AVALIAÇÃO DOS EFEITOS DA OZONIOTERAPIA NA REGENERAÇÃO DE LESÕES DO NERVO CIÁTICO EM RATOS: REVISÃO SISTEMÁTICA

A lesão do nervo periférico é um problema comum que freqüentemente resulta em incapacidade. A dor neuropática é uma dor crônica devastadora causada por lesão primária ou disfunção, tanto periférica quanto no sistema nervoso central. A ozonioterapia foi desenvolvida e conhecida como uma abordagem alternativa e eficaz em certas circunstâncias clínicas. Promove regeneração nervosa periférica, aumentando os níveis de antioxidantes e diminuindo radicais livres oxidativos. A terapia com ozônio é considerada um método terapêutico alternativo, seguro e eficaz para o metabolismo do oxigênio, energia celular e defesa antioxidante. O objetivo deste estudo foi buscar evidências científicas sobre os efeitos da ozonioterapia na regeneração de lesões do nervo ciático em ratos, através de uma revisão sistemática. Foi realizada uma busca inicial nas bases secundárias que divulgam todas as revisões sistemáticas cadastradas, estando elas em andamento ou finalizadas. A busca foi realizada no período de setembro de 2019 a fevereiro de 2020, sendo atualizada nas bases de dados: LILACS, PUBMED (MEDLINE), WEB OF SCIENCE, COCHRANE LIBARY, BIREME, SCIELO. A partir da busca eletrônica nas bases de dados, foi encontrado um total de 140 estudos primários a partir do evento de interesse estudado na presente revisão, sendo 08 incluídos na revisão sistemática. Conclui-se que a ozonioterapia gera efeitos positivos na regeneração da lesão do nervo ciático em ratos, quando comparados a grupos controle ou a grupos em que foi utilizada associação de outros medicamentos.

Peripheral nerve injury is a common problem that often results in disability. Neuropathic pain is a devastating chronic pain caused by a primary injury or dysfunction, both peripheral and in the central nervous system. Ozone therapy has been developed and known as an alternative and effective approach in certain clinical circumstances. Ozone therapy promotes peripheral nerve regeneration, increasing the levels of antioxidants and decreasing oxidative free radicals. Ozone therapy is considered an alternative, safe and effective therapeutic method for oxygen metabolism, cellular energy and antioxidant defense. The aim of this study was to seek scientific evidence on the effects of ozone therapy on the regeneration of sciatic nerve injuries in rats, through a systematic review. An initial search was carried out on the secondary databases that disclose all registered systematic reviews, whether they are in progress or completed. The search was carried out from September 2019 to February 2020, being updated in the databases: LILACS, PUBMED (MEDLINE), WEB OF SCIENCE, COCHRANE LIBARY, BIREME, SCIELO. From the electronic search in the databases, a total of 140 primary studies were found based on the event of interest studied in the present review, of which 8 were included in the systematic review. It is concluded that ozone therapy generates positive effects in the regeneration of sciatic nerve damage in rats, when compared to control groups or the combination of other drugs.

INVESTIGAÇÃO IN VITRO E IN VIVO DO EFEITO REGENERATIVO NA MEDULA ESPINAL NA PRESENÇA DE FRAGMENTOS DO NERVO ISQUIÁTICO COM ADIÇÃO DOS ÓLEOS ESSENCIAIS DE Hyptis suaveolens (L.) Poit E Croton blanchetianus Baill

A medula espinal (ME) é afetada em casos de traumas diretos ou indiretos e alguns estudos apontam que os nervos periféricos induzem um ambiente propício para regeneração. Além disso, várias plantas medicinais possuem metabólitos secundários com atividades no Sistema Nervoso Central. Este estudo objetivou analisar o efeito regenerativo na ME in vitro e in vivo na presença de fragmentos do nervo isquiático (FGNI) com adição dos óleos essenciais (OES) de Hyptis suaveolens (HS) e Croton blanchetianus (CB). As plantas de HS e CB foram submetidas ao processo de hidrodestilação e a análise da composição química foi feita por cromatografia gasosa e espectrometria de massas. Para a avaliação da plasticidade na ME in vitro, células foram coletadas de ratos neonatos Wistar e cultivadas em 6 grupos: um controle (D-10) e os demais grupos com diferentes combinações de meio condicionado do nervo isquiático (MCNI) e os OES de HS e CB. A morfometria celular foi avaliada após 96 horas por microscopia de contraste de fases, sendo em seguida realizada a imunocitoquímica para GFAP, GAP-43, NeuN e a plasticidade analisada por Microscopia Eletronica de Varredura. Os grupos foram comparados estatisticamente através do teste de Tukey e Bonferroni (p<0,05). Assim, foi possível avaliar a aderência, o efeito plástico e trófico das células nos grupos cultivados em D-10 acrescidos dos OES, com alterações morfológicas mais visíveis quando comparados com os grupos controle. O OE de CB, especialmente, promoveu a manutenção da expansão das células, indicando sua ação na plasticidade das células da ME. Quanto à análise regenerativa na ME in vivo, foram utilizados 40 ratos Wistar e de 4 deles foi removido o nervo isquiático (NI). Os 36 animais restantes foram submetidos a uma transecção medular com 4 mm de espessura ao nível torácico baixo e divididos em 6 grupos (n=6): no grupo 1 foi inoculado 10l de solução salina (5%) (SS); no grupo 2 FGNI mais 10l de SS (SS + NI); no grupo 3 FGNI mais o OE de HS (HS + NI); no grupo 4 foi inoculado apenas o OE de HS; no grupo 5 FGNI mais o OE de CB (CB + NI) e no grupo 6 foi inoculado apenas o OE de CB. O desempenho dos membros posteriores foi avaliado por 12 semanas usando pontuação do comportamento motor (BBB) e o déficit funcional ligado ao comportamento da pontuação combinada (CBS) e os dados dos testes comportamentais dos grupos tratados foram comparados estatisticamente. Ocorreu recuperação dos movimentos dos membros posteriores dos animais pertencentes aos grupos com o FGNI e com os OES quando comparados ao grupo SS e SS + NI. Entretanto, nos grupos com o OE de CB ocorreram resultados mais significativos e superioridade frente aos grupos com o OE de HS. Portanto, a combinação de OES e nervos periféricos como o NI, in vitro e in vivo, proporcionou a plasticidade morfológica e a melhora da recuperação funcional da ME.

: The spinal cord (SC) is affected in cases of direct or indirect trauma and some studies indicate that the peripheral nerves induce an environment conducive to regeneration. In addition, several medicinal plants have secondary metabolites with activities in the central nervous system. This study aimed to analyze the regenerative effect on SC in vitro and in vivo in the presence of sciatic nerve fragments (SNFG) with the addition of essential oils (EOS) from Hyptis suaveolens (HS) and Croton blanchetianus (CB). The HS and CB plants were submitted to the hydrodistillation process and the analysis of the chemical composition of the EOS was perfomed by gas chromatography and mass spectrometry. For the evaluation of cellular plasticity on SC in vitro, the SC cells were collected from newborn Wistar rats, and then cultured in six groups: one control (D-10) and the others with different combinations of sciatic nerve conditioned medium (SNCM) and HS and CB EOS. Cell morphometry was evaluated after 96 hours by phase contrast microscopy, and then the immunocytochemistry was performed for GFAP, GAP-43, NeuN and plasticity was performed by scanning electron microscopy. The groups were statistically compared using the Tukey and Bonferroni tests (p <0.05). Thus, it was possible to evaluate the adherence, the plastic and trophic effect in groups cultured in D-10 plus EOS, with more visible morphological changes when compared to control groups. CB EO, especially, promoted the maintenance of cell expansion, indicating its action on the plasticity of SC cells. Regarding the regenerative analysis on SC in vivo, forty Wistar rats were used; sciatic nerve was removed from four animals, and thirty-six animals were submitted to a 4 mm thick medullary transection at the lower thoracic level; the animals were later separated in 6 groups (n=6): in group 1, 10l of saline solution (5%)(SS); in group 2, FGNS plus 10l of SS (SS + NS); in group 3, FGNS plus HS essential oil (EO) (HS + NS); in group 4, only HS EO; in group 5, FGNS plus CB EO (CB + NS) and in group 6, only CB EO (CB + NS) were inoculated. Posterior limb performance was assessed weekly for 12 weeks, using motor behavior score (BBB) and functional deficit associated with combined score behavior (CBS). Data from the behavioral tests of the treated groups were compared statistically. The different types of treatments allowed the recovery of the hind limbs movements of the animals of the FGNI and OES groups, and they showed a better recovery when compared to the SS and SS + NS groups. However, the groups with the EO of CB showed more significant results and superiority compared to the groups with the EO of HS. Therefore, the combination of OES and peripheral nerves such as NI, in vitro and in vivo, provided morphological plasticity and an improvement in the functional recovery of SC.

Avaliação clínica e histopatológica da cicatrização do nervo ciático de coelhos (Oryctolagus cuniculus) submetidos à neurotmese e neurorrafia periférica com duas técnicas, associado ao uso de implantes de quitosana.

Os processos traumáticos são de grande importância na medicina veterinária, sendo as maiores casuísticas de atendimentos na clínica cirúrgica de pequenos animais, e dentro desses traumas, o envolvimento de lesões ao sistema nervoso é de grande preocupação devido a sua integridade conectiva com todos os outros sistemas. As lesões aos nervos periféricos podem trazer danos irreparáveis e comprometimento grave de funções dos membros quando não corrigidas adequadamente, principalmente devido a sua limitada capacidade de reparação. A reparação nervosa é um desafio na medicina, devido a isso algumas áreas da biologia e engenharia de materiais vem trabalhando em conjunto, para desenvolver produtos que possam promover a reparação de tecidos de difícil cicatrização. O primeiro capítulo do presente trabalho teve como objetivo avaliar técnicas cirúrgicas utilizadas na reparação de nervo periférico, e no segundo capítulo foi comparada a associação de implante a base de quitosana com a técnica com melhor resultado. Foram estudados dez coelhos (Oryctolagus cuniculus da família Leporidae, linhagem Nova Zelândia), hígidos, com idade aproximada de doze meses e peso entre 2,0 kg e 3,5 kg, submetidos à secção total do nervo ciático. Foram realizadas avaliações clínico-neurológicas e histopatológicas para avaliar o retorno funcional do membro e a progressão da cicatrização nervosa.

Traumatic processes retain great importance in veterinary medicine, with the largest number of cases being attended at the surgical clinic of small animals; and within these processes the involvement of injuries to the nervous system is a great concern due to its connective integrity with all other systems. Peripheral nerve damage can cause irreparable damage and severe impairment of limb function when not properly corrected, mainly because of its limited repair capacity. Nerve repair is a challenge in medicine, and some areas of biology and engineering have been working together, such as materials engineering, to develop products that can promote difficult tissue repair. The first chapter of the present study aimed to evaluate surgical techniques used in the repair the peripheral nerve, in the second chapter the association of chitosan based implant with the best result technique was compared. Ten rabbits (Oryctolagus cuniculus of the Leporidae family, New Zealand line), healthy, aged approximately twelve months and weighing between 2.0 kg and 3.5 kg, submitted to the total sciatic nerve section were studied. Clinical- neurological and histopathological evaluations were performed to evaluate functional limb return and progression of nerve healing.

EFEITO DO TRANSPLANTE DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES NA REGENERAÇÃO DO NERVO PERIFÉRICO EM RATOS

As lesões de nervos periféricos por neurotmese apresentam resultados paradoxais na recuperação pela ausência na regeneração. Assim, manter o ambiente permissivo de crescimento no coto distal após a lesão é essencial, sendo as células de Schwann chaves neste processo. A terapia celular apresenta potencial para a regeneração nervosa, baseado na substituição celular e promoção do crescimento axonal. As células tronco mesenquimais multipotentes de tecido adiposo (CTMM-TA) são uma fonte promissora pela fácil obtenção, expansão in vitro e por apresentarem propriedades imunomoduladoras e antinflamatórias. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi comparar os efeitos do transplante de CTMM caninas e murinas em combinação com a técnica de tubulação com veia descelularizada, na regerenaração do nervo ciático em modelo experimental de neurotmese em ratos. Ratos Wistar submetidos a neurotmese do nervo ciático foram divididos em 5 grupos: Grupo controle (GC), Grupo denervado (GD), Grupo Transplante de Veia descelularizada (GV), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes caninas (GCTMMc), Grupo Veia + células tronco mesenquimais multipotentes murinas (GCTMMm). Após a marcação com nanocristais fluorescentes e viabilidade celular, 1 x 106 CTMM caninas e murinas foram injetadas depois da realização da lesão experimental por neurotmese com 10mm por tubulação com veia descelularizada nos grupos GCTMMc e GCTMMm, e solução tampão salina de Hank's (HBSS) no grupo veia (GV). Durante o período de 35 dias, o índice de funcionalidade do nervo ciático (IFNC) e a eletroneuromiografia (ENMG) foram realizadas para avaliar a recuperação funcional. Análises histológicas e imunohistoquímicas foram efetuadas para revelar a mielinização, a produção de fatores neurtróficos e a persistencia das CTMM. Observaram-se resultados positivos funcionais nos dias 27 e 35 no grupo tratado com GCTMMm. Os resultados eletrofisiológicos de latência (m/s) e amplitude (mV) no nervo ciático foram superiores nos grupos GCTMMc e GCTMMm. Na avaliação do número e a densidade de fibras nervosas, os grupos GCTMMm e GCTMMc, mostraram melhores resultados. Foi observado uma expressão significativamente alta de BDNF no grupo GCTMMc, associado com o incremento na expressão da proteína S-100 nos grupos GCTMMc e GCTMMm, comparado com o GD. Demonstrou-se, também, que as CTMM derivadas do tecido adiposo canino e murino apresentaram efeitos positivos na regeneração do nervo ciático após neurotmese em ratos.

The peripheral nerves injury by neurotmesis presents confusing results in the recovery by the lack of regeneration. Thus, it is essential to maintain a growth permissive microenvironment in the distal stump following injury for Schwann cells. The cell therapy has therapeutic potential for nerve regenertion, based on cell replacement and promotion of axonal growth. Adipose-derived multipotent mesenchymal stem cells (AdMSC) are a promising source for easy retrieval and expansion in vitro and have immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The objective of this study was to compare the effects of canine and murine MSC transplantation in combination with the tubulization of decellularized vein in sciatic nerve regeneration. Wistar rats were divided into 5 groups: control group (CG), denervated group (DG), decellularized vein transplantation group (VG), vein + canine MSC group (cMSC) and vein + murine MSC group (mMSC). After labeling with fluorescent nanocrystals and cell viability, 1 x 106 canine and murine MSC were injected after experimental injury for neurotmesis with 10mm and tubulization with decellularized vein in the cMSC and mMSC groups. During a period of 35 days the sciatic nerve functional index (SFI) and electroneuromyography (EMG) were performed to access functional recovery. Histological analysis and immunohistochemistry were performed to evaluate myelination, neurotrophic factor production and persistence of MSC. It was observed functional postive results at 27th and 35th days in the group treated with mMSC. The electrophysiologycal results of latency (m/s) and amplitude (mV) in the sciatic nerve, they were higher in groups cMSC and mMSC. In assessing the number and density of nerve fibers, mMSC and cMSC groups showed better results. It was observed a significantly higher BDNF expression than the cMSC group, associated with increased expression of S-100 protein in the cMSC and mMSC groups compared to the GD. Also, it has been shown that MSC canine and murine derived of adipose tissue (AdMSC) showed positive effects on the sciatic nerve regeneration in the rat model neurotmesis.

S100ß and fibroblast growth factor-2 are present in cultured Schwann cells and may exert paracrine actions on the peripheral nerve injury / S100ß e fator de crescimento de fibroblasto-2 estão presentes nas células de Schwann cultivadas e exercem ações parácrinas na lesão do nervo

PURPOSE: The neurotrophic factor fibroblast growth factor-2 (FGF-2, bFGF) and Ca++ binding protein S100ß are expressed by the Schwann cells of the peripheral nerves and by the satellite cells of the dorsal root ganglia (DRG). Recent studies have pointed out the importance of the molecules in the paracrine mechanisms related to neuronal maintenance and plasticity of lesioned motor and sensory peripheral neurons. Moreover, cultured Schwann cells have been employed experimentally in the treatment of central nervous system lesions, in special the spinal cord injury, a procedure that triggers an enhanced sensorymotor function. Those cells have been proposed to repair long gap nerve injury. METHODS: Here we used double labeling immunohistochemistry and Western blot to better characterize in vitro and in vivo the presence of the proteins in the Schwann cells and in the satellite cells of the DRG as well as their regulation in those cells after a crush of the rat sciatic nerve. RESULTS: FGF-2 and S100ß are present in the Schwann cells of the sciatic nerve and in the satellite cells of the DRG. S100ß positive satellite cells showed increased size of the axotomized DRG and possessed elevated amount of FGF-2 immunoreactivity. Reactive satellite cells with increased FGF-2 labeling formed a ring-like structure surrounding DRG neuronal cell bodies.Reactive S100ß positive Schwann cells of proximal stump of axotomized sciatic nerve also expressed higher amounts of FGF-2. CONCLUSION: Reactive peripheral glial cells synthesizing FGF-2 and S100ß may be important in wound repair and restorative events in the lesioned peripheral nerves.(AU)

OBJETIVO: O fator neurotrófico fator de crescimento de fibroblastos-2 (FGF-2, bFGF) e a proteína ligante de Ca++ S100ß são expressos pelas células de Schwann dos nervos e por células satélites do gânglio da raiz dorsal (GRD). Estudos recentes indicam a importância das moléculas nos mecanismos parácrinos relacionados à manutenção neuronal e à plasticidade de neurônios periféricos motores e sensoriais. Além disso, células de Schwann cultivadas têm sido empregadas experimentalmente no tratamento de lesões no sistema nervo central, especialmente na lesão da medula espinal, a qual mostrou uma melhora da função sensoriomotora. Estas células são ainda propostas no reparo do nervo lesado com perda de tecido. MÉTODOS: Usamos a dupla marcação imunohistoquímica e o Western blot para caracterizar melhor in vitro e in vivo a presença das proteínas nas células de Schwann e nas células satélites do GRD assim como sua regulação nessas células após a compressão do nervo ciático de ratos. RESULTADOS: FGF-2 e S100ß estão presentes nas células de Schwann do nervo ciático e nas células satélites do GRD. Células satélites do GRD axotomizado positivas para S100ß possuíam quantidade aumentada de imurreatividade da FGF-2. Células satélites reativas apresentando maior quantidade de FGF-2 formaram um anel ao redor dos corpos neuronais do GRD. Células de Schwann do coto proximal à axotomia do nervo ciático e positivas para S100ß também expressaram quantidades aumentadas de FGF-2. CONCLUSÃO: As células gliais periféricas ao sintetizar FGF-2 e S100ß podem ser importantes no reparo de cicatrização e em eventos restaurativos nas lesões do nervo.(AU)

Differential astroglial responses in the spinal cord of rats submitted to a sciatic nerve double crush treated with local injection of cultured Schwann cell suspension or lesioned spinal cord extract: implications on cell therapy for nerve repair / Respostas astrocitárias na medula espinal do rato submetido ao esmagamento duplo do nervo ciático e tratado com injeção local de suspensão de células de Schwann cultivadas ou de extrato de medula espinal lesada. Implicações na terapia celular para o reparo do nervo

PURPOSE: Reactive astrocytes are implicated in several mechanisms after central or peripheral nervous system lesion, including neuroprotection, neuronal sprouting, neurotransmission and neuropathic pain. Schwann cells (SC), a peripheral glia, also react after nerve lesion favoring wound/repair, fiber outgrowth and neuronal regeneration. We investigated herein whether cell therapy for repair of lesioned sciatic nerve may change the pattern of astroglial activation in the spinal cord ventral or dorsal horn of the rat. METHODS: Injections of a cultured SC suspension or a lesioned spinal cord homogenized extract were made in a reservoir promoted by a contiguous double crush of the rat sciatic nerve. Local injection of phosphate buffered saline (PBS) served as control. One week later, rats were euthanized and spinal cord astrocytes were labeled by immunohistochemistry and quantified by means of quantitative image analysis. RESULTS: In the ipsilateral ventral horn, slight astroglial activations were seen after PBS or SC injections, however, a substantial activation was achieved after cord extract injection in the sciatic nerve reservoir. Moreover, SC suspension and cord extract injections were able to promote astroglial reaction in the spinal cord dorsal horn bilaterally. Conclusion: Spinal cord astrocytes react according to repair processes of axotomized nerve, which may influence the functional outcome. The event should be considered during the neurosurgery strategies(AU)

OBJETIVO: Astrócitos reativos participam de vários mecanismos após lesões do sistema nervoso central e periférico, os quais incluem neuroproteção, brotamento neuronal, neurotransmissão e dor neuropática. As células de Schwann (CS), um tipo de glia periférica, também reagem com a lesão do nervo, podendo interferir com o reparo e cicatrização, crescimento de fibras e regeneração neuronais. Investigamos aqui a possibilidade da terapia celular para o reparo do nervo ciático poder alterar o padrão da ativação astrocitária nos cornos anterior e posterior da medula espinal do rato. MÉTODOS: Suspensão de CS cultivadas ou extrato homogeneizado de medula espinal lesada de rato foram inoculados num reservatório feito a partir de dois esmagamentos aplicados no nervo ciático do rato distantes 0,5mm entre si. Injeção local de salina tamponada serviu como controle. Os ratos foram mortos uma semana após e os astrócitos da medula espinal marcados por método imunohistoquímico e quantificados por análise de imagem. RESULTADOS: No corno anterior da medula, ipsilateral à lesão, ativação astrocitária leve foi vista após as injeções de tampão ou CS, entretanto, ativação celular intensa foi observada nesta região com a inoculação neural do extrato homogeneizado de tecido medular lesado. Adicionalmente, as inoculações de CS e de extrato homogeneizado de tecido medular promoveram forte reação astrocitária no corno dorsal da medula espinal, bilateralmente. CONCLUSÕES: Os astrócitos da medula espinal reagem em função do processo de reparo do nervo lesado, o que pode influenciar o resultado funcional esperado, algo que deve ser considerado durante o planejamento da estratégia neurocirúrgica(AU)

Caracterização de um modelo experimental de neuropatia em ratos diabéticos induzidos pela aloxana

One-hundred male norvegicus rats, approximately 3-months old, were randomly assigned to two experimental groups: Control Group (CG) included 50 non-diabetic control rats and Diabetic Group (DG) included 50 alloxan untreated-diabetic rats. Each group was further divided into 5 subgroups of 10 rats and sacrificed at 1, 3, 6, 9, and 12 months of follow-up, respectively. Clinical (body weight, water and food intake and urine output) and laboratory parameters (blood glucose, urinary glucose and insulin) were documented in all moments of evaluation. A segment of the sciatic nerve was taken from each animal in both groups for light and eletron microscopy. Significant clinical and laboratory changes (P 0.01), compatibles with severe diabetes, were observed in all animals of DG beginning at 4 th day after diabetes induction. There were no significant changes in the number of myelinic fibers and of glycogen granules in DG rats when compared with CG rats at 1, 3, and 6 months of follow-up. However, DG rats presented a significantly decreased number of myelinic fibers, with increase of the number of smaller myelinic fibers, when compared with CG rats (P 0.05) at 9 and 12 months of follow-up. Intra-axonal glycogen granules were also more evident in DG rats in these periods. No difference was observed between the two experimental groups in the number of unmyelinated fibers. There was also no structural difference in both groups in the intra-axonal and endoneural spaces, in the myelin sheath or in the Schwann cells all over the study.

Cem ratos norvégicus, machos, com aproximadamente 3 meses de idade foram distribuídos por sorteio em 2 grupos experimentais: Grupo Controle (GC): com 50 ratos sadios, não diabéticos e Grupo Diabético (GD): com 50 ratos diabéticos, induzidos pela aloxana, sem qualquer tratamento. Cada grupo foi dividido em 5 subgrupos com 10 ratos cada e sacrificados com 1, 3, 6, 9 e 12 meses de seguimento, respectivamente. Parâmetros clínicos (peso, ingestão hídrica e alimentar, e diurese) e laboratoriais (glicemia, glicose urinária e insulina) foram documentados em todos os momentos de avaliação. Um segmento do nervo ciático foi obtido de cada animal, em ambos os grupos, para estudo à MO. e ME. Alterações clínicas e laboratoriais significativas (P 0,01), compatíveis com diabetes grave, foram observadas em todos os animais do GD a partir do 4o dia após a indução. Ratos de ambos os grupos apresentaram alterações no número de fibras mielínicas e nos depósitos intraaxonais de glicogênio que não diferiram, estatisticamente, aos 1, 3 e 6 meses de seguimento. Entretanto, aos 9 e 12 meses, ratos do GD apresentaram diminuição significativa no número de fibras mielínicas, com aumento do número de fibras mielínicas de menor calibre, quando comparados com ratos do GC (P 0,05). Grânulos de glicogênio intraaxonais também foram mais acentuados em ratos do GD no 9o e 12o mês de seguimento. Não foram observadas diferenças na densidade de fibras amielínicas ou alterações ultraestruturais significativas entre os dois grupos, em relação aos espaços intraaxonais e endoneurais, bainhas de mielina e células de Schwann durante todo o estudo.

Partial epineural burying of nerve grafts with different sizes next to or distant from neurorrhaphys site: histological and electrophysiological studies in rat sciatic nerves

The aim of the present study was to compare and correlate histologically and electromyographically the effects of partial epineural burying of sural nerve segments in sectioned and sutured rat sciatic nerves. Sixty adult male Wistar rats were operated on 3 groups: Group 1, sural nerve graft, 9mm long, placed next to neurorrhaphy; Group 2, sural nerve graft, 9mm long, buryied 10mm distant from neurorrhaphy; Group 3, sural nerve graft, 18mm long, set next to neurorrhaphy. The morphological features were examined at light microscope after 3 months in 45 rats. The elements observed were: vascularization, vacuoles in nerve fibers, mastocytes and inflammatory infiltrate. The morphometry was made after 6 months in 15 rats from Group 1, 2 and 3, measuring external nerve fiber diameters and counting myelinated nerve fibers/mm². The electrophysiological study was perfomed after 6 months, registering maximum amplitude and frequency of EMG pontentials, at rest, in extensor digitorum longus muscle. Group 3 rats presented sciatic nerves better conserved morphologically and mean external nerve fiber diameters greater than those from Groups 1 and 2. There were no significant differences in density of nerve fibers/mm², and in the electrophysiological study in rats from Group 1, 2 and 3. The epineural burying of sural nerve grafts with greater length and placed next to the neurorrhaphys site had a significantly better regeneration of the histological features than the smaller ones distant from neurorrhaphy.

O objetivo foi comparar e correlacionar, histológica e eletromiograficamente, os efeitos do sepultamento parcial de segmentos de nervo sural em nervos ciáticos de rato, seccionados e suturados. Sessenta ratos adultos, da linhagem Wistar, foram operados em três Grupos: Grupo 1 , um segmento de nervo sural com 9mm. de comprimento colocado próximo à neurorrafia; Grupo 2 , um segmento de nervo sural com 9mm. de comprimento sepultado 10mm. distante da neurorrafia ; Grupo 3, um enxerto de nervo sural com 18mm. de comprimento, posicionado próximo à neurorrafia. Os pormenores histológicos foram examinados sob microscopia de luz em 45 ratos, 3 meses depois. Os elementos observados foram : vascularização, vacúolos nas fibras nervosas, mastócitos e infiltrado inflamatório. A morfometria foi realizada, após 6 meses, em 15 ratos dos Grupos 1, 2 e 3, medindo-se os diâmetros externos e contando-se as fibras nervosas mielinizadas por mm². O estudo eletrofisiológico foi feito após 6 meses, registrando a amplitude máxima e a freqüência dos potenciais eletromiográficos no músculo extensor longo dos dedos, em repouso. Os ratos do Grupo 3 apresentaram-se morfologicamente melhor conservados e com diâmetros de fibras maiores do que nos Grupos 1 e 2. Não houve diferença na densidade de fibras/mm² e no estudo eletrofisiológico entre os ratos dos Grupos 1 , 2 e 3. O sepultamento epineural de segmentos de nervo sural com maior comprimento e colocados próximos à neurorrafia apresentaram pormenores morfológicos de regeneração significantemente melhores do que os menores e posicionados distantes da sutura do nervo.

Avaliação de possíveis mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo do C-terminal da S100A9 murina sobre a dor neuropática experimental / Evaluation of possible mechanisms involved in the antinociceptive effect of the C-terminus of murine S100A9 on experimental neuropathic pain: an experimental approach

O peptídeo sintético idêntico ao C-terminal da proteína S100A9 murina (pS100A9m) possui efeito antinociceptivo em diferentes modelos de dor inflamatória aguda. No presente estudo, o efeito do pS100A9m foi avaliado sobre a dor neuropática induzida pela constrição crônica (CCI) do nervo ciático em ratos. Ainda, foram investigados os possíveis mecanismos envolvidos neste efeito. A nocicepção foi avaliada pelos testes de hiperalgesia, alodinia e dor espontânea. Os animais foram tratados com diferentes doses do pS100A9m pelas vias intraplantar, oral ou intratecal 14 dias após a CCI e a nocicepção avaliada após 1 hora. As três vias de administração bloquearam a hiperalgesia, a alodinia e a dor espontânea decorrentes da dor neuropática. A duração do efeito do pS100A9m varia de acordo com a via utilizada e com o fenômeno nociceptivo testado. Ainda, a injeção intraplantar do peptídeo, na pata contralateral à CCI, inibiu a hiperalgesia e a alodinia observadas após a constrição do nervo. Quando o pS100A9m foi administrado pela via intraplantar no 7° dia após a CCI, ele também induziu inibição da hiperalgesia inflamatória que é observada nesse período. Os prováveis mecanismos envolvidos no efeito antinociceptivo do pS100A9m foram investigados pela administração de antagonistas de receptores de serotonina, noradrenalina, GABA (A e B) e opióides. Os resultados obtidos demonstraram que apenas o antagonista de receptor GABAB reverteu completamente o efeito antinociceptivo do pS100A9m sobre a dor neuropática, detectada no 14º dia pós-cirúrgico. Além disso, foram avaliadas as expressões das proteínas Egr-1, Fos e TNFα na medula dos ratos submetidos à CCI e tratados com o peptídeo 7 ou 14 dias do procedimento cirúrgico. O aumento na expressão das proteínas Egr-1 e Fos foi evidenciado tanto no 7º como no 14º dia após a CCI, em animais que não receberam nenhum tratamento ou aqueles que foram tratados com o veículo do peptídeo. Por outro lado, o pS100A9m inibiu a expressão destas duas proteínas no lado ipsolateral à CCI no corno dorsal da medula espinhal dos animais. Com relação ao TNFα, apenas no 7º dia após a CCI foi detectado o aumento na expressão desta proteína. Ainda, foi neste período que o pS100A9m acarretou inibição da expressão do TNFα no corno ventral de animais submetidos ao procedimento cirúrgico. Estes resultados demonstram que o C-terminal da S100A9 murina inibe a dor neuropática experimental por uma ação dependente de receptores GABAB, sugerindo que este peptídeo possivelmente promova uma ativação dos mecanismos inibitórios espinhais, acarretando em redução da ativação de neurônios na medula. Desta forma, o pS100A9m demonstra um potencial terapêutico para o tratamento de dores persistentes

The synthetic peptide identical to the C-terminus of murine S100A9 protein (mS100A9p) has antinociceptive effect on different acute inflammatory pain models. In this study, the effect of mS100A9p was evaluated on neuropathic pain induced by chronic constriction injury (CCI) of the sciatic nerve in rats, and the possible mechanisms involved in this effect were investigated. Hyperalgesia, allodynia, and spontaneous pain were assessed to evaluate nociception. Rats were treated with different doses of mS100A9p by intraplantar, oral, or intrathecal routes on day 14 after CCI, and nociception was evaluated 1 hour later. These three routes of administration blocked hyperalgesia, allodynia and spontaneous pain. The duration of mS100A9p effect depends on the route used and the phenomenon analyzed. Moreover, intraplantar injection of mS100A9p in the contralateral paw inhibited the hyperalgesia and allodynia induced by CCI. When mS100A9p was administered by intraplantar route on day 7 after CCI, it reversed the inflammatory hyperalgesia observed in this period. The mechanisms likely involved in the antinociceptive effect of mS100A9p were investigated by administration of antagonists of serotonin, norepinephrine, GABA (A and B) and opioid receptors. Only the GABAB receptor antagonist completely reversed the antinociceptive effect of mS100A9p on neuropathic pain on day 14 after CCI. Besides, the expression of Egr-1, Fos and TNFα proteins was evaluated in the spinal cord of rats submitted to CCI and treated with mS100A9p on days 7 or 14 after CCI. The expression of Egr-1 and Fos was increased in animals not treated or treated with vehicle on days 7 and 14 after CCI. On the other hand, mS100A9p inhibited the expression of these two proteins in the dorsal horn of spinal cord ipsilateral to CCI. The increase in TNFα expression was observed exclusively on day 7 after CCI. In the same time period, mS100A9p nhibited the expression of TNFα in the ventral horn of spinal cord of animals submitted to CCI. The results obtained herein demonstrate that the C-terminus of murine S100A9 protein inhibits the experimental neuropathic pain by a GABAB-dependent action, suggesting that this peptide promotes the activation of spinal inhibitory mechanisms leading to the reduction of activation of spinal neurons. Therefore, mS100A9p demonstrates a potential therapeutic use in persistent pain syndromes