Spatial distribution and evaluation of risk factors for bovine neosporosis in Rondônia, Brazil / Distribuição espacial e avaliação dos fatores de risco para neosporose bovina em Rondônia, Brasil

Neospora caninum is an important worldwide parasite responsible for causing abortion in animals. Due to limited information on the occurrence of infection by this parasite in the state of Rondônia, Brazil, this study aimed to determine the seroprevalence and identify the risk factors associated with the infection in slaughtered cattle, from 19 municipalities distributed in seven microregions of the state. A total of 494 samples were obtained and subjected to anti-N. caninum antibodies, using the Indirect Immunofluorescence Reaction technique. Antibodies were detected in 5.06% (25/494) of the samples, in 30.30% (10/33) of farms, in nine municipalities located in four microregions of Rondônia. Of all the animals analyzed, 4.81% of the females (20/416) and 6.41% of the males (05/78) were seropositive for the parasite, with "abortion in the last 12 months" being considered an important risk factor for the occurrence of infection (OR = 9.54; p = 0.01). The present study points out the prevalence of anti-N. caninum antibodies in 5.06% of slaughtered animals and abortion as the main risk factor associated with infection by N. caninum, thus contributing to the elucidation of the epidemiology of this protozoan in Rondônia, Brazil.

Neospora caninum é um importante parasito, responsável por causar aborto em animais e distribuído mundialmente. Devido às informações limitadas sobre a ocorrência da infecção por esse parasito no estado de Rondônia, Brasil, este estudo teve como objetivo determinar a soroprevalência e identificar os fatores de risco associados à infecção em bovinos abatidos, oriundos de 19 municípios, distribuídos em sete microrregiões do estado. Um total de 494 amostras foi obtido e submetido à pesquisa de anticorpos anti-N. caninum, por meio da técnica de reação de imunofluorescência indireta. Os anticorpos foram detectados em 5,06% (25/494) das amostras, em 30,30% (10/33) das propriedades rurais, de nove municípios, localizados em quatro microrregiões de Rondônia. De todos os animais analisados, 4,81% das fêmeas (20/416) e 6,41% dos machos (05/78) foram soropositivos para o parasito, sendo o "aborto nos últimos 12 meses" considerado um importante fator de risco para a ocorrência da infecção (OR = 9,54; P = 0,01). O presente estudo aponta a prevalência de anticorpos anti-N. caninum em 5,06% dos animais abatidos e o aborto como o principal fator de risco associado à infecção por N. caninum, contribuindo assim para a elucidação da epidemiologia desse protozoário em Rondônia, Brasil.

Molecular detection of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp in tissues of Sus scrofa slaughtered in southern Brazil / Detecção molecular de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em tecidos de Sus scrofa abatidos no Sul do Brasil

The aim of this study was to determine the presence of deoxyribonucleic acid (DNA) from Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. and Neospora caninum, in tissues of wild boars slaughtered in southern Brazil. A total of 156 samples were collected from different organs of 25 wild boars, and DNA from at least one of the protozoa investigated was detected in 79 samples. To differentiate between infectious agents, restriction fragment length polymorphism was performed using the restriction enzymes DdeI and HpaII. For N. caninum, conventional PCR was performed with specific primers. The DNA of at least one of the studied pathogens was detected in each animal: 26.58% for T. gondii, 68.36% for Sarcocystis spp. and 5.06% for N. caninum. Coinfection between T. gondii and Sarcocystis spp. occurred in 14 animals, between T. gondii and N. caninum in only one male animal, between Sarcocystis spp. and N. caninum in a female, while co-infection with the three agents was equally observed in only one male animal. Considering the high frequency of detection and its zoonotic risk, especially T. gondii, it appears that wild boars can be potential sources of transmission of infectious agents and the adoption of monitoring measures in these populations should be prioritized.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de ácido desoxirribonucléico (DNA) de Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. e Neospora caninum, em tecidos de javalis abatidos no sul do Brasil. Foram coletadas 156 amostras de diferentes órgãos de 25 javalis, sendo detectado o DNA de pelo menos um dos protozoários pesquisados em 79 amostras. Para diferenciar entre os agentes infecciosos, o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição, foi realizado usando-se as enzimas de restrição DdeI e HpaII. Para N. caninum, a PCR convencional foi realizada com "primers" específicos. O DNA de pelo menos um dos patógenos estudados foi detectado em cada animal: 26,58% para T. gondii, 68,36% para Sarcocystis spp. e 5,06% para N. caninum. Coinfecção entre T. gondii e Sarcocystis spp. ocorreu em 14 animais; entre T. gondii e N. caninum em apenas um animal macho; entre Sarcocystis spp. e N. caninum em uma fêmea, enquanto a coinfecção com os três agentes foi observada igualmente em apenas um animal macho. Considerando-se a alta frequência de detecção e seu risco zoonótico, especialmente T. gondii, constata-se que os javalis podem ser potenciais fontes de transmissão de agentes infecciosos, e a adoção de medidas de monitoramento nessas populações devem ser priorizadas.(AU)

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. in species of naturally infected birds / Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em espécies de aves naturalmente infectadas

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp. are parasites detected in tissues of domestic and wild animals. Birds are relevant in the life cycle and epidemiology of protozoa due to the wide variety of bird species, feeding and migratory habits. The aim of this study was the molecular detection of T. gondii, N. caninum and Sarcocystis spp. in several species of naturally infected birds. Therefore, samples of brain and heart tissue were collected from birds received and necropsied at the Central Laboratory for the Diagnosis of Avian Pathologies (LCDPA), undergoing DNA extraction and amplification by the polymerase chain reaction (PCR) of the 18S rRNA gene to Sarcocystis spp., NC5 gene for N. caninum and repetitive gene 529 base pairs for T. gondii. N. caninum was detected in two birds (02/65, 3.07%), in a brain sample of Rupornis magnisrostris (accession number: ON182081, 267pb) and in a brain and heart sample of Dendrocygna bicolor (accession number: ON211312, 267pb). DNA of the genus Sarcocystis was detected in three birds (03/65, 4.62%), and in the genetic sequencing Sarcocystis spp. (accession number: MW463929) in brain of Nymphicus hollandicus and Sarcocystis speeri (accession number: MW464125) in brain and heart of Amazona aestiva. Phylogenetic analysis revealed that Sarcocystis spp. formed a clade with Sarcocystis spp. that use skunk (Didelphis aurita) as definitive host and Sarcocystis falcatula that use Moluccan loris (Trichoglossus moluccanus) as intermediate host. S. speeri formed a clade with S. speeri that used Mus musculus as an experimental intermediate host and formed a clade with Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti and Sarcocystis sp. that affect bird species. T. gondii DNA was not detected in any tissue. This is the first report of DNA detection of N. caninum, Sarcocystis spp. and S. speeri in tissue samples for these bird species extending the list of intermediate hosts.

Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. são parasitas detectados em tecidos de animais domésticos e selvagens. As aves são relevantes no ciclo de vida e epidemiologia dos protozoários devido à grande variedade de espécies de aves, hábitos alimentares e migratórios. O objetivo deste estudo foi a detecção molecular de T. gondii, N. caninum e Sarcocystis spp. em diversas espécies de aves naturalmente infectadas. Portanto, amostras de tecido de cérebro e coração foram coletados de aves recebidas e necropsiadas no Laboratório Central de Diagnóstico de Patologias Aviárias (LCDPA), sendo submetidas a extração de DNA e amplificação pela reação em cadeia da polimerase (PCR) do gene 18S rRNA para Sarcocystis spp., gene NC5 para N. caninum e gene repetitivo 529 pares de bases para T. gondii. N. caninum foi detectado em duas aves (02/65; 3,07%), em amostra de cérebro de Rupornis magnisrostris (número acesso: ON182081, 267pb) e em amostras de cérebro e coração de Dendrocygna bicolor (número acesso: ON211312, 267pb). DNA do genero Sarcocystis spp. foi detectado em três aves (03/65; 4,62%), sendo que no sequenciamento genético foram identificados Sarcocystis spp. (número acesso: MW463929) em cérebro de Nymphicus hollandicus e Sarcocystis speeri (número acesso: MW464125) em cérebro e coração de Amazona aestiva. A análise filogenética revelou que Sarcocystis spp. formou um clado com Sarcocystis spp. que utilizam gambá (Didelphis aurita) como hospedeiro definitivo e S. falcatula que utilizam Lóris-molucano (Trichoglossus moluccanus) como hospedeiro intermediário. S. speeri formou um clado com S. speeri que utilizou Mus musculus como hospedeiro intermediário experimental e formou um clado com Sarcocystis columbae, Sarcocystis corvusi, Sarcocystis halieti e Sarcocystis sp. que afetam espécies de aves. O DNA de T. gondii não foi detectado em nenhum tecido. Este é o primeiro relato de detecção de DNA de N. caninum, Sarcocystis spp. e S. speeri em amostras de tecido para essas espécies de aves estendendo a lista de hospedeiros intermediários.

Genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Chile / Diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores do Chile

Abstract This study aimed to investigate the genetic diversity of Hepatozoon spp. in rodents from Valdivia, Chile. A total of 74 rodents (synanthropic n=38; wild n=36) were trapped in Valdivia. We performed conventional PCR assays for Apicomplexa organisms targeting two overlapping 18S rDNA gene fragments (600 bp and 900 bp) followed by sequencing of selected amplicons. Hepatozoon spp. occurrence was 82.43% (61/74). Twelve sequences obtained from the 600 bp and ten from the 900 bp 18S rDNA fragments were identified as Hepatozoon sp. Six sequences obtained from 18S rDNA-based overlapping PCR protocols were used for concatenated (1,400 bp) phylogenetic, haplotype and distance analyses. Hepatozoon spp. 18S rDNA concatenated sequences from the present study were detected in Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus, and Abrothrix longipilis grouped with Hepatozoon species earlier described in rodents and reptiles from Chile and Brazil. Nucleotide polymorphism of the six 18S rDNA sequences (1,400 bp) from this study, and other Chilean sequences from rodents and rodent's ticks, showed high diversity with a total of nine Chilean haplotypes. Three haplotypes from Valdivia were identified for the first time in this study, suggesting the circulation of novel haplotypes in rodents from southern Chile.

Resumo Este estudo teve como objetivo investigar a diversidade genética de Hepatozoon spp. em roedores de Valdivia, Chile. Um total de 74 roedores (sinantrópicos n=38; selvagens n=36) foram capturados. PCR convencional foi realizada para organismos Apicomplexa, visando dois fragmentos sobrepostos do gene 18S rDNA (600 bp e 900 bp), seguida pelo sequenciamento de amplicons selecionados. A ocorrência de Hepatozoon spp. foi de 82,43% (61/74). Doze sequências obtidas dos fragmentos de 18S rDNA de 600 pb e dez dos fragmentos de 18S rDNA de 900 pb foram identificadas como Hepatozoon sp. Seis sequências obtidas, a partir de protocolos de PCR sobrepostos, foram usadas para análises filogenéticas (1.400 bp), de haplótipos e de distância. Sequências concatenadas 18S rDNA do presente estudo foram detectadas em Oligoryzomys longicaudatus, Rattus norvegicus, Mus musculus e Abrothrix longipilis e agrupadas com Hepatozoon descrito em roedores e répteis do Chile e do Brasil. A análise de polimorfismos das seis sequências deste estudo, junto com outras sequências chilenas de roedores e carrapatos de roedores, mostrou alta diversidade com um total de nove haplótipos no Chile. Três haplótipos detectados em Valdivia foram identificados pela primeira vez neste estudo, sugerindo que novos haplótipos circulam em roedores do sul do Chile.

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans

ABSTRACT: The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.

RESUMO: O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Molecular detection of Apicomplexa protozoa in tissues from Alouatta guariba clamitans / Detecção molecular de protozoários Apicomplexa em tecidos de Alouatta guariba clamitans

The brown howler monkey (Alouatta guariba clamitans) is a primate species widely distributed in South America. Infections by protozoa are common in primates. However, studies on protozoa in primates in Brazil are scarce, so the goal of this study was to investigate DNA from the apicomplexan protozoa Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii in tissues of A. guariba clamitans. DNA extraction was performed on tissue samples from the heart, brain, liver, spleen, lung and intestine of six A. guariba clamitans from Santa Maria, Central Region of Rio Grande do Sul, Brazil. Conventional PCR was performed using 18S rRNA gene general primers for Apicomplexa and also specific primers to amplify Neosporaspp. and Toxoplasma gondii DNA. All animals were positive in the 18S PCR and the genetic sequencing confirmed the presence of Sarcocystis spp. DNA in the tissues of four animals belonging to at least two species (S. neurona and S. gigantea) and T. gondii DNA in the other two animals. One positive sample for T. gondii was genotypically characterized as atypical by the restriction fragment length polymorphism technique. N. caninum DNA was not detected in the tested samples. The presence of Apicomplexa protozoan DNA in the tissues of the six animals tested in this study highlights the importance of howler monkeys as maintainers of these pathogens in nature.(AU)

O bugio ruivo (Alouatta guariba clamitans) é uma espécie de primata amplamente distribuída na América do Sul. As infecções por protozoários são comuns em primatas. Entretanto, estudos sobre protozoários em primatas no Brasil são escassos, portanto o objetivo deste estudo foi pesquisar DNA dos protozoários Apicomplexa Neospora caninum, Sarcocystisspp. e Toxoplasma gondii em tecidos de A. guariba clamitans. A extração de DNA foi realizada em amostras de tecido do coração, cérebro, fígado, baço, pulmão e intestino de seis A. guariba clamitans oriundos de Santa Maria, Região Central do Rio Grande do Sul, Brasil. Foi realizada PCR convencional utilizando primers geral do gene 18S rRNA para Apicomplexa e também primers específicos para amplificação de DNA de Neospora spp.e Toxoplasma gondii. Todos os animais foram positivos no PCR geral para Apicomplexa e no sequenciamento genético confirmou-se a presença de DNA de Sarcocystis nos tecidos de quatro animais pertencentes a pelo menos duas espécies (S. neurona e S. gigantea), e DNA de T. gondii foi detectado nos outros dois animais. Uma amostra positiva para T. gondii foi caracterizada genotipicamente como atípico pela técnica de polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição. Não foi detectado DNA de N. caninum nas amostras testadas. A presença de DNA de protozoários apicomplexa nos tecidos dos seis animais testados neste estudo destaca a importância dos bugios ruivos como mantenedores desses patógenos na natureza.(AU)

Survey of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona antibodies in wild red-tailed Amazon parrots (Amazona brasiliensis) / Pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora caninum e anti-Sarcocystis neurona em papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre

Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis neurona are obligate intracellular parasites within the phylum Apicomplexa. The red-tailed Amazon parrot (Amazona brasiliensis) is a near-threatened species of psittacine that is endemic to the Atlantic Forest of Brazil and has been designated as a bioindicator because of its sensitivity to environmental qualitative status and changes. The aim of this study was to evaluate the presence of antibodies against T. gondii, N. caninum and S. neurona in wild red-tailed Amazon parrot nestlings on Rasa Island, Brazil. Blood samples were collected from 51 parrots and plasma samples were stored at 20 °C until immunofluorescence antibody tests (IFAT) were performed. Antigen slides were prepared using tachyzoites of T. gondii (RH strain) and, N. caninum (NC-1 strain) and using merozoites of S. neurona (SNR37 strain). Plasma samples were tested at initial dilutions of 1:16 for T. gondii, 1:50 for N. caninum and 1:5 for S. neurona. An anti-chicken antibody conjugated with FITC was used as a secondary antibody at 1:50 dilution. No antibodies for any of these three protozoa were found, thus suggesting that these wild red-tailed Amazon parrot nestlings had not been exposed to these parasites.(AU)

Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis neurona são protozoários intracelulares do filo Apicomplexa. O papagaio-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) é um psitacídeo endêmico da floresta atlântica, considerado uma espécie quase ameaçada de extinção e bioindicadora por sua sensibilidade às mudanças no ambiente. O objetivo do presente estudo foi detectar a presença de anticorpos contra T. gondii, N. caninum e S. neurona em filhotes de papagaios-de-cara-roxa (Amazona brasiliensis) de vida livre na Ilha Rasa, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 51 papagaios e armazenadas a - 20ºC até a realização da Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). As lâminas de RIFI com os antígenos, foram preparadas com taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e N. caninum (cepa NC-1) e com merozoítos de S. neurona (cepa SNR37). Os plasmas foram diluídos em PBS (Ph 7,2) nas diluições 1:16 para T. gondii, 1:50 para N. caninum e 1:5 para S. neurona. O conjugado anti-IgG de galinhas marcado com fluoresceína (FITC) foi utilizado na diluição de 1:50. Não foram detectados anticorpos para os três protozoários nas amostras sugerindo que os filhotes de papagaios-de-cara-roxa não foram expostos aos protozoários.(AU)

Protection against Toxoplasma gondii cysts in pigs immunized with rROP2 plus Iscomatrix / Proteção contra cistos de Toxoplasma gondii em suínos imunizados com rROP2 associado à Iscomatrix

This study aimed to evaluate the humoral immune response in pigs immunized intranasally and intramuscularly with recombinant Toxoplasma gondii rROP2 protein in combination with the adjuvant Iscomatrix. Twelve mixed breed pigs divided into three groups (n=4) were used, G1 received recombinant ROP2 proteins (200 µg/dose) plus Iscomatrix, G2 received PBS plus Iscomatrix, and G3 as the control group. The intranasal (IN) and intramuscular (IM) routes were used. Animals were challenged orally with VEG strain oocysts and treated on day three after challenge. Fever, anorexia, and prostration were the clinical signs observed in all animals. All the G1 animals produced antibodies above the cut-off on the day of the challenge, while the G2 and G3 remained below the cut-off. Better partial protection against parasitemia and cyst tissue formation was observed in G1 than G3. The protection factors against tissue cyst formation were 40.0% and 6.1% for G1 and G2, respectively, compared to G3. In conclusion, there were not systemic antibody responses in pigs with IN immunization with rROP2+Iscomatrix; however, after IM immunization, those animals produced higher titers than animal controls. We associated these results with partial protection obtained against parasitemia and tissue cysts formation.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a resposta imune humoral em suínos imunizados pelas vias intranasal e intramuscular com proteínas recombinantes rROP2 do Toxoplasma gondii associadas ao adjuvante Iscomatrix. Doze suínos cruzados divididos em 3 grupos (n=4) foram utilizados. O G1 recebeu proteína recombinante ROP2 (200mg/dose) associada ao adjuvante Iscomatrix; o G2 recebeu PBS associado ao Iscomatrix; e o G3 foi o grupo controle. As vias intranasal (IN) e intramuscular (IM) foram utilizadas. Os animais foram desafiados por via oral com a cepa VEG e tratados no dia três após o desafio. Febre, anorexia e prostração foram os sinais clínicos observados em todos os animais. Todos os animais do G1 produziram anticorpos acima do ponto de corte no dia do desafio, enquanto os animais do G2 e G3 permaneceram abaixo do ponto de corte no desafio. Proteção parcial contra parasitemia e formação de cistos teciduais foram observadas nos suínos do G1 comparados ao G3. Os fatores de proteção contra a formação de cistos teciduais foram 40,0% e 6,1% no G1 e G2, respectivamente, comparados com o G3. Como conclusão, não houve estimulação da resposta imune humoral sistêmica nos suínos após as imunizações IN com rROP2+Iscomatrix. Estes animais, porém, após a imunização IM, produziram títulos de anticorpos mais altos que os animais controles. Esses resultados foram associados a uma proteção parcial contra a parasitemia e formação de cistos teciduais.(AU)

New Isospora and Host Species in Brazilian Passerines

Normal passerines (n=216) were evaluated for oocysts of Isospora in feces at the Triage Center for Wild Animals (CETAS, IBAMA, Belo Horizonte; August 21 to September 21, 2012). The positive samples with oocysts represented 13.0% of Cardinalidae (n=23), 11.2% of Emberizidae (n=107), 50% of Icteridae (n=10) and 60.3% of Thraupidae (n=68). The probability of fecal oocysts attributable to the host in Thraupidae is higher than in Cardinalidae, Emberizidae, Fringillidae and Turdidae, but similar to Icteridae. No oocysts were found in Fringillidae and Turdidae. Within Thraupidae, Isospora was for the first time described in Paroaria dominicana and Schistochlamys ruficapillus and within Icteridae, in Gnorimopsar chopi. Saltator similis presented a higher risk, 66.9% greater than Lanio pileatus and Sporophila caerulescens and with a 27.9% greater probability than Sporophila nigricolis. The new coccidian species described were Isospora dominicana [ellipsoid oocysts, 25 (30-20) x 25 (28-20) µm] in Paroaria dominicana; Isospora beagai [ovoid oocysts, 28 (32-17) x 25 (29-16) µm] and Isospora ferri [ellipsoid oocysts, 20 (22-16) x 18 (22-15) µm] in Saltator similis; Isospora ruficapillus [spheric to subspherical oocysts, 25 (26-23) x 24 (25-21) µm] in Schistochlamys ruficapillus; and Isospora chopi [spherical to sub-spherical oocysts, 24.5 x 22 (30-20 x 25-20) µm] and Isospora gnorimopsar [sub-spherical to ovoid oocysts, 27 x 23 (32-22 x 28-20) µm] in Gnorimopsar chopi. The morphometry and features were compared with previously described Isospora in passerines. New coccidian species and new passerine hosts are described for Isospora and recommends for constant monitoring during rehabilitation, especially for the hosts of Thraupidae and Icteridae.(AU)

New Isospora and Host Species in Brazilian Passerines

Normal passerines (n=216) were evaluated for oocysts of Isospora in feces at the Triage Center for Wild Animals (CETAS, IBAMA, Belo Horizonte; August 21 to September 21, 2012). The positive samples with oocysts represented 13.0% of Cardinalidae (n=23), 11.2% of Emberizidae (n=107), 50% of Icteridae (n=10) and 60.3% of Thraupidae (n=68). The probability of fecal oocysts attributable to the host in Thraupidae is higher than in Cardinalidae, Emberizidae, Fringillidae and Turdidae, but similar to Icteridae. No oocysts were found in Fringillidae and Turdidae. Within Thraupidae, Isospora was for the first time described in Paroaria dominicana and Schistochlamys ruficapillus and within Icteridae, in Gnorimopsar chopi. Saltator similis presented a higher risk, 66.9% greater than Lanio pileatus and Sporophila caerulescens and with a 27.9% greater probability than Sporophila nigricolis. The new coccidian species described were Isospora dominicana [ellipsoid oocysts, 25 (30-20) x 25 (28-20) µm] in Paroaria dominicana; Isospora beagai [ovoid oocysts, 28 (32-17) x 25 (29-16) µm] and Isospora ferri [ellipsoid oocysts, 20 (22-16) x 18 (22-15) µm] in Saltator similis; Isospora ruficapillus [spheric to subspherical oocysts, 25 (26-23) x 24 (25-21) µm] in Schistochlamys ruficapillus; and Isospora chopi [spherical to sub-spherical oocysts, 24.5 x 22 (30-20 x 25-20) µm] and Isospora gnorimopsar [sub-spherical to ovoid oocysts, 27 x 23 (32-22 x 28-20) µm] in Gnorimopsar chopi. The morphometry and features were compared with previously described Isospora in passerines. New coccidian species and new passerine hosts are described for Isospora and recommends for constant monitoring during rehabilitation, especially for the hosts of Thraupidae and Icteridae.

Toxoplasmose sistêmica em filhotes de gatos / Systemic toxoplasmosis in kittens

Background: Toxoplasmosis is a worldwide disease that affects virtually all species of warm-blooded animals. The felids,domestic and wild, are considered the definitive hosts of the protozoan. In Brazil, Toxoplasma gondii infection has beendiagnosed in horses, goats, primates, dogs and cats. In the backlands of Paraíba, the disease has been sporadically reportedaffecting dogs with canine distemper and swine, but cases of systemic toxoplasmosis in cats have not yet been described.The aim of the present study was to describe the main epidemiological, clinical and anatomopathological aspects of twocases of systemic toxoplasmosis in kittens.Cases: Two kittens were affected with three (cat 1) and six (cat 2) months old, females, and crossbreed. The kittens had notbeen vaccinated or dewormed, and were raised with other cats in a peridomiciliary regime in a rural area in the backlandsof Paraíba. Cat 1 was thin, apathetic, dehydrated, tachypneic and with pale mucous membranes. Cat 2, showed inappetence,apathy, jaundice, fever, dehydration, dyspnea and abdominal breathing pattern. At necropsy, non-collapsed, shiny, reddishlungs with multifocal whitish areas, punctuated or nodular, measuring from 0.1 to 0.3 cm in diameter, were found on thepleural surface and parenchyma. The livers were pale, with lobular pattern accentuation, and reddish depressed multifocalareas randomly distributed on the capsular surface. Histologically, multifocal to coalescent areas of necrosis, moderate (cat1) or marked (cat 2), associated with intralesional bradyzoites and tachyzoites and variable lymphoplasmacytic infiltratewere observed. In cat 2, numerous bradyzoites were visualized in the gray matter of the left cerebral hemisphere (temporaland parietal lobes), sometimes associated with a moderate lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate. In the perivascularspaces of the...

Toxoplasmose sistêmica em filhotes de gatos / Systemic toxoplasmosis in kittens

Background: Toxoplasmosis is a worldwide disease that affects virtually all species of warm-blooded animals. The felids,domestic and wild, are considered the definitive hosts of the protozoan. In Brazil, Toxoplasma gondii infection has beendiagnosed in horses, goats, primates, dogs and cats. In the backlands of Paraíba, the disease has been sporadically reportedaffecting dogs with canine distemper and swine, but cases of systemic toxoplasmosis in cats have not yet been described.The aim of the present study was to describe the main epidemiological, clinical and anatomopathological aspects of twocases of systemic toxoplasmosis in kittens.Cases: Two kittens were affected with three (cat 1) and six (cat 2) months old, females, and crossbreed. The kittens had notbeen vaccinated or dewormed, and were raised with other cats in a peridomiciliary regime in a rural area in the backlandsof Paraíba. Cat 1 was thin, apathetic, dehydrated, tachypneic and with pale mucous membranes. Cat 2, showed inappetence,apathy, jaundice, fever, dehydration, dyspnea and abdominal breathing pattern. At necropsy, non-collapsed, shiny, reddishlungs with multifocal whitish areas, punctuated or nodular, measuring from 0.1 to 0.3 cm in diameter, were found on thepleural surface and parenchyma. The livers were pale, with lobular pattern accentuation, and reddish depressed multifocalareas randomly distributed on the capsular surface. Histologically, multifocal to coalescent areas of necrosis, moderate (cat1) or marked (cat 2), associated with intralesional bradyzoites and tachyzoites and variable lymphoplasmacytic infiltratewere observed. In cat 2, numerous bradyzoites were visualized in the gray matter of the left cerebral hemisphere (temporaland parietal lobes), sometimes associated with a moderate lymphoplasmacytic inflammatory infiltrate. In the perivascularspaces of the...(AU)

Natural Sarcocystis gigantea infection in sheep from Southern Brazil / Infecção natural por Sarcocystis gigantea em ovinos no Rio Grande do Sul

Protozoal diseases caused by species of Sarcocystis can cause serious damage in sheep flocks, inducing decreased growth conversion rates and partial or complete loss of carcasses at the slaughterhouse. This article describes an outbreak of Sarcocystis gigantea infection in sheep slaughtered in a farm in Rio Grande do Sul State, Brazil. Between July and September 2013, three sheep showed multiple nodules in the esophagus that were microscopically characterized as encapsulated cysts filled with elongated, basophilic, nucleated structures morphologically consistent with S. gigantea bradyzoites. Diagnosis was made based on the epidemiological, macroscopic, and microscopic findings. This is the first report of this infection in sheep in Rio Grande do Sul and should be recognized by veterinarians, especially during meat inspection.(AU)

Doenças causadas por protozoários do gênero Sarcocystis podem causar sérios prejuízos em rebanhos de ovinos, por induzirem retardo no crescimento e condenação parcial ou total das carcaças em abatedouro. O presente trabalho descreve a infecção natural por Sarcocystis gigantea em ovinos abatidos em uma propriedade rural no Rio grande do Sul. Entre julho e setembro de 2013, três ovinos apresentaram múltiplos nódulos no esôfago, os quais, microscopicamente, corresponderam a cistos circundados por cápsula rugosa, repletos de estruturas alongadas, basofílicas e nucleadas, morfologicamente compatíveis com bradizoítos de S. gigantea. Os dados epidemiológicos unidos aos achados macroscópicos e microscópicos permitiram o diagnóstico conclusivo. Esse foi o primeiro relato dessa infecção no Rio Grande Sul e deve ser reconhecida por veterinários de campo e especialmente no momento da inspeção das carcaças no abatedouro.(AU)

Seroepidemiology of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp. among horses in the south of the state of Minas Gerais, Brazil / Soroepidemiologia de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp. em Equinos no Sul do Estado de Minas Gerais, Brasil

The present study used the indirect fluorescent antibody test (IFAT) to determine the seroprevalence of Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii and Neospora spp., and evaluated the variables associated with these infections among 506 apparently healthy horses, reared in the south of the state of Minas Gerais, Brazil. This study was conducted between April 2012 and October 2013. Among the horses, the true prevalence of S. neurona was 26% (95% CI: 22.0-30.4%), T. gondii 19.9% (95% CI: 15.5-24.8%) and Neospora spp. 23.9% (95% CI: 19.9-28.1%); and among the farms, 88.3% (95% CI: 74.4-91.6%), 71.6% (95% CI: 41-92.8%) and 85% (95% CI: 70.7-96.1%), respectively. Regarding mixed infection, 17 horses (3.4%) were seropositive for both S. neurona and T. gondii, 16 (3.2%) for T. gondii and Neospora spp. and 14 (2.8%) for S. neurona and Neospora spp. The associations between seropositivity and variables relating to the structure of the farm, management and health were analyzed using the logistic regression analysis, through the generalized estimating equations (GEE). The results suggest that the south of Minas Gerais is an enzootic area for S. neurona, T. gondii and Neospora spp. among horses, with prevalence of asymptomatic subclinical or chronic infections.(AU)

Este estudo determinou, pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), a soroprevalência de Sarcocystis neurona, Toxoplasma gondii e Neospora spp., e avaliou as variáveis associadas com a infecção, em 506 equinos, aparentemente sadios, criados no Sul de Minas, Brasil. O estudo foi realizado no período de abril de 2012 a outubro de 2013. Entre equinos, a prevalência verdadeira para S. neurona foi de 26% (IC 95%= 22,0-30,4%); para T. gondii de 19,9% (IC 95%= 15,5-24,8%); e para Neospora spp. de 23,9% (IC 95%= 19,9-28,1%); e entre propriedades, 88,3% (IC 95%= 74,4-91,6%), 71,6% (IC 95% = 41-92,8%), e 85% (IC 95%= 70,7-96,1%), respectivamente. Em relação à infecção mista, 17 (3,4%) equinos foram soropositivos para S. neurona e T. gondii, 16 (3,2%) para T. gondii e Neospora spp., e 14 (2,8%) para S. neurona e Neospora spp. A associação entre soropositividade e variáveis relacionadas à estrutura da propriedade, manejo e sanidade, foi analisada, utilizando-se a análise de regressão logística estimada por Generalized Estimating Equations (GEE). Os resultados sugerem que o Sul de Minas é área enzoótica para S. neurona, T. gondii e Neospora spp. em equinos, com predomínio de infecções subclínicas ou crônicas, assintomáticas.(AU)

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

Antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii detected in buffaloes from Rio Grande do Sul, Brazil / Anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii detectados em búfalos no Rio Grande do Sul

The presence of antibodies against Neospora caninum, Sarcocystis spp. and Toxoplasma gondii was evaluated in buffaloes (Bubalus bubalis) from Rio Grande do Sul state (RS), southern Brazil. Serum samples (n=220) were analyzed for antibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT). Antibody presence was considered when the titers were equal or higher than 100 for these protozoa. A total of 60.5% (133/220) buffalo serum samples were positive for at least one of the protozoa evaluated in this study. Antibodies for N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii were found in 36.4% (80/220), 25.5% (56/220) and 16.8% (37/220) of the buffaloes respectively, indicating a higher frequency of N. caninum infection (p=0.0133). The IFAT is a suitable method to diagnose N. caninum, Sarcocystis spp. and T. gondii infection in buffaloes for detecting IgG antibodies. This study demonstrates the presence of these three protozoa in buffalo herds in RS, Brazil, which may be source of infection to other animals. The high frequency of animals positive for N. caninum is important and could be related to reproductive problems. Additionally, the presence of Sarcocystis spp. and T. gondii in buffaloes can be a possible public health issue.(AU)

A presença de anticorpos contra Neospora caninum, Sarcocystis spp. e Toxoplasma gondii foi avaliada em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Rio Grande do Sul (RS), Região Sul do Brasil. Amostras de soro de 220 bubalinos foi analisada para presença de anticorpos, através de reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Foram consideradas positivas as amostras que apresentaram títulos de anticorpos maiores ou iguais a 100, para os protozoários estudados. Um total de 60,5% (133/220) das amostras sorológicas dos búfalos foram positivas para pelo menos um dos parasitas pesquisados. Anticorpos para N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii foram encontrados em 36,4% (80/220); 25,5% (56/220) e 16,8% (37/220) dos búfalos respectivamente, indicando que houve uma maior frequência de infecção de N. caninum em relação aos demais protozoários (p=0.0133). A RIFI é um método adequado para o diagnóstico sorológico da infecção por N. caninum, Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos. Este estudo demonstrou a presença destes três protozoários em bubalinos no RS, Brasil, que pode ser fonte de infecção para outros animais. A elevada ocorrência de animais positivos para N. caninum é importante e pode estar relacionada a problemas reprodutivos. Adicionalmente, a presença de Sarcocystis spp. e T. gondii em búfalos, pode significar um possível problema de saúde pública.(AU)

ASPECTOS MORFOLOGICO E MOLECULAR DE MICROPARASITOS EUCARIOTOS EM Ageneiosus inermis (LINNAEUS, 1766) (SILURIFORMES: AUCHENIPTERIDAE) E Plagioscion auratus (CASTELNAU, 1855) (PERCIFORMES: SCIAENIDAE) CAPTURADOS NA ILHA DE JUTUBA, PARÁ

A bacia amazônica abriga a maior e mais diversa ictiofauna do mundo, sendo o pescado importante fonte de alimento nessa região. Os peixes são os vertebrados que apresentam os maiores índices de infecção por parasitos, devido às peculiaridades do meio aquático facilitar a propagação, reprodução e ciclo de vida desse grupo. A presença de microparasitos pode ocasionar a diminuição da qualidade do pescado, podendo ser transmitida ao homem. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo caracterizar os microparasitos eucariotos nas espécies Ageneiosus inermis e Plagioscion auratus capturados na Ilha de Jutuba, Belém, Pará. Foram realizadas das espécies com auxílio de tarrafa e rede de emalhar em coletas bimestrais. Os peixes foram transportados vivos para o Laboratório de Pesquisa Carlos Azevedo UFRA/Belém, anestesiados e necropsiados para análise de microparasitos (CEUA 13/2014). Pequenos fragmentos dos órgãos parasitados foram retirados, fixados e processados para microscopia de Luz (ML) e biologia Molecular (BM) para identificação e foi verificada a prevalência parasitária. A partir das análises foram identificados dois gêneros pertecentes ao filo Cnidaria (Subfilo Myxozoa), um pertecente ao filo Apicomplexa e um ao Filo Microsporídia. Na espécie A. inermis observou a presença de Calyptospora sp. no fígado com prevalência de 27%, apresentando alterações histopalógicas, Ellipsomyxa sp. na vesícula biliar parasitando 65% dos hospedeiros e Myxosporo não identificados na bexiga urinária com 86,7%. Em P. auratus foi observado no fígado microsporídio com prevalência de 30%, apresentando alteração tecidual. O gênero Kudoa foi encontrado na musculatura esquelética nas duas espécies de hospedeiro desse estudo, com 40% para A. inermis e 35% para P. auratus. As infecções apresentadas por esses grupos de microparasitas não haviam ainda sido descritas na literatura para essas espécies. A diversidade de microparasitas encontradas neste estudo, evidencia a importância da intensificação dos estudo de ictioparasitos na região amazônica.

The Amazon basin is home to the largest and most diverse ichthyofauna in the world, with fish being an important source of food in this region. Fish are the vertebrates that have the highest rates of infection by parasites, due to the peculiarities of the aquatic environment to facilitate the propagation, reproduction and life cycle of this group. The presence of microparasites can cause a decrease in the quality of the fish and can be transmitted to humans. In view of this, the present study aimed to characterize eukaryotic microparasites in the species Ageneiosus inermis and Plagioscion auratus captured in the island of Jutuba, Belém, Pará. They were carried out with the help of a net and gillnet in bimonthly collections. The fish were transported alive to the Carlos Azevedo Research Laboratory - UFRA / Belém, anesthetized and necropsied for analysis of microparasites (CEUA 13/2014). Small fragments of Organs parasitized organs were removed, fixed and processed for Light microscopy (ML) and Molecular biology (BM) for identification and the parasite prevalence was verified. From the analyzes, two genera belonging to the phylum Cnidaria (Subphylum Myxozoa) were identified, one belonging to the phylum Apicomplexa and one to the Phylum Microsporídia. In the species A. inermis observed the presence of Calyptospora sp. in the liver with a prevalence of 27%, presenting histopalogical alterations, Ellipsomyxa sp. in the gallbladder parasitizing 65% of the hosts and Myxosporo not identified in the urinary bladder with 86.7%. In P. auratus, microsporidium was observed in the liver with a prevalence of 30%, with tissue alteration. The genus Kudoa was found in skeletal musculature in the two host species in this study, with 40% for A. inermis and 35% for P. auratus. The infections presented by these groups of microparasites had not yet been described in the literature for these species. The diversity of microparasites found in this study, highlights the importance of intensifying the study of ichthyosparasites in the Amazon region.

Estudo de patogenicidade de duas cepas de Neospora caninum isoladas de caprinos e sua correlação genética com outras cepas por genotipagem de microssatélites

O presente trabalho compreende o Estudo de diferentes cepas de Neospora caninum do Brasil e da Escócia quanto às suas características genéticas, avaliação de patogenicidade, virulência e possibilidade de isolamento. O primeiro capítulo, consiste de um artigo publicado no periódico internacional Veterinary Parasitology e descreve uma tentativa de isolamento de cepas do parasito utilizando tecido placentário de cabras naturalmente infectadas, em um bioensaio utilizando gerbis. Apesar dos gerbis serem descritos na literatura como sendo altamente susceptíveis à infecção por N. caninum, somente foi obtido sucesso na infecção de animais após imunossupressão com altas doses de metilpredinisolona. Animais imunossuprimidos apresentaram sinais clínicos de emagrecimento, pelos arrepiados e alterações de propriocepção como Head tilt. Análises histopatológicas revelaram reações inflamatórias no encéfalo, consistindo de infiltrados inflamatórios mononucleares multifocais associados à manguitos perivasculares e estruturas parasitárias semelhantes a cistos e taquizoítos, juntamente com áreas de necrose associadas à infiltrado inflamatório de macrófagos e reação de cicatrização em musculatura esquelética. Apesar do sucesso na infecção dos gerbis, não foi possível obter o isolamento do parasito em cultivo celular em uma primeira tentativa, o que levou à segunda parte do trabalho. O capítulo dois consiste de um artigo publicado no periódico intenracional Experimental Parasitology. Foram utilizados tecidos dos gerbis infectados descritos anteriormente e novas amostras de sistema nervoso central de caprinos naturalmente infectados em um bioensaio em camundongos C57BL6 Knockout para o gene Interferon gamma (camundongos knockout- KO). Os camundongos Knockout por serem incapazes de desenvolver uma resposta imune adequada ao N. caninum, permitiram a rápida replicação de taquizoítos principalmente em macrófagos peritoneais, os camundongos apresentaram acentuada perde de peso, letargia e ascite 15 a 30 dias após inoculação, quando foram eutanasiados e o líquido peritoneal utilizado para infecção de monocamadas de células VERO. A grande quantidade de taquizoítos no líquido peritoneal de camundongos KO permitiu uma rápida adaptação e crescimento dos mesmos em cultura de células, dando origem a dois isolados de cabras nomeados NC-Goat1 e NC-Goat2. Os dois isolados foram testados quanto à sua Patogenicidade em um modelo de infecção experimental em camundongos BALB/c, amplamente utilizado na literatura. As cepas não apresentaram alta patogenicidade e virulência no modelo de infecção de camundongos, apesar das duas cepas terem sido associadas a doença clínica em caprinos, com abortos, natimortos e encefalite em caprinos jovens e adultos. O terceiro capítulo apresenta resultados de um estudo genético de genotipagem dos isolados NC-Goat1 e NC-Goat2, amostras clínicas de caprinos e bovinos do sul de Minas Gerais e amostras de bovinos da região de Dumfries e Galloway na Escócia. Utilizando a técnica de genotipagem por microssatélites, análises filogenéticas evidenciaram que as cepas de N. caninum presentes nos isolados e nas amostras clínicas de caprinos tinha relação próxima com os isolados brasileiros NC-SP1, NC-Bahia e NC-Goiás, enquanto que as amostras de bovinos de minas gerais não se correlacionaram proximamente às outras. Analisando as amostras provenientes de rebanhos escoceses, todos tenderam a se relacionar proximamente entre elas e com outras amostras escocesas descritas anteriormente na literatura. Análises adicionais utilizando marcadores microssatélites descritos pelo grupo de pesquisa do Instituto Moredun, evidenciaram genótipos mistos associados ao isolado padrão de N. caninum (NC-1), sugerindo que o isolado poderia ter sido composto por múltiplos genótipos ao isolamento e à medida que foi replicado em cultura celular convergiu em uma população mais homogênea de parasitos.

The present work comprises the study of different strains of Neospora caninum, from Brazil and Scotland, regarding their genetic characteristics, pathogenicity, virulence and attempts at isolation. The first chapter consists of an article published in the journal Veterinary Parasitology and describes an attempt to isolate parasite strains using placental tissue from naturally infected goats in a bioassay using gerbils. Although gerbils are described in the literature as highly susceptible to N. caninum infection, successful infection of animals has only been achieved after immunosuppression with high doses of methylpredinisolone. Immunosuppressed animals showed clinical signs of weight loss, fur and proprioception changes such as Head tilt. Histopathological analysis revealed inflammatory reactions in the brain consisting of multifocal mononuclear inflammatory infiltrates associated with perivascular cuffs, cyst-like and tachyzoite-like parasitic structures, along with areas of necrosis associated with macrophage inflammatory infiltrate and skeletal muscle scar formation. Despite the success in gerbil infection, it was not possible to obtain isolation of the parasite in cell culture in a first attempt, which led to the second part of the work. The chapter two consists of an article published in the journal Experimental Parasitology. Tissues from the previously described infected gerbils and new samples from the central nervous system of naturally infected goats were used in a bioassay using C57BL6 interferon gamma Knockout mouse (KO mice). Knockout mice, being unable to develop an adequate immune response to N. caninum, allowed the rapid replication of tachyzoites mainly in peritoneal macrophages, showing marked weight loss, lethargy and ascites 15 to 30 days after inoculation, when they were euthanized, and the peritoneal fluid used for infection of VERO cell monolayers. The large amount of tachyzoites in the peritoneal fluid of KO mice allowed their rapid adaptation and growth in cell culture, resulting in two goat isolates named NCGoat1 and NC-Goat2. Both isolates were tested for pathogenicity in a widely used experimental BALB/c mouse infection model. The strains did not show high pathogenicity and virulence in the mouse infection model, although both strains were associated with clinical disease in goats, with abortions, stillbirths and encephalitis in young and adult goats. The third chapter presents the results of a genetic genotyping study of the isolates NCGoat1 and NC-Goat2, clinical samples from goats and cattle from southern Minas Gerais and samples from cattle from the Dumfries and Galloway region of Scotland. Using the microsatellite genotyping technique, phylogenetic analyzes showed that N. caninum strains present in the isolates and clinical samples of goats had a close relationship with the Brazilian isolates NC-SP1, NC-Bahia and NC-Goiás, while the samples from Minas Gerais cattle did not correlate closely to the others. Analysing samples from Scottish herds, all tended to relate closely to each other and to other Scottish samples previously described in the literature. Additional analyses using microsatellite markers described by the Moredun Institute research group showed mixed genotypes associated with the standard N. caninum isolate (NC-1), suggesting that the isolate could have been composed of multiple genotypes on isolation and as it was replicated in cell culture they converged to a more homogeneous population of parasites.

Investigação de anticorpos contra Sarcocystis neurona e Sarcocystis cruzi em equinos / Investigation of antibodies against Sarcocystis neurona and Sarcocystis cruzi in equines

Sarcocystis neurona is the primary agent for Equine Protozoal Myeloencephalitis (EPM), important neurological disease characterized by behavior or muscular changes, that impairs animal performance and husbandry. Sarcocystis cruzi is a pathogen related to myositis in cattle. Although related the life cycles of the parasites are distinct. S. neurona has opossums (Didelphis spp.) and S. cruzi, dogs as definitive hosts. However, S. neurona and S. cruzi may undergo cross-reactivity in serological tests, interfering on results of EPM ante-mortem diagnostic tests. In the present study, serology of 189 mares was performed by indirect immunofluorescence antibody test, using antigens of S. neurona and S. cruzi in order to assess the exposure degree of animals to antigens. Analyzing the results, it was observed that most of the animals (84.13%) reacted with at least one protozoal species and the number of animals which showed antibodies against S. cruzi was greater than S. neurona (80.42% and 33.86%, respectively) and a third of seropositive animals reacted to antigens of both species.(AU)