Monitoring periodontal lesions and their effects during pregnancy: microbiological aspects of the oral cavity and amniotic fluid in pregnant ewes / Monitoramento de lesões periodontais e seus efeitos na gestação: aspectos microbiológicos da cavidade bucal e líquido amniótico de ovelhas gestantes

Periodontitis affects the teeth supporting tissues, leading to tooth loss and damage to animal health. Evidence in humans suggests that oral microorganisms spread systemically, increasing the risk of pregnancy disorders such as miscarriage, prematurity, and low birth weight. This study aimed to verify whether periodontopathogenic microorganisms reach the transplacental unit, culminating in problems in pregnant ewes. After analyzing the oral cavity, 10 clinically healthy pregnant ewes (OGCH group) and 10 pregnant ewes with periodontitis (OGP group) were selected. The subgingival biofilm was collected for the polymerase chain reaction (PCR) test and amniotic fluid for both the PCR and interleukin (IL) analysis. Peripheral blood was collected for complete blood count, and analyses of IL-6, IL1-ß, and tumor necrosis factor-α were performed. Placental fragments were collected to assess the inflammatory changes using optical microscopy. After giving birth, both the ewes and their lambs were weighed. On clinical examination, a positive correlation between bleeding and suppuration (correlation index - CI=0.54), suppuration and marginal gingivitis (CI=0.34), and marginal gingivitis and edema (CI=0.54) was observed. The weights of the ewes (p=0.013) and their respective lambs (p=0.04) in the OGP group were lower than those of their OGCH group counterparts. The hematological analysis revealed that the OGP group ewes showed a slight increase in the mean corpuscular volume (p=0.2447), segmented cells (p=0.3375), and eosinophils (p=0.3823) when compared with the OGCH group ewes, without a statistical difference. Regarding the microorganisms detected in the oral cavity, there was a significant difference between the occurrence of periodontal pockets and the presence of Fusobacterium necrophorum (p=0.0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0.0392), and the Mollicutes class (p=0.0352). Staphylococcus genus (p=0.9107) and Archaea domain (p=0.7245) were detected in the amniotic samples of both groups, without a significant difference, whereas P. asaccharolytica (p=0.2685) was only detected in one sample in the OGCH group. The expression of cytokine IL-6 in the OGP group differed significantly between the prepartum and postpartum periods (p=0.0039); moreover, it differed significantly in the postpartum period between the OGCH and OGP groups (p=0.0198). Histological examination showed a higher percentage of placental changes in the OGP group (70%) than in the OGCH group, such as the presence of macrophages, neutrophils, plasma cells, and multifocal areas of calcification. These results do not corroborate the hypothesis of dissemination of oral microorganisms to the placental unit, suggesting that it constitutes placental isolation in sheep.

A periodontite afeta os tecidos de suporte dos dentes levando à perda dentária e danos à saúde do animal. Evidências em humanos sugerem que os microrganismos orais se espalham sistemicamente, aumentando o risco de distúrbios da gravidez, como aborto espontâneo, prematuridade e baixo peso ao nascer. Este estudo teve como objetivo verificar se microrganismos periodontopatogênicos atingem a unidade transplacentária, culminando em problemas em ovelhas gestantes. Após análise da cavidade oral, foram selecionadas 10 ovelhas gestantes clinicamente saudáveis (grupo OGCH) e 10 ovelhas gestantes com periodontite (grupo OGP). O biofilme subgengival foi coletado para o teste de reação em cadeia da polimerase (PCR) e o líquido amniótico para teste de PCR e análise de interleucina (IL). Sangue periférico foi coletado para hemograma completo e análises de IL-6, IL1-ß e fator de necrose tumoral-α foram realizadas. Fragmentos de placenta foram coletados para avaliação das alterações inflamatórias por meio de microscopia óptica. Após o parto, as ovelhas e seus cordeiros foram pesados. Ao exame clínico, observou-se correlação positiva entre sangramento e supuração (índice de correlação - IC=0,54), supuração e gengivite marginal (IC=0,34) e gengivite marginal e edema (IC=0,54). Os pesos das ovelhas (p=0,013) e de seus respectivos cordeiros (p=0,04) do grupo OGP foram inferiores aos do grupo OGCH. A análise hematológica revelou que as ovelhas do grupo OGP apresentaram discreto aumento no volume corpuscular médio (p=0,2447), células segmentadas (p=0,3375) e eosinófilos (p=0,3823) quando comparadas com as ovelhas do grupo OGCH, sem diferença estatística diferença. Em relação aos microrganismos detectados na cavidade oral, houve diferença significativa entre a ocorrência de bolsas periodontais e a presença de Fusobacterium necrophorum (p=0,0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0,0392) e da classe Mollicutes (p=0,0352). O gênero Staphylococcus (p=0,9107) e o domínio Archaea (p=0,7245) foram detectados nas amostras amnióticas de ambos os grupos, sem diferença significativa, enquanto P. asaccharolytica (p=0,2685) foi detectado apenas em uma amostra do grupo OGCH. A expressão da citocina IL-6 no grupo OGP diferiu significativamente entre os períodos pré e pós-parto (p=0,0039); além disso, diferiu significativamente no período pós-parto entre os grupos OGCH e OGP (p=0,0198). O exame histológico mostrou maior porcentagem de alterações placentárias no grupo OGP (70%) do que no grupo OGCH, como a presença de macrófagos, neutrófilos, plasmócitos e áreas multifocais de calcificação. Esses resultados não corroboram a hipótese de disseminação de microrganismos orais para a unidade placentária, sugerindo que se trata de um isolamento placentário em ovinos.

Avaliação da maturidade pulmonar de cabritos nascidos a termo e prematuros / [Evaluation of lung maturity of term and premature kid]

Avaliou-se a maturidade pulmonar de cabritos no líquido amniótico de suas mães pela coloração de Shor, pelo azul de Nilo e pela contagem de corpos lamelares, bem como a vitalidade e os níveis de glicose e lactato séricos em cabritos nascidos a termo e prematuros. Para tanto, foram utilizados 32 cabritos, divididos em três grupos, a saber: grupo I: cabritos nascidos de cesarianas com 149 dias de gestação; grupo II: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação; e grupo III: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação, oriundos de mães que receberam, por via intramuscular, 20mg/cabra de dexametasona, 36 horas antes da cirurgia eletiva. A coloração de Shorr e a contagem de corpos lamelares demonstraram ser métodos diagnósticos promissores para a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos caprinos. Contudo, a administração de dexametasona nas cabras no período antenatal não influenciou a maturidade fetal. Constatou-se, entretanto, que a avaliação física do paciente, logo após o nascimento, também se mostra fundamental no que tange à percepção da vitalidade e da viabilidade de cabritos recém-nascidos.(AU)

Pulmonary maturity of goats in their amniotic fluid was evaluated by Shor, Nile blue staining, and lamellar body count, as well as vitality and serum glucose and lactate levels in term and premature goats. Twenty-four kids were divided into three groups: group I: comprised of eight animals born by cesarean section with 149 days of gestation; group II: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation; and group III: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation, in which the does received intramuscular dexamethasone (20mg/goat) 36 hours prior to elective cesarean section. Shorr staining and lamellar body count have shown to be promising diagnostic methods for the assessment of lung maturity in goat neonates. However, the administration of dexamethasone to goats during antenatal period did not influence fetal maturity. It was verified that the physical evaluation of the patient, shortly after birth, is fundamental for the perception of vitality and viability of newborn goats.(AU)

Avaliação da maturidade pulmonar de cabritos nascidos a termo e prematuros / [Evaluation of lung maturity of term and premature kid]

Avaliou-se a maturidade pulmonar de cabritos no líquido amniótico de suas mães pela coloração de Shor, pelo azul de Nilo e pela contagem de corpos lamelares, bem como a vitalidade e os níveis de glicose e lactato séricos em cabritos nascidos a termo e prematuros. Para tanto, foram utilizados 32 cabritos, divididos em três grupos, a saber: grupo I: cabritos nascidos de cesarianas com 149 dias de gestação; grupo II: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação; e grupo III: cabritos nascidos de cesarianas com 143 dias de gestação, oriundos de mães que receberam, por via intramuscular, 20mg/cabra de dexametasona, 36 horas antes da cirurgia eletiva. A coloração de Shorr e a contagem de corpos lamelares demonstraram ser métodos diagnósticos promissores para a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos caprinos. Contudo, a administração de dexametasona nas cabras no período antenatal não influenciou a maturidade fetal. Constatou-se, entretanto, que a avaliação física do paciente, logo após o nascimento, também se mostra fundamental no que tange à percepção da vitalidade e da viabilidade de cabritos recém-nascidos.(AU)

Pulmonary maturity of goats in their amniotic fluid was evaluated by Shor, Nile blue staining, and lamellar body count, as well as vitality and serum glucose and lactate levels in term and premature goats. Twenty-four kids were divided into three groups: group I: comprised of eight animals born by cesarean section with 149 days of gestation; group II: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation; and group III: comprised of eight animals born by cesarean section with 143 days of gestation, in which the does received intramuscular dexamethasone (20mg/goat) 36 hours prior to elective cesarean section. Shorr staining and lamellar body count have shown to be promising diagnostic methods for the assessment of lung maturity in goat neonates. However, the administration of dexamethasone to goats during antenatal period did not influence fetal maturity. It was verified that the physical evaluation of the patient, shortly after birth, is fundamental for the perception of vitality and viability of newborn goats.(AU)

Assessment of fetal lung maturity using analysis of amniotic fluid from ewes that gave birth prematurely and at term / Avaliação da maturidade pulmonar fetal utilizando a análise de líquido amniótico de ovelhas que deram à luz prematuramente e a termo

The aim of this study was to evaluate the lung maturity of premature and full-term lambs by analyzing amniotic fluid using the following methods: Clements test, Nile blue cytology test, hematoxylin-Shorr stain, lamellar body count, and radiographic tests. The use of these methods is intended to identify high-risk newborns and provide immediate clinical intervention after birth. Altogether, 56 animals (24 ewes and 32 lambs) were included in the study and divided into 3 groups. Group I consisted of 8 ewes that were at approximately 145 days of gestation; this group delivered 10 lambs naturally. Group II consisted of 8 ewes that were at 138 days' gestation; this group delivered 11 lambs by cesarean section. Group III consisted of 8 ewes at 138 days' gestation; this group was administered intramuscular dexamethasone (16mg/animal) 36 hours prior to a cesarean section. Group III delivered11 lambs. Cytological tests were performed using a microscope with a maximum magnification of 1000x, while the Clements test was visually observed by one of the researchers. Amnioticfluid lamellar body counts were measured using transmission electron microscopy. Among the staining methods, hematoxylin-Shorr was reliable, and Group III had a greater number of orangeophilic cells when compared to Group II, probably due to corticoid administration. The Clements test showed pulmonary maturity in approximately 20% of Group I lambs and Group II showed 9.1% of bubbles; however, Group III had the highest pulmonary maturity percentage (36.4%). The lamellar bodies were measured, and all groups had sizes between 0.019 and 0.590μm. Radiographic evaluation revealed that the majority of lambs presented some level of pulmonary radiodensity, indicating an acinar pattern at birth. These results are in line with the expectations of each group. We found that the normal group showed greater pulmonary maturity, whereas Group II presented pulmonary immaturity, which is expected because this group comprised lambs born prematurely and Group III showed pulmonary maturity almost comparable to the normal delivery group (Group I). This is due to the fact that although these animals are premature, the use of dexamethasone helped in pulmonary maturation. Therefore, these pulmonary maturity tests are considered effective when more than one technique is used and can be used routinely in the care of a pregnant ewe in labor, where a simple collection of amniotic fluid can predict a high-risk pregnancy and alert the veterinarian if the newborn needs intensive supportive treatment.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturidade pulmonar de cordeiros prematuros e a termo por meio da análise do líquido amniótico utilizando os seguintes métodos: teste de Clements, teste de citologia do azul do Nilo, coloração de hematoxilina-Shorr, contagem de corpos lamelares e testes radiográficos. Um desses métodos tem por objetivo identificar recém-nascidos de alto risco e fornecer intervenção clínica imediata após o nascimento. Ao todo, 56 animais (24 ovelhas e 32 cordeiros) foram incluídos no estudo e divididos em 3 grupos. O grupo I foi composto por 8 ovelhas com aproximadamente 145 dias de gestação; este grupo deu à luz 10 cordeiros naturalmente. O Grupo II foi composto por 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo deu à luz 11 cordeiros por cesariana. Grupo III consistiu de 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo recebeu dexametasona intramuscular (16 mg / animal) 36 horas antes de uma cesariana. O Grupo III entregou 11 cordeiros. Os testes citológicos foram realizados em microscópio com aumento máximo de 1000x, enquanto o teste de Clements foi observado visualmente por um dos pesquisadores. A contagem de corpos lamelares de líquido amniótico foi medida usando microscopia eletrônica de transmissão. Dentre os métodos de coloração, o hematoxilina-Shorr foi confiável, sendo que o Grupo III apresentou maior número de células orangeofílicas quando comparado ao grupo II, provavelmente devido à administração de corticóide. O teste de Clements mostrou maturidade pulmonar em aproximadamente 20% dos cordeiros do Grupo I e o Grupo II apresentou 9,1% de bolhas; entretanto, o Grupo III apresentou o maior percentual de maturidade pulmonar (36,4%). Os corpos lamelares foram medidos e todos os grupos apresentaram tamanhos entre 0,019 e 0,590μm. A avaliação radiográfica revelou que a maioria dos cordeiros apresentava algum grau de radiodensidade pulmonar, indicando padrão acinar ao nascimento. Esses resultados estão alinhados com as expectativas de cada grupo. Verificamos que o grupo normal apresentou maior maturidade pulmonar, enquanto o Grupo II apresentou imaturidade pulmonar, o que é esperado por se tratar de cordeiros nascidos prematuramente e o Grupo III apresentou maturidade pulmonar quase comparável ao grupo de parto normal (Grupo I). Isso se deve ao fato de que, embora esses animais sejam prematuros, o uso da dexametasona auxiliou na maturação pulmonar. Portanto, esses testes de maturidade pulmonar são considerados eficazes quando mais de uma técnica são utilizadas e podem ser usadas rotineiramente no cuidado de uma ovelha gestante em trabalho de parto, onde uma simples coleta de líquido amniótico pode prever uma gravidez de alto risco e alertar o veterinário se o recém-nascido precisa de tratamento de suporte intensivo.(AU)

Assessment of fetal lung maturity using analysis of amniotic fluid from ewes that gave birth prematurely and at term / Avaliação da maturidade pulmonar fetal utilizando a análise de líquido amniótico de ovelhas que deram à luz prematuramente e a termo

The aim of this study was to evaluate the lung maturity of premature and full-term lambs by analyzing amniotic fluid using the following methods: Clements test, Nile blue cytology test, hematoxylin-Shorr stain, lamellar body count, and radiographic tests. The use of these methods is intended to identify high-risk newborns and provide immediate clinical intervention after birth. Altogether, 56 animals (24 ewes and 32 lambs) were included in the study and divided into 3 groups. Group I consisted of 8 ewes that were at approximately 145 days of gestation; this group delivered 10 lambs naturally. Group II consisted of 8 ewes that were at 138 days' gestation; this group delivered 11 lambs by cesarean section. Group III consisted of 8 ewes at 138 days' gestation; this group was administered intramuscular dexamethasone (16mg/animal) 36 hours prior to a cesarean section. Group III delivered11 lambs. Cytological tests were performed using a microscope with a maximum magnification of 1000x, while the Clements test was visually observed by one of the researchers. Amnioticfluid lamellar body counts were measured using transmission electron microscopy. Among the staining methods, hematoxylin-Shorr was reliable, and Group III had a greater number of orangeophilic cells when compared to Group II, probably due to corticoid administration. The Clements test showed pulmonary maturity in approximately 20% of Group I lambs and Group II showed 9.1% of bubbles; however, Group III had the highest pulmonary maturity percentage (36.4%). The lamellar bodies were measured, and all groups had sizes between 0.019 and 0.590μm. Radiographic evaluation revealed that the majority of lambs presented some level of pulmonary radiodensity, indicating an acinar pattern at birth. These results are in line with the expectations of each group. We found that the normal group showed greater pulmonary maturity, whereas Group II presented pulmonary immaturity, which is expected because this group comprised lambs born prematurely and Group III showed pulmonary maturity almost comparable to the normal delivery group (Group I). This is due to the fact that although these animals are premature, the use of dexamethasone helped in pulmonary maturation. Therefore, these pulmonary maturity tests are considered effective when more than one technique is used and can be used routinely in the care of a pregnant ewe in labor, where a simple collection of amniotic fluid can predict a high-risk pregnancy and alert the veterinarian if the newborn needs intensive supportive treatment.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a maturidade pulmonar de cordeiros prematuros e a termo por meio da análise do líquido amniótico utilizando os seguintes métodos: teste de Clements, teste de citologia do azul do Nilo, coloração de hematoxilina-Shorr, contagem de corpos lamelares e testes radiográficos. Um desses métodos tem por objetivo identificar recém-nascidos de alto risco e fornecer intervenção clínica imediata após o nascimento. Ao todo, 56 animais (24 ovelhas e 32 cordeiros) foram incluídos no estudo e divididos em 3 grupos. O grupo I foi composto por 8 ovelhas com aproximadamente 145 dias de gestação; este grupo deu à luz 10 cordeiros naturalmente. O Grupo II foi composto por 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo deu à luz 11 cordeiros por cesariana. Grupo III consistiu de 8 ovelhas com 138 dias de gestação; este grupo recebeu dexametasona intramuscular (16 mg / animal) 36 horas antes de uma cesariana. O Grupo III entregou 11 cordeiros. Os testes citológicos foram realizados em microscópio com aumento máximo de 1000x, enquanto o teste de Clements foi observado visualmente por um dos pesquisadores. A contagem de corpos lamelares de líquido amniótico foi medida usando microscopia eletrônica de transmissão. Dentre os métodos de coloração, o hematoxilina-Shorr foi confiável, sendo que o Grupo III apresentou maior número de células orangeofílicas quando comparado ao grupo II, provavelmente devido à administração de corticóide. O teste de Clements mostrou maturidade pulmonar em aproximadamente 20% dos cordeiros do Grupo I e o Grupo II apresentou 9,1% de bolhas; entretanto, o Grupo III apresentou o maior percentual de maturidade pulmonar (36,4%). Os corpos lamelares foram medidos e todos os grupos apresentaram tamanhos entre 0,019 e 0,590μm. A avaliação radiográfica revelou que a maioria dos cordeiros apresentava algum grau de radiodensidade pulmonar, indicando padrão acinar ao nascimento. Esses resultados estão alinhados com as expectativas de cada grupo. Verificamos que o grupo normal apresentou maior maturidade pulmonar, enquanto o Grupo II apresentou imaturidade pulmonar, o que é esperado por se tratar de cordeiros nascidos prematuramente e o Grupo III apresentou maturidade pulmonar quase comparável ao grupo de parto normal (Grupo I). Isso se deve ao fato de que, embora esses animais sejam prematuros, o uso da dexametasona auxiliou na maturação pulmonar. Portanto, esses testes de maturidade pulmonar são considerados eficazes quando mais de uma técnica são utilizadas e podem ser usadas rotineiramente no cuidado de uma ovelha gestante em trabalho de parto, onde uma simples coleta de líquido amniótico pode prever uma gravidez de alto risco e alertar o veterinário se o recém-nascido precisa de tratamento de suporte intensivo.(AU)

A new organ preservation solution for static cold storage of the liver. Amniotic fluid

Purpose: To evaluate the effect of amniotic fluid in liver preservation in organ transplantation, and compare it with standard preservation solutions. Methods: The groups consisted of Group 1: Ringer Lactate (RL) group, Group 2: HTK group, Group 3: UW group, Group 4: AF group. The livers of rats from Group 1, 2, 3, and 4 were perfused and placed into falcon tubes containing RL, HTK, UW, and AF solutions at +4°C, respectively. The tubes were stored for 12 hours in the refrigerator at +4°C. Tissue samples were taken at the 6th and 12th hours for histopathological examinations of the perfused livers, and storage solutions for biochemical analyzes at 6th and 12th hours. Results: AF was shown to maintain organ viability by reducing the number of cells undergoing apoptosis. Histopathological changes such as sinusoidal dilatation, hydropic degeneration, and focal necrosis were found to be similar to the groups in which the standard organ preservation solutions were used. Additionally, the results of INOS, IL-10, and TNF-,which were evaluated immunohistochemically, have been shown to be similar to the UW and HTK groups. Conclusions: AF provided conservation similar to UW and HTK in the 12-hour liver SCS process. The fact that apoptosis values are comparable to standard preservation solutions supports the success of AF in the cold storage of the liver.(AU)

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.

Fluido amniótico, alternativa eficiente para obtenção de células-tronco mesenquimais multipotentes / Amniotic fluid, efficient alternative to obtain multipotent mesenchymal stem cells

Na última década houve um crescente interesse na investigação quanto à presença de células-tronco no fluido amniótico, devido a facilidade de obtenção, isolamento e cultivo in vitro. Além disso, a utilização do fluido como fonte de células-tronco possibilita a obtenção de células com alto grau de indiferenciação e elevada taxa de proliferação in vitro e grande capacidade de diferenciação. Todas estas vantagens tornam o líquido amniótico uma fonte atrativa de células-tronco para utilização em biotecnologias reprodutivas, como a clonagem e transgênese, bem como ensaios clínicos e terapias celulares em animais para posterior utilização em seres humanos. Este artigo apresenta um panorama da pesquisa científica com células-tronco derivadas do fluido amniótico no mundo, a partir de levantamento bibliográfico de artigos científicos de pesquisadores brasileiros e estrangeiros.

In the last decade there has been a growing interest in investigation of presence of stem cells in amniotic fluid due to the ease of obtaining, isolating and in vitro culture. In addition, the use of amniotic fluid as a source of stem cells makes it possible to obtain cells with a high degree of indifferentiation and a high rate of in vitro proliferation and a great capacity for differentiation. All of these advantages make amniotic fluid an attractive source of stem cells for use in reproductive biotechnologies, such as cloning and transgenesis, as well as clinical trials in animals for further use in humans. This article presents a panorama of the scientific research with stem cells derived from amniotic fluid in the world, from a bibliographical survey of scientific articles of Brazilian and foreign researchers.

Efeito do DMSO e glicerol na criopreservação de células tronco mesenquimais derivadas de líquido amniótico de fetos caprinos / Effect of DMSO and glycerol in criopreservation of mesenquimial trunk cells derived from amniotic fluid of caprine fetus

O objetivo do estudo foi avaliar a viabilidade e taxa de proliferação de células-tronco mesenquimais (CTMs) derivadas do líquido amniótico (LA) após cultivo in vitro, e o efeito de dois agentes crioprotetores. Foram utilizadas 9 cabras prenhes. As amostras foram colhidas de fetos caprinos por laparotomia, e delas obtidos as (CTMs) e submetidas ao cultivo in vitro. Posteriormente, uma fração das células foi criopreservada em meio DMSO (dimetilsulfóxido) ou glicerol e vitrificadas para posterior avaliação da viabilidade. O meio DMSO promoveu melhores taxas de sobrevida celular preservando as características de pluripotencialidade e de replicação in vitro.(AU)

The objective of the study was to evaluate the viability and proliferation rate of mesenchymal stem cells (MTCs) derived from amniotic fluid (LA) after in vitro culture, and the effect of two cryoprotective agents. 9 pregnant goats were used. The samples were collected from goat fetuses by laparotomy, and from them (CTMs) were obtained and cultured in vitro. Subsequently, a fraction of the cells were cryopreserved in DMSO (dimethylsulfoxide) or glycerol medium and vitrified for further evaluation of viability. The DMSO medium promoted better cell survival rates while preserving the characteristics of pluripotency and replication in vitro.(AU)

Fluido amniótico, alternativa eficiente para obtenção de células-tronco mesenquimais multipotentes / Amniotic fluid, efficient alternative to obtain multipotent mesenchymal stem cells

Na última década houve um crescente interesse na investigação quanto à presença de células-tronco no fluido amniótico, devido a facilidade de obtenção, isolamento e cultivo in vitro. Além disso, a utilização do fluido como fonte de células-tronco possibilita a obtenção de células com alto grau de indiferenciação e elevada taxa de proliferação in vitro e grande capacidade de diferenciação. Todas estas vantagens tornam o líquido amniótico uma fonte atrativa de células-tronco para utilização em biotecnologias reprodutivas, como a clonagem e transgênese, bem como ensaios clínicos e terapias celulares em animais para posterior utilização em seres humanos. Este artigo apresenta um panorama da pesquisa científica com células-tronco derivadas do fluido amniótico no mundo, a partir de levantamento bibliográfico de artigos científicos de pesquisadores brasileiros e estrangeiros.(AU)

In the last decade there has been a growing interest in investigation of presence of stem cells in amniotic fluid due to the ease of obtaining, isolating and in vitro culture. In addition, the use of amniotic fluid as a source of stem cells makes it possible to obtain cells with a high degree of indifferentiation and a high rate of in vitro proliferation and a great capacity for differentiation. All of these advantages make amniotic fluid an attractive source of stem cells for use in reproductive biotechnologies, such as cloning and transgenesis, as well as clinical trials in animals for further use in humans. This article presents a panorama of the scientific research with stem cells derived from amniotic fluid in the world, from a bibliographical survey of scientific articles of Brazilian and foreign researchers. (AU)

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid / Avaliação maturidade pulmonar em neonatos bovinos: análise do líquido amniótico

Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.(AU)

O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.(AU)

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid / Avaliação maturidade pulmonar em neonatos bovinos: análise do líquido amniótico

Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.(AU)

O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.(AU)

Evaluation of pulmonary maturity in bovine neonates: analysis of amniotic fluid

ABSTRACT: Considering the representativeness of dairy cattle in our country, the concern about the mortality rates of the animals increases each time. Regarding to calf mortality, the Respiratory Distress Syndrome (RDS) has an important relevance during the neonatal period, and it is present in immature lungs. The amniotic fluid is in direct contact with the fetus, and it is able to offer evidence about his maturity. The aim of this study was to standardize the characteristics of the amniotic fluid, color, aspect, viscosity, quantification of lamellar body and surfactant evaluation by the Clements test and cytology, of term-born, mature and healthy calves. There were used 50 Black and White Holstein calves, which mothers were observed at calving in order to collect the amniotic fluid by puncture in the moment of exposure of the fetal membrane through the vaginal canal. Most amniotic fluid had a clear and hazy appearance due to varying degrees of viscosity and the presence or absence of clots. The Clements test could be adapted to the bovine species by the modification consisting in the addition of 3mL of amniotic fluid and 1mL of 95% ethanol. The methodology of the lamellar body count by the automated particle counter is not applicable for the bovine because of the small size of their lamellar body. The Nile Blue staining is unsatisfactory on predicting fetal maturity on the bovine species, different from cytology using Hematoxylin-Shorr stain. The presence of orange cells, increase in large amounts at the end of pregnancy. The cell stained orange counting, cells which are found in great amounts at the end of pregnancy. The present study stablished new parameters for evaluation of fetal and pulmonary maturity in the bovine species.

RESUMO: O objetivo desse estudo foi reunir novos dados práticos sobre a avaliação da maturidade pulmonar em neonatos bovinos, padronizando as características do líquido amniótico de bezerros maduros e hígidos, o que proporcionará a oportunidade de tratamento precoce dos animais prematuros, evitando prejuízos econômicos, principalmente quando consideramos os animais de alto valor genético. Amostras de líquido amniótico foram coletadas de 50 vacas da Raça Holandesa Preta e Branca. Corpos lamelares foram identificados por microscopia eletrônica de transmissão como estruturas de tamanho aproximado de 130nm, o que impede sua contagem em analisadores automáticos. O teste de Clements sofreu adaptações de técnica e se mostrou viável com a diluição de 3mL de líquido amniótico em 1mL de etanol a 95%. A citologia utilizando o método de Hematoxilina-Shorr, diferentemente do teste de Azul de Nilo, foi eficaz na identificação das células orangiofílicas, indicativas de maturidade fetal. Esses métodos mostraram-se originais e úteis ferramentas para a avaliação de maturidade pulmonar na espécie bovina, porém estudos com bezerros prematuros ainda são necessários.

MONITORAMENTO DOS EFEITOS DA DOENÇA PERIODONTAL NA REPRODUÇÃO: AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA DA CAVIDADE BUCAL E LÍQUIDO AMNIÓTICO DE OVELHAS GESTANTES

A periodontite é uma doença inflamatória que atinge os tecidos de sustentação dos dentes mediada pela presença de microrganismos que resultam em destruição progressiva do ligamento periodontal e osso alveolar, culminando em perda dentária. Em humanos, associações entre bactérias patogênicas periodontais e problemas gestacionais como nascimento prematuro, baixo peso ao nascer e abortos estão bem estabelecidas. Apesar da patogênese das periodontites em ruminantes ser semelhante à observada em humanos, pouco se conhece sobre a correlação entre esta enfermidade e agravos gestacionais. O objetivo deste estudo foi verificar o impacto das doenças periodontais na gestação ovina pela análise clínica e microbiológica da cavidade bucal e líquido amniótico e monitorar alterações hematológicas, placentárias e peso após o parto de ovelhas gestantes e seus respectivos cordeiros. Foram selecionadas dez ovelhas gestantes clinicamente sadias (OGCS) e dez ovelhas gestantes com periodontite (OGP). Foram avaliadas a cavidade oral, microbiota de biofilme dental, líquido amniótico, hemograma e tecido placentário no momento da expulsão fetal para avaliação de presença de alterações inflamatórias. Verificou-se correlação positiva entre sangramento gengival e supuração (ic=0,54), supuração e gengivite marginal (ic=0,34) e gengivite marginal e edema (ic=0,54). Observou-se menor peso no grupo OGP (p=0,013) e seus respectivos cordeiros (p=0,04), quando comparados ao grupo de ovelhas sadias (OGCS). No perfil microbiológico da cavidade bucal, houve diferença significativa entre a ocorrência de bolsas periodontais e a presença de Fusobacterium necrophorum (p= 0,0328), P. asaccharolytica (p=0.0392) e a classe Mollicutes (p= 0,0352). Houve maior incidência do gênero Staphylococcus; (p=0,9107) e o domínio Archaea (p=0,7245) e uma única amostra de P. asaccharolytica (p=0,2685) no líquido amniótico. O grupo OGP apresentou a maior parte de fêmeas com alterações placentárias (70%) dentre elas presença de macrófagos, neutrófilos e plasmócitos, congestão moderada e áreas multifocais de calcificação. A presença de Fusobacterium necrophorum foi estritamente correlacionada aos casos de periodontite, não atingindo os envoltórios fetais.

Periodontitis is an inflammatory disease that affects the tissues that support the teeth. The presence of microorganisms results in progressive destruction of the periodontal ligament and alveolar bone, culminating in tooth loss. In humans, associations between periodontal pathogenic bacteria and gestational problems such as premature birth, low birth weight and abortions are well established. Although the pathogenesis of periodontitis in ruminants is similar to that observed in humans, little is known about the correlation between this disease and pregnancy disorders. The aim of this study was to verify the impact of periodontal diseases on ovine pregnancy by clinical and microbiological analysis of the oral cavity and amniotic fluid and to monitor hematological, placental and weight changes after delivery of pregnant ewes and their respective lambs. Ten clinically healthy pregnant ewes (OGCS) and ten pregnant ewes with periodontitis (OGP) were selected. The oral cavity, dental biofilm microbiota, amniotic fluid, blood count and placental tissue at the time of fetal expulsion were evaluated to assess the presence of inflammatory changes. There was a positive correlation between gingival bleeding and suppuration (ic = 0.54), suppuration and marginal gingivitis (ic = 0.34) and marginal gingivitis and edema (ic = 0.54). Less weight was observed in the OGP group (p = 0.013) and their respective lambs (p = 0.04), when compared to the healthy sheep group (OGCS). In the microbiological profile of the oral cavity, there was a significant difference between the occurrence of periodontal pockets and the presence of Fusobacterium necrophorum (p = 0.0328), P. asaccharolytica (p = 0.0392) and the Mollicutes class (p = 0.0352). There was a higher incidence of the Staphylococcus genus; (p = 0.9107) and the Archaea domain (p = 0.7245) and a single sample of P. asaccharolytica (p = 0.2685) in the amniotic fluid. The OGP group presented the majority of females with placental alterations (70%), among them the presence of macrophages, neutrophils and plasma cells, moderate congestion and multifocal areas of calcification. The presence of Fusobacterium necrophorum was strictly correlated to cases of periodontitis, not reaching the fetal wraps.

Transmissão vertical de Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona em éguas da raça Puro Sangue Inglês (PSI)

As doenças infecto-parasitárias causam prejuízos na criação de equinos. Os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona estão relacionados às doenças neurológicas e reprodutivas em equinos. Em cavalos, T. gondii e Neospora spp. podem ser transmitidos via horizontal e vertical. Sarcocystis neurona causa a Mieloencefalite Protozoária Equina (MEP). Existem poucos estudos que avaliaram a presença dos protozoários em placentas de éguas e até o presente, não foram encontrados trabalhos em amostras de líquido amniótico. A presente dissertação foi dividida em dois capítulos. O capítulo I objetivou detectar e monitorar os anticorpos anti-Toxoplasma gondii, anti-Neospora spp. e anti-Sarcocystis neurona em éguas prenhas e verificar a exposição intra-uterina dos parasitas, pela pesquisa de anticorpos específicos em amostras pré colostrais de potros. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas em três momentos: (1º) dois meses antes do parto; (2º) um mês antes do parto e (3º) no dia do parto. As amostras séricas dos potros foram analisadas antes da ingestão do colostro. O método RIFI (Reação de Imunofluorescência Indireta), nos soros maternos foi realizado nas diluições 1:64 para T. gondii, 1:50 para Neospora spp. e 1:16 para S. neurona. Os soros pré colostrais dos potros foram avaliados sem diluição e na diluição 1:16 para os três protozoários. Nenhuma égua apresentou anticorpos para T. gondii. Em 19,35% das éguas, verificou-se anticorpos anti-Neospora spp. e 29,03% anticorpos anti-S. neurona. Nenhum anticorpo foi detectado nas amostras pré colostrais dos potros. Durante o período gestacional, as éguas apresentaram flutuações nos títulos de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona, com maior soroprevalência no 9º mês para ambos. Neste estudo constatou a presença de anticorpos anti-Neospora spp. e anti-S. neurona em éguas. Nos potros não foram detectados anticorpos. O monitoramento das éguas prenhas soropositivas é importante para a sanidade do animal. O capítulo II objetivou detectar os protozoários Toxoplasma gondii, Neospora spp e Sarcocystis neurona em placentas equinas e líquido amniótico, e descrever lesões causadas pelos parasitas. Amostras de soro de 31 éguas prenhas foram avaliadas pelo método de RIFI como descrito anteriormente. A PCR para os três protozoários foi realizada em amostras de placentas (pool) de 31 éguas e em 30 amostras de líquido amniótico. Para análise histológica foram coletadas quatro regiões da placenta (corno prenhe, corno não prenhe, corpo do útero e estrela cervical). Estruturas parasitárias (cistos) foram observadas em cinco placentas. Na PCR quatro amostras de placenta foram positivas para Neospora spp. e uma para S. neurona. A PCR dos líquidos amnióticos resultou em sete amostras positivas, uma para T. gondii, cinco para Neospora spp. e uma S. neurona. Neospora spp. e Sarcocystis neurona foram detectados em tecidos placentários, demonstrando que estes infectam placenta equina. T. gondii, Neospora spp. e S. neurona foram detectados em amostras de líquido amniótico. Sugere-se que a transmissão transplacentária de T. gondii, Neospora spp. e Sarcocystis neurona ocorra em éguas.

Infectious-parasitic diseases cause damage to horse breeding. Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona are related to neurological and reproductive diseases in horses. In horse T. gondii and Neospora spp. can be transmitted through horizontal and vertical routes. S. neurona causes Equine Protozoan Myeloencephalitis (EPM). There are few studies that have evaluated the presence of protozoa in mares placentas and to date, no studies have been found in samples of amniotic fluid. This dissertation had been divided into two chapters. Chapter I aimed to detect and monitor the antibodies anti-Toxoplasma gondii, antiNeospora spp. and anti-Sarcocystis neurona in pregnant mares and to verify the intrauterine exposure of the parasites by detecting specific antibodies in pre-colostral samples of the foals. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated in three moments: (1st) two months before delivery; (2nd) one month before delivery and (3rd) on the day of the birth. The serum samples from foals were analyzed before ingesting colostrum. The IFAT method (Indirect Immunofluorescence Antibody Test) in maternal serum was performed at 1:64 dilutions for T. gondii, 1:50 for Neospora spp. and 1:16 for S. neurona. Pre colostral serum from foals were tested pure and at 1:16 dilution for the three protozoa. No mare showed antibodies to T. gondii. In 19.35% of the mares were verified anti-Neospora spp.; and 29.03% were verified with anti-S. neurona antibodies. No antibodies were detected in the pre colostral samples of the foals. During the gestational period, the mares showed fluctuations in the anti-Neospora spp. and anti-S. neurona, with higher seroprevalence in the 9th month for both. This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurona in mares.This study has established the presence of anti-Neospora spp. and anti-S. neurone in mares. In foals, no antibodies were detected. Monitoring of pregnant seropositive mares is important for the animal's health. Chapter II aimed to detect the protozoa Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona in equine placentas and amniotic fluid, and to describe the lesions caused by the parasites. Serum samples from 31 pregnant mares were evaluated by the IFAT method as previously described. PCR, for the three protozoans, was performed from the placental samples (pool) of 31 mares and 30 samples of amniotic fluid. For histological analysis, four regions (pregnant horn, not pregnant horn, body of the uterus and cervical star) of the placenta were collected. Parasitic structures (cysts) were observed in five placentas. In PCR, four placenta samples were positive for Neospora spp., and one for S. neurona. The amniotic fluids PCR resulted in seven positive sample, one for T gondii, five for Neospora spp. and a S. neurona. Neospora spp. and Sarcocystis neurona were detected in placental tissues, demonstrating that these infect mares placentas. T. gondii, Neospora spp. and S. neurona were detected in samples of amniotic fluid. It is suggested that the transplacental transmission of Toxoplasma gondii, Neospora spp. and Sarcocystis neurona occurs in mares.

Comparação da composição bioquímica do líquido amniótico equino colhido em diferentes estágios gestacionais e no momento do parto / Comparison of the biochemical composition of equine amniotic fluid collected in different gestational phases and at delivery

A viabilidade e maturidade fetais podem ser estimadas através da avaliação dos fluídos fetais em muitas espécies, no entanto a composição bioquímica do líquido amniótico durante a gestação ainda não está bem definida para a espécie equina. O objetivo deste estudo foi estabelecer e comparar o perfil bioquímico do liquido amniótico em diferentes momentos da gestação e no momento do parto para um melhor entendimento da fisiologia da gestação de equinos. Foram avaliados valores encontrados para pH, osmolaridade, glicose, uréia, creatinina, gamma-GT, sódio, potássio, cloretos e proteína total no liquido amniótico colhido de 122 éguas comparando-se os resultados encontrados entre as colheitas em terço inicial (TI), médio (TM) e final (TF) da gestação e no momento do parto (MP). [...] Valores para gamma GT diferiram apenas entre os grupos TF e MP e mais estudos devem ser conduzidos sobre sua função no liquido amniótico das espécies domésticas. Os valores de sódio e cloretos não diferiram significativamente entre os grupos estudados e as concentrações de potássio diferiram apenas entre os grupos TF e MP refletindo a manutenção do equilíbrio eletrolítico do líquido amniótico equino durante a gestação. As concentrações de proteínas totais variaram de maneira heterogênea entre os grupos, porém todos estes demonstraram baixas concentrações. Concluímos que a composição bioquímica do liquido amniótico equino varia de acordo com o desenvolvimento fetal e pode ser utilizada como mensuração da viabilidade e maturidade do feto no futuro, no entanto devido ao pequeno número de estudos conduzidos e diferenças encontradas em seus resultados, outros estudos devem ser realizados para a melhor definição do perfil bioquímico do líquido amniótico equino durante as fases gestacionais e no momento do parto.(AU)

The viability and fetal maturity can be estimated by biochemical evaluation of the fetal fluids of several species; however the biochemical composition of amniotic fluid during pregnancy is not fully defined for equine. The aim of this study was to establish and compare the biochemical profile of amniotic fluid in different moments of pregnancy and at delivery, in order to better explain the peculiarities of the physiology of pregnancy in mares. The values founded for pH, osmolarity, glucose, urea, creatinine, gamma-GT, Sodium, potassium, chloride and total protein were evaluated in amniotic fluid collected from 122 mares comparing the results between the initial-third (IT), mid-third (MT) and latter-third (FT) of gestation and at delivery (D). [...] Concentrations of urea tended to be statistically different in at least one of the groups. A significant increase in creatinine concentrations was observed during the initial-third, medium-third and the final-third of pregnancy and the value found at delivery remained equal to final-third. Values for Gamma GT differed only between FT and D groups and more studies should be conducted about its role in the amniotic fluid of domestic species. For the sodium and chloride ions, they were not significantly different between the studied stages, and the potassium ion was significantly different only between FT and D reflecting the maintenance of electrolyte balance of the amniotic fluid during equine pregnancy. Total protein concentrations were different between groups, but all the groups showed low concentrations. We conclude that the values of the parameters studied varied according with the fetal development and can be used for the evaluation of fetal viability and maturity in the future, but the scarce number of studies in this area and the difference between the results found in literature demonstrate the need of more works to establish the biochemical profile of equine amniotic fluid during pregnancy and at delivery.(AU)

Comparação da concentração de citocinas no líquido amnióticos de bezerros Nelore concebidos por meio de diferentes biotecnologias da reprodução / Comparison of the cytokines concentration in amniotic fluid of the Nelore calves conceived by reproduction biotechnologies

O objetivo deste trabalho foi determinar as concentrações de TNF-α, IFN-y, IL-6 e IL-8 no fluido amniótico de bezerros concebidos por meio de PIV, TE e IA no momento do parto. Utilizaram-se sessenta animais divididos em grupos: 1-vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de doadoras superovuladas (TE); 2-vinte vacas gestando bezerros Nelore de inovulações de embriões provenientes de PIV; 3- vinte vacas Nelore gestando bezerros de IA. Durante a fase de expulsão, realizou-se a colheita do líquido amniótico que foi depositado em tubo plástico e congelado em freezer. Realizou-se ELISA para a dosagem das citocinas, cujas concentrações foram submetidas ao teste de Kruskal-Wallis, com p<0.05. Para TNF-a verificou-se que o grupo TE não apresentou diferença na concentração em relação ao grupo PIV e IA (p>0,05). Contudo no grupo IA, a concentração de TNF-α foi inferior ao do grupo PIV (p<0,05). Para IFN-y não foi observada diferença significativa entre as concentrações nos diferentes grupos (p>0.05). Apenas duas amostras do grupo PIV apresentaram concentração detectável de IL-6 e para IL-8 apenas uma amostra do mesmo grupo. Os resultados desse experimento podem ser adotados como padrões para gestação normal de bovinos. Entretanto novas pesquisas na área da imunologia da gestação são necessárias para melhor descrever o papel das citocinas na manutenção da gestação e no desencadeamento do trabalho de parto em bovinos.

This study aimed to determine the levels of TNF-α, IFN-Y, IL-6 and IL-8 in amniotic fluid of calves from IVP compared with those obtained by conventional embryo transfer and artificial insemination at the delivery. Sixty animals used were divided into groups: 1 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves of embryos transfer conventional method (ET); 2 - Twenty Nelore cross-breed cows pregnant with Nelore calves obtained by in vitro production after follicular aspiration; 3 Twenty pregnant Nelore cows bearing calves obtained by artificial insemination (AI). All births of the animals of the experiment were observed. During the expulsion phase the amnion was punctured and 15mL of fluid were collected using a needle and syringes compatible. The material was deposited on plastic tube and frozen in freezer for later analysis. The cytokines levels were measured by immunoenzymatic assay. The Kruskal-Wallis Test was used for statistical analysis with 5% significance. The TNF-a levels in the animals of the ET group showed no significant difference the concentration of this cytokine in the group AI and IVP. However for group AI were statistically lower than the IVP group (p<0.05). Furthermore, the median of the INF wasn't different significantly between the groups (p>0.05). Only samples 15 and 18 of the IVP group had detectable concentrations of IL-6 and to IL-8 only 15 of the sample the same group. The results of this experiment can be adopted as standards for normal pregnancy in cattle, since there is no report of such literature. However new researches in immunology of pregnancy are necessary to describe the role of cytokines in both the maintenance of pregnancy and in the delivery labor for the bovine specie.

Análise bioquímica dos líquidos fetais e citologia do fluido amniótico da fêmea de Mocó (Kerodon rupestris) / Biochemical analysis of fetal fluids and cytology of the amniotic fluid of female Mocó (Kerodon rupestris)

Foram utilizados 10 sistemas genitais femininos de mocós (Kerodon rupestris) para estabelecer parâmetros de referência relativos à osmolaridade, pH, cálcio, fósforo, uréia, creatinina, glicose e proteínas totais. Os animais foram criados em cativeiro no CEMAS (Centro de Criação de Animais Silvestres), Mossoró - RN. As fêmeas estavam da metade (30-45 dias) para o final da gestação (65-70 dias). As bolsas amnióticas e alantoideanas foram puncionadas individualmente para colheita dos líquidos fetais, que foram centrifugados e analisados posteriormente. Para o líquido amniótico, as concentrações médias em mg/dl foram: glicose = 45,87 ± 22,38; cálcio = 6,31 ± 1,24; fósforo = 1,64 ± 0,72; creatinina = 0,45 ± 0,12; uréia = 34,03 ± 5,96; proteínas totais = 31,24 ± 16,67. Para o líquido alantoideano, as concentrações médias em mg/dl foram: glicose = 59,17 ± 10,85; cálcio = 5,58 ± 0,59; fósforo = 1,27 ± 0,73; creatinina = 0,38 ± 0,38; uréia = 31,49 ± 2,28; proteínas totais = 30,70 ± 18,39. Foram observadas pequenas oscilações entre as concentrações dos parâmetros bioquímicos do fluido amniótico e alantoideano. Estas concentrações são determinadas, provavelmente, pela atividade metabólica materno-fetal. A análise das células do fluido amniótico revelou quatro tipos celulares. (AU)

The aim of the present work was to study certain biochemical characteristics of fetal fluids of the female mocó (Kerodon rupestris), by assesment of the following parameters present in the amniotic and allantoic fetal fluids: osmolarity, pH, calcium, phosphorous, total protein, urea, creatinina and glycose. Ten genital systems of mocós were sampled (gestation = 30-45 and 65-70 days). The amniotic and allantoic sacs were punctured and the fetal fluid obtained for posterior analysis. It was observed the following concentrations (mg/ml) in the amniotic fluid: glycose= 45,87 ± 22,38; calcium = 6,31 ± 1,24; phosphorus = 1,64 ± 0,72; creatinine = 0,45 ± 0,12; urea = 34,03 ± 5,96; total protein = 31,24 ± 16,67. In the allantoic fluid the concentrations were: : glycose = 59,17 ± 10,85; calcium = 5,58 ± 0,59; phosphorous = 1,27 ± 0,73; creatine = 0,38 ± 0,38; urea = 31,49 ± 2,28; total protein = 30,70 ± 18,39. Results obtained from the analisys of the composition of fetal fluids showed small oscillations between the amniotic and the allantoic fluids. Their concentrations, probably, are determined by the materno-fetal metabolic activity. Amniotic fluid cytology showed four cells types. (AU)