Molecular detection of hemoplasmas in rescued blackeared opossums (Didelphis aurita Wied-Neuwied, 1826) from southeastern Brazil, with evidence of a novel genotype infecting marsupials / Detecção molecular de hemoplasmas em gambás-de-orelha-preta (Didelphis aurita Wied-Neuwied, 1826) resgatados do sudeste do Brasil, com evidência de um novo genótipo infectando marsupiais

There is a growing concern about the participation of wild hosts and reservoirs in the epidemiology of several pathogens, particularly within the context of environmental changes and the expansion of the One Health concept. The aim of this study was to investigate the presence of hemoplasmas in opossums rescued from the metropolitan region of Rio de Janeiro state, Brazil. Blood samples were collected from 15 Didelphis aurita and subjected to DNA extraction and PCR using primers for the 16S rRNA and 23S rRNA genes. Physical examination and hematological analysis were also performed. Three out of 15 opossums tested positive for hemotropic Mycoplasma spp. by PCR and showed hematological alterations such as anemia and leukocytosis. Clinical signs were non-specific and associated to traumatic lesions. The phylogenetic analysis indicated that the hemoplasma detected was positioned between 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detected in D. virginiana from North American and hemoplasmas recently detected in D. aurita from the state of Minas Gerais, Brazil. This study indicates the existence of hemoplasma infections in D. aurita from the metropolitan region of Rio de Janeiro, and reinforce the need for new epidemiological inquiries to clarify the participation of these in the dynamics of circulation of tick-borne pathogens.(AU)

Há uma crescente preocupação com a participação de hospedeiros e reservatórios silvestres na epidemiologia de diversos patógenos, principalmente no contexto das mudanças ambientais e da expansão do conceito "One Health". O objetivo deste estudo foi investigar a presença de hemoplasmas em gambás resgatados da região metropolitana do estado do Rio de Janeiro, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 15 Didelphis aurita e submetidas à extração de DNA e PCR utilizando-se "primers" para os genes 16S rRNA e 23S rRNA. O exame físico e a análise hematológica também foram realizados. Três dos 15 gambás testaram positivo para Mycoplasma spp. hemotrópico por PCR. Os sinais clínicos eram inespecíficos e associados a lesões traumáticas. Anemia e leucocitose foram detectadas em animais positivos. A análise filogenética indicou que o hemoplasma detectado estava posicionado entre 'Ca. Mycoplasma haemodidelphis' detectado em D. virginiana da América do Norte e hemoplasmas recentemente detectados em D. aurita do estado de Minas Gerais, Brasil. Este estudo indica a existência de infecções por hemoplasmas em D. aurita, da região metropolitana do Rio de Janeiro, e reforça a necessidade de novos inquéritos epidemiológicos, para esclarecer a participação destes na dinâmica de circulação de patógenos transmitidos por carrapatos.(AU)

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.

Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.(AU)

Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.(AU)

Molecular detection of Mycoplasma suis in extensive pig production systems in the State of Maranhão, northeast Brazil / Detecção molecular de Mycoplasma suis em suínos de criações extensivas no estado do Maranhão, nordeste do Brasil

Mycoplasma suis is a bacterium that causes hemoplasmosis in pigs. This agent is capable of adhering to the surface of porcine erythrocytes, inducing structural changes on these cells. In Brazil, there are few reports about the disease, its causal agent, and the economic impact of this pathogen on pig production systems and farm sanitation. The present study aimed to investigate the occurrence of M. suis in extensive swine farms located in the counties of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario, State of Maranhão, northeast Brazil. For such purpose, 64 blood samples of pigs from these facilities were tested for M. suis using a 16S rRNA gene-based quantitative real-time PCR (qPCR); 82.3%, 65.2% and 25% of blood samples of swine from farms in the cities of Itapecuru Mirim, Santa Rita and Rosario were positive for M. suis by qPCR, respectively. This study shows, for the first time, that M. suis circulates in pig populations from the state of Maranhão, Northeast Brazil.(AU)

Mycoplasma suis é uma bactéria que causa a hemoplasmose em suínos. Este agente é capaz de se aderir à superfície dos eritrócitos de suínos, ocasionando deformações estruturais nestas células. No Brasil, poucos são os relatos acerca do parasita, da infecção e de seus impactos econômicos nas esferas produtiva e sanitária. O objetivo deste estudo foi investigar, por meio da PCR em tempo real quantitativa (qPCR) baseada no gene 16S rRNA, a ocorrência de M. suis em 64 amostras de sangue de suínos de criações extensivas dos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, localizados no estado do Maranhão. Foram obtidos um percentual de 82,3%, 65,2% e 25% de amostras positivas na qPCR para M. suis nos municípios de Itapecuru Mirim, Santa Rita e Rosário, respectivamente. Este estudo mostra que M. suis circula entre os suínos de criações extensivas no estado do Maranhão.(AU)

High occurrence of Mycoplasma suis infection in swine herds from non-technified farms in Mossoró, state of Rio Grande do Norte, Northeastern Brazil / Alta ocorrência de infecção por Mycoplasma suis em suínos de criações não tecnificadas de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte, Nordeste brasileiro

Abstract Mycoplasma suis, the etiological agent of swine hemoplasmosis, has been neglected in swine herds around the world. Swine hemoplasmosis is frequently associated with hemolytic anemia, disgalacty, infertility and immunosuppression, and it results in significant economic losses. This study investigates the occurrence of M. suis in non-technified swine herds in the northeastern region of Brazil using quantitative PCR (qPCR) based on the 16S rRNA gene. Between March and August 2013, blood samples from 147 swine were collected during slaughter in the city of Mossoró, state of Rio Grande do Norte, northeastern Brazil. One hundred and twelve samples (76.19%) were positive for M. suis by qPCR assays. The range of Cqs and quantification (copies of a M. suis-16S rRNA gene fragment/µL) was 20.8637.89 and 1.64×1016.64×107, respectively. One can conclude that M. suis infection have high occurrence (76,19%) in non-technified swine-rearing systems in Mossoró in the state of Rio Grande do Norte, Brazil.(AU)

Resumo Mycoplasma suis, agente etiológico da hemoplasmose suína, tem sido negligenciado nas criações de suínos ao redor do mundo. A hemoplasmose suína é frequentemente associada à anemia hemolítica, disgalactia, infertilidade e imunossupressão, acarretando em perdas econômicas. O objetivo do presente trabalho foi investigar, por meio da PCR quantitativa (qPCR) baseada no gene rRNA 16S, a ocorrência de M. suis em amostras de sangue de suínos de criações não tecnificadas na cidade de Mossoró, Estado do Rio Grande do Norte. Entre março a agosto de 2013, foram colhidas amostras de sangue de 147 suínos de criações não tecnificadas da referida região. Cento e doze amostras (76,19%) amostras mostraram-se positivas na qPCR para M. suis. A média dos Cqs e da quantificação (número de cópias do gene 16S rRNA de M. suis por microlitro) foi de 20,86 37,89 e 1,64 x 101 a 6,64 x 107, respectivamente. Conclui-se que a infecção por M. suis apresenta alta ocorrência (76,19%) em criações de suínos não tecnificadas na cidade de Mossoró, estado do Rio Grande do Norte.(AU)

HEMOPLASMOSE EM FELÍDEOS SILVESTRES DE VIDA LIVRE E CATIVEIRO NO ESTADO DO MATO GROSSO, BRASIL

Os hemoplasmas são parasitos de eritrócitos, caracterizados por estarem sempre na posição epieritrocitária e por causarem anemia nos animais infectados. Em felinos, três espécies de Mycoplasmas são descritas: Mhf, CMhm e CMt. Considerados importantes reservatórios de doenças, os felídeos silvestres podem desempenhar um papel crucial na epidemiologia das hemoplasmoses. Logo, o objetivo deste estudo foi detectar a ocorrência dessas três espécies de hemoplasmas de importância clínica em felídeos silvestres de vida livre e cativeiro. Foram coletadas, extraídas e submetidas a reação em cadeia da polimerase (PCR), amostras de sangue de 23 felídeos silvestres de 6 espécies distintas (Leopardus colocolo, Leopardus pardalis, Leopardus wiedii, Pantera onca, Puma concolor e Puma yagouaorundii) no período de agosto de 2014 a agosto de 2018. Não houve detecção de Mhf nos felídeos deste estudo. CMhm foi detectado em 12,5% (3/23) animais, dois de vida livre e um de cativeiro, sendo estes pertencentes a mesma espécie (Leopardus pardalis). CMt estava presente 52,2% dos felídeos (12/23), sendo 6 animais de vida livre e 6 animais de cativeiro. Todas as espécies de felídeos silvestres testadas apresentaram pelo menos um animal positivo para este microrganismo, sendo encontrada a um animal com coinfecção de CMhm e CMt. Este é o primeiro relato pela técnica de PCR da ocorrência de CMt em Leopardus colocolo, Leopardus wiedii, Puma concolor, Panthera onca e Puma yagouaroundi. Os mecanismos de transmissão são ainda incertos para estes microrganismos. O estudo das populações felinas silvestres pode contribuir ativamente para compreensão da epidemiologia das hemoplasmoses e da importância destes animais como reservatórios, podendo afetar significativamente a saúde humana e as populações domésticas e silvestres.

Hemoplasms are erythrocyte parasites characterized by being always in the epidermocytic position and causing anemia in infected animals. In felines, three species of Mycoplasmas are described: Mhf, CMhm and CMt. Considered important reservoirs of disease, wild felids can play a crucial role in the epidemiology of hemoglobin. Therefore, the objective of this study was to detect the occurrence of these three species of hemoplasms of clinical importance in wild felines of free life and captivity. Blood samples of 23 wild felids from 6 different species (Leopardus colocolo, Leopardus pardalis, Leopardus wiedii, Panther onca, Puma concolor and Puma yagouaorundii) were collected, extracted and submitted to polymerase chain reaction (PCR) in the period of August 2014 and August 2018. There was no detection of Mhf in the felids of this study. CMhm was detected in 3 animals (12.5%), two of free life and one of captivity, being these belonging to the same species (Leopardus pardalis). CMt was present in 12 felids (52.2%), 6 free life animals and 6 captive animals. All species of wild felids tested had at least one positive animal for this microorganism, with CMhm and CMt coinfection. This is the first report of the occurrence of CMt in Leopardus colocolo, Leopardus wiedii, Puma concolor, Panthera onca and Puma yagouaroundi. The mechanisms of transmission are still uncertain for these microorganisms. The study of wild feline populations may contribute actively to understanding the epidemiology of hemoplasmosis and the importance of these animals as reservoirs and could significantly affect human health and domestic and wild populations.

Molecular detection of hemotrophic mycoplasmas among domiciled and free-roaming cats in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, Brazil / Detecção molecular de micoplasmas hemotróficos em gatos domiciliados e errantes em Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, Brasil

Hemoplasmas are bacteria living in feline red blood cells. Feline hemoplasmosis is frequently associated with old male cats that have access to the streets. This study aimed to detect the presence of hemoplasma speciess in domiciled and free-roaming cats in Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul (MS), Brazil, using molecular techniques. Between January 2013 and April 2013, EDTA-whole blood samples were collected from 151 domestic cats (65 free-roaming and 86 domiciled cats). Samples were subjected to PCR assays targeting hemoplasmas 16S rRNA, followed by sequencing, BLAST analysis and phylogenetic analysis. Results show an occurrence of 36.4% for hemoplasmas. Twenty-three cats (15.2%) were positive for ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum, 17 (11.2%) for M. haemofelis and 15 (9.9%) for ‘Candidatus M. turicensis, from PCR. Coinfection by two or three hemoplasmas was found in 25 cats (16.6%). No statistically significant difference between genders or between lifestyles was observed for the presence of hemoplasmas among the cats. Results show different hemoplasma species are present in cat population (Campo Grande, MS, Brazil). It is suggested that a differential diagnosis for feline hemoplasmosis should be made when cats show nonspecific clinical signs of disease with systemic manifestation.

Hemoplasmas são bactérias encontradas aderidas aos eritrócitos de felinos. A hemoplasmose felina está frequentemente associada a gatos velhos machos, sem raça definida e com acesso à rua. O presente estudo objetivou realizar a detecção molecular de espécies de hemoplasmas em gatos domiciliados e errantes em Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul (MS), Brasil. Entre janeiro/2013 e abril/2013, amostras de sangue foram colhidas de 151 gatos domésticos (65 errantes e 86 domiciliados) e avaliadas por PCR frente à presença de sequências do gene do 16S rRNA de hemoplasmas, seguidas de sequenciamento, análise pelo BLAST e análise filogenética. Os resultados deste estudo mostraram uma ocorrência de 36,4%. Vinte e três (15,2%) gatos mostraram-se positivos na PCR para ‘Candidatus Mycoplasma haemominutum, 17 (11,2%) para Mycoplasma haemofelis, e 15 (9,9%) para ‘Candidatus Mycoplasma turicensis. A co-infecção por dois ou três hemoplasmas ocorreu em 25 gatos (16,6%). Não foi observada diferença estatística significativa entre sexo e estilo de vida dos gatos amostrados e a presença de hemoplasmas. O estudo mostrou que diferentes espécies de hemoplasmas circulam na população de gatos (domiciliados e errantes) na cidade de Campo Grande, MS, Brasil. Sugere-se o diagnóstico diferencial para hemoplasmose felina em gatos que apresentam sinais clínicos inespecíficos de doença com manifestação sistêmica.

Cytauxzoon felis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' coinfection in a brazilian domestic cat (Felis catus) / Co-infecção por Cytauxzoon felis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' em um gato doméstico (Felis catus) no Brasil

This article describes the first detection of Cytauxzoon felis, using molecular techniques, in a naturally infected domestic cat from Brazil, South America. Coinfection with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' was also found. The molecular identification of the piroplasmid species was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing analysis. A 284 pb fragment of the gene encoding the 18S ribosomal RNA region was amplified and showed 99% identity with other C. felis strains from North America. In addition, PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis, which amplifies a 595 bp fragment of the gene encoding 16S ribosomal RNA of some bacterial species, identified the co-infecting species as 'Candidatus M. haemominutum'.

Este artigo descreve a primeira detecção de Cytauxzoon felis em um gato doméstico naturalmente infectado no Brasil, América do Sul, através de técnicas moleculares. Também foi encontrada co-infecção com 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. A detecção molecular da espécie do piroplasmídeo foi realizada através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento. Um fragmento de 284 pb do gene codificador da região 18S do RNA ribossomal do parasito foi sequenciada e mostrou 99% de identidade com outros isolados de C. felis da América do Norte. Ademais, através da análise por meio de PCR-RFLP (Polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição), que amplifica um fragmento de 595 pb do gene codificador da porção 16 do RNA ribossomal de algumas espécies de bactérias, concluiu-se que a espécie com-infectante era 'Candidatus M. haemominutum'.

Cytauxzoon felis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' coinfection in a Brazilian domestic cat (Felis catus)

This article describes the first detection of Cytauxzoon felis, using molecular techniques, in a naturally infected domestic cat from Brazil, South America. Coinfection with 'CandidatusMycoplasma haemominutum' was also found. The molecular identification of the piroplasmid species was performed by Polymerase Chain Reaction (PCR) and sequencing analysis. A 284 pb fragment of the gene encoding the 18S ribosomal RNA region was amplified and showed 99% identity with other C. felis strains from North America. In addition, PCR-RFLP (restriction fragment length polymorphism) analysis, which amplifies a 595 bp fragment of the gene encoding 16S ribosomal RNA of some bacterial species, identified the co-infecting species as 'Candidatus M. haemominutum'.

Este artigo descreve a primeira detecção de Cytauxzoon felis em um gato doméstico naturalmente infectado no Brasil, América do Sul, através de técnicas moleculares. Também foi encontrada co-infecção com 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. A detecção molecular da espécie do piroplasmídeo foi realizada através da reação em cadeia pela polimerase (PCR) e sequenciamento. Um fragmento de 284 pb do gene codificador da região 18S do RNA ribossomal do parasito foi sequenciada e mostrou 99% de identidade com outros isolados de C. felis da América do Norte. Ademais, através da análise por meio de PCR-RFLP (Polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição), que amplifica um fragmento de 595 pb do gene codificador da porção 16 do RNA ribossomal de algumas espécies de bactérias, concluiu-se que a espécie com-infectante era 'Candidatus M. haemominutum'.