Influência das estações seca e chuvosa na capacidade de desenvolvimento de oócitos e produção in vitro de embriões da espécie caprina / Influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro embryo production in goats

Objetivou-se com este estudo determinar a influência das estações seca e chuvosa na maturação de oócitos e produção in vitro (PIV) de embriões na espécie caprina. Os ovários das cabras nas estações seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de "slicing" dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na classificação morfológica. Foram realizadas 12 repetições, nas quais os CCOs foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro dos embriões. A média e desvio padrão da taxa de clivagem foi determinada no dia 3 (D-3) e dos embriões que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células, mórula e blastocisto foi determinada nos dias 4 (D-4), 5 (D-5) e 8 (D-8) após a fecundação, respectivamente. A quantidade de blastômeros foi determinada com o corante DAPI e os blastômeros positivos para apoptose por meio do teste de TUNEL. A produção de embriões no D-3 e mórulas foram inferiores ao obtido no período chuvoso (P 0,05) quanto às fases de maturação, fertilização, cultivo no D-4 e blastocisto. Os embriões produzidos na estação seca apresentaram maior incidência de apoptose (P < 0,05). Nas condições descritas neste estudo, os resultados permitem concluir que as fases iniciais do desenvolvimento embrionário sofrem maior impacto negativo durante a estação seca em protocolos de PIV na espécie caprina.

This study aimed to determine the influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro production (IVP) of embryos in goats. The ovaries of does in dry (October to March) and rainy season (April-September) were collected at a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing of the follicles from 2 to 6 mm in diameter, and selected based on morphologic classification. We used 12 replicates, in which the COCs were submitted to maturation, fertilization and in vitro culture. The cleavage rate was determined on day 3 (D-3) and embryos that developed to 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) stages after fertilization. The number of blastomeres was assessed with DAPI staining, and the determination of apoptotic blastomeres was performed by TUNEL assay. In the dry season, D-3 embryos and morulae development was lower than that obtained in the rainy season (P0.05) were observed on oocyte maturation, fertilization, D-4 embryo yield and blastocyst development. Embryos produced during the dry season had a higher incidence of apoptosis on D- 3 and at the morulae stage (P<0.05). Under the conditions described in this study, the results suggest that the early stages of embryonic development suffer greater negative impact during the dry season in IVP protocols in goats.

Influência das estações seca e chuvosa na capacidade de desenvolvimento de oócitos e produção in vitro de embriões da espécie caprina / Influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro embryo production in goats

Objetivou-se com este estudo determinar a influência das estações seca e chuvosa na maturação de oócitos e produção in vitro (PIV) de embriões na espécie caprina. Os ovários das cabras nas estações seca (outubro a março) e chuvosa (abril a setembro) foram colhidos em abatedouro e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Os complexos cumulus oophorus (CCOs) foram colhidos pela técnica de "slicing" dos folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro e selecionados com base na classificação morfológica. Foram realizadas 12 repetições, nas quais os CCOs foram submetidos à maturação, fertilização e cultivo in vitro dos embriões. A média e desvio padrão da taxa de clivagem foi determinada no dia 3 (D-3) e dos embriões que se desenvolveram aos estádios de 8-16 células, mórula e blastocisto foi determinada nos dias 4 (D-4), 5 (D-5) e 8 (D-8) após a fecundação, respectivamente. A quantidade de blastômeros foi determinada com o corante DAPI e os blastômeros positivos para apoptose por meio do teste de TUNEL. A produção de embriões no D-3 e mórulas foram inferiores ao obtido no período chuvoso (P < 0,05). Não apresentaram diferenças (P > 0,05) quanto às fases de maturação, fertilização, cultivo no D-4 e blastocisto. Os embriões produzidos na estação seca apresentaram maior incidência de apoptose (P < 0,05). Nas condições descritas neste estudo, os resultados permitem concluir que as fases iniciais do desenvolvimento embrionário sofrem maior impacto negativo durante a estação seca em protocolos de PIV na espécie caprina.(AU)

This study aimed to determine the influence of dry and rainy seasons on oocyte maturation and in vitro production (IVP) of embryos in goats. The ovaries of does in dry (October to March) and rainy season (April-September) were collected at a slaughterhouse and transported to the Laboratory of Biotechnical Reproduction of UFRPE. The cumulus oophorus complexes (COCs) were collected by the technique of slicing of the follicles from 2 to 6 mm in diameter, and selected based on morphologic classification. We used 12 replicates, in which the COCs were submitted to maturation, fertilization and in vitro culture. The cleavage rate was determined on day 3 (D-3) and embryos that developed to 8-16 cells (D-4), morulae (D-5) and blastocyst (D-8) stages after fertilization. The number of blastomeres was assessed with DAPI staining, and the determination of apoptotic blastomeres was performed by TUNEL assay. In the dry season, D-3 embryos and morulae development was lower than that obtained in the rainy season (P<0.05). However, no differences (P>0.05) were observed on oocyte maturation, fertilization, D-4 embryo yield and blastocyst development. Embryos produced during the dry season had a higher incidence of apoptosis on D- 3 and at the morulae stage (P<0.05). Under the conditions described in this study, the results suggest that the early stages of embryonic development suffer greater negative impact during the dry season in IVP protocols in goats.(AU)

In vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goats oocytes in rainy and dry periods / Maturação nuclear in vitro e morte celular por apoptose em oócitos de caprinos nos períodos seco e chuvoso

This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect

Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos

IN VITRO NUCLEAR MATURATION AND CELL DEATH BY APOPTOSIS IN GOATS OOCYTES IN RAINY AND DRY PERIODS / MATURAÇÃO NUCLEAR IN VITRO E MORTE CELULAR POR APOPTOSE EM OÓCITOS DE CAPRINOS NOS PERÍODOS SECO E CHUVOSO

This study aimed to determine the in vitro nuclear maturation and cell death by apoptosis in goat oocytes. The ovaries of goats were collected during the dry (October-March) and rainy (April-September) seasons in slaughterhouses and transported to the Laboratory of Reproductive Biotechniques of UFRPE. Twelve repetitions were performed and cumulus oophorus were collected from follicles of 2-6 mm diameter using the technique of "slicing" and selected based on morphology. The experiment contained two groups: Group-1 (not matured), evaluated immediately after collection, and Group-2 (matured in vitro), assessed after 24 hours of maturation in a CO2 incubator, in which 25 oocytes per drop were placed in alkaline maturation (MBM). After collecting the oocytes from G-1 and G-2, the quality was determined by testing the enzyme activity of caspases and DNA fragmentation (TUNEL), using PhiPhiLux-G1D2 reagent, and in group G-2 the quality was only determined after nuclear maturation. During nuclear maturation stages, germinal vesicle, germinal vesicle breakdown and metaphase I and II were evaluated and no significant differences were found (P> 0.05). There was also no significant difference (P> 0.05) in enzymes activity of caspase and DNA fragmentation of oocytes matured and not matured in vitro. Based on the data obtained, it was concluded that rainy and dry seasons have no effect

Este estudo teve como objetivo determinar a maturação nuclear in vitro e a morte celular por apoptose em oócitos caprinos. Os ovários de cabras foram coletados nos períodos seco (outubro a março) e chuvoso (abril a setembro), em abatedouros, e transportados ao Laboratório de Biotécnicas da Reprodução da UFRPE. Foram realizadas 12 repetições e os complexos cumulus oophorus foram colhidos de folículos entre 2 a 6 mm de diâmetro pela técnica de slicing e selecionados com base na morfologia. O experimento continha dois grupos: Grupo-1 (não maturados), avaliados logo após a colheita, e Grupo-2 (maturados in vitro), avaliados após a maturação de 24 horas em incubadora de CO2, na qual 25 oócitos foram colocados por gota em meio básico de maturação (MBM). Após a coleta dos oócitos do G-1 e G-2, foi determinada a qualidade, por meio dos testes de atividade das enzimas caspases e o de fragmentação de DNA (TUNEL), com reagente PhiPhiLux-G1D2, sendo que no grupo G-2 a qualidade só foi determinada após maturação nuclear. Avaliou-se durante os estádios de maturação nuclear as fases de vesícula germinativa, rompimento da vesícula germinativa, metáfase I e II, não havendo diferença significativa (P > 0,05). Também não foi encontrada diferença significativa (P > 0,05) na atividade das enzimas caspases e na fragmentação do DNA dos oócitos não maturados e maturados in vitro. Com base nos