The Unicorn Mouse: Cranial Lipoma in a B6. Cg Mouse

Intracranial lipomas, also called intracranial lipomatous hamartomas, have been reported in some strains of research mice, but are rare in C57BL6 strains. It is presumed based on current publications that this is the first report of an intracranial lipoma in a mouse with this genetic change (B6.Cg-Cnpy2 tm1.2 Zhli Alb-Cre). Grossly, a fur-covered, soft, cylindrical, exophytic mass on the dorsal midline of the cranium was evident. Upon dissection, a soft, white, tubular structure extended through a 1mm defect in the sagittal suture of the skull to the deep surface of the hypodermis. Histologically, the mass consisted of well demarcated proliferation of mature white adipocytes, each containing one large fat droplet. The mass extended from the cerebrum at the level just caudal to the hippocampus in the third ventricle, between the superior colliculus and the caudal portion of the retrosplenial area and through the sagittal suture to the hypodermis and was surrounded by normal brain tissue.(AU)

Protocolo de vocalização ultrassônica em camundongos: uma ferramenta para avaliação do comportamento social / Ultrasonic vocalization protocol in mice: a tool for assessing social behavior

O estudo de desarranjos do neurodesenvolvimento, sejam estes herdados ou adquiridos, necessita da integração cada vez mais aprofundada entre pesquisa básica e abordagem clínica. Apesar da análise do comportamental humano ser essencial para caracterizar e motivar a inovação científica nas várias condições clínicas e/ ou de disfunção social, os estudos comportamentais bem controlados utilizando modelos animais favorecem a ponte do conhecimento entre o laboratório e o clínico populacional. No comportamento social fino e adaptado às espécies animais de experimentação científica, estudos de comunicação ultrassônica em camundongos vem sendo de extrema importância para esclarecimento de achados comportamentais de linguagem em correspondentes em condições humanas. O presente estudo busca consolidar um paradigma de investigação comportamental em linguagem utilizando um modelo murino de linhagem selvagem C57/BL6 no contexto de vocalização ultrassônica na separação materna estabelecida em filhotes pré-adolescentes. Além da determinação e aplicação do protocolo experimental aqui relatado, os resultados demonstraram que não houve diferenças nas idades analisadas e corroboram com os dados descritos em literatura uma vez que ocorreu uma inclinação para comunicação de baixa complexidade.

Neurodevelopmental disorders can be inherited or acquired and requires deeper integration between basic and clinical research. The access and analysis of human behavior patterns are essential to push for scientific innovation in various clinical conditions and/or social dysfunction, but clinical and psychological approach can be challenging to achieve in these conditions. Thus, behavioral studies using animal models in experimental settings favor and advance the understanding of neurodevelopmental disarrangements in human population. In this regard, social behavior testing in fine and elaborate cognitive skills such as ultrasonic vocalization in mice have been extremely important to study behavioral findings of language dysfunction in human condition. Therefore, the present study seeks to consolidate a behavioral investigation paradigm in language using a murine model of wild line C57/BL6 in the context of ultrasonic vocalization in the maternal separation established in pre-adolescent subjects. Besides the establishment and application of the experimental design reported here, the results showed a trend for low complexity communication manifested by the pre-adolescent offspring with no differences regarding age or sex in tested animals.

Protocolo de vocalização ultrassônica em camundongos: uma ferramenta para avaliação do comportamento social / Ultrasonic vocalization protocol in mice: a tool for assessing social behavior

O estudo de desarranjos do neurodesenvolvimento, sejam estes herdados ou adquiridos, necessita da integração cada vez mais aprofundada entre pesquisa básica e abordagem clínica. Apesar da análise do comportamental humano ser essencial para caracterizar e motivar a inovação científica nas várias condições clínicas e/ ou de disfunção social, os estudos comportamentais bem controlados utilizando modelos animais favorecem a ponte do conhecimento entre o laboratório e o clínico populacional. No comportamento social fino e adaptado às espécies animais de experimentação científica, estudos de comunicação ultrassônica em camundongos vem sendo de extrema importância para esclarecimento de achados comportamentais de linguagem em correspondentes em condições humanas. O presente estudo busca consolidar um paradigma de investigação comportamental em linguagem utilizando um modelo murino de linhagem selvagem C57/BL6 no contexto de vocalização ultrassônica na separação materna estabelecida em filhotes pré-adolescentes. Além da determinação e aplicação do protocolo experimental aqui relatado, os resultados demonstraram que não houve diferenças nas idades analisadas e corroboram com os dados descritos em literatura uma vez que ocorreu uma inclinação para comunicação de baixa complexidade.(AU)

Neurodevelopmental disorders can be inherited or acquired and requires deeper integration between basic and clinical research. The access and analysis of human behavior patterns are essential to push for scientific innovation in various clinical conditions and/or social dysfunction, but clinical and psychological approach can be challenging to achieve in these conditions. Thus, behavioral studies using animal models in experimental settings favor and advance the understanding of neurodevelopmental disarrangements in human population. In this regard, social behavior testing in fine and elaborate cognitive skills such as ultrasonic vocalization in mice have been extremely important to study behavioral findings of language dysfunction in human condition. Therefore, the present study seeks to consolidate a behavioral investigation paradigm in language using a murine model of wild line C57/BL6 in the context of ultrasonic vocalization in the maternal separation established in pre-adolescent subjects. Besides the establishment and application of the experimental design reported here, the results showed a trend for low complexity communication manifested by the pre-adolescent offspring with no differences regarding age or sex in tested animals.(AU)

Avaliação microbiológica de rações secas irradiadas e autoclavadas oferecidas ad libitum para camundongos da linhagem C57BL/6

A qualidade da ração peletizada disponível para animais de laboratório está ligada diretamente a condição sanitária destes biomodelos. Apesar disso, poucos são os trabalhos publicados que abordam o seu controle microbiológico. Mesmo havendo esterilização prévia das rações que serão utilizadas nos comedouros, estas entram em contato com os animais, com o ambiente e são manuseadas pela equipe técnica durante a manutenção dos animais. Além disso, sua estocagem pode ser inadequada, o que pode levar a uma contaminação e possíveis problemas na qualidade deste alimento. A partir destas possíveis vias de contaminação, este trabalho teve como objetivo verificar a qualidade microbiológica de rações irradiadas e autoclavadas e avaliar por quanto tempo elas mantêm esta qualidade higiênicosanitária. Para atingir esse objetivo foi realizada a pesquisa de micro-organismos indicadores, durante o período de manutenção da ração nas gaiolas dos camundongos e foi verificado se os comedouros e a cavidade oral dos animais apresentaram as mesmas bactérias detectadas nas rações. Antes de iniciar as análises das rações, foram realizados dois ensaios com o corante alimentício líquido, o primeiro para verificar a inocuidade do corante frente a bactérias e o segundo para verificar se a ração marcada era palatável e se não haveria preferência ou repulsa dos animais por determinada cor. No resultado do primeiro ensaio foi constatado que o corante não interferia no crescimento bacteriano enquanto que o no segundo ensaio observou-se que a ração marcada continuava palatável e não houve preferência ou repulsa dos animais por determinada cor. A partir dos resultados destes ensaios, iniciou-se o experimento que foi realizado com quatro grupos de camundongos da linhagem C57BL/6 (10 machos e 10 fêmeas) para cada ração (autoclavada e irradiada), com cinco animais em cada gaiola. As rações foram marcadas para possibilitar a diferenciação entre as rações oferecidas inicialmente e as subsequentes, permitindo comparar a sua qualidade/tempo de exposição. Esse procedimento mimetizou o procedimento padrão de acrescentar novos pellets semanalmente nos comedouros por cima dos pellets antigos, permitindo estimar o tempo em que a ração ficou no comedouro sem ocorrência de contaminação. Após as análises microbiológicas das rações os resultados obtidos foram: ausência de Salmonella spp. e a contagem de micro-organismos mesófilos totais, bolores, leveduras, coliformes totais e termotolerantes bem abaixo dos limites máximos estabelecidos na literatura. Mostrando assim que, após todo o período de exposição, as rações mantêm boa qualidade higiênico-sanitária. Em contrapartida, nos comedouros e na análise da microbiota da cavidade oral dos animais não foi identificado nenhum micro-organismo utilizado como indicador para qualidade das rações, mas foram isoladas algumas bactérias potencialmente patogênicas como: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Acinetobacter baumanni complex, Enterobacter cloacae e Klebsiella pneumoniae demonstrando que apesar de não haver ração contaminada, de alguma forma houve quebra de barreira sanitária, portanto todos os procedimentos dessa área devem ser revistos, pra verificar onde está havendo falha

The quality of the pelleted feed available for laboratory animals is directly linked to the health condition of these biomodels. Despite this, there are few published works that address its microbiological control. Even with previous sterilization of the feeds that will be used in the feeders, they come into contact with the animals, with the environment and are handled by the technical team during the maintenance of the animals. In addition, its storage may be inadequate, which can lead to contamination and possible problems in the quality of these foods. Based on these possible contamination routes, this study aimed to verify the microbiological quality of irradiated and autoclaved rations and to define how long they lose their hygienicsanitary quality. In order to achieve this objective, the research of indicator microorganisms was carried out during the maintenance period of the feed in the mice cages and it was verified whether the feeders and the oral cavity of the animals showed the same bacteria detected in the feed. Before starting the analysis of the rations, two tests were carried out with liquid food coloring, the first to check the innocuousness of the dye against bacteria and the second to check if the marked diet was palatable and if there would be no preference or repulsion of the animals for a certain color. In the result of the first test it was found that the dye did not interfere with bacterial growth whereas in the second test it was observed that the marked diet was still palatable and there was no preference or repulsion of the animals for a certain color. In the result of the first test it was found that the dye did not interfere with bacterial growth, whereas in the second test it was observed that the marked diet was still palatable and there was no preference or repulsion of the animals for a certain color. From the results of these tests, the experiment was started with four groups of C57BL / 6 mice (10 males and 10 females) for each diet (autoclaved and irradiated), with five animals in each cage. The diets were marked to allow the differentiation between the diets offered initially and the subsequent ones, allowing to compare their quality / exposure time. This procedure mimicked the standard procedure of adding new pellets weekly in the feeders on top of the old pellets, allowing to estimate the time the feed was in the feeder without contamination. After the microbiological analyzes of the diets, the results obtained were: absence of Salmonella spp. and counting of total mesophilic microorganisms, molds, yeasts, total coliforms and thermotolerants well below the maximum limits established in the literature. Thus, showing that, after the entire period of exposure, it maintains good hygienic-sanitary quality. In contrast, in the feeders and in the analysis of the microbiota of the oral cavity of the animals, no microorganisms used as an indicator for the quality of the rations were identified, but some pathogenic bacteria were isolated, such as: Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Acinetobacter baumanni complex, Enterobacter cloacae and Klebsiella pneumoniae demonstrating that although there is no contaminated feed, somehow there was a break in the sanitary barrier, so all procedures in this area should be reviewed, to see where there is a failure.

A influência do fundo genético de camundongos C57Bl/6 e A/J na resposta inflamatória aguda induzida pelo etanol / The influence of genetic background of C57Bl/6 and A/J mice on the development of acute inflammatory response induced by alcohol

Objetivo: O consumo e o abuso alcoólico pela população humana são crescentes mundialmente e induzem severos danos hepáticos como esteatose, hepatite e cirrose. Estes indivíduos geralmente são mais susceptíveis a doenças infecciosas, uma vez que o metabolismo alcoólico afeta a resposta imune inata e adquirida. Nosso objetivo foi investigar a influência do fundo genético sobre a resposta inflamatória aguda induzida pelo etanol em duas linhagens de camundongos isogênicos: C57Bl/6 e A/J. Materiais e Métodos: Camundongos C57Bl/6 e A/J foram tratados com etanol (7g/ kg) por gavagem. Após 4 horas avaliamos o perfil dos leucócitos sanguíneos e os níveis plasmáticos das enzimas associadas à funções hepáticas como alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e gamma glutamil transferase (GGT). Os níveis plasmáticos das citocinas pro-inflamatórias (IL-6, TNF-alfa e IL-1beta) e anti-inflamatória (IL-10) foram determinados por ELISA. A injúria hepática induzida pelo tratamento com etanol foi investigada por meio da análise histopatológica. Resultados: Observamos redução no número total de leucócitos sanguíneos para ambas as linhagens e aumento na razão do número de células PMN/MN apenas para os camundongos A/J após o tratamento com etanol por gavagem. As enzimas de atividade hepática AST e GGT aumentaram apenas nos camundongos A/J após o tratamento com etanol. Estes resultados corroboram com a avaliação histopatológica, onde nos camundongos A/J tratados com etanol houve intensa vacuolização hepática, esteatose micro vesicular ao redor da veia centro lobular e necrose difusa no parênquima hepático. Por fim, somente os camundongos A/J expressaram maior concentração plasmática de IL-6 após o tratamento com etanol. Conclusão: Nossos resultados sugerem que, para este modelo, a intensa resposta inflamatória em respostas ao etanol contribuiu para a injúria hepática nos camundongos A/J.

Objective: Alcohol abuse is increasing worldwide in the human population and causes severe liver damage such as steatosis, hepatitis and cirrhosis. These individuals are often more susceptible to infectious diseases since alcohol metabolites affect the innate and acquired immune responses. Our aim was to investigate the influence of genetic background on the acute inflammatory response to ethanol treatment in two strains of commonly used experimentally inbred mice: C57Bl/6 and A/J. Methods: C57Bl/6 and A/J mice were treated with ethanol (7g/kg) by gavage. After 4 hours we evaluated blood leukocyte profiles and the levels of the hepatic enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST) and gamma glutamil transferase (GGT). The levels of pro-inflammatory (IL-6, TNF-alpha and IL-1 beta) and anti-inflammatory (IL-10) cytokines were determined by ELISA in plasma samples. The consequences of ethanol treatment were also followed by liver histopathological analysis. Results: We observed a decrease in total circulating leukocytes in both mice strains and increase of PMN/MN ratio only in A/J mice after ethanol gavage. Hepatic AST and GGT activities increased after ethanol treatment only in A/J mice. These results are in agreement with more intense liver vacuolization and micro steatosis around the centrilobular vein and diffuse necrosis in hepatic parenchyma observed in A/J mice. In addition, only A/J strain expressed more IL-6 in the plasma after ethanol treatment. Conclusion: Our results suggest that in this model, the more intense inflammatory response to ethanol developed in A/J mice may be at least in part responsible for the hepatic injury.

A influência do fundo genético de camundongos C57Bl/6 e A/J na resposta inflamatória aguda induzida pelo etanol / The influence of genetic background of C57Bl/6 and A/J mice on the development of acute inflammatory response induced by alcohol

Objetivo: O consumo e o abuso alcoólico pela população humana são crescentes mundialmente e induzem severos danos hepáticos como esteatose, hepatite e cirrose. Estes indivíduos geralmente são mais susceptíveis a doenças infecciosas, uma vez que o metabolismo alcoólico afeta a resposta imune inata e adquirida. Nosso objetivo foi investigar a influência do fundo genético sobre a resposta inflamatória aguda induzida pelo etanol em duas linhagens de camundongos isogênicos: C57Bl/6 e A/J. Materiais e Métodos: Camundongos C57Bl/6 e A/J foram tratados com etanol (7g/ kg) por gavagem. Após 4 horas avaliamos o perfil dos leucócitos sanguíneos e os níveis plasmáticos das enzimas associadas à funções hepáticas como alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e gamma glutamil transferase (GGT). Os níveis plasmáticos das citocinas pro-inflamatórias (IL-6, TNF-alfa e IL-1beta) e anti-inflamatória (IL-10) foram determinados por ELISA. A injúria hepática induzida pelo tratamento com etanol foi investigada por meio da análise histopatológica. Resultados: Observamos redução no número total de leucócitos sanguíneos para ambas as linhagens e aumento na razão do número de células PMN/MN apenas para os camundongos A/J após o tratamento com etanol por gavagem. As enzimas de atividade hepática AST e GGT aumentaram apenas nos camundongos A/J após o tratamento com etanol. Estes resultados corroboram com a avaliação histopatológica, onde nos camundongos A/J tratados com etanol houve intensa vacuolização hepática, esteatose micro vesicular ao redor da veia centro lobular e necrose difusa no parênquima hepático. Por fim, somente os camundongos A/J expressaram maior concentração plasmática de IL-6 após o tratamento com etanol. Conclusão: Nossos resultados sugerem que, para este modelo, a intensa resposta inflamatória em respostas ao etanol contribuiu para a injúria hepática nos camundongos A/J. (AU)

Objective: Alcohol abuse is increasing worldwide in the human population and causes severe liver damage such as steatosis, hepatitis and cirrhosis. These individuals are often more susceptible to infectious diseases since alcohol metabolites affect the innate and acquired immune responses. Our aim was to investigate the influence of genetic background on the acute inflammatory response to ethanol treatment in two strains of commonly used experimentally inbred mice: C57Bl/6 and A/J. Methods: C57Bl/6 and A/J mice were treated with ethanol (7g/kg) by gavage. After 4 hours we evaluated blood leukocyte profiles and the levels of the hepatic enzymes alanine amino transferase (ALT), aspartate amino transferase (AST) and gamma glutamil transferase (GGT). The levels of pro-inflammatory (IL-6, TNF-alpha and IL-1 beta) and anti-inflammatory (IL-10) cytokines were determined by ELISA in plasma samples. The consequences of ethanol treatment were also followed by liver histopathological analysis. Results: We observed a decrease in total circulating leukocytes in both mice strains and increase of PMN/MN ratio only in A/J mice after ethanol gavage. Hepatic AST and GGT activities increased after ethanol treatment only in A/J mice. These results are in agreement with more intense liver vacuolization and micro steatosis around the centrilobular vein and diffuse necrosis in hepatic parenchyma observed in A/J mice. In addition, only A/J strain expressed more IL-6 in the plasma after ethanol treatment. Conclusion: Our results suggest that in this model, the more intense inflammatory response to ethanol developed in A/J mice may be at least in part responsible for the hepatic injury. (AU)

Inflamação cutânea em modelo animal de dermatite atópica canina

A dermatite atópica (DA) é a forma mais comum de alergia que afeta cães causando prurido e inflamação na pele. O objetivo desse estudo foi avaliar um modelo murino similar à doença nos cães, para possibilitar futuros estudos de tratamento da atopia. Três grupos de 3 camundongos da linhagen C57Bl/6 receberam 0,1ml de extrato do ácaro Dermatophagoides farinae pela via percutânea em até 4 ciclos de indução e posteriormente a pele foi coletada por biópsia para avaliação histopatológica. Cada ciclo consistiu em duas aplicações de alérgeno que foi mantido aderido a pele com bandagem, sendo grupo G2 (2 ciclos), G3 (3 ciclos) e G4 (4 ciclos) e um grupo controle Gc que não recebeu alérgeno, somente bandagem. Não foram observadas alterações cutâneas clínica como eritema e escoriação em nenhum grupo. Houve diferença estatística significante no grupo que recebeu 4 ciclos de indução de alérgenos quanto à hiperplasia de epiderme e quantidade de mastócitos. O infiltrado perivascular foi maior em todos os grupos em relação ao controle. Sobretudo deverão ser realizados mais estudos para obter um modelo animal murino reprodutível para avaliação dos tratamentos da dermatite atópica canina

The atopic dermatitis (AD) is a common allergic disease in dogs that cause itching and skin inflammation. This study aimed to test a murine model comparable to the dogs disease, to enable future atopic disease treatment studies. Three groups of 3 mice C57Bl/6 received 0.1ml of Dermatophagoides farinae mite extract percutaneously in up to 4 cycles of induction and subsequently the skin was collected by biopsy for histopathological evaluation. Each cycles were two allergen applying that kept fixed onto the skin with a bandage, being thus group G2 (2 cycles), G3 (3 cycles) and G4 (4 cycles) and a control group Gc that did not received allergen, only bandage. No clinical symptoms such as erythema and excoriations were observed in any group. There was a significant statistical difference in group G4 regarding epidermal hyperplasia and mast cell numbers. The perivascular infiltrate was higher in all groups than the control group. Therefore, further studies should be performed to obtain a reproducible murine animal model of canine atopic dermatitis treatments.

Detecção de Proteus mirabilis nas fezes de camundongos spf / /Detection of Proteus mirabilis in specifc pathogen free mice feces

O presente estudo teve como objetivo apresentar os resultados de pesquisa de positividade do microorganismo Proteus mirabilis em camundongos das linhagens C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude, originários do setor de criação de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP e relatar a importância do isolamento deste microorganismo em colônias de animais. Para tanto, amostras de fezes de 71 camundongos da linhagem C57BL/6, 48 camundongos da linhagem BALB/c e 26 camundongos da linhagem BALB/c Nude, foram semeadas em meios específicos para bactérias gram negativas e diagnosticado no Enterokit B da Probac do Brasil. Nossos resultados mostraram que, as linhagens de camundongos C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude apresentaram P.mirabilis nas fezes, nas porcentagens de 80,3%, 62,5% e 73,1% respectivamente, sendo inadequadas para utilização em protocolos experimentais das áreas de radiobiologia, imunologia, oncologia e cirurgias experimentais invasivas, por interferirem potencialmente nos resultados destas áreas. CEUA nº 251/11.

This study aimed to present the positive results of Proteus mirabilis research from strains inbred mice C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude, originating from the sector of Specific Pathogen Free (SPF) mice - Animal Facilities of Faculdade de Medicina (USP – University of São Paulo) and report the importance of isolation of this microorganism in colonies of animals. For this, stool samples from: 71 C57BL/6, 48 BALB/c and 26 BALB /c Nude inbred mice, were inoculated in cultural bacteria specific media and diagnosed in the B Enterokit Probac-Brasil. Our results showed that the strains of C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude presented P.mirabilis in stool, percentages of 80.3%, 62.5% and 73.1% respectively, being unsuitable for use in experimental protocols in the fields of radiobiology, immunology, oncology, and experimental invasive surgeries by interfering mainly on the results of these areas. CEUA No. 251/11.

Detecção de Proteus mirabilis nas fezes de camundongos spf / /Detection of Proteus mirabilis in specifc pathogen free mice feces

O presente estudo teve como objetivo apresentar os resultados de pesquisa de positividade do microorganismo Proteus mirabilis em camundongos das linhagens C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude, originários do setor de criação de camundongos livres de patógenos específicos (SPF) do Centro de Bioterismo da Faculdade de Medicina da USP e relatar a importância do isolamento deste microorganismo em colônias de animais. Para tanto, amostras de fezes de 71 camundongos da linhagem C57BL/6, 48 camundongos da linhagem BALB/c e 26 camundongos da linhagem BALB/c Nude, foram semeadas em meios específicos para bactérias gram negativas e diagnosticado no Enterokit B da Probac do Brasil. Nossos resultados mostraram que, as linhagens de camundongos C57BL/6, BALB/c e BALB/c Nude apresentaram P.mirabilis nas fezes, nas porcentagens de 80,3%, 62,5% e 73,1% respectivamente, sendo inadequadas para utilização em protocolos experimentais das áreas de radiobiologia, imunologia, oncologia e cirurgias experimentais invasivas, por interferirem potencialmente nos resultados destas áreas. CEUA nº 251/11.(AU)

This study aimed to present the positive results of Proteus mirabilis research from strains inbred mice C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude, originating from the sector of Specific Pathogen Free (SPF) mice - Animal Facilities of Faculdade de Medicina (USP University of São Paulo) and report the importance of isolation of this microorganism in colonies of animals. For this, stool samples from: 71 C57BL/6, 48 BALB/c and 26 BALB /c Nude inbred mice, were inoculated in cultural bacteria specific media and diagnosed in the B Enterokit Probac-Brasil. Our results showed that the strains of C57BL/6, BALB/c and BALB/c Nude presented P.mirabilis in stool, percentages of 80.3%, 62.5% and 73.1% respectively, being unsuitable for use in experimental protocols in the fields of radiobiology, immunology, oncology, and experimental invasive surgeries by interfering mainly on the results of these areas. CEUA No. 251/11.(AU)

Surgical procedures to an experimental polymicrobial sepsis: cecal ligation and puncture

Sepsis is still a leading cause of death worldwide and the mechanism of shock remains to be completely understood. Several studies have aimed to evaluate the effects of several drugs and procedures in sepsis, and the most common models of this study are to challenge mice with LPS or to simulate a polymicrobial infection using a surgical procedure. Such procedure consists in exposure of the cecum by a midline laparotomy, ligature of ileocecal junction and perforation with a needle, squeezing cecum contents to the peritoneum cavity. Beyond the variations allowed by this model, the thickness of the needle used and the number of perforations seem to be an important factor, displaying different levels of sepsis severity. In this study, we used two mice strains (C57BL/6 and BALB/c) to describe the procedures of cecal ligation and puncture (CLP), comparing the survival rates of mice subjected to three different thicknesses of perforation.

Surgical procedures to an experimental polymicrobial sepsis: Cecal Ligation and Puncture

Sepsis is still a leading cause of death worldwide and the mechanism of shock remains to be completely understood. Several studies have aimed to evaluate the effects of several drugs and procedures in sepsis, and the most common models of this study are to challenge mice with LPS or to simulate a polymicrobial infection using a surgical procedure. Such procedure consists in exposure of the cecum by a midline laparotomy, ligature of ileocecal junction and perforation with a needle, squeezing cecum contents to the peritoneum cavity. Beyond the variations allowed by this model, the thickness of the needle used and the number of perforations seem to be an important factor, displaying different levels of sepsis severity. In this study, we used two mice strains (C57BL/6 and BALB/c) to describe the procedures of cecal ligation and puncture (CLP), comparing the survival rates of mice subjected to three different thicknesses of perforation.

Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts

Little is known on the epitopes derived from metacyclic promastigotes of Leishmania that are important on the regulation or destruction of the parasite, as targets of immune attack in the vertebrate host. In this study we investigated an alternative method to obtain metacyclic promasigotes of Leishmania major, as evaluated by the course of infection and delayed-type hipersensitivity (DTH) in resistant versus susceptible inbred mice. Non-infective (procyclic) promastigotes of L. major recently transformed from tissue amastigotes were attached to a negatively charged glass-wool column, whereas metacyclic promastigotes were not bound to columns and could be easily recovered. Optimal chromatography conditions were validated through statistical analyses. Parasite average yield from glass wool columns and promastigote viability were estimated by light microscopy. Metacyclic promastigotes yielded 43.5% to 57.5%. Different patterns of cutaneous lesions were obtained in BALB/c (susceptible) and C57BL/6 (resistant) mice, the former with highly infective lesions induced by metacyclic promastigotes. DTH responses proved to be higher in groups of C57BL/6 mice which were infected with metacyclic promastigotes. These results indicate that the new method could be integrated with the investigation of metacyclogenesis of Leishmania in vivo.

Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.

Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts

Little is known on the epitopes derived from metacyclic promastigotes of Leishmania that are important on the regulation or destruction of the parasite, as targets of immune attack in the vertebrate host. In this study we investigated an alternative method to obtain metacyclic promasigotes of Leishmania major, as evaluated by the course of infection and delayed-type hipersensitivity (DTH) in resistant versus susceptible inbred mice. Non-infective (procyclic) promastigotes of L. major recently transformed from tissue amastigotes were attached to a negatively charged glass-wool column, whereas metacyclic promastigotes were not bound to columns and could be easily recovered. Optimal chromatography conditions were validated through statistical analyses. Parasite average yield from glass wool columns and promastigote viability were estimated by light microscopy. Metacyclic promastigotes yielded 43.5% to 57.5%. Different patterns of cutaneous lesions were obtained in BALB/c (susceptible) and C57BL/6 (resistant) mice, the former with highly infective lesions induced by metacyclic promastigotes. DTH responses proved to be higher in groups of C57BL/6 mice which were infected with metacyclic promastigotes. These results indicate that the new method could be integrated with the investigation of metacyclogenesis of Leishmania in vivo.

Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.

Behavior of Leishmania major metacyclic promastigotes during the course of infection and immune response development in resistant versus susceptible hosts

Little is known on the epitopes derived from metacyclic promastigotes of Leishmania that are important on the regulation or destruction of the parasite, as targets of immune attack in the vertebrate host. In this study we investigated an alternative method to obtain metacyclic promasigotes of Leishmania major, as evaluated by the course of infection and delayed-type hipersensitivity (DTH) in resistant versus susceptible inbred mice. Non-infective (procyclic) promastigotes of L. major recently transformed from tissue amastigotes were attached to a negatively charged glass-wool column, whereas metacyclic promastigotes were not bound to columns and could be easily recovered. Optimal chromatography conditions were validated through statistical analyses. Parasite average yield from glass wool columns and promastigote viability were estimated by light microscopy. Metacyclic promastigotes yielded 43.5% to 57.5%. Different patterns of cutaneous lesions were obtained in BALB/c (susceptible) and C57BL/6 (resistant) mice, the former with highly infective lesions induced by metacyclic promastigotes. DTH responses proved to be higher in groups of C57BL/6 mice which were infected with metacyclic promastigotes. These results indicate that the new method could be integrated with the investigation of metacyclogenesis of Leishmania in vivo.

Pouco se conhece sobre os epítopos derivados de promastigotas metacíclicos de Leishmania que são importantes para a regulação ou destruição do parasita, como alvos de ação imunológica no hospedeiro vertebrado. Neste estudo, nós investigamos um método alternativo para obter promastigotas metacíclicos de Leishmania major, pela avaliação do curso da infecção e reação de hipersensibilidade do tipo retardado (HTR) em hospedeiros resistentes e susceptíveis. Promastigotas não-infectantes (procíclicos) de L. major, recentemente isolados de amastigotas, foram selecionados pela adesão a colunas de lã de vidro negativamente carregadas, enquanto que promastigotas metacíclicos não se aderem à coluna e podem ser recuperados com facilidade. Condições ótimas de cromatografia foram validadas por análise estatística. O rendimento médio de parasitas obtidos após separação em colunas de lã de vidro e a viabilidade dos promastigotas foram estimados por microscopia óptica. Os promastigotas metacíclicos tiveram um rendimento médio de 43,5% a 57,5%. Camundongos BALB/c (susceptíveis) e camundongos C57BL/6 (resistentes) apresentaram padrões distintos de lesões cutâneas, os primeiros com lesões mais agressivas, induzidas por promastigotas metacíclicos. As respostas à reação de HTR foram maiores nos grupos de camundongos C57BL/6, submetidos à infecção com promastigotas metacíclicos. Estes resultados indicam que o novo método poderia ser integrado aos protocolos existentes para estudar a metaciclogênese de parasitas do gênero Leishmania in vivo.

Associação entre infecção experimental por Mycoplasma pneumoniae e/ou Chlamydophila (Chlamydia) pneumoniae e a intensidade das lesões ateroscleróticas da aorta, em camundongos C57BL/6 apoE KO, com ênfase na diferença entre os sexos / Association between experimental infection by Mycoplasma pneumoniae and/or Chlamydophila (Chlamydia) pneumoniae and intensity of atherosclerotic lesions in the aorta of C57BL/6 apoE KO mice, with emphasis on the difference between sexes

Os mecanismos pelos quais os agentes infecciosos, independentes ou não de meio ambiente permissivo, podem promover a aterogênese e as manifestações clínicas não estão completamente esclarecidos. Apesar das numerosas publicações demonstrando a presença de antígenos ou DNA de agentes infecciosos nas placas de ateroma, a questão se o agente infeccioso pode iniciar o processo aterosclerótico ou agravá-lo permanece sem resposta, possibilitando o aprofundamento das pesquisas neste assunto. Desta forma, este trabalho tem como objetivo estudar se a infecção experimental, por C.pneumoniae e/ou M.pneumoniae, em camundongos C57BL/6 apoE KO induziria ou afetaria a intensidade e a característica de vulnerabilidade da placa ateromatosa, de acordo com o sexo e/ou a dieta rica em colesterol. Métodos: um grupo de camundongos recebeu dieta enriquecida com 1% de colesterol (hiperlipidêmica), e o outro ração com formulação adequada para espécie (normolipidêmica), desde os dois meses de idade. Aos 8 meses de idade foram subdivididos, inoculados com 106 UFI de C.pneumoniae e/ou 106 UFC de M.pneumoniae, por via intraperitoneal, reinoculados um mês após e sacrificados aos 10 meses de idade. Para análise histopatológica secções transversais das aortas torácicas foram processadas para emblocamento em parafina, cortadas com 5 µm de espessura e coradas pelas técnicas de hematoxilina-eosina e tricrômico de Masson. As medianas das variáveis: altura da placa, área da placa, área de gordura da placa, área da artéria, área da luz e porcentagem de obstrução da luz da artéria dos diferentes grupos foram submetidas ao teste de Mann Whitney, com o nível de rejeição de 5%. Resultados: a infecção por C.pneumoniae e/ou M.pneumoniae causou agravamento da aterosclerose tanto em camundongos C57BL/6 apoE KO machos quanto em fêmeas. No entanto, as fêmeas infectadas somente com M.pneumoniae evoluíram com placas mais instáveis, representadas por maior remodelamento positivo. A co-infecção por C.pneumoniae e M.pneumoniae induziu placas mais estáveis, ou seja, com menor conteúdo de gordura e sem remodelamento, tanto nos machos quanto nas fêmeas. A introdução de dieta rica em colesterol levou ao não desenvolvimento de remodelamento positivo do vaso nas fêmeas infectadas por M.pneumoniae, mas sim nas co-infectadas por C.pneumoniae e M.pneumoniae que apresentaram placas mais instáveis, por serem mais volumosas e com maior conteúdo de gordura. Nos machos houve desenvolvimento de placas mais gordurosas nos infectados por C.pneumoniae. Conclusão: A infecção por C.pneumoniae e/ou M.pneumoniae em camundongos C57BL/6 apoE KO levou ao desenvolvimento ou agravamento de placas de aterosclerose, com diferenças em relação a intensidade e padrões de vulnerabilidade de acordo com o sexo versus o tipo de agente infecciosos. Os subgrupos infectados de fêmeas apresentaram maior agravamento da aterosclerose do que os machos. A dieta rica em colesterol agravou a intensidade da aterosclerose e mudou os padrões de vulnerabilidade dos subgrupos infectados

Independent of the presence or not a favorable ambient, mechanisms by which infectious agents may boost atherogenesis and clinical aspects are not fully elucidated. In spite of many demonstrations of infeccious agent antigens or DNA, the question if the infection may iniciate or aggravate the atherosclerotic process remains unanswered, requiring further studies. Therefore, the present work studies if the experimental infection of C57BL/6 apoE KO mice by C. pneumoniae and/or M. pneumoniae induces or affects the intensity of atherosclerosis and its characteristics of plaque vulnerability, with regard to the gender and/or the cholesterolrich diet. Methods: a group of mice was fed with 1% cholesterol-enriched diet (hyperlipidemic), from two months of age; the other group received adequately formulated food for the species (normolipidemic). At eight months of age, the mice were subgrouped according to inoculation intra-peritoneally with 106 IFU of C. pneumoniae and/or 106 CFU of M. pneumoniae, and re-inoculation one month later. They were killed at ten months of age. Cross-sectional thoracic aorta fragments were studied in embedded in paraffin block sections stained Hematoxylin-eosin and Masson?s trichromic techniques. Differences in the median of the variables: plaque height, plaque area, area of fat plaque, luminal area and percent obstruction of the lumen searched using the Mann Whitney?s test, with a 5% level of rejection. Results: the infection by C. pneumoniae and/or M. pneumoniae worsened atherosclerosis in both males and females C57BL/6 apoE KO mice. However, the M. pneumoniae inoculated female group presented more unstable plaques represented by positive remodeling of the vessel. The co-infection by both bacteria induced more stable plaque represented by low fat content and absence of vessel remodeling, in both male and female mice. The introduction of cholesterol enriched diet led to lack of positive vessel remodeling in M.pneumoniae inoculated female group, but development of unstable plaques characterized by large plaque are with high content of fat, in co-infected ones. In male groups there was development of plaque with higher fat content in the subgroup inoculated with C.pneumoniae. Conclusion: Infection by M. pneumoniae and/or C. pneumoniae, in C57BL/6 apoE KO mice, led to development or aggravation of atherosclerotic plaques, with differences regarding intensity and pattern of vulnerability according to the gender versus type of infectious agents. The infected female groups presented more aggravation of atherosclerosis than male ones. Cholesterol enriched diet aggravated the intensity of atherosclerosis and changed the patterns of vulnerability of infected subgroups