Resumo
Brachiaria spp. é a forragem tropical mais cultivada em vários países; no entanto, muitos relatos de doenças foram descritos em animais devido à toxicidade das saponinas esteroidais presentes na planta. Essas toxinas causam danos principalmente no fígado, que pode apresentar várias lesões histopatológicas, incluindo infiltrados de células de citoplasma espumoso, conhecidas como macrófagos espumosos (ME) e fibrose. A fibrose hepática ocorre principalmente após ativação das células estreladas hepáticas (CEHs) em miofibroblastos fibrogênicos. O objetivo deste estudo foi investigar a ativação de CEHs para verificar a possível associação entre macrófagos espumosos e fibrose hepática em bovinos mantidos em pastagem de Brachiaria. Fragmentos de fígado de bovinos alimentados com Brachiaria spp. foram coletados em um abatedouro e destes, 48 foram selecionados na análise histológica considerando a presença de infiltrados de macrófagos espumosos. As amostras foram divididas em 4 escores/grupos (12 animais por grupo), de acordo com a quantidade e tamanho dos infiltrados de macrófagos espumosos no parênquima hepático: 0= ausência de ME e lesões histológicas; 1= discreto; 2= moderado; 3= acentuado. As amostras foram submetidas à análise histopatológica (Hematoxilina e Eosina - HE; Tricrômico de Masson TM para avaliar a deposição de colágeno) e imuno-histoquímica (-SMA; CD163). A análise histopatológica revelou infiltrados inflamatórios mononucleares nos tratos portais e fibrose capsular discreta como as lesões mais frequentes. O TM exibiu fibrose discreta a moderada, geralmente envolvendo grupos de macrófagos espumosos, em regiões subcapsulares ou periportais. Houve diferença estatística significante entre os grupos de infiltrados de macrófagos espumosos e a porcentagem de fibrose (p= 0,001) e imunomarcação de CEHs (p= 0,002). Fígados com escore 3 apresentaram maior porcentagem de fibrose e ativação de CEHs quando comparado ao grupo 0, e houve correlação entre estas variáveis e os grupos/escores de macrófagos espumosos. A avaliação de CD163 não revelou alteração de marcação de células de Kupffer entre os grupos, porém revelou grande variação da expressão deste receptor entre os macrófagos espumosos. Não houve correlação entre a expressão de CD163 em macrófagos espumosos e a fibrose hepática. Este estudo conclui que uma quantidade maior de macrófagos espumosos pode estimular a fibrose hepática através da ativação de CEHs, sendo este achado concordante com a literatura que sugere injúria hepática crônica e fibrose em fígados de bovinos alimentados com Brachiaria spp. Os macrófagos espumosos associados à ingestão desta pastagem, apresentam ainda, variação evidente da expressão de CD163, sendo esta expressão maior em grupos com maior quantidade destas células.
Brachiaria spp. is the most cultivated tropical forage in several countries; however, many disease reports have been described in animals due to the toxicity of steroidal saponins present in the plant. These toxins cause damage mainly to the liver, which can present several histopathological lesions, including infiltrates of cells with foamy cytoplasm, known as foamy macrophages (FM), and fibrosis. Liver fibrosis occurs mainly after activation of hepatic stellate cells (HSCs) in fibrogenic myofibroblasts. The objective of this study was to investigate the activation of HSCs to verify the possible association between foamy macrophages and hepatic fibrosis in cattle kept in Brachiaria pasture. Liver fragments of cattle fed with Brachiaria spp. were collected in a slaughterhouse and from these, 48 were selected in histological analysis considering the presence/absence of foamy macrophage infiltrates. The samples were divided into 4 scores/groups (12 animals per group), according to the amount and size of foamy macrophage infiltrates in the liver parenchyma: 0 = absence of FM (and no histological lesions); 1= mild; 2= moderate; 3= intense. The samples were submitted to histopathological analysis (Hematoxylin and Eosin - HE; Masson's trichrome - MT to assess collagen deposition) and immunohistochemistry (-SMA; CD163). Histopathological analysis revealed mononuclear inflammatory infiltrates in the portal tracts and mild capsular fibrosis as the most frequent lesions. MT exhibited mild to moderate fibrosis, usually involving groups of foamy macrophages, in subcapsular or periportal regions. There was a significant statistical difference between the groups of foamy macrophage infiltrates and the percentage of fibrosis (p= 0.001) and immunostaining of HSCs (p= 0.002). Livers with score 3 showed a higher percentage of fibrosis and activation of HSCs when compared to group 0, and there was a correlation between these variables and the groups of foamy macrophages. The evaluation of CD163 did not reveal changes in the labeling of Kupffer cells between the groups, but it did reveal a great variation in the expression of this receptor between foamy macrophages. There was no correlation between CD163 expression in foamy macrophages and liver fibrosis. This study concludes that a larger amount of foamy macrophages can stimulate hepatic fibrosis through the activation of HSCs, which is consistent with the literature that suggests chronic liver injury and fibrosis in livers of cattle fed with Brachiaria spp. The foamy macrophages associated with the ingestion of this pasture, also presented an evident variation in the expression of CD163, being this expression superior in groups with a greater quantity of these cells.
Resumo
A inspeção da carcaça e órgãos nos abatedouros objetiva limitar o aproveitamento de produtos impróprios para consumo humano, protegendo a população contra doenças transmitidas pelos alimentos. O fígado é uma víscera nutritiva e bem aceita pelos consumidores, mas suas funções metabólicas o tornam susceptível a diversas lesões, fazendo com que seja condenado frequentemente na rotina de inspeção. Este estudo analisou fígados bovinos e relacionou as lesões macro e microscópicas com os sistemas de produção dos animais abatidos (sistemas intensivo, semi-intensivo e extensivo). Avaliou também a presença de lesão microscópica em fígados sem lesão macroscópica. Foram coletadas 450 amostras de fígado bovino dos diferentes sistemas de produção, as quais foram processadas para exame histológico. As alterações macroscópicas observadas nos fígados bovinos foram: fibrose capsular (32%), aderências/peri-hepatite (25,8%), teleangiectasia (24,4%), manchas pálidas ou amareladas (20,9%), hemorragia subcapsular (7,1%), abscessos (5,3%), granulomas (3,5%), congestão (1,8%) e cistos (0,9%). Os achados microscópicos foram: infiltrado inflamatório mononuclear (66,4%), macrófagos espumosos (40,9%), tumefação hepatocelular (30%), tumefação hepatocelularcentrolobular (22,7%), fibrose capsular (26,4%), degeneração gordurosa (15,1%), peri-hepatite (13,8%), necrose (13,5%), teleangiectasia (12,2%), abscessos (2,9%), granulomas (1,8%), congestão (16%), hemorragia subcapsular (4,6%), infiltrado inflamatório polimorfonuclear (2,5%), infiltrado inflamatório misto (8,7%), hiperplasia ductal (4,9%) e cistos (0,9%). As lesões que apresentaram relação com os sistemas de produção (P<0,05) foram: infiltrado inflamatório mononuclear, macrófagos espumosos e tumefação hepatocelular. Os fígados de bovinos criados em sistema intensivo apresentaram mais lesões macroscópicas e os fígados de bovinos criados em sistema extensivo apresentaram mais lesões microscópicas. Somente 19,5% dos fígados sem lesão macroscópica não apresentaram nenhum tipo de lesão microscópica. Conclui-se que o sistema de produção pode influenciar na ocorrência de algumas lesões hepáticas e que fígados sem lesão macroscópica, liberados para consumo humano, podem apresentar várias lesões microscópicas importantes.
The inspection of cattle carcasses and organs at slaughterhouses aims at limiting the use of products with abnormalities that makes them improper for human consumption, thereby protecting the public from food-borne diseases. The liver is a nutritious viscera and it is well accepted by consumers. However, its metabolic functions make it susceptible to various injuries, which often condemn it during inspections routine. This study evaluated bovine livers and linked the macro and microscopic lesions found to the beef cattle production systems (intensive, semi intensive and extensive). Also evaluated the presence of microscopic lesions on livers without macroscopic findings. Some 450 samples of beef liver were collected from various production systems and were processed for histological examination. Macroscopic changes observed on the samples were: capsular fibrosis (32%), adhesions/perihepatitis (25.8%), telangiectasia (24.4%), pale or yellowish spots (20.9%), subcapsular hemorrhage (7.1%), abscesses (5.3%), granulomas (3.5%), congestion (1.8%) and cysts (0.9%). Microscopic findings were mononuclear cell infiltration (66.4%), foamy macrophages (40.9%), hepatocellular swelling (30%), centrilobular swelling (22.7%), capsular fibrosis (26.4%), fatty degeneration (15.1%), perihepatitis (13.8%), necrosis (13.5%), telangiectasia (12.2%), abscesses (2.9%), granulomas (1.8%) congestion (16%), subcapsular hemorrhage (4.6%), polymorphonuclear inflammatory infiltrate (2.5%), mixed inflammatory infiltrate (8.7%), ductal hyperplasia (4.9%) and cysts (0.9%). Those injuries related to production systems (P<0.05) were: mononuclear cell infiltration, foamy macrophages and cellular swelling. The livers of bovines raised in extensive system present more macroscopic lesions and the livers of bovines raised in intensive system present more microscopic lesions. Only 19.5% of livers without macroscopic findings did not show histopathological lesions. This study concludes that beef cattle production systems can influence the occurrence of some liver lesions and that liver without macroscopic findings, released for human consumption may have several important microscopic lesions.