Resumo

Background: Cerebral babesiosis is a significant cause of mortality in calves, as it can be transmitted through the placenta during gestation and presents with hemolytic and/or neurological symptoms. However, the role of this agent as a cause of abortion is still poorly understood. In endemic areas, the disease primarily affects cattle between the ages of 1 and 12 months and occasionally neonates. This study aimed to describe the epidemiological, clinical, anatomopathological, molecular, and differential diagnostic aspects of a naturally infected newborn Nelore calf. Case: A newborn Nelore calf from Mato Grosso do Sul was discovered dead 1 h after birth and was subjected to necropsy, cytopathological and histopathological examinations by the Pathological Anatomy Laboratory (LAP) at the Federal University of Mato Grosso do Sul (UFMS), as well as complementary in situ hybridization (ISH) and polymerase chain reaction (PCR) tests. Hemoparasite research yielded negative results in all cows within the herd, including the mother of the necropsied calf, which were all clinically healthy. The clinical and hematological examination results of the cows were normal. At necropsy, the calf appeared thin, with a moderately jaundiced carcass and multiple petechiae on the pleural and pericardial surfaces. The lung was inflated until the opening of the thoracic cavity and floated when immersed in formalin, indicating that the calf was born alive and breathing. The spleen and liver were moderately enlarged with rounded edges, and the liver appeared slightly orange. The gray matter of the brain was significantly cherry red. Histologically, the central nervous system capillaries were slightly congested, with numerous punctiform and basophilic structures observed in the erythrocytes obliterating these vessels, either alone or in pairs, measuring 1 to 2 µm in diameter, which were morphologically consistent with Babesia bovis. In the cytological evaluation of the imprint slides of the brain cortex, blood capillaries filled with erythrocytes parasitized by solitary or paired punctiform basophilic structures, approximately 1 µm in diameter, morphologically compatible with B. bovis, were detected. Positive labeling for Babesia spp. was observed in the ISH ex-amination, while the PCR identified B. bovis and B. bigemina in were identified in the brain fragments. The macroscopic findings, including pale or icteric mucous membranes, yellow and enlarged liver, and splenomegaly observed in cases of anaplasmosis, may be confused with those of cerebral babesiosis when the latter does not present with hemoglobinuria. Brain congestion indicates B. bovis infection but does not rule out co-infection with Anaplasma marginale in this case, although this rickettsia was not identified in the blood smear. Discussion: The diagnosis of Babesia bovis infection was based on epidemiological and histological data, as well as the identification of the protozoan in spleen and brain smears and through PCR and ISH exams, which are highly sensitive and can aid in the diagnosis of B. bovis in cases of perinatal deaths. In situ hybridization is effective in cases where the material has autolysis, as the technique allows the genetic material of the agent to be associated with the lesion, even with tissue alterations caused by fixation in formalin. The findings of this study highlight the importance of considering this disease as a differential diagnosis among those that cause abortions or neonatal losses in cattle and emphasize the importance of conducting anatomopathological exams for definitive diagnosis.

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Abstract Serum and DNA samples from 15 naturally infected calves in Seropédica, Brazil, were obtained quarterly from birth to 12 months of age, in order to longitudinally evaluate their humoral immune response against Babesia bovis and the merozoite surface antigen diversity of B. bovis. Anti-B. bovis IgG antibodies were detected by an indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Using DNA amplification, sequencing and phylogenetic analysis, the genetic diversity of B. bovis was assessed based on the genes that encode merozoite surface antigens (MSA-1, MSA-2b and MSA-2c). The serological results demonstrated that up to six months of age, all the calves developed active immunity against B. bovis. Among the 75 DNA samples evaluated, 0, 3 and 5 sequences of the msa-1, msa-2b and msa-2c genes were obtained, respectively. The present study demonstrated that the msa-2b and msa-2c gene sequences amplified from blood DNA of B. bovis-positive calves were genetically diversified. These data emphasize the importance of conducting deeper studies on the genetic diversity of B. bovis in Brazil, in order to design diagnostic antigens and vaccines in the future.

Resumo Para avaliar longitudinalmente a resposta imune humoral anti-B. bovis e a diversidade genética de antígenos de superfície de merozoítos de B. bovis, entre bezerros naturalmente infectados em Seropédica, Brasil, amostras de soro e DNA de 15 bezerros foram obtidas trimestralmente, desde o nascimento até 12 meses de idade. Anticorpos IgG para B. bovis foram detectados pelos testes de Imunofluorescência Indireta e Ensaio de Imunoadsorção Enzimático Indireto. Usando-se amplificação de DNA, sequenciamento e análises filogenéticas, a diversidade genética de B. bovis, com base nos genes que codificam antígenos de superfície de merozoítos (MSA-1, MSA-2b e MSA-2c) foi investigada. Os resultados da sorologia demonstraram que, até os seis meses de idade, todos os bezerros desenvolveram imunidade ativa contra B. bovis. Entre as 75 amostras de DNA avaliadas, foram obtidas 0, 3 e 5 sequências dos genes msa-1, msa-2b e msa-2c. O presente estudo demonstrou que sequências dos genes msa-2b e msa-2c amplificadas a partir de amostras de sangue positivas para B. bovis de bezerros de Seropédica, foram geneticamente distintas. O presente trabalho realça a importância de se realizar estudos aprofundados sobre a diversidade genética de B. bovis no Brasil, objetivando o desenvolvimento de antígenos para o diagnóstico e vacinas no futuro.

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Babesiose cerebral é uma enfermidade causada pelo protozoário Babesia bovis. O agente faz parte do complexo Tristeza Parasitária Bovina, uma das mais importantes doenças parasitárias em bovinos. O presente estudo relata um surto causado por B. bovis em vinte bezerros de aproximadamente 7 a 25 dias de idade. O surto ocorreu entre março e junho de 2015, na região sul do Brasil, área de instabilidade enzoótica para a Tristeza Parasitária Bovina. O diagnóstico foi realizado pela epidemiologia, lesões macroscópicas e pela presença de numerosas formas parasitárias de Babesia bovis em capilares encefálicos, observados em imprints corados por Giemsa. Surtos de babesiose por B. bovis cerebral nos primeiros dias de vida de bezerros é incomum, porém não pode ser desconsiderada em surtos com alta letalidade em áreas de instabilidade enzoótica.(AU)

Cerebral babesiosis is a protozoan disease caused by Babesia bovis. This parasite belongs to the bovine parasitic complex of tick-borne diseases that affect livestock worldwide. The present study reports an outbreak caused by B. bovis affected twenty 7-25 day-old calves. Outbreak occurred from May to July 2015 in the south of Brazil, where there is an area of enzootic instability for cattle tick fever. The macroscopic lesions were anemia, hemoglobinuria, splenomegaly, hepatomegaly, yellow liver and cherry-pink discoloration of cerebral and cerebellar cortex. The diagnosis was based on epidemiology, necropsy and microscopic findings in the brain that showed B. bovis in the capillary vessels of the brain in imprints stained by Giemsa. Cases of cerebral babesiosis by Babesia bovis in such young calves are uncommon but should be considered as a diagnosis possibility when there is high mortality rate in areas ofen zootic instability.(AU)

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Este estudo avaliou a incidência de infecções naturais pelos agentes da tristeza parasitária bovina (TPB), Anaplasma marginale, Babesia bovis e Babesia bigemina, em bezerros nascidos em cinco fazendas do semiárido paraibano. Em cada fazenda, foram coletadas amostras de sangue de 6 a 14 bezerros a cada 14 dias durante os primeiros 12 meses de vida de cada animal. As amostras de sangue foram processadas por microhematócrito e testadas por PCR para detecção de DNA de A. marginale, B. bovis e B. bigemina. Em paralelo, foram quantificadas as infestações por carrapatos nos bovinos nas cinco fazendas, assim como as populações de tabanídeos em três fazendas. De 41 bezerros monitorados durante o primeiro ano de vida, 25 (61,0%) apresentaram PCR positivo para A. marginale, 7 (17,1%) para B. bigemina e 3 (7,3%) para B. bovis. Os valores de incidência da infecção por A. marginale variaram de 83,3% a 100% em quatro fazendas. A infecção por B. bigemina ocorreu em bezerros de apenas duas fazendas (incidências de 12,5% e 85,7%) e a por B. bovis em apenas uma (incidência de 42,8%). Em uma fazenda os 14 bezerros permaneceram negativos para A. marginale, B. bigemina e B. bovis durante os 12 meses de acompanhamento. Os resultados de PCR foram confirmados por sequenciamento de DNA de produtos amplificados. A presença de carrapatos Rhipicephalus (Boophilus) microplus foi verificada somente em duas propriedades, nas quais houve infecção por A. marginale, B. bigemina e B. bovis (este último agente em apenas uma delas). Foram capturados 930 tabanídeos no estudo, a maioria durante os períodos de chuvas na região; 70,7% dos tabanídeos corresponderam a Tabanus claripennis. Houve associação significativa entre PCR positivo para A. marginale ou B. bigemina e menores valores de hematócrito. Este estudo demonstra que, mesmo avaliando apenas cinco propriedades rurais, a incidência dos agentes da TPB ocorreu de forma heterogênea na região, corroborando o status de área de instabilidade enzoótica para TPB previamente relatado para o semiárido paraibano.(AU)

This study evaluated the incidence of natural infection by agents of cattle tick fever (CTF), Anaplasma marginale, Babesia bovis and Babesia bigemina in calves born in five farms within the semiarid region of Paraíba state, Brazil. In each farm, blood samples were collected from 6 to 14 calves every 14 days during the first 12 months of life of each animal. Blood samples were processed by microhematocrit and tested by PCR for detection of DNA of A. marginale, B. bovis and B. bigemina. In parallel, the tick infestations on animals were quantified in the five farms, as well as populations in horseflies in three farms. From a total of 41 calves monitored during the first year of life, 25 (61.0%) had positive PCR for A. marginale, 7 (17.1%) for B. bigemina and 3 (7.3%) to B. bovis. Incidence values for A. marginale infection ranged from 83.3% to 100% in four farms. Infection with B. bigemina in calves was detected at only two farms (incidence of 12.5% and 85.7%) and by B. bovis in just one (42.8% incidence). On one farm 14 calves remained negative for A. marginale, B. bigemina and B. bovis during the 12 month follow-up. PCR results were confirmed by DNA sequencing of amplified products. The presence of Rhipicephalus (Boophilus) microplus was found only in two farms in which there was infection by A. marginale, B. bigemina and B. bovis (the latter agent in only one of them). A total of 930 horseflies were captured in the study, most during periods of rain in the region; 70.7% of horseflies corresponded to Tabanus claripennis. There was significant association between a positive PCR for A. marginale and B. bigemina and lower hematocrit values. This study demonstrates that even evaluating only five rural properties, the incidence of CTF occurred heterogeneously in the region, confirming the status of enzootic instability area for CTF, previously reported for the semiarid region of Paraiba.(AU)

Resumo

A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasito pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de Babesia bovis intraeritrocitária em tecidos fixados em formol. Para este estudo, foram analisadas retrospectivamente amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.(AU)

Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the southern Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic Babesia bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.(AU)

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A Tristeza Parasitária Bovina (TPB) é uma doença endêmica no Brasil que causa prejuízos econômicos e redução do bem-estar em bovinos de corte. Conhecer a dinâmica da TPB, bem como abordar sua transmissão vertical é fundamental para entender a epidemiologia da doença. Objetivou-se com este trabalho avaliar a frequência da TPB em diferentes categorias de bovinos corte em um sistema de confinamento em Minas Gerais, bem como avaliar a transmissão vertical da doença em bezerros recém-nascidos. Para determinar a frequência de Anaplasma marginale, Babesia bovis e B. bigemina foram avaliados 665 animais divididos em cinco categorias: animais de Chegada (CH), novilhas do Diagnóstico de Gestação (DG), bezerros Recém-Nascidos (RN), bezerros Demamados (BD) e animais da Terminação (TR). A avaliação em todas as categorias foram realizadas através de esfregaço sanguíneo, hematócrito e Imunofluorescência Indireta (RIFI). Ademais, em amostras do grupo RN foram realiados nPCR e análise da transferência de imunidade passiva. Foram encontrados, ao esfregaço sanguíneo, A. marginale em todas as categorias e Babesia sp. em nenhuma das amostras. Apenas a categoria RN apresentou significativo valor de hematócrito abaixo do normal (20,1%). A RIFI indicou área de estabilidade enzóotica para os três agentes na categoria animais de chegada e nas novilhas durante o diagnóstico de gestação. O grupo terminação só não possui estabilidade para B. bigemina, e os animais da desmama foram instáveis para todos os agentes. Em mais de 90% dos bezerros recém-nascidos a transmissão de imunidade passiva foi boa a excelente ( PT >5,8 g/dL). Na avaliação molecular desse mesmo grupo, observou-se a taxa de transmissão vertical de A. marginale de 41,3%, B. bigemina 0,8% e nenhuma transmissão vertical para B. bovis.

Tick Fever is an endemic disease in Brazil that causes economic losses and reduced welfare in beef cattle. knowing the dynamics of tick fever as well as addressing its vertical transmission is essential to understand the epidemiology of the disease. The objective of this study was to evaluate the frequency of tick fever in different categories of beef cattle in a confinement system in Minas Gerais, as well as to evaluate the vertical transmission of the disease in newborn calves. For the detection of Anaplasma marginale, Babesia bovis and B. bigemina, 665 animals were used, divided into five categories: Arrival (CH), Pregnancy Diagnosis (DG), Newborn (NB), Weaned (BD) and Termination (TR). The evaluation in all categories was done through blood smear, hematocrit and Immunofluorescence Assay (IFA). Furthermore, in samples from newborn animals, nPCR and analysis of passive immunity transfer were performed. A. marginale in all categories and Babesia sp. in any of the samples. Only the NB category presented a significant hematocrit value below normal (20.1%). The IFA indicated an area of enzootic stability for the three agents in the category of arrival animals and in the heifers of the pregnancy diagnosis. The termination group was not stable for B. bigemina, and the weaning animals were unstable for all agents. In more than 90% of newborn calves, transmission of passive immunity at an excellent to good level (PT >5.8 g/dL) was found. In the molecular evaluation of this same group, it was observed a vertical transmission rate of A. marginale of 41.3%, B. bigemina 0.8% and no vertical transmission for B. bovis

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This study aimed to determine the seroprevalence of Babesiosis and Anaplasmosis in cattle from the municipalities of Ouricuri and Petrolina, state of Pernambuco, Brazil, and to define the risk factors for the occurrence of the diseases. Blood samples were collected for serologic testing by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). Sanitary epidemiological questionnaires were applied to the producers aiming to identify possible risk factors. Ticks were collected, identified and tested by Polymerase Chain Reaction (PCR) for the diagnosis of infection by Anaplasma marginale, Babesia bigemina and Babesia bovis. The study was conducted with 861 cattle, being 468 in Petrolina and 393 in Ouricuri. The seroprevalence of A. marginale, B. bigemina and B. bovis in Petrolina was of 35.0% (164/468), 35.9% (168/468) and 32.3% (151/468), respectively; and in Ouricuri was 45.5% (179/393), 38.6% (152/393), and 54.9% (216/393), respectively. Co-infection for Anaplasma spp. and Babesia spp. was observed in 31.6% and 32.1% samples of Petrolina and Ouricuri, respectively. The detection of DNA of Babesia spp. by PCR was possible in 5.8% (8/137) ticks; which 62.5% (5/8) was detected later infection with B. bovis; and 23.3% (32/137) with A. marginale. The presence of ticks, the use of acaricide, age, race, and county of residence of the animals were identified as risk factors for TBD by univariate analysis and multivariate. This study allowed the characterization of the municipalities studied as enzootic instability areas for these hemoparasitic, and consequently alert for adoption of adequate control measures and new studies.

Este estudo objetivou determinar a soroprevalência da Babesiose e Anaplasmose em bovinos dos municípios de Ouricuri e Petrolina, estado de Pernambuco, Brasil; e definir os possíveis fatores de risco para a ocorrência dessas doenças. Amostras de sangue foram coletadas para realização de teste sorológico por Imunofluorescência Indireta (RIFI). Questionários epidemiológicos sanitários foram aplicados aos produtores com o objetivo de identificar possíveis fatores de risco. Carrapatos foram coletados, identificados e testados por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o diagnóstico da infecção por Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babaesia bovis. O estudo foi conduzido com 861 bovinos, sendo 468 de Petrolina e 393 de Ouricuri. A soroprevalência de A. marginale, B. bigemina e B. bovis em Petrolina foi de 35,0% (164/468), 35,9% (168/468) e 32,3% (151/468), respectivamente; e em Ouricuri foi de 45,5% (179/393), 38,6% (152/393) e 54,9% (216/393), respectivamente. A co-infecção por Anaplasma spp. e Babesia spp. foi observada em 31,6% e 32,1% de amostras de Petrolina e Ouricuri, respectivamente. A detecção de DNA de Babesia spp. por PCR foi possível em 5,8% (8/137) carrapatos, dos quais em 62,5 % (5/8) foi detectada posteriormente infecção por B. bovis, e em 23,3% (32/137) por A. marginale. A presença de carrapatos, o uso de acaricidas, idade, raça, e o município de residência dos animais foram identificados como fatores de risco para TPB pela análise univariável e multivariável. Este estudo permitiu caracterizar os municípios estudados como de instabilidade enzoótica para esses hemoparasitos, e consequentemente, alertar para adoção de medidas adequadas de controle e realização de novos estudos.

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Este estudo objetivou determinar a soroprevalência da Babesiose e Anaplasmose em bovinos dos municípios de Ouricuri e Petrolina, estado de Pernambuco, Brasil; e definir os possíveis fatores de risco para a ocorrência dessas doenças. Amostras de sangue foram coletadas para realização de teste sorológico por Imunofluorescência Indireta (RIFI). Questionários epidemiológicos sanitários foram aplicados aos produtores com o objetivo de identificar possíveis fatores de risco. Carrapatos foram coletados, identificados e testados por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para o diagnóstico da infecção por Anaplasma marginale, Babesia bigemina e Babaesia bovis. O estudo foi conduzido com 861 bovinos, sendo 468 de Petrolina e 393 de Ouricuri. A soroprevalência de A. marginale, B. bigemina e B. bovis em Petrolina foi de 35,0% (164/468), 35,9% (168/468) e 32,3% (151/468), respectivamente; e em Ouricuri foi de 45,5% (179/393), 38,6% (152/393) e 54,9% (216/393), respectivamente. A co-infecção por Anaplasma spp. e Babesia spp. foi observada em 31,6% e 32,1% de amostras de Petrolina e Ouricuri, respectivamente. A detecção de DNA de Babesia spp. por PCR foi possível em 5,8% (8/137) carrapatos, dos quais em 62,5 % (5/8) foi detectada posteriormente infecção por B. bovis, e em 23,3% (32/137) por A. marginale. A presença de carrapatos, o uso de acaricidas, idade, raça, e o município de residência dos animais foram identificados como fatores de risco para TPB pela análise univariável e multivariável. Este estudo permitiu caracterizar os municípios estudados como de instabilidade enzoótica para esses hemoparasitos, e consequentemente, alertar para adoção de medidas adequadas de controle e realização de novos estudos.(AU)

This study aimed to determine the seroprevalence of Babesiosis and Anaplasmosis in cattle from the municipalities of Ouricuri and Petrolina, state of Pernambuco, Brazil, and to define the risk factors for the occurrence of the diseases. Blood samples were collected for serologic testing by Indirect Immunofluorescence Assay (IFA). Sanitary epidemiological questionnaires were applied to the producers aiming to identify possible risk factors. Ticks were collected, identified and tested by Polymerase Chain Reaction (PCR) for the diagnosis of infection by Anaplasma marginale, Babesia bigemina and Babesia bovis. The study was conducted with 861 cattle, being 468 in Petrolina and 393 in Ouricuri. The seroprevalence of A. marginale, B. bigemina and B. bovis in Petrolina was of 35.0% (164/468), 35.9% (168/468) and 32.3% (151/468), respectively; and in Ouricuri was 45.5% (179/393), 38.6% (152/393), and 54.9% (216/393), respectively. Co-infection for Anaplasma spp. and Babesia spp. was observed in 31.6% and 32.1% samples of Petrolina and Ouricuri, respectively. The detection of DNA of Babesia spp. by PCR was possible in 5.8% (8/137) ticks; which 62.5% (5/8) was detected later infection with B. bovis; and 23.3% (32/137) with A. marginale. The presence of ticks, the use of acaricide, age, race, and county of residence of the animals were identified as risk factors for TBD by univariate analysis and multivariate. This study allowed the characterization of the municipalities studied as enzootic instability areas for these hemoparasitic, and consequently alert for adoption of adequate control measures and new studies.(AU)

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Ten male, 12-month-old Jersey with intact spleens, serologically and parasitologically free from Babesia were housed individually in an arthropod-free isolation system from birth and throughout entire experiment. The animals were randomly divided into two groups. Five animals (group A) were intravenously inoculated with 6.6 X10(7) red blood cells parasitized with pathogenic sample of Babesia bovis (passage 7 BboUFV-1), for the subsequent "ex vivo" determination of the expression of adhesion molecules. Five non-inoculated animals (group B) were used as the negative control. The expression of the adhesion molecules ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and thrombospondin (TSP) was measured in bovine umbilical vein endothelial cells (BUVECs). The endothelial cells stimulated with a pool of plasma from animals infected with the BboUFV-1 7th passage sample had a much more intense immunostaining of ICAM-1, VCAM, PECAM-1 E-selectin and TSP, compared to the cells which did not received the stimulus. The results suggest that proinflammatory cytokines released in the acute phase of babesiosis may be involved in the expression of adhesion molecules thereby implicating them in the pathophysiology of babesiosis caused by B. bovis.

Dez bezerros machos, da raça Jersey, com 1 ano de idade com baços "in situ", sorológica e parasitologicamente livres de Babesia, foram mantidos em baias individuais no isolamento a prova de artrópodes do Depto de Veterinária desde o nascimento e ao longo de toda a experimentação. Os animais foram divididos aleatoriamente em dois grupos. Cinco animais (grupo A) foram inoculados por via intravenosa com 6,6 x10(7) hemácias parasitados com amostra patogênica de Babesia bovis (BboUFV - 1 7ª passagem) , para a determinação subseqüente "ex vivo" da expressão de moléculas de adesão . Cinco animais não inoculados (Grupo B ) foram utilizados como controlo negativo . A expressão de moléculas de adesão ICAM - 1, VCAM , PECAM - 1, E - selectina e trombospondina ( TSP ) foi medida em células endoteliais da veia umbilical de bovinos (BUVECs). As células endoteliais estimuladas com um pool de plasma proveniente de animais infectados com BboUFV - 1 7ª passagem tinham uma imunocoloração muito mais intensa de ICAM - 1 , VCAM , PECAM - 1 de E - selectina e de TSP , em comparação com as células que não receberam o estímulo . Os resultados sugerem que as citocinas pró-inflamatórias liberados na fase aguda da babesiose pode estar envolvida na expressão de moléculas de adesão , implicando , assim, elas na fisiopatologia da babesiose causada por B. bovis.

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A babesiose bovina é uma hemoparasitose causada por duas espécies de protozoários, Babesia bovis e Babesia bigemina, que atinge os rebanhos de bovinos em praticamente todo território nacional, sendo responsável por grandes perdas na produtividade dos rebanhos. A transmissão ocorre, principalmente, pelo carrapato Rhipicephalus Boophillus microplus. Os sinais clínicos se caracterizam por anemia intensa, por hemólise extravascular, febre, hemoglobinúria, icterícia e morte. O diagnóstico da babesiose pode ser por meio do exame microscópico de esfregaços de sangue periférico. O objetivo desse trabalho foi estudar a prevalência da babesiose bovina no município de Umuarama. Foram analisados 325 prontuários clí-nicos de bovinos provenientes do município de Umuarama atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Paranaense no período de janeiro de 2003 a dezembro de 2010. A análise revelou que 32,4% foram positivos e 68,6% foram negativos para Babesia spp. Em relação ao sexo dos animais, 30,5% das fêmeas (n=243) e 34,1% dos machos (n=82) foram positivos. Segundo a aptidão zootecnica 27,4% dos bovinos com aptidão para corte (n=164) e 35,4% dos bovinos com aptidão para leite (n=161) foram positivos. Não houve diferença significativa entre os sexos e entre as aptidões (p>0,05). Segundo a subespécie bovina, 23% dos bovinos Bos taurus indicus (n=107) e 37,4% dos bovinos Bos taurus taurus (n=179) foram positivos. Houve diferença significativa entre as subespécies (p<0,05), ocorrendo maior prevalência de babesiose nos Bos taurus taurus. De acordo com os resultados encontrados pode-se concluir que nao houve diferença na prevalência de babesiose quando se comparou o sexo e a aptidão zootécnica. Foi observada uma maior prevalÇencia de babesiose em Bos taurus quando comparado com Bos indicus.

Bovine babesiois is a hemoparasitosis, this disease is caused by two protozoa species, Babesia bovis and Babesiabigemina, and afflicts bovine herds on the entire country, being, responsible for great losses in productivity of the herds.Transmission happens mainly by the tick Rhipicephalus Boophilus microplus. Clinical signs are intense anemia by extravascularhemolysis, fever, hemoglobinuria, jaundice and death. The diagnosis for babesiosis may be through microscopic examinationof peripheral blood smears. It is a disease of great importance for bovine production. The aim of this paper was to studythe prevalence of babesiosis in the municipality of Umuarama. It was analyzed 325 clinical charts from Umuarama, treatedat the Universidade Paranaense (UNIPAR) Veterinary Hospital, from January 2003 to December 2010. The analysis showedthat 32.4% were positive and 68.6% were negative for Babesia spp. Considering gender, 30.5% of the female (n=243) and34.1% of male (n=82) were positive. Concerning productive aptitude 27.4% of the bovines with beef aptitude (n=164) and35.4% of bovines with dairy aptitude (n=161) were positive. There was no significant difference between genders and aptitude(p>0.05). Concerning bovine subspecies 23% of Bos taurus indicus (n=107) and 37.4% of Bos taurus taurus (n=179) werepositive. There was significant difference between subspecies (p<0,05), with greater prevalence of babesiosis in Bos taurustaurus.. According to the results found, it is possible to conclude that there was no difference in the prevalence of babesiosiswhen compared gender and productive aptitude. It was observed a higher prevalence of babesiosis in Bos taurus taurus whencompared to Bos indicus.

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The goal of this study was to characterize the epidemiological situation and the factors involved in the prevalence of babesiosis and anaplasmosis in cattle in the dairy basin of Parnaíba, Piauí, Brazil. The study was conducted in 22 farms, and collected blood samples from 202 cattle to study serological, molecular and determination of the packed cell volume (PCV). On the farms were applied surveys involving epidemiological aspects. Seroprevalence rates were: Babesia bigemina 52.5%, B. bovis 68.8%, and Anaplasma marginale 89.1%. Of the samples analyzed, 73.3% were reactive for Babesia spp. and A. marginale, showing co-infection. In PCR, B. bigemina and B. bovis were positive in 52.0% and 33.2% respectively, and A. marginale in 76.2%. Of these, 51.5% amplified DNA of Babesia spp. and A. marginale. The semi-intensive management predominated in 68.0% of the farms studied. The clinical history of babesiosis and anaplasmosis, was reported from 73% of the farms. There was no significant difference (p>0.05) between age groups and for the PCV of positive compared with negative animals. The study indicates that in this region is enzootic instability for babesiosis and enzootic stability for anaplasmosis, reinforcing the fact that in Brazil there are areas of enzootic instability, even in tropical regions of the country. The PCR technique was a valuable tool for the diagnosis of these diseases and may be used to characterize a geographic region.

O objetivo deste estudo foi caracterizar a situação epidemiológica e os fatores envolvidos na prevalência da babesiose e anaplasmose em bovinos da bacia leiteira de Parnaíba, Piauí, Brasil. O estudo foi realizado em 22 propriedades, sendo coletadas amostras de sangue de 202 bovinos para estudos sorológicos, moleculares e determinação do volume globular (VG). Nas propriedades foram aplicadas inquéritos envolvendo aspectos epidemiológicos. As taxas de soroprevalência foram: 52,5% para Babesia bigemina, 68,8% B. bovis, e 89,1% para Anaplasma marginale. Das amostras analisadas, 73,3% foram reagentes para Babesia spp. e A. marginale, demostrando co-infecção. Na PCR, B. bigemina e B. bovis foram positivas em 52,0% e 33,2% respectivamente, e A. marginale em 76,2%. Destes, 51,5% amplificaram DNA de Babesia spp. e A. marginale. O manejo semi-intensivo predominou em 68,0% das propriedades estudadas. O histórico clínico de babesiose e anaplasmose foi relatado em 73% das propriedades. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre as faixas etárias e para o VG de animais positivos comparados com os negativos. O estudo indica que nesta região há instabilidade enzoótica para babesiose e estabilidade enzoótica para anaplasmose, reforçando o fato de que, no Brasil, existem áreas de instabilidade enzoótica, mesmo em regiões tropicais do país. A técnica de PCR demonstrou ser uma ferramenta valiosa para o diagnóstico destas doenças e pode ser utilizada para caracterizar uma região geográfica.

Resumo

The seroprevalence of Anaplasma marginale, Babesia bigemina, Babesia bovis and Trypanosoma vivax and the risk factors for these infections were investigated in 509 cows on 37 farms in the semiarid region of Paraíba, northeastern Brazil. Cow serum samples were tested by means of immunofluorescence assay (IFA) against each specific antigen. The mean seroprevalence values per farm were 15.0% (range: 0-75%) for A. marginale, 9.5% (range: 0-40%) for B. bigemina and 26.9% (range: 0-73.7%) for B. bovis. All cows tested negative for T. vivax. Higher prevalence for A. marginale was significantly associated with less frequent acaricide spraying per year and with higher use of injectable antihelminthics. Presence of cows positive for B. bigemina was significantly associated with acaricide use and with presence of horse flies on the farm. Both occurrence and higher prevalence of B. bovis were significantly associated with recent observations of ticks on cattle. Overall, the present results indicate that the region investigated is an enzootically unstable area for A. marginale, B. bigemina and B. bovis, since most animals were seronegative to at least one agent.

A soroprevalência de Anaplasma marginale, Babesia bigemina, Babesia bovis e Trypanosoma vivax, assim como os fatores de risco para estas infecções, foram investigadas em 37 fazendas (total de 509 vacas) da região semiárida da Paraíba, nordeste do Brasil. A presença de anticorpos nos soros dos animais foi detectada pela técnica de imunofluorescência indireta, utilizando antígenos específicos. Os valores médios de soroprevalência por fazenda foram 15,0% (0-75%) para A. marginale, 9,5% (0-40%) para B. bigemina, e 26,9% (0-73,7%) para B. bovis. Todas as vacas foram soronegativas para T. vivax. As maiores prevalências de A. marginale foram significativamente associadas com menor uso de carrapaticidas por ano e com uso mais frequente de antihelmínticos injetáveis. A soroprevalência de B. bigemina foi significativamente associada com o uso de carrapaticidas, e com a presença de mutucas na fazenda. Tanto a ocorrência como a maior soroprevalência para B. bovis nas fazendas foram significativamente associadas com a presença recente de carrapatos nos bovinos. No geral, os resultados indicam que as fazendas amostradas estão situadas em área de instabilidade enzoótica para A. marginale, B. bigemina, e B. bovis, uma vez que a maioria dos animais foi soronegativa para pelo menos um dos agentes.

Resumo

A babesiose e a anaplasmose tem como agentes etiológicos Anaplasma marginale e Babesia spp. e causa perdas econômicas significativas em rebanhos bovinos. A indisponibilidade atual de um controle preventivo por vacinação demonstra a necessidade de alternativas para o desenvolvimento de novas vacinas. Assim, o desenvolvimento de uma vacina recombinante pode ser uma opção para prevenção da doença nestes animais. Construções proteicas ricas em epítopos com potencial imunogênico são utilizadas atualmente como proposta para a construção de candidatos a vacinas recombinantes. Objetivou-se neste trabalho a avaliação de um imunógeno obtido pelo uso do DNA recombinante a partir da combinação de porções de genes ricos em epítopos de A. marginale e Babesia spp. Para tanto, foram utilizados camundongos BALB/c inoculados com: PBS, MontanideTM ISA 70 (Seppic®), pcDNA3.1ª, pcDNA3.1A/anabab, ANABABr e pcDNA3.1A/anabab com booster de ANABABr. Os soros obtidos foram testados para presença de IgG total e suas subclasses IgG1 e IgG2a. Foi realizado o cultivo de esplenócitos, estimulados com a proteína recombinante (ANABABr), para detecção de Interleucina-10 (IL-10) e Interferon-gama (IFN-). Os resultados não demostraram diferença na produção de IFN- e IL-10 nos diferentes grupos testados. No entanto, foi detectado produção de IgG total no grupo que recebeu a proteína recombinante (ANABABr), como também, no grupo que recebeu o DNA associado ao booster de proteína (pcDNA3.1A/anabab com booster de ANABABr), indicando indução de resposta imune humoral. A produção de IgG1 e IgG2a foram avaliadas, nos grupos com resultado positivo para produção de IgG total, de modo a determinar o perfil de resposta imune induzida pela vacina nos camundongos. Essas análises não detectaram diferença significativa entre as imunoglobulinas testadas.

Babesiosis and anaplasmosis have the etiological agents Anaplasma marginale and Babesia spp. and causes significant economic losses in cattle herds. The current unavailability of preventive control by vaccination demonstrates the need for alternatives for the development of new vaccines. Thus, the development of a recombinant vaccine may be an option for disease prevention in these animals. Protein constructs rich in epitopes with immunogenic potential are currently used as a proposal for the construction of recombinant vaccine candidates. The objective of this work was to evaluate an immunogen obtained by the use of recombinant DNA from the combination of portions of genes rich in epitopes of A. marginale and Babesia spp. BALB / c mice inoculated with: PBS, MontanideTM ISA 70 (Seppic®), pcDNA3.1ª, pcDNA3.1A / anabab, ANABABr and pcDNA3.1A / anabab with ANABABr booster were used. The sera obtained were tested for the presence of total IgG and its subclasses IgG1 and IgG2a. Spleen cells were stimulated with the recombinant protein (ANABABr) for the detection of Interleukin-10 (IL-10) and Interferon-gamma (IFN-). The results showed no difference in the production of IFN- and IL-10 in the different groups tested. However, total IgG production was detected in the group that received the recombinant protein (ANABABr), as well as in the group that received the DNA associated with the protein booster (pcDNA3.1A / anabab with ANABABr booster), indicating induction of response humoral immune. The production of IgG1 and IgG2a were evaluated in the groups with positive result for total IgG production, in order to determine the immune response profile induced by the vaccine in the mice. These analyzes did not detect a significant difference between the immunoglobulins tested.

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The aim of the study was to estimate the prevalence of Babesia bovis and Babesia bigemina in water buffaloes of the Marajó Island, State of Pará, Brazil. We used an indirect enzyme-linked immunosorbent assay (iELISA), with total antigen containing proteins outer surface, and polymerase chain reaction (qPCR), involving the use of SYBR Green based on amplification of a small fragment of the cytochrome b gene. The prevalence of positive animals in iELISA to B. bovis B. bigemina and mixed infection was 24.87% (199/800), 20.75% (166/800) and 18.75% (150/800), respectively. Using the PCR, the presence of B. bovis was detected in 15% (18/199) and B. bigemina in 16% (19/199) of animals, and of these, 58% (11/19) presented co-infected by the two agents. The results show a low prevalence of antibodies anti-B. bovis and anti-B. bigemina in water buffaloes from Marajó Island. However, it was observed that the agents of bovine babesiosis circulate in buffaloes, and these may act as reservoirs.

O objetivo do estudo foi testar a prevalência sorológica e molecular de Babesia bovis e Babesia bigemina em búfalos da Ilha de Marajó, Pará. Foi utilizado ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (iELISA) com antígeno total contendo proteínas de superfície externa e reação em cadeia da polimerase (qPCR), envolvendo o uso de SYBR Green com base na amplificação de um pequeno fragmento de gene do citocromo b. A prevalência de animais positivos no ELISA para B. bovis, B. bigemina e para infecção mista foi de 24.87% (199/800), 20.75% (166/800) e 18.75% (150/800), respectivamente. Na PCR foi detectado a presença de B. bovis em 15% (18/199) e de B. bigemina em 16% (19/199) dos animais, sendo que destes, 58% (11/19) apresentavam-se co-infectados pelos dois agentes. Os resultados mostram uma baixa prevalência de anticorpos anti-B. bovis e anti-B. bigemina em búfalos da Ilha do Marajó. Porém, observou-se que os agentes da babesiose bovina circulam em búfalos, podendo estes atuar como reservatórios.

Resumo

A babesiose é uma doença hemolítica transmitida por carrapatos e causada por protozoários intraeritrocitários do gênero Babesia. Esta é uma doença de incidência elevada na Região Sul do Brasil e responsável por perdas econômicas consideráveis. O diagnóstico clínico-patológico pode ser feito através da demonstração do parasita pelo exame de esfregaços sanguíneos ou de tecidos frescos. Entretanto, com frequência, somente órgãos fixados em formol são remetidos para laboratórios de patologia, o que impossibilita a realização do esfregaço. O principal objetivo deste estudo foi encontrar técnicas histoquímicas alternativas e capazes de aprimorar a evidenciação de B. bovis intraeritrocitária. Para este estudo, foram analisadas, retrospectivamente, amostras de tecidos de 50 casos de necropsias de bovinos, as quais haviam sido fixadas em formol e processadas rotineiramente para histopatologia. Os casos foram divididos em um grupo controle, constituído por 12 casos de babesiose cerebral com substância cinzenta encefálica róseo-cereja característica (grupo A), e 38 casos sugestivos de tristeza parasitária bovina (grupo B), conforme os protocolos de necropsias. Foram testadas as técnicas histoquímicas de Azul Alciano, Azul de Metileno, Azul de Toluidina, Giemsa, Gram (método de McCallum-Goodpasture), Grocott, Ácido Periódico de Schiff e Ziehl-Neelsen. Dentre estas, observou-se que as técnicas de Azul de Metileno e Azul de Toluidina permitiram observar características morfológicas e tintoriais de maneira mais nítida, auxiliando na identificação de B. bovis. Adicionalmente, foram estabelecidos vários parâmetros clínico-epidemiológicos e anatomopatológicos da babesiose por B. bovis.

Babesiosis is a hemolytic tick-borne disease caused by intraerythrocytic protozoal parasites of the genus Babesia. This is a disease of high incidence in the South region of Brazil and responsible for considerable economic losses. Clinical-pathological diagnosis can be made by demonstrating the parasite by examining blood smears or fresh tissues. However, frequently, only formalin-fixed organs are sent to pathology laboratories, which makes it impossible to perform the smears. The main objective of this study was to find alternative histochemical techniques capable to improve the identification of intraerythrocytic B. bovis in histological sections. For this study, tissue samples from 50 bovine necropsy cases were retrospectively analyzed, which had been fixed in formalin and routinely processed for histopathology. The cases were divided into a control group, consisting of 12 cases of cerebral babesiosis with characteristic pink-cherry gray matter (group A), and 38 cases suggestive of cattle tick fever (group B), according to necropsy protocols. Histochemical techniques of Alcian Blue, Methylene Blue, Toluidine Blue, Giemsa, Gram (McCallum-Goodpasture method), Grocott, Periodic Acid of Schiff and Ziehl-Neelsen were tested. Among these, it was observed that the techniques of Methylene Blue and Toluidine Blue allowed to observe morphological and dye characteristics in a clearer way, aiding in the identification of B. bovis. In addition, several clinical-epidemiological and anatomopathological parameters of babesiosis caused by B. bovis were established.

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The study aimed to evaluate the risk factors associated with the frequency of IgG antibodies against Babesia bovis and B. bigemina in cattle in southern Mozambique. Eight hundred and nine serum samples were collected from cattle in three provinces namely Maputo, Gaza and Inhambane, and tested by indirect enzyme-linked immunosorbent assay (i-ELISA) to assess the humoral immune response towards B. bovis and B. bigemina. The chi-square test at 5 percent significance was used to determine whether there was an association between gender, age and geographic origin of seropositive animals. The overall prevalence was 78.8 percent (548/695) for B. bovis and 76.0 percent (528/695) for B. bigemina. The origin of the animals showed a significant association (p<0.05) with seropositivity to both agents, while gender and age was not associated (p>0.05). Maputo province had the highest rate of positive animals, with 93.7 percent (118/126) for B. bovis and 97.6 percent (123/126) for B. bigemina. In Gaza province 77.3 percent (321/415) of the animals were positive for B. bovis and 67.5 percent (280/415) for B. bigemina, while in the province of Inhambane the levels of seropositivity were 70.8 percent (109/154) and 81.2 percent (125/154) for B. bovis and B. bigemina respectively. In the present study, the frequency of cattle positive for B. bovis and B. bigemina was shown to increase among older age groups, suggesting that infection and re-infection persisted even after the primary infection. Thus, this region is considered to be in a state of enzootic stability with regards to B. bovis and B. bigemina.

Foram avaliados os fatores de risco associados a frequência de anticorpos da classe IgG contra Babesia bovis e B. bigemina em bovinos da região sul de Moçambique. Oitocentos e nove amostras de soros foram coletadas de bovinos em três províncias nomeadamente Maputo, Gaza e Inhambane e testados por ensaio de imunoadsorção enzimático indireto (i-ELISA) para avaliar a resposta imune humoral contra B. bovis e B. bigemina. O teste de Qui-quadrado a 5 por cento de significância foi utilizado para verificar a associação entre as variáveis sexo, faixa etária e origem geográfica com a soropositividade dos animais. A prevalência geral foi de 78,8 por cento (548/695) para B. bovis e 76,0 por cento (528/695) para B. bigemina. A origem dos animais apresentou associação (p<0,05) com a soropositividade a ambos os agentes, enquanto variável sexo não apresentou associação (p>0,05). A província de Maputo apresentou a maior taxa de animais positivos, com 93,7 por cento (118/126) para B. bovis e 97,6 por cento (123/126) para B. bigemina. Na província de Gaza a soropositividade foi de 67,5 por cento (280/415) para B. bigemina e 77,3 por cento (321/415) para B. bovis enquanto que na província de Inhambane a positividade foi de 81,2 por cento (125/257) e 70,8 por cento (109/257) para B. bigemina e B. bovis, respectivamente. Na presente pesquisa, a freqüência de bovinos positivos para B. bovis e B. bigemina aumentou nas faixas etárias superiores, sugerindo que as infecções e as re-infecções persistem mesmo após primo-infecção. A região estudada apresenta-se na condição de estabilidade enzoótica para os agentes estudados.

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Entre as principais causas de perdas produtivas em bovinos criados nos trópicos está a infestação pelo carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus e, consequentemente, dos hemoparasitas transmitidos por ele. A resistência dos zebuínos e de animais cruzados com raças taurinas à infestação por esse ácaro é amplamente conhecida. Entretanto, no que se refere à suscetibilidade às babesioses bovinas, existem evidências de que o grupo genético também pode interferir na resistência, seguindo o mesmo padrão observado para o carrapato vetor, com os taurinos apresentando maior sensibilidade. Assim, este estudo teve por objetivo avaliar a parasitemia por Babesia bovis e Babesia bigemina em 50 novilhas da raça Canchim ( Charolês + Zebu) naturalmente infestadas pelo R. (B.) microplus nas quatro estações do ano durante 24 meses, além de caracterizar o perfil de citocinas que podem estar associados ao fenótipo de resistência e suscetibilidade aos hemoparasitas do gênero Babesia spp. Foram realizadas contagens de fêmeas adultas de carrapatos com tamanho igual ou superior a 4,5 mm de diâmetro, presentes no lado esquerdo de cada bovino. As amostras de DNA extraídas foram submetidas à amplificação por meio da Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real (qPCR), utilizando iniciadores que flanqueiam fragmentos dos genes mitocondriais do citocromo b (mt-cyt B), específicos para B. bovis e B. bigemina. O RNA extraído do sangue, foi usado para sintetizar o DNA complementar (cDNA) para análise de expressão dos genes do IFN-, TNF-, IL-10 e IL-12B por meio da quantificação relativa (RT-qPCR). Foram observadas diferenças significativas (P<0,05) entre os meses das avaliações para a contagem de carrapatos. Entretanto, não houve efeito significativo (P>0,05) nas colheitas realizadas entre novembro de 2013 a janeiro de 2014 e entre os meses janeiro e fevereiro de 2015. A frequência da parasitemia no rebanho foi de 98%. Dentre as amostras de DNA que puderam ser quantificadas pela qPCR, 98% e 95,4% foram positivas para B. bovis e B. bigemina, respectivamente. Com relação ao número de cópias (NC) dos fragmentos dos genes mt-cyt B específicos para B. bovis e B. bigemina foram observados efeitos significativos (P<0,05) para ambas as espécies e interação das mesmas com as colheitas realizadas nas diferentes estações do ano. A análise do nível de expressão de mRNA do IFN-, TNF- e IL-12B revelou que houve um efeito siginificativo (P<0,05) da interação entre animais dos extremos de resistência/suscetibilidade e estações do ano, exceto para IL-10. Conclui-se que, a qPCR apresenta alta sensibilidade e especificidade para o diagnóstico das babesioses bovinas em amostras de sangue e que a oscilação na carga parasitária nas diferentes estações do ano pode estar associada com o perfil de expressão de citocinas apresentada pelos animais do rebanho Canchim durante o período experimental.

Among the main causes of production losses in cattle is in the tropics infestation by Rhipicephalus (Boophilus) microplus, and consequently the hemoparasites transmitted by it. The resistance of zebu and crossbred with European breeds to infestation by this mite is widely known. However, as regards susceptibility to bovine babesiosis, there is evidence that genetic group can also interfere in resistance following the same pattern observed in the tick vector, with the taurine presenting greater sensitivity. This study aimed to evaluate parasitaemia by Babesia bovis and Babesia bigemina in 50 heifers Canchim ( Charolais + Zebu) naturally infested by R. (B.) microplus in four seasons for 24 months, and characterize the profile of cytokines that may be associated with phenotype resistance and susceptibility by gender hemoparasites Babesia spp. Adult female ticks counts with size equal to or greater than 4.5 mm in diameter, present in the left side of each calf were performed. The extracted DNA samples were subjected to amplification by Reaction Polymerase Chain Quantitative Real Time (qPCR), using primers flanking fragments of mitochondrial gene cytochrome B (mt-cyt B) specific for B. bovis and B. bigemina. The RNA extracted from the blood was used to synthesize complementary DNA (cDNA) for expression analysis of genes IFN-, TNF-, IL-10 and IL-12B by relative quantification (RT-qPCR). Significant differences were observed (P <0.05) between the months of reviews for the tick count. However, there was no significant effect (P>0.05) in samples taken between november 2013 and january 2014 and between the months january and february 2015. The frequency of parasitaemia in the herd was 98%. Among the samples of DNA that could be quantified by qPCR, 98% and 95.4% were positive for B. bovis and B. bigemina, respectively. Regarding the number of copies (NC) of fragments of genes mt-cyt B, specific to B. bovis and B. bigemina significant effects were observed (P<0.05) for both species and interaction between those harvests in different seasons. Analysis of the mRNA expression level of IFN-, TNF- and IL-12B showed that there was a significant effect (P<0.05) interaction between the animal extreme resistance/susceptibility and seasons, except for IL-10. It is concluded that the qPCR has high sensitivity and specificity for the diagnosis of bovine babesiosis in blood samples and that the fluctuation in the parasitic load in the different seasons of the year may be associated with the profile of cytokine expression presented by herd animals Canchim during the experimental period.

Resumo

O complexo tristeza parasitária bovina é responsável por grandes prejuízos à pecuária brasileira e o conhecimento de sua epidemiologia tem se tornado cada vez mais necessário. Objetivou-se com este estudo conhecer a dinâmica da infecção por Anaplasma marginale, Babesia bovis e B. bigemina em bezerras da raça Holandês em um sistema de criação intensivo. O experimento foi conduzido em uma fazenda localizada no município de Inhaúma Minas Gerais, que possui um histórico de altas taxas de morbidade e mortalidade de animais na fase de recria por anaplasmose e babesiose. Foram utilizadas 224 fêmeas bovinas, divididas em sete grupos. A avaliação foi feita através de esfregaço sanguíneo, volume globular, RIFI e PCR. Os animais apresentaram um período de maior susceptibilidade a anaplasmose e a babesiose por B. bigemina durante a fase de recria. Já para B. bovis a queda da imunidade passiva ocorreu simultaneamente com o desenvolvimento da imunidade ativa. Foram detectados alguns casos de transmissão transplacentária de A. marginale e B. bovis. As infecções por Babesia iniciaram na fase de pós-casinha, período em que os animais passaram a ter contato com carrapatos. As infecções por A. marginale tiveram predomínio durante a fase de recria. A queda do VG e o maior número de animais anêmicos ocorreram na fase de maior concentração de quadros clínicos de anaplasmose e babesiose. Os resultados mostraram que os animais jovens desta fazenda apresentam susceptibilidade para A. marginale e B. bigemina. A situação para B. bovis é estável, podendo ocorrer alguns casos esporádicos

The tick fever complex is responsible for major losses to the Brazilian livestock and knowledge of its epidemiology has become increasingly necessary. The aim of this study was to know the dynamics of infection by Anaplasma marginale, Babesia bovis and B. bigemina in Holstein calves in an intensive farming system. The experiment was conducted on a farm in the municipality of Inhaúma - Minas Gerais, which has a history of high rates of morbidity and mortality of animals in the growing phase for anaplasmosis and babesiosis. 224 animals were divided into seven groups were used. The evaluation was done by blood smear, packed cell volume, IFAT and PCR. The animals showed a period of increased susceptibility to anaplasmosis and babesiosis by B. bigemina during the growing phase. As for B. bovis drop of passive immunity occurred simultaneously with the development of active immunity. Were detected some cases of transplacental transmission of A. marginale and B. bovis. Babesia infections began in the post-house phase, during which the animals began to have contact with ticks. Infections with A. marginale had predominated during the growing phase. The fall of the packed cell volume and the largest number of anemic animals occurred in the major phase concentration of clinical cases of anaplasmosis and babesiosis. The results showed that young animals in this farm have susceptibility to A. marginale and B. bigemina. The situation for B. bovis is stable, and there may be some sporadic cases.

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An outbreak of cattle mortality due to Babesia bovis infection in the county of Picada Café, Rio Grande do Sul, southern Brazil, in April 2007 is described. Twenty eight heifers (50.9%) died, out of a herd of 55 animals, in five days. The disease occurred approximately 20 days after heifers were transferred to this farm. The clinical signs included fever, anemia, aggressiveness, incoordination, petechiae in the mucous membranes and death after 1 to 2 days. The necropsy revealed pale mucous membranes, splenomegaly, enlarged and yellowish liver, congested and edematous gall bladder containing viscous granular bile. The kidneys and urine were dark red. The gray matter of cerebrum and cerebellum had a characteristic cherry-pink color. Hemorrhage was seen in the epicardium and endocardium. The histological findings consisted of hemoglobinuric nephrosis, paracentral hepatic necrosis, bile stasis, spleen congestion. The gray matter of the brain exhibited congestion with erythrocytes parasitized by Babesia bovis, which were also seen in the brain impression smear. The death of 28 heifers in 5 days was attributed to inadequate immunity against the parasite. The application of imidocarb dipropionate in animals presenting the initial stage of the disease and in all other animals of the herd was adopted as preventive treatment and no new cases of the disease happened in the next two months, when they were sent to slaughter.

Descreve-se um surto de mortalidade em bovinos por Babesia bovis em abril de 2007, no Município de Picada Café, Rio Grande do Sul. Em um rebanho com 55 novilhas, 28 (50,9%) morreram em cinco dias. A doença iniciou vinte dias após o ingresso dos bovinos na propriedade. Os sinais clínicos incluíam febre, incoordenação, agressividade, anemia, petéquias nas mucosas e morte 1 á 2 dias após. Em 4 animais necropsiados, observaram-se palidez de mucosas, hemorragias múltiplas, esplenomegalia, fígado aumentado e alaranjado, vesícula biliar com parede edemaciada e contendo bile grumosa. Os rins estavam vermelho-escuros e a bexiga continha urina cor de vinho tinto. O encéfalo apresentou cor róseo-cereja externamente e ao corte, mais marcado no córtex telencefálico, cerebelo e corpo estriado, contrastando com a cor branca da substância branca. Na histologia havia nefrose hemoglobinúrica, necrose hepática paracentral, bilestase canalicular, congestão esplênica, além de congestão com grande quantidade de eritrócitos parasitados por estruturas compatíveis com Babesia bovis na região cortical do encéfalo, também observadas em esfregaços teciduais dessas regiões. A morte de 28 bovinos em 5 dias deveu-se, provavelmente, à falta de imunidade contra o parasito. O tratamento foi realizado com dipropionato de imidocarb nos demais animais, havendo recuperação dos bovinos que apresentavam sinais iniciais leves e não ocorrência de novos casos durante um período de dois meses, quando foram enviados para abate.

Resumo

An outbreak of babesiosis by Babesia bovis is reported in cattle in the municipality of Santa Vitória do Palmar, considered a Rhipicephalus (Boophilus) microplus free area, in southern Brazil on a farm located at Latitude S 33°05'23" and Longitude WO 53°09'29". In mid November four bulls, four cows and two heifers originated from the municipality of Minas do Leão, RS, a tick endemic area, located at Latitude S 30°12'07" and Longitude WO 52°03'25" were introduced in the herd. Fourty out of 393 adult cattle died. The first bovine died on January 19 and the last on March 2. The diagnosis of babesiosis was performed by the observation of gross lesions and numerous B. bovis organisms in smears of the cerebral cortex. It is suggested that the mean temperatures between 23.2°C and 23.6°C and the relative humidity between 75.3% and 77.5° observed in the period allowed the occurrence of a tick generation, which caused infection by B. bovis in cattle without immunity.

Descrevem-se os aspectos epidemiológicos de um surto de babesiose cerebral ocorrido em bovinos no município de Santa Vitória do Palmar, RS em uma propriedade localizada geograficamente na Latitude S 33°05'23" e Longitude WO 53°09'29", região considerada zona livre de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Em meados de novembro de 2007 foram transferidos para essa propriedade quatro touros, quatro novilhas e duas vacas provenientes do município de Minas do Leão,RS localizado geograficamente na Latitude S 30°12'07" e Longitude WO 52°03'25". De um total de 393 animais, 40 bovinos adultos morreram no período entre 19 de janeiro e 2 de março de 2008. O diagnóstico foi realizado pela observação das lesões macroscópicas e pela presença de numerosas formas parasitárias de Babesia bovis em impressões de fragmentos do córtex telencefálico coradas por Giemsa, que foram enviados ao Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da UFPel (LRD). Sugere-se que o clima favorável com temperaturas médias entre 23,2°C e 23,6°C e umidade relativa do ar média entre 77,5° e 75,3% observados no período determinaram a ocorrência de uma geração de carrapatos que ao infestarem e inocularem o agente em animais sem nenhuma imunidade contra o mesmo desencadearam o surto.