Resumo
No Brasil a esquistossomose mansônica acomete cerca de sete milhões de pessoas e 25 milhões estão sob risco contrair a infecção. Uma das medidas de controle da esquistossomose é o uso de moluscicidas, dentre os naturais testados, o látex de Euphorbia milii var. hislopii apresentou-se como potencial moluscicida em baixas concentrações, enquadrando-se nos critérios da OMS. Este trabalho tem por objetivo verificar as alterações imunológicas e teciduais provocadas pela exposição à concentração subletal do látex de E. milii por 24 horas em Biomphalaria glabrata infectada por Schistosoma mansoni. As analises foram feitas em quatro grupos de moluscos: infectado por S. mansoni e exposto ao látex (IE), não infectado e exposto ao látex (E), apenas infectado (I) e controle - sem infecção e exposição (C). As alterações imunológicas foram analisadas individualmente em 10 moluscos de cada grupo, através da quantificação e tipagem de hemócitos e produção de óxido nítrico. Em relação à histologia, cinco moluscos de cada grupo foram separados para a análise, através de cortes longitudinais. Os resultados relacionados a contagem de hemócitos foram: o grupo I apresentou menor quantidade de hemócitos, e o grupo IE a maior. Os grupos E e C não apresentaram diferença significativa. Foram encontrados três tipos de hemócitos: hialinócitos, granulócitos e células blásticas. Em todos os grupos a proporção hialinócitos foi superior, C (59,8%), E (47,5%), I (45,7%), IE (41,3%). Nos grupos E (28,4%), I (36,8%) e IE (31,7%) o segundo maior tipo de hemócitos foi granulócitos, seguido por células blásticas em menor proporção. No grupo C as células blásticas representaram 27,5%, seguido dos granulócitos 12,5%. Não houve diferença significativa entre os tipos celulares e os diferentes grupos analisados em 24 horas. Comparando os tipos de hemócitos em cada grupo, observamos diferença significativa entre o número de células do tipo hialinócitos e blásticas tanto nos grupos controle, como dos infectados. Com relação a produção de óxido nítrico (NO), os moluscos do grupo C apresentaram uma quantidade superior comparado aos demais. Não houve diferença na produção NO comparando o grupo IE, com os grupos E e I. O grupo E apresentou uma redução em comparação com o grupo I. A exposição ao látex promoveu no grupo IE, intensa proliferação de hemócitos no tentáculo, manto, mufla, glândula digestiva, rim e ovotestes. Na glândula digestiva e no rim foram observadas reações granulomatosas em torno dos esporocistos, característica de moluscos refratários à infecção. No manto, foi observado destruição tecidual com esporocistos mortos. No grupo E também houve proliferação hemocitária no rim e na glândula digestiva, além de edemas na região do manto.Conclui-se que a concentração subletal do látex de E. milii influenciou a resposta imune celular de uma linhagem suscetível de B. glabrata a infecção por S.mansoni, levando a destruição dos parasitos no tecido como observado em linhagens de moluscos resistentes a infecção.
In Brazil, schistosomiasis mansoni affects about 7 million people and other 25 millions are at the risk of becoming infected with it. One of the ways to control schistosomiasis is the use of molluscicides to control the intermediate host. Among the non-chemicals tested, latex Euphorbia milii var. hislopii showed molluscicide potencial in low concentrations following the criteria of WHO. This thesis aimed to verify Biomphalaria glabrata immunological and tissue changes caused by exposure to a sublethal concentration of E. milii latex for 24 hours. The analysis were made in 4 groups of mollusks : infected by S. mansoni and exposed to latex (IE) uninfected and exposed to latex (E), only infected (I) and control neither infected nor exposed (C). The immunological analysis was made in 10 mollusks of each group through the quantification, chracterization of hemocytes and production of nitric oxide. In relation to histology, five mollusks of each group were separated to the analysis, through longitudinal sections. The results related to the number of hemocytes were: group I presented the lower number of hemocytes than others and group IE showed the significative increase comparing with the others. The groups E and C did not present significative difference. Three types of hemocytes were found: hyalinocytes, granulocytes and blast-like cells. In all the groups the proportion of hyalinocytes was superior, C (59,8%), E (47,5%), I (45,7%), IE (41,3%). In groups E (28,4%), I (36,8%) and IE (31,7%) the second greatest type was granulocytes followed by blast-like cells in lower proportion. In group C the blast-like cells represented 27,5%, followed by granulocytes 12,5%. There was no significant difference among the cell types and the different groups analyzed in 24 hours. Comparing the types of hemocytes in each group significant difference was observed between the number of cells of the type hyalinocytes and blast-like in the control and infected group. Concerning the NO production, the mollusks of group C showed an increase comparing with the others. There was no difference in the NO production comparing the group IE with the groups E and I. Whereas the group E presented a reduction in relation to the group I. The E.milii latex exposition promoted, in the group infected by S. mansoni a great proliferation of hemocytes in the tentacles, mantle, mufla, digestive gland, kidney and ovotestis. In the digestive gland and the kidney were observed granulomatous reactions around the sporocysts, characteristics of mollusks resistant to the infection. In the mantle, tissue destruction with dead sporocysts was observed. In the uninfected group and exposed, there was also proliferation of hemocytes in the kidney and the digestive gland, besides of this we observed edema in the mantle area. We conclude that the sublethal concentration of the latex of E. milii influenced the immune response of the suscetible lineage B. glabrata to infection by S.mansoni, promoving the destruction of parasites as observed in resistant snails.
Resumo
A interação entre hospedeiros intermediários e helmintos pode causar alterações metabólicas e reprodutivas no molusco hospedeiro, que começam a usar suas reservas para manter as funções vitais, na elaboração de resposta imunológica e reparação de danos teciduais e também para compensar a drenagem de nutrientes/energia pelos parasitos em desenvolvimento. Investigações sobre as co-infecções por helmintos de espécies diferentes podem fornecer informações essenciais sobre a biologia da sua co-existência, refletindo aspectos mais próximos àqueles que encontramos em condições naturais. Nossos objetivos foram investigar as alterações reprodutivas, avaliar a atividade da lactato desidrogenase e as concentrações de glicose na hemolinfa e glicogênio no complexo glândula digestiva-gônada e massa cefalopediosa, e também verificar alterações histológicas e histoquímicas de Biomphalaria glabrata experimentalmente co-infectados com Echinostoma paraensei e Angiostrongylus cantonensis. Cinco grupos de moluscos (não infectados, com infecções simples (Echinostoma paraensei ou Angiostrongylus cantonensis) e dupla, seja E. paraensei primeiro (E + A) ou A. cantonensis primeiro (A + E)) foram acompanhados; três vezes por semana durante quatro semanas o número de massas de ovos, número de ovos e número de moluscos eclodidos foram contados. Amostras para a análise histológica e histoquímica do ovoteste, glândula do albúmen, complexo glândula digestiva e massa cefalopediosa foram coletadas após quatro semanas, assim como amostras para a análise bioquímica. O número de massas de ovos/molusco, ovos/molusco e moluscos eclodidos dos moluscos infectados apresentaram diferenças significativas quando comparados com o grupo controle, especialmente no grupo E + A, cuja a maioria dos valores dos parâmetros analisados foi inferior a 50% dos valores observados para os moluscos controle. Um decréscimo significativo nos níveis de glicose e de glicogênio, em contraste com um aumento de atividade da lactato desidrogenase foi observado nos exemplares infectados. Estes resultados indicam que a demanda de energia intensa leva o molusco infectado ao aumento da degradação anaeróbia de carboidratos para obtenção de energia em uma taxa compatível com o aumento da demanda energética, numa tentativa de manter a homeostase glicêmica. As análises histológicas e histoquímicas mostraram que a presença de ambos os parasitos nos órgãos analisados associados com intensa desorganização celular.
The interaction between intermediate hosts and helminths can cause metabolic and reproductive changes in the host snail, they start using their reserves to maintain its vital functions, immune system activation, repair of tissue damage and also to supply the necessary energy for the parasites development. Investigations of co-infection by different helminths can provide essential information about the biology of their co-existence. Our aims are investigate the reproductive changes, evaluate the activity of lactate dehydrogenase and the concentrations of glucose in the hemolymph and glycogen in the digestive gland complex and cephalopedal mass, and also verify histological and histochemical changes of Biomphalaria glabrata experimentally co-infected with Echinostoma paraensei and Angiostrongylus cantonensis. Five groups of snails i.e. uninfected, with single and double infections, either E. paraensei first (E+A) or A. cantonensis first (A+E) were followed; three times a week during four weeks the numbers of egg masses, eggs and hatched snails were counted. Histological and histochemical samples of the ovotestis, albumen gland, digestive gland complex and cephalopedal mass was collected after four weeks as well samples for the biochemical analysis. The number of egg masses/snail, eggs/snail and hatched snails showed significative differences comparing the control group to all infected groups, especially in group E + A, with the majority of values of parameters analyzed lower than 50% of those observed for control snails. A significant decrease in glucose levels and glycogen content, in contrast an increase of lactate dehydrogenase activity was observed in the infected snails. These results indicate intense energy demand that takes the snail increasing the anaerobic degradation of carbohydrates in the infected snails to obtain energy in an attempt to maintain homeostasis. The histological analysis showed that presence of both parasites in the all organs analysed and the parasites were associated with cell disorganization.
Resumo
Parasitos pertencentes ao gênero Echinostoma caracterizam por apresentar um ciclo biológico complexo, com dois hospedeiros intermediários e sítio final de infecção restrito ao lúmen intestinal de seus hospedeiros definitivos. Estes hospedeiros são representados principalmente por aves aquáticas e semi-aquáticas, mamíferos, incluindo o homem, e ocasionalmente algumas espécies de répteis e peixes. Possuem como primeiros hospedeiros intermediários moluscos límnicos, onde os miracídios penetram ativamente e desenvolvem até os estágios de esporocistos, rédias e cercárias. Por sua vez, crustáceos, anfíbios, peixes e moluscos límnicos atuam como segundos hospedeiros intermediários onde ocorre a formação de metacercárias, estágios infectantes ao hospedeiro definitivo. Neste estudo, Biomphalaria glabrata foi experimentalmente infectada com diferentes doses miracidiais (5 ou 50) de E. paraensei. Os moluscos foram dissecados após uma, duas, três e quatro semanas de infecção para a coleta da hemolinfa e tecidos (complexo gônada-glândula digestiva- GGD e massa cefalopediosa). Na hemolinfa foram quantificadas as concentrações de glicose e de ácidos carboxílicos (succínico, pirúvico, lático e oxálico), bem como a atividade da lactato desidrogenase (LDH). Nos tecidos de estocagem foram mensurados os conteúdos de glicogênio e consumo de oxigênio (O2). Alterações foram observadas na glicemia dos moluscos, em ambas as situações de parasitismo, com significativo aumento dos níveis de glicose verificado a partir da terceira semana de infecção quando comparado ao grupo controle. Mudanças foram também descritas em relação à atividade da lactato desidrogenase, sendo caracterizadas pelo aumento de sua atividade nos períodos mais tardios da infecção. Em paralelo, verificou-se um decréscimo nos conteúdos de glicogênio em tecidos de armazenamento, sendo tal redução maior na glândula digestiva (sítio de desenvolvimento larval), em comparação à massa cefalopediosa. A infecção por ambas as doses miracidiais ainda resultou em um aumento dos níveis de ácidos oxálico e lático, bem como em um declínio nos conteúdos de ácidos pirúvico e succínico em B. glabrata. Significativa supressão no estado fosforilativo (estado 3 respiratório) e no consumo basal de oxigênio (estado 1 e 2) em B. glabrata infectada por E. paraensei foi demonstrada, indicando que a infecção por este equinostomatídeo diminui a capacidade do hospedeiro intermediário em realizar reações oxidativas aeróbias. Variações relevantes relacionadas ao estado mitocondrial desacoplado (estado 3u) de B. glabrata infectada por tal trematódeo foram também descritas. Tais resultados demonstram redução na taxa de descarboxilação oxidativa das reações que integram o ciclo do ácido tricarboxílico e aceleração do processo de degradação anaeróbia de carboidratos nos moluscos infectados, através da fermentação lática, essencial para garantir a obtenção de energia e o sucesso da infecção. Assim, os resultados observados neste estudo demonstram que a infecção com cinco ou 50 miracídios de E. paraensei provocou consideráveis alterações metabólicas em B. glabrata, sendo que os moluscos expostos a maior carga miracidial apresentaram os maiores danos, caracterizando uma resposta dosedependente.
Parasites belonging to the Echinostoma genus are characterized by having a complex biological cycle, with two intermediate hosts and a final habitat restricted to the intestinal lumen of the definitive hosts. These hosts include aquatic birds, mammals (including humans) and occasionally some reptile and fish species. Their first intermediate hosts are freshwater snails, into which the miracidia actively penetrate for development of the next three stages (sporocysts, rediae and cercariae). Freshwater crustaceans, amphibians, fish and snails act as the second intermediate hosts, enabling the formation of metacercariae, the infective larval stage to the definitive host. In this work, Biomphalaria glabrata specimens were experimentally infected with different doses (5 or 50) of E. paraensei miracidia. The snails were dissected one, two, three and four weeks after infection to collect the hemolymph, shells and tissues (gonad-digestive gland complex- GDG). In the hemolymph were quantified glucose concentrations and carboxylic acids (succinic, pyruvic, lactic and oxalic acids), as well as the activity of lactate dehydrogenase (LDH). The storage of tissues was measured glycogen content and oxygen consumption (O2). Changes were observed in glycemia of the snails, in both situations parasitism, with significant increase in glucose levels observed from the third week post infection when compared to the control group. Changes have also been described in relation to the activity of lactate dehydrogenase and are characterized by the increase of its activity in the later periods of infection. In parallel, there was a decrease in glycogen content in storage tissues, being such greater reduction in the digestive gland (larval development site) in comparison to the cephalopedal mass. In addition, the infection by both miracidiais doses resulted in increased levels of oxalic acid and lactic acid, as well as a decline in the content of pyruvic and succinic acids in B. glabrata. The prepatent infection by this equinostomatideo still significantly suppressed the phosphorylation state (state 3 respiration) and basal oxygen consumption (state 1 and 2) in B. glabrata, demonstrating that infection by E. paraensei decreases the capacity of the intermediate host in performing aerobic oxidative reactions. These results demonstrate the reduction in oxidative decarboxylation rate of the reactions that are part of the tricarboxylic acid cycle and acceleration of the process of anaerobic degradation of carbohydrates in the infected snails by lactic acid fermentation, it is essential to ensure the obtaining of energy and the success of the infection. Thus, the results observed in this study demonstrate that infection with five or 50 miracidia of E. paraensei caused significant metabolic changes in B. glabrata snails being exposed to the largest load miracidial showed the greatest damage, featuring a dose-dependent response.
Resumo
A esquistossomose mansônica no Brasil constitui-se um grave problema para a saúde pública, o que tem motivado inúmeras pesquisas envolvendo formas alternativas de controle do molusco hospedeiro, Biomphalaria glabrata. O presente estudo teve por objetivos: (1) avaliar o potencial moluscicida de Solanum lycocarpum procedente da Estação Ecológica Pirapitinga, TrêsMarias, MG e do campus Seropédica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, RJ através de bioensaios com B. glabrata e (2) verificar efeitos crônicos, nos moluscos sobreviventes, da exposição ao extrato aquoso da planta sobre a reprodução (número de massas ovígeras) e mortalidade. Folhas da planta, após secas a temperatura ambiente, foram picotadas e pesadas para a preparação da infusão a 10%, a partir da qual foram obtidas as concentrações 2,5 e 5%. Os moluscos utilizados nos bioensaios apresentavam 9-13 mm de diâmetro de concha. Os extratos obtidos da planta, na concentração de 10%, determinaram as maiores taxas de mortalidade ao final do bioensaio, 100 e 93,4% respectivamente para as duas localidades de coleta. Sendo dessa forma, comprovada sua ação moluscicida. Decorridos 90 dias de observação, verificou-se a influência dos extratos sobre o parâmetro mortalidade dos moluscos sobreviventes aos bioensaios.(AU)
Schistosomiasis, in Brazil, is a serious problem for the public health, which has motivated numerous studies involving alternative forms of control the host snail, Biomphalaria glabrata. The objectives of the present study were: (1) to evaluate the molluscicidal potential of Solanum lycocarpum coming from the Estação Ecológica de Pirapitinga, Três Marias, Minas Gerais state and from campus Seropédica of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro state through bioassays with B. glabrata and (2) to verify chronic effect, in the surviving snails, of the exposition to the aqueous extract of the plant on the reproduction (number the egg mass) and mortality. Leaves of the plant were droughts in ambient temperature, cut and weighed for the infusion preparation 10%, from which concentrations 2.5 and 5% were prepared. The snails used in the bioassays showed 9-13 mm shell diameter. Strong molluscicidal activity was observed, already in first the 24 hours of observation with the 10% concentration, for the plants came from the two analyzed localities. After 90 days of observation the influence of extracts on the parameter mortality of the surviving snails to the bioassays was observed.(AU)
Assuntos
Solanum lycopersicum/classificação , Biomphalaria/classificação , Esquistossomose mansoni/patologia , Reprodução/genética , Mortalidade/tendênciasResumo
A esquistossomose mansônica no Brasil constitui-se um grave problema para a saúde pública, o que tem motivado inúmeras pesquisas envolvendo formas alternativas de controle do molusco hospedeiro, Biomphalaria glabrata. O presente estudo teve por objetivos: (1) avaliar o potencial moluscicida de Solanum lycocarpum procedente da Estação Ecológica Pirapitinga, TrêsMarias, MG e do campus Seropédica da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, RJ através de bioensaios com B. glabrata e (2) verificar efeitos crônicos, nos moluscos sobreviventes, da exposição ao extrato aquoso da planta sobre a reprodução (número de massas ovígeras) e mortalidade. Folhas da planta, após secas a temperatura ambiente, foram picotadas e pesadas para a preparação da infusão a 10%, a partir da qual foram obtidas as concentrações 2,5 e 5%. Os moluscos utilizados nos bioensaios apresentavam 9-13 mm de diâmetro de concha. Os extratos obtidos da planta, na concentração de 10%, determinaram as maiores taxas de mortalidade ao final do bioensaio, 100 e 93,4% respectivamente para as duas localidades de coleta. Sendo dessa forma, comprovada sua ação moluscicida. Decorridos 90 dias de observação, verificou-se a influência dos extratos sobre o parâmetro mortalidade dos moluscos sobreviventes aos bioensaios.
Schistosomiasis, in Brazil, is a serious problem for the public health, which has motivated numerous studies involving alternative forms of control the host snail, Biomphalaria glabrata. The objectives of the present study were: (1) to evaluate the molluscicidal potential of Solanum lycocarpum coming from the Estação Ecológica de Pirapitinga, Três Marias, Minas Gerais state and from campus Seropédica of the Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro state through bioassays with B. glabrata and (2) to verify chronic effect, in the surviving snails, of the exposition to the aqueous extract of the plant on the reproduction (number the egg mass) and mortality. Leaves of the plant were droughts in ambient temperature, cut and weighed for the infusion preparation 10%, from which concentrations 2.5 and 5% were prepared. The snails used in the bioassays showed 9-13 mm shell diameter. Strong molluscicidal activity was observed, already in first the 24 hours of observation with the 10% concentration, for the plants came from the two analyzed localities. After 90 days of observation the influence of extracts on the parameter mortality of the surviving snails to the bioassays was observed.
Assuntos
Biomphalaria/classificação , Solanum lycopersicum/classificação , Esquistossomose mansoni/patologia , Mortalidade/tendências , Reprodução/genéticaResumo
O nematóide Angiostrongylus cantonensis foi primeiramente descrito como parasito de artéria pulmonar de Rattus norvegicus e Rattus rattus em Canton, China. Este helminto tem sido mencionado como principal agente etiológico da meningoencefalite eosinofílica humana, uma metazoonose endêmica no continente asiático e que recentemente, tem-se disseminado para África, Norte e Sul da América e Ilhas do Caribe. Atualmente, o Brasil é considerado área de alto risco ao estabelecimento da angiostrongilíase humana, justificado não somente pela presença de moluscos, mas também roedores naturalmente infectados, que atuam respectivamente como hospedeiros intermediários e definitivos desse parasito, fatores que favorecem diretamente a dinâmica de transmissão da angiostrongilíase neural. Em seu ciclo de vida moluscos atuam como hospedeiros intermediários, possibilitando a partir se sua infecção, o desenvolvimento de formas larvais infectantes ao hospedeiro definitivo. Nos últimos anos, a caracterização de padrões metabólicos de moluscos infectados experimentalmente, tem sido estudada como base para o desenvolvimento de medidas focadas principalmente no controle de patologias transmitidas por estes organismos. Porém, quando nos referimos a modelos experimentais utilizando A. cantonensis e Biomphalaria glabrata, os dados ainda são escassos, o que preocupa, não apenas pela importância do parasito, mas também pela ampla distribuição da espécie B. glabrata no Brasil. Neste estudo, foram observadas alterações no metabolismo mineral, lipídico e oxidativo de B. glabrata, decorrentes da infecção experimental por A. cantonensis. Para isso, foram utilizados moluscos da linhagem pigmentada criados desde a oviposição e mantidos em condições laboratóriais. Foram formados dois grupos: controle (C1, C2, C3) com animais não infectados e infectados (I1, I2 e I3). Os grupos eram compostos por 10 moluscos. Todo experimento foi feito em duplicata, utilizando um total de 120 moluscos. Após 1, 2 e 3 semanas de infecção, 20 moluscos de cada grupo eram dissecados para a coleta da hemolinfa e tecidos. As leituras espectrofotométricas foram realizadas a partir de kits comercias da marca Doles. As dosagens bioquímicas demonstraram que a infecção por A. cantonensis induziu uma diminuição significativa nos conteúdos hemolinfáticos de cálcio após primeira semana de infecção, seguido por um aumento nas concentrações desse íon na segunda semana de estudo. Este cenário foi acompanhado por uma intensa mobilização de CaCO3 na concha de moluscos infectados, possivelmente como tentativa em restabelecer o equilíbrio ácido-base alterado durante o desenvolvimento do parasito. Resultados histopatológicos demonstraram ainda alterações morfológicas na glândula digestiva de moluscos infectados, caracterizadas principalmente na forma de reações granulomatosas e áreas de calcificação metastática. Variações nas reservas de lipídios neutros estocados no complexo glândula digestiva-gônoda foram também demonstradas. A infecção resultou em um decréscimo significativo nos conteúdos de colesterol e no aumento dos níveis de ácido graxo e triacilglicerol após as duas primeiras semanas de infecção. O aumento nos conteúdos de ácido graxo foi associado ao aumento da atividade lipásica, indicando que A. cantonensis induz de fato a ativação de um processo lipolítico durante etapa de desenvolvimento em seu hospedeiro intermediário. Por fim, a infecção de A. cantonensis resultou em mudanças no metabolismo oxidativo de B. glabrata. Além da depleção de reservas polissacarídicas estocadas na glândula digestiva e massa cefalopodal, o parasitismo por A. cantonensis induziu a ativação do metabolismo anaeróbio de seu hospedeiro, resultando não apenas no aumento da atividade da lactato desidrogenase hemolinfática, mas também na redução dos níveis de ácido pirúvico e acúmulo de lactato. Isso representa uma interessante resposta adaptativa do hospedeiro frente à infecção, possibilitando o hospedeiro a partir do metabolismo anaeróbio, gerar energia e ao mesmo tempo mantém seu balanço redox. Adicionalmente, a redução nas concentrações de ácido oxálico observado nos períodos finais do desenvolvimento parasitário, sugere o seu desvio para a gliconeogênese, destacando o envolvimento dessa molécula como precursora na síntese de glicose-6-fosfato. Este cenário metabólico foi acompanhado por uma supressão na fosforilação oxidativa de moluscos infectados (1 e 2 semanas) de infecção, sugerindo uma diminuição na quantidade de mitocôndrias no tecido analisado, ou ainda, na inibição de centros enzimáticos relacionados às reações oxidativas.
Angiostrongylus cantonensis Chen, 1935 was first described as a parasite of the pulmonary artery of Rattus norvegicus and Rattus rattus in Canton, China. This helminth is an etiological agent of eosinophilic meningoencephalitis, a zoonotic disease endemic to certain Asian countries, which has recently dispersed to Africa, North and South America, and Caribbean islands. Currently Brazil is considered an area of high risk for the establishment of human angiostrongyliasis, due mainly to the occurrence of naturally infected snails and rodents, acting respectively as definitive and intermediate hosts of this parasite, directly favoring the transmission dynamics of neural angiostrongyliasis. In its life cycle, snails act as intermediate hosts, allowing the development of infective larval forms in the definitive host. In recent years, the metabolic characteristics of experimentally infected snails have been studied in an effort to develop measures to control the pathologies transmitted by these organisms. However, there is little information on the relationship between A. cantonensis and the freshwater snail Biomphalaria glabrata, which is cause for concern, not only because of the importance of this parasite, but also due to the widespread distribution of this snail in Brazil. In this study, the metabolic alterations of B. glabrata resulting from experimental infection by A. cantonensis were evaluated. For this purpose, snails of the pigmented strain were used, reared in the laboratory since oviposition. Two overall groups were formed: control (C1, C2 and C3), with uninfected animals, and treated (I1, I2 and I3), with infected snails. Each subgroup was composed of 10 snails. The entire experiment was performed in duplicate, utilizing a total of 120 snails. After one, two and three weeks of infection, 20 snails from each group were dissected to collect the hemolymph and tissues. The spectrophotometric readings were performed with Doles commercial reagent kits. The biochemical measurement demonstrated that infection by A. cantonensis induced a significant reduction in the hemolymph concentrations of calcium after one week of infection, followed by an increase in the concentrations of this ion in the second week of infection. This situation was accompanied by intense mobilization of CaCO3 in the shell of the infected snails, possibly as an attempt to reestablish the acid-base equilibrium after its alteration during the parasites development. The histopathology results also demonstrated morphological changes in the digestive gland of infected snails, mainly in the form of granulomatous reactions and areas of metastatic calcification. Variations in the reserves of neutral lipids stored in the digestive gland-gonad complex were also observed. Infection resulted in a significant decrease in the concentrations of cholesterol and an increase in the levels of fatty acid and triacylglycerol after the first two weeks of infection. The increase in the concentration of fatty acid was associated with an increase in lipase activity, indicating that A. cantonensis induces activation of a lipolytic process during development in its intermediate host. Finally, infection by A. cantonensis resulted in changes in the oxidative metabolism of B. glabrata. Besides depletion of the polysaccharide reserves stored in the digestive gland and cephalopodal mass, parasitism by A. cantonensis induced activation of the hosts anaerobic metabolism, resulting not only in an increase in activity of lactate dehydrogenase in the hemolymph, but also reduction of the levels of pyruvic acid and accumulation of lactate. This is an interesting adaptive response of the host to infection, enabling the host, through anaerobic metabolism, to generate energy while still maintaining its redox balance. Additionally, the reduction in the concentrations of oxalic acid in the final parasite development periods suggests its diversion to gluconeogenesis, indicating the involvement of this molecule as a precursor in the synthesis of glucose-6-phosphate. This metabolic condition was accompanied by a deletion in oxidative phosphorylation infected snails (1 and 2 weeks) after infection, suggesting a decrease in the number of mitochondria in the examined tissue, or suppression of enzymatic centers related to oxidative reactions.
Resumo
The attraction exerted by Biomphalaria glabrata infected with Angiostrongylus costaricensis on Schistosoma mansoni miracidia of the BH strain was tested, using a glass apparatus composed by two circular chambers connected to a channel. One mollusk or a sample of a snail conditioning water (SCW) was placed in one of the chambers, randomly selected, and the remaining of the apparatus was filled with chlorine-free water. Ten miracidia were placed in the centre of the channel and their behaviour was observed for 15 minutes. Ten replicates were made for each treatment (snail or SCW), using different specimens of mollusks or different samples of SCW. Mollusks infected with A. costaricensis attracted significantly less S. mansoni miracidia than non-infected B. glabrata. In addition, miracidia were also significantly more attracted to SCW from mollusks infected with A. costaricensis.
Utilizando-se um artefato de vidro composto por duas câmaras unidas por um canal, testamos a atração miraxonal exercida por Biomphalaria glabrata infectada por Angiostrongylus costaricensis sobre miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH. Um molusco ou uma amostra de sua água de condicionamento (SCW) foi colocado aleatoriamente em uma das câmaras, sendo o restante do artefato preenchido com água declorada. Dez miracídios foram colocados no centro do canal e seu comportamento foi observado por 15 minutos. Foram feitas dez replicações de cada experimento utilizando-se espécimes de moluscos ou de amostras de SCW diferentes. Moluscos infectados com A. costaricensis atraíram significativamente menos miracídios de S. mansoni que B. glabrata não infectada. Além disso, miracídios foram significativamente mais atraídos pela SCW de moluscos infectados com A. costaricensis.
Resumo
Biomphalaria glabrata (Say, 1818) is a freshwater pulmonate gastropod that represents great medical importance. Bradybaena similaris (Férussac, 1821) is a terrestrial pulmonate gastropod and an important plague to the different plant cultures with economic interest. Both species are intermediate hosts of helminths. These molluscs have hermaphrodites gonads producing eggs and sperm. Here, we examined histoformological aspects of hermaphrodites gonads of both B. glabrata and B. similaris. The gonad of B. similaris is subdivided into lobes and presence of glands in its interior, which was not observed in B. glabrata. Moreover, in B. similaris the germ cells are accumulated in some areas, and has one oocyte in each follicle in the gonad; however, in B. glabrata the germ cells are juxtaposed and more than one oocyte in each follicle.
Biomphalaria glabrata (Say, 1818) é um gastrópode pulmonado de água doce que desperta grande interesse médico e veterinário. Bradybaena similaris (Férussac, 1821) é um gastrópode pulmonado terrestre considerado uma praga agrícola de plantações de hortaliças. Ambas as espécies são hospedeiras intermediárias de helmintos. Esses moluscos possuem uma gônada hermafrodita produtora de óvulos e espermatozóides de forma simultânea. Neste estudo foram avaliados aspectos histomorfológicos das gônadas hermafroditas de B. glabrata e B. similaris. A gônada de B. similaris encontra-se subdividida em lobos com glândulas em seu interior, o que não foi observado em B. glabrata. Além disso, em B. similaris as células germinativas estão acumuladas em determinados pontos e com a presença de um ovócito em cada folículo da gônada; não obstante, em B. glabrata as células germinativas encontraram-se justapostas e com mais de um ovócito em cada folículo.
Resumo
The attraction exerted by Biomphalaria glabrata infected with Angiostrongylus costaricensis on Schistosoma mansoni miracidia of the BH strain was tested, using a glass apparatus composed by two circular chambers connected to a channel. One mollusk or a sample of a snail conditioning water (SCW) was placed in one of the chambers, randomly selected, and the remaining of the apparatus was filled with chlorine-free water. Ten miracidia were placed in the centre of the channel and their behaviour was observed for 15 minutes. Ten replicates were made for each treatment (snail or SCW), using different specimens of mollusks or different samples of SCW. Mollusks infected with A. costaricensis attracted significantly less S. mansoni miracidia than non-infected B. glabrata. In addition, miracidia were also significantly more attracted to SCW from mollusks infected with A. costaricensis.
Utilizando-se um artefato de vidro composto por duas câmaras unidas por um canal, testamos a atração miraxonal exercida por Biomphalaria glabrata infectada por Angiostrongylus costaricensis sobre miracídios de Schistosoma mansoni da linhagem BH. Um molusco ou uma amostra de sua água de condicionamento (SCW) foi colocado aleatoriamente em uma das câmaras, sendo o restante do artefato preenchido com água declorada. Dez miracídios foram colocados no centro do canal e seu comportamento foi observado por 15 minutos. Foram feitas dez replicações de cada experimento utilizando-se espécimes de moluscos ou de amostras de SCW diferentes. Moluscos infectados com A. costaricensis atraíram significativamente menos miracídios de S. mansoni que B. glabrata não infectada. Além disso, miracídios foram significativamente mais atraídos pela SCW de moluscos infectados com A. costaricensis.
Resumo
The behaviour of the albino and melanic variants of Biomphalaria glabrata of Belo Horizonte (MG. Brazil) was studied comparatively, in terms of their respective susceptibilities to infection by Schistosoma mansoni of the same origin, through observation of the elimination of cercariae for a three-month period and the calculation of mortality and infection rates, in control and in infected snails. The number of amoebocytes, granulocytes and hyalinocytes in the circulating hemolymph during different periods of infection was analyzed. The evolution of the infection in the tissues was observed by means of histological cross-sections. The melanic variant showed greater susceptibility to infection and a higher mortality rate. The albino variant showed a higher number of circulating amoebocytes, both granulocytes and hyalinocytes. A higher number of degenerated sporocysts were seen in the histological cross-sections of the albino variant. The results suggest that the melanic variant of B. glabrata was more susceptible to infection by S. mansoni than was the albino variant.
Foi estudado comparativamente o comportamento das variantes albina e melânica de Biomphalaria glabrata de Belo Horizonte (MG. Brasil), em relação à susceptibilidade à infecção pelo Schistosoma mansoni de mesma origem, através da observação da eliminação de cercárias por um período de três meses e a verificação das taxas de mortalidade e infecção nos moluscos controles e infectados. Analisou-se também, o número de amebócitos granulócitos e hialinócitos na hemolinfa circulante em diferentes períodos de infecção. A evolução da infecção nos tecidos foi observada através de cortes histológicos. A variante melânica apresentou maior susceptibilidade à infecção e maior taxa de mortalidade. A variante albina apresentou maior número de amebócitos circulantes, tanto granulócitos quanto hialinócitos. Nos cortes histológicos foi verificado maior número de esporocistos degenerados na variedade albina. Por estes resultados sugere-se que nas populações estudadas a variante melânica de B. glabrata, foi mais susceptível à infecção pelo S. mansoni.
Resumo
Biomphalaria glabrata (Say, 1818) is a freshwater pulmonate gastropod that represents great medical importance. Bradybaena similaris (Férussac, 1821) is a terrestrial pulmonate gastropod and an important plague to the different plant cultures with economic interest. Both species are intermediate hosts of helminths. These molluscs have hermaphrodites gonads producing eggs and sperm. Here, we examined histoformological aspects of hermaphrodites gonads of both B. glabrata and B. similaris. The gonad of B. similaris is subdivided into lobes and presence of glands in its interior, which was not observed in B. glabrata. Moreover, in B. similaris the germ cells are accumulated in some areas, and has one oocyte in each follicle in the gonad; however, in B. glabrata the germ cells are juxtaposed and more than one oocyte in each follicle.
Biomphalaria glabrata (Say, 1818) é um gastrópode pulmonado de água doce que desperta grande interesse médico e veterinário. Bradybaena similaris (Férussac, 1821) é um gastrópode pulmonado terrestre considerado uma praga agrícola de plantações de hortaliças. Ambas as espécies são hospedeiras intermediárias de helmintos. Esses moluscos possuem uma gônada hermafrodita produtora de óvulos e espermatozóides de forma simultânea. Neste estudo foram avaliados aspectos histomorfológicos das gônadas hermafroditas de B. glabrata e B. similaris. A gônada de B. similaris encontra-se subdividida em lobos com glândulas em seu interior, o que não foi observado em B. glabrata. Além disso, em B. similaris as células germinativas estão acumuladas em determinados pontos e com a presença de um ovócito em cada folículo da gônada; não obstante, em B. glabrata as células germinativas encontraram-se justapostas e com mais de um ovócito em cada folículo.
Resumo
Nesta nota é apresentada detalhadamente a metodologia (preparação dos extratos, adaptação dos caramujos, ensaio de atividade, destino dos caramujos) usada para a avaliação da atividade moluscicida de extratos de plantas frente a caramujos da espécie Biomphalaria glabrata. A adaptação desta metodologia tem o propósito de avaliar extratos naturais para a busca de produtos alternativos mais baratos, biodegradáveis, seguros e disponíveis localmente, para o controle das populações de caramujos.(AU)
The methodology (extract preparation, adaptation of the snails, activity test, destiny of the snails) used for the evaluation of the molluscicidal activity of plant extracts in relation to snails from the Biomphalaria glabrata species appears in detail in this note. The adaptation of this methodology has the purpose of evaluating natural extracts in order to find cheaper, biodegradable, safe and easily available alternative products for the control of the populations of snails.(AU)
En este apunte se presenta detalladamente la metodología (preparación de los extractos, adaptación de los caracoles, ensayo de actividad, destino de los caracoles) utilizada para la evaluación de la actividad moluscicida de extractos de plantas frente a caracoles de la especie Biomphalaria glabrata. La adaptación de esta metodología tiene el propósito de evaluar extractos naturales para la búsqueda de productos alternativos más baratos, biodegradables, seguros y disponibles localmente, para el control de las poblaciones de caracoles.(AU)
Assuntos
Caramujos , Caramujos/parasitologia , Moluscos , Esquistossomose/prevenção & controle , Esquistossomose/epidemiologia , Fasciola hepatica/isolamento & purificação , Schistosoma mansoni/isolamento & purificação , Niclosamida/administração & dosagem , Poluentes Conservativos , Biomphalaria , Niclosamida/efeitos adversos , Brasil/epidemiologiaResumo
O nematóide Angiostrongylus cantonensis (Chen, 1935) é parasito de pulmões de roedores, primeiramente descrito em ratos silvestres por Cheng em 1935. Trata-se de um agente zoonótico, o qual causa angiostrongilíase humana. O ciclo de vida deste nematóide envolve obrigatoriamente a participação de moluscos como hospedeiros intermediários e crustáceos, anfíbios, peixes e répteis como hospedeiros paratênicos. Atualmente, o Brasil é considerado uma área de alto risco ao estabelecimento da angiostrongilíase humana, justificado pela ocorrência de moluscos, especialmente o caramujo africano, Achatina fulica (Bowdich, 1822), e roedores naturalmente infectados, fatores que favorecem diretamente a instalação do ciclo desta doença. Nos últimos anos, a caracterização de padrões metabólicos de moluscos infectados experimentalmente, tem sido estudada como base para o desenvolvimento de medidas focadas principalmente no controle de agentes transmitidos por estes organismos. Porém, quando nos referimos a modelos experimentais utilizando A. cantonensis e Biomphalaria glabrata (Say, 1818), os dados ainda não foram caracterizados, o que preocupa, não apenas pela importância do parasito, mas também pela ampla distribuição da espécie B. glabrata no Brasil. Neste estudo, pela primeira vez foram avaliadas as alterações metabólicas de B. glabrata, decorrentes da infecção esperimental por A. cantonensis. Para isso, foram utilizados moluscos da linhagem melânica criados desde a oviposição e mantidos em condições laboratoriais. Foram formados dois grupos: controle (C1, C2, C3) com animais não infectados e infectados (I1, I2 e I3). Os grupos eram compostos por 10 moluscos. Todo experimento foi feito em duplicata, utilizando um total de 120 moluscos. Após 1, 2 e 3 semanas de infecção, 20 moluscos de cada grupo eram dissecados para a coleta da hemolinfa e tecidos. As leituras espectrofotométricas foram realizadas a partir de kits comercias da marca Doles. As dosagens bioquímicas demonstraram uma diminuição significativa nos conteúdos hemolinfáticos de glicose, proteínas e ácido úrico e um aumento nos conteúdos de ureia e na atividade enzimática da lactato desidrogenase (LDH), alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotranferase (AST) dos grupos infectados em relação ao grupo controle. Variações nas reservas polissacarídicas também foram demonstradas, com os grupos infectados apresentando uma diminuição nas reservas de glicogênio da massa cefalopediosa, glândula digestiva e de galactogênio na glândula de albúmen, indicando um comprometimento do estado nutricional do molusco. Juntos, os resultados confirmam o envolvimento de mecanismos bioquímicos homeostáticos, caracterizados principalmente pela ativação do metabolismo protéico nos moluscos infectados, que passam a utilizar fontes não glicídicas para a produção de energia. Como consequência, um acúmulo de catabólitos do metabolismo protéico foi observado, o que poderia explicar em parte, as maiores concentrações de ureia na hemolinfa de animais infectados. Além disso, a maior atividade de centros enzimáticos nos organismos infectados sugere para LDH o provável envolvimento de uma via fermentativa na produção de energia, e no caso das transaminases (ALT e AST) uma importante associação entre o metabolismo protéico e a síntese de nova glicose, possibilitando a formação de -cetoácidos a partir de aminoácidos gliconeogênicos. Adicionalmente, alterações na biologia reprodutiva
Assuntos
Animais , Biomphalaria/anatomia & histologia , Nematoides/anatomia & histologia , Nematoides/citologiaResumo
O nematóide Angiostrongylus cantonensis (Chen, 1935) é parasito de pulmões de roedores, primeiramente descrito em ratos silvestres por Cheng em 1935. Trata-se de um agente zoonótico, o qual causa angiostrongilíase humana. O ciclo de vida deste nematóide envolve obrigatoriamente a participação de moluscos como hospedeiros intermediários e crustáceos, anfíbios, peixes e répteis como hospedeiros paratênicos. Atualmente, o Brasil é considerado uma área de alto risco ao estabelecimento da angiostrongilíase humana, justificado pela ocorrência de moluscos, especialmente o caramujo africano, Achatina fulica (Bowdich, 1822), e roedores naturalmente infectados, fatores que favorecem diretamente a instalação do ciclo desta doença. Nos últimos anos, a caracterização de padrões metabólicos de moluscos infectados experimentalmente, tem sido estudada como base para o desenvolvimento de medidas focadas principalmente no controle de agentes transmitidos por estes organismos. Porém, quando nos referimos a modelos experimentais utilizando A. cantonensis e Biomphalaria glabrata (Say, 1818), os dados ainda não foram caracterizados, o que preocupa, não apenas pela importância do parasito, mas também pela ampla distribuição da espécie B. glabrata no Brasil. Neste estudo, pela primeira vez foram avaliadas as alterações metabólicas de B. glabrata, decorrentes da infecção esperimental por A. cantonensis. Para isso, foram utilizados moluscos da linhagem melânica criados desde a oviposição e mantidos em condições laboratoriais. Foram formados dois grupos: controle (C1, C2, C3) com animais não infectados e infectados (I1, I2 e I3). Os grupos eram compostos por 10 moluscos. Todo experimento foi feito em duplicata, utilizando um total de 120 moluscos. Após 1, 2 e 3 semanas de infecção, 20 moluscos de cada grupo eram dissecados para a coleta da hemolinfa e tecidos. As leituras espectrofotométricas foram realizadas a partir de kits comercias da marca Doles. As dosagens bioquímicas demonstraram uma diminuição significativa nos conteúdos hemolinfáticos de glicose, proteínas e ácido úrico e um aumento nos conteúdos de ureia e na atividade enzimática da lactato desidrogenase (LDH), alanina aminotransferase (ALT) e aspartato aminotranferase (AST) dos grupos infectados em relação ao grupo controle. Variações nas reservas polissacarídicas também foram demonstradas, com os grupos infectados apresentando uma diminuição nas reservas de glicogênio da massa cefalopediosa, glândula digestiva e de galactogênio na glândula de albúmen, indicando um comprometimento do estado nutricional do molusco. Juntos, os resultados confirmam o envolvimento de mecanismos bioquímicos homeostáticos, caracterizados principalmente pela ativação do metabolismo protéico nos moluscos infectados, que passam a utilizar fontes não glicídicas para a produção de energia. Como consequência, um acúmulo de catabólitos do metabolismo protéico foi observado, o que poderia explicar em parte, as maiores concentrações de ureia na hemolinfa de animais infectados. Além disso, a maior atividade de centros enzimáticos nos organismos infectados sugere para LDH o provável envolvimento de uma via fermentativa na produção de energia, e no caso das transaminases (ALT e AST) uma importante associação entre o metabolismo protéico e a síntese de nova glicose, possibilitando a formação de -cetoácidos a partir de aminoácidos gliconeogênicos. Adicionalmente, alterações na biologia reprodutiva(AU)
Assuntos
Animais , Nematoides/anatomia & histologia , Nematoides/citologia , Biomphalaria/anatomia & histologiaResumo
Some terrestrial mollusks are natural hosts of Angiostrongylus costaricensis. In the laboratory, this nematode can be maintained in certain planorbids, which are aquatic mollusks and intermediate hosts of Schistosoma mansoni. Mollusks can be infected with Angiostrongylus costaricensis by ingestion of or active penetration by the first-stage larvae. In this work we assessed the ability of Biomphalaria glabrata to attract first-stage larvae of A. costaricensis. Movement of the nematode larvae towards the mollusks was observed after 15 min, 30 min and 1 h. B. glabrata did not attract the first-stage larvae of A. costaricensis in any of the three intervals. The susceptibility of two populations of Biomphalaria tenagophila to infection by A. costaricensis was also determined. One population was genetically selected for the susceptibility to S. mansoni while the other was not. Third-stage larvae were recovered from the snails 30 days after exposure of the two populations to 120 first-stage larvae. All the mollusks were infected. However, a significantly higher number of third-stage larvae were recovered in mollusks not genetically selected.
Alguns moluscos terrestres são hospedeiros naturais do Angiostrongylus costaricensis. No laboratório, esse nematódeo pode ser mantido em planorbídeos, que são moluscos aquáticos e hospedeiros intermediários do Schistosoma mansoni. Os moluscos podem ser infectados com A. costaricensis por ingestão ou por penetração ativa de larvas de primeiro estágio. Neste trabalho, testamos a habilidade de Biomphalaria glabrata em atrair larvas de primeiro estágio de A. costaricensis. A movimentação das larvas do nematódeo em direção aos moluscos foi observada após 15 minutos, 30 minutos e 1 hora. B. glabrata não atraiu as larvas de primeiro estágio de A. costaricensis nos três intervalos de tempo. Verificamos também a suscetibilidade de duas populações de Biomphalaria tenagophila à infecção por A. costaricensis. Uma população era selecionada geneticamente para a susceptibilidade ao S. mansoni, enquanto a outra não o era. Larvas de terceiro estágio foram recuperadas dos moluscos 30 dias após a exposição das duas populações a 120 larvas de primeiro estágio. Todos os moluscos estavam infectados. Entretanto, um número significativamente maior de larvas de terceiro estágio foi recuperado em moluscos não geneticamente selecionados.
Resumo
Some terrestrial mollusks are natural hosts of Angiostrongylus costaricensis. In the laboratory, this nematode can be maintained in certain planorbids, which are aquatic mollusks and intermediate hosts of Schistosoma mansoni. Mollusks can be infected with Angiostrongylus costaricensis by ingestion of or active penetration by the first-stage larvae. In this work we assessed the ability of Biomphalaria glabrata to attract first-stage larvae of A. costaricensis. Movement of the nematode larvae towards the mollusks was observed after 15 min, 30 min and 1 h. B. glabrata did not attract the first-stage larvae of A. costaricensis in any of the three intervals. The susceptibility of two populations of Biomphalaria tenagophila to infection by A. costaricensis was also determined. One population was genetically selected for the susceptibility to S. mansoni while the other was not. Third-stage larvae were recovered from the snails 30 days after exposure of the two populations to 120 first-stage larvae. All the mollusks were infected. However, a significantly higher number of third-stage larvae were recovered in mollusks not genetically selected.
Alguns moluscos terrestres são hospedeiros naturais do Angiostrongylus costaricensis. No laboratório, esse nematódeo pode ser mantido em planorbídeos, que são moluscos aquáticos e hospedeiros intermediários do Schistosoma mansoni. Os moluscos podem ser infectados com A. costaricensis por ingestão ou por penetração ativa de larvas de primeiro estágio. Neste trabalho, testamos a habilidade de Biomphalaria glabrata em atrair larvas de primeiro estágio de A. costaricensis. A movimentação das larvas do nematódeo em direção aos moluscos foi observada após 15 minutos, 30 minutos e 1 hora. B. glabrata não atraiu as larvas de primeiro estágio de A. costaricensis nos três intervalos de tempo. Verificamos também a suscetibilidade de duas populações de Biomphalaria tenagophila à infecção por A. costaricensis. Uma população era selecionada geneticamente para a susceptibilidade ao S. mansoni, enquanto a outra não o era. Larvas de terceiro estágio foram recuperadas dos moluscos 30 dias após a exposição das duas populações a 120 larvas de primeiro estágio. Todos os moluscos estavam infectados. Entretanto, um número significativamente maior de larvas de terceiro estágio foi recuperado em moluscos não geneticamente selecionados.
Resumo
Adenosine is an important signaling molecule for many cellular events. Adenosine deaminase (ADA) is a key enzyme for the control of extra- and intra-cellular levels of adenosine. Activity of ADA was detected in hemolymph of B. glabrata and its optimum assay conditions were determined experimentally. The pH variation from 6.2 to 7.8 caused no significant change in ADA activity. Using adenosine as a substrate, the apparent Km at pH 6.8 was 734 µmols.L-1. Highest activity was found at 37ºC. Standard assay conditions were established as being 15 minutes of incubation time, 0.4 µL of pure hemolymph per assay, pH 6.8, and 37ºC. This enzyme showed activities of 834 ± 67 µmol.min-1.L-1 (25ºC) and 2029 ± 74 µmol.min-1.L-1 (37ºC), exceeding those in healthy human serum by 40 and 100 times, respectively. Higher incubation temperature caused a decrease in activity of 20% at 43ºC or 70% at 50ºC for 15 minutes. The ADA lost from 26 to 78% of its activity when hemolymph was pre-incubated at 50ºC for 2 or 15 minutes, respectively. Since the ADA from hemolymph presented high levels, it can be concluded that in healthy and fed animals, adenosine is maintained at low concentrations. In addition, the small variation in activity over the 6.2 to 7.8 range of pH suggests that adenosine is maintained at low levels in hemolymph even under adverse conditions, in which the pH is altered.
A adenosina é uma molécula sinalizadora de muitos eventos celulares. A adenosina desaminase (ADA) é enzima chave para o controle dos níveis intra e extra celulares de adenosina. A atividade da ADA foi detectada em hemolinfa de B. glabrata e suas condições ótimas de ensaio foram determinadas experimentalmente. A variação do pH de 6,2 até 7,8 não causou mudança significativa na atividade. O Km aparente foi de 734 µmoles L-1, usando adenosina como substrato. A maior atividade foi encontrada usando 37ºC como temperatura de incubação. As condições de ensaio padrão foram então estabelecidas como sendo 15 minutos de tempo de incubação, 0,4 µL de hemolinfa por ensaio, pH 6.8 e 37ºC de temperatura de incubação. A enzima apresentou atividades de 834 ± 67 µmols.min-1.L-1 (25ºC) e 2029 ± 74 µmols.min-1.L-1 (37ºC), em torno de 40 e 100 vezes maiores que os níveis encontrados em soro de humanos sadios. Em temperaturas superiores, essa atividade cai 20% a 43ºC e 70% a 50ºC, em 15 minutos. A ADA perde 26 a 78% de sua atividade quando a hemolinfa é pré-incubada a 50ºC de 2 a 15 minutos, respectivamente. Considerando os altos níveis de ADA encontrados pode-se inferir que, em animais sadios e alimentados, a adenosina é mantida em baixas concentrações na hemolinfa. Tendo a atividade da enzima permanecido constante frente à larga faixa de pH testada, sugere-se que a ADA pode atuar com eficiência mesmo em situações adversas que determinem variações no pH da hemolinfa.
Resumo
Aqueous and alcoholic extracts were obtained from crushed dried leaves of tomato plant (Lycopersicon esculentum, Mill.) c.v. Cherry. By the use of a methanolic extraction and alkaline precipitation, a product named crude steroidal glycoalkaloid (GEb), was obtained. The presence of tomatidine was characterized in this product. In laboratory, the aqueous and alcoholic extracts and GEb have shown molluscicidal activity against Biomphalaria glabrata (Say, 1818). The crude steroidal glycoalkaloid presented a high molluscicidal activity (LC50 = 8.01 ppm and LC90 = 13.17 ppm), similar to that of tomatine. None of the compounds tested affected B. glabrata egg masses. The level of activity showed by the different extracts and by the GEb, pointed out the GEb as the only candidate able to be considered for further tests toward field trials as molluscicidal agent.
Foram obtidos extratos aquosos e alcoólicos a partir de pó de folhas secas de tomateiro (Lycopersicon esculentum, Mill.) c.v. Cereja. Por extração metanólica e precipitação alcalina, foi obtido um produto que denominamos "glicoalcalóide esteroidal bruto" (GEb), no qual foi caracterizada a presença de tomatina. Em ensaios laboratoriais, os extratos aquosos, alcoólicos e o GEb apresentaram atividade moluscicida em Biomphalaria glabrata (Say, 1818). O "glicoalcalóide esteroidal bruto" apresentou alta atividade moluscicida (CL50 = 8,01 ppm e CL90 = 13,17 ppm), comparável à atividade da tomatina. Desovas de B. glabrata mostraram-se resistentes aos extratos testados. Os níveis de atividade moluscicida apresentados pelos diversos extratos e o GEb, apontam apenas o GEb como candidato para a continuação dos estudos visando a sua possível utilização em campo.
Resumo
Aqueous and alcoholic extracts were obtained from crushed dried leaves of tomato plant (Lycopersicon esculentum, Mill.) c.v. Cherry. By the use of a methanolic extraction and alkaline precipitation, a product named crude steroidal glycoalkaloid (GEb), was obtained. The presence of tomatidine was characterized in this product. In laboratory, the aqueous and alcoholic extracts and GEb have shown molluscicidal activity against Biomphalaria glabrata (Say, 1818). The crude steroidal glycoalkaloid presented a high molluscicidal activity (LC50 = 8.01 ppm and LC90 = 13.17 ppm), similar to that of tomatine. None of the compounds tested affected B. glabrata egg masses. The level of activity showed by the different extracts and by the GEb, pointed out the GEb as the only candidate able to be considered for further tests toward field trials as molluscicidal agent.
Foram obtidos extratos aquosos e alcoólicos a partir de pó de folhas secas de tomateiro (Lycopersicon esculentum, Mill.) c.v. Cereja. Por extração metanólica e precipitação alcalina, foi obtido um produto que denominamos "glicoalcalóide esteroidal bruto" (GEb), no qual foi caracterizada a presença de tomatina. Em ensaios laboratoriais, os extratos aquosos, alcoólicos e o GEb apresentaram atividade moluscicida em Biomphalaria glabrata (Say, 1818). O "glicoalcalóide esteroidal bruto" apresentou alta atividade moluscicida (CL50 = 8,01 ppm e CL90 = 13,17 ppm), comparável à atividade da tomatina. Desovas de B. glabrata mostraram-se resistentes aos extratos testados. Os níveis de atividade moluscicida apresentados pelos diversos extratos e o GEb, apontam apenas o GEb como candidato para a continuação dos estudos visando a sua possível utilização em campo.
Resumo
The development of cercariae from Schistosoma mansoni strains BH and SJ in Biomphalaria glabrata and Biomphalaria tenagophila treated with saccharose was studied. The molluscs were maintained in dechlorinated tap water containing 0.01% saccharose. After one week of treatment with saccharose, B. glabrata and B. tenagophila were exposed to ten S. mansoni miracidia, from BH and SJ strains respectively. Control snails of both species were maintained in dechlorinated tap water without saccharose and exposed to the same number of miracidia. There was no significant difference between the infection rates of snails treated or not with saccharose. However, the two groups of B. glabrata had significantly greater infection rates than the corresponding B. tenagophila groups. Molluscs treated with saccharose had a lower survival rate, with the greatest mortality occurring immediately before and at the beginning of cercariae release. Treatment with saccharose did not result in the release of more cercariae, but larvae from molluscs so treated showed a greater capacity to penetrate mouse skin, which was attributed to the greater energy supply during larval development in the mollusc.
Foi estudado o desenvolvimento de cercárias de Schistosoma mansoni das linhagens BH e SJ em Biomphalaria glabrata e Biomphalaria tenagophila, respectivamente, tratadas com sacarose. Os moluscos foram mantidos em água declorada contendo 0,01% de sacarose. Após uma semana de tratamento com sacarose, B. glabrata e B. tenagophila foram expostas a dez miracídios de S. mansoni das linhagens BH e SJ, respectivamente. Moluscos controles de ambas as espécies mantidos em água declorada sem sacarose foram expostos ao mesmo número de miracídios. Não houve diferença significativa entre as taxas de infecção dos moluscos tratados ou não com sacarose. Entretanto, os dois grupos de B. glabrata tiveram taxas de infecção significativamente maiores que as correspondentes aos grupos de B. tenagophila. Moluscos tratados com sacarose apresentaram menor taxa de sobrevivência, com a maior mortalidade ocorrendo imediatamente depois e no início da liberação de cercárias. O tratamento com sacarose não resultou na maior liberação de cercárias, mas larvas de moluscos tratados com esse açúcar mostraram maior capacidade de penetrar na pele de camundongo, o que foi atribuído ao maior suprimento de energia durante o desenvolvimento larval no molusco.