Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.(AU)

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.(AU)

Criopreservação e crioprotetores na proteção do espermatozoide suíno / Cryopreservation and cryoprotectors in protection of the swine sperm

O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.

The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.

Criopreservação e crioprotetores na proteção do espermatozoide suíno / Cryopreservation and cryoprotectors in protection of the swine sperm

O uso de sêmen congelado apresenta menores índices de concepção e menor número de leitões nascidos por parto. Isso ocorre porque a criopreservação acarreta variações de temperatura, alteração da permeabilidade espermática e processos oxidativos, sendo que o sêmen suíno apresenta, naturalmente, baixa capacidade antioxidante e sofre estresse oxidativo. No entanto, vários crioprotetores são utilizados para diversas espécies e já é descrito o uso de colesterol, carreado com ciclodextrina, e de aminoácidos, visando a melhoria do sêmen após o descongelamento. A adição de colesterol ao sêmen, previamente à criopreservação, mantém a integridade da membrana acrossomal e retarda a capacitação espermática, feito que pode ser facilitado com o carreamento por ciclodextrina. Em paralelo, pesquisas apontam a importância do uso de aminoácidos no sêmen, que formam uma camada de proteção térmica que preserva a integridade da célula espermática, além de apresentarem função osmorregulativa. Nesse sentido, a viabilização da criopreservação do sêmen suíno favorece o melhoramento genético, minimiza a transmissão de patógenos e possibilita a formação de um banco de germoplasma. Para tanto, faz-se necessário o aprimoramento do uso de crioprotetores em uma proporção ideal, que mantenha a integridade da membrana espermática e não prejudique a capacitação espermática e a reação acrossomal, necessárias para a fecundação.(AU)

The use of frozen semen presents lower conception rates and fewer piglets born per birth. This is due to the fact that cryopreservation causes variations in temperature, changes in sperm permeability and oxidative processes, and the swine semen naturally presents low antioxidant capacity and undergoes oxidative stress. However, several cryoprotectants are used for several species, and the use of cyclodextrin and amino acid-loaded cholesterol is already described, aiming to improve the semen after thawing. The addition of cholesterol to the semen prior to cryopreservation maintains the integrity of the acrosomal membrane and slows sperm capacitation, which can be facilitated by cyclodextrin loading. In parallel, research indicates the importance of the use of amino acids in the semen, which form a layer of thermal protection that preserves the integrity of the sperm cell, in addition to presenting osmorregulatory function. In this sense, the viability of the cryopreservation of the swine semen favors the genetic improvement, minimizes the transmission of pathogens and allows the formation of a germplasm bank. Therefore, it is necessary to improve the use of cryoprotectants in an ideal proportion, which maintains the integrity of the sperm membrane and does not detract from the sperm capacitation and acrosomal reaction required for fertilization.(AU)

Diferentes tipos de embalagens e qualidade do sêmen suíno criopreservado / Different types of packaging and quality of cryopreserved swine semen

Devido à alta sensibilidade do espermatozoide suíno à criopreservação, torna-se importante o estudo acerca dos danos provocados à célula, pela agressão térmica ocasionada durante este processo. Sendo assim, avaliou-se neste trabalho, a influência de diferentes embalagens, utilizadas para o armazenamento de sêmen suíno, sobre a qualidade do espermatozoide criopreservado. Foram utilizados animais híbridos, a coleta do sêmen foi feita pela técnica da mão enluvada. Foram analisados o vigor (0 a 5), a motilidade (0 a 100%), a taxa de degradação da motilidade e a integridade acrossomal. O sêmen foi congelado em palhetas de 0,5mL, criotubos de 2,0mL e macrotubos de 4 e 5mL. As amostras de sêmen suíno congelado em palhetas apresentaram os melhores resultados de vigor espermático (2,3), de motilidade (45,4%), de taxa de degradação da motilidade (56,5%) e de integridade acrossomal (60,6%), quando comparadas às amostras criopreservadas nos demais tipos de embalagens avaliadas (p<0,05). Somente para o parâmetro taxa de degradação da motilidade, o sêmen conservado em palhetas apresentou resultados similares ao conservado em macrotubo de 4mL (54,1%). Os resultados pós-descongelação indicaram que o sêmen envasado nas palhetas foi o que apresentou características condizentes com a possibilidade de serem utilizados nos protocolos de inseminação artificial, com possibilidades de bons resultados de fertilidade. Concluiu-se que embalagens que permitam uma maior velocidade de trocas de temperatura entre as células encontradas no bordo e no centro, favorecem a uma melhor qualidade do sêmen descongelado.

Due to high sensitivity of the swine spermatozoa to cryopreservation, it is important to study the damage caused to the cell by thermal aggression during this process. Thus, this study evaluated the influence of different packages used for the storage of swine semen on the quality of cryopreserved spermatozoa. Hybrid animals were used, and semen collection was made by the gloved hand technique. The vigor (0 the 5), motility (0 the 100%), rate of motility degradation and acrosome integrity were analyzed. The semen was frozen in straws of 0.5mL, cryotubes of 2.0mL and macrotubes of 4 and 5mL. The swine semen samples frozen in straws showed the best results in sperm vigor (2.3), motility (45.4%), motility degradation rate (56.5%) and acrosomal integrity (60.6%), when compared to the cryopreserved samples in the other types of packaging evaluated (p<0.05). Only for the motility degradation rate parameter, the semen preserved in straws showed results similar to the one conserved in a 4 mL macrotube (54.1%). The results after thawing indicated that the semen packed in straws was the one that presented consistent characteristics with the possibility of being used in artificial insemination protocols with possibilities of good fertility results. It was concluded that packages that allow a higher speed of temperature changes between the cells found on the edge and in the center of them, favor a better quality of the thawed semen.

Uso de placa aquecedora visando a incubação do espermatozoide ovino após criopreservação / Use of heating plate aiming at the ovine sperm incubation after cryopreservation

Objetivou-se avaliar a utilização da placa aquecedora, em substituição ao banho-maria, no teste de termorresistência (TTR) de espermatozoides de carneiros após a criopreservação. Foram coletados 10 ejaculados de três carneiros adultos (n=30), por meio de vagina artificial para ovinos. Em seguida, foram diluídos em TrisGema de ovo, a uma concentração final de 200 x106 sptz/mL, e submetidos á curva de resfriamento, para posterior criopreservação em palhetas em nitrogênio líquido. Após descongelação, as amostras foram analisadas quanto à integridade de membrana, de acrossoma e atividade mitocondrial. O sêmen então foi dividido em dois tubos e submetido ao TTR, um em banho-maria e outro em placa aquecedora, e, ainda, avaliado a cada 30 minutos, do tempo zero (pós-descongelação) até 90 minutos de incubação, a 37 °C, quanto à motilidade espermática e à motilidade progressiva. As variáveis foram submetidas à análise de variância e as médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. Após o processo de congelação/descongelação, os espermatozoides apresentaram baixo percentual de integridade de membrana e elevado percentual de atividade mitocondrial e integridade do acrossoma. Não foi observada diferença na motilidade espermática nem na motilidade progressiva ao longo do TTR, quando comparados os espermatozoides que foram incubados em banho-maria aos incubados em placa aquecedora durante o período de 90 minutos. A placa aquecedora pode ser utilizada como meio de incubação dos espermatozoides de carneiros em substituição ao banho-maria.

The objective was to evaluate the use of the hot plate to replace the water bath in the thermo resistance test of ovine sperm after cryopreservation. Ten ejaculates were also collected from three adult sheep (n=30), by means of artificial sheep vagina. The collected samples were diluted in Tris-Egg Yolk, at a final concentration of 200 x106 sptz/mL and subjected to a cooling curve for subsequent cryopreservation in liquid nitrogen straws. Immediately after thawing, the samples were analyzed for membrane and acrosome integrity, and mitochondrial activity. The semen was then divided into two tubes and submitted to TTR, one in a water bath and the other in a hot plate, and evaluated every 30 minutes, from time zero (post-thaw) until 90 minutes of incubation at 37 °C, for sperm motility and progressive motility. The variables were subjected to analysis of variance and the means were compared using the Tukey test at 5% probability. After the freeze/thawing process, sperm showed a low percentage of membrane integrity, high percentage of mitochondrial activity, in addition to maintaining the integrity of acrossome. No difference was observed in sperm motility nor progressive motility, along the TTR, when comparing the sperm that were incubated in a water bath in relation to those incubated in a hot plate during the period of 90 minutes. The heating plate can be used as a means of incubating sheep sperm in replacement of the water bath.

Criopreservação de sêmen em onças pintadas de cativeiro / Semen cryopreservation in captive jaguars

A onça-pintada é um dos principais animais da fauna brasileira e dentre todos os felinos, a onça-pintada (Panthera onca) somente é menor que o leão (Panthera leo) e o tigre (Panthera tigris), logo sendo classificada como o maior felino de todo o continente americano. Apesar de todo o reconhecimento e importância, a espécie vem sofrendo significativa redução no número de indivíduos. Já há bastante tempo essa espécie vem mantendo seu status de conservação como espécie vulnerável, segundo o Ministério do Meio Ambiente, e próximo de ameaçada, segundo classificação da Lista Vermelha da IUCN. As principais causas que levam à diminuição da população desta espécie estão ligadas à redução no número de suas presas naturais como cervos, queixadas e catetos, e principalmente devido à expansão de áreas urbanas, destruição dos habitats naturais, atropelamentos em rodovias e caça ilegal. Tais fatores capazes de reduzir a população desses animais vem se agravando constantemente devido principalmente as políticas públicas ineficazes para a proteção de espécies ameaçadas. Na contramão desta situação, pesquisadores trabalham visando o desenvolvimento de estratégias com o intuito de proteger a espécie. A estratégia de conservação de maior destaque e de resultado mais rápido a curto prazo são as biotécnicas reprodutivas, uma vez que tais técnicas são capazes de aumentar o número de indivíduos em um curto espaço de tempo. Nas biotécnicas reprodutivas, destaca-se a criopreservação (congelamento) de sêmen, técnica na qual se permite armazenar amostras sob temperaturas extremamente negativas, por um longo período de tempo e também deslocar o material para quaisquer localidades.

The jaguar is one of the main important animals of the Brazilian fauna and among all felines, the jaguar (Panthera onca) is only smaller than the lion (Panthera leo) and the tiger (Panthera tigris), soon being classified as the largest cat from all over the American continent. Despite all the recognition and importance, the species has undergone a significant reduction in the number of individuals. This species has been maintaining its conservation status as a vulnerable species for a long time, according to the Brazilian Ministry of the Environment, and close to threatened, according to the classification of the IUCN Red List. The main causes that lead to a decrease in the population of this species are related to the reduction in the number of natural prey such as deer, peccary and collared peccary, and mainly due to the expansion of urban areas, destruction of natural habitats, being hit by roads and illegal hunting. Such factors capable of reducing the population of these animals have been constantly worsening due mainly to ineffective public policies for the protection of endangered species. Against this background, researchers are working to develop strategies to protect the species. The conservation strategy of greater prominence and of quicker result in the short term is the reproductive biotechniques, since such techniques are able to increase the number of individuals in a short period of time. In reproductive biotechniques, semen cryopreservation (freezing) stands out, a technique in which samples can be stored under extremely negative temperatures for a long period of time and the material can also be moved to any location.

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.

Uso do DMSO a 3% e diferentes concentrações de glicerol na curva de resfriamento do sêmen suíno / Use of 3% DMSO and different glycerol concentrations in the swine semen cooling curve

Este trabalho teve como objetivo testar o crioprotetor Dimetilsulfóxido (DMSO-3%) e o glicerol, em cinco concentrações (0,5%, 1%, 3%, 5% e 7%) em uma nova curva de resfriamento. Foram feitas sete coletas de sete varrões (n=49) através da técnica da mão enluvada. O DMSO (3%) e o glicerol foram adicionados separadamente ao diluente de congelação. Durante a análise da curva, a menor média de vigor espermático foi observada à concentração de 7% de glicerol. Na concentração de 1% de glicerol obteve-se maior média de motilidade espermática (72±12,3), sem diferença em relação à concentração de 5%. Maiores médias de vigor e motilidade espermática pós-descongelação foram observadas a3% de glicerol, diferindo das concentrações de 0,5% de glicerol e 3% de DMSO quanto ao vigor e dos demais tratamentos quanto à motilidade espermática. No teste de resistência osmótica o glicerol a 3% como diluente de congelação proporcionou melhor proteção à membrana espermática, diferindo dos demais tratamentos, exceto do DMSO a 3% e glicerola 1%. Observou-se maior porcentagem de células vivas na concentração de 5% e 7% de glicerol, diferindo das demais concentrações. Já o maior percentual de espermatozoides com acrossomas intactos foi observado quando se utilizou o diluente de congelação contendo glicerol a 3% (73,8±11,9). Os resultados do presente estudo, sugeriram que o glicerol, ainda é a melhor opção de crioprotetor a ser utilizada nos processos de criopreservação do espermatozoide suíno.(AU)

This study aimed to test the cryoprotectant Dimethylsulfoxide (DMSO-3%) and glycerol, in five concentrations (0.5%, 1%, 3%, 5% and 7%) in a new cooling curve. Seven collections from seven boars (n=49) through the gloved hand technique were made. DMSO (3%) and glycerol were added separately to the freezing diluent. During the analysis of the curve, the lowest mean sperm count was observed at a concentration of 7% glycerol. The concentration of 1% glycerol obtained more sperm motility (72±12.3) but, did not differ in concentrations of 5% glycerol. Higher mean sperm motility and vigor after thawing were observed at 3%glycerol, differing from 0.5% glycerol and 3% DMSO concentrations regarding vigor and other treatments regarding sperm motility. In the osmotic resistance test, 3% glycerol as a freezing agent provided better protection to the spermatic membrane, differing from the other treatments except for 3% DMSO and 1% glycerol. A higher percentage of living cells was observed in the 5% and 7% glycerol concentration, differing from the other concentrations. The highest percentage of spermatozoa with intact acrosomes was observed when the freezing diluent containing 3% glycerol (73.8±11.9) was used. The results of this study suggested that glycerol is still the best cryoprotective option to be used in cryopreservation processes of swine sperm.(AU)

Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.(AU)

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.(AU)

Vitrificação de sêmen de peixes teleósteos / Vitrification of teleosts fish semen

A preservação de sêmen de peixes é uma técnica promissora para o desenvolvimento daaquicultura, e consiste na conservação dos gametas masculinos a longo prazo. Dentre os procedimentosde criopreservação de sêmen de peixes, a vitrificação vem sendo desenvolvida como uma alternativa àcriopreservação convencional devido à sua rapidez, praticidade e baixo custo. Apesar dos benefícios, essatécnica possui alguns entraves que limitam seu sucesso, uma vez que consiste em mergulhar a amostradiretamente em nitrogênio líquido, necessitando de grandes quantidades de crioprotetores de ação interna,que podem ser tóxicos. Dessa forma, diferentes protocolos precisam ser testados, a fim de obterresultados satisfatórios após a aplicação da técnica. A vitrificação tem sido utilizada com sucesso parasêmen, ovócitos, embriões e tecidos de mamíferos e, atualmente, alguns protocolos de vitrificação desêmen já foram elaborados para determinadas espécies de peixes com relativo sucesso, contudo maisestudos são necessários para aumentar a viabilidade espermática após o reaquecimento. Portanto, oobjetivo desta revisão é resumir os procedimentos básicos do processo de vitrificação de sêmen de peixese apresentar os principais resultados encontrados na literatura.(AU)

The preservation of fish semen is a promising technique for the development of aquaculture, andconsists in the conservation of male gametes in the long term. Among the procedures forcryopreservation of fish semen, vitrification has been developed as an alternative to conventionalcryopreservation due to its speed, practicality, and low cost. Despite the benefits, this technique has someobstacles that limit its success, since it consists of immersing the sample directly into liquid nitrogen,requiring large amounts of internal cryoprotectants, which can be toxic. Thus, different protocols need tobe tested in order to obtain satisfactory results after the application of the technique. Vitrification hasbeen successfully used for semen, oocytes, embryos and mammalian tissues, and currently some semenvitrification protocols have been developed for certain species of fish with relative success, howeverfurther studies are needed to increase sperm viability after warming. Therefore, the purpose of thisreview is to summarize the basic procedures of the fish semen vitrification process and present the mainresults found in the literature.(AU)

Criopreservação de sêmen em onças pintadas de cativeiro / Semen cryopreservation in captive jaguars

A onça-pintada é um dos principais animais da fauna brasileira e dentre todos os felinos, a onça-pintada (Panthera onca) somente é menor que o leão (Panthera leo) e o tigre (Panthera tigris), logo sendo classificada como o maior felino de todo o continente americano. Apesar de todo o reconhecimento e importância, a espécie vem sofrendo significativa redução no número de indivíduos. Já há bastante tempo essa espécie vem mantendo seu status de conservação como espécie vulnerável, segundo o Ministério do Meio Ambiente, e próximo de ameaçada, segundo classificação da Lista Vermelha da IUCN. As principais causas que levam à diminuição da população desta espécie estão ligadas à redução no número de suas presas naturais como cervos, queixadas e catetos, e principalmente devido à expansão de áreas urbanas, destruição dos habitats naturais, atropelamentos em rodovias e caça ilegal. Tais fatores capazes de reduzir a população desses animais vem se agravando constantemente devido principalmente as políticas públicas ineficazes para a proteção de espécies ameaçadas. Na contramão desta situação, pesquisadores trabalham visando o desenvolvimento de estratégias com o intuito de proteger a espécie. A estratégia de conservação de maior destaque e de resultado mais rápido a curto prazo são as biotécnicas reprodutivas, uma vez que tais técnicas são capazes de aumentar o número de indivíduos em um curto espaço de tempo. Nas biotécnicas reprodutivas, destaca-se a criopreservação (congelamento) de sêmen, técnica na qual se permite armazenar amostras sob temperaturas extremamente negativas, por um longo período de tempo e também deslocar o material para quaisquer localidades.(AU)

The jaguar is one of the main important animals of the Brazilian fauna and among all felines, the jaguar (Panthera onca) is only smaller than the lion (Panthera leo) and the tiger (Panthera tigris), soon being classified as the largest cat from all over the American continent. Despite all the recognition and importance, the species has undergone a significant reduction in the number of individuals. This species has been maintaining its conservation status as a vulnerable species for a long time, according to the Brazilian Ministry of the Environment, and close to threatened, according to the classification of the IUCN Red List. The main causes that lead to a decrease in the population of this species are related to the reduction in the number of natural prey such as deer, peccary and collared peccary, and mainly due to the expansion of urban areas, destruction of natural habitats, being hit by roads and illegal hunting. Such factors capable of reducing the population of these animals have been constantly worsening due mainly to ineffective public policies for the protection of endangered species. Against this background, researchers are working to develop strategies to protect the species. The conservation strategy of greater prominence and of quicker result in the short term is the reproductive biotechniques, since such techniques are able to increase the number of individuals in a short period of time. In reproductive biotechniques, semen cryopreservation (freezing) stands out, a technique in which samples can be stored under extremely negative temperatures for a long period of time and the material can also be moved to any location.(AU)

Vitrificação de sêmen de peixes teleósteos / Vitrification of teleosts fish semen

A preservação de sêmen de peixes é uma técnica promissora para o desenvolvimento daaquicultura, e consiste na conservação dos gametas masculinos a longo prazo. Dentre os procedimentosde criopreservação de sêmen de peixes, a vitrificação vem sendo desenvolvida como uma alternativa àcriopreservação convencional devido à sua rapidez, praticidade e baixo custo. Apesar dos benefícios, essatécnica possui alguns entraves que limitam seu sucesso, uma vez que consiste em mergulhar a amostradiretamente em nitrogênio líquido, necessitando de grandes quantidades de crioprotetores de ação interna,que podem ser tóxicos. Dessa forma, diferentes protocolos precisam ser testados, a fim de obterresultados satisfatórios após a aplicação da técnica. A vitrificação tem sido utilizada com sucesso parasêmen, ovócitos, embriões e tecidos de mamíferos e, atualmente, alguns protocolos de vitrificação desêmen já foram elaborados para determinadas espécies de peixes com relativo sucesso, contudo maisestudos são necessários para aumentar a viabilidade espermática após o reaquecimento. Portanto, oobjetivo desta revisão é resumir os procedimentos básicos do processo de vitrificação de sêmen de peixese apresentar os principais resultados encontrados na literatura.

The preservation of fish semen is a promising technique for the development of aquaculture, andconsists in the conservation of male gametes in the long term. Among the procedures forcryopreservation of fish semen, vitrification has been developed as an alternative to conventionalcryopreservation due to its speed, practicality, and low cost. Despite the benefits, this technique has someobstacles that limit its success, since it consists of immersing the sample directly into liquid nitrogen,requiring large amounts of internal cryoprotectants, which can be toxic. Thus, different protocols need tobe tested in order to obtain satisfactory results after the application of the technique. Vitrification hasbeen successfully used for semen, oocytes, embryos and mammalian tissues, and currently some semenvitrification protocols have been developed for certain species of fish with relative success, howeverfurther studies are needed to increase sperm viability after warming. Therefore, the purpose of thisreview is to summarize the basic procedures of the fish semen vitrification process and present the mainresults found in the literature.

Cinética e integridade de espermatozoides caprinos criopreservados utilizando Red Cushion® como estratégia de proteção espermática durante a centrifugação do sêmen / Kinetics and integrity of cryopreserved goat sperm using Red Cushion® as a strategy to sperm protection during semen centrifugation

Objetivou-se avaliar o efeito do gradiente de Iodixanol (Red Cushion®, RC) como método deproteção espermática durante a centrifugação (CE) do sêmen caprino destinado à criopreservação. Foramrealizadas colheitas de sêmen de cinco reprodutores caprinos da raça Anglo Nubiana (N= cincoejaculados/bode). Os ejaculados foram divididos em três grupos experimentais: GC (Controle); G1 (CEutilizado 1ml de RC) e G2 (foi utilizado 0,5mL de RC, misturado ao pellet espermático após a CE). Asamostras foram centrifugadas, diluídas, envasadas e criopreservadas. A cinética espermática foi avaliada porsistema computadorizado de análise (CASA) após a descongelação e pós-teste de termorresistência (TTR), efoi avaliada a integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI, %). Não foram observadasdiferenças para a motilidade total (p=0,1849) avaliada pós-descongelação (GC=45,1%, G1=51,86% eG2=55,28%) ou pós-TTR (GC=10,32%, G1=11,44% e G2=13,16%), bem como para nenhum outroparâmetro cinético avaliado. Também não foram encontradas diferenças para a MPAI (GC=43,70% ±16,60; G1=36,68 ± 17,40; G2=41,72 ± 14,76; p=0,2523). Conclui-se que a utilização de Red Cushion®não promove nenhum benefício à manutenção da cinética e integridade de espermatozoides caprinossubmetidos a centrifugação previamente ao processo de criopreservação do sêmen.

The aim of this study was to evaluate the efficacy of iodixanol gradient centrifugation (RedCushion®, RC) as a method of protection of goat semen submitted to centrifugation previously tocryopreservation process. Semen were collected from five Anglo Nubian goats (n = five ejaculates/goat).The ejaculates were divided into three experimental groups: GC (Control; conventional centrifugation);G1 (centrifugation using 1ml RC) and G2 (centrifugation using 0.5 mL RC, mixed to sperm pellet beforethe cryopreservation). Samples were centrifuged (CE) at 600xg for 10 minutes, diluted, packed andcryopreserved. Sperm kinetics were evaluated using a computer assisted semen analysis (CASA) afterthawing and after thermoresistance test (TTR), and the integrity of the plasma and acrosomal membranewas evaluated (MPAI, %). No differences were observed for total motility (P =0.1849) assessed afterthawing (GC=45.1%, G1=51.86% and G2=55.28%) or post-TTR (GC=10.32%, G1=11.44% andG2=13.16%), as well as for the other kinetic parameters analyzed. Furthermore, no differences for MPAI(CG =43.70% ± 16.60; G1=36.68 ± 17.40; G2=41.72 ± 14.76; P=0.2523) were found comparing thedifferent groups. In conclusion, Red Cushion® was not able to improve the kinetics and integrity of thegoat semen submitted to the cryopreservation process.

Scrotal thermography to assess the seminal quality in Nelore and Girolando bulls / Termografia escrotal e a relação com a qualidade seminal em touros Nelore e Girolando

Bull selection by andrological examination aims to estimate the reproductive capacity of the male. Bulls of zebu origin adapt better to high temperatures than bulls of taurine origin, which may influence scrotum temperature and seminal quality due to the imbalance of testicular thermoregulation. The objective of this study was to investigate the relationship between bioclimatic variables, the temperature of body and scrotal areas, assessed with infrared thermography, and the quality of fresh and post-thawed semen in zebu Nelore bulls (Bos taurus indicus) and Girolando bulls (Bos taurus taurus x Bos taurus indicus). Bulls were kept in pickets with access to water, mineral mix and a diet supplemented with concentrate. Infrared thermographs of the scrotum, orbital globe and muzzle were performed twice a week with a Flir E40 thermal imager. For scrotal thermograms, we analyzed the temperatures of the spermatic cord, proximal and distal portion of the testes and tail of the epididymis using the Flir Tools software. Samples were collected using an artificial vagina and the ejaculates were processed and frozen in liquid nitrogen until further analyses. Data were analyzed with the Tukey test or the Kruskall-Wallis test, depending on their normal distribution. Our results showed differences (p < 0.05) between the two breeds regarding the temperature in the ocular globe, spermatic cord and proximal portion of the scrotum. Nelore bulls presented lower temperature in the body and in certain regions of the scrotum compared to Girolando bulls. Seminal characteristics varied between breeds, with the Nelore breed presenting better semen. Positive correlations were observed between minor sperm defects and ventral regions of the testes and tails of the epididymis in Girolando bulls. Nelore bulls were less influenced by climatic variables and presented lower temperature in skin surface areas in the...

A seleção de touros pelo exame andrológico visa estimar a capacidade reprodutiva do macho. Touros de origem zebuína apresentam melhor adaptabilidade às altas temperaturas, em relação aos touros de origem taurina, podendo influenciar na temperatura do escroto e na qualidade seminal pelo desequilíbrio da termorregulação testicular. Objetivou-se avaliar a influência das variáveis bioclimáticas e a relação de perfis de termogramas por infravermelho de áreas do corpo e escroto com a qualidade do sêmen fresco e descongelado em touros das raças Nelore e Girolando, mantidos em Central de Inseminação Artificial. Foram utilizados quatro touros Nelore e quatro Girolando, mantidos em piquetes com acesso a água e mistura mineral; e suplementação com concentrado. Termografias infravermelhas do escroto, globo ocular e mufla foram realizadas duas vezes por semana com termovisor Flir E40. Para os termogramas escrotais, as temperaturas do cordão espermático, porção proximal e distal dos testículos e cauda do epidídimo foram analisadas utilizando o software Flir Tools. Foram realizadas colheitas de sêmen com vagina artificial e os ejaculados processados e congelados em nitrogênio líquido e analisados na pós-descongelação. Os dados passaram pelo teste de normalidade e teste Tukey; e na ausência de normalidade pelo teste Kruskall- Wallis. Entre raças, foram observadas diferenças (P < 0,05) nas temperaturas do globo ocular, cordão espermático e porção proximal do escroto. Os touros Nelore apresentaram menor temperatura corpórea e de regiões do escroto, em relação aos touros Girolando. As características seminais variaram entre raças (P < 0,05), a raça Nelore apresentou sêmen de melhor qualidade. Correlações positivas (P < 0,05) foram observadas entre defeitos espermáticos menores e temperaturas da região ventral dos testículos e das caudas dos epidídimos. em touros Girolando. Os touros da raça...

Sorting and cryopreservation of goat sperm with or without phenolic compounds / Seleção e criopreservação de espermatozoides caprinos com ou sem compostos fenólicos

The objectives of this study were to evaluate goat sperm sorting in continuous Percoll® density gradients and gamete freezability, in the presence or absence of phenolic antioxidants. For this, semen pools were sorted, frozen, and evaluated. The non-selected group (NSg) presented lower progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), and wobble (WOB) than the selected groups, and straight line velocity (VSL) compared to those with catechin or resveratrol. The amplitude of lateral head displacement (ALH) was higher in NSg, and quercetin reduced the mitochondrial membrane potential (MMP). After thawing, the NSg presented lower PM than the selected groups, VSL and VAP (average path velocity) than the selected group with or without catechin, LIN and WOB than the selected with or without catechin or resveratrol, and STR than the selected with catechin. Moreover, NSg presented higher ALH and BCF than the samples selected with or without catechin. Plasma membrane integrity and intact and living cells were higher in the selected groups, and MMP was lower in the NSg and the selected group with quercetin. Thus, centrifugation in Percoll® continuous density gradients is a viable methodology to select goat sperm compatible with the freezing, especially in the presence of catechin or resveratrol.(AU)

Objetivou-se avaliar a separação de espermatozoides caprinos em gradientes de densidade contínuos de Percoll® e a congelabilidade espermática, com ou sem antioxidantes fenólicos. Para tal, pools seminais foram selecionados, congelados e avaliados. O grupo não selecionado (gNS) apresentou menor motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e oscilação (WOB) do que os selecionados, bem como menor velocidade linear progressiva (VSL) do que os com catequina ou resveratrol. A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior no gNS e a quercetina reduziu o potencial de membrana mitocondrial (PMM). Após a descongelação, o gNS manifestou menor MP do que os selecionados, menor VSL e VAP (velocidade média da trajetória) do que os com ou sem catequina, menor LIN e WOB do que os com ou sem catequina ou resveratrol, e menor STR do que os com catequina, além de maior ALH e BCF do que os com ou sem catequina. A integridade da membrana plasmática e as células intactas e vivas foram maiores nas amostras selecionadas e o PMM foi inferior no gNS e no selecionado com quercetina. Portanto, a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll® é uma metodologia viável para selecionar espermatozoides caprinos compatíveis com a congelação, especialmente na presença de catequina ou resveratrol.(AU)

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Scrotal thermography to assess the seminal quality in Nelore and Girolando bulls / Termografia escrotal e a relação com a qualidade seminal em touros Nelore e Girolando

Bull selection by andrological examination aims to estimate the reproductive capacity of the male. Bulls of zebu origin adapt better to high temperatures than bulls of taurine origin, which may influence scrotum temperature and seminal quality due to the imbalance of testicular thermoregulation. The objective of this study was to investigate the relationship between bioclimatic variables, the temperature of body and scrotal areas, assessed with infrared thermography, and the quality of fresh and post-thawed semen in zebu Nelore bulls (Bos taurus indicus) and Girolando bulls (Bos taurus taurus x Bos taurus indicus). Bulls were kept in pickets with access to water, mineral mix and a diet supplemented with concentrate. Infrared thermographs of the scrotum, orbital globe and muzzle were performed twice a week with a Flir E40 thermal imager. For scrotal thermograms, we analyzed the temperatures of the spermatic cord, proximal and distal portion of the testes and tail of the epididymis using the Flir Tools software. Samples were collected using an artificial vagina and the ejaculates were processed and frozen in liquid nitrogen until further analyses. Data were analyzed with the Tukey test or the Kruskall-Wallis test, depending on their normal distribution. Our results showed differences (p < 0.05) between the two breeds regarding the temperature in the ocular globe, spermatic cord and proximal portion of the scrotum. Nelore bulls presented lower temperature in the body and in certain regions of the scrotum compared to Girolando bulls. Seminal characteristics varied between breeds, with the Nelore breed presenting better semen. Positive correlations were observed between minor sperm defects and ventral regions of the testes and tails of the epididymis in Girolando bulls. Nelore bulls were less influenced by climatic variables and presented lower temperature in skin surface areas in the...(AU)

A seleção de touros pelo exame andrológico visa estimar a capacidade reprodutiva do macho. Touros de origem zebuína apresentam melhor adaptabilidade às altas temperaturas, em relação aos touros de origem taurina, podendo influenciar na temperatura do escroto e na qualidade seminal pelo desequilíbrio da termorregulação testicular. Objetivou-se avaliar a influência das variáveis bioclimáticas e a relação de perfis de termogramas por infravermelho de áreas do corpo e escroto com a qualidade do sêmen fresco e descongelado em touros das raças Nelore e Girolando, mantidos em Central de Inseminação Artificial. Foram utilizados quatro touros Nelore e quatro Girolando, mantidos em piquetes com acesso a água e mistura mineral; e suplementação com concentrado. Termografias infravermelhas do escroto, globo ocular e mufla foram realizadas duas vezes por semana com termovisor Flir E40. Para os termogramas escrotais, as temperaturas do cordão espermático, porção proximal e distal dos testículos e cauda do epidídimo foram analisadas utilizando o software Flir Tools. Foram realizadas colheitas de sêmen com vagina artificial e os ejaculados processados e congelados em nitrogênio líquido e analisados na pós-descongelação. Os dados passaram pelo teste de normalidade e teste Tukey; e na ausência de normalidade pelo teste Kruskall- Wallis. Entre raças, foram observadas diferenças (P < 0,05) nas temperaturas do globo ocular, cordão espermático e porção proximal do escroto. Os touros Nelore apresentaram menor temperatura corpórea e de regiões do escroto, em relação aos touros Girolando. As características seminais variaram entre raças (P < 0,05), a raça Nelore apresentou sêmen de melhor qualidade. Correlações positivas (P < 0,05) foram observadas entre defeitos espermáticos menores e temperaturas da região ventral dos testículos e das caudas dos epidídimos. em touros Girolando. Os touros da raça...(AU)

Padronização do Sperm Class Analyzer® (SCA®) para avaliação de espermatozoides equinos criopreservados / [Standardization of the Sperm Class Analyzer® (SCA®) for the evaluation of cryopreserved equine sperm]

Objetivou-se, no primeiro experimento, avaliar o efeito da velocidade de captura de imagens de 25Hz, 30Hz e 50Hz na cinética dos espermatozoides equinos criopreservados. Todas as velocidades mostraram-se adequadas para capturar o movimento espermático (P>0,05). No segundo experimento, objetivou-se avaliar o efeito da deposição de sêmen em lâmina sob lamínula, Leja®10 e 20, na cinética espermática. O uso de lâmina e lamínula foi superior às lejas para manter a LIN e o WOB (P<0,05). No terceiro experimento, objetivou-se avaliar o efeito das concentrações de 25, 50 e 100x106 na cinética espermática. As concentrações de 25 e 50 x106 foram superiores a 100x106 para preservar a LIN, a STR e a BCF e não afetar negativamente a motilidade (P<0,05). No quarto experimento, objetivou-se avaliar o efeito dos diluidores BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm e da solução fisiológica na cinética espermática. O BotuCrio® foi superior a todos os diluidores em preservar a BCF e os hiperativos (P<0,05). Conclui-se que o emprego da velocidade de captura entre 25 e 50Hz, a deposição do sêmen entre lâmina e lamínula e a rediluição em diluidor de congelação para atingir 25 a 50x106 de espermatozoides/mL são ideais para o SCA® avaliar, de forma fidedigna, o sêmen equino criopreservado.(AU)

The objective of the first experiment was to evaluate the effect of 25, 30 and 50Hz frame acquisition rate on equine cryopreserved sperm. All frame acquisition rates tested were adequate to capture the sperm movement (P>0.05). The aim of the second experiment was to evaluate the effect of chambers, slide-coverslip, Leja®10 and 20 on sperm movement. The use of slide-coverslip was superior to maintain LIN and WOB (P<0.05). The aim of the third experiment was to evaluate the effect of 25, 50 and 100x106 sperm/mL concentration on sperm movement. Concentrations of 25 and 50x106 sperm/mL were greater than 100x106 to preserve LIN, STR and BCF and did not adversely affect motility (P<0.05). The aim of the fourth experiment was to evaluate the effect of BotuCrio®, BotuSêmen®, TALP sperm and physiological solution on sperm movement. BotuCrio® was superior among other extenders in preserving BCF and hyperactive (P<0.05). It is concluded that the use of the frame acquisition rate between 25 and 50 Hz; the deposition of semen between slide and coverslip and new dilution in the freezing extender to 25-50x106 of sperm/mL is ideal to reliably evaluate cryopreserved equine semen by SCA®.(AU)

Sorting and cryopreservation of goat sperm with or without phenolic compounds / Seleção e criopreservação de espermatozoides caprinos com ou sem compostos fenólicos

The objectives of this study were to evaluate goat sperm sorting in continuous Percoll® density gradients and gamete freezability, in the presence or absence of phenolic antioxidants. For this, semen pools were sorted, frozen, and evaluated. The non-selected group (NSg) presented lower progressive motility (PM), linearity (LIN), straightness (STR), and wobble (WOB) than the selected groups, and straight line velocity (VSL) compared to those with catechin or resveratrol. The amplitude of lateral head displacement (ALH) was higher in NSg, and quercetin reduced the mitochondrial membrane potential (MMP). After thawing, the NSg presented lower PM than the selected groups, VSL and VAP (average path velocity) than the selected group with or without catechin, LIN and WOB than the selected with or without catechin or resveratrol, and STR than the selected with catechin. Moreover, NSg presented higher ALH and BCF than the samples selected with or without catechin. Plasma membrane integrity and intact and living cells were higher in the selected groups, and MMP was lower in the NSg and the selected group with quercetin. Thus, centrifugation in Percoll® continuous density gradients is a viable methodology to select goat sperm compatible with the freezing, especially in the presence of catechin or resveratrol.(AU)

Objetivou-se avaliar a separação de espermatozoides caprinos em gradientes de densidade contínuos de Percoll® e a congelabilidade espermática, com ou sem antioxidantes fenólicos. Para tal, pools seminais foram selecionados, congelados e avaliados. O grupo não selecionado (gNS) apresentou menor motilidade progressiva (MP), linearidade (LIN), retilinearidade (STR) e oscilação (WOB) do que os selecionados, bem como menor velocidade linear progressiva (VSL) do que os com catequina ou resveratrol. A amplitude de deslocamento lateral de cabeça (ALH) foi maior no gNS e a quercetina reduziu o potencial de membrana mitocondrial (PMM). Após a descongelação, o gNS manifestou menor MP do que os selecionados, menor VSL e VAP (velocidade média da trajetória) do que os com ou sem catequina, menor LIN e WOB do que os com ou sem catequina ou resveratrol, e menor STR do que os com catequina, além de maior ALH e BCF do que os com ou sem catequina. A integridade da membrana plasmática e as células intactas e vivas foram maiores nas amostras selecionadas e o PMM foi inferior no gNS e no selecionado com quercetina. Portanto, a centrifugação em gradientes contínuos de densidade de Percoll® é uma metodologia viável para selecionar espermatozoides caprinos compatíveis com a congelação, especialmente na presença de catequina ou resveratrol.(AU)