Immune response dynamics of recent and chronic small ruminant lentivirus infection in the male reproductive system / Dinâmica da resposta imunológica da infecção recente e crônica por lentivírus de pequenos ruminantes no sistema reprodutor de machos

The objective of this study was to analyze the immune responses of bucks to small ruminant lentivirus (SRLV) with a focus on the reproductive system of males with recent and chronic infection. A total of 12 bucks were selected, six seronegative and six seropositive with chronic natural infection for more than 18 months (chronic infection group). After selecting the animals, the six seronegative males were intravenously inoculated with caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV)-Co viral strain at a titer of 10-5,6 TCID50/mL. After viral inoculation, this group was called the recent infection group and was monitored weekly with the chronically infected group for 180 days with blood serum and seminal plasma Western Blot (WB) analysis. Of the animals with chronic SRLV infection, 18.94% (50/264) showed anti-SRLV antibodies in at least one of the samples, and 81.06% (214/264) were negative. Anti-SRLV antibodies were detected in 27.27% (36/132) of the blood serum samples from this group, while 10.60% (14/132) were reactive in the seminal plasma WB test. The animals inoculated with CAEV-Co became seropositive after the third week of viral inoculation. In this group, 31.06% (41/132) of seminal plasma samples had anti-SRLV antibodies, and of these, 70.73% (29/41) coincided with blood serum results. Of the remaining 29.27% (12/41), the seminal plasma sample of only three animals (RIA2, RIA3, and RIA5) had anti-SRLV antibodies. One of the animals with a recent infection presented anti-SRLV antibodies only in seminal plasma samples, possibly due to virus compartmentalization. Intermittent viral shedding was observed in both biological samples, regardless of the infection stage. The immune response in bucks with recent SRLV infection is more significant than in chronically infected animals. Regardless of the stage of infection, there is a fluctuation in antibody levels, therefore, this creates a risk of false-negative samples when performing the diagnosis.

O objetivo desse estudo foi analisar a resposta imunológica aos lentivírus de pequenos ruminantes (LVPR) com enfoque no sistema reprodutor de machos com infecção recente e crônica. Para isso, foram selecionados 12 reprodutores caprinos, sendo seis soronegativos e seis soropositivos com infecção natural crônica há mais de 18 meses (grupo com infecção crônica). Após seleção dos animais, os seis machos soronegativos foram inoculados com a cepa viral do vírus da artrite encefalite caprina (CAEV)-Co, título 10-5,6 TCID50/mL, por via intravenosa. A partir da inoculação viral este agrupamento passou a ser denominado de grupo com infecção recente e juntamente com o grupo com infecção crônica foram acompanhados, semanalmente por 180 dias, com análise dos testes de Western Blot (WB) no soro sanguíneo e plasma seminal. Nos animais com infecção crônica para LVPR, 18,94% (50/264) apresentaram anticorpos anti-LVPR em pelo menos uma das distintas amostras, e 81,06% (214/264) tiveram resultados negativos. Das amostras de soro sanguíneo do referido grupo, em 27,27% (36/132) detectou-se anticorpos anti-LVPR, enquanto que no plasma seminal 10,60% (14/132) foram reagentes no teste de WB. Nos animais inoculados com o CAEV-Co, ocorreu a soroconversão após a terceira semana da inoculação viral. Nesse grupo, 31,06% (41/132) das amostras de plasma seminal tiveram anticorpos anti-LVPR, sendo que dessas 41, 70,73% (29/41) coincidiram com resultado das amostras de soro sanguíneo. Nos 29,27% (12/41) restante, houve a detecção somente no plasma seminal e eram amostras provenientes de três animais (AIR2, AIR3 e AIR5). Em um dos animais com infecção recente, só foi identificado anticorpos anti-LVPR em amostras de plasma seminal, possivelmente em função da compartimentalização do vírus. Intermitência viral foi observada em ambas as amostras biológicas, independentemente do estágio de infecção. Conclui-se que a resposta imunológica em reprodutores com infecção recente LVPR é mais acentuada do que em animais cronicamente infectados. E, independentemente do estágio da infecção há uma flutuação nos níveis de anticorpos, sendo, portanto, um fator de risco, em virtude da existência de amostras falso-negativo ao realizar o diagnóstico.

Serological evaluation of Neospora caninum in pregnant women treated at referral center for prenatal screening in Mato Grosso do Sul, Brazil / Avaliação sorológica de Neospora caninum em gestantes atendidas em centro de referência para triagem pré-natal em Mato Grosso do Sul, Brasil

Neospora caninum is an obligate intracellular protozoan with canids (Canis domesticus, Canis lupus dingo, Canis latrans, Canis lupus) as its definitive hosts. The objective of this study was to detect anti-N. caninum antibodies in pregnant women seen at referral center for prenatal screening in the state of state Mato Grosso do Sul, Brazil. A total of 188 serum samples from pregnant women provided by the Instituto de Pesquisa, Ensino e Diagnósticos da APAE de Campo Grande (IPED/ APAE) were subjected to IFA test and western blot analysis. The samples were divided into three groups: 23/99 samples from the seropositive group for toxoplasmosis were positive for anti-N. caninum IgG antibodies, and 9/99 positive for IgM; in the HIV group, 7/33 were positive for IgG; and in the HIV+toxoplasmosis group, 13/56 were positive for IgG and two positive for IgM. The seropositivity for IgG was assessed by western blot by testing 43 IFA test positive samples using rNcSRS2 (Nc-p43) as antigen. The serological results of the present study suggest that exposure of these pregnant women to the parasite N. caninum and presence of IgM antibodies are indicative of recent infection. Further studies are needed to establish the possibility of active infection.(AU)

Neospora caninum é um protozoário intracelular obrigatório que possui os canídeos (Canis domesticus, Canis lupus dingo, Canis latrans, Canis lupus) como seus hospedeiros definitivos. O objetivo deste trabalho foi detectar anticorpos anti-N. caninum em gestantes, atendidas em centro de referência para triagem pré-natal, em Mato Grosso do Sul, Brasil. Um total de 188 amostras de soro de gestantes, cedidas pelo Instituto de Pesquisa, Ensino e Diagnósticos da APAE de Campo Grande (IPED/ APAE), foram submetidas ao teste de RIFI e western blot para a detecção de anticorpos anti-N. caninum. As amostras foram divididas em três grupos: 23/99 amostras do grupo soropositivo para toxoplasmose demonstraram positividade para anticorpos IgG anti-N. caninum e 9/99 positivos para IgM. No grupo HIV 7/33 apresentaram positividade para IgG. No grupo HIV+Toxoplasmose 13/56 apresentaram positividade para IgG e duas para IgM. A soropositividade para IgG foi avaliada por western blot, testando 43 amostras positivas para RIFI, usando-se rNcSRS2 (Nc-p43) como antígeno. Os resultados sorológicos do presente estudo sugerem exposição dessas gestantes ao parasita N. caninum e a positividade para anticorpos IgM são indicativos de infecção recente. Mais estudos na área são necessários para estabelecer a possibilidade de infecção ativa.(AU)

Avaliação de um controle estratégico da artrite encefalite caprina em rebanho caprino leiteiro / Evaluation of strategic control of caprine arthritis- encephalitis in dairy herd goats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização periódica de testes de diagnóstico mais sensíveis aliados às práticas de manejo, visando ao controle eficaz da artrite encefalite caprina (CAE). Foram realizadas oito coletas de sangue em matrizes e reprodutores. Da primeira à sétima análise, as coletas foram quadrimestrais, utilizando-se os testes de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-i) e Western Blot (WB). A oitava coleta aconteceu seis meses após a sétima, utilizando-se o WB e a reação em cadeia de polimerase (PCR). A prevalência da CAE foi de 6,8%, 14,9% e 39,2% no IDGA, ELISA-i e WB, respectivamente. Na última análise, foram detectados 0,9% de animais positivos pelo WB e 10,8% pela PCR. Apesar de não erradicarem a CAE, as medidas adotadas, aliadas à utilização periódica dos testes sorológicos e à combinação com a PCR, foram importantes para reduzir significativamente os animais soropositivos no rebanho.(AU)

The aim of this study was to evaluate the periodic use of more sensitive diagnostic tests associated to management practices for the effective control of caprine arthritis-encephalitis (CAE). We carried out eight blood samples in does and bucks. From the first to the seventh analysis, the samples were quarterly, using Agarose Gel Immunodiffusion (AGID), Enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA) and Western Blot (WB) tests. The eighth collection was made six months after the seventh, using the WB and Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of CAE was 6.8%, 14.9% and 39.2% in the AGID, i-ELISA and WB respectively. The last analysis detected 0.9% of animals positive by WB and 10.8% by PCR. Although they do not eradicate CAE, steps taken together with the periodic use of serological tests and the combination with PCR were important to significantly reduce positive animals in the herd.(AU)

Avaliação de um controle estratégico da artrite encefalite caprina em rebanho caprino leiteiro / Evaluation of strategic control of caprine arthritis- encephalitis in dairy herd goats

O objetivo deste trabalho foi avaliar a utilização periódica de testes de diagnóstico mais sensíveis aliados às práticas de manejo, visando ao controle eficaz da artrite encefalite caprina (CAE). Foram realizadas oito coletas de sangue em matrizes e reprodutores. Da primeira à sétima análise, as coletas foram quadrimestrais, utilizando-se os testes de imunodifusão em gel de agarose (IDGA), ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-i) e Western Blot (WB). A oitava coleta aconteceu seis meses após a sétima, utilizando-se o WB e a reação em cadeia de polimerase (PCR). A prevalência da CAE foi de 6,8%, 14,9% e 39,2% no IDGA, ELISA-i e WB, respectivamente. Na última análise, foram detectados 0,9% de animais positivos pelo WB e 10,8% pela PCR. Apesar de não erradicarem a CAE, as medidas adotadas, aliadas à utilização periódica dos testes sorológicos e à combinação com a PCR, foram importantes para reduzir significativamente os animais soropositivos no rebanho.(AU)

The aim of this study was to evaluate the periodic use of more sensitive diagnostic tests associated to management practices for the effective control of caprine arthritis-encephalitis (CAE). We carried out eight blood samples in does and bucks. From the first to the seventh analysis, the samples were quarterly, using Agarose Gel Immunodiffusion (AGID), Enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA) and Western Blot (WB) tests. The eighth collection was made six months after the seventh, using the WB and Polymerase Chain Reaction (PCR). The prevalence of CAE was 6.8%, 14.9% and 39.2% in the AGID, i-ELISA and WB respectively. The last analysis detected 0.9% of animals positive by WB and 10.8% by PCR. Although they do not eradicate CAE, steps taken together with the periodic use of serological tests and the combination with PCR were important to significantly reduce positive animals in the herd.(AU)

Evaluation of caprine arthritis-encephalitis virus transmission in newborn goat kids / Estudo da transmissão do vírus da artrite-encefalite caprina em cabritos neonatos

Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.

A artrite encefalite caprina causa perdas consideráveis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.

Evaluation of caprine arthritis-encephalitis virus transmission in newborn goat kids / Estudo da transmissão do vírus da artrite-encefalite caprina em cabritos neonatos

Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.(AU)

A artrite encefalite caprina causa perdas consideráveis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.(AU)

Evaluation of caprine arthritis-encephalitis virus transmission in newborn goat kids / Estudo da transmissão do vírus da artrite-encefalite caprina em cabritos neonatos

Caprine arthritis encephalitis causes considerable losses in goat production. The main form of the caprine arthritis encephalitis virus transmission is through the ingestion of colostrum or milk from infected females. However, some transmissions cannot be explained in this manner. Therefore, this study aimed to evaluate transplacental transmission of caprine arthritis encephalitis virus. Blood samples were collected from 283 newborn kids of Anglo-Nubian and Saanen breeds born from seropositive and seronegative goats. Samples were collected immediately after birth and analyzed with agarose gel immunodiffusion and western blot. All samples were negative in the agarose gel immunodiffusion. However, the western blot test demonstrated that four kids were born positive for caprine arthritis encephalitis virus. This result indicates that although in a low frequency (1.4%), there is a possibility of transplacental transmission of small ruminant lentivirus.(AU)

A artrite encefalite caprina causa perdas consideráveis para a produção caprina. A principal forma de transmissão do vírus da artrite encefalite caprina é a ingestão de colostro ou leite de fêmeas infectadas. No entanto, algumas transmissões não podem ser explicadas por esta via. Dessa forma, este estudo teve como objetivo avaliar a transmissão do vírus da artrite encefalite caprina por via transplacentária (vertical). Foram realizadas coletas de sangue em 283 crias recém-nascidas das raças Anglo-Nubiana e Saanen, provenientes de progenitores soropositivos e soronegativos. As amostras foram coletadas logo após o nascimento e analisadas pelas técnicas de imunodifusão em gel de agarose e western blot. No teste de imunodifusão em gel de agarose, nenhum cabrito foi detectado reagente. Porém, no teste de western blot, quatro cabritos nasceram soropositivos. Esse resultado indica que, apesar de baixa frequência (1,4%), existe a possibilidade de transmissão via transplacentária do lentivírus de pequenos ruminantes.(AU)

Serosurvey of Borrelia in dogs, horses, and humans exposed to ticks in a rural settlement of southern Brazil / Soroprevalência e fatores associados a Borrelia em cães, equinos e humanos expostos a carrapatos em um assentamento rural do sul do Brasil

Abstract The aims of the present study were to serosurvey dogs, horses, and humans highly exposed to tick bites for anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies, identify tick species present, and determine risk factors associated with seropositivity in a rural settlement of Paraná State, southern Brazil. Eighty-seven residents were sampled, along with their 83 dogs and 18 horses, and individual questionnaires were administered. Immunofluorescence antibody test (IFAT) was performed on serum samples and positive samples were subjected to western blot (WB) analysis. Anti-B. burgdorferi antibodies were found in 4/87 (4.6%) humans, 26/83 (31.3%) dogs, and 7/18 (38.9%) horses by IFAT, with 4/4 humans also positive by WB. Ticks identified were mostly from dogs and included 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale, and 1/67 A. cajennense sensu lato. All (34/34) horse ticks were identified as A. cajennense s.l.. No significant association was found when age, gender, or presence of ticks was correlated to seropositivity to Borrelia sp. In conclusion, although anti-Borrelia antibodies have been found in dogs, horses and their owners from the rural settlement, the lack of isolation, molecular characterization, absence of competent vectors and the low specificity of the commercial WB kit used herein may have impaired risk factor analysis.(AU)

Resumo Os objetivos do presente estudo foram realizar um levantamento sorológico de cães, cavalos e humanos altamente expostos a picadas de carrapatos para anticorpos anti-B. burgdorferi s.l., identificar as espécies de carrapatos presentes, e determinar os fatores de risco associados a soropositividade em um assentamento rural do Estado do Paraná, sul do Brasil. Oitenta e sete residentes foram amostrados junto com seus respectivos 83 cães e 118 cavalos e questionários individuais foram aplicados. O teste de imunofluorescência indireta (IFI) foi realizado nas amostras sorológicas e as positivas foram submetidas a análise por western blot (WB). Anticorpos anti-B. burgdorferi foram detectados em 4/87 (4,6%) humanos, 26/83 (31,3%) cães e 7/18 (38,9%) cavalos pela IFI, com 4/4 humanos também positivos pelo WB. Os carrapatos identificados foram em sua maioria de cães e incluíram 45/67 Rhipicephalus sanguineus, 21/67 Amblyomma ovale e 1/67 A. cajennense sensu lato. Todos (34/34) carrapatos dos cavalos foram identificados como A. cajennense s.l.. Não foram observadas diferenças estatísticas entre idade, sexo ou presença de carrapatos e soropositividade para Borrelia sp. Em conclusão, embora anticorpos anti-Borrelia tenham sido encontrados em cães, equinos e seus proprietários do assentamento rural, a ausência de isolamento, caracterização molecular, ausência de vetores competentes e baixa especificidade do kit comercial de WB utilizado podem ter limitado a análise de fatores de risco.(AU)

First record of Borrelia burgdorferi sensu lato antibodies in stray dogs in the northwest region of Parana state, Brazil / Primeira detecção de anticorpos anti-Borrelia burgdorferi sensu lato em cães errantes da região noroeste do estado do Paraná, Brasil

The aim of this study was to determine the occurrence of B. burgdorferi sensu lato s.l. antibodies in stray dogs of the urban area of Umuarama Town, localized in the northwest region of Parana state, Brazil. Serum samples from 168 dogs were tested using indirect immunofluorescence assay (IFA) and Western Blot (WB) in order to detect anti-Borrelia burgdorferi s.l. antibodies. The IFI analysis was used as screening test and positive results were confirmed employing the WB technique. Sixty-five (38.69%) of 168 serum samples were positive in the IFI; 54 of them (83.07%) were confirmed by the WB. The overall data analysis confirmed the presence of anti-B. burgdorferi s.l. antibodies in 32.14% (54/168) dogs, what suggests that northwest region of Parana State may constitute a risk area for Lyme disease. Further studies are necessary to determine the epidemiological characteristics of this disease in the region studied.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de anticorpos anti-B. burgdorferi sensu lato sl em cães errantes da área urbana da cidade de Umuarama, localizado na região noroeste do estado do Paraná, Brasil. Amostras de soro de 168 cães foram testados utilizando imunofluorescência indireta (IFI) e Western Blot (WB), a fim de detectar anticorpos anti-Borrelia burgdorferi sl. A IFI foi utilizada como teste de triagem e os resultados positivos foram confirmados empregando a técnica de WB. Sessenta e cinco (38,69%) de 168 amostras de soro foram positivas na IFI; 54 deles (83,07%) foram confirmados pela WB. A análise geral dos dados confirmaram a presença de anticorpos anti-B. burgdorferi sl em 32,14% (54/168) dos cães, o que sugere que a região noroeste do Estado do Paraná, pode constituir uma área de risco para a doença de Lyme. Mais estudos são necessários para determinar as características epidemiológicas da doença na região estudada.(AU)

Indirect ELISA for diagnosis of Brucella ovis infection in rams / ELISA indireto para diagnóstico da infecção por Brucella ovis em carneiros

Brucella ovis is a major cause of epididymitis in sexually mature rams, resulting in subfertility, infertility, and economic losses for the sheep industry worldwide. The aim of this study was to develop an indirect ELISA (iELISA) using recombinant proteins, namely rBoP59 and rBP26, as antigens for serological diagnosis of B. ovis infection. The BoP59 and BP26 recombinant proteins were expressed in E. coli and purified by affinity chromatography. Antigenicity was tested by Western blot and iELISA. Standardization of iELISA was performed with 500ng and 1µg BoP59 and rBP26 per well, testing serum from uninfected and experimentally infected rams. rBP26 was effective in distinguishing positive from negative rams. The rBP26 iELISA developed in this study is the first to use a completely purified rBP26 as antigen resulting in high sensitivity (100%) and specificity (90.2%), and an overall accuracy equal to 1.0.(AU)

Brucella ovis é uma das principais causas de epididimite em carneiros sexualmente maduros, resultando em subfertilidade e infertilidade e consequentes perdas econômicas para a ovinocultura em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi desenvolver ELISA indireto (ELISAi), utilizando como antígeno proteínas recombinantes BoP59r e BP26r para diagnóstico da infecção por B. ovis. BoP59r e BP26r foram expressas em E. coli e purificadas por cromatografia de afinidade e a antigenicidade testada por Western blot e ELISAi. A padronização do ELISAi foi realizada testando 500 ng e 1 µg de BoP59r e BP26r por poço e soros de carneiros infectados e não infectados. A BP26r foi eficiente em diferenciar ovinos negativos de positivos. O ELISAi com BP26 desenvolvido neste estudo foi o primeiro a utilizar BP26 completamente purificada como antígeno, resultando em elevada sensibilidade (100%) e sensibilidade (90,2%), com acurácia igual a 1,0.(AU)

CARACTERIZAÇÃO DA FUNÇÃO DO IGF2BP-1 NO COMPORTAMENTO DO OSTEOSSARCOMA CANINO

A medicina comparativa torna-se cada vez mais importante para obtenção de estudos aprofundados em diversas áreas incluindo a oncologia, possibilitando melhor conhecimento da genética do câncer e desenvolvimentos de novas terapias. A expressão do IGF2BP-1 tem sido correlacionada com lesões pré-neoplásicas e neoplasias de maior agressividade, além de estar correlacionada com mau prognóstico em pacientes oncológicos com melanomas, sarcomas e carcinomas. A proposta geral desta pesquisa é identificar a expressão do IGF2BP-1 em linhagens celulares de osteossarcoma (OSA) canino e murino, bem como correlacionar sua expressão com o comportamento celular e avaliar a intensidade de marcação desta proteína através de imuno-histoquímica em amostras de OSA canino. Os resultados deste ensaio demonstraram que o IGF2BP-1 reduziu o potencial de formação de colônias, aumentou o potencial de invasão e migração celular e gerou aumento da expressão dos genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 e C-MYC em células de OSA murinho. A expressão deste gene em células de cão aumentou a formação de colônias, reduziu o potencial de invasão e migração celular e o silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou redução da expressão dos genes CCND1, CD133, CMYC e FZD6 em células de OSA canino. O silenciamento parcial do IGF2BP-1 gerou aumento dos genes AXIN-2 e VEGF em células de OSA canino. A imuno-histoquímica é um método eficaz para detecção do IGF2BP-1 em amostras de OSA canino evidenciando marcação citoplasmática forte na maioria das amostras, por meio de análise qualitativa. Com este estudo, podemos entender melhor a complexidade genética do câncer, concluindo que o IGF2BP-1 induz a modificações epigenéticas celulares levando a alterações indutoras ou supressoras tumorais através da ativação de diversas vias que contribuem para regulação do metabolismo celular, proliferação, angiogênese, quimiorresistência entre outras características que podem contribuir para o processo de tumorigênese.

Comparative medicine is becoming increasingly important to obtain studies in several areas including oncology, enabling better knowledge of cancer genetics and developments of new therapies. The expression of IGF2BP-1 has been correlated with pre-neoplastic lesions and neoplasms with more aggressiveness, in addition to being correlated with poor prognosis in cancer patients with melanomas, sarcomas and carcinomas. The general proposal of this research is to identify the expression of IGF2BP-1 in canine and murine osteosarcoma (OSA) cell lines, as well as to correlate its expression with cellular behavior to evaluate the staning intensity of this protein through immunohistochemistry in samples of canine OSA. The results of this assay demonstrated that IGF2BP-1 reduced the potential for colony formation, increased cell invasion and migration potential, and increased expression of genes ABCG2, AXIN2, BTrCP, VEGF, CD133 and C-MYC in murine OSA cells lines. Expression of this gene in canine OSA cells increased colony formation, reduced potential of cell invasion and migration, and partial silencing of IGF2BP-1 generated reduced expression of the CCND1, CD133, CMYC and FZD6 genes in canine OSA cells. Partial silencing of IGF2BP-1 generated increased AXIN-2 and VEGF genes in canine OSA cells. Immunohistochemistry is an effective method for detecting IGF2BP-1 in canine OSA samples showing strong cytoplasmic staining in most of samples through qualitative analysis. In this study, we can better understand the genetic complexity of cancer, concluding that IGF2BP-1 induces cellular epigenetic changes leading to tumor-inducing or suppressive changes through the activation of several pathways that contribute to the regulation of cellular metabolism, proliferation, angiogenesis, chemoresistance among other features that may contribute to the process of tumorigenesis.

Estudo comparativo do desempenho do imunodiagnóstico para a Leishmaniose Visceral (LV) canina por Western Blot utilizando antígenos de excreção e secreção de L. (L.) infantum chagasi frente às técnicas diagnósticas empregadas pelo Programa de Vigilância e Controle da LV no Estado de São Paulo

Nas Américas, os cães são incriminados como os principais reservatórios urbanos de Leishmania infantum chagasi, fazendo da Leishmaniose Visceral Canina (LVC), além de uma preocupação veterinária, um problema de Saúde Pública ainda sem solução, devido a sua proximidade com o ser humano. O cão infectado apresenta intenso parasitismo cutâneo tornando-se importante fonte de infecção para flebotomíneos vetores. Entre os primeiros trabalhos que mostraram a importância da utilização dos exoantígenos para o diagnóstico da leishmaniose visceral (LV), estão os trabalhos de Sergeiev e Shikuna (1969); Schnur e colaboradores (1972), que reportaram que os metabólitos dos promastigotas excretados ao meio de cultura são imunogênicos ao hospedeiro. No presente estudo objetivou-se desenvolver, padronizar e realizar o imunodiagnóstico para a LVC com a utilização exoantígenos (ES) de L. infantum chagasi por Western Blot. Posteriormente, comparar os resultados obtidos nessa metolologia com os resultados obtidos quando da realização das ações de vigilância e controle da LVC, pelas técnicas de ensaio imunoenzimático (ELISA), reação de imunofluorescência indireta (RIFI), esses três produzidos por Bio Manguinhos. FIOCRUZ, Rio de Janeiro, Brasil e no teste imunocromatográfico com antígeno rK39 IT Leish Diamed®. Foram examinadas 136 amostras de sangue coletadas de cães de áreas endêmicas para LVC no município de Bauru, São Paulo, Brasil. Na análise dos resultados verificou-se no diagnóstico pelo Western Blot com ES, que 20 amostras apresentaram alguma discordância com uma ou mais técnicas. Dentre as discordantes, uma amostra apresentou positividade 24 meses antes no Western Blot quando comparado com os testes sorológicos clássicos, o que nos chama a atenção para um possível marcador de fase precoce da infecção por L. infantum chagasi. No presente estudo tanto cães sintomáticos quanto os cães assintomáticos com exame parasitológico positivo apresentaram anticorpos contra as três bandas imunodominantes no imunoblotting (29, 30 e 31 kDa). Para a melhoria do diagnóstico da LVC, no que se referea técnica de western Blot aqui estudada, será necessária sua continuidade, com a inclusão de um número maior de amostras e animais; aprimoramento técnico na purificação de ES, além de avaliação de especificidade frente a outras patologias caninas.

In the Americas, the dogs are framed as the main urban reservoirs of L. infantum chagasi, making the Canine Visceral Leishmaniasis (CVL), plus a veterinary concern, a public health problem still unresolved, due to its proximity to the human being. The infected dog presents intense skin parasitism becoming an important source of infection for sandfly vectors. Among the first works that showed the importance of the use of exoantigens for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL), are the work of Sergeiev and Shikuna (1969); Schnur et al. (1972), which reported that the metabolites of promastigotes excreted to the medium are immunogenics to the host. The objective of this study was to comparatively evaluate the parameters of immunodiagnostic tests of exoantigens L. infantum chagasi in serological diagnosis of CVL with tests that use different antigens, standardize the ideal conditions of reactivity of exoantigens of L. infantum chagasi in the immunoassay of LVC for western blot, evaluate and compare the standardized methodology from the results obtained directly in ELISA assays , IIFA (Indirect Immunofluoresnce Assay), both manufacterd by BioManguinhos/Fiocruz, Rio de Janeiro, Brazil and rapid test rK39 antigen IT Leish Diamed®, made with canine serum samples collected in endemic area for LVC, during surveillance and control activities. Of 136 samples analysed by Western Blot test, 20 showed some disagreement with one or more serological tests. Among the discordant, a sample presented positivity 24 months before in the Western Blot when compared with the classic serological tests, which draws attention to a possible marker of early stage of infection with L. infantum chagasi.In this study both symptomatic dogs as asymptomatic dogs (parasitology positive) presented antibodies against the three dominant bands in immunoblotting (29, 30 and 31 kDa), additional studies must be carried out by increasing the number of samples analysed and for the improvement of this protocol, the evaluation of the specificity of other canine diseases, as well as the use of more sophisticated techniques for purification of antigen excretion and secretion can be important tools for improving standardized technique.

Produção de antígeno e separação da proteína p28 por microfiltragem seriada para sorodiagnóstico da artrite encefalite caprina por ensaio imunoenzimático / Production of antigen and p28 protein separation by microfiltration serial for serodiagnosis of caprine arthritis encephalitis by enzyme immunoassay

Este estudo teve como objetivo produzir um antígeno (Ag) a partir de cultura de células de membrana sinovial caprina (MSC) infectadas com o vírus de artrite encefalite caprina (CAEV), pela técnica de microfiltração seriada, substituindo a ultracentrifugação em colchão de sacarose (UCCS) para utilização em ELISA indireto (ELISA-i). Amostras de 188 soros caprinos, que previamente foram testados pelo Western blot (WB) com Ag UCCS, foram submetidas à análise pelo ELISA-i com o novo antígeno produzido, que mostrou concordância de 92% em relação ao antígeno UCCS. A sensibilidade e a especificidade do ELISA em relação ao WB foram de 95,6% e 88,5%, respectivamente. A nova técnica, criada a partir de microfiltrações, mostrou-se efetiva e de baixo custo para o diagnóstico sorológico de anticorpos para CAEV em comparação ao antígeno ultracentrifugado, e constitui uma alternativa viável para produção de antígeno purificado de lentivírus de pequenos ruminantes.(AU)

This study aimed to produce an antigen (Ag) from the culture of goat synovial membrane cells (MSC) infected by CAEV through serial microfiltering technique replacing ultra ultracentrifugation in sacarosis Mattress (UCCS) for the indirect diagnosis ELISA tests (i ELISA). Samples of 188 sera from goats previously examined by Western Blot (WB) with Ag UCCS were submitted to analysis by i ELISA with new antigen produced, demonstrating an accordance of 92% in relation to UCCS antigen. The specificity and sensitivity relating to WB were of 95,65% and 88, 5% respectively. The new technique created from the microfiltering is effective and with low cost for the serological antibodies diagnosis of CAEV comparing to the ultracentrifuged one, presenting, therefore, as a viable alternative for purified antigen of lentivirus in small ruminants.(AU)

Efeito da terapia com células tronco mesenquimais na proteinúria de cães com doença renal crônica

A proteinúria de origem renal é um indicador de lesão e atua na progressão da doença renal crônica em cães. Na rotina clínica, várias são as recomendações em relação à terapia de manutenção, que visam minimizar ou retardar a progressão da doença. Com o recente progresso na pesquisa sobre a terapia com as células tronco mesenquimais (CTM), tem-se discutido sobre a possibilidade de minimização dos mecanismos inflamatórios e imunológicos de autoperpetuação da lesão renal com a sua utilização, assim a análise sequencial das proteínas urinárias por métodos qualitativos, tais como a eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunodetecção das proteínas por Western Blot pode trazer subsídios para esta avaliação. Portanto, como hipótese, suscita-se que a administração de CTM em cães com DRC possa trazer benefícios com o intuito de minimizar o desenvolvimento da proteinúria, contribuindo para o retardo na velocidade de progressão da doença renal. Trata-se de um estudo prospectivo, longitudinal, duplo-cego e randomizado em que foram avaliados 22 cães com DRC, tratados com solução fisiológica (SF) ou CTM e avaliados a cada 30 a 45 dias em 12 momentos, divididos em grupos de acordo com o estágio da doença, grupo A (estágio 2, SF:n=6, CTM:n=3) e grupo B (estágio 3, SF:n=6, CTM:n=7). Observou-se que os cães do Grupo B apresentaram proteinúria mais intensa, maior porcentagem de proteínas de alto peso molecular, maior imunodetecção de albumina, proteínas ligadas ao retinol e a vitamina D e menor imunodetecção de proteína de Tamm-Horsfall ao longo do acompanhamento, quando comparado ao Grupo A. Os resultados obtidos nesse estudo, não permitiu definir conclusões contundentes de que a terapia com a CTM tenha trazido alterações importantes que indicasse o seu benefício. Os dados sugerem que os cães nos estágios iniciais da DRC (estágio 2) poderiam ser os mais favorecidos com a referida terapia, entretanto mais estudos contemplando um número maior de animais, como o maior tempo de acompanhamento devem ser conduzidos para tal investigação.

Protein of renal origin is an indicator of injury and acts on the progression of chronic kidney disease in dogs. In the clinical routine, several recommendations regarding maintenance therapy are aimed at minimizing or delaying the progression of the disease. With the recent progress in the research on mesenchymal stem cell therapy (CTM), it has been discussed the possibility of minimizing the inflammatory and immunological mechanisms of self-perpetuation of the renal lesion with its use, thus the sequential analysis of the urinary proteins by qualitative methods such as polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and the immunodetection of proteins by Western blot can prove the efficacy of the therapy. Therefore, as hypothesis, it is suggested that the administration of CTM in dogs with CKD can fetch benefits in order to minimize the development of proteinuria, contributing to the delay in the rate of progression of renal disease. This is a prospective, longitudinal, double-blind, randomized study in which 22 dogs with CKD were treated with physiological solution (SF) or CTM and evaluated every 30 to 45 days in 12 moments divided into groups according to (stage 2, SF: n = 6, CTM: n = 3) and group B (stage 3, SF: n = 6, CTM: n = 7). Group B dogs were found to have more intense proteinuria, a higher percentage of high molecular weight proteins, greater albumin immunodetection as well as retinol-binding protein and vitamin D-binding protein, and decreased Tamm-Horsfall protein immunodetection throughout follow-up, when compared to Group A. The results obtained in this study did not allow to draw conclusive conclusions that CTM therapy brought important changes that indicated its benefit. The data suggest that dogs in the early stages of CKD (stage 2) could be the most favored with such therapy, however more studies contemplating a larger number of animals, such as longer follow-up, should be conducted for such investigation.

EXPRESSÃO DAS PROTEÍNAS CALPAÍNA E CALPASTATINA E SUAS RELAÇÕES COM A QUALIDADE DA CARNE DE BOVINOS DA RAÇA NELORE (Bos indicus).

A atuação das enzimas proteolíticas durante o post-mortem é um dos principais fatores que determinam a qualidade da carne, sendo as enzimas calpaína e calpastatina uma das principais atuantes neste processo. O objetivo deste estudo foi avaliar a relação entre a expressão gênica dos genes CAPN1, CAPN2 e CAST, a quantificação das enzimas µ-calpaína, m-calpaína e calpastatina, dentro de grupos contrastantes para maciez e crescimento animal. Foram utilizados dados de 90 animais machos não castrados da raça Nelore, com idade aproximada de 24 meses, permanecendo em confinamento por 95 dias. Após o abate foram colhidas amostras do músculo Longissimus thoracis entre a 9ª e 13ª costelas, da meia-carcaça esquerda. As amostras coletadas foram utilizadas para medir a área de olho de lombo (AOL), espessura de gordura subcutânea (EGS), índice de marmorização (IM), perdas por cozimento, coloração instrumental da carne e força de cisalhamento (FC). A partir do restante da carne, foram coletadas alíquotas para a realização das análises de índice de fragmentação miofibrilar (MFI) e lipídeos totais (LT). Foram coletadas alíquotas para a análise da expressão gênica e quantificação das enzimas. Os dados de força de cisalhamento foram utilizados como critério para a separação em carne macia e dura. Também foram utilizadas o ganho de peso para a separação quanto ao crescimento animal. Os seguintes grupos foram formados: Leve (n=10), Pesado (n=10), Duro (n=10), Macio (n=10). As análises estatísticas foram realizadas utilizando-se o procedimento GLM e MIXED do programa SAS. No presente trabalho não foi encontrada diferença nas expressões dos genes CAPN1 e CAPN2 entre os grupos. Para o grupo contrastante para maciez também não foi encontrada diferença significativa (p<0,05 para a quantidade das enzimas µ e m-calpaína, e da calpastatina. Não foi encontrada correlação da quantidade das enzimas µ e m-calpaína, e calpastatina com as características PF e GP. Não foi encontrada diferença significativa (p<0,05) para o grupo contrastante para maciez da quantidade das enzimas µ e m-calpaína. Porém foi encontrada diferença significativa (p<0,05) para a quantidade da enzima calpastatina, onde os animais do grupo de carne dura apresentaram maiores valores em relação aos de carne macia. Além de apresentarem uma alta correlação entre a quantidade de calpastatina e as características FC (0) e FC (7) (r= 0,81 e 0,74, respectivamente). A diferença entre os grupos contrastantes e a alta correlação entre os níveis de calpastatina com as características de maciez demonstra a importância do sistema das calpainas na proteólise das miofibrilas, sendo os níveis de calpastatina um alvo potencial para a seleção de animais, com o objetivo de melhorar as características da qualidade da carne dos animais da raça Nelore

The role of proteolytic enzymes during the post-mortem is one of the main factors that determine the quality of the meat, and the enzymes calpain and calpastatin are one of the main factors in this process. The aim of this study was to evaluate the gene expression of the genes CAPN1, CAPN2 and CAST, and quantify the enzymes -calpain, m-calpain and calpastatin within contrasting groups animal growth, and thougness. 90 animals data were used uncastrated male Nellore, aged approximately 24 months remaining in confinement for 95 days. After slaughter were harvested Longissimus muscle samples thoracis between the 9th and 13th ribs, the left half-carcase. The samples were used to measure the ribeye area (REA), subcutaneous fat thickness (SFT), marbling index (MI), cooking loss, instrumental color of the meat and shear force (SF). From the rest of the meat, aliquots were collected to perform the myofibrillar fragmentation index analysis (MFI) and total lipids (TL). Were collected aliquots for the analysis of gene expression and quantification of enzymes. The data of shear force were used as criteria for the separation of tender and tough meat. The characteristics of weight gain for the separation on the animal growth were also used. The following groups were formed: lightweight (LW, n=10), Heavy (HV, n=10), tough meat (TO, n=10), tender meat (TE, n=10). Statistical analyzes were performed using the GLM and MIXED procedure of Statistical Analysis System program. In this study there was no difference in the expression of CAPN1 and CAPN2 genes between the groups. In this study there was no difference in the expressions of CAPN1 and CAPN2 genes between the groups. For the contrasting group for tenderness meat was also no significant difference (p <0.05) for the amount of enzymes and m-calpain, and calpastatin. There was no correlation between the amount of and m-calpain enzymes, and calpastatin with PF and GP. There was no significant difference (p <0.05) for the contrasting group for meat tenderness of the amount of enzyme and m-calpain. However, a significant difference (p <0.05) for the amount of enzyme calpastatin where animals of tough meat group had higher values on the tender meat. In addition to having a high correlation between the amount of characteristics calpastatin and SF (0) and SF (7) (r = 0.81 and 0.74, respectively). The difference between the contrasting groups and the high correlation between the calpastatin levels with tenderness characteristics demonstrates the importance of the system of calpains proteolysis of myofibrils, and the calpastatin levels of a potential target for the selection of animals for the purpose of improve the quality characteristics of the meat of Nellore.

Immunohistochemical and molecular expression of laminin-332 gamma-2 chain in canine mammary tumors / Expressão imunoistoquímica e molecular da laminina-332 cadeia gama-2 em tumores mamários de cadelas

Forty-eight cases of canine mammary cancer were investigated to evaluate the immunohistochemical distribution of the γ2 chain of laminin-332. Tumor cells were compared to a pool of normal mammary tissues using quantitative RT-PCR. The western blot was performed in eight tumor samples as complementary test to evaluate protein integrity. Immunohistochemistry experiments showed negative, focal, and weak expression of laminin-332 γ2 in tumors with the worst prognosis. Quantitative PCR revealed downregulation of the gene in 27 (56.2 percent) of the animals. Out of the 16 dogs with γ2 chain overexpression, seven were still alive. The western blot results showed bands generation of 36, 50, and 98kDa, suggesting degradation of laminin-332 γ2 in malignant tumors. The results suggest that, in the future, low expression and/or degradation of laminin-332 γ2 chain in canine mammary tumors may be used as an indicator of malignant potential. However, further studies are necessary to corroborate these results.(AU)

Para avaliar a expressão imunoistoquímica da cadeia γ 2 da laminina-332, foram investigados 48 casos de câncer mamário canino. Comparou-se, por RT-PCR, a expressão gênica nas células tumorais com um pool de tecido mamário. Como teste complementar, em oito amostras tumorais, realizou-se western blot para avaliar a integridade da proteína laminina-332 γ 2. A imunoistoquímica demonstrou expressão negativa, focal e fraca da laminina-332 γ 2 nos tumores com pior prognóstico. A RT-PCR quantitativa revelou a baixa expressão do gene em 27 (56,2 por cento) dos animais. Das 16 cadelas com superexpressão da cadeia γ 2, sete ainda estavam vivas no final do estudo. O resultado do western blot mostrou bandas de 36, 50 e 98kDa, sugerindo uma degradação da laminina-332 γ 2 em tumores malignos. Os resultados sugerem que, no futuro, a baixa expressão e/ou degradação da laminina-332 γ 2 nos tumores mamários caninos podem ser utilizadas como indicadores de potencial maligno. No entanto, mais estudos são necessários para confirmar estes resultados.(AU)

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate

Imunodetecção de antígenos de Escherichia coli em infecção experimental em aves / Imunodetection of Escherichia coli antigens in experimental infection in broiler flocks

A colibacilose é uma enfermidade importante na avicultura por causar prejuízos econômicos e danos à carcaça. Escherichia coli é um micro-organismo oportunista e a complexidade da infecção se deve a diversidade de sorotipos, variados fatores de virulência e baixa capacidade de estimular a imunidade cruzada. Assim, a compreensão dos mecanismos de virulência que ocorrem no hospedeiro, pode resultar no desenvolvimento de métodos diagnósticos e profiláticos. Neste estudo, 85 pintinhos foram divididos em quatro grupos, sendo três infectados com diferentes sorogrupos de Escherichia coli (O2, O78, O119) e um vacinado com Poulvac® E.coli (Pfizer®). As lesões sugestivas de colibacilose foram avaliadas e qualificadas aos 35 dias de idade, e em seguida realizada a colheita de sangue para a obtenção do soro. Foram obtidas proteínas in vitro dos sorogrupos de E. coli utilizados na infecção experimental e da vacina (mutante de Escherichia coli O78). Estas foram separadas por eletroforese unidimensional em gel de acrilamida utilizando dodecil sulfato de sódio (SDS) e foram submetidas a reação de western blot com a mistura de soros de cada grupo estudado e também com o pool de soros de aves livres de patógenos específicos (SPF), usadas como controle negativo. O perfil eletroforético revelou a presença de várias proteínas dos diferentes sorogrupos de E. coli quando cultivadas no meio casaminoácido e levedura. Houve diferenças entre os sorotipos, mas também proteínas comuns. Foi possível estabelecer uma relação entre virulência, quantidades de proteínas específicas e taxa de reisolamento (AU)

The colibacillosis is a serious disease in poultry industry to cause economic losses and damage to carcass. Escherichia coli is an opportunistic microorganism and the complexity of infection is due to the diversity of serotypes, several virulence factors and low ability to stimulate cross-immunity. Thus understanding of virulence mechanisms that occur in the host, may result in development of diagnostic and prophylactic methods. In this study, 85 chicks were divided into four groups being infected with three different serogroups of E. coli (O2, O78, O119) and vaccinated with Poulvac E. coli ® (Pfizer ®). The lesions suggestive of colibacillosis were evaluated at 35 days of age, and then the blood sample are collected to obtain the serum. Proteins were obtained in vitro from serogroups of E. coli used in experimental infection and vaccine (mutant of Escherichia coli O78). These were separated by one-dimensional electrophoresis on acrylamide gels using sodium dodecyl sulfate (SDS) and then reacted by western blot with the pool of sera from each group and also with the pool of sera from specific pathogen free poultry used as negative control. The electrophoretic pattern showed the presence of many proteins of different serogroups of E. coli when grown in the broth casaminoacid and yeast. There were differences among serotypes, but also common proteins. It was possible to establish a relationship between virulence and reisolation rate (AU)

Caracterização de Mycoplasma agalactiae isolados no Brasil e produção de vacinas contra agalaxia contagiosa

Mycoplasma agalactiae é o principal microrganismo causador da agalaxia contagiosa (AC), doença caracterizada por mastite seguida de agalaxia, poliartrite e ceratoconjuntivite. Em 2001, M. agalactiae foi isolado e identificado no Brasil, determinando grandes prejuízos econômicos. Considerando a necessidade de caracterização de amostras brasileiras de M. agalactiae e da implantação de medidas eficazes de controle, esse trabalho foi realizado em três etapas. O primeiro artigo descreve o perfil bioquímico e protéico de isolados de M. agalactiae de pequenos ruminantes através do cultivo em meio Hayflick modificado, testes bioquímicos e eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunogenicidade destas proteínas por Western Blot (WB). As amostras apresentaram similaridade no perfil protéico com bandas variando de 30 a 135 kDa no SDS-PAGE, além da presença de uma proteína imunodominante de 48 kDa no WB. Para dar continuidade a identificação do agente envolvido na AC no Brasil, o segundo artigo descreve a análise de dez sequências de M. agalactiae isolados de caprinos e ovinos. Um fragmento de DNA de 360 bp do gene 16S rRNA amplificado por PCR foi sequenciado. A análise revelou alto grau de similaridade, entre as dez sequências e uma similaridade maior que 99% com amostras de referência de M. agalactiae. No terceiro artigo, a eficiência de três vacinas inativadas, preparadas com amostra local de M. agalactiae e adsorvidas com três adjuvantes, foi avaliada em caprinos e ovinos. A resposta sorológica dos animais vacinados foi analisada através de um ELISA indireto. As três vacinas induziram produção de anticorpos, podendo ser utilizadas como uma alternativa para reduzir as perdas econômicas e prevenir a agalaxia contagiosa. Estes resultados confirmam a presença e disseminação do M. agalactiae no país e fortalece a possibilidade de controle da doença pela adoção da vacinação dos rebanhos.

Mycoplasma agalactiae is the main causative organism of contagious agalactia (CA), a disease characterized by mastitis followed by agalactia, polyarthritis, and keratoconjunctivitis. In 2001, M. agalactiae was isolated and identified in Brazil, causing great economic losses. Considering the need for characterization of Brazilian strains of M. agalactiae and implementation of effective control, this work was performed in three steps. The first article describes the biochemical and protein profile of isolates of M. agalactiae in small ruminants through the culture in modified Hayflick medium, biochemical tests, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunogenicity of these proteins by Western blot (WB). The samples had similar protein in the profile bands ranging from 30-135 kDa in SDS-PAGE, in addition the presence of a protein of 48 kDa immunodominant WB was shown. To continue identifying the agent involved in the AC in Brazil, the second article describes the analysis of ten sequences of M. agalactiae isolated from goats and sheeps. A DNA fragment of 360 bp of the 16S rRNA gene was amplified by PCR and sequenced. The analysis revealed a high degree of similarity among all the sequences. The study revealed greater than 99% similarity with the reference samples of M. agalactiae. In the third article, efficacy of three inactivated vaccines prepared with a local of M. agalactiae sample and adsorbed with three adjuvants was evaluated in goats and sheep. The antibody response in vaccinated animals was analyzed using an indirect ELISA. The three vaccines induced antibody production, and can be an alternative to reduce economic losses and prevent contagious agalactia. These results confirms the presence and spread of M. agalactiae in the country and enhances the possibility of controlling the disease through the adoption of livestock vaccination.

Caracterização de Mycoplasma agalactiae isolados no Brasil e produção de vacinas contra agalaxia contagiosa

Mycoplasma agalactiae é o principal microrganismo causador da agalaxia contagiosa (AC), doença caracterizada por mastite seguida de agalaxia, poliartrite e ceratoconjuntivite. Em 2001, M. agalactiae foi isolado e identificado no Brasil, determinando grandes prejuízos econômicos. Considerando a necessidade de caracterização de amostras brasileiras de M. agalactiae e da implantação de medidas eficazes de controle, esse trabalho foi realizado em três etapas. O primeiro artigo descreve o perfil bioquímico e protéico de isolados de M. agalactiae de pequenos ruminantes através do cultivo em meio Hayflick modificado, testes bioquímicos e eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) e a imunogenicidade destas proteínas por Western Blot (WB). As amostras apresentaram similaridade no perfil protéico com bandas variando de 30 a 135 kDa no SDS-PAGE, além da presença de uma proteína imunodominante de 48 kDa no WB. Para dar continuidade a identificação do agente envolvido na AC no Brasil, o segundo artigo descreve a análise de dez sequências de M. agalactiae isolados de caprinos e ovinos. Um fragmento de DNA de 360 bp do gene 16S rRNA amplificado por PCR foi sequenciado. A análise revelou alto grau de similaridade, entre as dez sequências e uma similaridade maior que 99% com amostras de referência de M. agalactiae. No terceiro artigo, a eficiência de três vacinas inativadas, preparadas com amostra local de M. agalactiae e adsorvidas com três adjuvantes, foi avaliada em caprinos e ovinos. A resposta sorológica dos animais vacinados foi analisada através de um ELISA indireto. As três vacinas induziram produção de anticorpos, podendo ser utilizadas como uma alternativa para reduzir as perdas econômicas e prevenir a agalaxia contagiosa. Estes resultados confirmam a presença e disseminação do M. agalactiae no país e fortalece a possibilidade de controle da doença pela adoção da vacinação dos rebanhos.(AU)

Mycoplasma agalactiae is the main causative organism of contagious agalactia (CA), a disease characterized by mastitis followed by agalactia, polyarthritis, and keratoconjunctivitis. In 2001, M. agalactiae was isolated and identified in Brazil, causing great economic losses. Considering the need for characterization of Brazilian strains of M. agalactiae and implementation of effective control, this work was performed in three steps. The first article describes the biochemical and protein profile of isolates of M. agalactiae in small ruminants through the culture in modified Hayflick medium, biochemical tests, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and immunogenicity of these proteins by Western blot (WB). The samples had similar protein in the profile bands ranging from 30-135 kDa in SDS-PAGE, in addition the presence of a protein of 48 kDa immunodominant WB was shown. To continue identifying the agent involved in the AC in Brazil, the second article describes the analysis of ten sequences of M. agalactiae isolated from goats and sheeps. A DNA fragment of 360 bp of the 16S rRNA gene was amplified by PCR and sequenced. The analysis revealed a high degree of similarity among all the sequences. The study revealed greater than 99% similarity with the reference samples of M. agalactiae. In the third article, efficacy of three inactivated vaccines prepared with a local of M. agalactiae sample and adsorbed with three adjuvants was evaluated in goats and sheep. The antibody response in vaccinated animals was analyzed using an indirect ELISA. The three vaccines induced antibody production, and can be an alternative to reduce economic losses and prevent contagious agalactia. These results confirms the presence and spread of M. agalactiae in the country and enhances the possibility of controlling the disease through the adoption of livestock vaccination.(AU)