PCR-RLFP characterization of Leishmania spp. in domestic animals from the south-western border of Brazil / Caracterização de Leishmania spp. pela técnica de PCR-RFLP em animais domésticos da fronteira Oeste do Brasil

The aim of this study was to characterize Leishmania spp. from canine and feline samples using Polymerase Chain Reaction (PCR)- Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP). It was conducted in the southern region of Brazil, located at border crossings to Argentina and Uruguay. Samples were collected from 116 dogs (Canis lupus familiaris) and 89 cats (Felis catus). The PCR was performed to screen for an LT1 fragment from kinetoplast DNA (kDNA) target gene, and positive samples were subjected to a second PCR for an internal transcribed spacers (ITS1) region from ribosomal DNA (rDNA) target. RFLP was performed using the Haemophilus aegyptius (HAE III) restriction endonuclease (Fermentas ®). Positive samples by PCR ITS1 were sequenced and deposited in NCBI GenBank, and a phylogenetic analysis was developed. We found that 12.9% (15/116) of the samples from dogs were positive. All the 89 cat samples were negative. Positive samples were tested against Leishmania reference strains presenting different patterns in PCR-RFLP, and these samples showed bands denoting similarity to the standard species of Leishmania infantum, proven through sequencing and phylogenetic analysis. The RFLP technique, alone, was shown to be feasible for practical application and confirmation of the involved Leishmania spp.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar espécies de Leishmania em amostras de caninos e felinos, utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR)- polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição (RFLP). O estudo foi realizado na região de fronteira no sul do Brasil, divisa com Argentina e Uruguai. Amostras foram coletadas de 116 cães (Canis lupus familiaris) e 89 gatos (Felis catus). A PCR foi realizada com o gene alvo do fragmento LT1 do DNA do cinetoplasto (kDNA) para triagem e, as amostras positivas foram submetidas a uma segunda PCR com alvo ITS1 no DNA ribossomal (rDNA). O RFLP foi realizado com a endonuclease de restrição Haemophilus aegyptius (HAE III) (Fermentas ®). As sequências positivas no PCR-ITS1 foram depositadas no NCBI GenBank, além disso, a análise filogenética foi realizada. Foram detectadas 12,9% (15/116) amostras positivas em cães. Das 89 amostras de gatos todas foram negativas. Cepas de referência de Leishmania, com padrões diferentes na PCR-RFLP, e amostras positivas apresentaram similaridade das bandas com as espécies padrão de Leishmania infantum, o que foi comprovado no sequenciamento e análise filogenética. A técnica de RFLP, sozinha, demonstrou viabilidade para a aplicação prática e a confirmação das espécies de Leishmania spp. envolvidas.(AU)

Myxobolus freitasi n. sp. (Myxozoa: Bivalvulida), a parasite of the brain of the electric knifefish in the Brazilian Amazon region / Myxobolus freitasi n. sp. (Myxozoa: Bivalvulida), parasita do cérebro do peixe-faca elétrico na Amazônia brasileira

A total of 30 specimens of the Amazonian electric knifefish, Brachyhypopomus beebei Schultz, 1944 (Gymnotiformes: Hypopomidae), were collected from the Peixe-Boi River in the state of Pará, Brazil (1°0659 S; 47°1826 W). Fragments of the brain tissue were extracted for analysis via optical microscopy, and 18 specimens (60%) presented microparasites of the genus Myxobolus, with unequal capsules. The spores were 18.6 µm (17.7-19.8 µm) long and 8.6 µm (8.4-9.0 µm) wide; the largest polar capsule was 13.0 µm (12.4-13.4 µm) long and 5.6 µm (5.3-6.0 µm) wide, and the smallest capsule was 5.0 µm (4.5-5.3 µm) long and 2.5 µm (2.3-2.6 µm) wide. Infected brain fragments were extracted for histological processing and staining with hematoxylin-eosin and Ziehl-Neelsen. Some fragments were conserved in ethanol for molecular genetics analysis. A partial sequence of the 18S DNA gene was obtained from the spores, which did not correspond to any other sequences deposited in GenBank, although it did form a clade with other Myxobolus parasites of the nervous system. The morphological data, together with molecular phylogeny, supported the designation of a new species Myxobolus freitasi n. sp.(AU)

Um total de 30 espécimes do peixe-faca elétrico da Amazônia, Brachyhypopomus beebei Schultz, 1944 (Gymnotiformes: Hypopomidae), foram coletados no rio Peixe-Mani, no estado do Pará, Brasil (1 ° 06'59 S; 47 ° 18 ' 26 W). Fragmentos de tecido cerebral foram extraídos para análise em microscopia óptica, sendo que 18 espécimes (60%) apresentavam microparasitos do gênero Myxobolus, com cápsulas desiguais. Os esporos apresentavam 18,6 µm (17,7-19,8 µm) de comprimento e 8,6 µm (8,4-9,0 µm) de largura; a maior cápsula polar tinha 13,0 µm (12,4-13,4 µm) de comprimento e 5,6 µm (5,3-6,0 µm) de largura, e a menor cápsula tinha 5,0 µm (4,5-5,3 µm) de comprimento e 2,5 µm (2,3-2,6 µm) de largura. Fragmentos cerebrais infectados foram extraídos para processamento histológico e coloração com hematoxilina-eosina e Ziehl-Neelsen. Alguns fragmentos foram conservados em etanol para análise genética molecular. Dos esporos, foi obtida uma sequência parcial do gene 18S do DNA, que não correspondeu a nenhuma outra sequência depositada no GenBank, embora tenha formado um clado com outros parasitas do gênero Myxobolus do sistema nervoso. Os dados morfológicos, juntamente com a filogenia molecular, apoiaram a designação de uma nova espécie Myxobolus freitasi n. sp.(AU)

Molecular investigation of Toxoplasma gondii in oysters (Crassostrea spp. ) sold on beaches in the State of Pará, Brazil / Investigação molecular de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea spp. ) comercializadas em praias do estado do Pará, Brasil

The aim of this study was to detect Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea spp.) sold on seven beaches in the State of Pará, Brazil. According to the National Program for Hygiene and Sanitary Control of Bivalve Mollusks, 100 g of the edible part of mollusks is required to analyze contaminating microorganisms. In this study, 12 oysters were assumed to be equivalent to 100 g of edible parts when preparing each pooled sample. In total, 360 oysters were purchased from 30 vendors. From groups of 12 oysters purchased per vendor, 60 pooled samples were obtained, comprising 30 gill tissues and 30 gastrointestinal tracts. For molecular analysis, nested-PCR was conducted to amplify a 155-base-pair product of the B1 gene from T. gondii. All analyzed samples were negative for T. gondii. Our findings indicate that the oyster samples sold on the beaches in the State of Pará were not contaminated by T. gondii.(AU)

O objetivo deste estudo foi detectar DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea spp.) comercializadas em sete praias do Estado do Pará, Brasil. De acordo com o Programa Nacional de Controle Higiênico Sanitário de Moluscos Bivalves, 100 g da parte comestível dos moluscos são necessários para a análise de microrganismos contaminantes. Neste estudo, 12 ostras foram consideradas equivalentes a 100 g de partes comestíveis na preparação de cada amostra agrupada. No total, 360 ostras foram compradas de 30 vendedores. De grupos de 12 ostras adquiridas por vendedor, foram obtidas 60 amostras agrupadas, compreendendo 30 tecidos branquiais e 30 tratos gastrointestinais. Para a análise molecular, a nested PCR foi realizada para amplificar um produto de 155 pares de bases do gene B1 de T. gondii. Todas as amostras analisadas foram negativas para T. gondii. Os resultados indicam que as amostras de ostras comercializadas em praias do Estado do Pará não foram contaminadas por T. gondii.(AU)

First report of detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp) in the state of Maranhão / Primeiro relato da detecção de DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp) no Estado do Maranhão

The aim of this study was to report on detection of Toxoplasma gondii DNA in oysters (Crassostrea sp.) in the state of Maranhão. To conduct this study, 200 farmed oysters were acquired in the municipality of Raposa and 100 in Paço do Lumiar; and a further 100 oysters were taken from the natural stock in the municipality of Primeira Cruz. This total of 400 specimens sampled was divided into 80 pools composed of five animals each. The gills and visceral mass of each oyster were removed for DNA extraction (per pool of oysters), using a commercial kit. The nested PCR technique (with the primer SAG-1) was then used to investigate any presence of protozoa. This molecular technique demonstrated the presence of DNA of T. gondii in 2.5% of the pools of oysters (n = 2/80): these oysters were exclusively from farms. The results from this study allow the conclusion that oysters of the genus Crassostrea that are farmed in the state of Maranhão are capable of filtering oocysts of T. gondii and maintaining them in their tissues. They are therefore potential sources of contamination for humans and other animals.(AU)

Objetivou-se com este estudo relatar a detecção do DNA de Toxoplasma gondii em ostras (Crassostrea sp.) no estado do Maranhão. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa, e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz. Do total de 400 exemplares amostrados, formaram-se 80 pools em que cada pool foi constituído por cinco animais. De cada ostra foi procedida à retirada das brânquias e massa visceral, seguido da extração de DNA de cada pool de ostras, com a utilização de kit comercial. Posteriormente, realizou-se a pesquisa do protozoário por meio da técnica de nested PCR (primer SAG-1). Com a técnica molecular utilizada, foi diagnosticado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools de ostras oriundas exclusivamente de cultivo. Com os resultados obtidos neste estudo, conclui-se que ostras do gênero Crassostrea sp., cultivadas no estado do Maranhão, são capazes de filtrar e manter nos seus tecidos oocistos de T. gondii, sendo, portanto, fontes potenciais de contaminação para seres humanos e outros animais.(AU)

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.

Listeria monocytogenes en leche de vaca producida por granjas lecheras familiares / Listeria monocytogenes in cow's milk produced by family-owned dairy farms / Listeria monocytogenes em leite de vaca produzido por propriedades leiteiras familiares

Refrigeration is an important milk preservation method. However, milk quality may deteriorate if the product is refrigerated for long periods, mainly due to the growth of psychrotrophic bacteria. This group of microorganisms includes pathogenic genera, most notably Listeria monocytogenes. The detection of this bacterium in food is important, given its pathogenic effects on human and animal health and also its economic relevance. This study focused on detecting the presence of L. monocytogenes in milk samples collected at small family-owned dairy farms. Samples were cultivated on PALCAM and ALOA agars for microbiological analysis and a molecular analysis by polymerase chain reaction was performed for the detection of L. monocytogenes. Despite the negative results obtained in both these analyses, further studies are recommended to confirm or refute the negligible effect of L. monocytogenes on small dairy farms.(AU)

A refrigeração é um método importante de preservação do leite. No entanto, a qualidade do leite pode piorar se o produto for mantido sob refrigeração por longos períodos, principalmente devido ao crescimento de bactérias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos inclui gêneros patogênicos, mais notavelmente Listeria monocytogenes. A detecção dessa bactéria em alimentos é importante, tendo em vista seus efeitos patogênicos na saúde humana e animal e também sua relevância econômica. Este estudo teve como objetivo detectar a presença de L. monocytogenes em amostras de leite coletadas em pequenas fazendas leiteiras de propriedade familiar. As amostras foram cultivadas em ágar PALCAM e ALOA para análise microbiológica e análise molecular por reação em cadeia da polimerase para detecção de L. monocytogenes. Apesar dos resultados negativos obtidos em ambas as análises, estudos adicionais são recomendados para confirmar ou refutar o efeito insignificante de L. monocytogenes em pequenas fazendas leiteiras.(AU)

La refrigeración es un método importante de conservación de la leche. Sin embargo, la calidad de la leche puede deteriorarse si el producto se refrigera durante períodos prolongados, principalmente debido al crecimiento de bacterias psicrotróficas. Este grupo de microorganismos incluye géneros patógenos, más notablemente Listeria monocytogenes. La detección de esta bacteria en los alimentos es importante, dados sus efectos patógenos sobre la salud humana y animal y también su relevancia económica. Este estudio se centró en detectar la presencia de L. monocytogenes en muestras de leche recolectadas en pequeñas granjas lecheras familiares. Las muestras se cultivaron en agares PALCAM y ALOA para análisis microbiológico y se realizó un análisis molecular por reacción en cadena de la polimerasa para la detección de L. monocytogenes. A pesar de los resultados negativos obtenidos en ambos análisis, se recomiendan más estudios para confirmar o refutar el efecto insignificante de L. monocytogenesen pequeñas granjas lecheras.(AU)

Leptospirosis in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil / Leptospirose em capivaras de vida livre (Hydrochaeris hydrochaeris) de um campus universitário na cidade de Araras em São Paulo, Brasil

The capybara (Hydrochaeris hydrochaeris L. 1766) is the largest existing rodent in the world. This animal species, being synanthropic, may serve as a transmitter of different diseases and parasitic infections in animals and humans as well. Leptospirosis is a cosmopolitan infectious disease with a high prevalence in tropical and subtropical regions that can affect humans and other domestic and wild animals. Due to the absence of regional data and the importance of this animal species in transmitting diseases to animals and humans, the aim of this study was to analyze DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil. A total of 31 capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) were captured for collecting their blood samples. The collected sera were analyzed using the microscopic agglutination test (MAT). For the detection of Leptospira spp. DNA, the serum samples were used to extract genomic DNA for the nested-PCR analysis. Out of the 31 serum samples, 29 (93.55%) were reactive for MAT, with titers ranging from 25 to 400. The antibody could be identified against the most probable serovar in 26 (89.65%) samples, namely: Grippotyphosa (69.23%), Autumnalis (26.92%), and Bratislava (3.85%). Presence of Leptospira via nested-PCR was found only in 3.22% of serum samples. This study revealed the presence of DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybara. Characterization of these animals as possible carriers and disseminators of the etiological agent in the environment is necessary for identification of infection in other animals and campus visitors.

A capivara (Hydrochaeris hydrochaeris, L., 1766) é o maior roedor existente, pertencente a ordem Rodentia e família Hydrichaeridae. Esta espécie animal por ser sinantrópica pode ser transmissora de diferentes enfermidades infecto-parasitárias para animais e também para o homem. Entre as enfermidades, destaca-se a leptospirose, doença infecciosa cosmopolita com elevada prevalência em regiões tropicais e subtropicais que pode acometer o homem e outros animais domésticos e silvestres. Devido à ausência de dados regionais e a importância desta espécie animal para a saúde única o objetivo deste trabalho foi detectar DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris) de vida livre provenientes de um campus universitário da cidade de Araras em São Paulo, Brasil. Foram capturadas 31 capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris), as quais passaram por coletas de sangue, onde os soros colhidos foram analisados mediante a técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Para a detecção de DNA de Leptospira spp., as amostras de soro foram submetidas a extração de DNA e esses submetidos à técnica de nested-PCR. Das 31 amostras de soro, 29 (93,55%) foram reagentes na SAM com títulos variando de 25 a 400. Em 26 (89,65%) amostras foi possível identificar o anticorpo contra o sorovar mais provável sendo: Grippotyphosa (69,23%), Autumnalis (26,92%) e Bratislava (3,85%) e em uma amostra de soro (3,22%) evidenciou-se a presença de leptospiras através da nested-PCR. Este estudo evidenciou a presença de DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivara de vida livre, caracterizando estes animais como possíveis portadores e disseminadores do agente etiológico no ambiente, permitindo a infecção de outros animais e também de visitantes do campus.

Leptospirosis in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil / Leptospirose em capivaras de vida livre (Hydrochaeris hydrochaeris) de um campus universitário na cidade de Araras em São Paulo, Brasil

The capybara (Hydrochaeris hydrochaeris L. 1766) is the largest existing rodent in the world. This animal species, being synanthropic, may serve as a transmitter of different diseases and parasitic infections in animals and humans as well. Leptospirosis is a cosmopolitan infectious disease with a high prevalence in tropical and subtropical regions that can affect humans and other domestic and wild animals. Due to the absence of regional data and the importance of this animal species in transmitting diseases to animals and humans, the aim of this study was to analyze DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) from a university campus in the city of Araras in São Paulo, Brazil. A total of 31 capybaras (Hydrochaeris hydrochaeris) were captured for collecting their blood samples. The collected sera were analyzed using the microscopic agglutination test (MAT). For the detection of Leptospira spp. DNA, the serum samples were used to extract genomic DNA for the nested-PCR analysis. Out of the 31 serum samples, 29 (93.55%) were reactive for MAT, with titers ranging from 25 to 400. The antibody could be identified against the most probable serovar in 26 (89.65%) samples, namely: Grippotyphosa (69.23%), Autumnalis (26.92%), and Bratislava (3.85%). Presence of Leptospira via nested-PCR was found only in 3.22% of serum samples. This study revealed the presence of DNA and anti-Leptospira spp. antibodies in free-living capybara. Characterization of these animals as possible carriers and disseminators of the etiological agent in the environment is necessary for identification of infection in other animals and campus visitors.(AU)

A capivara (Hydrochaeris hydrochaeris, L., 1766) é o maior roedor existente, pertencente a ordem Rodentia e família Hydrichaeridae. Esta espécie animal por ser sinantrópica pode ser transmissora de diferentes enfermidades infecto-parasitárias para animais e também para o homem. Entre as enfermidades, destaca-se a leptospirose, doença infecciosa cosmopolita com elevada prevalência em regiões tropicais e subtropicais que pode acometer o homem e outros animais domésticos e silvestres. Devido à ausência de dados regionais e a importância desta espécie animal para a saúde única o objetivo deste trabalho foi detectar DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris) de vida livre provenientes de um campus universitário da cidade de Araras em São Paulo, Brasil. Foram capturadas 31 capivaras (Hydrochaeris hydrochaeris), as quais passaram por coletas de sangue, onde os soros colhidos foram analisados mediante a técnica de Soroaglutinação Microscópica (SAM). Para a detecção de DNA de Leptospira spp., as amostras de soro foram submetidas a extração de DNA e esses submetidos à técnica de nested-PCR. Das 31 amostras de soro, 29 (93,55%) foram reagentes na SAM com títulos variando de 25 a 400. Em 26 (89,65%) amostras foi possível identificar o anticorpo contra o sorovar mais provável sendo: Grippotyphosa (69,23%), Autumnalis (26,92%) e Bratislava (3,85%) e em uma amostra de soro (3,22%) evidenciou-se a presença de leptospiras através da nested-PCR. Este estudo evidenciou a presença de DNA e anticorpos anti-Leptospira spp. em capivara de vida livre, caracterizando estes animais como possíveis portadores e disseminadores do agente etiológico no ambiente, permitindo a infecção de outros animais e também de visitantes do campus.(AU)

Oncicola venezuelensis (Marteau, 1977) (Acanthocephala: Oligacanthorhynchidae) in Puma concolor in Rio de Janeiro, Brazil / Oncicola venezuelensis (Marteau, 1977) (Acanthocephala: Oligacanthorhynchidae) em Puma concolor no Rio de Janeiro, Brasil

Specimens of Oncicola venezuelensis (Marteau, 1977) were recovered from fragments of intestinal tissue of a female Puma concolar (Linn, 1771) found dead in Petrópolis, Rio de Janeiro in 2017. A total of 140 helminths were recovered. Five males and 5 females of the helminths were analyzed morphologically as well as 50 parasite eggs recovered in intestinal contents. Morphologically, these helminths were compatible with the genus Oncicola, because of the size and shape of the proboscis, the size and disposition of the lemnisci and the morphometry of the eggs, in which the external membrane of the shell was delicate and clear. From histopathology, the helminths were deeply embeded in the mucosa reaching up to the muscle layer. One specimen was also identified molecularly with universal primers that amplified the eukaryote region ITS1-5.8S-ITS2. The helminth showed 99% identity with the gene sequence of O. venezuelensis deposited in GenBank. It is important to emphasize, this parasite has been very little reported in the literature, which reinforces the importance of this report.(AU)

Espécimes de Oncicola venezuelensis (Marteau, 1997) foram recuperados de fragmentos do tecido intestinal de uma fêmea de Puma concolor (Linn, 1771) encontrada morta em Petrópolis, Rio de Janeiro, em 2017. Um total de 140 helmintos foram recuperados. Cinco machos e 5 cinco fêmeas dos helmintos foram analisados morfologicamente, bem como 50 ovos dos parasitos recuperados no conteúdo intestinal. Morfologicamente, esses helmintos eram compatíveis com o gênero Oncicola, devido ao tamanho e formato da probóscide, o tamanho e disposição do leminisco e a morfometria dos ovos, que apresentaram membrana externa da casca delicada e clara. A partir da histopatologia, pode-se verificar que os helmintos estavam profundamente inseridos na mucosa, atingindo até a camada muscular. Um espécime também foi identificado molecularmente com primers universais que amplificam a região ITS-1.5.8S.ITS-2. Após as análises moleculares, foi verificado que os helmintos apresentavam 99% de identidade com sequência gênica de O. venezuelensis que está depositada no Genbank. É importante enfatizar, que esse parasito foi muito pouco relatado na literatura, demonstrando a importância deste relato.(AU)

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time.

Detecção molecular de grupos de bactérias fermentadoras no rúmen de bovinos e bubalinos em Santarém-PA / Molecular detection of groups of fermentative bacteria in the rumen of cattle and buffaloes in Santarém-PA

O objetivo deste trabalho foi detectar grupos de bactérias do conteúdo ruminal de bubalinos e bovinos utilizando técnicas de Biologia Molecular. As coletas foram realizadas no Frigorífico Mararu, na cidade de Santarém-PA. Foram coletadas 10 amostras de líquido ruminal, sendo 5 de bovinos e 5 de bubalinos. A extração de DNA foi realizada segundo o protocolo do Kit Brasílica baseado em sílica. Para a detecção das bactérias, foram utilizados os primers 16S L2 e 1472, AR e BR. Foi utilizado para a PCR, num volume de 25 µl, o kit PCR Mix LGC 2X. As amostras foram corridas em gel de agarose 3% corado com Azul de Bromofenol e GelRed. Após a corrida, o gel foi visualizado em radiação UV. Os primers utilizados na amplificação da região do gene 16S rRNA se mostraram eficientes para os estudos de detecção das bactérias ruminais. Foi observada a diferença entre bovinos e bubalinos, onde os primers L2 e 1472 amplificaram em bovinos o grupo de bactérias fibrolíticas e em bubalinos o grupo de bactérias não fibrolíticas. Enquanto os primers AR e BR amplificaram o grupo de bactérias não fibrolíticas para bovinos e o grupo de bactérias fibrolíticas para bubalinos. Os trabalhos de identificação de bactérias ruminais em bubalinos é escasso, por isso a importância dos resultados encontrados. Houve diferença nos grupos de microrganismos encontrados nos ruminantes entre bubalinos e bovinos, e no tipo de primer utilizado, mostrando a importância do estudo das bactérias presentes no rúmen. O estudo realizado necessita de uma abordagem maior, como o sequenciamento das amostras de DNA para se identificar melhor as espécies presentes dentro dos diferentes grupos detectados. Outras técnicas de Biologia Molecular podem ser utilizadas para uma melhor acurácia dos dados encontrados, como o uso da PCR em tempo real.(AU)

The objective of this work was to detect groups of bacteria in the rumen content of buffaloes and cattle using molecular biology techniques. The samplings were carried out in the Fridge Mararu, in the city of Santarém-PA. Were collected 10 samples of ruminal fluid, being 5 to buffaloes and 5 of cattle. DNA extraction was performed according to the protocol of the Kit Brasílica based on silica. For the detection of bacteria, we used primers 16S L2 and 1472, AR and BR. It was used for PCR, a volume of 25 µl PCR kit Mix LGC 2X. The samples were run on 3% agarose gel stained with bromophenol blue and GelRed. The gel was visualized on a UV radiation. The primers used in the amplification of the region of the 16S rRNA gene was shown to be effective for the studies of detection of ruminal bacteria. It was observed the difference between cattle and buffalo, where the primers L2 and 1472 amplified in cattle the group of fibrolytic bacteria and in buffaloes the group of not fibrolytic bacteria. While the primers AR and BR amplified the group of not fibrolytic bacteria forcattle and the group of fibrolytic bacteria to Buffalo. The work of identification of ruminal bacteria in buffaloes is scarce, so the importance of the results found. There was a difference in the groups of microorganisms found in ruminants between buffaloes and cattle, and the type of primer used, showing the importance of the study of bacteria in the rumen. The study requires a larger approach, such as the sequencing of the DNA samples to better identify the species present within the different groups were detected. Other Molecular Biologytechniques can be used for better accuracy of data found, such as the use of PCR in real time. (AU)

New occurrence of Kudoa orbicularis parasitizing the freshwater catfish Trachelyopterus galeatus (Siluriformes: Auchenipteridae) in the Brazlian Amazon region / Nova ocorrência de Kudoa orbicularis parasitando peixe de água doce Trachelyopterus galeatus (Siluriformes: Auchenipteridae) na região Amazônica brasileira

The aim of this was describe an infection by Kudoa orbicularis in freshwater catfish Trachelyopterus galeatus. A sample of 80 specimens of T. galeatus was collected in the municipality of Cachoeira do Arari, Marajó Island, in the state of Pará, Brazil. Pseudocysts were found in the muscle fibers of the epaxial and hypaxial regions of 85.0% of the specimens analyzed, reflecting a high infection rate. The pseudocysts contained spores that were pseudo-square in shape, with a mean length of 4.65 µm (range: 4.045.54) and mean width of 1.53 µm (1.561.74). Analyses on the morphology of the spores and a partial 934-bp sequence of the SSU rDNA gene confirmed that the microparasite was Kudoa orbicularis. This is the second record of this microparasite in a siluriform host in the Brazilian Amazon region.(AU)

O objetivo deste estudo foi descrever a infecção por Kudoa orbicularis em Trachelyopterus galeatus. Foram analisados 80 espécimes de T. galeatus capturados no município de Cachoeira do Arari, ilha de Marajó, estado do Pará, Brasil. A presença de pseudocistos nas fibras musculares das regiões epiaxial e hipoaxial em 85,0% dos exemplares analisados, mostra alto grau de infecção. Os pseudocistos continham esporos de formato pseudoquadrado, medindo 4,65 (4,04-5,54) µm de comprimento e 5,25 (4,78-5,98) µm de largura, com quatro cápsulas polares de tamanho iguais medindo 2,22 (2,05-2,32) µm de comprimento e 1,53 (1,56-1,74) µm de largura. Através das análises morfológicas dos esporos e molecular de uma sequência parcial de 934bps do gene SSU rDNA, confirma que o microparasito é Kudoa orbicularis, sendo este o segundo registro desse microparasito em hospedeiro da ordem Siluriformes da Amazônia brasileira.(AU)

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Spatiotemporal expression pattern of alpha, beta, and gamma genes during BoHV-5 infection / Expressão temporal de genes alfa, beta e gama durante ainfecção pelo BoHV-5

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)

Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)

Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

Detecção molecular de Neospora caninum em macaco-da-noite (Aotus azarae) de vida livre no estado do Mato Grosso: relato de caso / Molecular detection of Neospora caninum in azara's night monkey (Aotus azarae) of wildlife in the state of Mato Grosso: Case report

Estudos indicam, por meio de infecção experimental, que primatas não humanos são susceptíveis à infecção por Neospora caninum. Relata-se um caso de um macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus), que apresentou sinais inespecíficos e não respondeu à terapêutica clínica de suporte, evoluindo a óbito, encaminhado em seguida para exame anatomopatológico. Amostras de tecidos foram coletadas e processadas rotineiramente para confecção de lâminas histológicas. Microscopicamente, a principal lesão foi observada no coração e consistia em miocardite necrótica multifocal por protozoário, com a presença de estruturas compatíveis com o estágio de taquizoítos de protozoários dos gêneros Neospora sp. ou Toxoplasma sp. No sistema nervoso central, predominantemente no tronco encefálico, havia estruturas semelhantes às descritas no coração. Os resultados da reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram positivos para N. caninum e negativos para Toxoplasma gondii, usando DNA extraído do sangue e dos tecidos. Este relato de caso fornece evidências histológicas e moleculares de que o primata em questão foi susceptível a uma infecção natural, porém estudos devem ser realizados para investigar o real papel dos primatas no ciclo de vida de N. caninum.(AU)

Studies indicate through experimental infection that non-human primates are susceptible to infection by Neospora caninum. This report is of a case of a night monkey (Aotus azarae infulatus) that presented nonspecific signs and did not respond to supportive clinical therapy evolving to death, followed by a pathology examination. Tissue specimens were routinely collected and processed for the preparation of histological slides. Microscopically, the main lesion was observed in the heart and consisted of multifocal necrotic myocarditis by protozoa, with the presence of structures compatible with the stage of protozoan tachyzoites of the genus Neospora sp. or Toxoplasma sp. In the central nervous system, predominantly in the brainstem there were structures similar to those described in the heart. Polymerase chain reaction (PCR) results were positive for N. caninum and was negative for Toxoplasma gondii using DNA extracted from blood and tissues. This case report provides histological and molecular evidence that the primate in question was susceptible to a natural infection, but studies should be conducted to investigate the real role of primates in the life cycle of N. caninum.(AU)

Detecção molecular de Neospora caninum em macaco-da-noite (Aotus azarae) de vida livre no estado do Mato Grosso: relato de caso / Molecular detection of Neospora caninum in azara's night monkey (Aotus azarae) of wildlife in the state of Mato Grosso: Case report

Estudos indicam, por meio de infecção experimental, que primatas não humanos são susceptíveis à infecção por Neospora caninum. Relata-se um caso de um macaco-da-noite (Aotus azarae infulatus), que apresentou sinais inespecíficos e não respondeu à terapêutica clínica de suporte, evoluindo a óbito, encaminhado em seguida para exame anatomopatológico. Amostras de tecidos foram coletadas e processadas rotineiramente para confecção de lâminas histológicas. Microscopicamente, a principal lesão foi observada no coração e consistia em miocardite necrótica multifocal por protozoário, com a presença de estruturas compatíveis com o estágio de taquizoítos de protozoários dos gêneros Neospora sp. ou Toxoplasma sp. No sistema nervoso central, predominantemente no tronco encefálico, havia estruturas semelhantes às descritas no coração. Os resultados da reação em cadeia pela polimerase (PCR) foram positivos para N. caninum e negativos para Toxoplasma gondii, usando DNA extraído do sangue e dos tecidos. Este relato de caso fornece evidências histológicas e moleculares de que o primata em questão foi susceptível a uma infecção natural, porém estudos devem ser realizados para investigar o real papel dos primatas no ciclo de vida de N. caninum.(AU)

Studies indicate through experimental infection that non-human primates are susceptible to infection by Neospora caninum. This report is of a case of a night monkey (Aotus azarae infulatus) that presented nonspecific signs and did not respond to supportive clinical therapy evolving to death, followed by a pathology examination. Tissue specimens were routinely collected and processed for the preparation of histological slides. Microscopically, the main lesion was observed in the heart and consisted of multifocal necrotic myocarditis by protozoa, with the presence of structures compatible with the stage of protozoan tachyzoites of the genus Neospora sp. or Toxoplasma sp. In the central nervous system, predominantly in the brainstem there were structures similar to those described in the heart. Polymerase chain reaction (PCR) results were positive for N. caninum and was negative for Toxoplasma gondii using DNA extracted from blood and tissues. This case report provides histological and molecular evidence that the primate in question was susceptible to a natural infection, but studies should be conducted to investigate the real role of primates in the life cycle of N. caninum.(AU)

A utilização de técnicas moleculares para a identificação de espécies em pescado

A identificação de espécies em alimentos é assunto de grande interesse para toda a cadeia de produção, para a fiscalização e para o meio acadêmico. Geralmente, o pescado é identificado com base nas características físicas de cada espécie. Porém, devido às limitações das análises morfológicas, as técnicas moleculares estão sendo cada vez mais empregadas para essa finalidade. A grande maioria destas utiliza a PCR para amplificar uma região de interesse do DNA de um material ou de um organismo, seguida da aplicação de métodos para a identificação da espécie. Os métodos mais utilizados são: eletroforese em gel, RFLP, PCR em tempo real, sequenciamento de DNA e DNA barcode, cada um com suas vantagens e aplicações específicas. As fraudes pela adição ou substituição de espécies em pescado ferem as legislações vigentes no Brasil e podem trazer graves consequências, incluindo perdas econômicas, desequilíbrios ambientais e riscos à saúde pública.(AU)

Avaliação das técnicas de imunodifusão em gel de ágar, ensaio imunoenzimático indireto e reação em cadeia da polimerase no diagnóstico da brucelose ovina / Evaluation of technical, immunodiffusion agar gel, enzyme-linked immunosorbent assay and polymerase chain reaction in the diagnosis of ovine brucellosis

A brucelose na espécie ovina tem recebido destaque, uma vez que se trata de uma enfermidade que acomete o sistema reprodutivo dos animais, provocando sério comprometimento no setor produtivo. Dessa forma, objetivou-se a avaliação de três métodos para o diagnóstico da brucelose ovina: o ensaio imunoenzimático indireto (ELISAi), a técnica imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e a reação em cadeia da polimerase (PCR). Para tanto, utilizaram-se 211 amostras de sangue de ovinos oriundos de propriedades de nove municípios da microrregião homogênea de Teresina, Piauí. As 211 amostras de sangue foram submetidas aos testes sorológicos e à PCR, visando detectar anticorpos anti-B. ovis e DNA de Brucella ovis, respectivamente. Foram obtidos resultados positivos nos testes sorológicos, sendo 36 (17,06%) positivos no teste IDGA e sete (3,31%) positivos no teste ELISAi, contudo não houve resultados positivos na técnica de PCR. Dos métodos de diagnóstico utilizados neste estudo, o teste IDGA foi o que apresentou melhor desempenho na detecção de animais reagentes, quando comparado ao teste ELISAi e à PCR em amostras de sangue, e o percentual de animais soropositivos sugere uma ampla distribuição de ovinos infectados por Brucella ovis na região em estudo, o que pode causar prejuízos aos produtores.(AU)

Brucellosis in sheep has received a major focus, since it is a disease that affects the reproductive system of animals, causing serious impairment in the productive sector. Thus, three methods for the diagnosis of ovine brucellosis were evaluated as goal, the indirect Linked Immunosorbent Assay (ELISAi) test, the Immunodiffusion Agar Gel (AGID) technique and the Polymerase Chain Reaction (PCR). Therefore, we used 211 sheep blood samples from properties of nine municipalities of the homogeneous micro-region of Teresina, Piaui. The 211 blood samples were subjected to serologic testing and PCR to detect anti-B. ovis antibodies, and Brucella ovis DNA, respectively. Positive results in serological tests were obtained, 36 (17%) positive in the AGID test and seven (3.3%) positive to the ELISAi test, however, there were no positive results in the PCR technique. Of the diagnostic methods used in this study, the AGID test was the one that presented the best performance in the detection of reactive animals, when compared to ELISAi and PCR in blood samples and, the percentage of seropositive animals suggests a wide distribution of Brucella ovis infected sheep in the study region and could cause loss to producers.(AU)

A utilização de técnicas moleculares para a identificação de espécies em pescado

A identificação de espécies em alimentos é assunto de grande interesse para toda a cadeia de produção, para a fiscalização e para o meio acadêmico. Geralmente, o pescado é identificado com base nas características físicas de cada espécie. Porém, devido às limitações das análises morfológicas, as técnicas moleculares estão sendo cada vez mais empregadas para essa finalidade. A grande maioria destas utiliza a PCR para amplificar uma região de interesse do DNA de um material ou de um organismo, seguida da aplicação de métodos para a identificação da espécie. Os métodos mais utilizados são: eletroforese em gel, RFLP, PCR em tempo real, sequenciamento de DNA e DNA barcode, cada um com suas vantagens e aplicações específicas. As fraudes pela adição ou substituição de espécies em pescado ferem as legislações vigentes no Brasil e podem trazer graves consequências, incluindo perdas econômicas, desequilíbrios ambientais e riscos à saúde pública.