Molecular detection of Toxoplasma gondii, Neospora caninum and Sarcocystis spp in tissues of Sus scrofa slaughtered in southern Brazil / Detecção molecular de Toxoplasma gondii, Neospora caninum e Sarcocystis spp. em tecidos de Sus scrofa abatidos no Sul do Brasil

The aim of this study was to determine the presence of deoxyribonucleic acid (DNA) from Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. and Neospora caninum, in tissues of wild boars slaughtered in southern Brazil. A total of 156 samples were collected from different organs of 25 wild boars, and DNA from at least one of the protozoa investigated was detected in 79 samples. To differentiate between infectious agents, restriction fragment length polymorphism was performed using the restriction enzymes DdeI and HpaII. For N. caninum, conventional PCR was performed with specific primers. The DNA of at least one of the studied pathogens was detected in each animal: 26.58% for T. gondii, 68.36% for Sarcocystis spp. and 5.06% for N. caninum. Coinfection between T. gondii and Sarcocystis spp. occurred in 14 animals, between T. gondii and N. caninum in only one male animal, between Sarcocystis spp. and N. caninum in a female, while co-infection with the three agents was equally observed in only one male animal. Considering the high frequency of detection and its zoonotic risk, especially T. gondii, it appears that wild boars can be potential sources of transmission of infectious agents and the adoption of monitoring measures in these populations should be prioritized.(AU)

O objetivo deste estudo foi determinar a presença de ácido desoxirribonucléico (DNA) de Toxoplasma gondii, Sarcocystis spp. e Neospora caninum, em tecidos de javalis abatidos no sul do Brasil. Foram coletadas 156 amostras de diferentes órgãos de 25 javalis, sendo detectado o DNA de pelo menos um dos protozoários pesquisados em 79 amostras. Para diferenciar entre os agentes infecciosos, o polimorfismo do comprimento do fragmento de restrição, foi realizado usando-se as enzimas de restrição DdeI e HpaII. Para N. caninum, a PCR convencional foi realizada com "primers" específicos. O DNA de pelo menos um dos patógenos estudados foi detectado em cada animal: 26,58% para T. gondii, 68,36% para Sarcocystis spp. e 5,06% para N. caninum. Coinfecção entre T. gondii e Sarcocystis spp. ocorreu em 14 animais; entre T. gondii e N. caninum em apenas um animal macho; entre Sarcocystis spp. e N. caninum em uma fêmea, enquanto a coinfecção com os três agentes foi observada igualmente em apenas um animal macho. Considerando-se a alta frequência de detecção e seu risco zoonótico, especialmente T. gondii, constata-se que os javalis podem ser potenciais fontes de transmissão de agentes infecciosos, e a adoção de medidas de monitoramento nessas populações devem ser priorizadas.(AU)

Sphaerospora festivus n. sp., a parasite of the flag cichlid, Mesonauta festivus (Teleostei: Cichlidae) from eastern Amazon, Brazil / Sphaerospora festivus n. sp., um parasito do ciclídeo bandeira, Mesonauta festivus (Teleostei: Cichlidae) da Amazônia oriental, Brasil

The present study describes a new species of the genus Sphaerospora found in the urinary bladder of the flag cichlid, Mesonauta festivus collected in Corre Água district of the municipality of Macapá, Amapá State (Brazil). The study includes morphological and phylogenetic analyses of the new parasite, to determine the relationship of the new species with related myxosporean species. The new species has polysporous plasmodia, which vary in size and shape. The mature myxospores are subspherical shape in valvar view. In the sutural view, the myxospores are 5.3±0.2 (5.2-5.6) μm in length and 7.0±0.7 (6.3-7.7) μm in width, with two piriform polar capsules equal size, 2.5±0.2 (2.3-2.8) μm in length and 1.8±0.2 (1.6-2.0) μm in width. The phylogenetic analyses of a partial sequence of the 18S rRNA gene confirmed the status of the new species and determined the relationship of the new species and related myxosporean species.The sum of the evidence indicates that, Sphaerospora festivus n. sp. belongs to the family Sphaerosporidae, and is the first record of the genus Sphaerospora from Brazil.(AU)

O presente estudo tem como objetivo descrever uma nova espécie de Sphaerospora encontrado na bexiga urinária de Mesonauta festivus, coletado no distrito Corre Água, no município de Macapá, estado do Amapá (Brasil). Foram realizadas análises morfométricas e filogenéticas, nas quais se avaliou a relação entre as espécies de mixosporídeos já descritas. A nova espécie possui plasmódio poliespórico, que varia em tamanho e forma. Os esporos maduros são subesféricos. Na visão sutural, apresentam 5,3 ± 0,2 (5,2-5,6) μm de comprimento e 7,0 ± 0,7 (6,3-7,7) μm de largura, com duas cápsulas polares piriformes de tamanhos iguais, 2,5 ± 0,2 (2,3-2,8) μm de comprimento e 1,8 ± 0,2 (1,6-2,0) μm de largura. As análises filogenéticas das sequências parciais do gene 18S rDNA confirmam ser uma nova espécie e determinou a relação desta com outros myxozoários já relatados. Conclui-se que a espécie em estudo pertence à família Sphaerosporidae, gênero Sphaerospora, e nova espécie, Sphaerospora festivus n. sp. e primeira ocorrência de parasitos desse gênero no Brasil.(AU)

Sphaerospora festivus n. sp., a parasite of the flag cichlid, Mesonauta festivus (Teleostei: Cichlidae) from eastern Amazon, Brazil / Sphaerospora festivus n. sp., um parasito do ciclídeo bandeira, Mesonauta festivus (Teleostei: Cichlidae) da Amazônia oriental, Brasil

Abstract The present study describes a new species of the genus Sphaerospora found in the urinary bladder of the flag cichlid, Mesonauta festivus collected in Corre Água district of the municipality of Macapá, Amapá State (Brazil). The study includes morphological and phylogenetic analyses of the new parasite, to determine the relationship of the new species with related myxosporean species. The new species has polysporous plasmodia, which vary in size and shape. The mature myxospores are subspherical shape in valvar view. In the sutural view, the myxospores are 5.3±0.2 (5.2-5.6) μm in length and 7.0±0.7 (6.3-7.7) μm in width, with two piriform polar capsules equal size, 2.5±0.2 (2.3-2.8) μm in length and 1.8±0.2 (1.6-2.0) μm in width. The phylogenetic analyses of a partial sequence of the 18S rRNA gene confirmed the status of the new species and determined the relationship of the new species and related myxosporean species.The sum of the evidence indicates that, Sphaerospora festivus n. sp. belongs to the family Sphaerosporidae, and is the first record of the genus Sphaerospora from Brazil.

Resumo O presente estudo tem como objetivo descrever uma nova espécie de Sphaerospora encontrado na bexiga urinária de Mesonauta festivus, coletado no distrito Corre Água, no município de Macapá, estado do Amapá (Brasil). Foram realizadas análises morfométricas e filogenéticas, nas quais se avaliou a relação entre as espécies de mixosporídeos já descritas. A nova espécie possui plasmódio poliespórico, que varia em tamanho e forma. Os esporos maduros são subesféricos. Na visão sutural, apresentam 5,3 ± 0,2 (5,2-5,6) μm de comprimento e 7,0 ± 0,7 (6,3-7,7) μm de largura, com duas cápsulas polares piriformes de tamanhos iguais, 2,5 ± 0,2 (2,3-2,8) μm de comprimento e 1,8 ± 0,2 (1,6-2,0) μm de largura. As análises filogenéticas das sequências parciais do gene 18S rDNA confirmam ser uma nova espécie e determinou a relação desta com outros myxozoários já relatados. Conclui-se que a espécie em estudo pertence à família Sphaerosporidae, gênero Sphaerospora, e nova espécie, Sphaerospora festivus n. sp. e primeira ocorrência de parasitos desse gênero no Brasil.

Development of a qPCR to diagnose the genus Eimeria in bovines / Desenvolvimento de uma qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria em bovinos

Bovine coccidiosis is caused by protozoa of the genus Eimeria. These protozoa mainly affect young animals, causing a decrease in production and consequent economic losses. The routine diagnosis is made through morphological observation of the oocysts, which has several limitations. The objective of the present study was to develop a qPCR technique for the diagnose of Eimeria spp. in cattle. For this purpose, the 18S rRNA region of the DNA of these parasites was selected, since it is a region with low variability among the species. The qPCR was developed using the SYBR Green, resulting in a PCR with a high sensitivity, able to amplify samples containing only one oocyst of Eimeria spp. of bovines. The feasibility of using qPCR in the diagnosis of the Eimeria Genus is demonstrated in this study, once this technique shows to be less laborious and needs less skills for diagnostic training when compared to the technique conventionally used in theroutine (micromorphometry).

A coccidiose em bovinos é causada por protozoários do gênero Eimeria. Estes protozoários acometem principalmente animais jovens, causando diminuição de produção e consequente perdas econômicas. O diagnóstico de rotina é realizado através de observação morfológica dos oocistos, que possui várias limitações. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma técnica de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos. Para isto foi selecionada a região 18S rRNA do DNA destes parasitas, pois a mesma é uma região com pouca variabilidade entre as espécies. A qPCR foi desenvolvida com a utilização de SYBR Green, tendo como resultado uma PCR com uma alta sensibilidade, capaz de amplificar amostras contendo apenas um oocisto de Eimeria spp de bovinos. Demonstra-se nesse estudo a viabilidade na utilização da qPCR no diagnóstico do gênero Eimeria, sendo esta técnica menos laboriosa e com menos necessidade de treinamento para diagnóstico quando comparada com a técnica convencionalmente utilizada em rotina (micromorfometria).

Development of a qPCR to diagnose the genus Eimeria in bovines / Desenvolvimento de uma qPCR para o diagnóstico do gênero Eimeria em bovinos

Bovine coccidiosis is caused by protozoa of the genus Eimeria. These protozoa mainly affect young animals, causing a decrease in production and consequent economic losses. The routine diagnosis is made through morphological observation of the oocysts, which has several limitations. The objective of the present study was to develop a qPCR technique for the diagnose of Eimeria spp. in cattle. For this purpose, the 18S rRNA region of the DNA of these parasites was selected, since it is a region with low variability among the species. The qPCR was developed using the SYBR Green, resulting in a PCR with a high sensitivity, able to amplify samples containing only one oocyst of Eimeria spp. of bovines. The feasibility of using qPCR in the diagnosis of the Eimeria Genus is demonstrated in this study, once this technique shows to be less laborious and needs less skills for diagnostic training when compared to the technique conventionally used in theroutine (micromorphometry).(AU)

A coccidiose em bovinos é causada por protozoários do gênero Eimeria. Estes protozoários acometem principalmente animais jovens, causando diminuição de produção e consequente perdas econômicas. O diagnóstico de rotina é realizado através de observação morfológica dos oocistos, que possui várias limitações. O objetivo do presente trabalho foi desenvolver uma técnica de qPCR para diagnóstico de Eimeria spp. em bovinos. Para isto foi selecionada a região 18S rRNA do DNA destes parasitas, pois a mesma é uma região com pouca variabilidade entre as espécies. A qPCR foi desenvolvida com a utilização de SYBR Green, tendo como resultado uma PCR com uma alta sensibilidade, capaz de amplificar amostras contendo apenas um oocisto de Eimeria spp de bovinos. Demonstra-se nesse estudo a viabilidade na utilização da qPCR no diagnóstico do gênero Eimeria, sendo esta técnica menos laboriosa e com menos necessidade de treinamento para diagnóstico quando comparada com a técnica convencionalmente utilizada em rotina (micromorfometria).(AU)

Molecular characterization of Paramphistomum cervi in buffaloes

Background: Paramphistomiasis (Rumen fluke disease) in ruminants is a major health problem, characterized by coarse hair, weakness, loss of appetite, weight retardations, intestine ulcers, inter-mandibular inflammation, causing substantial economic losses, and high mortality. In tropical and subtropical regions, the disease was neglected but has recently emerged as an important cause of production losses. While documented reports on Paramphistomum cervi, Paramphistomum ichikawai and Paramphistomum are limited in Asian countries and paramphistomosis has been considered the major health and economic problem in several countries. The present study aimed to identify paramphistomoid flukes that infects buffaloes with the goal of characterization of prevalence in Pakistan and its comparison with neighbor countries. Materials, Methods & Results: In 2018, a total of 178 slaughtered buffaloes aged four to six years were examined. After an immediate postmortem examination of each buffalo, flukes were collected from their infected rumen and reticulum using sterilized forceps and placed in a saline solution. DNA was extracted from adult Paramphistome species using the standard phenol chloroform method and used for amplification of partial fragment of 18S rRNA sequences using specific pair of primer. After amplification and sequencing of 18S rRNA partial fragment, the generated sequences were assembled and trimmed to remove any primer contaminations. Twenty-three randomly selected and morphologically identified adult Paramphistomum were used in species-level identification using specific primers for partial fragment of 18S rRNA sequences. The cleaned sequences (810 bp) were used to identify similar sequences using BLAST on the NCBI website. The GenBank retrieved sequences and new Paramphistomum species isolated sequences were aligned using CLUSTAL in the BioEdit Sequence...

Vitamin B12 deficiency in newly weaned goat kids associated with clinical infection with Eimeria arloingi / Deficiência de vitamina B12 em cabritos recém-desmamados associada à infecção clínica por Eimeria arloingi

A severe outbreak of diarrhea associated with poor growth was reported in ten newly weaned goat kids that originated from a research farm (Group A). Two of these kids underwent necropsy examination. Five goat kids of the same age maintained in the same pen showed no clinical signs (Group B). The clinical, gross pathological and histopathological features of the clinically sick animals were consistent with severe coccidiosis. Group A animals had significantly lower levels of serum vitamin B12 ( 200 pg/ml) compared with group B animals (2000 pg/ml). In addition, kids belonging to group A had significantly higher Eimeria arloingi oocysts per gram (OPG) of faeces (101,400/g) compared with kids of group B (9,154/g). Microscopy and molecular tools (18S rRNA and COI genes) confirmed that the goat kids were infected with the caprine protozoan parasite E. arloingi. This study provides a definitive association between low levels of serum vitamin B12 and clinical E. arloingi infection, and also provides support to our previous studies that demonstrated how low levels of serum vitamin B12 leads to an impairment of neutrophil function and thereby potential lowered immunity to pathogens.(AU)

Um surto grave de diarreia, associado à baixo crescimento, foi relatado em dez cabritos recém-desmamados, originários de uma fazenda de pesquisa (Grupo A). Dois animais foram submetidos a exame necroscópico. Cinco cabritos da mesma idade e mantidos na mesma instalação não apresentaram sinais clínicos (Grupo B). As características clínicas e as lesões macroscópicas e microscópicas dos animais clinicamente doentes eram consistentes com coccidiose grave. Os animais do grupo A apresentaram níveis significativamente mais baixos de vitamina B12 sérica ( 200 pg / ml) em comparação com os animais do grupo B (2000 pg/ml). Além disso, os animais pertencentes ao grupo A apresentaram um número de oocistos de Eimeria arloingi por grama (OPG) de fezes (101,400/g) significativamente mais alto do que os animais do grupo B (9,154/g). As análises microscópica e molecular (genes 18S rRNA e COI) confirmaram que os cabritos estavam infectados com o protozoário E. arloingi. Este estudo fornece uma associação definitiva entre baixos níveis de vitamina B12 no soro e infecção clínica por E. arloingi. Também fornece suporte aos estudos anteriores, que demonstraram como baixos níveis de vitamina B12 no soro comprometem a função dos neutrófilos e, consequentemente, a imunidade a patógenos.(AU)

Caracterização molecular de Sarcocystis spp. em amostras de carne / Molecular characterization of Sarcocystis spp. in samples of meat

A sarcocistose é uma doença distribuída mundialmente, podendo acometer aves, répteis e diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença de Sarcocystis spp. e caracterizar as espécies encontradas em 375 amostras de produtos cárneos (filé mignon bovino, carne moída bovina e salame colonial). Para isso, foi realizada a detecção do parasita através da técnica de PCR para amplificação parcial do gene 18S rRNA e sua caracterização molecular utilizando o polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP) com as enzimas de restrição Bcl I, Rsa I e Alu I. A ocorrência de Sarcocystis spp. foi de 17% (64/375) do total de amostras testadas pelo PCR. Entre os produtos cárneos avaliados, 5,6% (7/125) das amostras de filé mignon, 12,8% (16/125) de carne moída e 32,8% (41/125) de embutido colonial, foram positivas para presença do DNA do Sarcocystis spp. Entre estas amostras positivas, as espécies caracterizadas foram Sarcocystis hirsuta e Sarcocystis hominis com prevalências de 93,7% (60/64) e 6,3% (4/64), respectivamente. Considerando à relevância da sarcocistose na área da saúde pública, a ocorrência de S. hominis encontrado neste estudo, pode ser um fator de risco para a contaminação humana. Porém, a presença do DNA deste protozoário não significa necessariamente potencial de infecção aos humanos, pois cuidados nos processos de fabricação podem reduzir a viabilidade dos cistos.(AU)

The sarcocystosis is a worldwide spread disease and can affect birds, reptiles and many mammals, including man. The aim of this study was to detect the presence of Sarcocystis spp. and characterize the species found in 375 samples of meat products (filet mignon, ground beef and colonial salami). For this, we carried out the detection of the parasite by PCR for the amplification of the partial 18S rRNA gene and molecular characterization using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) with restriction enzymes Bcl I, Alu I and Rsa I. The occurrence of Sarcocystis spp. was 17% (64/375) of all samples. Among the meat products evaluated, the filet mignon samples were positive in 5.6% (7/125), the ground beef in 12.8% (16/125) and the colonial salami in 32.8% (41/125). Of the positive samples, Sarcocystis hirsuta and Sarcocystis hominis were detected, with prevalence of 93.7% (60/64) and 6.3% (4/64), respectively. Considering the relevance of sarcocystosis in public health, the occurrence of S. hominis found may be a risk factor to human contamination. However, the presence of DNA of this parasite does not necessarily mean potential of infection to humans, because good practices in the manufacturing processes can reduce the viability of the cysts.(AU)

Caracterização molecular de Sarcocystis spp. em amostras de carne / Molecular characterization of Sarcocystis spp. in samples of meat

A sarcocistose é uma doença distribuída mundialmente, podendo acometer aves, répteis e diversos mamíferos, incluindo o homem. O objetivo desse trabalho foi detectar a presença de Sarcocystis spp. e caracterizar as espécies encontradas em 375 amostras de produtos cárneos (filé mignon bovino, carne moída bovina e salame colonial). Para isso, foi realizada a detecção do parasita através da técnica de PCR para amplificação parcial do gene 18S rRNA e sua caracterização molecular utilizando o polimorfismo no comprimento do fragmento de restrição (RFLP) com as enzimas de restrição Bcl I, Rsa I e Alu I. A ocorrência de Sarcocystis spp. foi de 17% (64/375) do total de amostras testadas pelo PCR. Entre os produtos cárneos avaliados, 5,6% (7/125) das amostras de filé mignon, 12,8% (16/125) de carne moída e 32,8% (41/125) de embutido colonial, foram positivas para presença do DNA do Sarcocystis spp. Entre estas amostras positivas, as espécies caracterizadas foram Sarcocystis hirsuta e Sarcocystis hominis com prevalências de 93,7% (60/64) e 6,3% (4/64), respectivamente. Considerando à relevância da sarcocistose na área da saúde pública, a ocorrência de S. hominis encontrado neste estudo, pode ser um fator de risco para a contaminação humana. Porém, a presença do DNA deste protozoário não significa necessariamente potencial de infecção aos humanos, pois cuidados nos processos de fabricação podem reduzir a viabilidade dos cistos.(AU)

The sarcocystosis is a worldwide spread disease and can affect birds, reptiles and many mammals, including man. The aim of this study was to detect the presence of Sarcocystis spp. and characterize the species found in 375 samples of meat products (filet mignon, ground beef and colonial salami). For this, we carried out the detection of the parasite by PCR for the amplification of the partial 18S rRNA gene and molecular characterization using the restriction fragment length polymorphism (RFLP) with restriction enzymes Bcl I, Alu I and Rsa I. The occurrence of Sarcocystis spp. was 17% (64/375) of all samples. Among the meat products evaluated, the filet mignon samples were positive in 5.6% (7/125), the ground beef in 12.8% (16/125) and the colonial salami in 32.8% (41/125). Of the positive samples, Sarcocystis hirsuta and Sarcocystis hominis were detected, with prevalence of 93.7% (60/64) and 6.3% (4/64), respectively. Considering the relevance of sarcocystosis in public health, the occurrence of S. hominis found may be a risk factor to human contamination. However, the presence of DNA of this parasite does not necessarily mean potential of infection to humans, because good practices in the manufacturing processes can reduce the viability of the cysts.(AU)

Serological and molecular techniques applied for identification of Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates / Técnicas sorológicas e moleculares aplicadas na identificação de Plasmodium spp. em amostras de primatas não humanos

The aim of this study was to identify Plasmodium spp. in blood samples from nonhuman primates (NHPs) in the state of Maranhão, using classical and alternative techniques for examination of human malaria. A total of 161 blood samples from NHPs were analyzed: 141 from captive animals at a Wildlife Screening Center (CETAS) and 20 from free-living animals in a private reserve. The techniques used were microscopy, rapid diagnostic test (RDT), Indirect fluorescent antibody test (IFAT) and molecular techniques (semi-nested PCR, quantitative real-time PCR and LAMP). Two serological methods (dot-ELISA and indirect ELISA) were also standardized with rhoptry protein-soluble antigen of P. falciparum and P. berghei. Trophozoite forms of Plasmodium sp. were identified on slides from five different animals. No samples were positive through RDT and LAMP. Four samples were seropositive for P. malariae through IFAT. The samples showed low reactivity to ELISA. Plasmodium sp. was detected in 34.16% (55/161) of the samples using qPCR based on the 18S rRNA gene. After sequencing, two samples showed 100% identityl to P. malariae, one showed 97% identity to Plasmodium sp. ZOOBH and one showed 99% identity to P. falciparum . PCR was shown to be the most sensitive technique for diagnosing Plasmodium in NHP samples.(AU)

Neste estudo objetivamos identificar Plasmodium spp. em amostras sangue de primatas não humanos (PNH) do estado do Maranhão, utilizando técnicas clássicas e alternativas para o exame da malária humana. Foram analisadas 161 amostras de sangue de PNH, sendo 141 de CETAS (cativeiro) e 20 de reserva particular (vida livre), utilizando microscopia, teste de diagnóstico rápido (RDT), imunofluorescência indireta (IFI) e técnicas moleculares (semi-nested PCR, PCR em tempo real quantitativo e LAMP). Dois métodos sorológicos (dot-ELISA e ELISA indireto) também foram padronizados com antígenos solúveis de roptrias de P. falciparum e P. berghei. Formas trofozoíticas de Plasmodium sp. foram identificadas em lâminas de cinco animais diferentes. Nenhuma amostra foi positiva em TDR e LAMP. Quatro amostras foram soropositivas para P. malariae na IFI. Os soros de PNH mostraram baixa reatividade pelo ELISA indireto. Plasmodium sp. foi detectado em 34,16% (55/161) das amostras utilizando a qPCR baseada no gene 18S rRNA. No sequenciamento, duas amostras mostraram identidade com P. malariae (100%), uma com Plasmodium sp. ZOOBH (97%) e uma com P. falciparum (99%). A PCR mostrou ser a técnica mais sensível para diagnósticos de Plasmodium em amostras de PNH.(AU)

Genetic diversity of piroplasmids species in equids from island of São Luís, northeastern Brazil / Diversidade genética de espécies de piroplasmídeos em equídeos na ilha de São Luís, Nordeste do Brasil

Equine piroplasmosisis, a tick-borne disease caused by the intra-erythrocytic protozoans Babesia caballi and Theileria equi, has economic importance due to the international trade and the increased movement of horses all over the world. The goal of this study was to evaluate the occurrence of phylogenetic diversity of T. equi and B. caballi genotypes among infected equids from São Luís Island, state of Maranhão, northeastern Brazil. Between December of 2011 and June of 2012, EDTA-blood and serum samples were collected from 139 equids (90 donkeys, 39 horses and 10 mules). From 139 serum samples submitted to ELISA assay, IgG antibodies to T. equi and B. caballi were detected in 19.4% (27/139) and 25.2% (35/139), respectively. Among sampled animals, 21.6% (30/139) and 55.4% (77/139) were positive for cPCR assays for T. equi and B. caballi, based on ema-1 and rap-1 genes, respectively. Overall, the T. equi sequences (n=7) submitted to Maximum Likelihood analysis (based on a 18S rRNA fragment of 1700 bp after alignment) grouped into three main groups, which were subdivided in eight clusters. The present work showed that different genotypes of T. equi and B. caballi circulate among equids in Brazil.(AU)

A piroplasmose equina, uma doença transmitida por carrapatos e causada pelos protozoários intra-eritrocíticos Babesia caballi e Theileria equi, tem importância econômica devido ao comércio internacional e ao aumento do movimento de cavalos em todo o mundo. O objetivo do presente estudo foi mostrar a diversidade filogenética de T. equi e B. caballi infectando cavalos, burros e jumentos na Ilha de São Luís, Estado do Maranhão, Nordeste do Brasil. Entre dezembro de 2011 e junho de 2012, amostras de sangue com EDTA e soro de foram coletadas de 139 equídeos (90 jumentos, 39 cavalos e 10 burros). Dentre as 139 amostras de soro submetidas ao ensaio de ELISA, foram detectados anticorpos IgG contra T. equi e B. caballi em 19,4% (27/139) e 25,2% (35/139), respectivamente. Entre os animais amostrados, 21,6% (30/139) e 55,4% (77/139) foram positivos por meio dos ensaios de cPCR para T. equi e B. caballi, com base nos genes ema-1 e rap-1, respectivamente. No geral, as sequências T. equi (n = 7) submetidas à análise de Máxima Verossimilhança (baseada em um fragmento do 18S rRNA de 1700 pb, após o alinhamento) foram agrupadas em três grupos principais, os quais foram subdivididos em oito grupos. O presente trabalho mostrou que diferentes genótipos de T. equi e B. caballi circulam entre equídeos no Brasil.(AU)

DIVERSIDADE GENÉTICA DE Hepatozoon spp. EM ROEDORES NO BRASIL

O gênero Hepatozoon spp. engloba protozoários parasitas de uma ampla variedade de vertebrados terrestres. Recentemente, vem se investigando o possível papel de roedores como hospedeiros intermediários e paratênicos nos ciclos de transmissão de espécies de Hepatozoon parasitas de carnívoros domésticos e selvagens. O presente estudo teve como objetivo investigar a presença e caracterizar o DNA de Hepatozoon spp. em amostras de baço de 31 gêneros de roedores amostrados em cinco biomas brasileiros. Das 462 amostras analisadas 195 amostras foram positivas em um ou ambos os protocolos utilizados. Hepatoozon spp. foi detectado em 24 gêneros de roedores, com primeiro relato da infecção pelo referido parasita em Rattus rattus, Mus musculus, Proechimys roberti, P. cuvieri, G. spixii, Hylaeamys megacephalus, Gracilinanus agilis, Cerradomys scotti, C. akroai, C. marinhus e Wiedomys cerradensis. As análises Bayesiana e de Máxima Verossimilhança das sequências 18S rRNA obtidas mostraram a presença de três clados de Hepatozoon, sendo um clado composto por sequências de Hepatozoon sp. detectados em roedores e répteis (cobras, jacarés e lagartos), um clado composto por Hepatozoon americanum e espécies de Hepatozoon detectadas em canídeos e felídeos selvagens, e um clado agrupando Hepatozoon canis e Hepatozoon spp. detectados em canídeos domésticos e selvagens e Rhipicephalus sanguineus. As sequências de Hepatozoon do presente estudo foram agrupadas no clado de roedores e répteis. A análise de distância pelo software Splitstree revelou que as sequências do presente estudo foram agrupadas em um grupo com sequências de Hepatozoon de outros roedores do Brasil e do mundo, próximas às sequências de Hepatozoon detectadas em répteis. As sequências de Hepatozoon obtidas de felídeos e canídeos formaram grupos distintos daquelas detectadas em roedores. Para análise de haplótipos 18S rRNA de Hepatozoon spp. detectados em roedores em outros estudos realizados no Brasil até o presente momento foram escolhidas 26 sequências e a análise foi realizada com o software TCS. Seis haplótipos foram encontrados, sendo o haplótipo 1 o mais frequente. Os resultados do presente estudo sugerem a existência de estruturação genética das espécies de Hepatozoon que ocorrem em roedores no Brasil de acordo com a localidade geográfica.

The Hepatozoon spp. genus includes protozoan parasites of a wide range of terrestrial vertebrates. Recently, the role of rodents as intermediate and paratenic hosts in the transmission of Hepatozoon species parasites of domestic and wild carnivores, has been investigated. The present study aimed to investigate the presence and characterization of Hepatozoon spp. in spleen samples of 31 genera of rodents sampled in five Brazilian biomes. Out of 462 samples analyzed, 195 were positive in one or in both protocols. Hepatoozon spp. was detected in 24 genera of rodents, with the first report of the infection in Rattus rattus, Mus musculus, Proechimys roberti, P. cuvieri, G. spixii, Hylaeamys megacephalus, Gracilinanus agilis, Cerradomys scotti, C. akroai, C. marinhus and Wiedomys cerradensis. Bayesian and Maximum Likelihood analyzes of the obtained 18S rRNA sequences demonstrated the presence of three clades of Hepatozoon, one clade being composed of Hepatozoon sp. detected in rodents and reptiles (snakes, alligators and lizards), a clade composed of Hepatozoon americanum and Hepatozoon species detected in canids and wild felids, and a clade grouping Hepatozoon canis and Hepatozoon spp. detected in domestic and wild canids and in Rhipicephalus sanguineus. Hepatozoon sequences of the present study were grouped in the clade of rodents and reptiles. Distance analysis by Splitstree software revealed that the sequences of the present study were grouped into a group with Hepatozoon sequences from other rodents from Brazil and the world, close to the Hepatozoon sequences detected in reptiles. For analysis of 18S rRNA haplotypes of Hepatozoon spp. detected in rodents from other studies conducted in Brazil up to the moment, 26 sequences were chosen and the analysis was performed with the TCS software. Six haplotypes were found, with haplotype 1 being the most frequent. Results of the present study suggest the existence of genetic structuring of Hepatozoon species in rodents in Brazil according to the geographical location.

Impact of Amazon land use on the community of soil fungi

Considered as one of the most biodiverse biomes, the Amazon has a featured role in the discovery of new species of plants, animals and microorganisms, which may be important for the functionality of different ecosystems. However, studies on the impacts resulted from changes in the Amazon land use on microbial communities and their functions are still limited. In this context, the soil fungal diversity can act as an important indicator of environmental stress caused by land use of the Amazon. This study describes changes in soil fungal communities caused by different systems of land use (primary forest, secondary forest, agroforestry, agriculture and pasture). Communities were observed in each of the areas using denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) of 18S rRNA gene combined with the non-metric multidimensional scaling (NMDS). Unique bands indicated the dominance of particular fungal groups in each of the specific treatments, mainly in areas converted to pasture, which differed greatly from samples of other systems of land use (SLU). The analysis of partial sequence of the 18S rRNA gene of fungi in soils under primary forest, agriculture and pasture showed differences (p = 0.001), evidencing the fungal community response to such changes. Most abundant phyla were the Zygomycota in the soil under primary forest and agricultural land, and Basidiomycota in the soil under pasture. The results show that the Amazon soil is an ecosystem susceptible to environmental changes in regarding the fungi community inhabiting this niche.(AU)

Impact of Amazon land use on the community of soil fungi

Considered as one of the most biodiverse biomes, the Amazon has a featured role in the discovery of new species of plants, animals and microorganisms, which may be important for the functionality of different ecosystems. However, studies on the impacts resulted from changes in the Amazon land use on microbial communities and their functions are still limited. In this context, the soil fungal diversity can act as an important indicator of environmental stress caused by land use of the Amazon. This study describes changes in soil fungal communities caused by different systems of land use (primary forest, secondary forest, agroforestry, agriculture and pasture). Communities were observed in each of the areas using denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE) of 18S rRNA gene combined with the non-metric multidimensional scaling (NMDS). Unique bands indicated the dominance of particular fungal groups in each of the specific treatments, mainly in areas converted to pasture, which differed greatly from samples of other systems of land use (SLU). The analysis of partial sequence of the 18S rRNA gene of fungi in soils under primary forest, agriculture and pasture showed differences (p = 0.001), evidencing the fungal community response to such changes. Most abundant phyla were the Zygomycota in the soil under primary forest and agricultural land, and Basidiomycota in the soil under pasture. The results show that the Amazon soil is an ecosystem susceptible to environmental changes in regarding the fungi community inhabiting this niche.

Isolation, morphological and molecular characterization of phytate-hydrolysing fungi by 18S rDNA sequence analysis

Phytate is the primary storage form of phosphate in plants. Monogastric animals like poultry, pigs and fishes have very low or no phytase activities in their digestive tracts therefore, are incapable to efficiently utilize phytate phosphorus from the feed. Phytase from microbial sources are supplemented to feedstuff of these to increase the uptake of phytate phosphorus. In the present work efforts were made to isolate and characterize proficient phytase producing fungi from soil. Phytase producing fungi were isolated using phytate specific medium. Fungal isolates were selected according to their higher phytase activities. These isolates were further characterized and identified by morphological and microscopic analysis and confirmed by amplification of 18S rRNA gene, using specific primers. This gene was subsequently sequenced and phylogenetic affiliations were assigned. Fungal isolates were identified as various species of Aspergillus. Phytases from these fungi could be utilized as a feed additive in poultry and swine industries.(AU)

Design of primer pairs for species-specific diagnosis of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi using PCR / Construção de pares de primers para a detecção espécie-específica de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi por PCR

The objective of this study was to design and evaluate new primers for species-specific detection of L. infantum chagasi using PCR. Two combinations of primer pairs were established with the aim of obtaining specific amplification products from the L. infantum chagasi 18S rRNA gene. The combinations of the primer pairs and the respective sizes of the PCR products, based on the U422465 GenBank reference sequence of L. infantum chagasi, were: LCS1/LCS3 (259 bp) and LCS2/LCS3 (820 bp). It was concluded that the new PCR assays optimized using the primer pairs LCS1/LCS3 and LCS2/LCS3 were effective for specific detection of L. infantum chagasi, with analytical sensitivity to detect 1 pg/µL of DNA.

Objetivou-se com este trabalho construir e avaliar novos primers para a detecção espécie-específicos de L. infantum chagasi por PCR. Foram estabelecidas duas combinações de pares de primers com a finalidade de obter produtos de amplificação específicos para o gene 18S rRNA de L. infantum chagasi. As combinações dos pares de primers e os respectivos tamanhos dos produtos de PCR, previstos conforme a sequência de referência utilizada (GenBank U422465) foram: LCS1/LCS3 (259 pb); LCS2/LCS3 (820 pb). Pôde-se concluir que os novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de primers LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção específica de L. infantum chagasi, com sensibilidade analítica para detectar 1 pg/µL de DNA.

Design of primer pairs for species-specific diagnosis of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi using PCR / Construção de pares de primers para a detecção espécie-específica de Leishmania (Leishmania) infantum chagasi por PCR

The objective of this study was to design and evaluate new primers for species-specific detection of L. infantum chagasi using PCR. Two combinations of primer pairs were established with the aim of obtaining specific amplification products from the L. infantum chagasi 18S rRNA gene. The combinations of the primer pairs and the respective sizes of the PCR products, based on the U422465 GenBank reference sequence of L. infantum chagasi, were: LCS1/LCS3 (259 bp) and LCS2/LCS3 (820 bp). It was concluded that the new PCR assays optimized using the primer pairs LCS1/LCS3 and LCS2/LCS3 were effective for specific detection of L. infantum chagasi, with analytical sensitivity to detect 1 pg/µL of DNA.

Objetivou-se com este trabalho construir e avaliar novos primers para a detecção espécie-específicos de L. infantum chagasi por PCR. Foram estabelecidas duas combinações de pares de primers com a finalidade de obter produtos de amplificação específicos para o gene 18S rRNA de L. infantum chagasi. As combinações dos pares de primers e os respectivos tamanhos dos produtos de PCR, previstos conforme a sequência de referência utilizada (GenBank U422465) foram: LCS1/LCS3 (259 pb); LCS2/LCS3 (820 pb). Pôde-se concluir que os novos ensaios de PCR otimizados neste estudo, empregando os pares de primers LCS1/LCS3 e LCS2/LCS3, foram efetivos para a detecção específica de L. infantum chagasi, com sensibilidade analítica para detectar 1 pg/µL de DNA.

CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE Theileria equi DE EQUÍDEOS DO MUNICÍPIO DE PASSO FUNDO, RIO GRANDE DO SUL, BRASIL

Piroplasmose equina, uma doença causada pelos hemoparasitas Babesia caballi e Theileria equi, é considerada a principal doença parasitária que afeta equídeos. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento epidemiológico molecular e de frequência sorológica de T. equi em eqüinos da região Noroeste do Estado do Rio Grande do Sul (RS), Brasil. Foram coletadas 90 amostras de sangue de cavalos de Passo Fundo, RS, Brasil, que são usados em esportes equestres e lazer. Na frequência sorológica observada através do diagnóstico por ELISA para T. equi, obteve 18,9% de reações positivas. Para o diagnóstico molecular foi realizada a amplificação do gene 18S rRNA por nPCR, sequenciamento de produtos e análise filogenética comparativa dos isolados. Das 90 amostras, 21,1% (19/90) tiveram o gene 18S rRNA amplificado. Estas amostras foram sequenciadas e as sequências de consenso das amostras mais seguras foram submetidas à análise de relação com outras sequências de T. equi depositadas no GenBank. Os resultados indicaram entre 99 e 100% de identidade de amostras de nosso estudo em comparação a amostras dos Estados Unidos da América (EUA). Na análise filogenética, as amostras foram agrupados em dois grupos principais (A e B). No grupo A, quatro sequências foram filogeneticamente próximas de sequências encontradas na fronteira de EUA / México, na África do Sul e no Brasil. No entanto, cinco amostras do grupo B revelaram proximidade com amostras relatadas nos EUA e Espanha. Este estudo permite, pela primeira vez analisar a variação molecular no gene 18S rRNA de T. equi, onde se encontrou nove novos genótipos de T. equi em cavalos da área de estudo. No entanto ainda há estudos para ajudar a compreender o significado de variação genética, epidemiologia, diagnóstico, terapia e usa perspectiva de vacinas recomendadas.

Equine piroplasmosis, a disease caused by haemoparasites Babesia caballi and Theileria equi is considered the main parasitic disease that affects horses. The aim of this study was to perform a molecular epidemiological survey and serological frequency T. equi in equines of Northwest region in the state of Rio Grande do Sul (RS), Brazil. There were collected 90 blood samples from horses of Passo Fundo, RS, Brazil, which are used to perform equestrian and leisure as well. Serologic diagnostic to T. equi was realized with ELISA, obtained 18.9% showed positive reaction. For molecular diagnostic agents was carried out amplification of the 18S rRNA gene for nPCR, and sequencing of products and comparative phylogenetic analysis of the isolates. Of the 90 samples, 21,1% (19/90) had the 18S rRNA gene amplified. These samples were sequenced and samples with consensus sequences safest subjected to analysis of relationship to other sequences deposited in GenBank T. equi. The results indicated between 99 and 100% identity of samples of our study from United States of America (USA) sample. In the phylogenetic analysis, the samples were grouped into two major groups (A and B). In group A, four sequences were phylogenetically close to sequences found on the border of USA / Mexico, in South Africa and in Brazil. However, five samples of group B revealed proximity reported in the USA and Spain. This study allows for the first time to complete the change in the 18S rRNA gene of T. equi, where we find nine new genotypes of T. equi in horses in the study area. However there are still studies to help understand the meaning of genetic variation, epidemiology, diagnosis, therapy and perspective uses of recommended vaccines.