Lipopolysaccharide effects on activation and apoptosis of primordial ovarian follicles in heifers / Efeitos de lipopolissacarídeos na ativação e apoptose de folículos ovarianos primordiais em novilhas

The objective of the present study was to evaluate the effect of lipopolysaccharide (LPS) administration on activation and apoptosis of primordial follicles. There was no difference in the total number of follicles as well as in the different types of follicles. Furthermore, the LPS challenge didn't modulate the expression of genes related with ovarian reserve (HAM), oocyte survival (Survivin), activation rate (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1), and follicular abnormalities. Therefore, the LPS exposure with 24h interval had no effect on activation rate and primordial follicles abnormalities, and also had no effect on expression of anti-apoptotic genes and genes related with ovarian reserve, oocyte survival, activation rate, and primordial follicles abnormalities.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da administração de lipopolissacarídeo (LPS) na ativação e a apoptose de folículos primordiais. Dez novilhas saudáveis (Bos taurus taurus), com idade média de 14 meses, alojadas em sistema de confinamento e alimentadas com TMR, foram utilizadas neste experimento. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: grupo LPS (LPS; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 0,5µg/kg de peso corporal de lipopolissacarídeo (Sigma Aldrich®) diluído em 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h; e grupo controle (CTR; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h. A primeira injeção de LPS foi realizada no d 1, e no d 5 os animais foram abatidos, os ovários foram pesados e as amostras dos ovários foram coletadas para avaliação histológica e molecular. Não houve diferença no número total de folículos, bem como nos diferentes tipos de folículos. Além disso, o desafio com LPS não modulou a expressão de genes relacionados à reserva ovariana (HAM), à sobrevivência oocitária (Survivin), à taxa de ativação (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1) e às anormalidades foliculares. Portanto, a exposição ao LPS com intervalo de 24h não teve efeito sobre a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais, bem como não teve efeito sobre a expressão de genes antiapoptóticos e de genes relacionados com a reserva ovariana, a sobrevivência oocitária, a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais.

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterial endotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador de qualidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamação crônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinar quantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo método cromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo método de coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostras de água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se as mesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dos pontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por método de coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo método cromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficiente de variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foram obtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método em laboratórios de saúde pública.

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality, since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammation in patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determining quantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kinetic chromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique. The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to the Brazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed using the same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations of the endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gel coagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic method for recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variation from 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results were obtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the public health laboratories.

Validação de metodologia analítica para determinação de endotoxina bacteriana em água para diálise por meio de método cromogênico cinético / Analytical methodology validation for determining the bacterial endotoxin in the dialysis water by means of kinetic chromogenic technique

O nível de endotoxina presente na água tratada para hemodiálise é um importante indicador de qualidade, uma vez que altas concentrações de endotoxina atuam como a principal fonte de inflamação crônica em pacientes submetidos à diálise. Este estudo visa validar o método analítico para determinar quantitativamente a endotoxina bacteriana em amostras de água de hemodiálise pelo método cromogênico cinético e de comparar com o método de coagulação em gel. Os ensaios pelo método de coagulação em gel foram realizados de acordo com a Farmacopeia Brasileira em três amostras de água de hemodiálise. A validação do método cromogênico cinético foi realizada utilizando-se as mesmas amostras por meio de sistema de teste portátil. As médias geométricas das concentrações dos pontos finais obtidos nos testes de confirmação de sensibilidade LAL e de interferência por método de coagulação em gel apresentaram resultado de 0,125 UE/mL. Os resultados obtidos pelo método cromogênico para a recuperação do controle positivo do produto variaram de 89 a 186% e o coeficiente de variação de 2,5 a 18,2%, demonstrando que as amostras não apresentaram interferência. Foram obtidos resultados equivalentes em ambos os métodos, o que permite a implementação do método em laboratórios de saúde pública.(AU)

The occurrence of endotoxin in the treated water for hemodialysis is an important indicator of quality, since high concentrations of endotoxin constitute the main source for causing chronic inflammation in patients undergoing dialysis. This study aims at validating the analytical method for determining quantitatively the bacterial endotoxin in hemodialysis water samples. The data from the kinetic chromogenic method were compared with the results obtained from the gel coagulation technique. The gel coagulation assays were performed in three samples of hemodialysis water, according to the Brazilian Pharmacopoeia. The validation of the kinetic chromogenic method was performed using the same samples through the portable test system. The geometric means of the concentrations of the endpoints obtained from the tests for confirming the LAL sensitivity and the interference by gel coagulation method showed a result of 0.125 EU/mL. The results obtained by the chromogenic method for recovering the product positive control varied from 89 to 186% and the coefficient of variation from 2.5 to 18.2%, demonstrating that the samples did not show interference. Equivalent results were obtained in both methods, therefore being viable the implementation of this methodology in the public health laboratories.(AU)

Clinical and hematological changes in sheep induced by Escherichia coli lipopolysaccharide / alterações clínicas e hematológicas induzidas pela administração de lipopolisscarídeo de Escherichia coli em ovelhas / Alteraciones clínicas y hematológicas inducidas por la administración de lipopoliscárido de Escherichia coli en ovejas

Organic response to infection is characterized by a systemic reaction known as acute phase response (APR). In order to know the effect of the administration of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) on physiological, hematological and biochemical variables, 10 sheep weighing 45 ± 5 kg were divided in two groups: Experimental group treated with 3 doses of 1 µg.kg-1 LPS and control group treated with saline solution (SS) at the same frequency as experimental group. Body temperature (BT°), heart rate (HR) and respiratory rate (RR) were monitored. Blood samples for hemogram and enzyme activity for aspartate amino transferase (AST) and gamma glutamyl transferase (GGT) were collected between 1 and 24 h post-LPS. LPS-treated sheep presented mean values of BT (41.2 ± 0.4°C), HR (132 ± 12.3 beats/min) and RR (107.2 ± 25 cycles/min) higher than those observed in control sheep (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 beats/min and 53.6 ± 17.1 cycles/min respectively). Between 4 and 8 hours post-injection (hpi) of LPS the leukocyte count was associated with lymphopenia, followed by leukocytosis at 24 hours. No changes were observed in the activity of AST and GGT enzymes. The results characterize APR induced by LPS in sheep, representing a useful model to study cardiovascular, hematological and biochemical responses to infection. (AU)

A resposta orgânica à infecção é caracterizada por uma reação sistêmica conhecida como resposta de fase aguda (RFA). Para conhecer o efeito da administração de lipopolissacárideo (LPS) de Escherichia coli sobre as variáveis fisiológicas, hematológicas e bioquímicas, 10 carneiros pesando 45 ± 5 kg foram divididos em dois grupos: o grupo experimental tratado com três doses de 1 µg.kg -1 de LPS e grupo controle tratado com solução salina (SS) na mesma frequência que o grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frequência cardíaca (FC) e frequência respiratória (FR) foram monitoradas. As amostras de sangue foram tomadas para hemograma e atividade da enzima aspartato aminotransferase (AST) e gama- -glutamiltransferase (GGT) entre uma e 24 h pós-LPS. Ovelhas tratadas com LPS apresentaram valores médios de T°C (41,2 ± 0,4°C), FC (132 ± 12,3 batimentos/min) e FR (107,2 ± 25 ciclos/min) acima dos observados em ovelhas do tratamento controle (39,8 ± 0,2°C, 88,8 ± 8,7 batimentos/min e 53,6 ± 17,1 ciclos/min, respectivamente). Entre 4 e 8 horas após a injeção de LPS, a contagem de leucocitos foi asociado com linfopenia, seguida de leucocitose as 24 horas. Nenhuma mudança na atividade das enzimas AST e GGT foi observada. Os resultados caracterizam uma resposta de fase aguda induzida por LPS em ovelhas, o que representa um modelo útil para estudar os sistemas cardiovascular, hematológico e bioquímico em resposta à infecção.(AU)

La respuesta orgánica a la infección se caracteriza por una reacción sistémica conocida como respuesta de fase aguda (RFA). Para conocer el efecto de la administración de lipopolisacárido (LPS) de Escherichia coli sobre las variables fisiológicas, hematológicas y bioquímicas, 10 ovejas con un peso de 45 ± 5 kg se dividieron en dos grupos: grupo experimental tratado con 3 dosis de 1 µg.kg-1de LPS y grupo control tratado con solución salina (SS) en la misma frecuencia que el grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frecuencia cardíaca (FC) y frecuencia respiratoria (FR) fueron monitoreadas. Se tomaron muestras de sangre para hemograma y actividad enzimática para el aspartato amino transferasa (AST) y gamma glutamil transferasa (GGT) entre 1 y 24 h post-LPS. Las ovejas tratadas con LPS presentaron valores medios de T°C (41.2 ± 0.4°C), FC (132 ± 12.3 latidos / min) y FR (107.2 ± 25 ciclos/min) por encima de los observados en ovinos controles (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 latidos/min y 53.6 ± 17.1 ciclos/min respectivamente). Entre las 4 y 8 horas después de la inyección de LPS, el recuento de leucocitos se asoció a linfopenia, seguida de leucocitosis a las 24 horas. No se observaron cambios en la actividad de las enzimas AST y GGT. Los resultados caracterizan una respuesta de fase aguda inducida por LPS en ovinos, representando un modelo útil para estudiar los sistemas cardiovascular, hematológico y bioquímico en respuesta a la infección.(AU)

Clinical and hematological changes in sheep induced by Escherichia coli lipopolysaccharide / alterações clínicas e hematológicas induzidas pela administração de lipopolisscarídeo de Escherichia coli em ovelhas / Alteraciones clínicas y hematológicas inducidas por la administración de lipopoliscárido de Escherichia coli en ovejas

Organic response to infection is characterized by a systemic reaction known as acute phase response (APR). In order to know the effect of the administration of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) on physiological, hematological and biochemical variables, 10 sheep weighing 45 ± 5 kg were divided in two groups: Experimental group treated with 3 doses of 1 µg.kg-1 LPS and control group treated with saline solution (SS) at the same frequency as experimental group. Body temperature (BT°), heart rate (HR) and respiratory rate (RR) were monitored. Blood samples for hemogram and enzyme activity for aspartate amino transferase (AST) and gamma glutamyl transferase (GGT) were collected between 1 and 24 h post-LPS. LPS-treated sheep presented mean values of BT (41.2 ± 0.4°C), HR (132 ± 12.3 beats/min) and RR (107.2 ± 25 cycles/min) higher than those observed in control sheep (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 beats/min and 53.6 ± 17.1 cycles/min respectively). Between 4 and 8 hours post-injection (hpi) of LPS the leukocyte count was associated with lymphopenia, followed by leukocytosis at 24 hours. No changes were observed in the activity of AST and GGT enzymes. The results characterize APR induced by LPS in sheep, representing a useful model to study cardiovascular, hematological and biochemical responses to infection. (AU)

A resposta orgânica à infecção é caracterizada por uma reação sistêmica conhecida como resposta de fase aguda (RFA). Para conhecer o efeito da administração de lipopolissacárideo (LPS) de Escherichia coli sobre as variáveis fisiológicas, hematológicas e bioquímicas, 10 carneiros pesando 45 ± 5 kg foram divididos em dois grupos: o grupo experimental tratado com três doses de 1 µg.kg -1 de LPS e grupo controle tratado com solução salina (SS) na mesma frequência que o grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frequência cardíaca (FC) e frequência respiratória (FR) foram monitoradas. As amostras de sangue foram tomadas para hemograma e atividade da enzima aspartato aminotransferase (AST) e gama- -glutamiltransferase (GGT) entre uma e 24 h pós-LPS. Ovelhas tratadas com LPS apresentaram valores médios de T°C (41,2 ± 0,4°C), FC (132 ± 12,3 batimentos/min) e FR (107,2 ± 25 ciclos/min) acima dos observados em ovelhas do tratamento controle (39,8 ± 0,2°C, 88,8 ± 8,7 batimentos/min e 53,6 ± 17,1 ciclos/min, respectivamente). Entre 4 e 8 horas após a injeção de LPS, a contagem de leucocitos foi asociado com linfopenia, seguida de leucocitose as 24 horas. Nenhuma mudança na atividade das enzimas AST e GGT foi observada. Os resultados caracterizam uma resposta de fase aguda induzida por LPS em ovelhas, o que representa um modelo útil para estudar os sistemas cardiovascular, hematológico e bioquímico em resposta à infecção.(AU)

La respuesta orgánica a la infección se caracteriza por una reacción sistémica conocida como respuesta de fase aguda (RFA). Para conocer el efecto de la administración de lipopolisacárido (LPS) de Escherichia coli sobre las variables fisiológicas, hematológicas y bioquímicas, 10 ovejas con un peso de 45 ± 5 kg se dividieron en dos grupos: grupo experimental tratado con 3 dosis de 1 µg.kg-1de LPS y grupo control tratado con solución salina (SS) en la misma frecuencia que el grupo experimental. Temperatura corporal (T°C), frecuencia cardíaca (FC) y frecuencia respiratoria (FR) fueron monitoreadas. Se tomaron muestras de sangre para hemograma y actividad enzimática para el aspartato amino transferasa (AST) y gamma glutamil transferasa (GGT) entre 1 y 24 h post-LPS. Las ovejas tratadas con LPS presentaron valores medios de T°C (41.2 ± 0.4°C), FC (132 ± 12.3 latidos / min) y FR (107.2 ± 25 ciclos/min) por encima de los observados en ovinos controles (39.8 ± 0.2°C, 88.8 ± 8.7 latidos/min y 53.6 ± 17.1 ciclos/min respectivamente). Entre las 4 y 8 horas después de la inyección de LPS, el recuento de leucocitos se asoció a linfopenia, seguida de leucocitosis a las 24 horas. No se observaron cambios en la actividad de las enzimas AST y GGT. Los resultados caracterizan una respuesta de fase aguda inducida por LPS en ovinos, representando un modelo útil para estudiar los sistemas cardiovascular, hematológico y bioquímico en respuesta a la infección.(AU)

Interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide on performance and biological parameters of broiler chickens

This study was conducted to determine the interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide (sLPS) on the performance, biological parameters, and histological evaluations of 198 one-day-old male broiler chickens divided into three treatments according to sLPS dose (0, 250, or 500 µg/application/bird) that was applied to the birds every other day, from 15 to 27 days of age. At the end of the experiment (28 days), significant effects were observed on body weight (R= -0.17 and P=0.05), total cholesterol serum levels(R=0.43 and p 0.01), phosphorus (R=0.53 and P 0.01), uric acid (R= -0.38 and P 0.01), C-reactive protein (R=0.68 and p 0.01), serum activity of aspartate aminotransferase (R=0.39 and p 0.01) and alkaline phosphatase (R= -0.39 and p 0.01). According to these results, sLPS mainly affect broiler biological parameters, but also their live performance.

Interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide on performance and biological parameters of broiler chickens

This study was conducted to determine the interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide (sLPS) on the performance, biological parameters, and histological evaluations of 198 one-day-old male broiler chickens divided into three treatments according to sLPS dose (0, 250, or 500 µg/application/bird) that was applied to the birds every other day, from 15 to 27 days of age. At the end of the experiment (28 days), significant effects were observed on body weight (R= -0.17 and P=0.05), total cholesterol serum levels(R=0.43 and p 0.01), phosphorus (R=0.53 and P 0.01), uric acid (R= -0.38 and P 0.01), C-reactive protein (R=0.68 and p 0.01), serum activity of aspartate aminotransferase (R=0.39 and p 0.01) and alkaline phosphatase (R= -0.39 and p 0.01). According to these results, sLPS mainly affect broiler biological parameters, but also their live performance.(AU)

Interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide on performance and biological parameters of broiler chickens

This study was conducted to determine the interference of Salmonella typhimurium lipopolysaccharide (sLPS) on the performance, biological parameters, and histological evaluations of 198 one-day-old male broiler chickens divided into three treatments according to sLPS dose (0, 250, or 500 µg/application/bird) that was applied to the birds every other day, from 15 to 27 days of age. At the end of the experiment (28 days), significant effects were observed on body weight (R= -0.17 and P=0.05), total cholesterol serum levels(R=0.43 and p 0.01), phosphorus (R=0.53 and P 0.01), uric acid (R= -0.38 and P 0.01), C-reactive protein (R=0.68 and p 0.01), serum activity of aspartate aminotransferase (R=0.39 and p 0.01) and alkaline phosphatase (R= -0.39 and p 0.01). According to these results, sLPS mainly affect broiler biological parameters, but also their live performance.

Peracute bovine mastitis caused by Klebsiella pneumoniae / Mastite bovina hiperaguda causada por Klebsiella pneumoniae

Relata-se a ocorrência de graves sintomas de mastite hiperaguda em vaca, causada por Klebsiella pneumoniae, na terceira semana de lactação. Descrevem-se aspectos epidemiológicos, sintomas clínicos, procedimentos de diagnóstico microbiológico, conduta terapêutica e medidas de controle.(AU)

Endotoxemia por lipopolissacarídeo de Escherichia coli, em eqüinos: efeitos de antiinflamatórios nas concentrações sérica e peritoneal do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) / Escherichia coli lipopolisacharide (LPS) induced endotoxemia in horses: effects of anti-inflammatory drugs on seric and peritoneal tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) concentrations

Avaliou-se a inibição da produção do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) devido ao pré-tratamento com antiinflamatório esteroidal (dexametasona) e não esteroidal (diclofenaco sódico) em eqüinos com endotoxemia induzida experimentalmente. Foram utilizados 15 cavalos machos não castrados, distribuídos em três grupos de cinco animais: controle (C), diclofenaco sódico (DS) e dexametasona (DM). A endotoxemia subletal foi induzida pela infusão intravenosa (IV) de 0,1mg/kg/pv de lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli 055:B5, administrado em 250ml de solução estéril de cloreto de sódio a 0,9 por cento, durante 15min. Os cavalos do grupo-controle foram tratados com solução de cloreto de sódio a 9 por cento IV. Nos animais do grupo DS, administraram-se, por via oral, 2,2mg/kg de diclofenaco sódico e, nos do grupo DM, 1,1mg/kg de dexametasona IV, respectivamente, 60 e 30min antes da infusão da endotoxina. Mensurou-se, por meio de ensaio de toxicidade com células da linhagem L929, a concentração de TNF-alfa no soro e no líquido peritoneal às 0, 1», 3 e 6 horas após injeção do LPS. No grupo-controle, observou-se aumento significativo de TNF-alfa sérico, em relação ao valor basal e aos grupos DS e DM, 1,15 horas após a indução da endotoxemia. No líquido peritoneal, as concentrações observadas estavam abaixo daquelas da curva padrão de TNF-alfa, não havendo diferença entre os grupos (P>0,05)(AU)

The inhibition of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) production due to pre-treatment with steroidal (dexamethazone) and non-steroidal (sodium diclofenac) anti-inflammatories was studied in horses under experimentally induced endotoxemy. Fifteen stallions were allotted into three groups of five animals each: control (C), sodium diclofenac (SD) and dexamethazone (DM). Sublethal endotoxemy was induced with 0.1mg/kg/bw Escherichia coli 055:B5 lipopolysaccharide (LPS), IV, administrated in 250ml of 0.9 percent sterile sodium chloride, during 15 minutes. Control group horses received 9 percent sodium chloride, IV. SD group animals were orally administrated 2.2mg/kg sodium diclofenac and DM horses received 1.1mg/kg dexamethazone, IV, 30 and 60 minutes before endotoxin infusion, respectively. TNF-alpha concentration was measured in serum and peritoneal fluid by toxicity assay using L929 lineage cells at 0, 1», 3 and 6 hours after LPS injection. Ninety minutes after endotoxemy induction, it was verified a significant increase of serum TNF-a concentration in horses from control group in relation to the basal values as well as results of horses from SD and DM groups. In peritoneal fluid, the measured concentrations were lower than those from TNF-a standard curve and difference among the groups was not verified (P>0.05)(AU)

Susceptibilidade de larvas de Cerotoma arcuata Olivier (Coleoptera: Chrysomelidae) a Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin, Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin e Bacillus thuringiensis Berliner

Second instar larvae of Cerotoma arcuata were evaluated concerning the susceptibility to fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae and Bacillus thuringiensis strains containing Cry3 toxin. Adults of C. arcuata were kept in large cages and fed on bean seedlings and the larvae were reared in ‘gearbox feeding on germinated Phaseolus bean cotyledons. Strains CG 156 and CG 213 of B. bassiana killed 100% of the insect larvae and strains CG 210 and CG 321 of M. anisopliae killed 80 and 100% of the insect larvae. Strain CG 940 of B. thuringiensis killed 70% of the insect larvae.

Larvas de 2° instar de Cerotoma arcuata foram avaliadas em relação à susceptibilidade aos fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e a bactéria Bacillus thuringiensis com as toxinas Cry3. Os insetos adultos foram mantidos em gaiolas e alimentados com plântulas de feijão (Phaseolus vulgaris L.) e as larvas em "gerbox" com cotilédones de plântulas de feijão recém-germinadas. Das oito estirpes de B. bassiana avaliadas, CG 156 e CG 213 causaram 100% de mortalidade das larvas, as duas estirpes de M. anisopliae CG 210 e CG 321 foram patogênicas, eliminando 80 e 100% das larvas de C. arcuata, e, das cinco estirpes de B. thuringiensis testadas, o isolado CG 940 causou 70% de mortalidade das larvas.

Effect of different methods of sterilization on the inactivation of bacterial endotoxin (LPS) in endodontic files

This study evaluated the presence of lipopolysaccharide (LPS) in endodontic files after in vitro contamination with E. coli LPS and sterilization in dry heat or wet heat, with or without previous immersion in a Ca(OH)2 suspension. LPS was quantified using the Kinetic QCL TM test and data were analyzed statistically by the t-test. LPS was quantified only in the contaminated group, not submitted to any immersion or sterilization procedure (0.262±0.1296 endotoxin units/mL) (p=0.0003). In conclusion, both wet heat and dry heat sterilization were effective in inactivating LPS without the need of previous immersion of the files in a Ca(OH)2 suspension.

Este estudo avaliou a presença de endotoxina (LPS) em limas endodônticas após contaminação in vitro com LPS de E. coli e esterilização em autoclave ou forno de Pasteur, com ou sem imersão prévia em suspensão de hidróxido de cálcio. A quantificação do LPS foi efetuada pelo teste Kinetic QCL TM, e os resultados submetidos à análise estatística (teste t). LPS foi quantificado apenas no grupo contaminado e não submetido a nenhum procedimento de imersão ou esterilização (0,262±0,1296 unidades de endotoxina/mL) (p=0,0003). Concluiu-se que a esterilização das limas em autoclave ou forno de Pasteur foi eficaz na inativação do LPS, não sendo necessária a sua imersão prévia em suspensão de hidróxido de cálcio.

Susceptibilidade de larvas de Cerotoma arcuata Olivier (Coleoptera: Chrysomelidae) a Beauveria bassiana (Bals.) Vuillemin, Metarhizium anisopliae (Metsch.) Sorokin e Bacillus thuringiensis Berliner

Second instar larvae of Cerotoma arcuata were evaluated concerning the susceptibility to fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae and Bacillus thuringiensis strains containing Cry3 toxin. Adults of C. arcuata were kept in large cages and fed on bean seedlings and the larvae were reared in ‘gearbox’ feeding on germinated Phaseolus bean cotyledons. Strains CG 156 and CG 213 of B. bassiana killed 100% of the insect larvae and strains CG 210 and CG 321 of M. anisopliae killed 80 and 100% of the insect larvae. Strain CG 940 of B. thuringiensis killed 70% of the insect larvae.

Larvas de 2° instar de Cerotoma arcuata foram avaliadas em relação à susceptibilidade aos fungos entomopatogênicos Beauveria bassiana, Metarhizium anisopliae e a bactéria Bacillus thuringiensis com as toxinas Cry3. Os insetos adultos foram mantidos em gaiolas e alimentados com plântulas de feijão (Phaseolus vulgaris L.) e as larvas em "gerbox" com cotilédones de plântulas de feijão recém-germinadas. Das oito estirpes de B. bassiana avaliadas, CG 156 e CG 213 causaram 100% de mortalidade das larvas, as duas estirpes de M. anisopliae CG 210 e CG 321 foram patogênicas, eliminando 80 e 100% das larvas de C. arcuata, e, das cinco estirpes de B. thuringiensis testadas, o isolado CG 940 causou 70% de mortalidade das larvas.

Experimental models of sepsis and septic shock: an overview

Sepsis remains a major cause of morbidity and mortality in surgical patients and trauma victims, mainly due to sepsis-induced multiple organ dysfunction. In contrast to preclinical studies, most clinical trials of promising new treatment strategies for sepsis have fails to demonstrate efficacy. Although many reasons could account for this discrepancy, the misinterpretation of preclinical data obtained from experimental studies, and especially the use of animal models that do not adequately mimic human sepsis may have been contributing factors. In this review, the benefits and limitations of various animal models of sepsis are discussed to clarify the extend to which findings are relevant to human sepsis, particularly with respect to the subsequent design and execution of clinical trials. Such models include intravascular infusion of endotoxin or live bacteria, bacterial peritonitis, cecal ligation and perforation, soft tissue infection, pneumonia or meningitis models, using different animal species including rats, mice, rabbits, dogs, pigs, sheep and nonhuman primates. Despite several limitations, animal models remain essential in the development of all new therapies for sepsis and septic shock, because they provide fundamental information about the pharmacokinetics, toxicity, and mechanism of drug action that cannot be duplicated by other methods. New therapeutic agents should be studies in infection models, even after the initiation of the septic process. Furthermore, debility conditions need to be reproduced to avoid the exclusive use of healthy animals, which often do not represent the human septic patient.

A sepse persiste como causa capital de mortalidade e morbidade em pacientes operados e nas vítimas de trauma, principalmente pela disfunção de múltiplos órgãos induzida pela sepse. Em contraste com estudos experimentais, a maioria dos estudos clínicos avaliando potenciais novos tratamentos para a sepse falham em demonstrar eficácia. Apesar de haver diversas possíveis explicações para esta discrepância, a interpretação equivocada dos dados pré-clínicos e. principalmente, o uso de modelos animais que não mimetizam adequadamente a sepse humana podem ter sido fatores contribuintes. Nesta revisão, os benefícios e limitações dos diversos modelos experimentais de sepse são discutidos quanto a relevância com a sepse humana e em relação a futuros ensaios clínicos. Entre os modelos discutidos incluímos a injeção intravascular de endotoxina ou bactérias vivas, peritonite bacteriana, ligadura e punção cecal, infecção de tecidos moles, e modelos de pneumonia e meningite, utilizando várias espécies de animais tais como ratos, camundongos, coelhos, porcos, ovelhas e primatas. Apesar das limitações, modelos animais permanecem essenciais para o desenvolvimento de todas as novas terapias para a sepse e choque séptico, pois fornecem dados fundamentais quanto a farmacocinética, toxicidade e mecanismos de ação das drogas e que não podem ser de outro modo reproduzidos. Os novos agentes terapêuticos devem ser testados mesmo após o início do processo séptico e condições debilitantes devem ser desenvolvidas para evitar o uso exclusivo de animais saudáveis e que freqüentemente não representam a maior parte da população de pacientes sépticos.

Comparative evaluation of pyrogens tests in pharmaceutical products

A comparison of methodologies for detection of pyrogens in pharmaceutical products was performed. The rabbit pyrogen test was optimized and the dose-response curve was obtained for the 2nd International Standard for bacterial endotoxins, establishing 13.81 EU/mL/kg as the concentration of endotoxin necessary to induce a temperature rise of 0.5ºC. The 0.5ºC cut-off was shown to give results that were more compatible with the pyrogenic doses for humans. The Limulus amoebocyte lysate test (LAL) was standardized with gel-clot and chromogenic endpoints, and used for the comparative evaluation of pharmaceutical products showing good agreement. The use of beta-glucan-reactive and non-reactive LAL reagents identified some products with false-positive results. The interference test was carried out and the specifications validated for some new products as the maximum valid dilution. The results emphasized the importance and limitations of the assays recommended for the evaluation of purity and quality control of parenteral medicinal products, improving the existing methodologies in the context of reduction and replacement in the use of animal models.

Realizou-se a comparação de metodologia para avaliação de pirogênios em produtos farmacêuticos. Otimizou-se o teste da hipertermia em coelhos elaborando a curva dose-resposta com o 2º Padrão Internacional de endotoxinas bacterianas, com base na qual determinou-se a concentração de 13,81 UE/mL por kg de peso corporal, necessária para produzir aumento de temperatura de 0,5ºC. Observou-se que o limite de 0,5ºC forneceu resultados comparáveis com as doses pirogênicas para o homem. Padronizou-se o teste do lisado de amebócitos do Limulus (LAL) com determinação do ponto final cromogênico e por geleificação, que foram utilizados para a avaliação de produtos farmacêuticos obtendo-se resultados concordantes. Avaliaram-se as respostas de reagentes LAL reativos e não-reativos a beta-glicanos, observando diferenças que poderiam reprovar amostras com base em resultados falso-positivos. Executou-se o teste de interferências, validou-se o procedimento e estabeleceu-se a máxima diluição válida para produtos farmacêuticos sem especificações farmacopéicas. Os resultados enfatizam a importância e as limitações dos ensaios preconizados para avaliação da pureza e controle da qualidade de produtos farmacêuticos parenterais, contribuindo para aprimorar as metodologias existentes no contexto da redução e substituição dos modelos animais.

Comparative evaluation of pyrogens tests in pharmaceutical products

A comparison of methodologies for detection of pyrogens in pharmaceutical products was performed. The rabbit pyrogen test was optimized and the dose-response curve was obtained for the 2nd International Standard for bacterial endotoxins, establishing 13.81 EU/mL/kg as the concentration of endotoxin necessary to induce a temperature rise of 0.5ºC. The 0.5ºC cut-off was shown to give results that were more compatible with the pyrogenic doses for humans. The Limulus amoebocyte lysate test (LAL) was standardized with gel-clot and chromogenic endpoints, and used for the comparative evaluation of pharmaceutical products showing good agreement. The use of beta-glucan-reactive and non-reactive LAL reagents identified some products with false-positive results. The interference test was carried out and the specifications validated for some new products as the maximum valid dilution. The results emphasized the importance and limitations of the assays recommended for the evaluation of purity and quality control of parenteral medicinal products, improving the existing methodologies in the context of reduction and replacement in the use of animal models.

Realizou-se a comparação de metodologia para avaliação de pirogênios em produtos farmacêuticos. Otimizou-se o teste da hipertermia em coelhos elaborando a curva dose-resposta com o 2º Padrão Internacional de endotoxinas bacterianas, com base na qual determinou-se a concentração de 13,81 UE/mL por kg de peso corporal, necessária para produzir aumento de temperatura de 0,5ºC. Observou-se que o limite de 0,5ºC forneceu resultados comparáveis com as doses pirogênicas para o homem. Padronizou-se o teste do lisado de amebócitos do Limulus (LAL) com determinação do ponto final cromogênico e por geleificação, que foram utilizados para a avaliação de produtos farmacêuticos obtendo-se resultados concordantes. Avaliaram-se as respostas de reagentes LAL reativos e não-reativos a beta-glicanos, observando diferenças que poderiam reprovar amostras com base em resultados falso-positivos. Executou-se o teste de interferências, validou-se o procedimento e estabeleceu-se a máxima diluição válida para produtos farmacêuticos sem especificações farmacopéicas. Os resultados enfatizam a importância e as limitações dos ensaios preconizados para avaliação da pureza e controle da qualidade de produtos farmacêuticos parenterais, contribuindo para aprimorar as metodologias existentes no contexto da redução e substituição dos modelos animais.

The reaction of dental pulp to Escherichia coli lipopolysaccharide and Enterococcus faecalis lipoteichoic acid

This research evaluates the effects of the lipopolysaccharides (LPS) from Escherichia coli and lipoteichoic acid (LTA) from Enterococcus faecalis on dental pulp. These molecules are components of the Gram-negative and Gram-positive bacteria cell wall, respectively. Ten dogs were used in the experiment. Inoculation in surgically opened pulp and coronal restoration with glass ionomer was the method chosen. The evaluation times were 1, 7, 15, 30 and 60 days. The results showed that the LPS and LTA, at 150 µg/ml, produced a negative interference in the pulp leading to destruction. LTA caused less damage than LPS.

O presente trabalho avaliou os efeitos do ácido lipoteicóico (LTA) e do lipopolissacarídeo (LPS) no tecido pulpar. Essas moléculas estão presentes nas paredes das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, respectivamente. Utilizaram-se dez cães para inoculação das substâncias em polpas expostas cirurgicamente. Os períodos de avaliação foram de 1, 7, 15, 30 e 60 dias. Os resultados demonstraram que 150 µg/ml de LPS e LTA interferem negativamente na polpa promovendo destruição tecidual. O LTA estabeleceu um padrão citotóxico menos agressivo que o LPS.

Genes de Bacillus thuringiensis: uma estratégia para conferir resistência a insetos em plantas

Insect pests are a major worldwide cause of damage to agriculture. The control of insect pests was primarily relied on agrochemical and, in a much smaller scale, on biological insecticides. Insect-resistant transgenic plants represent a new alternative to the protection of crops against insect pests. The entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bt) is the source of resistance genes for the commercial production of the so called Bt-plants. In this review, the main features of Bt as source of resistance genes will be described as well as the main aspects of insect-resistant transgenic plants and advantages of using Bt-plants.

Os insetos constituem uma das principais causas de danos à produção agrícola no mundo. O controle de insetos tem sido realizado por meio de agroquímicos e, em muito menor escala, pelo emprego de inseticidas biológicos. As plantas transgênicas resistentes a insetos representam uma nova alternativa no combate aos insetos-praga das lavouras. A bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis Berlinier (Bt) é a fonte dos genes de resistência nas chamadas plantas-Bt, produzidas comercialmente. No presente trabalho de revisão, são abordados os aspectos relacionados à bactéria Bt como fonte de genes de resistência a insetos-pragas, plantas geneticamente modificadas, vantagens do uso de plantas-Bt, bem como perspectivas dessa ferramenta biotecnológica.

Detection of cry1 genes in Bacillus thuringiensis isolates from South of Brazil and activity against Aanticarsia gemmatalis (Lepidoptera:Noctuidae)

The bacterium Bacillus thuringiensis (Bt) is characterized by its ability to produce proteic crystalline inclusions during sporulation. Cry1 protein has insecticidal activity and is highly specific to certain insects and not toxic to unrelated insects, plants or vertebrates. In this work, the patogenicity of twelve Bt isolates was tested against Anticarsia gemmatalis, one of the most important insect pests of soybeans. Spore-crystal complex was applied to the surface of artificial diets and the mortality of A. gemmatalis larvae was assessed seven days after each treatment. When compared to a control Bt isolate known by its high toxicity to A. gemmatalis larvae, four novel Bt isolates exhibited even higher toxic activities against the insect, resulting in more than 90% mortality. PCR was used to amplify DNA fragments related to known cry1 genes. Bt strains with high toxicity produced expected PCR products of around 280 bp, whereas non-toxic or low toxic strains did not produce any PCR product or showed amplified fragments of different sizes. Toxic Bt isolates also exhibited an expected protein profile when total protein extracts were evaluated by SDS-PAGE.

A bactéria Bacillus thuringiensis (Bt) é caracterizada pela sua habilidade de produção de corpos paraesporais durante a esporulação. As proteínas cry1 têm atividade inseticida e são altamente específicas para certos insetos e não são tóxicas para outros insetos, plantas e vertebrados. Neste trabalho, a patogenicidade de doze isolados foram testados contra Anticarsia gemmatalis, um dos mais importantes insetos pragas da cultura da soja. Para tanto, foi aplicada sobre a superfície da dieta uma suspensão de esporo-cristal e a mortalidade de lagartas de Anticarsia gemmatalis foi avaliada sete dias após a aplicação. Quando comparado com uma linhagem de Bt controle, conhecido pela sua alta toxicidade para lagartas da soja, quatro novos isolados exibiram atividade tóxica superior, acima de 90% de mortalidade. Foi utilizada a técnica de PCR para amplificar fragmentos de DNA de regiões codificantes de genes cry1. Os isolados de Bt com alta mortalidade produziram produtos de PCR de tamanho esperado, em torno de 280 pb, isolados não tóxicos ou pouco tóxico não produziram qualquer produto de PCR ou mostraram fragmentos amplificados com padrões diferentes do esperado. Os isolados de Bt com alta atividade contra a lagarta da soja mostraram a presença de proteínas com tamanho de aproximadamente 150 kDa, quando o extrato protéico total foi analisado em SDS-PAGE.

Genes de Bacillus thuringiensis: uma estratégia para conferir resistência a insetos em plantas

Insect pests are a major worldwide cause of damage to agriculture. The control of insect pests was primarily relied on agrochemical and, in a much smaller scale, on biological insecticides. Insect-resistant transgenic plants represent a new alternative to the protection of crops against insect pests. The entomopathogenic bacterium Bacillus thuringiensis (Bt) is the source of resistance genes for the commercial production of the so called Bt-plants. In this review, the main features of Bt as source of resistance genes will be described as well as the main aspects of insect-resistant transgenic plants and advantages of using Bt-plants.

Os insetos constituem uma das principais causas de danos à produção agrícola no mundo. O controle de insetos tem sido realizado por meio de agroquímicos e, em muito menor escala, pelo emprego de inseticidas biológicos. As plantas transgênicas resistentes a insetos representam uma nova alternativa no combate aos insetos-praga das lavouras. A bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis Berlinier (Bt) é a fonte dos genes de resistência nas chamadas plantas-Bt, produzidas comercialmente. No presente trabalho de revisão, são abordados os aspectos relacionados à bactéria Bt como fonte de genes de resistência a insetos-pragas, plantas geneticamente modificadas, vantagens do uso de plantas-Bt, bem como perspectivas dessa ferramenta biotecnológica.