First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.(

A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.

First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

ABSTRACT: The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.

RESUMO: A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.

First report of nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in German Shepherds in Southern Brazil / Primeiro relato da mutação nt230(del4) no gene MDR1 em Pastores Alemães no Sul do Brasil

The P-glycoprotein (P-gp) is a transmembrane protein encoded by the MDR1 gene that functions as a biological barrier by extruding toxins and xenobiotics out of cells. The MDR1 gene can carry a mutation called nt230(del4), which is a deletion of four base pairs resulting in the formation of a non-functional protein that may predispose to severe toxicosis, as observed in dogs with sensitivity to ivermectin. Several breeds have been described as carriers of the mutation, including German Shepherds (GS). However, the presence of the mutant allele in this breed has not been described in Brazil. This study aimed to determine the genotypic and allelic frequency of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS from Southern Brazil. Blood samples were collected from 79 GS in the state of Rio Grande do Sul and genotype for the MDR1 gene was performed. Seventy-eight (98.7%) dogs were dominant homozygous genotype (wild) and one (1.3%) was heterozygous. This study showed that there is a low frequency (0.6%) of the mutant allele while the frequency of the wild allele is high (99.4%) in this specific population. This is the first report of the presence of the nt230(del4) mutation in the MDR1 gene in GS in Brazil. This information is important for breeders to prevent dissemination of the mutant allele in the national breeding population and international exchange of animals for breeding; for owners and veterinarians to be aware when dispensing and administering medications for GS dogs in Brazil.((AU)

A Glicoproteína-P é uma proteína transmembrana codificada pelo gene MDR1 que atua como uma barreira fisiológica através da extrusão de toxinas e xenobióticos para fora das células. O gene MDR1 pode carregar uma mutação chamada nt230(del4) que é uma deleção de quatro pares de bases, resultando na formação de uma proteína não-funcional que pode predispor à toxicoses graves, como as observadas em cães sensíveis à ivermectina. Diversas raças de cães foram descritas como portadoras da mutação nt230(del4), incluindo Pastores Alemães (PA). Entretanto, a presença do alelo mutante nessa raça não foi descrita em cães no Brasil. O objetivo desse estudo foi determinar a frequência genotípica e alélica da mutação nt230(del4) em PA no sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 79 PA no estado do Rio Grande do Sul e o genótipo dos cães para o gene MDR1 realizado. Setenta e oito (98.7%) cães foram homozigotos dominantes (selvagem) e um (1.3%) tinha genótipo heterozigoto. A frequência do alelo mutante foi baixa (0.6%), enquanto a frequência do alelo selvagem foi alta (99.4%) nesta população. Este é o primeiro relato da presença desta mutação nt230(del4) no gene MDR1 em PA no Brasil. Esta informação é importante para criadores a fim de prevenir a disseminação do alelo mutante na população de criadores da raça no Brasil e programas internacionais de troca de animais para criação, para tutores e veterinários estarem conscientes quando prescreverem e administrarem medicações para cães PA no Brasil.(AU)

P-glycoprotein and MRP1 expression in tissues from dogs with visceral leishmaniasis / Expressão da glicoproteína-P e MRP1 em tecidos de cães com leishmaniose visceral

P-Glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) are efflux pumps responsible for the MDR phenotype (multidrug resistance). In this work, we will investigate the immunohistochemical expression of P-gp and MRP1 in 24 tissue samples from dogs with Leishmania infantum (syn. L. chagasi) and evaluate whether canine visceral leishmaniasis (CVL) induces MDR in dogs. The expectation is that the results obtained from this research may offer prospects for a safer and more effective therapeutic approach for this disease. Findings illustrated that the expression of P-gp in CVL affected tissue samples (p<0.05) was greater than those of the control group, with the exception of skin tissue samples which did not differ. However, only the adrenal gland samples affected by LVC expressed significantly more MRP1 (p<0.05) than the control group. The expressions of P-gp and MRP1 were lower (p<0.05) in LVC positive spleen and skin samples in comparison with other tissues. These results suggest that the lack of a parasitological cure could be due to the high expression of P-gp and MRP1 in the liver, adrenal glands, and kidneys, which block the action of parasitacidal drugs recommended in treatment.

Glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1) são bombas de efluxo responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Neste trabalho, investigamos a expressão por imuno-histoquímica da gp-P e MRP1 em amostras de tecidos de 24 cães com Leishmania infantum (syn. L. chagasi), e avaliamos se a leishmaniose visceral canina (LVC) induz a MDR em cães, tendo a expectativa de que os resultados obtidos possam oferecer perspectivas de uma abordagem terapêutica mais segura e eficaz nesta doença. Os resultados mostraram que a expressão da gp-P nas amostras de cães com LVC foi maior (p<0,05) em todos os tecidos em comparação ao grupo controle, com exceção da pele, que não diferiu. Entretanto, apenas as glândulas adrenais nas amostras LVC, em comparação as controle, expressaram significativamente mais MRP1 (p<0,05). As expressões de gp-P e MRP1 foram menores (p<0,05) no baço e pele das amostras LVC positivas, em comparação aos demais tecidos. Os resultados sugerem que a falha da cura parasitológica poderia ser devido à alta expressão da gp-P e MRP1 no fígado, adrenal e rins, por impedir a ação parasiticida dos fármacos recomendados no tratamento.

P-glycoprotein and MRP1 expression in tissues from dogs with visceral leishmaniasis / Expressão da glicoproteína-P e MRP1 em tecidos de cães com leishmaniose visceral

P-Glycoprotein (P-gp) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) are efflux pumps responsible for the MDR phenotype (multidrug resistance). In this work, we will investigate the immunohistochemical expression of P-gp and MRP1 in 24 tissue samples from dogs with Leishmania infantum (syn. L. chagasi) and evaluate whether canine visceral leishmaniasis (CVL) induces MDR in dogs. The expectation is that the results obtained from this research may offer prospects for a safer and more effective therapeutic approach for this disease. Findings illustrated that the expression of P-gp in CVL affected tissue samples (p<0.05) was greater than those of the control group, with the exception of skin tissue samples which did not differ. However, only the adrenal gland samples affected by LVC expressed significantly more MRP1 (p<0.05) than the control group. The expressions of P-gp and MRP1 were lower (p<0.05) in LVC positive spleen and skin samples in comparison with other tissues. These results suggest that the lack of a parasitological cure could be due to the high expression of P-gp and MRP1 in the liver, adrenal glands, and kidneys, which block the action of parasitacidal drugs recommended in treatment.(AU)

Glicoproteína-P (gp-P) e proteína de resistência a múltiplas drogas (MRP1) são bombas de efluxo responsáveis pelo fenótipo MDR (resistência a múltiplas drogas). Neste trabalho, investigamos a expressão por imuno-histoquímica da gp-P e MRP1 em amostras de tecidos de 24 cães com Leishmania infantum (syn. L. chagasi), e avaliamos se a leishmaniose visceral canina (LVC) induz a MDR em cães, tendo a expectativa de que os resultados obtidos possam oferecer perspectivas de uma abordagem terapêutica mais segura e eficaz nesta doença. Os resultados mostraram que a expressão da gp-P nas amostras de cães com LVC foi maior (p<0,05) em todos os tecidos em comparação ao grupo controle, com exceção da pele, que não diferiu. Entretanto, apenas as glândulas adrenais nas amostras LVC, em comparação as controle, expressaram significativamente mais MRP1 (p<0,05). As expressões de gp-P e MRP1 foram menores (p<0,05) no baço e pele das amostras LVC positivas, em comparação aos demais tecidos. Os resultados sugerem que a falha da cura parasitológica poderia ser devido à alta expressão da gp-P e MRP1 no fígado, adrenal e rins, por impedir a ação parasiticida dos fármacos recomendados no tratamento.(AU)

Expression of P-glycoprotein, multidrug resistance-associated protein, glutathione-S-transferase pi and p53 in canine transmissible venereal tumor / Expressão da glicoproteína-P, proteína associada à múltiplas drogas, glutationa-S-transferase pi e p53 no tumor venéreo transmissível canino

The overexpression of proteins P-glycoprotein (P-gp), multidrug resistance-associated protein (MRP1), mutant p53, and the enzyme glutathione-S-transferase (GSTpi) are related to resistance to chemotherapy in neoplasms. This study evaluated the expression of these markers by immunohistochemistry in two groups of canine TVT, without history of prior chemotherapy (TVT1, n=9) and in TVTs presented unsatisfactory clinical response to vincristine sulfate (TVT2, n=5). The percentage of specimens positively stained for P-gp, MRP1, GSTpi and p53 were, respectively 88.8%, 0%, 44.5% and 22.2% in TVT1 and 80%, 0%, 80% and 0% in TVT2. In TVT1, one specimen presented positive expression for three markers and four specimens for two markers. In TVT2, three specimens expressed P-gp and GSTpi. In conclusion, the canine TVTs studied expressed the four markers evaluated, but just P-gp and GSTpi were significantly expressed, mainly at cytoplasm and cytoplasm and nuclei, respectively, either before chemotherapy as after vincristine sulfate exposure. Future studies are needed to demonstrate the function of these two markers in conferring multidrug resistance (MDR) or predict the response to chemotherapy in canine TVT.(AU)

A superexpressão das proteínas glicoproteína-P (Gp-P), proteína associada à resistência à múltiplas drogas 1 (MRP1) e p53 mutante e a enzima glutationa-S-transferase pi (GSTpi) está relacionada com resistência à quimioterapia em neoplasias humanas e caninas. Este estudo avaliou a expressão, por meio da imuno-histoquímica desses marcadores em espécimes de TVT caninos sem histórico de quimioterapia prévia (TVT1, n=9) e em TVT caninos que apresentaram resposta clínica insatisfatória ao sulfato de vincristina (TVT2, n=5). A porcentagem de espécimes positivos para Gp-P, MRP1, GSTpi e p53 foram, respectivamente 88,8%, 0%, 44,5% e 22,2% no grupo TVT1 e 80%, 0%, 80% e 0% no grupo TVT2. No TVT1, um espécime apresentou expressão positiva para três marcadores e quatro para dois marcadores. No TVT2, três espécimes expressaram a Gp-P e GSTpi. Em conclusão, os TVTs caninos estudados expressaram os quatro marcadores avaliados, no entanto apenas a Gp-P e GSTpi foram significativamente expressas, principalmente no citoplasmas e no citoplasma e no núcleo, respectivamente, tanto antes da quimioterapia quanto após à exposição ao sulfato de vincristina. Estudos futuros são necessários para demonstrar a função desses dois marcadores em conferir resistência à multiplas drogas (RMD) ou predizer a resposta a quimioterapia no TVT canino.(AU)

AVALIAÇÃO CITOTÓXICA DA MAMMEA A/BB EM LINHAGENS DE CÉLULAS DE GLIOMA

COSTA, I. B. Avaliação citotoxica da mammea A/BB em linhagens de células de glioma. 2019. 80 p. Dissertação (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. O glioblastoma é a forma mais agressiva dentre os gliomas os recursos terapêuticos disponíveis são limitados e envolvem ressecção cirúrgica, radioterapia e quimioterapia. Nesse ínterim, a busca por alternativas farmacológicas mais eficazes e menos agressivas coloca a mammea A/BB em análise. Esse metabólito vegetal é encontrado na casca das raízes da família botânica Calophyllaceae, do gênero Kielmeyera. Objetiva-se a partir da realização deste estudo avaliar o potencial citotóxico da mammea A/BB em células de glioblastoma humano U251 e de glioma de rato C6. A ação farmacológica da mammea A/BB foi testada em ambas linhagens, por meio dos ensaios de viabilidade celular por MTT, teste de migração, quantificação de cariopicnose e da expressão de glicoproteína-p. Analisou-se também o efeito da droga em células normais astrocitárias de rato e uma comparação da viabilidade celular entre a droga teste e o quimioterápico de primeira linha, a temozolomida. Os experimentos desenvolvidos indicaram que as linhagens U251 e C6 apresentaram, em todas as amostras analisadas, uma sensibilidade concentração dependente à mammea A/BB e resistência à temozolomida no intervalo de concentração de 2 M a 200 M. As concentrações de 27 ± 2,31M e 56,85 ± 14,17 M da mammea A/BB foram capazes de inibir a população celular em 50% nas linhagens U251 e C6, respectivamente, bem como o potencial migratório das referidas linhagens. A droga teste não apresenta ação citotóxica em células astrocitárias de rato. Foram encontrados núcleos picnóticos em maior quantidade no tratamento com a mammea A/BB quando comparado com as condições controle e DMSO. A mammea A/BB não apresentou diferença significativa na indução da expressão da glicoproteína P. Os resultados obtidos indicam uma ação farmacológica potencial na indução da citotoxicidade da droga nas tipologias celulares tumorais e não citotóxica nas células normais avaliadas.

COSTA, I. B. Cytotoxic evaluation of the mammea A/BB to glioma cells. 2019. 80 p. MSc Thesis (Mestre em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia, Salvador, 2019. Glioblastoma is the most aggressive form of gliomas and the available therapeutic resources are limited and involve surgical resection, radiotherapy and chemotherapy. The search for more effective and less aggressive pharmacological alternatives places mammea A/BB under analysis. This plant metabolite is found in the bark of roots of the botanical family Calophyllaceae, of the genus Kielmeyera. The objective of this study was to evaluate the cytotoxic potential of mammea A/BB in human glioblastoma U251 and C6 rat glioma cells. The pharmacological action of mammea A/BB was tested in both strains by cell viability assays by MTT, migration test, cariopnosis quantification and p-glycoprotein expression.The effect of the drug on normal murine astrocytic cells and a comparison of cell viability between the test drug and the first-line chemotherapy, temozolomide, were also analyzed. The experiments showed that the U251 and C6 cell lines had a concentration dependent sensitivity to mammae A/BB and resistance to temozolomide in the concentration range of 2 M to 200 M in all the analyzed samples. The concentrations of 27 ± 2.31 M and 56.85 ± 14.17 M of mammea A/BB were able to inhibit the cell population in 50% in the lines U251 and C6, respectively, as well as the migratory potential of these lines. The test drug shows no cytotoxic action on murine astrocyte cells. Pinocytic nuclei were found in greater quantity in the treatment with mammea A/BB when compared to the control and DMSO conditions. Mammea A/BB showed no significant difference in the induction of P-glycoprotein expression. The results indicate a potential pharmacological action in the induction of cytotoxicity of the drug in tumor cell types and non-cytotoxic in the normal cells evaluated.

Avaliação da associação vincristina-ivermectina no tratamento do tumor venéreo transmissível canino

O tumor venéreo transmissível (TVT) é uma doença neoplásica de células redondas que afeta principalmente o sistema genital de cães. A vincristina é considerada a droga de primeira escolha no tratamento, no entanto, nos últimos anos, vários casos de resistência foram relatados, bem como múltiplos efeitos colaterais causados por essa droga. Portanto, o uso de novos medicamentos ou novas combinações tem sido estudado, como a associação de vincristina e ivermectina (que é um fármaco que funciona como um inibidor da glicoproteína-P), buscando reduzir os efeitos colaterais da vincristina. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência da combinação de vincristina e ivermectina no tratamento de cães naturalmente infectados com TVT. Também avaliamos a duração do tratamento, o número de aplicações de quimioterapia e os efeitos colaterais causados por este protocolo quimioterápico. Quarenta e um cães naturalmente infectados pelo TVT foram tratados no HOSPMEV-UFBA durante um período de 19 meses. Dentro destes quarenta e um, realizamos um estudo experimental com vinte animais. Foram alocados dez cães em dois grupos, aleatoriamente: o grupo controle (G-Vin) (n = 10) foi tratado apenas com vincristina a cada sete dias na dose de 0,5 mg / m² IV, e o grupo experimental (G-Iv/Vin) (n = 10) foi tratado com vincristina em a mesma dosagem e intervalo, juntamente com ivermectina SC, em torno de 24-48 horas antes da administração de vincristina, a cada quinze dias. Todos os cães foram acompanhados semanalmente por exame clínico, hemograma completo e análise citológica até o desaparecimento do tumor. No G-Vin 3 (3/10) dos cães apresentavam tumor do tipo linfocitoide, 2 (2/10) apresentavam tumor do tipo misto e 5 (5/10) apresentavam tumor do tipo plasmocitoides; no G-Iv/Vin 1 (1/10) apresentou tumor tipo linfocitoide, 3 (3/10) do tipo misto e 6 (6/10) do tipo plasmocitóide. Não houve diferença entre o tempo do tratamento entre os dois grupos (p = 0,48) e as doses necessárias de vincristina para remissão total do tumor (p = 0,80). No entanto, em cães do G-Vin, houve uma queda significativa nos valores de leucócitos totais quando comparados antes e após o tratamento, o que não ocorreu com os cães do G-Iv/Vin. Concluímos que existem benefícios terapêuticos da associação da ivermectina à vincristina para o tratamento do TVT, uma vez que houve redução da citotoxicidade do protocolo com a associação dos dois fármacos, não comprometendo o sucesso do tratamento. Sugerimos novos estudos, com maior número de animais, avaliar diferença estatística entre os grupos.

The transmissible venereal tumor (TVT) is a round cells neoplastic disease that mostly affects the genital system of dogs. Vincristine is considered the first-line drug in the treatment, however in recent years, several cases of resistance have been reported, as well as multiple side-effects caused by this drug. Therefore, the use of new medications or new combinations have been studied, such as the association of vincristine and ivermectin (which is a drug that works as a P-glycoprotein inhibitor), seeking to reduce vincristine side-effects. The aim of this study was to evaluate the efficiency of the combination of vincristine and ivermectin in the treatment of dogs naturally infected with TVT. We also assessed, the treatment length, the number of chemotherapy applications and the side effects caused by this chemotherapy protocol. Forty-one dogs naturally infected by TVT were treated at HOSPMEV-UFBA during a 19-month period. Within these forty-one, we conducted an experimental study with twenty animals. We allocated ten dogs in two groups, randomly: the control group (G-Vin) (n=10) was treated only with vincristine every seven days at a dose of 0.5 mg / m² IV, whether the experimental group (G-Iv/Vin) (n=10) was treated with vincristine at the same dosage and interval along with ivermectin IM, around 24-48 hours prior to vincristine administration, every fifteen days. All dogs were followed weekly by clinical examination, complete blood count and cytological analysis until tumor disappearance. In the G-Vin 3 (3/10) dogs presented lymphocyte type tumor, 2 (2/10) presented mixed type tumor and 5 (5/10) presented plasmacytoid type tumor; in the G-Iv/Vin 1 (1/10) presented lymphocyte type tumor, 3 (3/10) of the mixed type and 6 (6/10) of the plasmacytoid type. There was no difference between treatment length between the two groups (p = 0.48) and the required doses of vincristine to total tumor remission (p = 0.80). However, in dogs from the G-Vin, there was a significant drop in total leukocyte values when comparing before and after the treatment, which did not occur with the dogs from the G-Iv/Vin. We concluded that there are therapeutic benefits of associating ivermectin with vincristine for TVT treatment, since there was a reduction of the cytotoxicity of the protocol with the association of the two drugs, not jeopardizing the success of the treatment. We suggest further studies, with a greater number of animals, evaluate statistical difference between groups.

BIOMARCADORES MOLECULARES PROGNÓSTICOS EM CADELAS COM NEOPLASIA MAMÁRIA: ESTUDO DOS GENES BRCA2, PGAM1 E ABCB1

O estudo comparativo de tumores mamários em cães e humanos é possível devido à similaridade compartilhada de processos biológicos e genética tumoral. Algumas proteínas, enzimas, RNAm e genes são utilizados como biomarcadores para diagnóstico precoce e para prognóstico do câncer. Assim, pesquisas de biomarcadores tumorais humanos com resultados promissores servem de base para o estudo de alvos moleculares em cães, visando a confirmação da importância destes biomarcadores também para o prognóstico na rotina clínica veterinária. Os genes BRCA2 e PGAM1 aparentam serem marcadores prognósticos promissores, assim como os genes ABCB1 e CBR1, marcadores terapêuticos de relevância para cadelas com neoplasias mamárias. O gene BRCA2 participa da manutenção da estabilidade do genoma, enquanto o gene PGAM1 atua na via glicolítica. O gene TP53 é sinalizado como regulador da via glicolítica atuando diretamente sobre o gene PGAM. O gene ABCB1 codifica a glicoproteína P (gp-P), associada a efeitos adversos e resistência a várias drogas, inclusive a quimioterápicos. Porém, além desta já conhecida característica, estudos também associam ABCB1 ao processo de carcinogênese. Outro gene associado à efeitos adversos ao tratamento é o CBR1, o qual codifica a enzima carbonil redutase 1, envolvida com a cardiotoxicidade associada ao quimioterápico doxorrubicina. O objetivo desse estudo é identificar mutações nos genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 e CBR1, assim como a expressão do RNAm de PGAM1 e TP53 em neoplasias mamárias de cadelas, correlacionando com dados clínicos dos animais e características histopatológicas do tumor. Foram estudados 100 tumores mamários de 57 cadelas cujas cadeias mamárias extirpadas foram divididas em três amostras: uma para análise histopatológica; outra para identificação de mutações nos genes BRCA2, PGAM1, ABCB1; e a terceira para avaliação da expressão de RNAm de PGAM1 e TP53. Além disso, coletou-se amostra de sangue total de cada cadela para identificação de mutações nos genes BRCA2 e CBR1 no DNA constitutivo do indivíduo. Identificou-se uma alta frequência (97,9%, n = 47/48) de mutações germinativas no éxon 11 do BRCA2 de cadelas com tumores mamários. Um total de sete polimorfismos foi encontrado, dentre os quais três teriam potencial para alterar a função proteica. Em relação a PGAM1, nossos achados sustentam que a p53 regula negativamente via glicolítica através da interação com PGAM1, tendo em vista que a maioria dos carcinomas mamários caninos estudados (71,5%; n = 15/21) apresentaram níveis reduzidos de RNAm de PGAM1 e níveis normais de RNAm do TP53. Em relação ao gene ABCB1, cães da raça poodle com tumores mamários apresentaram uma frequência significativamente maior dos polimorfismos c.985T>A e c.3442A>G nos éxons 9 e 26, respectivamente, quando comparados as demais raças analisadas, tendo um risco 10 vezes maior de apresentar as variações encontradas. Considerando que cães da raça poodle estão predispostos ao desenvolvimento de tumores mamários, pode-se hipotetizar que os polimorfismos detectados neste estudo poderiam aumentar o risco de desenvolvimento de neoplasias mamárias em cães. Não foram encontradas variantes na região codificante do gene CBR1 nos animais analisados.

The comparative study of mammary tumors between dogs and humans is possible due a shared similarity of biological processes and tumor genetics. Some proteins, enzymes, mRNA and genes are used as biomarkers for early diagnosis and prognosis of cancer. Thus, human tumor biomarkers with promising results serve as the basis for the study of molecular targets also for dogs, aiming to confirm the importance of these biomarkers for prognosis in veterinary clinical routine. The BRCA2 and PGAM1 genes appear to be promising prognostic markers, as well as the ABCB1 and CBR1 genes, therapeutic markers for bitches with breast neoplasms. The BRCA2 gene plays a role in maintaining the stability of the genome, while the PGAM1 gene acts in the glycolytic pathway. The TP53 gene is a regulator of glycolytic pathway acting directly on PGAM gene. The ABCB1 gene encodes the P glycoprotein, associated with adverse effects and resistance to various drugs, including chemotherapeutic agents. However, in addition to this well-known feature, studies also associate ABCB1 with the carcinogenesis process. Another gene associated with adverse effects is CBR1, which encodes the enzyme carbonyl reductase 1, involved with the individual cardiotoxicity associated with some drugs, among them the chemotherapeutic doxorubicin. The aim of this study was to identify mutations in the genes PGAM1, BRCA2, ABCB1 and CBR1, as well as the expression of PGAM1 and TP53 mRNA in canine mammary tumors, correlating with animal clinic data and histopathological characteristics of the tumor. A total of 100 mammary tumors were studied from 57 bitches whose extirpated mammary chains. Samples were divided: one for histopathological analysis; other for identification of mutations in BRCA2, PGAM1, ABCB1 genes; and a third for evaluation of PGAM1 mRNA expression. In addition, whole blood samples were collected from each dog for identification of mutations in the BRCA2 and CBR1 genes in constitutive DNA. A high frequency (97.9%, n = 47/48) of germinative mutations in BRCA2 exon 11 from bitches with mammary tumors was identified. A total of seven polymorphisms were found, among which three would have potential to alter protein function. Regarding PGAM1, our findings support that p53 negatively regulates glycolytic pathway through the interaction with PGAM1, considering that the majority of canine mammary carcinomas studied (71.5%, n = 15/21) had reduced PGAM1 mRNA levels and normal TP53 mRNA levels. In relation to ABCB1 gene, poodle dogs with mammary tumors presented a significantly higher frequency of c.985T> A and c.3442A> G polymorphisms in exons 9 and 26, respectively, when compared to the other breeds analyzed, with a 10 times to present the variations found. Considering that poodle dogs are predisposed to the development of mammary tumors, it can be hypothesized that the polymorphisms detected in this study could increase the risk of developing mammary neoplasias in dogs. No variants were found in CBR1 coding region in the animals analyzed.

Weak phenotypic reversion of ivermectin resistance in a field resistant isolate of Haemonchus contortus by verapamil / Reversão fenotípica da resistência a ivermectina em isolado de campo de Haemonchus contortus pelo verapamil

Recent advances in anthelmintic resistant phenotype reversion by Pgp modulating drugs in ruminant nematodes indicate that this can be a useful tool to helminth control. The aim of the present study was to evaluate the efficacy of ivermectin (IVM) in combination with verapamil (VRP), in oil or water-based vehicle, against an IVM-resistant field isolate of Haemonchus contortus through a larval migration assay and experimental infection trial. In the in vitro assay was observed a phenotypic reversion of H. contortus resistance to ivermectin at a high concentration of VRP, increasing IVM efficacy from 53.1 percent to 94.3. In the in vivo trial, IVM + VRP demonstrated 36.02 percent efficacy compared to the 7.75 percent of IVM alone. The vehicle formulation showed no influence in efficacy. These are the first results demonstrating the effect of VRP as a partial IVM-resistance phenotype reverser in a field isolate of IVM-resistant H. contortus experimentally inoculated in sheep.

Avanços recentes na reversão fenotípica da resistência anti-helmíntica por drogas moduladoras de Pgp em nematódeos de ruminantes indicam que esta pode ser uma ferramenta útil no controle de helmintos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da ivermectina (IVM), em combinação com o verapamil (VRP), em veículo oleoso ou à base de água, contra um isolado de campo de H. contortus resistente por meio de teste de migração de larvas e infecção experimental em ovinos. No teste in vitro, observou-se reversão fenotípica da resistência de Haemonchus contortus à ivermectina com alta concentração de VRP, aumentando a eficácia da IVM de 53,1 por cento para 94,3. No teste in vivo, IVM + VRP demonstrou 36,02 por cento de eficácia em relação a 7,75 por cento de IVM sozinha. O veículo da formulação não apresentou influência na eficácia. Estes são os primeiros resultados que demonstram o efeito da VRP como reversor parcial do fenótipo da resistência de IVM-fenótipo em um isolado de campo de H. contortus resistente, inoculado experimentalmente em ovinos.

Weak phenotypic reversion of ivermectin resistance in a field resistant isolate of Haemonchus contortus by verapamil / Reversão fenotípica da resistência a ivermectina em isolado de campo de Haemonchus contortus pelo verapamil

Recent advances in anthelmintic resistant phenotype reversion by Pgp modulating drugs in ruminant nematodes indicate that this can be a useful tool to helminth control. The aim of the present study was to evaluate the efficacy of ivermectin (IVM) in combination with verapamil (VRP), in oil or water-based vehicle, against an IVM-resistant field isolate of Haemonchus contortus through a larval migration assay and experimental infection trial. In the in vitro assay was observed a phenotypic reversion of H. contortus resistance to ivermectin at a high concentration of VRP, increasing IVM efficacy from 53.1 percent to 94.3. In the in vivo trial, IVM + VRP demonstrated 36.02 percent efficacy compared to the 7.75 percent of IVM alone. The vehicle formulation showed no influence in efficacy. These are the first results demonstrating the effect of VRP as a partial IVM-resistance phenotype reverser in a field isolate of IVM-resistant H. contortus experimentally inoculated in sheep.(AU)

Avanços recentes na reversão fenotípica da resistência anti-helmíntica por drogas moduladoras de Pgp em nematódeos de ruminantes indicam que esta pode ser uma ferramenta útil no controle de helmintos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da ivermectina (IVM), em combinação com o verapamil (VRP), em veículo oleoso ou à base de água, contra um isolado de campo de H. contortus resistente por meio de teste de migração de larvas e infecção experimental em ovinos. No teste in vitro, observou-se reversão fenotípica da resistência de Haemonchus contortus à ivermectina com alta concentração de VRP, aumentando a eficácia da IVM de 53,1 por cento para 94,3. No teste in vivo, IVM + VRP demonstrou 36,02 por cento de eficácia em relação a 7,75 por cento de IVM sozinha. O veículo da formulação não apresentou influência na eficácia. Estes são os primeiros resultados que demonstram o efeito da VRP como reversor parcial do fenótipo da resistência de IVM-fenótipo em um isolado de campo de H. contortus resistente, inoculado experimentalmente em ovinos.(AU)

O gene de resistência a múltiplas drogas (MDR1) e as implicações da mutação nt230 (De14) em cães / The multiple drug resistance gene (MDR1) and the mutation nt230 (De14) in dogs / Gen de resistencia a múltiples fármacos (MDR1) y las implicaciones de los mutación nt230 (De14) en perros

O gene MDR1 (Multi Drug Resistance 1), também conhecido como ABCB1, é responsável pela expressão de uma proteina transportadora de membrana, da superfamília ATB Binding Cassete (ABC) , denominada glicoproteína P (Gp-P). A Gp-P funciona como uma bomba de efluxo contra xenobióticos, protegendo o organismo da ação de determinados fármacos. Assim animais que apresentam mutação no gene MDR1, demostram sinais de intoxicação ao receberem drogas que sejam substratos para a Gp-P. Com o presente trabalho objetivou-se revisar sobre a mutação no gene de resistência a múltiplas drogas MDR1, tendo em vista sua grande prevalência descrita em diversas raças de cães.(AU)

The gene MDR1 (Multi-drug Resistance 1), also known as ABCB1 is responsible for the expression of a membrane carrier protein of the superfamily ATB Binding Cassete (ABC), called P-glycoprotein (P-gp). The P-gp functions as an efflux pump against xenobiotics, protecting the body from the action of certain drugs. Thus animais with mutationsin the MDR1 gene, demonstrate signs of intoxication when receiving drugs that works as substrates for P-gp. The present work aimed to review about the mutation in the gene for multidrug resistance MDR1, given its high prevalence reported in several breeds of dogs.(AU)

El gen MDR1 (resistencia a múltiples fármacos 1), también conocido como ABCB1, es responsable de la expresión de una proteína de transporte de membrana, superfamilia ATB Binding Cassete (ABC) , llamada P-glicoproteína (P-gp). Las funciones de la P-gp como una bomba de expulsión contra xenobióticos, protegiendo al organismo de la acción de ciertos medicamentos. Así, los animales con mutaciones en el gen MDR1, mostrar signos de intoxicación mientras recibe medicamentos que son sustratos de la P-gp. El presente trabajo tuvo como objetivo revisar la mutación en el gen de resistencia a múltiples fármacos MDR1, dada su alta prevalencia reportada en varias razas de perros.(AU)

O gene de resistência a múltiplas drogas (MDR1) e as implicações da mutação nt230 (De14) em cães / The multiple drug resistance gene (MDR1) and the mutation nt230 (De14) in dogs / Gen de resistencia a múltiples fármacos (MDR1) y las implicaciones de los mutación nt230 (De14) en perros

O gene MDR1 (Multi Drug Resistance 1), também conhecido como ABCB1, é responsável pela expressão de uma proteina transportadora de membrana, da superfamília ATB Binding Cassete (ABC) , denominada glicoproteína P (Gp-P). A Gp-P funciona como uma bomba de efluxo contra xenobióticos, protegendo o organismo da ação de determinados fármacos. Assim animais que apresentam mutação no gene MDR1, demostram sinais de intoxicação ao receberem drogas que sejam substratos para a Gp-P. Com o presente trabalho objetivou-se revisar sobre a mutação no gene de resistência a múltiplas drogas MDR1, tendo em vista sua grande prevalência descrita em diversas raças de cães.

The gene MDR1 (Multi-drug Resistance 1), also known as ABCB1 is responsible for the expression of a membrane carrier protein of the superfamily ATB Binding Cassete (ABC), called P-glycoprotein (P-gp). The P-gp functions as an efflux pump against xenobiotics, protecting the body from the action of certain drugs. Thus animais with mutationsin the MDR1 gene, demonstrate signs of intoxication when receiving drugs that works as substrates for P-gp. The present work aimed to review about the mutation in the gene for multidrug resistance MDR1, given its high prevalence reported in several breeds of dogs.

El gen MDR1 (resistencia a múltiples fármacos 1), también conocido como ABCB1, es responsable de la expresión de una proteína de transporte de membrana, superfamilia ATB Binding Cassete (ABC) , llamada P-glicoproteína (P-gp). Las funciones de la P-gp como una bomba de expulsión contra xenobióticos, protegiendo al organismo de la acción de ciertos medicamentos. Así, los animales con mutaciones en el gen MDR1, mostrar signos de intoxicación mientras recibe medicamentos que son sustratos de la P-gp. El presente trabajo tuvo como objetivo revisar la mutación en el gen de resistencia a múltiples fármacos MDR1, dada su alta prevalencia reportada en varias razas de perros.

Multi-drug resistance (MDR1) gene and P-glycoprotein influence on pharmacokinetic and pharmacodymanic of therapeutic drugs

(MDR1) gene expressed in tumor cells and also in several normal tissues, such as intestine, liver, kidney, blood-brain barrier, spinal cord, and placenta. P-gp has been identified in mice, rat, bovine, monkey, rodents, and human beings and has been receiving a particular clinical relevance because this protein expression limits brain access and intestinal absorption of many drugs. This protein plays a role as a protective barrier against a wide variety of substrates, avoiding drug entry into the central nervous system. P-glycoprotein also interferes with drug bioavailability and disposition, including absorption, distribution, metabolization, and excretion, influencing pharmacokinetic and pharmacodynamic of drugs. Modulation of P-gp may help the efficacy of treatment of several diseases and can explain some adverse central nervous system effects induced by drugs after intravenous administration and the poor response of oral administration in patients. Alteration in P-gp expression or function has been associated with several diseases susceptibility in humans and animals. Furthermore, additional studies relating MDR1 and P-gp expression has an important clinical implication also in terms of treatment efficacy.

P-glicoproteína (P-gp) é um transportador de membrana ligado ao gene de resistência múltipla (MDR1), expressado em células tumorais e também em tecidos normais como intestino, fígado, rins, membranas hematoencefálica, hemo-placentária e medula espinhal. A P-gp já foi identificada em camundongos, ratos, bovinos, macacos, roedores e seres humanos e tem ganhado relevância clínica particular em função de sua expressão limitar o acesso de drogas ao cérebro e interferir com a absorção intestinal quando administradas pela via oral. Esta proteína participa da função protetora do organismo contra uma grande variedade de substratos, evitando a entrada de drogas no sistema nervoso central. A P-gp interfere também com a biodisponibilidade dos fármacos, incluindo absorção, distribuição, metabolização e excreção, influenciando assim, a farmacocinética e dinâmica dos mesmos. Desta maneira, a modulação da P-gp pode explicar alguns efeitos adversos no sistema nervoso central, induzidos por alguns fármacos após administração intravenosa, e a pobre resposta após administração oral em pacientes. A alteração na expressão ou função da P-glicoproteína tem sido associada a uma maior susceptibilidade a diversas doenças em humanos e animais. Estudos adicionais relacionados à expressão e à função da P-gp espécie-específica têm implicação clínica importante em termos de eficiência de tratamento.

Multi-drug resistance (MDR1) gene and P-glycoprotein influence on pharmacokinetic and pharmacodymanic of therapeutic drugs

(MDR1) gene expressed in tumor cells and also in several normal tissues, such as intestine, liver, kidney, blood-brain barrier, spinal cord, and placenta. P-gp has been identified in mice, rat, bovine, monkey, rodents, and human beings and has been receiving a particular clinical relevance because this protein expression limits brain access and intestinal absorption of many drugs. This protein plays a role as a protective barrier against a wide variety of substrates, avoiding drug entry into the central nervous system. P-glycoprotein also interferes with drug bioavailability and disposition, including absorption, distribution, metabolization, and excretion, influencing pharmacokinetic and pharmacodynamic of drugs. Modulation of P-gp may help the efficacy of treatment of several diseases and can explain some adverse central nervous system effects induced by drugs after intravenous administration and the poor response of oral administration in patients. Alteration in P-gp expression or function has been associated with several diseases susceptibility in humans and animals. Furthermore, additional studies relating MDR1 and P-gp expression has an important clinical implication also in terms of treatment efficacy.

P-glicoproteína (P-gp) é um transportador de membrana ligado ao gene de resistência múltipla (MDR1), expressado em células tumorais e também em tecidos normais como intestino, fígado, rins, membranas hematoencefálica, hemo-placentária e medula espinhal. A P-gp já foi identificada em camundongos, ratos, bovinos, macacos, roedores e seres humanos e tem ganhado relevância clínica particular em função de sua expressão limitar o acesso de drogas ao cérebro e interferir com a absorção intestinal quando administradas pela via oral. Esta proteína participa da função protetora do organismo contra uma grande variedade de substratos, evitando a entrada de drogas no sistema nervoso central. A P-gp interfere também com a biodisponibilidade dos fármacos, incluindo absorção, distribuição, metabolização e excreção, influenciando assim, a farmacocinética e dinâmica dos mesmos. Desta maneira, a modulação da P-gp pode explicar alguns efeitos adversos no sistema nervoso central, induzidos por alguns fármacos após administração intravenosa, e a pobre resposta após administração oral em pacientes. A alteração na expressão ou função da P-glicoproteína tem sido associada a uma maior susceptibilidade a diversas doenças em humanos e animais. Estudos adicionais relacionados à expressão e à função da P-gp espécie-específica têm implicação clínica importante em termos de eficiência de tratamento.