Antimicrobial activity and phytochemical prospection of vegetal extracts of Ocotea silvestris Vattimo-Gil and Ocotea diospyrifolia (Meisn. ) against serotypes of Salmonella of poultry origin / Atividade antimicrobiana e prospecção fitoquímica dos extratos vegetais de “Ocotea silvestris” Vattimo-Gil e “Ocotea diospyrifolia” (Meisn. ) frente sorotipos de “Salmonella” de origem avícola

The aim of this work was to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts Ocotea silvestris Vattimo-Gil and Ocotea diospyrifolia (Meisn.) Mez against 10 serotypes Salmonella enterica of poultry origin of the highest incidence in the western region of Paraná, as well as to perform the phytochemical screening of the compounds of the two species. After obtaining the aqueous extract and the organic extracts (ethyl alcohol, ethyl acetate and hexane) was determined Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) by technique microdilution broth. Phytochemical prospecting performed according to qualitative methodology of precipitation and colorimetry. The extracts presented inhibitory and bactericidal activity in different concentrations (200 to 25 mg.mL-1) against the serotypes of Salmonella, varying according to the solvent extractor. The ethyl acetate extract presented the best results, followed by the alcoholic, aqueous and hexane extract. It is noteworthy that studies of antimicrobial activity with vegetable extract within the genus Ocotea are scarce, however, the Lauraceae family presents significant biological activities, mainly related to its essential oils. Phytochemical prospecting detected the presence of steroids and alkaloids in both Ocotea species, which may justify the antimicrobial potential found for Salmonella serotypes. It is concluded that these plants represent an alternative for the control of Salmonella in the poultry sector, reflecting a new perspective for studies with natural products.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais de Ocotea silvestris Vattimo-Gil e Ocotea diospyrifolia (Meisn.) Mez frente a 10 sorotipos de Salmonella enterica de origem avícola de maior incidência na região Oeste do Paraná, bem como realizar a triagem fitoquímica dos compostos de Ocotea silvestris Vattimo-Gil e Ocotea diospyrifolia (Meisn.). Após a obtenção do extrato aquoso e dos extratos orgânicos (álcool etílico, acetato de etila e hexano) foram determinadas a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração bactericida mínima (MBC) por meio da técnica de microdiluição em caldo. A prospecção fitoquímica foi realizada de acordo com metodologia qualitativa de precipitação e colorimetria. Os extratos apresentaram atividade inibitória e bactericida em diferentes concentrações (200 a 25 mg.mL-1) frente aos sorotipos de Salmonella, variando de acordo com o solvente extrator. O extrato acetato de etila apresentou os melhores resultados, seguido pelo extrato alcoólico, aquoso e hexânico. Ressalta-se que estudos de atividade antimicrobiana com extrato vegetais dentro do gênero Ocotea são escassos, contudo, a família Lauraceae apresenta significativas atividades biológicas, principalmente relacionadas aos seus óleos essenciais. A prospecção fitoquímica detectou a presença de esteróides e alcalóides em ambas as espécies de Ocotea, podendo justificar o potencial antimicrobiano encontrado para os sorotipos de Salmonella. Conclui-se que estas plantas representam uma alternativa para o controle de Salmonella no setor avícola, refletindo uma nova perspectiva para estudos com produtos naturais.(AU)

Antimicrobial activity and phytochemical prospection of vegetal extracts of Ocotea silvestris Vattimo-Gil and Ocotea diospyrifolia (Meisn. ) against serotypes of Salmonella of poultry origin / Atividade antimicrobiana e prospecção fitoquímica dos extratos vegetais de “Ocotea silvestris” Vattimo-Gil e “Ocotea diospyrifolia” (Meisn. ) frente sorotipos de “Salmonella” de origem avícola

The aim of this work was to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts Ocotea silvestris Vattimo-Gil and Ocotea diospyrifolia (Meisn.) Mez against 10 serotypes Salmonella enterica of poultry origin of the highest incidence in the western region of Paraná, as well as to perform the phytochemical screening of the compounds of the two species. After obtaining the aqueous extract and the organic extracts (ethyl alcohol, ethyl acetate and hexane) was determined Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) by technique microdilution broth. Phytochemical prospecting performed according to qualitative methodology of precipitation and colorimetry. The extracts presented inhibitory and bactericidal activity in different concentrations (200 to 25 mg.mL-1) against the serotypes of Salmonella, varying according to the solvent extractor. The ethyl acetate extract presented the best results, followed by the alcoholic, aqueous and hexane extract. It is noteworthy that studies of antimicrobial activity with vegetable extract within the genus Ocotea are scarce, however, the Lauraceae family presents significant biological activities, mainly related to its essential oils. Phytochemical prospecting detected the presence of steroids and alkaloids in both Ocotea species, which may justify the antimicrobial potential found for Salmonella serotypes. It is concluded that these plants represent an alternative for the control of Salmonella in the poultry sector, reflecting a new perspective for studies with natural products.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais de Ocotea silvestris Vattimo-Gil e Ocotea diospyrifolia (Meisn.) Mez frente a 10 sorotipos de Salmonella enterica de origem avícola de maior incidência na região Oeste do Paraná, bem como realizar a triagem fitoquímica dos compostos de Ocotea silvestris Vattimo-Gil e Ocotea diospyrifolia (Meisn.). Após a obtenção do extrato aquoso e dos extratos orgânicos (álcool etílico, acetato de etila e hexano) foram determinadas a concentração inibitória mínima (MIC) e a concentração bactericida mínima (MBC) por meio da técnica de microdiluição em caldo. A prospecção fitoquímica foi realizada de acordo com metodologia qualitativa de precipitação e colorimetria. Os extratos apresentaram atividade inibitória e bactericida em diferentes concentrações (200 a 25 mg.mL-1) frente aos sorotipos de Salmonella, variando de acordo com o solvente extrator. O extrato acetato de etila apresentou os melhores resultados, seguido pelo extrato alcoólico, aquoso e hexânico. Ressalta-se que estudos de atividade antimicrobiana com extrato vegetais dentro do gênero Ocotea são escassos, contudo, a família Lauraceae apresenta significativas atividades biológicas, principalmente relacionadas aos seus óleos essenciais. A prospecção fitoquímica detectou a presença de esteróides e alcalóides em ambas as espécies de Ocotea, podendo justificar o potencial antimicrobiano encontrado para os sorotipos de Salmonella. Conclui-se que estas plantas representam uma alternativa para o controle de Salmonella no setor avícola, refletindo uma nova perspectiva para estudos com produtos naturais.

Interação fauna x flora: interação alimentar entre Bicho- Preguiça Bradypus variegatus Schinz 1825 em cativeiro e Cecropia pachystachya Trécul 1847 Embaúba

A presente pesquisa foi desenvolvida no Parque Estadual de Dois Irmãos (PEDI), Recife, Pernambuco. Utilizou-se cinco preguiças da espécie Bradypus variegatus Schinz 1825, conhecidas como preguiças de garganta-marrom, em condição de cativeiro ou semi-cativeiro. Os representantes dessa espécie, em liberdade, alimentam-se de um variado arranjo de vegetais, no entanto há uma preferência pelas espécies do gênero Cecropia. Esse trabalho teve como objetivo geral: avaliar a interação alimentar entre B.variegatus em cativeiro e a Cecropia pachystachya, e como objetivos específicos: descrever os padrões hematológicos e bioquímicos, em B. variegatus, o perfil fitoquímico de C. pachysthacya e a atividade antimicrobiana in vitro do extrato frente às bactérias obtidas de vacas com mastite clínica, e subclínica. Foram realizadas descrições dos parâmetros de referência para níveis hematológicos e bioquímicos séricos, em cinco animais alimentando-se de Cecropia pachystachya, em cativeiro, chamada fase 1, em períodos alternados com dieta livre fase 2. Os parâmetros foram respectivamente: eritrócitos, hematócrito, hemoglobina, volume corpuscular médio-VCM, hemoglobina corpuscular média-CHCM, amplitude de distribuição de glóbulos vermelhos-RDW, leucócitos, neutrófilos bastonetes, neutrófilos segmentados, basófilos, eosinófilos, linfócitos, monócitos, plaquetas e alanina aminotransferase-ALT, aspartato aminotrasnferase-AST, -glutamiltransferase-GGT, bilirrubina total, bilirrubina direta, triglicerídeos, colesterol total, colesterol HDL , glicose, ureia, creatinina, acido úrico e albumina. Para hematologia, eritrócitos, hematócrito e hemoglobina apresentaram significância estatística e os índices da Fase 2 foram mais elevados em ambas, para essas variáveis, quando comparados à Fase 1. No caso das plaquetas, a Fase 2 apresentou níveis mais elevados que os observados para a Fase 1. Foi possível observar que as enzimas de função hepática ALT e GGT foram inferiores na Fase 1 quando comparadas a Fase 2 e AST apresentou comportamento inverso, sendo mais elevada na Fase 1. Embora sem significância estatística é possível observar que os índices de colesterol e a fração HDL tendem a ser mais elevados para os animais da Fase 1 quando comparados a Fase 2; pode ser correlacionado há elevação de triglicerídeos na Fase 1. Juntamente com a função hepática, a função renal também foi significativa entre fases. Ureia e creatinina apresentaram valores inferiores na Fase 1. A triagem fitoquímica demonstrou a presença de saponina, terpenos, óleos voláteis, flavonoide glicosilado, triterpenos, flavonoide, anglicona e tanino. No que tange as bactérias foram testadas: Escherichia coli (2), Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes, Bacillus spp. (2), Staphylococcus spp. (3), o extrato hidroalcoólico bruto em estudo, demostrou atividade inibitória frente aos isolados testados, resultante de efeito bacteriostático dos componentes do extrato.

This research was carried out in the Dois Irmãos State Park (PEDI), Recife, Pernambuco. Five sloths of the species Bradypus variegatus Schinz 1825, known as brown-throated sloths, in captivity or semi-captivity condition were used. The representatives of this species, in freedom, feed on a varied arrangement of plants, however there is a preference for species of the genus Cecropia. This work had as general objective: to evaluate the feed interaction between Bradypus variegatus in captivity and Cecropia pachystachya, and as specific objectives: to describe the hematological and biochemical patterns, the phytochemical profile and in vitro antimicrobial activity of the extract against bacteria obtained from cows with clinical, and subclinical mastitis. Descriptions of reference parameters for hematological and serum biochemical levels were performed in five animals feeding on Cecropia pachystachya, called phase 1, in alternating periods with phase 2 free diet. The parameters were, respectively: erythrocytes, hematocrit, hemoglobin, mean corpuscular volume-MCV, mean corpuscular hemoglobin-CHCM, range of distribution of red blood cells-RDW, leukocytes, rod neutrophils, segmented neutrophils, basophils, eosinophils, lymphocytes, monocytes, platelets and alanine aminotransferase-ALT, aspartate aminotransferase-AST, aspartate aminotransferase-AST -glutamyltransferase-GGT, total bilirubin, direct bilirubin, triglycerides, total cholesterol, HDL cholesterol, glucose, urea, creatinine, uric acid and albumin. For hematology, erythrocytes, hematocrit and hemoglobin were statistically significant and Phase 2 indices were higher in both, for these variables, when compared to Phase 1. In the case of platelets, Phase 2 had higher levels than those observed for Phase 1. It was possible to observe that the liver function enzymes ALT and GGT were lower in Phase 1 when compared to Phase 2 and AST showed an inverse behavior, being higher in Phase 1. Although not statistically significant, it is possible to observe that cholesterol indices and fraction HDL tends to be higher for Stage 1 animals compared to Stage 2; can be correlated with an elevation of triglycerides in Phase 1. Along with liver function, renal function was also significant between phases. Urea and creatinine had lower values in Phase 1. Phytochemical screening demonstrated the presence of saponin, terpenes, volatile oils, glycosylated flavonoids, triterpenes, flavonoids, anglicones and tannins. Regarding the bacteria, the following were tested: Escherichia coli, (2) Klebsiella pneumoniae, Bacillus spp. (2), Enterobacter aerogenes, Staphylococcus spp. (3), the crude hydroalcoholic extract under study, showed inhibitory activity against the tested isolates, resulting from the bacteriostatic effect of the extract components .

CARACTERIZAÇÃO FENOTÍPICA E GENOTÍPICA DE Salmonella enterica DE ORIGEM AVÍCOLA E ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE EXTRATOS DE PRÓPOLIS

Objetivou-se com este estudo caracterizar fenotipicamente e genotipicamente isolados provenientes de amostras de origem alimentar e ambiental, além de avaliar a ação antibiótica in vitro de extratos de própolis verde e vermelha. Os 128 isolados de Salmonella enterica foram obtidos e analisados quanto à suscetibilidade antimicrobiana pelo método de difusão em disco. Os antimicrobianos e concentrações em microgramas testadas foram: amoxicilina- ácido clavulânico (30µg), cotrimoxazol (trimetropim-sulfametoxazol) (25g), ciprofloxacina (5g), enrofloxacina (5g), ceftiofur (30g), cloranfenicol (30g), fosfomicina (200g) e doxiciclina (30g). As cepas Salmonella Enteritidis (ATCC 13076), Salmonella Typhimurium (ATCC 14028) e Escherichia coli (ATCC 25922) foram utilizadas como controle da qualidade dos testes de sensibilidade. Foram pesquisados dois genes de virulência e nove de resistência. Dentre os 128 isolados, 40 foram testados frente a ação da própolis. Os extratos de própolis diluídos em etanol foram avaliados quanto à sua atividade antimicrobiana nas concentrações de 0,2 a 100 mg/mL bactericida mínima. Foram encontrados 27 diferentes sorotipos, sendo os mais frequentes Salmonella Heidelberg, Saintpaul, Typhimurium e Minnesota. Verificou-se que 85,2% dos isolados foram resistentes a um ou mais agentes antimicrobianos utilizados e apenas cinco sorotipos não apresentaram resistência. Foram identificados 54 isolados multirresistentes. Dos oito antimicrobianos avaliados, para dois deles (cloranfenicol e fosfomicina) todos os isolados foram susceptíveis e aquele com maior número de isolados resistentes foi a ciprofloxacina. Dentre os genes de resistência avaliados (blaCTX-M e gyrA), cerca de 70% dos isolados o albergavam. Em relação aos de virulência, três (invA, hilA e sseD) foram identificados em todos os isolados testados. Para os outros seis, spvR foi o que apresentou maior número de isolados nos quais não foi identificado. Dos 18 diferentes sorotipos testados frente a ação antibiótica da própolis, o mais susceptível foi Salmonella Senftenberg e os mais resistentes: Agona, Braenderup, Heidelberg, Infantis, Minnesota, Schwarzengrund, Newport, Orion, Saintpaul e Anatum. Em geral, os menores valores de concentração inibitória e bactericida mínima foram 3,1 mg/mL e 6,25 mg/mL, respectivamente. A melhor ação antimicrobiana foi da própolis vermelha, independentemente do tipo de extração utilizada para obtenção dos extratos. Sendo assim, a própolis pode ser uma alternativa viável como antimicrobiano sob Salmonella sp por possuir potencial de ação expressivo. Buscar alternativas para o tratamento e controle de microrganismos patogênicos tem sido importante mediante o surgimento de cepas multirresistentes.

The objective of this study was to characterize phenotypically and genotypically isolates from food and environmental samples, as well as to evaluate the in vitro antibiotic action of green and red propolis extracts. The 128 isolates of Salmonella enterica were obtained and analyzed for antimicrobial susceptibility by disk diffusion method. The antimicrobials and microgram concentrations tested were: amoxicillin-clavulanic acid (30µg), cotrimoxazole (trimetropim- sulfamethoxazole) chloramphenicol (30g), chloramphenicol (30g) and doxycycline (30g). Salmonella Enteritidis (ATCC 13076), Salmonella Typhimurium (ATCC 14028) and Escherichia coli (ATCC 25922) strains were used as a quality control of the sensitivity tests. Two genes of virulence and nine of resistance were searched. Among the 128 isolates, 40 were tested against propolis action. Propolis extracts diluted in ethanol were evaluated for their antimicrobial activity ranging from 0.2 to 100 mg / mL inhibitory and bactericidal concentration. We found 27 different serotypes, the most common was Salmonella Heidelberg, Saintpaul, Typhimurium and Minnesota. It was found that 85.2% of the isolates were resistant to one or more antimicrobial agents used and only five serotypes showed no resistance. We identified 54 multiresistant isolates. Of the eight antimicrobials evaluated, for two of them (chloramphenicol and phosphomycin) all isolates were susceptible and the one with the largest number of resistant isolates was ciprofloxacin. Among the resistance genes evaluated (blaCTX-M and gyrA), about 70% of the isolates harbored it. Regarding virulence genes, three (invA, hilA and sseD) were identified in all isolates tested. For the other six, spvR presented the highest number of isolates in which it was not identified. Of the 18 different serotypes tested against antibiotic action of propolis, the most susceptible were Salmonella Senftenberg and the most resistant: Agona, Braenderup, Heidelberg, Children, Minnesota, Schwarzengrund, Newport, Orion, Saintpaul and Anatum. In general, the lowest inhibitory and minimum bactericidal concentration values were 3.1 mg / mL and 6.25 mg / mL, respectively. The best antimicrobial action was for red propolis, regardless of the type of extraction used to obtain the extracts. Thus, propolis may be a viable alternative as antimicrobial under Salmonella sp because it has expressive action potential. Seeking alternatives for the treatment and control of pathogenic microorganisms has been important through the emergence of multiresistant strains.

Toxicity of herbicides on Escherichia coli growth / Toxicidade de herbicidas sobre o crescimento de Escherichia coli

Agriculture uses a huge variety and quantity of chemicals. If, on one hand, the goal is to increase productivity, on the other hand these products contaminate aquatic environments. Among these products, herbicides deserve greater attention in relation to contamination of aquatic environments due to their extensive use to weed control. This study was carried out because the effects of these molecules on aquatic microorganisms such as Escherichia coli, is still unclear. Using microdilution plate assays, Escherichia coli were exposed to various commercial formulations of herbicides widely used in Brazil. The herbicide paraquat was the only one able to prevent the growth of Escherichia coli and is characterized as bacteriostatic.

A agricultura utiliza uma enorme variedade de produtos químicos, e se por um lado a meta é aumentar a produtividade, por outro lado estes produtos contaminam ambientes aquáticos. Entre estes produtos, herbicidas merecem maior atenção em relação à contaminação de ecossistemas aquáticos, devido a seu amplo emprego para controlar plantas daninhas. Este estudo foi realizado porque os efeitos destas moléculas em micro-organismos aquáticos, tais como Escherichia coli, ainda são pouco estudados. Através de ensaios de microdiluição, E. coli foi exposta a várias formulações comerciais de herbicidas amplamente utilizados no Brasil e foi verificado que o herbicida paraquat foi o único capaz de impedir o crescimento de E. coli, caracterizando-se assim como bacteriostático.

Toxicity of herbicides on Escherichia coli growth

Agriculture uses a huge variety and quantity of chemicals. If, on one hand, the goal is to increase productivity, on the other hand these products contaminate aquatic environments. Among these products, herbicides deserve greater attention in relation to contamination of aquatic environments due to their extensive use to weed control. This study was carried out because the effects of these molecules on aquatic microorganisms such as Escherichia coli, is still unclear. Using microdilution plate assays, Escherichia coli were exposed to various commercial formulations of herbicides widely used in Brazil. The herbicide paraquat was the only one able to prevent the growth of Escherichia coli and is characterized as bacteriostatic.

A agricultura utiliza uma enorme variedade de produtos químicos, e se por um lado a meta é aumentar a produtividade, por outro lado estes produtos contaminam ambientes aquáticos. Entre estes produtos, herbicidas merecem maior atenção em relação à contaminação de ecossistemas aquáticos, devido a seu amplo emprego para controlar plantas daninhas. Este estudo foi realizado porque os efeitos destas moléculas em micro-organismos aquáticos, tais como Escherichia coli, ainda são pouco estudados. Através de ensaios de microdiluição, E. coli foi exposta a várias formulações comerciais de herbicidas amplamente utilizados no Brasil e foi verificado que o herbicida paraquat foi o único capaz de impedir o crescimento de E. coli, caracterizando-se assim como bacteriostático.

In vitro antibacterial activity of some antihistaminics belonging to different groups against multi-drug resistant clinical isolates

Antihistaminics are widely used for various indications during microbial infection. Hence, this paper investigates the antimicrobial activities of 10 antihistaminics belonging to both old and new generations using multiresistant Gram-positive and Gram-negative clinical isolates. The bacteriostatic activity of antihistaminics was investigated by determining their MIC both by broth and agar dilution techniques against 29 bacterial strains. Azelastine, cyproheptadine, mequitazine and promethazine were the most active among the tested drugs. Diphenhydramine and cetirizine possessed weaker activity whereas doxylamine, fexofenadine and loratadine were inactive even at the highest tested concentration (1 mg/ml). The MIC of meclozine could not be determined as it precipitated with the used culture media. The MBC values of antihistaminics were almost identical to the corresponding MIC values. The bactericidal activity of antihistaminics was also studied by the viable count technique in sterile saline solution. Evident killing effects were exerted by mequitazine, meclozine, azelastine and cyproheptadine. Moreover, the dynamics of bactericidal activity of azelastine were studied by the viable count technique in nutrient broth. This activity was found to be concentration-dependant. This effect was reduced on increasing the inoculum size while it was increased on raising the pH. The post-antimicrobial effect of 100 fg/ml azelastine was also determined and reached up to 3.36 h.

A COMPARATIVE STUDY OF BACTERIOSTATIC ACTIVITY OF SYNTHETIC HYDROXYLATED FLAVONOIDS

Among other properties, flavonoids present a notable bacteriostatic activity. In this paper, minimal inhibitory concentrations (MICs) of 5,7,4'-trihydroxyflavanone (naringenin), 5,7-dihydroxyflavone and 2',4',4- trihydroxychalcone (isoliquitirigenin) against Staphylococcus aureus ATCC 25 923 were determined and compared to values obtained for other chalcones and flavanones previously investigated. Specific growth rates and MICs were determined by a turbidimetric kinetic method. The observed sequence MICflavanone (inactive) >MIC7-hidroxyflavanone (197.6 µgml-1)>MIC5,7,4'-trihydroxyflavanone (120 µgml-1) showed that the introduction of an electron donating group (-OH) causes an increase in bioactivity. On the other hand, the comparisons MIC5,7,4'-trihydroxyflavanone (120 µgml-1) >>> MIC2',4',4-trihydroxychalcone (29 µgml-1) and MIC5,7-dihydroxyflavone (105 µgml-1) >>> MIC2',4'-dihydroxychalcone (28.8 µgml-1) indicated that the chalcone structure is the most favourable for bacteriostatic activity within the flavonoid family.

Os flavonóides apresentam, entre outras, uma notável atividade bacteriostática. Neste trabalho determinaram-se as concentrações inibitórias mínimas de 5,7,4'-trihidroxiflavanona (naringenina), 5,7-dihidroxiflavona e 2',4',4-trihidroxichalcona (isoliquitirigenina) frente a Staphylococcus aureus ATCC 25 923 e comparadas com valores obtidos para outras chalconas e flavanonas investigadas previamente. As velocidades específicas de crescimento e as MICs foram avaliadas por um método cinético-turbidimétrico. A sequência observada MICflavanona(inactiva) >MIC7-hidroxiflavanona (197,6 µgml-1) > MIC5,7,4'-trihidroxiflavanona (120 µgml-1) mostrou que a introdução de um grupo doador de elétrons (-OH) provoca um aumento da bioatividade. Por outro lado, MIC5,7,4'-trihidroxiflavanona (120 µg ml-1) >>> MIC2',4',4-trihidroxichalcona (29 µg ml-1) e MIC5,7-dihidroxiflavona (105 µg ml-1) >>> MIC2',4'-dihidroxichalcona (28,8 µg ml-1) permitiram concluir que a estrutura chalcona é a mais favorável para a atividade bacteriostática dentro da família dos flavonóides.