EFICIÊNCIA DO PROTOCOLO SUPERESTIMULATÓRIO P-36 COM A UTILIZAÇÃO DE DUAS ADMINISTRAÇÕES DE FSH, EM ANIMAIS DA RAÇA ANGUS (Bos taurus)

MARTINS BONOTTO, Ramiro. Eficiência do protocolo superestimulatório P-36 com a utilização de duas administrações de FSH, em animais da raça angus (Bos taurus). 2015. 71f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Produção Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. A transferência de embriões é uma biotecnologia amplamente utilizada em vacas Bos taurus. Este princípio envolve a realização de um protocolo de superestimulação para indução de ovulações múltiplas. O protocolo P-36 é um dos mais utilizados com este propósito, pois permite a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) facilitando o manejo de doadoras e receptoras de embriões. A superestimulação é feita com oito doses decrescentes de pFSH a cada 12h, porém estudos mostram que a administração de pFSH com uma absorção lenta diminui o número de aplicações, mantendo a mesma produção de embriões. Assim o objetivo deste trabalho foi comparar a superovulação de vacas utilizando o protocolo P36 com redução no número de manejos. Foram utilizadas 24 vacas doadoras da raça Angus, distribuídas aleatoriamente em 2 grupos: Controle e MAP-5 (ácido hialurônico), em um delineamento cross over. Em dia aleatório do ciclo estral (D0), as doadoras receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,0 g de progesterona (DIV) e benzoato de estradiol (2 mg, via IM). No grupo controle, os animais foram superestimulados com pFSH (via IM, dose total = 200 mg) duas vezes ao dia em doses decrescentes do D4 ao D7, enquanto que no grupo MAP-5 foram realizadas somente duas administrações no D4 (75% da dose) e D6 (25% da dose). As coletas de embriões foram realizadas no D15 do protocolo. A análise estatística foi realizada com o pacote estatístico SAS utilizando o procedimento Mixed com nível de significância a 5%, sendo consideradas as variáveis: número de folículos no dia da indução de ovulação, número de corpos lúteos no momento da coleta, número de estruturas totais coletadas, número de estruturas fertilizadas e número de embriões viáveis. O grupo controle demonstrou-se significativamente melhor que o grupo MAP-5 quanto ao número de folículos (10,08±0,61 vs. 8,25±0,61), corpos lúteos (7,25±0,59 vs. 3,25±0,59) o que resultou em uma taxa de ovulação de 71,90% para o grupo controle e 39,39% para o grupo MAP-5. Quanto ao número de estruturas totais (8,29±0,98 vs. 3,08±0,98), estruturas fertilizadas (6,50±0,90 vs. 2,50±0,90) e embriões viáveis (4,21±0,72 vs. 2,00±0,72) o grupo controle também demonstrou diferença significativa quando comparado ao MAP-5. O que demonstra que a redução dos manejos com a dose de 200 mg de FSH proposta como grupo MAP-5 não foi eficaz para doadoras da raça Angus.

MARTINS BONOTTO, Ramiro. Efficiency protocol superstimulatory P-36 with the use of two FSH administration in Angus cows (Bos taurus) . 2015. 71f. Thesis (MS in Animal Science - Area: Animal Production) University of the State of Santa Catarina. Graduate Program in Animal Science, Lages, 2015. Embryo transfer is a biotechnology widely used in Bos taurus cows. This principle involves making an over stimulation protocol for inducing multiple ovulations. The P-36 protocol is one of the most used for this purpose as it allows artificial insemination in fixed time (TAI) facilitating the management of donor and recipient embryo. The overstimulation is made with eight pFSH decreasing doses every 12 hours, but studies show that the administration pFSH with a slow absorption decreases the number of applications, maintaining output similar embryos. So the aim of this study was to compare the superovulation of cows using the P36 protocol with reduction in the number of handlings. They were used 24 donor cows of Angus, randomly assigned to two groups: Control and MAP-5 (hyaluronic acid), in a crossover design. At random stage of the estrous cycle (D0), donors received an intravaginal device containing 1.0 g progesterone (DIV) and estradiol benzoate (2 mg, IM). In the control group, the animals were over stimulated with pFSH (IM, total dose = 200 mg) twice daily in decreasing doses of D4 to D7, while the MAP-5 group were carried out only two administrations in the D4 (75% of dose) and D6 (25% of dose). The embryo collections were made in the protocol D15. Statistical analysis was performed with SAS statistical package using the Mixed procedure with 5% significance level, and the variables considered: number of follicles on the day of ovulation induction, the number of corpora lutea at collection time, total number of collected structures, structures and number of fertilized number of viable embryos. The control group showed significantly better than the MAP-5 group and the number of follicles (10.08 ± 0.61 vs. 8.25 ± 0.61), corpora lutea (7.25 ± 0.59 vs. 3.25 ± 0.59) which resulted in a 71.90% ovulation rate for the control group and 39.39% for the MAP-5 group. As for the total number of structures (8.29 ± 0.98 vs. 3.08 ± 0.98), fertilized structures (6.50 ± 0.90 vs. 2.50 ± 0.90) and viable embryos (4 21 ± 0.72 vs. 2.00 ± 0.72) the control group also showed a significant difference when compared to MAP-5. This shows that the reduction of handlings with 200 mg of FSH proposed with MAP-5 group was not effective donor Angus breed.

Parâmetros quali-quantitativos na seleção de receptoras em programas de transferência de embriões ovinos

Objetivou-se avaliar parâmetros quali-quantitativos relacionados à receptora e ao embrião inovulado e a relação destes com as taxas de sobrevivência embrionária ovina. Os parâmetros utilizados foram idade, peso, índice de massa corpórea, escore de condição corporal, número de corpos lúteos no momento da inovulação, aspecto dos corpos lúteos, concentração de progesterona plasmática, intervalo entre o fim do tratamento hormonal e início dos sinais de estro e a duração do estro das receptoras. Os embriões foram avaliados quanto ao estadio de desenvolvimento, qualidade, número de embriões inovulados e estado, congelado ou fresco. Foram utilizados 90 embriões das raças Santa Inês e Dorper, inovulados em receptoras sincronizadas com esponja impregnada com 60 mg acetato de medroxiprogesterona por 14 dias, somado à administração 400 UI de gonadotrofina coriônica equina (eCG) no momento da retirada da esponja. Receptoras com maior índice de condição corporal e maior concentração de progesterona plasmática apresentaram melhor taxa de sobrevivência embrionária e entre esses dois fatores há uma correlação positiva. As demais variáveis relacionadas às receptoras não influenciaram de maneira significativa a taxa de sobrevivência embrionária. O estadio de desenvolvimento embrionário exerceu influência sobre a taxa de sobrevivência embrionária, a taxa de prenhez das receptoras não diferiu em relação à qualidade dos embriões (graus 1 e 2) e aqueles transferidos à fresco resultaram em taxas de sobrevivência superiores quando comparados aos transferidos após serem congelados-descongelados

The objective was to evaluate qualitative and quantitative parameters related to recipient and ovulated embryo and their relationship with the rates of embryo survival. The parameters used were: age, weight, body mass index, body condition score, number of corpus luteum at the time of embryo transfer, an aspect of corpus luteum, plasma progesterone concentration, interval between the end of the treatment and early signs of estrus and estrus length of the recipient. The embryos were evaluated for stage of development, quality, number of embryos ovulated and state, frozen or fresh. Were used 90 embryos of Santa Inês and Dorper, ovulated on recipeint synchronized with sponge impregnated with 60 mg medroxyprogesterone acetate for 14 days, added to an administration of 400 IU of equine chorionic gonadotropin (eCG) at the time of sponge removal. Recipient with higher level of body condition score and higher plasma progesterone concentration showed better embryo survival rate and between these two factors is a positive correlation. The other variables related to the recipient did not influence significantly the embryo survival rate. The stage of embryonic development influence upon the embryo survival rate, however, embryos of grades 1 and 2 did not differ in these rates. The fresh embryos had higher survival rates when compared to frozen-thawed embryos

Efeito do tratamento com extrato de pituitária equina na resposta ovariana e eficiência reprodutiva de éguas idosas em programa de tranferência da embriões

O presente trabalho objetivou avaliar os efeitos de doses baixas do extrato de pituitária eqüina (EPE) no crescimento folicular, taxa de ovulação e de recuperação embrionária em éguas idosas. Doadoras de embrião (n=20) da raça Quarto de Milha de um programa comercial com idade de 15 a 20 anos de idade, foram utilizadas em 3 ciclos consecutivos. O primeiro e o terceiro ciclo foi utilizado como grupo controle e entre eles o grupo tratado com EPE no segundo ciclo. Em todos os ciclos, a ultrassonografia transretal dos ovários foi realizada diariamente após aplicação de prostaglandina e monitorando os dois maiores folículos. Durante os três ciclos as éguas foram inseminadas com sêmen a fresco ou refrigerado do mesmo garanhão e receberam uma aplicação de acetato de deslorelina após a detecção de pelo menos um folículo de 35 a 40 mm de diâmetro. A recuperação embrionária foi realizada por lavado uterino 8 dias pós ovulação seguidas da administração de prostaglandina. No ciclo tratado, injeções de EPE (7mg/IM/duas vezes ao dia) se iniciaram no dia 8 após a ovulação até que um folículo pré-ovulatório fosse observado. A porcentagem de éguas com mais de uma ovulação foi comparada pelo teste de Fisher e a média do número de ovulações e embriões, assim como o diâmetro folicular, entre os ciclos foram comparados usando teste de Student?s. A porcentagem de éguas com mais de uma ovulação e o número de ovulações foram maiores (p<0,05) no ciclo tratado com EPE (65% das éguas e 1,8 ovulações) do que o grupo controle antes (5% e 1,0) e depois do tratamento (5% e 1,0). O número de embriões recuperados por ciclo também foi maior (p<0,05) no grupo tratado com EPE (1,0/ciclo) comparado com os ciclos controle (0,42/ciclo). Entretanto a taxa de embrião recuperado por ovulação foi similar (p>0,05) entre os grupos controles...

The present study aimed to evaluate the effect of the use of low doses of equine pituitary extract (EPE) on follicular growth, ovulation rate and embryo recovery rates in old mares. Embryo donors (n=20) of Quarter Horse breed from a commercial embryo center aging 15 to 20 years old , were used during 3 consecutive cycles. The first and third cycles were use as control being the EPE treatment performed on the second cycle. In all cycles transrectal ultrasonography of the uterus and ovaries was performed daily after PG injection to follow the development of the two largest follicles. During the 3 estrus mares were inseminated with cooled or fresh semen from the same stallion and received an injection of deslorelin (1 mg i.m.) upon detection of at least one follicle of 35 to 40 mm in diameter. The embryo flushing?s were performed on day 8 post-ovulation and were always followed by administration of PG. On the treated cycle, EPE injections (7mg twice daily i.m.) were started on day 8 after ovulation until a pre-ovulatory follicle was observed. The percentage of mares with more than one ovulation was compared by means using Fischer?s test and the mean number of ovulations and embryos, as well as follicular diameters, between cycles were compared using Student?s t test. The percentage of mares with more than one ovulation and number of ovulations were higher (p<0.05) in the EPE-treated cycle (65% of mares and 1.8 ovulations) than in the control cycle before (5% and 1.0) and after treatment (5% and 1.0). Also the mean number of embryos recovered per cycle were higher (p<0.05) on EPE treated cycle (1.0 /cycle) than in no treated cycles (0.42/cycle). However the embryo rate per ovulation was similar (p>0.05) between no treated cycles (0.4 embryo/ovulation) and treated cycle (0.6 embryo/ovulation). The treatment with EPE allowed the recovery of embryos in ix stage of development more...

Efeito da adição de antioxidante (Trolox®) ao meio de manutenção de embriões bovinos produzidos in vivo e ao meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários provenientes de abatedouro

Os objetivos do estudo foram: avaliar o efeito antioxidante do Trolox® 1) no meio de manutenção de embriões sobre as taxas de concepção (25 e 46 dias) e a perda gestacional de receptoras bovinas Holandesas repetidoras de serviço, em dois períodos (abril-junho/setembro-novembro) e 2) no meio de transporte de oócitos bovinos aspirados de ovários de abatedouro sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão in vitro. No Experimento 1, doadoras de embriões foram superovuladas e submetidas à lavagem uterina. Os embriões colhidos foram divididos em dois grupos, deixados em meio com ou sem antioxidante, por 2 a 6h. No Experimento 2, folículos foram aspirados e os complexos cumulus-oócito grau I e II foram divididos em quatro grupos: Controle 8h, Antioxidante 8h, Controle 20h e Antioxidante 20h. Então, foram mantidos em uma transportadora de oócitos (37ºC) por 8 ou 20 horas. Após a maturação, fecundação e cultivo in vitro, as taxas de clivagem (D3), blastocisto (D6, 7 e 9) e eclosão (D11) foram avaliadas. Alíquotas de 200 ?L do meio de transporte foram retiradas em cada momento experimental (0, 8 e 20h) para realização dos testes de capacidade antioxidante total (CAT). No Experimento 1, não houve efeito de tratamento sobre as variáveis avaliadas. Foi verificado efeito de período experimental (P=0,001), categoria da doadora (P<0,05), qualidade embrionária (P=0,049) e intervalo Divisão dos Grupos-Inovulação (P<0,0001). No Experimento 2, não houve efeito de tratamento sobre as taxas analisadas. No entanto, houve redução das taxas de clivagem e blastocisto (D7 e 9) nos grupos 20 horas. Ainda, no D6 foram obtidas taxas de blastocisto semelhantes nos grupos Antioxidante 8 e 20h. A análise da CAT evidenciou que o Trolox® auxiliou o combate às ROS

The objectives of the present study were to evaluate the effect of the addition of an antioxidant (Trolox®) 1) to a holding media for bovine in vivo produced embryos, on conception rates 25 and 46 days of pregnancy and pregnancy loss, in Holstein bovine recipients at 4th or more service, during two periods of the year (April-June/September-November) and 2) to a transport media for bovine oocytes aspirated from slaughter house ovaries, on in vitro cleavage, blastocyst and hatching rates. In Experiment 1, donor cows were superovulated and submitted to uterine flushings. The recovered embryos were divided into two groups, kept in holding media with or without antioxidant, for 2-6h. In Experiment 2, follicles were aspirated and cumulus-oocyte complexes grade I and II were divided into four groups: Control 8h, Antioxidant 8h, Control 20h and Antioxidant 20h. Oocytes were kept in a transportable machine (37ºC) for 8 or 20 hours. After in vitro maturation, fertilization and culture, cleavage (D3), blastocyst (D6, 7 and 9) and hatching rates (D11) were evaluated. Samples (200 ?L) of the transport media were collected in each experimental moment (0, 8 e 20h) for total antioxidant capacity assay (TACA). In Experiment 1, no effect of treatment was observed. Effects of experimental period (P=0.001), donor category (P<0.05), embryo quality (P=0.049) and interval Group division-embryo transfer (P<0.0001) were detected. In Experiment 2, no effect of treatment was found on the analyzed rates. However, reduction on cleavage and blastocyst (D7 e 9) rates was detected on Groups 20h. Also, on D6 similar blastocyst rates were observed in Groups Antioxidant 8 and 20h. The analysis of TACA evidenced that Trolox® collaborated with the combat against the ROS

Colpocitologia, Indução da Atividade Ovariana e da Ovulação e Transferência de Embriões a Fresco, em Gatos Domésticos

RESUMO SANTANA, Marcelo Lopes de, M.S., Universidade Federal de Viçosa, Fevereiro de 2005. Colpocitologia, Indução da Atividade Ovariana e da Ovulação e Transferência de Embriões a Fresco, em Gatos Domésticos. Orientador: Tarcízio Antônio Rego de Paula. Conselheiros: Eduardo Paulino da Costa e Cláudio César Fonseca. O experimento foi conduzido em duas etapas. A primeira etapa consistiu na realização de colpocitologia para avaliação do ciclo estral de gatas domésticas. Nesta etapa foram monitoradas por um período de 12 meses, seis gatas adultas não gestantes, sem raça definida, mantidas em um gatil em ambiente coletivo, sendo fornecido água e ração ad libitum. Os animais foram monitorados diariamente quanto a manifestações comportamentais das diferentes fases do ciclo estral, sendo obtidos três esfregaços vaginais semanalmente. Foram considerados os seguintes tipos celulares: células parabasais e intermediárias, células superficiais e células anucleadas, sendo analisadas cerca de 100 células em cada lâmina. Todos os animais avaliados apresentaram sinais comportamentais característicos das diferentes fases do ciclo estral durante todo o ano. O número médio de ciclos foi de 11,2 ao ano, sendo 8,8 observados nos meses de maior insolação e 2,4 nos meses de menor insolação média. Neste período a duração média dos ciclos estrais foi de 22,5 dias, enquanto no outono e inverno a duração média dos ciclos foi de 53 dias. as células parabasais e intermediárias estavam em maiores proporções no pós-estro (57,4%), reduzindo drasticamente no proestro (22,1%) e atingindo os menores valores observados no período de estro (15,95%). As células superficiais apresentaram menores variações durante as fases do ciclo estral sendo 28,7% no pós-estro, 43,6% no proestro e 33,2 % no estro. Já as células anucleadas apresentaram aumento considerável do período de proestro para o período de estro (34,3 % para 51,0 %), sendo no período de pós-estro registrado os menores valores (13,9%). A segunda etapa consistiu na indução da atividade ovariana e da ovulação, objetivando coleta e transferência de embriões. Nesta etapa foram utilizadas, dezesseis gatas domésticas adultas e dois machos adultos reprodutores. Todas as fêmeas receberam uma única aplicação de 150 UI de gonadotrofina coriônica eqüina (eCG) no pós-estro, como indutor da atividade ovariana, e 80 a 84 horas após, receberam uma única aplicação de 100 UI de gonadotrofina coriônica humana (hCG) como indutor da ovulação. Após a aplicação de hCG, oito gatas doadoras foram naturalmente acasaladas. As oito gatas receptoras receberam estímulo extra de indução da ovulação através da manipulação de um swab intravaginal. De cinco a seis dias após a aplicação de hCG, as gatas foram submetidas a uma laparotomia, para a coleta dos embriões, a qual foi efetuada através de lavagem uterina transcornual. Foram cirurgicamente inovulados em média seis embriões, classificados como mórula compacta e blastocisto dos tipos I a III, em quatro receptoras. Três animais apresentaram gestação confirmada por ultrassonografia aos 36 dias sendo que destes dois animais pariram ninhadas com dois e quatro filhotes, respectivamente 66 e 63 dias após a indução da ovulação. Excetuando-se um natimorto, todos os filhotes apresentaram desenvolvimento normal. ABSTRACT SANTANA, Marcelo Lopes de, M.S., Universidade Federal de Viçosa, February 2005. Colpocitology, Induction of the Ovarian Activity and of the Ovulation and Fresh Embryo Transfer, in