Lipopolysaccharide effects on activation and apoptosis of primordial ovarian follicles in heifers / Efeitos de lipopolissacarídeos na ativação e apoptose de folículos ovarianos primordiais em novilhas

The objective of the present study was to evaluate the effect of lipopolysaccharide (LPS) administration on activation and apoptosis of primordial follicles. There was no difference in the total number of follicles as well as in the different types of follicles. Furthermore, the LPS challenge didn't modulate the expression of genes related with ovarian reserve (HAM), oocyte survival (Survivin), activation rate (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1), and follicular abnormalities. Therefore, the LPS exposure with 24h interval had no effect on activation rate and primordial follicles abnormalities, and also had no effect on expression of anti-apoptotic genes and genes related with ovarian reserve, oocyte survival, activation rate, and primordial follicles abnormalities.

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da administração de lipopolissacarídeo (LPS) na ativação e a apoptose de folículos primordiais. Dez novilhas saudáveis (Bos taurus taurus), com idade média de 14 meses, alojadas em sistema de confinamento e alimentadas com TMR, foram utilizadas neste experimento. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: grupo LPS (LPS; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 0,5µg/kg de peso corporal de lipopolissacarídeo (Sigma Aldrich®) diluído em 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h; e grupo controle (CTR; n = 5), que recebeu duas injeções intravenosas de 2mL de solução salina (0,9% de NaCl), com intervalo de 24h. A primeira injeção de LPS foi realizada no d 1, e no d 5 os animais foram abatidos, os ovários foram pesados e as amostras dos ovários foram coletadas para avaliação histológica e molecular. Não houve diferença no número total de folículos, bem como nos diferentes tipos de folículos. Além disso, o desafio com LPS não modulou a expressão de genes relacionados à reserva ovariana (HAM), à sobrevivência oocitária (Survivin), à taxa de ativação (Pten, KIT, KITL1, KITL2, AKT1, SIRT1) e às anormalidades foliculares. Portanto, a exposição ao LPS com intervalo de 24h não teve efeito sobre a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais, bem como não teve efeito sobre a expressão de genes antiapoptóticos e de genes relacionados com a reserva ovariana, a sobrevivência oocitária, a taxa de ativação e as anormalidades dos folículos primordiais.

Pilomatricoma benigno em cão da raça Shih-Tzu / Benign pilomatricoma in a Shih-Tzu dog

Background: Pilomatricomas are neoplasms of hair follicles, located in the hair bulb, and the incidence is uncommon in the clinical-surgical clinical routine of dogs and cats. It commonly affects adult animals, with no predisposition to sex or race, and is mainly located in the neck, back, and tail region. The diagnosis is made by histopathological examination, where cells are observed in which their nucleus does not stain with hematoxylin and eosin - empty nucleus. The present work aimed to report a case of benign pilomatricoma since it is a rare condition in dogs and cats and, consequently, there is little information in the literature. Case: A 6-year-old male Shih-Tzu dog, not submitted to surgical contraception, weighing 6.9 kg, was treated at the Veterinary School Hospital (HVE) of the North Parana State University (UENP), Bandeirantes, PR, Brazil, with a history of nodules in the tail region, lasting 6 months. On physical examination, no changes were identified in the patient's physiological parameters. However, the presence of neoformations in the distal and medial region of the tail, similar to a nail, adherent, non-ulcerated and non-alopecic, and absence of pruritus or self-mutilation were identified. Vaccination and deworming were updated. Hematological examination, serum biochemicals (urea, creatinine, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, and albumin), and abdominal ultrasound showed no changes. According to the clinical and laboratory signs, it was decided to perform an excisional biopsy, using a caudectomy, for subsequent histopathological examination. The specimens were fixed in 10% formaldehyde and sent for histopathological examination. Histological examination was compatible with benign pilomatricoma. Postoperatively, cephalexin, dipyrone, tramadol hydrochloride, and meloxicam were prescribed, surgical wound cleaning, and the use of an Elizabethan collar until the suture was removed. After 10 days of the surgical procedure, the patient was asked to remove the sutures, and no changes were identified regarding the physiological parameters and blood count. Discussion: Pilomatricomas are commonly benign neoplasms arising from the germ cells of the follicular matrix. They present dermal or subdermal forms, with several cystic structures which are surrounded by keratinocytes, similar to the matrix cells of an anagen hair follicle, more keratinized and firmer areas, corroborating the results of the present report. In the ultrasound examination, the presence of intra-abdominal metastases was not identified, which is consistent with the literature, since in this type of neoplasm it is not common to identify foci of intra-abdominal and thoracic metastases. In the present report, immunohistochemistry was not used, even though it is used to differentiate follicular neoplasms from pilomatricomas. However, histopathological examination is considered the best method for the definitive diagnosis of pilomatricomas in dogs. It was concluded that the surgical treatment through excisional biopsy, with safety margins of 2 cm, was effective as a therapeutic method in the case of benign pilomatricoma, and the definitive diagnosis must be made through histopathological examination.

Uso da ultrassonografia Doppler colorido na reprodução de pequenos ruminantes / Use of color Doppler ultrasonography in the reproduction of small ruminants

A ultrassonografia (US) Doppler colorido fornece uma ferramenta não invasiva valiosa para detectar e monitorar mudanças dinâmicas na rede vascular e fluxo sanguíneo em vários órgãos e tecidos reprodutivos. Em apoio as biotécnicas da reprodução animal assistida, a US Doppler colorido tem mostrada alta eficiência no monitoramento funcional das estruturas ovarianas. A previsão de respostas ovarianas e produções embrionária em ovinos pela identificação de sinais Doppler na parede folicular já se mostrou eficiente. A aplicação da US Doppler colorido para a identificação da funcionalidade do tecido luteal é ainda maior, desde acompanhamentos fisiológicos e diagnósticos de disfunções luteais até ampla aplicação em conjunto as diferentes biotécnicas reprodutivas. Destaca-se em ovelhas e cabras, a aplicação comercial da US Doppler colorido para o diagnóstico de gestação precoce, de disfunções luteais, de determinação de respostas ovarianas em fêmeas doadoras e receptoras de embriões, para identificar efeitos luteotrófico de estratégias hormonais, e ainda para amparar as estratégias de ressincronização de estro.(AU)

Color Doppler ultrasonography (US) provides a valuable non-invasive tool for detecting and monitoring dynamic changes in the vascular network and blood flow in various reproductive organs and tissues. In support of assisted animal reproduction biotechniques, color Doppler US has shown high efficiency in the functional monitoring of ovarian structures. The prediction of ovarian responses and embryonic production in sheep by identifying Doppler signals in the follicular wall has already proved to be efficient. The application of color Doppler US for identifying the functionality of the luteal tissue is even greater, from physiological monitoring and diagnosis of luteal dysfunctions to wide application together with different reproductive biotechniques. It stands out in sheep and goats, the commercial application of color Doppler US for the diagnosis of early pregnancy, luteal dysfunctions, determination of ovarian responses in embryo donor and recipient females, to identify luteotrophic effects of hormonal strategies, and even to support estrus resynchronization strategies.(AU)

Protective effect of kaempferol against cisplatin-induced acute ovarian damage in a mouse model / [Efeito protetor do kaempferol contra o dano ovariano agudo induzido pela cisplatina em um modelo murino]

The flavonoid kaempferol has attracted research attention as a potential adjuvant during chemotherapy. This study aimed to evaluate the protective effects of kaempferol against ovarian damage in cisplatin-treated mice. Two groups of mice received saline solution (intraperitoneal injection [i.p.]; control) or a single dose of cisplatin (5 mg/kg body weight, i.p.). Moreover, two other mice groups were pretreated with kaempferol (1 or 10 mg/kg body weight, i.p.) 30 min before of the cisplatin administration. Thereafter, their ovaries were harvested and subjected to histological (follicular morphology and activation) and fluorescence (reactive oxygen species [ROS] production, glutathione [GSH] concentration, and mitochondrial activity) analyses. Compared with cisplatin treatment alone, pretreatment with 1 mg/kg kaempferol maintained normal follicular morphology, reduced ROS production and mitochondrial damage, and enhanced GSH concentration. However, pretreatment with 10 mg/kg kaempferol did not prevent cisplatin-induced damage. The rate of primordial follicle activation was greater in mice pretreated with 1 mg/kg kaempferol than in the other treatment groups. In conclusion, pretreatment with 1 mg/kg kaempferol prevents cisplatin-induced ovarian damage and stimulates primordial follicle activation in mice.

O flavonoide kaempferol tem atraído a atenção como um potencial adjuvante durante a quimioterapia. O presente estudo objetivou avaliar os efeitos do kaempferol contra os danos ovarianos em camundongos tratados com cisplatina. Fêmeas de camundongos receberam solução salina (injeção intraperitoneal [ip]; controle) ou uma dose única de cisplatina (5 mg/kg, ip) ou foram pré-tratadas com kaempferol (1 ou 10 mg/kg, ip) 30 min antes da administração de cisplatina. Os ovários foram recuperados e destinados para as análises histológicas (morfologia e ativação folicular) e de fluorescência (produção de espécies reativas de oxigênio [ERO], concentração de glutationa [GSH] e atividade mitocondrial). Em comparação ao tratamento apenas com cisplatina, o pré-tratamento com 1 mg/kg de kaempferol manteve a morfologia folicular normal, reduziu a produção de ERO, bem como os danos mitocondriais, e aumentou a concentração de GSH. Entretanto, o pré-tratamento com 10 mg/kg de kaempferol não preveniu os danos induzidos pela cisplatina. A taxa de ativação do folículo primordial foi maior em camundongos pré-tratados com 1 mg/kg de kaempferol do que nos outros grupos experimentais. Em conclusão, o pré-tratamento com 1 mg/kg de kaempferol previne o dano ovariano induzido pela cisplatina e estimula a ativação do folículo primordial em camundongos.

Reproductive performance of fixed-time artificial insemination in heifers supplemented with a homeopathic complex / Desempenho reprodutivo à inseminação artificial em tempo fixo em novilhas suplementadas com complexo homeopático

For this study, ½ blood Nelore × Aberdeen Angus heifers (n = 40; 14 months) were divided into two groups: control (n=20; 310 kg) and Pró-Cio (n=20; 304 kg). For Pró-Cio group, 20g of homeopathic product (Pró-cio®, Real H, Campo Grande, Brazil) was supplied together with corn eighteen days prior (D-18) to the beginning of the fixed-time artificial insemination protocol (FTAI). On D0, all females received an intravaginal P4 device and 2 mg BE. On D5, the AFC was assessed by ultrasound and blood was collected for AMH dosage. On D8, P4 device was removed; 300 IU eCG, 0.530 mg of cloprostenol sodium and 0.5 mg of EC were administered; an estrus-identifying adhesive was fixed at the tail insertion and the diameter of the dominant follicle (DF) was measured. On D10, all heifers were inseminated, estrus manifestation was assessed and the preovulatory follicle (POF) was measured. On D20, the CL area was measured and blood flow was assessed using Doppler ultrasound. Data were analyzed by Student, Mann-Whitney or Friedman test. The rates of heat expression, ovulation, and blood flow score with Doppler were analyzed using Fisher's exact test and pregnancy rate by binary logistic regression model (P ≤ 0.05). There was no difference in AFC or AMH dosage (P > 0.05). Pró-Cio group had greater diameters of the DF (9.94 ± 0.42 mm) and POF (11.61 ± 0.56 mm) than the controls (DF: 7.72 ± 0.34 mm and POF: 9.91 ± 0.37 mm), as well a larger CL area (3.26 ± 0.26 versus 2.35 ± 0.16 cm2) and a higher mean CL vascularization score (3.06 versus 2.26; P < 0.05). There was no significant difference (P > 0.05) between estrus manifestation or conception rate for control and Pró-Cio groups. Heifers supplemented with the homeopathic product showed larger follicular diameters at the end of the FTAI protocol and CL with better blood flow scores compared to the control group.

Para esse estudo, novilhas ½ sangue Nelore x Aberdeen Angus (n = 40; 14 meses) foram divididas em dois grupos: Controle (n = 20; 310 kg) e Pró-cio (n = 20; 304 kg). Para o grupo Pró-Cio, 20 g/animal de produto homeopático (Pró-cio®, Real H, Campo Grande, Brazil) foi fornecido juntamente com o milho dezoito dias antes (D-18) de inicar o protocolo de inseminaçãoa artificial em tempo-fixo (IATF). No D0, todas as fêmeas receberam um dispositivo intravaginal de P4 e 2 mg BE. No D5, avaliou-se a contagem de folículos antrais (CFA) por ultrassonografia e realizou-se coleta de sangue para dosagem de AMH. No D8, procedeu-se a retirada do dispositivo de P4; aplicação de 300 UI de eCG, 0,530 mg de cloprostenol sódico e 0,5 mg de CE; um adesivo identificador de estro foi fixado na inserção da cauda e foi feita a mensuração do diâmetro do folículo dominante (FD). No D10, todas as novilhas foram inseminadas, foi realizada a avaliação da manifestação de estro e mensuração do folículo pré-ovulatório (FPO). No D20, realizou-se mensuração da área e avaliação do fluxo sanguíneo do CL por ultrassonografia Doppler. Os dados foram analisados pelos testes de Student, Mann-Whitney ou Friedman. As taxas de expressão de estro, ovulação e escore de fluxo sanguíneo com Doppler foram analisadas usando o teste exato de Fisher e taxa de prenhez pelo modelo de regressão logística binária (p ≤ 0,05). Não houve diferença na CFA nem na dosagem de AMH (p > 0,05). O grupo PróCio apresentou maior diâmetro do FD (9,94 ± 0,42 mm) e FPO (11,61 ± 0,56 mm) em relação ao controle (FD: 7,72 ± 0,34 mm e FPO: 9,91 ± 0,37 mm), além de maior área do CL (3,26 ± 0,26 versus 2,35 ± 0,16 cm2; p < 0,05) e maior escore de vascularização médio do CL (3,06 versus 2,26; p < 0,05). Não houve diferença (p > 0,05) na taxa de manifestação de estro e nem na taxa de concepção entre os grupos Controle e Pró-Cio, respectivamente. Novilhas suplementadas com o produto homeopático apresentaram maiores diâmetros foliculares ao final do protocolo de IATF e CL com melhores escores de fluxo sanguíneo em relação ao grupo controle.

Effect of different gonadotropins on in vitro maturation of sheep oocytes / Efeito de diferentes gonadotrofinas na maturação in vitro de oócitos ovinos

The aim of this study was to examine the effect of replacing the use of follicle-stimulating hormone (FSH) with equine chorionic gonadotropin (eCG) and human chorionic gonadotropin (hCG) on the in vitro maturation (IVM) of sheep oocytes. After sheep ovaries were collected (n=300), the cumulus-oocyte complexes were aspirated, selected, and divided into four groups according to the IVM medium: CON group, in which the basic IVM medium was used; and eCG, hCG, and FSH groups, in which the oocytes were immersed in basic IVM medium with 10 IU/mL eCG, 10 IU/mL hCG, and 10 µg/mL FSH-p, respectively. In vitro maturation of the oocytes was performed at 38.5 °C, in a humidified atmosphere of 5% CO2 in air, for 24 h. Subsequently, the oocytes were evaluated for the degree of cumulus-cell expansion, chromatin configuration, GSH levels, and active mitochondria. There were no significant differences for the rate of cumulus cell expansion. The percentage of oocytes in MII was higher in the eCG group than in the CON and hCG groups (P<0.05) and similar to that of the FSH group. In conclusion, eCG can be used as a substitute for FSH in IVM of sheep oocytes.

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da gonadotrofina coriônica equina (eCG) e da gonadotrofina coriônica humana (hCG), em substituição ao uso de hormônio folículo estimulante (FSH) na maturação in vitro (MIV) de oócitos ovinos. Após a coleta de ovários (n=300) ovinos, os complexos cúmulus-oócitos (CCOs) foram aspirados, selecionados e divididos em quatro grupos de acordo com o meio de MIV: grupo CON, em que foi utilizado o meio MIV base; e grupos ECG, HCG e FSH, em que os oócitos foram imersos em meio MIV base adicionado de 10 UI/mL de eCG, 10 UI/mL de hCG e 10 µg/mL de FSH-p, respectivamente. A MIV dos oócitos foi realizada a 38,5°C, em atmosfera umidificada de 5% de CO2 em ar, durante 24 horas. Posteriormente, os oócitos foram avaliados, quanto grau de expansão das células do cumulus, configuração da cromatina, níveis de GSH e mitocôndrias ativas. Não foram observadas diferenças significativas com relação à taxa de expansão de células do cumulus. A percentagem de oócitos em MII foi maior no grupo ECG do que no grupo CON e HCG (P<0,05) e semelhante ao grupo FSH. Em conclusão, a eCG pode ser utilizada em substituição ao FSH na MIV de oócitos ovinos.

Immunolocalization of angiotensin-(1-7), angiotensin II and angiotensin- converting enzyme 2 in goat ovary / Imunolocalização de angiotensina-(1-7), angiotensina II e enzima-conversora de angiotensina 2 em ovário de cabras

There is increasing evidence as to the participation of the ovarian renin-angiotensin system in important reproductive processes. The inhibition of the angiotensin-converting enzyme (ACE) caused an increase in the rate of ovulation and pregnancy in the artificial insemination protocol has fixed time (TFIA). This study aimed to investigate the presence and location of Ang II, Ang- (1-7) and ACE2 in goat ovaries and the possibility of the involvement of these peptides in previous results. Ten ovaries from goats were collected in a slaughterhouse, washed in buffered PBS, perfused with protease inhibitor solution and processed for immunohistochemistry protocol. The search for peptides was performed using the avidin–biotin–peroxidase method. A strong immunoreactivity for Ang II in theca cells of antral follicles and corpus luteum was observed. Antral follicles (theca cells), corpus luteum and oocyte cytoplasm in early antral follicles exhibited strong immunoreactivity for Ang-(1-7). There was strong immunoreactivity for ACE2 in the cytoplasm of luteal cells and theca cells of antral follicles. In this study, for the first time, the presence and location of Ang II, Ang-(1-7) and ACE2 are reported in goat ovary, suggesting that there is participation in follicular development, oocyte maturation and corpus luteum development.

Há evidências crescentes quanto à participação do sistema renina-angiotensina ovariano em processos reprodutivos importantes. A inibição da enzima conversora de angiotensina (ECA) ocasionou aumento na taxa de ovulação e gravidez no protocolo de inseminação artificial por tempo fixo (TFIA). Este estudo teve como objetivo investigar a presença e localização de Ang II, Ang-(1-7) e ECA2 em ovários de cabras e a possibilidade do envolvimento desses peptídeos em resultados anterio-res. Dez ovários de cabras foram coletados em abatedouro, lavados em PBS tamponado, perfundidos com solução inibidora de protease e processados para protocolo de imunohistoquímica. A busca por peptídeos foi realizada usando o método avidina-bio-tina-peroxidase. Foi observada uma forte imunorreatividade para Ang II em células da teca de folículos antrais e corpo lúteo. Os folículos antrais (células da teca), corpo lúteo e citoplasma do oócito nos folículos antrais iniciais exibiram forte imunor-reatividade para Ang-(1-7). Houve forte imunorreatividade para ECA2 no citoplasma das células luteais e células da teca dos folículos antrais. Neste estudo, pela primeira vez, a presença e localização de Ang II, Ang- (1-7) e ECA2 são relatadas em ovário caprino, sugerindo que há participação no desenvolvimento folicular, maturação oocitária e desenvolvimento do corpo lúteo.

Immunolocalization of angiotensin-(1-7), angiotensin II and angiotensin- converting enzyme 2 in goat ovary / Imunolocalização de angiotensina-(1-7), angiotensina II e enzima-conversora de angiotensina 2 em ovário de cabras

There is increasing evidence as to the participation of the ovarian renin-angiotensin system in important reproductive processes. The inhibition of the angiotensin-converting enzyme (ACE) caused an increase in the rate of ovulation and pregnancy in the artificial insemination protocol has fixed time (TFIA). This study aimed to investigate the presence and location of Ang II, Ang- (1-7) and ACE2 in goat ovaries and the possibility of the involvement of these peptides in previous results. Ten ovaries from goats were collected in a slaughterhouse, washed in buffered PBS, perfused with protease inhibitor solution and processed for immunohistochemistry protocol. The search for peptides was performed using the avidin–biotin–peroxidase method. A strong immunoreactivity for Ang II in theca cells of antral follicles and corpus luteum was observed. Antral follicles (theca cells), corpus luteum and oocyte cytoplasm in early antral follicles exhibited strong immunoreactivity for Ang-(1-7). There was strong immunoreactivity for ACE2 in the cytoplasm of luteal cells and theca cells of antral follicles. In this study, for the first time, the presence and location of Ang II, Ang-(1-7) and ACE2 are reported in goat ovary, suggesting that there is participation in follicular development, oocyte maturation and corpus luteum development.(AU)

Há evidências crescentes quanto à participação do sistema renina-angiotensina ovariano em processos reprodutivos importantes. A inibição da enzima conversora de angiotensina (ECA) ocasionou aumento na taxa de ovulação e gravidez no protocolo de inseminação artificial por tempo fixo (TFIA). Este estudo teve como objetivo investigar a presença e localização de Ang II, Ang-(1-7) e ECA2 em ovários de cabras e a possibilidade do envolvimento desses peptídeos em resultados anterio-res. Dez ovários de cabras foram coletados em abatedouro, lavados em PBS tamponado, perfundidos com solução inibidora de protease e processados para protocolo de imunohistoquímica. A busca por peptídeos foi realizada usando o método avidina-bio-tina-peroxidase. Foi observada uma forte imunorreatividade para Ang II em células da teca de folículos antrais e corpo lúteo. Os folículos antrais (células da teca), corpo lúteo e citoplasma do oócito nos folículos antrais iniciais exibiram forte imunor-reatividade para Ang-(1-7). Houve forte imunorreatividade para ECA2 no citoplasma das células luteais e células da teca dos folículos antrais. Neste estudo, pela primeira vez, a presença e localização de Ang II, Ang- (1-7) e ECA2 são relatadas em ovário caprino, sugerindo que há participação no desenvolvimento folicular, maturação oocitária e desenvolvimento do corpo lúteo.(AU)

The effect of androgen on wool follicles and keratin production in Hetian sheep / Efeito do androgênio na produção de folículos e queratina em ovinos Hetianos

To investigate the optimal androgen concentration for culturing Hetian sheep wool follicle and to detect effects of androgen concentration on wool follicle cell proliferation and apoptosis using immunofluorescence labeling and real-time quantitative fluorescence determinations of wool keratin-associated protein gene expression levels. Wool follicles were isolated by microdissection and wool follicles and skin pieces were cultured in various concentrations of dihydrotestosterone (DHT) in culture medium. Next, daily lengthwise growth measurements of wool follicles were obtained using a microscopic micrometer. Cultured Hetian wool follicles were stained using the SACPIC method to reveal wool follicle structure, while sheep skin slices were used to observe cell proliferation by immunostaining and cell apoptosis using the TUNEL method. At the molecular biological level, keratin-associated protein (Kap) gene expression was studied using wool follicles cultured for various numbers of days in vitro. Effects of androgen concentrations on Hetian wool follicle growth and development were experimentally studied. EdU proliferation assays revealed that androgen promoted cell proliferation within wool follicle dermal papillae. TUNEL apoptosis detection demonstrated that androgen treatment could delay cell apoptosis. Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qPCR) results demonstrated that gene expression level patterns of Hetian mountain sheep super-high sulfur protein. Kap1.1, KIF1.2, Kap2.12 and Kap4.2 gene expression level of the mountainous experimental group was significantly higher than plains Hetian sheep. An androgen concentration of 100 nM can promote the growth of Hetian wool follicle cells in vitro, resulting in overexpression of some genes of the Kap family.(AU)

Investigar a concentração ideal de andrógenos em cultura de folículos pilosos de carneiro Hetiano e detectar os efeitos da concentração de andrógenos na proliferação e apoptose de células foliculares, por meio de imunofluorescência e de determinação quantitativa, em tempo real, da fluorescência dos níveis de expressão gênica de proteína associada à queratina. Folículos pilosos foram isolados por microdissecção, e folículos de lã e pedaços de pele foram cultivados em várias concentrações de di-hidrotestosterona (DHT) em meio de cultura. Em seguida, medições diárias de crescimento longitudinal dos folículos capilares foram obtidas usando um micrômetro microscópico. Folículos de lã cultivados de Hetianos foram corados pelo método SACPIC para revelar a estrutura do folículo piloso, enquanto fatias de pele de carneiro foram usadas para observar a proliferação celular por imunocoloração e apoptose celular por meio do método TUNEL. Em âmbito da biologia molecular, a expressão gênica da proteína associada à queratina (Kap) foi estudada usando folículos capilares cultivados por vários dias, in vitro. Os efeitos das concentrações de andrógenos no crescimento e desenvolvimento dos folículos de lã de Hetianos foram estudados experimentalmente. Ensaios de proliferação de EdU revelaram que o andrógeno promoveu a proliferação celular dentro das papilas dérmicas do folículo piloso. A detecção de apoptose por TUNEL demonstrou que o tratamento com andrógeno poderia atrasar a apoptose celular. Os resultados da reação em cadeia da polimerase transcrição reversa quantitativa (qPCR) demonstraram que os padrões de expressão gênica da proteína de enxofre Kap1.1, KIF1.2, Kap2.12 e Kap4.2 foram significativamente maiores no grupo de ovinos Hetianos de montanha. Uma concentração de androgênio de 100 nM pode promover o crescimento de células foliculares de lã de Hetianos in vitro, resultando na superexpressão de alguns genes da família Kap.(AU)

Influência da somatotropina recombinante bovina no desenvolvimento folicular e na coleta de embriões em éguas / Influence of bovine recombinant somatotropin in the follicular development and embryo colletion in mares

Dez éguas, sem raça definida, foram submetidas a avaliações ultrassonográficas durante o intervalo interovulatório, avaliando-se folículos ≥ 5mm. Cinco éguas foram tratadas com 500mg de r-bST no primeiro e no 14º dia pós-ovulação (grupo GT), e as demais com soro fisiológico (grupo GC). Quando o folículo dominante atingiu diâmetro ≥ 40mm, foram induzidas com hCG e inseminadas 24 horas após, sendo submetidas à coleta de embrião seis dias após a ovulação. Os dados foram agrupados de acordo com o diâmetro do folículo dominante nas fases de emergência, divergência, dominância, pré-ovulatória, indução, inseminação e ovulação. Todas as éguas foram usadas duas vezes, no mesmo grupo. O GT apresentou crescimento folicular precoce para as fases de emergência, divergência, dominância e pré-ovulatória, assim como para o seu maior folículo subordinado, que cresceu mais cedo. As taxas de recuperação foram de 90% (GC) e 70% (GT), em 16 estruturas coletadas, obtendo-se uma não fecundada e um blastocisto inicial para o grupo GC; os demais, no estágio de mórula, apresentaram comportamento semelhante entre os grupos. Conclui-se que a r-bST influencia a dinâmica folicular de éguas, levando a uma antecipação do desenvolvimento folicular, que pode ser utilizada para encurtar o ciclo estral.(AU)

Ten undefined mare breeds were submitted to ultrasonographic evaluations during the interovulatory interval, evaluating follicles measuring ≥ 5mm. Five mares were treated with 500mg r-bST on the first and the 14th day after ovulation (TG group), and the others with saline (CG group). When the dominant follicle reached a diameter ≥ 40mm the ovulation was induced with hCG, and the mares were inseminated 24 hours later and submitted to embryo collection six days after ovulation. The data were grouped according to the diameter of the dominant follicle in the emergence, divergence, dominance, preovulatory, induction, insemination and ovulation phases. All mares were used twice, in the same group. The GT showed early follicular growth for the emergence, divergence, dominance and pre-ovulatory phases, as well as for its greater subordinate follicle, growing earlier. The recovery rates were 90% (CG) and 70% (TG), and 16 structures were collected, obtaining an unfertilized embryo and an initial blastocyst for the CG group, the others in the morula stage behaved similarly between the groups. It can be concluded that r-bST influences the follicular dynamics of the mares, leading to an anticipation of the follicular development that can be used to shorten the estrous cycle.(AU)

Influência da somatotropina recombinante bovina no desenvolvimento folicular e na coleta de embriões em éguas / Influence of bovine recombinant somatotropin in the follicular development and embryo colletion in mares

Dez éguas, sem raça definida, foram submetidas a avaliações ultrassonográficas durante o intervalo interovulatório, avaliando-se folículos ≥ 5mm. Cinco éguas foram tratadas com 500mg de r-bST no primeiro e no 14º dia pós-ovulação (grupo GT), e as demais com soro fisiológico (grupo GC). Quando o folículo dominante atingiu diâmetro ≥ 40mm, foram induzidas com hCG e inseminadas 24 horas após, sendo submetidas à coleta de embrião seis dias após a ovulação. Os dados foram agrupados de acordo com o diâmetro do folículo dominante nas fases de emergência, divergência, dominância, pré-ovulatória, indução, inseminação e ovulação. Todas as éguas foram usadas duas vezes, no mesmo grupo. O GT apresentou crescimento folicular precoce para as fases de emergência, divergência, dominância e pré-ovulatória, assim como para o seu maior folículo subordinado, que cresceu mais cedo. As taxas de recuperação foram de 90% (GC) e 70% (GT), em 16 estruturas coletadas, obtendo-se uma não fecundada e um blastocisto inicial para o grupo GC; os demais, no estágio de mórula, apresentaram comportamento semelhante entre os grupos. Conclui-se que a r-bST influencia a dinâmica folicular de éguas, levando a uma antecipação do desenvolvimento folicular, que pode ser utilizada para encurtar o ciclo estral.(AU)

Ten undefined mare breeds were submitted to ultrasonographic evaluations during the interovulatory interval, evaluating follicles measuring ≥ 5mm. Five mares were treated with 500mg r-bST on the first and the 14th day after ovulation (TG group), and the others with saline (CG group). When the dominant follicle reached a diameter ≥ 40mm the ovulation was induced with hCG, and the mares were inseminated 24 hours later and submitted to embryo collection six days after ovulation. The data were grouped according to the diameter of the dominant follicle in the emergence, divergence, dominance, preovulatory, induction, insemination and ovulation phases. All mares were used twice, in the same group. The GT showed early follicular growth for the emergence, divergence, dominance and pre-ovulatory phases, as well as for its greater subordinate follicle, growing earlier. The recovery rates were 90% (CG) and 70% (TG), and 16 structures were collected, obtaining an unfertilized embryo and an initial blastocyst for the CG group, the others in the morula stage behaved similarly between the groups. It can be concluded that r-bST influences the follicular dynamics of the mares, leading to an anticipation of the follicular development that can be used to shorten the estrous cycle.(AU)

Different times to perform timed artificial insemination when using a P4/E2/eCG-based protocol in buffalo / Momentos diferentes para executar a inseminação artificial em tempo fixo utilizando o protocolo à base de P4/E2/eCG em búfalas

The aim of this study was to evaluate different times for timed artificial insemination (TAI) in buffalo submitted to a P4/E2/eCG-based protocol. In this study, 204 buffaloes were distributed into one of two groups (TAI56, n=103 and TAI64, n=101). At a random stage of the oestrous cycle (Day 0 = D0), in the morning (TAI56, a.m.) or afternoon (TAI64, p.m.), buffaloes received an intravaginal progesterone device (P4; 1.0 g) plus EB (2.0 mg i.m.). On D9 a.m. (TAI56) or p.m. (TAI64), the P4 was removed and buffaloes received PGF2a (0.53 mg i.m. sodium cloprostenol) and eCG (400 IU i.m.). On D10 a.m. (TAI56) or p.m. (TAI64), 24 h after P4 removal, buffaloes were treated with EB (1.0 mg i.m.). Buffaloes from TAI56 and TAI64 were inseminated 56 and 64 h after P4 removal (D11, p.m. and D12, a.m., respectively). Ultrasound examinations were performed on D0 to ascertain ovarian follicular status, at TAI to measure the diameter of the dominant follicle (DF) and D42 for pregnancy diagnosis. The statistical analysis was performed using the GLIMMIX procedure of SAS®. There was no difference between TAI56 and TAI64 for the diameter of the DF at TAI and the pregnancy per TAI. It was concluded that TAI 56 or 64 h after P4 removal did not affect fertility in buffaloes submitted to the induction of ovulation with EB. The present research supports that is possible to perform TAI at any time throughout the day in buffalo synchronized during the non-breeding season.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar diferentes momentos para a realização da IATF em búfalas submetidas a um protocolo à base de P4/E2/eCG. Neste estudo, 204 búfalas foram distribuídas em um de dois grupos (IATF56, n=103 e IATF64, n=101). Em estágio aleatório do ciclo estral (Dia 0 = D0), pela manhã (IATF56, manhã) ou pela tarde (IATF64, tarde), as búfalas receberam um dispositivo intravaginal de progesterona (P4; 1,0 g) e BE (2,0 mg i.m.). No D9 pela manhã (IATF56) ou pela tarde (IATF64), a P4 foi removida e as búfalas receberam PGF2a (0,53 mg i.m. cloprostenol sódico) e eCG (400 UI i.m.). No D10 pela manhã (IATF56) ou pela tarde (IATF64), 24 h após a remoção da P4, as búfalas foram tratadas com BE (1,0 mg i.m.). As búfalas dos grupos IATF56 e IATF64 foram inseminadas 56 e 64 h após a remoção da P4 (D11, pela tarde e D12, pela manhã, respectivamente). Avaliações ultrassonográficas foram realizadas no D0 para verificar o status folicular ovariano, na IATF para medir o diâmetro do folículo dominante (FD) e no D42 para o diagnóstico de gestação. A análise estatística foi realizada utilizando o procedimento GLIMMIX do SAS®. Não houve diferença entre os grupos IATF56 e IATF64 no diâmetro do FD na IATF e na prenhez por IATF. Conclui-se que a IATF 56 ou 64 h após a remoção da P4 não afeta a fertilidade de búfalas submetidas à indução da ovulação com BE. A presente pesquisa evidencia que é possível realizar a IATF durante todo o dia em búfalas sincronizadas durante a estação reprodutiva desfavorável.(AU)

In vitro embryos production of oocytes selected based on follicular size and by brilliant cresyl blue staining / Produção in vitro de embriões de oócitos selecionados baseados no tamanho folicular e por coloração com azul cresil brilhante

We evaluated the competence of bovine oocytes via morphological selection associated with follicular diameter and by brilliant cresyl blue (BCB) staining, in order to improve oocyte selection and the efficiency of in vitro embryo production. Follicles with small (2<4 mm), large (4–8 mm) or mixed (2–8 mm) diameters were aspirated from slaughterhouse ovaries. Next, the morphologically categorized oocytes were stained and evaluated with 26 μM of BCB (90 min), followed by an assessment of in vitro maturation (MII) and blastocyst production. Oocytes from the large (61.1 ± 3.9%) and mixed (52.9 ± 4.6%) follicular groups showed comparable (p>0,05) BCB+ rates, but both differed (p<0.05) as compared to the small-diameter group (41.0 ± 4.5%). Between the BCB+ and BCB oocytes, there was no difference (p>0,05) in MII rate in the mixed (respectively 86.7 ± 3.4 and 75.8 ± 2.2), large (respectively 89.4 ± 2.6 and 79.7 ± 2.3) and small (respectively 76.7 ± 2.9 and 67.2 ± 2.5) diameter groups. Comparing BCB (+ and -) oocytes, we observed (p>0,05) no change in the percentage of embryos in the large group (respectively 67.3 ± 3.3 and 53.5 ± 5.8) and in the small group (respectively 43.8 ± 5.3 and 33.9 ± 2.2), but there was a difference (p<0.05) in the mixed group (respectively 57.8 ± 3.9 and 39.6 ± 7.5). Furthermore, when we compared between follicular groups, the BCB+/large-diameter group (61.1 ± 3.9%) had a significant higher percentage of embryos (p<0.05) than the small-diameter BCB+ (43.8 ± 5.3) groups. To conclude, selection procedures that use follicle size and/or BCB staining may be used as an additional tool to improve the in vitro production of embryos.(AU)

Avaliou-se a competência de oócitos bovinos através da seleção morfológica associada ao diâmetro folicular e pela coloração azul cresil brilhante (BCB), a fim de melhorar a seleção de oócitos e a eficiência da produção in vitro de embriões. Folículos com diâmetro pequeno (2<4 mm), grande (4-8 mm) ou misto (2-8 mm) foram aspirados de ovários de matadouro. Em seguida, os oócitos classificados morfologicamente foram corados e avaliados com 26 μM de BCB (90 min), seguido de uma avaliação da maturação in vitro (MII) e produção de blastocisto. Os oócitos dos grupos folículo grande (61,1 ± 3,9%) e misto (52,9 ± 4,6%) apresentaram taxas de BCB+ comparáveis (p>0,05), mas ambos diferiram (p<0,05) em relação ao grupo folículo pequeno (41,0 ± 4,5%). Entre os oócitos BCB+ e BCB–, não houve diferença (p>0,05) na taxa de MII nos grupos mistos (respectivamente 86,7 ± 3,4 e 75,8 ± 2,2), grande (respectivamente 89,4 ± 2,6 e 79,7 ± 2,3) e pequeno (respectivamente 76,7 ± 2,9 e 67,2 ± 2,5). Comparando os oócitos BCB (+ e -), não observamos alteração (p>0,05) na porcentagem de embriões no grupo grande (respectivamente 67,3 ± 3,3 e 53,5 ± 5,8) e no grupo pequeno (respectivamente 43,8 ± 5,3 e 33,9 ± 2,2), mas há houve diferença (p<0,05) no grupo misto (respectivamente 57,8 ± 3,9 e 39,6 ± 7,5). Além disso, quando comparamos os grupos foliculares, o grupo BCB+/grande (61,1 ± 3,9%) apresentou uma porcentagem significativamente maior de embriões (p<0,05) do que o grupo BCB+/pequeno (43,8 ± 5,3). Para concluir, os procedimentos de seleção que usam tamanho do folículo e/ou coloração com BCB podem ser usados como uma ferramenta adicional para melhorar a produção in vitro de embriões.(AU)

In vitro embryos production of oocytes selected based on follicular size and by brilliant cresyl blue staining / Produção in vitro de embriões de oócitos selecionados baseados no tamanho folicular e por coloração com azul cresil brilhante

We evaluated the competence of bovine oocytes via morphological selection associated with follicular diameter and by brilliant cresyl blue (BCB) staining, in order to improve oocyte selection and the efficiency of in vitro embryo production. Follicles with small (20,05) BCB+ rates, but both differed (p0,05) in MII rate in the mixed (respectively 86.7 ± 3.4 and 75.8 ± 2.2), large (respectively 89.4 ± 2.6 and 79.7 ± 2.3) and small (respectively 76.7 ± 2.9 and 67.2 ± 2.5) diameter groups. Comparing BCB (+ and -) oocytes, we observed (p>0,05) no change in the percentage of embryos in the large group (respectively 67.3 ± 3.3 and 53.5 ± 5.8) and in the small group (respectively 43.8 ± 5.3 and 33.9 ± 2.2), but there was a difference (p<0.05) in the mixed group (respectively 57.8 ± 3.9 and 39.6 ± 7.5). Furthermore, when we compared between follicular groups, the BCB+/large-diameter group (61.1 ± 3.9%) had a significant higher percentage of embryos (p<0.05) than the small-diameter BCB+ (43.8 ± 5.3) groups. To conclude, selection procedures that use follicle size and/or BCB staining may be used as an additional tool to improve the in vitro production of embryos.

Avaliou-se a competência de oócitos bovinos através da seleção morfológica associada ao diâmetro folicular e pela coloração azul cresil brilhante (BCB), a fim de melhorar a seleção de oócitos e a eficiência da produção in vitro de embriões. Folículos com diâmetro pequeno (20,05), mas ambos diferiram (p0,05) na taxa de MII nos grupos mistos (respectivamente 86,7 ± 3,4 e 75,8 ± 2,2), grande (respectivamente 89,4 ± 2,6 e 79,7 ± 2,3) e pequeno (respectivamente 76,7 ± 2,9 e 67,2 ± 2,5). Comparando os oócitos BCB (+ e -), não observamos alteração (p>0,05) na porcentagem de embriões no grupo grande (respectivamente 67,3 ± 3,3 e 53,5 ± 5,8) e no grupo pequeno (respectivamente 43,8 ± 5,3 e 33,9 ± 2,2), mas há houve diferença (p<0,05) no grupo misto (respectivamente 57,8 ± 3,9 e 39,6 ± 7,5). Além disso, quando comparamos os grupos foliculares, o grupo BCB+/grande (61,1 ± 3,9%) apresentou uma porcentagem significativamente maior de embriões (p<0,05) do que o grupo BCB+/pequeno (43,8 ± 5,3). Para concluir, os procedimentos de seleção que usam tamanho do folículo e/ou coloração com BCB podem ser usados como uma ferramenta adicional para melhorar a produção in vitro de embriões.

Trabecular trichoblastoma in a domestic cat (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758) / Tricoblastoma trabecular em gato doméstico (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758)

Trichoblastoma is characterized as a benign cutaneous neoplasm that originates in the trichoblastic epithelium of the hair bulb. The present report describes the case of a 4-year-old cross breed neutered male cat that had a history of a slow, freely movable, ulcerated, slow growing, solitary cutaneous nodule located on the left scapular region. Histopathological evaluation showed neoplastic cells arranged in cohesive nests or palisades with eosinophilic and scant cytoplasm. Based on the microscopic findings, a diagnosis of trabecular trichoblastoma was made. The treatment of choice consisted of total surgical excision of the mass with safe surgical margins. Tumor recurrence was not observed.(AU)

O Tricoblastoma se caracteriza como uma neoplasia benigna cutânea que tem origem no epitélio tricoblástico do bulbo piloso. O presente relato descreve o caso de felino macho, sem raça definida (SRD), com histórico de nódulo solitário de crescimento lento, não aderido e ulcerado, localizado na região escapular esquerda. A histopatologia evidenciou células neoplásicas organizadas em ninhos coesos, em paliçadas com citoplasma eosinofílico e escasso, os achados foram compatíveis com a descrição de tricoblastoma trabecular. O tratamento de eleição consistiu na exérese cirúrgica total da massa com ampla margem de segurança e recidivas não foram observadas.(AU)

Trabecular trichoblastoma in a domestic cat (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758): Case report / Tricoblastoma trabecular em gato doméstico (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758): Relato de caso

Trichoblastoma is characterized as a benign cutaneous neoplasm that originates in the trichoblastic epithelium of the hair bulb. The present report describes the case of a 4-year-old cross breed neutered male cat that had a history of a slow, freely movable, ulcerated, slow growing, solitary cutaneous nodule located on the left scapular region. Histopathological evaluation showed neoplastic cells arranged in cohesive nests or palisades with eosinophilic and scant cytoplasm. Based on the microscopic findings, a diagnosis of trabecular trichoblastoma was made. The treatment of choice consisted of total surgical excision of the mass with safe surgical margins. Tumor recurrence was not observed.(AU)

O Tricoblastoma se caracteriza como uma neoplasia benigna cutânea que tem origem no epitélio tricoblástico do bulbo piloso. O presente relato descreve o caso de felino macho, sem raça definida (SRD), com histórico de nódulo solitário de crescimento lento, não aderido e ulcerado, localizado na região escapular esquerda. A histopatologia evidenciou células neoplásicas organizadas em ninhos coesos, em paliçadas com citoplasma eosinofílico e escasso, os achados foram compatíveis com a descrição de tricoblastoma trabecular. O tratamento de eleição consistiu na exérese cirúrgica total da massa com ampla margem de segurança e recidivas não foram observadas(AU)

Insulin effect during a Heatsynch protocol in dairy cows / Efeito da insulina durante um protocolo Heatsynch em vacas leiteiras

The objective of this study was to evaluate the effect of exogenous insulin administration on follicular growth, estrus presentation and conception rate during a protocol of ovulation synchronization. Dairy cows were subjected to the Heatsynch protocol, with the insertion of an intravaginal device containing 1.9 g of progesterone (CIDR) and an intramuscular injection containing 2.5 mg of GnRH on day 0. On day 7, the CIDR was removed and subjects were given 12.5 mg of dinoprost. Also on day 7, Insulin Group (IG, n = 21) animals received a subcutaneous injection containing 0.25 IU / kg of recombinant human insulin and the control group (CG, n = 25) received a 0.9% NaCl injection. On day 8, an injection of 0.5 mg of estradiol cypionate was administered to all cows. Animals were inseminated 12 hours after estrus presentation or at day 10 at fixed time. Follicular development was evaluated on days 7, 9, and 10 using transrectal ultrasonography, estrus presentation was observed between days 8 and 10, and conception rate was evaluated 30 days after AI. There were no differences in growth rate, follicular diameter, estrus presentation, and conception rate. Therefore, application of a single dose of insulin does not promoted an increase in follicular size, estrus presentation and conception rate in dairy cows.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração exógena de insulina sobre crescimento folicular, apresentação de cio e taxa de concepção durante um protocolo de sincronização da ovulação. As vacas holandês lactantes foram submetidas ao protocolo Heatsynch, com inserção do dispositivo intravaginal contendo 1,9 g de progesterona (CIDR) no dia 0 e uma injeção intramuscular de 2,5 mg de GnRH. No dia 7, o CIDR foi removido e foi aplicado 12,5 mg de dinoprost. Ainda no dia 7, os animais do Grupo Insulina (IG, n = 21) receberam uma injeção subcutânea de 0,25 UI / kg de insulina humana recombinante e o grupo controle (CG, n = 25) recebeu uma injeção de NaCl 0,9%. No dia 8 foi aplicado 0,5 mg de cipionato de estradiol em todas as vacas. Animais foram inseminados 12 horas após a apresentação de cio ou no dia 10 em tempo fixo. O desenvolvimento folicular foi avaliado nos dias 7, 9 e 10 por ultrassonografia transretal, a apresentação de cio foi observada entre os dias 8 e 10 e a taxa de prenhez/IA foi avaliada 30 dias após a IA. Não houve diferença quanto a taxa de crescimento e diâmetro folicular, apresentação de cio e taxa de concepção. A aplicação de uma dose única de insulina não promove o incremento no tamanho folicular, apresentação de cio e taxa de prenhez/IA em vacas de leite.(AU)

Trabecular trichoblastoma in a domestic cat (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758) / Tricoblastoma trabecular em gato doméstico (Felis catus domesticus, Linnaeus 1758)

Trichoblastoma is characterized as a benign cutaneous neoplasm that originates in the trichoblastic epithelium of the hair bulb. The present report describes the case of a 4-year-old cross breed neutered male cat that had a history of a slow, freely movable, ulcerated, slow growing, solitary cutaneous nodule located on the left scapular region. Histopathological evaluation showed neoplastic cells arranged in cohesive nests or palisades with eosinophilic and scant cytoplasm. Based on the microscopic findings, a diagnosis of trabecular trichoblastoma was made. The treatment of choice consisted of total surgical excision of the mass with safe surgical margins. Tumor recurrence was not observed.

O Tricoblastoma se caracteriza como uma neoplasia benigna cutânea que tem origem no epitélio tricoblástico do bulbo piloso. O presente relato descreve o caso de felino macho, sem raça definida (SRD), com histórico de nódulo solitário de crescimento lento, não aderido e ulcerado, localizado na região escapular esquerda. A histopatologia evidenciou células neoplásicas organizadas em ninhos coesos, em paliçadas com citoplasma eosinofílico e escasso, os achados foram compatíveis com a descrição de tricoblastoma trabecular. O tratamento de eleição consistiu na exérese cirúrgica total da massa com ampla margem de segurança e recidivas não foram observadas.

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)

DNA damage and primordial follicle activation after in vitro culture of sheep ovarian cortex in Morus nigra leaf extract / Dano ao DNA e ativação do folículo primordial após a cultivo in vitro do córtex ovariano de ovelha em extrato de folha de Morus nigra

This study evaluated the effect of Morus nigra leaf extract, with or without supplementation, on morphology, activation and DNA damage of preantral follicles cultured within sheep ovarian tissue. Ovaries were collected and divided into fragments, being one fixed for histological and Terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) mediated dUTP nick-end labeling (TUNEL) analysis (fresh control). The remaining fragments were cultured for 7 days in alpha minimum essential media (α-MEM) supplemented with bovine serum albumin (BSA), insulin, transferrin, selenium, glutamine, hypoxanthine and ascorbic acid (α-MEM+; control medium) or into medium composed of M. nigra extract without supplements (0.1; 0.2 or 0.4mg/mL) or supplemented with the same substances described above for α-MEM+ (MN 0.1+; 0.2+ or 0.4+mg/mL). Then, tissues were destined to histological and TUNEL analysis. The α-MEM+ treatment had more morphologically normal follicles than all M. nigra extract treatments. However, α-MEM+ treatment also showed signs of atresia because the percentage of TUNEL positive cells was similar in α-MEM+ and in 0.1mg/mL M. nigra without and with supplements. Moreover, a reduction in the primordial follicles and an increase in the growing ones were observed in all treatments, except 0.2mg/mL M. nigra. In conclusion, the follicles cultured at 0.1mg/mL M. nigra extract were in good condition and able to continue their development, as demonstrated by the same rates of DNA damage and follicular activation as the control medium.(AU)

Este estudo avaliou o efeito do extrato das folhas de Morus nigra, com ou sem suplementos, sobre a morfologia, a ativação e o dano ao DNA de folículos pré-antrais cultivados inclusos em tecido ovariano. Os ovários foram coletados e divididos em fragmentos, sendo um fixado para análise histológica e ensaio de marcação de terminações dUTP mediada por desoxinucleotidil transferase terminal (TUNEL) (controle fresco). Os fragmentos restantes foram cultivados durante 7 dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM) suplementado com albumina sérica bovina (BSA), insulina, transferrina, selênio, glutamina, hipoxantina e ácido ascorbico (α-MEM+; meio controle) ou em meio composto de extrato de M. nigra sem suplementos (0,1; 0,2 or 0,4mg/mL) ou suplementado com as mesmas substâncias descritas para α-MEM+ (MN 0,1+; 0,2+ or 0,4+mg/mL). Então, os tecidos foram destinados à análise histológica e TUNEL. O tratamento do α-MEM+ apresentou mais folículos morfologicamente normais que todos os tratamentos do extrato de M. nigra. No entanto, o tratamento com α-MEM+ também mostrou sinais de atresia, pois a porcentagem de células TUNEL positivas foi semelhante em α-MEM+ e em 0,1mg/mL M. nigra sem e com suplementos. Além disso, observou-se uma redução nos folículos primordiais e um aumento nos folículos em crescimento em todos os tratamentos, exceto 0,2mg/mL M. nigra. Em conclusão, os folículos cultivados com 0,1mg/mL de extrato de M. nigra estavam em boas condições e aptos a continuar seu desenvolvimento, como demonstrado pelas taxas de dano ao DNA e de ativação folicular semelhantes ao meio controle.(AU)