Diagnosis of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia in hens and laying hens in the western region of Paraná through bacterial isolation and identification in qPCR / Diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia em aves de postura e matrizes de corte na região oeste do Paraná através do isolamento bacteriano e identificação na qPCR

Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in poultry causing a decrease in productivity. The occurrence of this disease in chickens has already been verified in countries such as Australia, Italy, and the United States, but in Brazil, until now, epidemiological studies about Brachyspira sp. frequency were only carried out on pig farms. The objective of this study was to evaluate the presence of bacteria of the genus Brachyspira sp. through isolation and confirmation of the species Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia using the qPCR technique. Samples from 110 hens aged from 35 to 82 weeks were collected, 40 were from commercial egg farms and 70 were from laying hens matrices. For the first evaluation, bacterial isolation was performed from the feces. Positive samples were submitted to qPCR to identify the three species proposed. Cecum fragments of the birds were collected and fixed in formaldehyde for histological evaluation and counting of goblet cells. Of the 110 samples, 48 characteristic isolates of Brachyspira (43.6%) were obtained and of these in qPCR 13 identified as B. hyodysenteriae (11.8%) and 5 all from the same farm as Brachyspira intermedia (4.5%), 2 samples were positive for both agents (1.8%) and 28 were not characterized by qPCR (25.5%). None histopathological lesions were observed in the chicken cecum and no significant statistical difference was noticed in the count of goblet cells of the positive hens. It can be evidenced by the occurrence of Brachyspira sp. in laying farms and hens in Brazil, with special relevance to Brachyspira intermedia that can be potentially pathogenic for these animals.(AU)

Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves acarretando a queda de produtividade. A ocorrência desta enfermidade em galinhas já foi verificada em países como a Austrália, Itália e Estados Unidos, porém no Brasil, até o momento, trabalhos epidemiológicos sobre a frequencia de Brachyspira sp. só foram realizados em granjas de suínos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias do gênero Brachyspira sp. através do isolamento e confirmação das espécies Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando a técnica de qPCR. Foram coletadas amostras de 110 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 40 de granjas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se o isolamento bacteriano a partir das fezes. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação das três espécies propostas. Fragmentos de ceco das aves foram coletados e fixados em formol para avaliação histológica e contagem de células caliciformes. Das 110 amostras foram obtidos 48 isolamentos característicos de Brachyspira (43,6%) e destes na qPCR 13 identificadas como B. hyodysenteriae (11,8%) e 5 sendo todas da mesma granja (4,5%) como B. intermedia, 2 amostras foram positivas para ambos os agentes (1,8%) e 28 não foram caracterizadas através da qPCR (25,5%). Não foram observadas alterações histopatológicas no ceco e diferença estatística significativa na contagem de células caliciformes das aves positivas. Conclui-se que a Brachyspira sp. é frequente em granjas de poedeiras e matrizes de corte no Brasil, com especial relevância para a B. intermedia que possui potência patogênico para estas aves.(AU)

Diagnosis of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia in hens and laying hens in the western region of Paraná through bacterial isolation and identification in qPCR / Diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia em aves de postura e matrizes de corte na região oeste do Paraná através do isolamento bacteriano e identificação na qPCR

Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in poultry causing a decrease in productivity. The occurrence of this disease in chickens has already been verified in countries such as Australia, Italy, and the United States, but in Brazil, until now, epidemiological studies about Brachyspira sp. frequency were only carried out on pig farms. The objective of this study was to evaluate the presence of bacteria of the genus Brachyspira sp. through isolation and confirmation of the species Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia using the qPCR technique. Samples from 110 hens aged from 35 to 82 weeks were collected, 40 were from commercial egg farms and 70 were from laying hens matrices. For the first evaluation, bacterial isolation was performed from the feces. Positive samples were submitted to qPCR to identify the three species proposed. Cecum fragments of the birds were collected and fixed in formaldehyde for histological evaluation and counting of goblet cells. Of the 110 samples, 48 characteristic isolates of Brachyspira (43.6%) were obtained and of these in qPCR 13 identified as B. hyodysenteriae (11.8%) and 5 all from the same farm as Brachyspira intermedia (4.5%), 2 samples were positive for both agents (1.8%) and 28 were not characterized by qPCR (25.5%). None histopathological lesions were observed in the chicken cecum and no significant statistical difference was noticed in the count of goblet cells of the positive hens. It can be evidenced by the occurrence of Brachyspira sp. in laying farms and hens in Brazil, with special relevance to Brachyspira intermedia that can be potentially pathogenic for these animals.(AU)

Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves acarretando a queda de produtividade. A ocorrência desta enfermidade em galinhas já foi verificada em países como a Austrália, Itália e Estados Unidos, porém no Brasil, até o momento, trabalhos epidemiológicos sobre a frequencia de Brachyspira sp. só foram realizados em granjas de suínos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias do gênero Brachyspira sp. através do isolamento e confirmação das espécies Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando a técnica de qPCR. Foram coletadas amostras de 110 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 40 de granjas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se o isolamento bacteriano a partir das fezes. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação das três espécies propostas. Fragmentos de ceco das aves foram coletados e fixados em formol para avaliação histológica e contagem de células caliciformes. Das 110 amostras foram obtidos 48 isolamentos característicos de Brachyspira (43,6%) e destes na qPCR 13 identificadas como B. hyodysenteriae (11,8%) e 5 sendo todas da mesma granja (4,5%) como B. intermedia, 2 amostras foram positivas para ambos os agentes (1,8%) e 28 não foram caracterizadas através da qPCR (25,5%). Não foram observadas alterações histopatológicas no ceco e diferença estatística significativa na contagem de células caliciformes das aves positivas. Conclui-se que a Brachyspira sp. é frequente em granjas de poedeiras e matrizes de corte no Brasil, com especial relevância para a B. intermedia que possui potência patogênico para estas aves.(AU)

Diagnosis of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia in hens and laying hens in the western region of Paraná through bacterial isolation and identification in qPCR

ABSTRACT: Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in poultry causing a decrease in productivity. The occurrence of this disease in chickens has already been verified in countries such as Australia, Italy, and the United States, but in Brazil, until now, epidemiological studies about Brachyspira sp. frequency were only carried out on pig farms. The objective of this study was to evaluate the presence of bacteria of the genus Brachyspira sp. through isolation and confirmation of the species Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae and Brachyspira intermedia using the qPCR technique. Samples from 110 hens aged from 35 to 82 weeks were collected, 40 were from commercial egg farms and 70 were from laying hens matrices. For the first evaluation, bacterial isolation was performed from the feces. Positive samples were submitted to qPCR to identify the three species proposed. Cecum fragments of the birds were collected and fixed in formaldehyde for histological evaluation and counting of goblet cells. Of the 110 samples, 48 characteristic isolates of Brachyspira (43.6%) were obtained and of these in qPCR 13 identified as B. hyodysenteriae (11.8%) and 5 all from the same farm as Brachyspira intermedia (4.5%), 2 samples were positive for both agents (1.8%) and 28 were not characterized by qPCR (25.5%). None histopathological lesions were observed in the chicken cecum and no significant statistical difference was noticed in the count of goblet cells of the positive hens. It can be evidenced by the occurrence of Brachyspira sp. in laying farms and hens in Brazil, with special relevance to Brachyspira intermedia that can be potentially pathogenic for these animals.

RESUMO: Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves acarretando a queda de produtividade. A ocorrência desta enfermidade em galinhas já foi verificada em países como a Austrália, Itália e Estados Unidos, porém no Brasil, até o momento, trabalhos epidemiológicos sobre a frequencia de Brachyspira sp. só foram realizados em granjas de suínos. O objetivo deste estudo foi avaliar a presença de bactérias do gênero Brachyspira sp. através do isolamento e confirmação das espécies Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando a técnica de qPCR. Foram coletadas amostras de 110 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 40 de granjas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se o isolamento bacteriano a partir das fezes. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação das três espécies propostas. Fragmentos de ceco das aves foram coletados e fixados em formol para avaliação histológica e contagem de células caliciformes. Das 110 amostras foram obtidos 48 isolamentos característicos de Brachyspira (43,6%) e destes na qPCR 13 identificadas como B. hyodysenteriae (11,8%) e 5 sendo todas da mesma granja (4,5%) como B. intermedia, 2 amostras foram positivas para ambos os agentes (1,8%) e 28 não foram caracterizadas através da qPCR (25,5%). Não foram observadas alterações histopatológicas no ceco e diferença estatística significativa na contagem de células caliciformes das aves positivas. Conclui-se que a Brachyspira sp. é frequente em granjas de poedeiras e matrizes de corte no Brasil, com especial relevância para a B. intermedia que possui potência patogênico para estas aves.

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Estudo sorológico de isolados de Brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do Brasil

A colite espiroquetal, doença infecciosa causada pela Brachyspira pilosicoli, foi recentemente descrita no Brasil e causa significativas perdas à produção suinícola por diarréia, perda de peso e piora da conversão alimentar. O agente é anaeróbico, fastidioso e a infecção causada pelo mesmo de difícil diagnóstico laboratorial. Dessa forma, o desenvolvimento de técnicas de diagnóstico nessa área apresenta particular relevância. No presente trabalho buscou-se analisar isolados da bactéria através da técnica sorológica da microaglutinação. Foram produzidos em coelhos soros hiperimunes contra duas amostras de referência de B. pilosicoli, 20 amostras da bactéria isoladas no Estado do Rio Grande do Sul e uma cepa de referência de outra espiroqueta patogênica (B. hyodysenteriae). Reagindo todas as cepas contra todos os soros, foram detectados vários padrões de reatividade cruzado. Pela grande variabilidade dos títulos, não houve possibilidade estabelecer um padrão sorológico capaz de permitir um agrupamento das bactérias analisadas em sorotipos. A existência dessa discrepância nas aglutinações realizadas com soros homólogos e heterólogos sugere compartilhamento de antígenos (cadeias laterais de açúcares) entre as amostras ou diferenças de quantidade dos açúcares na membrana celular externa. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli com título superiores a 1:1120, o antissoro pr

Survival of pathogenic intestinal Spirochetes kept in pure cultures and in pig feces at four different temperatures

Porcine colonic spirochetosis (PCS) caused by Brachyspira pilosicoli has been identified as a contributing cause of diarrhea and reduced performance of growing pigs in all major swine producing countries. The current view that transmission of PCS occurs through contamination of the environment by acutely or persistently infected pigs is based on the assumption that the spirochetes remain viable in the environment. The purpose of this study was to compare the viability of Brachyspira pilosicoli kept in pure culture or mixed with feces at four different temperatures over time with that of Brachyspira hyodysenteriae. The results of the present study indicated that Brachyspira pilosicoli survived significantly longer than Brachyspira hyodysenteriae in pure cultures held at 24C and 37C, and at all temperatures in spiked fecal materials. Pure cultures of Brachyspira pilosicoli survived at least 63 days at -70C, seven days at 4C, 14 to 28 days at 24C and seven to 28 days at 37C. There was significant differences in the survival of the 2 species of spirochetes when mixed with feces. At -70C, Brachyspira pilosicoli and Brachyspira hyodysenteriae survived respectively an average of 21 and 3 days, and at 4C 12,25 and 4,25 days. Viability was reduced to one to seven days at 24C and one to three days at 37C for Brachyspira pilosicoli and five days at 24C and one day at

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.

Survival of pathogenic intestinal Spirochetes kept in pure cultures and in pig feces at four different temperatures

Porcine colonic spirochetosis (PCS) caused by Brachyspira pilosicoli has been identified as a contributing cause of diarrhea and reduced performance of growing pigs in all major swine producing countries. The current view that transmission of PCS occurs through contamination of the environment by acutely or persistently infected pigs is based on the assumption that the spirochetes remain viable in the environment. The purpose of this study was to compare the viability of Brachyspira pilosicoli kept in pure culture or mixed with feces at four different temperatures over time with that of Brachyspira hyodysenteriae. The results of the present study indicated that Brachyspira pilosicoli survived significantly longer than Brachyspira hyodysenteriae in pure cultures held at 24C and 37C, and at all temperatures in spiked fecal materials. Pure cultures of Brachyspira pilosicoli survived at least 63 days at -70C, seven days at 4C, 14 to 28 days at 24C and seven to 28 days at 37C. There was significant differences in the survival of the 2 species of spirochetes when mixed with feces. At -70C, Brachyspira pilosicoli and Brachyspira hyodysenteriae survived respectively an average of 21 and 3 days, and at 4C 12,25 and 4,25 days. Viability was reduced to one to seven days at 24C and one to three days at 37C for Brachyspira pilosicoli and five days at 24C and one day at

Avaliação da transmissão da Brachyspira pilosicoli através da infecção experimental em pintos de um dia

A Brachyspira pilosicoli é uma causa reconhecida de diarréia em diversas espécies animais e no homem. A transmissão ocorre principalmente pelas fezes, alimentos ou água contaminada. A bactéria tem boa capacidade de sobrevivência no meio ambiente, o que gera amplas oportunidades de transmissão. Este trabalho avaliou a capacidade de difusão horizontal de diferentes cepas de B. pilosicoli. Foram usadas 2 cepas de referência e 19 cepas de campo da bactéria, isoladas de casos de diarréia em suínos no Estado do Rio Grande do Sul, usando um modelo de infecção oral de pintos de um dia. Para cada cepa, 4 animais foram inoculados com uma suspensão de bactérias vivas e mantidos em gaiola com outros dois animais não inoculados (contatos). Decorridos 21 dias foram sacrificados e os cecos examinados por histopatologia, através da imuno-histoquímica. Foi observado que 73,68% das cepas de B. pilosicoli foram capazes de colonizar o epitélio do ceco. Houve diferenças no tipo de colonização, ocorrendo aderência contínua, focal ou presença de bactérias livres na luz intestinal. Com relação à capacidade de transmissão horizontal da infecção por B. pilosicoli, 57,89% das cepas foram capazes de aderir e/ou serem detectadas livres na luz intestinal dos animais contatos. A conclusão desse experimento foi de que algumas das cepas de campo mostraram alta capacidade de difusão horizontal.

Survival of pathogenic intestinal Spirochetes kept in pure cultures and in pig feces at four different temperatures

Porcine colonic spirochetosis (PCS) caused by Brachyspira pilosicoli has been identified as a contributing cause of diarrhea and reduced performance of growing pigs in all major swine producing countries. The current view that transmission of PCS occurs through contamination of the environment by acutely or persistently infected pigs is based on the assumption that the spirochetes remain viable in the environment. The purpose of this study was to compare the viability of Brachyspira pilosicoli kept in pure culture or mixed with feces at four different temperatures over time with that of Brachyspira hyodysenteriae. The results of the present study indicated that Brachyspira pilosicoli survived significantly longer than Brachyspira hyodysenteriae in pure cultures held at 24C and 37C, and at all temperatures in spiked fecal materials. Pure cultures of Brachyspira pilosicoli survived at least 63 days at -70C, seven days at 4C, 14 to 28 days at 24C and seven to 28 days at 37C. There was significant differences in the survival of the 2 species of spirochetes when mixed with feces. At -70C, Brachyspira pilosicoli and Brachyspira hyodysenteriae survived respectively an average of 21 and 3 days, and at 4C 12,25 and 4,25 days. Viability was reduced to one to seven days at 24C and one to three days at 37C for Brachyspira pilosicoli and five days at 24C and one day at

Estudo sorológico de isolados de brachyspira pilosicoli de suínos da região sul do brasil

As Brachyspiras são espiroquetas intestinais que podem causar diarréia em suínos nas idades de crescimento e terminação. As características imunológicas dessas bactérias têm sido pouco estudadas, sendo que esse tipo de conhecimento tem um impacto direto no desenvolvimento de testes de diagnóstico, classificação sorológica e produção de vacinas. Um sistema de tipificação sorológica havia sido obtido apenas para a Brachyspira (B.) hyodysenteriae e estudos preliminares haviam sugerido a possibilidade de estabelecer sistema similar para outra espécie desse gênero, a B. pilosicoli. O objetivo da presente dissertação foi realizar estudos nesse sentido, verificando diferenças sorológicas entre diversos isolados de B. pilosicoli provenientes de suínos com diarréia da região Sul do Brasil. Para isso, o teste de microaglutinação em placa (MAT) foi utilizado, por ser de fácil realização, podendo refletir as diferenças sorológicas existentes entre as cepas testadas. Foram analisadas 19 cepas brasileiras, a cepa de referência de B. pilosicoli (P43/6/78) e uma cepa de origem humana (SP16), além da cepa de referência da B. hyodysenteriae (B78). Para o MAT, soros hiperimunes policlonais foram produzidos em coelhos, através da inoculação de suspensões bacterianas dos isolados em estudo, ajustadas a uma concentração de 1x109 espiroquetas/mL. Diluições seriadas de cada um dos soros obtidos foram usadas para analisar o grau de microaglutinação e/ou lise, em microscopia de campo escuro. Para tal, foram colocados em contato com culturas das espiroquetas em fase de logarítmica de crescimento em meio líquido PRAS. Como controle negativo foi usado um tampão PBS, sendo todos os testes repetidos por cinco vezes em dias diferentes. Os resultados demonstraram que existe uma grande variabilidade antigênica dentre os isolados brasileiros de B. pilosicoli, não tendo sido possível realizar a classificação em grupos sorológicos, provavelmente devido a reações cruzadas entre as espiroquetas testadas. Foi detectada uma alta ocorrência (29%) de auto-aglutinações e/ou lise dos antígenos antes da realização do teste, sendo esse um fator limitante para o uso do MAT com espiroquetas intestinais. O teste de microaglutinação comprovou ser uma ferramenta sensível para a avaliação das características sorológicas da B. pilosicoli, pois repetições de exames realizadas em dias diferentes apresentaram 98% de concordância em seus resultados. Por reagir contra todas as cepas de B. pilosicoli contra as quais foi testado com título superiores a 1:1120, o antissoro produzido contra a amostra SIPV14 poderia ser utilizado em provas de diagnóstico, como a imuno-histoquímica e ELISA. Por reagir com todos os soros contra os quais foi testado com títulos superiores a 1:2880, a cepa SIPV42 seria a mais indicada para ser utilizada para a produção de vacina para a prevenção da infecção intestinal contra a B. pilosicoli (colite espiroquetal). A ampliação dos estudos para as outras espécies do gênero Brachyspira, como a B. murdochii, B. innocens, B. intermedia, B. alvinipulli, B. canis e, eventualmente, a B. aalborgi, poderiam fornecer uma visão mais detalhada sobre as características imunológicas desse gênero bacteriano