Acaricidal effect of major compounds to control Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1887) in dairy cows and possible alternatives for reversing multidrug resistance / Efeito acaricida dos principais compostos no controle de Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1887) em vacas leiteiras e possíveis alternativas para reverter a resistência múltipla às drogas

Tick control represent a great challenge to animal health. The objective of this study was to evaluate the efficacy of acaricidal compounds against Rhipicephalus microplus from dairy cattle systems in Paraná State, Brazil. Six farms (PR1-PR6) were selected, where anti-tick products were applied at fixed intervals. Two other farms that adopted alternative protocols; target selective treatment (PRS), and individual-based agroecological protocol (PRA) were also included in the trial. Fully engorged R. microplus were collected for the in vitro adult immersion test (AIT), and the egg hatch test (EHT) in all eight populations. The larval packet test (LPT) was used on PR6 and PRA tick populations. The treatment groups were composed of G1: dichlorvos 45% plus cypermethrin 5%, G2: deltamethrin 2.5%, G3: cypermethrin 15%, chlorpyriphos 25%, plus citronellal 1%, and G4: amitraz 12.5%. The efficacy at PR1 to PR6 revealed that G3 and G4 achieved moderate to high efficacy, from 75.0 to 100.0% and 73 to 98%, respectively. In the LPT, the efficacy at PR6 was 76.0, 67.0, 93.0 and 30.6%, while PRA presented 100.0, 100.0, 100.0, and 54.0%, for G1, G2, G3 and G4, respectively. Sustainable parasite control strategies are discussed.(AU)

O controle do carrapato representa um grande desafio na saúde animal. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia de compostos acaricidas contra Rhipicephalus microplus em sistemas de pecuária leiteira no Paraná, Brasil. Foram selecionadas seis fazendas (PR1-PR6), onde são aplicados produtos carrapaticidas regularmente. Duas outras fazendas que adotaram protocolos alternativos, PRS (tratamento seletivo) e PRA (controle agroecológico individual), também foram incluídas nos testes. R. microplus ingurgitadas foram coletados para testes in vitro de imersão em adultos (TIA) e teste de eclosão de ovos (TEO) em todas as oito populações. O teste de envelope de larvas (TEL) foi utilizado nas populações PR6 e PRA. Os grupos de tratamento foram compostos por G1: diclorvos 45% mais cipermetrina 5%, G2: deltametrina 2,5%, G3: cipermetrina 15%, clorpirifos 25% e mais citronelal 1% e G4: amitraz 12,5%. A eficácia em PR1 a PR6 revelou que G3 e G4 obtiveram eficácia de moderada a alta, variando de 75,0% a 100,0% e 73% a 98%, respectivamente. No TEL, a eficácia em PR6 foi de 76,0%, 67,0%, 93,0% e 30,6%, enquanto em PRA apresentou 100,0%, 100,0%, 100,0% e 54,0%, para G1, G2, G3 e G4, respectivamente. Estratégias sustentáveis de controle são discutidas neste documento.(AU)

In vitro efficacy of two commercial products of Metarhizium anisopliae s.l. for controlling the cattle tick Rhipicephalus microplus / Eficácia in vitro de dois produtos comerciais de Metarhizium anisopliae s.l. no controle do carrapato bovino Rhipicephalus microplus

The effects of two different products - Metarril® SP Organic (dry conidia) and Metarril® SC Organic (emulsifiable concentrated conidia in vegetable oil) - on eggs, larvae and Rhipicephalus microplus engorged females were here explored. Three concentrations (108, 107, and 106 conidia mL-1) for both products were prepared in water + 0.1% Tween® 80 (v/v); afterward, bioassays were carried out for all R. microplus stages by immersion in suspensions (Metarril® SP) or formulations (Metarril® SC). Metarril® SP suspensions showed low efficacy and did not affect biological parameters of treated engorged females; for eggs and larvae, only slight decreases in hatchability and larvae population were observed. Despite a delay in germination, Metarril® SC presented better results; for females, reductions in Egg Mass Weight (EMW) and Egg Production Index (EPI) were reported. On eggs, 108 conidia mL-1 increased Incubation Period (IP), shortened Hatching Period (HP) and decreased hatchability by up to 61%; for larvae, 107 and 108 conidia mL-1 reached 99.6 and 100% larval mortality respectively, 10 days after fungal exposure. Thus, further studies involving the use of oil-based formulations for ticks such as Metarril® SC need to be performed, especially to control the most susceptible stages (eggs and larvae).(AU)

No presente trabalho, os efeitos de dois diferentes produtos foram avaliados - Metarril® SP Organic (conídios secos) e Metarril® SC Organic (conídios concentrados em óleo vegetal) - para ovos, larvas e fêmeas ingurgitadas de Rhipicephalus microplus. Três concentrações (108, 107 e 106 conídios mL-1) para cada produto foram preparadas em água + Tween® 80 0,1% (v/v); os bioensaios foram realizados para todos os estágios de R. microplus por imersão nas suspensões (Metarril® SP) ou formulações (Metarril® SC). Metarril® SP não afetou os parâmetros biológicos das fêmeas, demonstrando assim baixa eficácia; para ovos e larvas, foram observadas discretas diminuições na eclodibilidade e na população de larvas. Apesar de um atraso na germinação, Metarril® SC apresentou melhores resultados; para as fêmeas, foram detectadas reduções no Peso da Massa de Ovos (PMO) e no Índice de Produção de Ovos (IPO). Para os ovos, a concentração de 108 conídios mL-1 aumentou o Período de Incubação (PI), reduziu o Período de Eclosão (PE) e também o da eclodibilidade em até 61%; para larvas, 107 e 108 conídios mL-1 atingiram 99,6 e 100% de mortalidade larval, respectivamente, 10 dias após a exposição fúngica. Com isso, estudos adicionais que envolvem o uso de formulações à base de óleo para carrapatos, como Metarril® SC, precisam ser realizados, especialmente para controlar os estágios mais suscetíveis (ovos e larvas).(AU)

In vitro activity of the hydroalcoholic extract of Chenopodium ambrosioides against engorged females of Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Atividade in vitro do extrato hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides diante de teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, known as the cattle tick, is a cause of great economic losses for dairy cattle farming because of its high frequency of occurrence and the difficulty in controlling it. The aim of this study was to evaluate the in vitro activity of Chenopodium ambrosioides extract on R. (B.) microplus. For this purpose, 125 females were selected and classified into five groups according to their weight, in order to ensure that the females used presented homogeneous weight. The treatments comprised 40 and 60% extracts of Chenopodium ambrosioides, distilled water, ethanol (70ºGL) and 12.5% amitraz. The extracts of C. ambrosioides (40 and 60%) showed effectiveness of 99.7 and 100% and higher percentages of dead females than the other treatments: 64 and 96%, respectively (p<0.001). In the groups exposed to distilled water and ethanol (70º GL), 92 and 88% of the females maintained oviposition. In the females exposed to 40 and 60% extracts, oviposition of 36 and 4% occurred, respectively. It was concluded that the extract of Chenopodium ambrosioides, at both concentration evaluated, had high efficiency against engorged females of cattle ticks.

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus, popularmente conhecido como carrapato-do-boi, é responsável por grande prejuízo à pecuária leiteira, em razão da sua alta frequência e dificuldade em seu controle. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade in vitro do extrato hidroalcóolico de Chenopodium ambrosioides sobre teleóginas de R. (B.) microplus. Para tal, foram selecionadas 125 teleóginas, classificadas em cinco tratamentos de acordo com o peso, de forma a manter os pesos das fêmeas homogêneos. Os tratamentos foram constituídos por: extrato hidroalcoólico da planta nas concentrações de 40 e 60% (v/v); água destilada; etanol 70º GL; e amitraz 12,5%. Os extratos de C. ambrosioides nas concentrações de 40 e 60% demonstraram eficácia de 99,7 e 100% e porcentagem de fêmeas mortas superior à dos demais tratamentos: 64 e 96%, respectivamente (p<0,001). Nos grupos tratados com água destilada e etanol 70º GL, 92 e 88% das fêmeas realizaram postura. Nas fêmeas expostas ao extrato 40 e 60%, a postura ocorreu em 36 e 4%, respectivamente. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de C. ambrosioides, nas concentrações avaliadas, possui alta eficiência contra teleóginas do carrapato bovino.

In vitro activity of the hydroalcoholic extract of Chenopodium ambrosioides against engorged females of Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Atividade in vitro do extrato hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides diante de teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, known as the cattle tick, is a cause of great economic losses for dairy cattle farming because of its high frequency of occurrence and the difficulty in controlling it. The aim of this study was to evaluate the in vitro activity of Chenopodium ambrosioides extract on R. (B.) microplus. For this purpose, 125 females were selected and classified into five groups according to their weight, in order to ensure that the females used presented homogeneous weight. The treatments comprised 40 and 60% extracts of Chenopodium ambrosioides, distilled water, ethanol (70ºGL) and 12.5% amitraz. The extracts of C. ambrosioides (40 and 60%) showed effectiveness of 99.7 and 100% and higher percentages of dead females than the other treatments: 64 and 96%, respectively (p<0.001). In the groups exposed to distilled water and ethanol (70º GL), 92 and 88% of the females maintained oviposition. In the females exposed to 40 and 60% extracts, oviposition of 36 and 4% occurred, respectively. It was concluded that the extract of Chenopodium ambrosioides, at both concentration evaluated, had high efficiency against engorged females of cattle ticks.(AU)

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus, popularmente conhecido como carrapato-do-boi, é responsável por grande prejuízo à pecuária leiteira, em razão da sua alta frequência e dificuldade em seu controle. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade in vitro do extrato hidroalcóolico de Chenopodium ambrosioides sobre teleóginas de R. (B.) microplus. Para tal, foram selecionadas 125 teleóginas, classificadas em cinco tratamentos de acordo com o peso, de forma a manter os pesos das fêmeas homogêneos. Os tratamentos foram constituídos por: extrato hidroalcoólico da planta nas concentrações de 40 e 60% (v/v); água destilada; etanol 70º GL; e amitraz 12,5%. Os extratos de C. ambrosioides nas concentrações de 40 e 60% demonstraram eficácia de 99,7 e 100% e porcentagem de fêmeas mortas superior à dos demais tratamentos: 64 e 96%, respectivamente (p<0,001). Nos grupos tratados com água destilada e etanol 70º GL, 92 e 88% das fêmeas realizaram postura. Nas fêmeas expostas ao extrato 40 e 60%, a postura ocorreu em 36 e 4%, respectivamente. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de C. ambrosioides, nas concentrações avaliadas, possui alta eficiência contra teleóginas do carrapato bovino.(AU)

In vitro activity of the hydroalcoholic extract of Chenopodium ambrosioides against engorged females of Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Atividade in vitro do extrato hidroalcoólico de Chenopodium ambrosioides diante de teleóginas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Rhipicephalus (Boophilus) microplus, known as the cattle tick, is a cause of great economic losses for dairy cattle farming because of its high frequency of occurrence and the difficulty in controlling it. The aim of this study was to evaluate the in vitro activity of Chenopodium ambrosioides extract on R. (B.) microplus. For this purpose, 125 females were selected and classified into five groups according to their weight, in order to ensure that the females used presented homogeneous weight. The treatments comprised 40 and 60% extracts of Chenopodium ambrosioides, distilled water, ethanol (70ºGL) and 12.5% amitraz. The extracts of C. ambrosioides (40 and 60%) showed effectiveness of 99.7 and 100% and higher percentages of dead females than the other treatments: 64 and 96%, respectively (p<0.001). In the groups exposed to distilled water and ethanol (70º GL), 92 and 88% of the females maintained oviposition. In the females exposed to 40 and 60% extracts, oviposition of 36 and 4% occurred, respectively. It was concluded that the extract of Chenopodium ambrosioides, at both concentration evaluated, had high efficiency against engorged females of cattle ticks.(AU)

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus, popularmente conhecido como carrapato-do-boi, é responsável por grande prejuízo à pecuária leiteira, em razão da sua alta frequência e dificuldade em seu controle. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade in vitro do extrato hidroalcóolico de Chenopodium ambrosioides sobre teleóginas de R. (B.) microplus. Para tal, foram selecionadas 125 teleóginas, classificadas em cinco tratamentos de acordo com o peso, de forma a manter os pesos das fêmeas homogêneos. Os tratamentos foram constituídos por: extrato hidroalcoólico da planta nas concentrações de 40 e 60% (v/v); água destilada; etanol 70º GL; e amitraz 12,5%. Os extratos de C. ambrosioides nas concentrações de 40 e 60% demonstraram eficácia de 99,7 e 100% e porcentagem de fêmeas mortas superior à dos demais tratamentos: 64 e 96%, respectivamente (p<0,001). Nos grupos tratados com água destilada e etanol 70º GL, 92 e 88% das fêmeas realizaram postura. Nas fêmeas expostas ao extrato 40 e 60%, a postura ocorreu em 36 e 4%, respectivamente. Conclui-se que o extrato hidroalcoólico de C. ambrosioides, nas concentrações avaliadas, possui alta eficiência contra teleóginas do carrapato bovino.(AU)

USO DE PORFIRINAS NA INATIVAÇÃO FOTODINÂMICA DE FÊMEAS INGURGITADAS DE Rhipicephalus microplus

O carrapato Rhipicephalus microplus conhecido popularmente como carrapato-do-boi, é um dos principais ectoparasitos que acomete bovinos, sendo considerado um dos grandes responsáveis por perdas econômicas na pecuária brasileira. O uso da terapia fotodinâmica pode ser uma alternativa de controle desse parasito. Essa ferramenta, consiste na combinação de fotossensibilizadores e uma fonte de irradiação com comprimento de onda adequado. O objetivo deste trabalho é avaliar a eficiência de diferentes fotossensibilizadores como as porfirinas: meso-tetra (4-piridil {bis (2,2 - bipiridina) clororutênio (II))) porfirina (RuTPyP), meso-tetra (4-piridil {bis (2,2 - bipiridina) clororutênio (II))) porfirinatozinco (III) (ZnRuTPyP) e hematoporfirina (HP) sobre a viabilidade de fêmeas ingurgitadas de R. microplus como método alternativo para o controle desses carrapatos, utilizando a luz do sol como fonte de irradiação. Cada fotossensibilizador foi testado nas concentrações: 2,5M; 5M e 10M. Foi utilizado um pool de 10 fêmeas ingurgitadas para cada tratamento. Como grupos controles foram utilizados grupos tratados apenas com DMSO 5% com exposição fotodinâmica, com DMSO 5% sem exposição fotodinâmica e grupos contendo cada fotossensibilizador mas sem exposição fotodinâmica. No 15º dia após a realização do experimento foram avaliados os parâmetros de viabilidade das fêmeas ingurgitadas como fêmeas viáveis e peso dos ovos; após 25 dias foi realizado o percentual de eclodibilidade de larvas. A HP inativou as fêmeas ingurgitadas de R. microplus e se mostrou eficaz para interferir na biologia reprodutiva, demonstrando o seu potencial acaricida, principalmente na menor concentração, onde alcançou 97,9% de percentual de controle. No entanto, as moléculas tetra-rutenadas (RuTPyP e ZnRuTPyP) não se demostraram efetivas para a inativação fotodinâmica do carrapato bovino.

The Rhipicephalus microplus tick, popularly known as ox-tick, is one of the main ectoparasites that affects cattle, being considered one of the major responsible for economic losses in Brazilian livestock. The use of photodynamic therapy can be an alternative to control this parasite. This tool consists of a combination of photosensitizers and an irradiation source with an appropriate wavelength. The objective of this work is to evaluate the efficiency of different photosensitizers such as porphyrins: meso-tetra (4-pyridyl {bis (2,2' - bipyridine) chlororuthenium (II))) porphyrin (RuTPyP), meso-tetra (4-pyridyl) {bis (2,2' - bipyridine) chlororuthenium (II))) porphyrinatozinc (III) (ZnRuTPyP) and hematoporphyrin (HP) on the viability of engorged R. microplus females as an alternative method for controlling these ticks, using light of the sun as a source of irradiation. Each photosensitizer was tested in the concentrations: 2.5M; 5M and 10M. A pool of 10 engorged females was used for each treatment. As control groups, groups treated only with DMSO 5% with photodynamic exposure, with DMSO 5% without photodynamic exposure and groups containing each photosensitizer but without photodynamic exposure were used. On the 15th day after the experiment, the viability parameters of engorged females were evaluated, such as viable females and egg weight; after 25 days the larval hatchability percentage was carried out. The HP inactivated the engorged females of R. microplus and proved to be effective to interfere in the reproductive biology, demonstrating its potential acaricide, mainly in the lowest concentration, where it reached 97.9% of control percentage. However, the tetra ruthenium molecules (RuTPyP and ZnRuTPyP), have not been shown to be effective for the photodynamic inactivation of the bovine tick.

Evaluation of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) resistance to different acaricide formulations using samples from Brazilian properties / Avaliação da resistência de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) a diferentes formulações acaricidas utilizando amostras de propriedades brasileiras

The Rhipicephalus (Boophilus) microplus tick is responsible for considerable economic losses in Brazil, causing leather damage, weight loss and reduced milk production in cattle and results in the transmission of pathogens. Currently, the main method for controlling this tick is using acaricides, but their indiscriminate use is one of the major causes of resistance dissemination. In this study, the adult immersion test (AIT) was used to evaluate resistance in ticks from 28 properties located in five different states (Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Ceará, São Paulo, e Minas Gerais) and the Distrito Federal (DF) of Brazil. The resistance was found in 47.64% of the repetitions demonstrating an efficacy of less than 90% in various locations throughout the country. The larvae packet test was used to evaluate samples from ten properties in four states (Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Minas Gerais and Espírito Santo). Spray products belonging to the main classes of acaricides, including combination formulations, were used in both types of test. New cases of resistance were found on properties within the states of Ceará, Espírito Santo and Mato Grosso, where such resistance was not previously reported.(AU)

O carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus é responsável por consideráveis perdas econômicas no Brasil, causando, nos bovinos, danos ao couro, perda de peso, redução na produção de leite, o que resulta na transmissão também de patógenos. Atualmente, o principal método de controle para esse carrapato é o uso de acaricidas, porém seu uso indiscriminado é uma das principais causas da disseminação da resistência. Neste estudo, o teste de imersão de adultos (TIA) foi utilizado para avaliar a resistência em carrapatos provenientes de 28 propriedades, localizadas em cinco diferentes estados brasileiros (Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Ceará, São Paulo, e Minas Gerais) e no Distrito Federal (DF). A resistência foi encontrada em 47,64% das repetições, demonstrando uma eficácia de menos de 90% em vários lugares do país. O teste de pacote de larva foi utilizado para avaliar amostras de 10 propriedades em quatro estados (Mato Grosso do Sul, Mato Grosso, Minas Gerais e Espírito Santo). Produtos de pulverização, pertencentes às principais classes de acaricidas, incluindo-se associações, foram utilizados em ambos os testes. Novos casos de resistência foram encontrados em propriedades nos estados do Ceará, Espírito Santo e Mato Grosso, nas quais a resistência ainda não havia sido previamente reportada.(AU)

TOXICIDADE DOS ÓLEOS ESSENCIAIS DE Illicium verum, Cymbopogon citratus E Azadirachta indica SOBRE Rhipicephalus microplus EM TESTE In vitro

No Brasil, o controle de Rhipicephalus microplus é realizado principalmente por acaricidas químicos. Todavia, devido ao crescente número de populações resistentes aos princípios ativos disponíveis no mercado e também devido à preocupação com a qualidade dos produtos de origem animal, novas tecnologias vêm sendo pesquisadas. Uma alternativa que tem demonstrado potencial é a utilização de óleos essenciais, porém, ainda são escassos os estudos a respeito do mecanismo de ação desses óleos nos carrapatos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito citotóxico e acaricida de diferentes concentrações dos óleos essenciais das plantas Illicium verum (anis estrelado), Cymbopogon citratus (capim cidreira) e Azadirachta indica (neem), sobre hemócitos e larvas de R. microplus. Para o teste de toxicidade, os óleos essenciais (obtidos comercialmente) foram diluídos em solução de água destilada e Tween 80® a 3% e as concentrações utilizadas foram 1,25; 2,5; 5; 10,0 e 20,0 mg/mL. Para obtenção dos hemócitos foi realizada a coleta de hemolinfa de 400 fêmeas completamente ingurgitadas de R. microplus. Os hemócitos foram plaqueados na concentração de 5 × 104 células em cada poço de uma placa de 96 poços, expostos a 10L da solução de cada óleo. Doze horas após a exposição, 20 L de resazurina na concentração de 0,13 mg/mL foram adicionados em cada poço e as amostras incubadas no escuro por três horas. A intensidade de fluorescência foi avaliada através de um fluorímetro de placa. A viabilidade relativa dos hemócitos foi calculada considerando as células não expostas a nenhum óleo como controles (100% viabilidade). Para avaliar a ação acaricida, foi realizado o teste de pacote de larvas, onde aproximadamente 100 larvas foram expostas às diferentes concentrações dos óleos e o percentual de mortalidade das larvas foi avaliado após 24 horas. Como resultados, verificou-se que na exposição a 20mg/mL dos óleos houve a maior alteração no percentual de viabilidade celular, cujas reduções foram de 23%, 15% e 9,4% para anis estrelado, capim cidreira e neem, respectivamente. No bioensaio com larvas de R. microplus, anis estrelado e capim cidreira causaram 99,3% e 63,2% de mortalidade, respectivamente, na concentração de 20mg/mL, enquanto que o neem não causou mais que 1,0% de mortalidade das larvas em nenhuma das concentrações testadas. Assim, conclui-se que os óleos essenciais de anis estrelado e capim cidreira apresentaram toxicidade sobre hemócitos e ação acaricida para R. microplus, sendo o anis estrelado o mais citotóxico e letal entre eles.

In Brazil, the control of Rhipicephalus microplus is carried out mainly by chemical acaricides. However, due to the growing number of populations resistant to the active ingredients available on the market and also due to the concern with the quality of products of animal origin, new technologies are being researched. An alternative that has demonstrated potential is the use of essential oils, however, studies on the mechanism of action of these oils in ticks are still scarce. Thus, the aim of this study was to evaluate the cytotoxic and acaricidal effect essential oils from the plants Illicium verum (star anise), Cymbopogon citratus (lemongrass) and Azadirachta indica (neem), in different concentrations against R. microplus. For the toxicity test, the essential oils (obtained commercially) were diluted in a solution of distilled water and 3% Tween 80® and the concentrations used were 1.25; 2.5; 5; 10.0 and 20.0 mg ml-1. Harvesting hemolytic, hemolymph was collected from 400 females completely engorged of R. microplus. Hemocytes were plated at a concentration of 5 × 104 cells in each well of a 96-well plate, exposed to 10L of the solution of each oil. Twelve hours after exposure, 20 L of resazurin at a concentration of 0.13 mg / mL was added to each well and the samples incubated in the dark for three hours. The fluorescence intensity was assessed using a plate fluorimeter. The relative viability of the hemocytes was calculated considering the cells not exposed to any oil as controls (100% viability). In order to evaluate the acaricidal action, the larval pack test was performed, where approximately 100 larvae were exposed to different oil concentrations and the mortality percentage of the larvae was assessed after 24 hours. As a result, it was found that in the exposure to (20mg mL-1) of oils there was the greatest change in the percentage of cell viability, whose reductions were of 23%, 15% and 9.4% for star anise, lemongrass and neem, respectively. In the bioassay with R. microplus larvae, star anise and lemongrass caused 99.3% and 63.2% of mortality, respectively, at a concentration of 20mg mL-1, while the neem caused no more than 1.0% mortality larvae in none of the tested concentrations. Thus, it is concluded that the essential oils of star anise and lemongrass showed toxicity on hemocytes and acaricidal action for R. microplus, with star anise being the most cytotoxic and lethal among them.

NANOTECNOLOGIA APLICADA À ELABORAÇÃO DE CARRAPATICIDAS SINTÉTICOS ASSOCIADOS A COMPOSTOS VEGETAIS PARA O CONTROLE DE Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Rhipicephalus microplus causa quedas na produção e consequentes prejuízos econômicos à pecuária. A resistência aos acaricidas e o risco da presença de resíduos nos alimentos de origem animal têm impulsionado a busca por novas alternativas de controle. Vários compostos vegetais possuem potencial acaricida/repelente, porém, possuem limitações em sua aplicação. Nanocarreadores podem proteger esses compostos, aumentar sua solubilidade aquosa e biodisponibilidade, além de reduzir possíveis efeitos tóxicos. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi desenvolver formulações carrapaticidas a partir de Nanopartículas Lipídicas Sólidas (NLS), Carreadores Lipídicos Nanoestruturados (CLN) e Nanopartículas de Zeína (NZ), associados à cipermetrina, clorpirifós e um composto vegetal (citral, mentol ou limoneno), caracterizar esses sistemas nanocarreadores e verificar sua atuação contra larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Nove formulações foram desenvolvidas e caracterizadas por Dynamic Light Scattering (DLS) e Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). As formulações 1 (NLS+cip+clo+citral), 2 (NLS+cip+clo+mentol), 3 (NLS+cip+clo+limoneno), 4 (CLN+cip+clo+citral), 5 (CLN+cip+clo+mentol) e 6 (CLN+cip+clo+limoneno) obtiveram médias de diâmetro de 286 a 304 nm; polidispersão de 0,16 a 0,18; potencial zeta de -15,8 a -20 mV, concentração de 3,37 ± 0,24 x 1013 a 5,44 ± 0,18 x 1013 partículas/mL; e Eficiência de Encapsulação (EE) > 98,01% para todos os princípios ativos, enquanto, para os mesmos parâmetros, as formulações de zeína NZ-1 (NZ+cip+clo+citral), NZ-2 (NZ+cip+clo+mentol) e NZ-3 (NZ+cip+clo+limoneno) obtiveram, respectivamente, valores médios de: 282,18 a 290,64 nm; 0,24 a 0,25; -3,35 a -6,10 mV; e concentração de 2,73 ± 2,67 x 1013 a 3,20 ± 3,03 x 1013 partículas/mL e EE > 96%. Todas as formulações foram avaliadas quanto ao seu potencial acaricida e comparadas com controles positivo (Colosso®) e negativos (água destilada; e nanopartículas sem princípio ativo). Na avaliação das formulações de nanocarreadores lipídicos, pelo Teste de Pacote de Larvas (TPL), os controles negativos não ocasionaram mortalidade das larvas, enquanto o controle positivo, avaliado na concentração de 0,512 mg.mL-1, causou 100% de mortalidade. As formulações de NLS 1, 2, 3 e de CLN 4, 5 e 6 foram avaliadas de 0,004 a 0,466 mg.mL-1. Na concentração de 0,007 mg.mL-1 atingiram 90,4, 75,9, 93,8, 100, 95,1, 72,7 % de mortalidade. Com excessão da 4, para a qual não foi possível determinar concentrações letais (CL), as formulações 1, 2, 3, 5 e 6 resultaram em CL50 e CL90 de: 0,0033 e 0,0072; 0,0054 e 0,0092; 0,0040 e 0,0081; 0,0023 e 0,0054; 0,0055 e 0,0094 mg.mL-1, respectivamente. Em relação às nanoformulações de zeína avaliadas pelo TPL, os controles negativos também não ocasionaram mortalidade das larvas, entretanto, o controle positivo (avaliado de 0,004 a 0,512 mg.mL-1), resultou em mortalidade de larvas > 71,9% na concentração de 0,064 mg.mL-1, enquanto as formulações de zeína (avaliadas de 0,004 a 0,466 mg.mL-1) ocasionaram mortalidade > 80 % na concentração de 0,029 mg.mL-1. Essas formulações NZ-1 (NZ+cip+clo+citral), NZ-2 (NZ+cip+clo+mentol) e NZ-3 (NZ+cip+clo+limoneno) ainda resultaram em altas taxas de mortalidade de larvas em menores concentrações, com CL50 e CL90 de: 0,0136 e 0,0352; 0,0115 e 0,0386; 0,0117 e 0,0301 mg.mL-1, respectivamente, e 0,0319 e 0,1028 mg.mL-1,vi respectivamente, para o controle positivo). As formulações de zeína foram também avaliadas pelo Teste de Imersão de Adultos (TIA) e as formulações NZ-1, NZ-2 e NZ-3 obtiveram, respectivamente: 50,2, 40,5 e 60,1% de eficácia sobre fêmeas ingurgitadas na concentração de 0,466 mg.mL-1, enquanto o controle positivo resultou em 39,4% de eficácia a 0,512 mg.mL-1. As formulações de zeína ainda apresentaram uma alta atividade residual, embora menor do que a do controle positivo. Esse estudo demonstrou que foi possível encapsular os princípios ativos priorizados e caracterizar os sistemas carreadores. Todas as nanoformulações foram capazes de proteger os princípios ativos contra a degradação em solução, o que é uma característica de estabilidade visada para produtos carrapaticidas comerciais. Dessa forma, nanoformulações podem ser uma alternativa para o desenvolvimento de novos biocarrapaticidas com menor quantidade de princípios ativos, visando-se promover um controle parasitário mais seguro, com menor risco de presença de resíduos nos alimentos de origem animal e no ambiente.

Rhipicephalus microplus causes declines in cattle production and consequent damage to livestock. The resistance of ticks and the risk of the presence of residues in food of animal origin have driven the search for new control alternatives. Several plant compounds have an acaricidal/repellent potential, however, they have limitations in their application. Nanocarriers can protect these compounds, increase their aqueous solubility and bioavailability, and reduce possible toxic effects. Thus, the objective of this study was to develop acaricide formulations from Solid Lipid Nanoparticles (NLS), Nanostructured Lipid Carriers (CLN) and Zein Nanoparticles (NZ), associated with cypermethrin (cip), chlorpyrifos (clo) and a plant compound (citral, menthol or limonene), characterize these nanocarrier systems and verify their performance against larvae and engorged females of R. microplus. Nine formulations were developed and characterized by Dynamic Light Scattering (DLS) and Nanoparticle Tracking Analysis (NTA). The formulations 1 (NLS+cip+clo+citral), 2 (NLS+cip+clo+menthol), 3 (NLS+cip+clo+limonene), 4 (CLN+cip+clo+citral), 5 (CLN+cip+clo+menthol) and 6 (CLN+cip+clo+limonene) obtained mean diameters from 286 to 304 nm; polydispersion from 0.16 to 0.18; zeta potential from -15.8 to -20 mV, concentration from 3.37 ± 0.24 x 1013 to 5.44 ± 0.18 x 1013 particles/mL; and Encapsulation Efficiency (EE) > 98.01% for all active ingredients, while, for the same parameters, zein formulations NZ-1 (NZ+cip+clo+citral), NZ-2 (NZ+cip+clo+menthol) and NZ-3 (NZ+cip+clo+limonene) obtained, respectively, mean values of: 282.18 to 290.64 nm; 0.24 to 0.25; -3.35 to -6.10 mV; concentration of 2.73 ± 2.67 x 1013 to 3.20 ± 3.03 x 1013 particles/mL and EE> 96%. All formulations were evaluated for their acaricidal potential and compared with positive (Colosso®) and negative (distilled water; and nanoparticles without active ingredient) controls. In the evaluation of lipid nanocarrier formulations, by the Larval Pack Test (TPL), the negative controls did not cause mortality of the larvae, while the positive control, evaluated at the concentration of 0.512 mg.mL-1, caused 100% mortality. The formulations of NLS 1, 2, 3 and CLN 4, 5 and 6 were evaluated from 0.004 to 0.466 mg.mL-1. At the concentration of 0.007 mg.mL-1 they reached 90.4, 75.9, 93.8, 100, 95.1, 72.7% of mortality. With the exception of 4, for which it was not possible to determine lethal concentrations (CL), formulations 1, 2, 3, 5 and 6 resulted in CL50 and CL90 of: 0.0033 and 0.0072; 0.0054 and 0.0092; 0.0040 and 0.0081; 0.0023 and 0.0054; 0.0055 and 0.0094 mg.mL-1, respectively. Regarding the zein nanoformulations evaluated by the TPL, the negative controls also did not cause mortality of the larvae, however, the positive control (evaluated from 0.004 to 0.512 mg.mL-1), resulted in larval mortality > 71.9% in the concentration 0.064 mg.mL-1, while zein formulations (evaluated from 0.004 to 0.466 mg.mL-1) caused mortality> 80% in the concentration of 0.029 mg.mL-1. These formulations NZ-1 (NZ + cip + clo + citral), NZ-2 (NZ + cip + clo + menthol) and NZ-3 (NZ + cip + clo + limonene) still resulted in high larval mortality rates in lower concentrations, with LC50 and LC90 of: 0.0136 and 0.0352; 0.0115 and 0.0386; 0.0117 and 0.0301 mg.mL-1, respectively, and 0.0319 and 0.1028 mg.mL-1, respectively, for the positive control). The zein formulations were also evaluated by the Adult Immersionviii Test (TIA) and the formulations NZ-1, NZ-2 and NZ-3 obtained, respectively: 50.2, 40.5 and 60.1% efficacy on engorged females at a concentration of 0.466 mg.mL-1, while the positive control resulted in 39.4% efficacy at 0.512 mg. mL-1. The zein formulations still showed a high residual activity, although less than that of the positive control. This study demonstrated that it was possible to encapsulate the prioritized active ingredients and characterize the carrier systems. All nanoformulations were able to protect the active ingredients against degradation in solution, which is a characteristic of stability aimed at commercial tick products. Thus, nanoformulations can be an alternative for the development of new biocarpathicides with less active ingredients, aiming to promote safer parasitic control, with less risk of the presence of residues in food of animal origin and in the environment.

Acaricidal efficacy against "Rhipicephalus (Boophilus) microplus" of citronella oil / Eficácia acaricida do óleo de citronela contra o "Rhipicephalus (Boophilus) microplus"

The Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important cattle tick in Brazil. For the ticks control, various studies on plants have been developed in an attempt to find extracts with acaricidal properties. This research was aimed at evaluating in vitro and in vivo effects of citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) oil on cattle ticks. Negative control group and eight concentrations of citronella oil and mineral oil (0.5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), were used on in vitro trials with engorged female ticks. The efficacy against cattle ticks was 0; 34.5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 and 100%, respectively, for citronella oil. For mineral oil contradictory results of acaricidal efficacy were observed. At the in vivo trial eighteen Holstein cows were allocated to three groups: negative control; citronella oil at 8.6% - level estimated by regression analysis, accounting for 95% efficacy against ticks on in vitro trial and amitraz at 0.025%. Engorged female ticks were counted before, mean of days -3, -2, -1, and after treatment, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 and 21 days. On the 1 st and 2nd milked after treatments, physiologic variables were evaluate (negative control x phytotherapic treatment). The efficacy against tick was 0; 91.3 and 60%, respectively, at 21 days after treatment. Similar results were found with physiologic variables between treatments.(AU)

O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o carrapato bovino mais importante no Brasil. Para o controle do carrapato, vários estudos com plantas têm sido desenvolvidos numa tentativa de encontrar extratos com propriedades acaricidas. Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar o efeito in vitro e in vivo do óleo de citronela (Cymbopogon winterianus Jowitt) sobre o carrapato bovino. Na experimentação in vitro foi utilizado o grupo controle negativo e oito concentrações de óleo de citronela e óleo mineral (0,5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), em fêmeas ingurgitadas de carrapatos. A eficácia carrapaticida para o óleo de citronela foi de 0; 34,5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 e 100%, respectivamente; para o óleo mineral foram observados resultados irregulares na eficácia acaricida. Para a experimentação in vivo foram constituídos três grupos: controle negativo; óleo de citronela a 8,6% nível estimado mediante análise de regressão, correspondendo a 95% de eficácia acaricida da pesquisa in vitro e amitraz a 0,025%, com dezoito vacas da raça Holandesa. Antes, média dos dias -3, -2, -1 e após a aplicação do produto, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 e 21 dias, foram contadas fêmeas ingurgitadas de carrapato. Na 1ª e na 2ª ordenha após a aplicação dos tratamentos, foram avaliadas variáveis fisiológicas (controle negativo x tratamento fitoterápico). A eficácia carrapaticida foi de 0; 91,3 e 60%(AU)

Eficácia acaricida do óleo de citronela contra o Rhipicephalus (Boophilus) microplus

The Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important cattle tick in Brazil. For the ticks control, various studies on plants have been developed in an attempt to find extracts with acaricidal properties. This research was aimed at evaluating in vitro and in vivo effects of citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) oil on cattle ticks. Negative control group and eight concentrations of citronella oil and mineral oil (0.5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), were used on in vitro trials with engorged female ticks. The efficacy against cattle ticks was 0; 34.5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 and 100%, respectively, for citronella oil. For mineral oil contradictory results of acaricidal efficacy were observed. At the in vivo trial eighteen Holstein cows were allocated to three groups: negative control; citronella oil at 8.6% - level estimated by regression analysis, accounting for 95% efficacy against ticks on in vitro trial and amitraz at 0.025%. Engorged female ticks were counted before, mean of days -3, -2, -1, and after treatment, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 and 21 days. On the 1st and 2nd milked after treatments, physiologic variables were evaluate (negative control x phytotherapic treatment). The efficacy against tick was 0; 91.3 and 60%, respectively, at 21 days after treatment. Similar results were found with physiologic variables between treatments.

O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o carrapato bovino mais importante no Brasil. Para o controle do carrapato, vários estudos com plantas têm sido desenvolvidos numa tentativa de encontrar extratos com propriedades acaricidas. Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar o efeito in vitro e in vivo do óleo de citronela (Cymbopogon winterianus Jowitt) sobre o carrapato bovino. Na experimentação in vitro foi utilizado o grupo controle negativo e oito concentrações de óleo de citronela e óleo mineral (0,5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), em fêmeas ingurgitadas de carrapatos. A eficácia carrapaticida para o óleo de citronela foi de 0; 34,5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 e 100%, respectivamente; para o óleo mineral foram observados resultados irregulares na eficácia acaricida. Para a experimentação in vivo foram constituídos três grupos: controle negativo; óleo de citronela a 8,6% - nível estimado mediante análise de regressão, correspondendo a 95% de eficácia acaricida da pesquisa in vitro e amitraz a 0,025%, com dezoito vacas da raça Holandesa. Antes, média dos dias -3, -2, -1 e após a aplicação do produto, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 e 21 dias, foram contadas fêmeas ingurgitadas de carrapato. Na 1ª e na 2ª ordenha após a aplicação dos tratamentos, foram avaliadas variáveis fisiológicas (controle negativo x tratamento fitoterápico). A eficácia carrapaticida foi de 0; 91,3 e 60%, respectivamente, 21 dias após o tratamento. Os valores das variáveis fisiológicas avaliadas foram similares entre os tratamentos.

Acaricidal efficacy against "Rhipicephalus (Boophilus) microplus" of citronella oil / Eficácia acaricida do óleo de citronela contra o "Rhipicephalus (Boophilus) microplus"

The Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the most important cattle tick in Brazil. For the ticks control, various studies on plants have been developed in an attempt to find extracts with acaricidal properties. This research was aimed at evaluating in vitro and in vivo effects of citronella (Cymbopogon winterianus Jowitt) oil on cattle ticks. Negative control group and eight concentrations of citronella oil and mineral oil (0.5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), were used on in vitro trials with engorged female ticks. The efficacy against cattle ticks was 0; 34.5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 and 100%, respectively, for citronella oil. For mineral oil contradictory results of acaricidal efficacy were observed. At the in vivo trial eighteen Holstein cows were allocated to three groups: negative control; citronella oil at 8.6% - level estimated by regression analysis, accounting for 95% efficacy against ticks on in vitro trial and amitraz at 0.025%. Engorged female ticks were counted before, mean of days -3, -2, -1, and after treatment, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 and 21 days. On the 1 st and 2nd milked after treatments, physiologic variables were evaluate (negative control x phytotherapic treatment). The efficacy against tick was 0; 91.3 and 60%, respectively, at 21 days after treatment. Similar results were found with physiologic variables between treatments.

O Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o carrapato bovino mais importante no Brasil. Para o controle do carrapato, vários estudos com plantas têm sido desenvolvidos numa tentativa de encontrar extratos com propriedades acaricidas. Esta pesquisa foi conduzida com o objetivo de avaliar o efeito in vitro e in vivo do óleo de citronela (Cymbopogon winterianus Jowitt) sobre o carrapato bovino. Na experimentação in vitro foi utilizado o grupo controle negativo e oito concentrações de óleo de citronela e óleo mineral (0,5; 1; 2; 5; 10; 20; 50; 100%), em fêmeas ingurgitadas de carrapatos. A eficácia carrapaticida para o óleo de citronela foi de 0; 34,5; 43; 48; 82; 99; 99; 100 e 100%, respectivamente; para o óleo mineral foram observados resultados irregulares na eficácia acaricida. Para a experimentação in vivo foram constituídos três grupos: controle negativo; óleo de citronela a 8,6% nível estimado mediante análise de regressão, correspondendo a 95% de eficácia acaricida da pesquisa in vitro e amitraz a 0,025%, com dezoito vacas da raça Holandesa. Antes, média dos dias -3, -2, -1 e após a aplicação do produto, 1, 2, 3, 5, 7, 10, 14 e 21 dias, foram contadas fêmeas ingurgitadas de carrapato. Na 1ª e na 2ª ordenha após a aplicação dos tratamentos, foram avaliadas variáveis fisiológicas (controle negativo x tratamento fitoterápico). A eficácia carrapaticida foi de 0; 91,3 e 60%

Effect of a spray formulation on the reproductive parameters of a susceptible population of Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Efeitos de uma formulação pulverização sobre os parâmetros reproductivos de uma população susceptível de Rhipicephalus (Boophilus) microplus

The number of studies emphasizing the possible damage that acaricidal spray formulations can cause on engorged female ticks' reproductive parameters is small. The present study evaluated the deleterious effects of a spray formulation (dichlorvos 60% + chlorpyrifos 20%) on the reproductive parameters of a susceptible population of Rhipicephalus (B.) microplus females, using the Stall Test. The ticks were allocated randomly to treatments according to the mean numbers of females detached from each cow on days -3, -2 and -1 and the cattle pen location. The numbers of engorged female ticks that naturally detached from the cattle were counted daily from day 1 to day 30. For each group, 20 detached engorged female ticks or the available number collected daily were evaluated regarding reproductive parameters. Associations of organophosphates demonstrated elevated acaricidal efficacy, as well as deleterious effects on the reproductive parameters of R. (B.) microplus females. The engorged female weight (days 1 to 7), weight of egg masses (days 5 to 10) and larval hatching percentage (days 5 to 19) were decreased (P ≤ 0.05). It is possible that a formulation can lead to deleterious effects on R. (B.) microplus females when the tick population analyzed shows elevated sensitivity towards a particular formulation. However, further studies need to be conducted.

É relativamente pequeno o número de estudos que enfatiza os danos que uma formulação acaricida spray pode desencadear sobre os parâmetros reprodutivos das teleóginas. O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos deletérios de uma formulação spray comercial (dichlorvos 60% + Clorpirifós 20%), sobre os parâmetros reprodutivos de uma população susceptível de R. (B.) microplus, desprendidas de bovinos experimentalmente infestados, utilizandose o teste de estábulo. Os animais foram alocados aos grupos de tratamentos de acordo com a contagem média de fêmeas desprendidas dos bovinos nos dias -3, -2 e -1. O número de teleóginas desprendidas foi quantificado do dia 1 ao 30. Para cada grupo, diariamente 20 fêmeas, ou a quantidade disponível, foram selecionadas e submetidas à avaliação dos parâmetros reprodutivos. A associação de organofosforados demonstrou elevada eficácia acaricida e também apresentou efeitos deletérios sob os parâmetros reprodutivos de Rhipicephalus (B.) microplus, diminuindo (P≤0,05) o peso das teleóginas (dos dias 1 ao 7), o peso da massa de ovos (dos dias 5 ao 10) e a eclodibilidade das larvas (dos dias 5 ao 19). Talvez uma formulação pode apresentar efeitos deletérios sobre os parâmetros reprodutivos de fêmeas de R. (B.) microplus, quando existe um elevado grau de sensibilidade dessa cepa de carrapato a um determinado composto. De qualquer maneira, futuros estudos devem ser realizados.

Efficacy of extracts from plants of the Brazilian Pantanal against Rhipicephalus (Boophilus) microplus

This research evaluated the in vitro acaricidal activity of extracts from 21 plant species from the Pantanal of Mato Grosso do Sul. During stage I, a larval immersion test was performed using three extract concentrations (5%, 20%, and 40%). During stage II, we used only plants that showed over 95% efficiency at the 40% concentration in stage I in an amount sufficient for the adult immersion test. Aeschynomene denticulata, Angelonia hirta, Aspilia latissima, Caperonia castaneifolia, Centratherum punctatum, Crotalaria micans, Diodia kuntzei, Echinodorus paniculatus, Hyptis mutabilis, Lantana canescens, Melanthera latifolia, Ocotea diospyrifolia, Richardia grandiflora, Sebastiana hispida, Tocoyena formosa, Zanthoxylum rigidum, and Sesbania virgata (fruit extract) showed acaricidal activity against the larval stage of Rhipicephalus (Boophilus) microplus higher than 95% at a 40% (w/v) concentration, while Hippocratea volubilis and Randia armata showed moderate efficacy and Croton glandulosus and Senna obtusifolia had no effect. The M. latifolia, A. hirta, R. grandiflora, and A. latissima raw extracts were evaluated for their activity against adults, and only A. hirta showed an efficacy close to 90%. Eighteen extracts had an efficacy of up to 95% against larvae at a 40% concentration, seven extracts were effective at 20%, and only one (Sebastiana hispida) was effective at a 5% concentration.

Este trabalho avaliou a atividade acaricida in vitro de extratos de 21 espécies de plantas do Pantanal de Mato Grosso do Sul. Na etapa I, foi realizado um teste de imersão larval utilizando três concentrações de extrato (5%, 20% e 40%). Na etapa II, utilizou-se apenas as plantas que apresentaram eficácia superior a 95%, na concentração de 40% na etapa I e que apresentasse quantidade suficiente para o teste de imersão de adulto. Aeschynomene denticulata, Angelonia hirta, Aspilia latissima, Caperonia castaneifolia, Centratherum punctatum, Crotalaria micans, Diodia kuntzei, Echinodorus paniculatus, Hyptis mutabilis, Lantana canescens, Melanthera latifolia, Ocotea diospyrifolia, Richardia grandiflora, Sebastiana hispida, Tocoyena formosa, Zanthoxylum rigidum e Sesbania virgata (extrato do fruto) apresentaram atividade acaricida sobre larvas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus superior a 95% na concentração de 40% (w/v), enquanto Hippocratea volubilis e Randia armata apresentaram eficácia moderada e Croton glandulosus e Senna obtusifolia não apresentaram efeito acaricida. Os extratos brutos de M. latifolia, A. hirta, R. grandiflora e A. latissima foram avaliados sobre adultos e A. hirta apresentou eficácia próxima de 90%. Dezoito extratos apresentaram eficácia de até 95%, contra larvas, na concentração de 40%, sete extratos foram eficazes a 20% e apenas um (Sebastiana hispida) foi eficaz na concentração de 5%.

Eficácia In Vitro De Extratos De Chenopodium Ambrosioides Sobre Teleóginas De Rhipicephalus (Boophilus) Microplus / In vitro efficacy of Chenopodium ambrosioides extracts on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females

Chenopodium ambrosioides L. (Amaranthaceae) (erva-de-santa-maria) é uma planta fortemente aromática usada popularmente por suas propriedades antiparasitárias.Avaliou-se com este estudo a eficácia in vitro de extratos hidroetanólicos de C. ambrosioides sobre a postura e a eclodibilidade larval de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) (Acari: Ixodidae), usando o teste de imersão de fêmeas ingurgitadas adultas.Os tratamentos foram constituídos por extratos feitos com 5%, 10% e 25% de C. ambrosioides (massa/volume), água destilada e veículo (constituído de propilenoglicol a 5%, etanol a 25% e água destilada). Dez teleóginas foram distribuídas de forma homogênea para cada grupo e imersas por 5 minutos em cada um dos extratos testados. Os extratos feitos com 5%, 10% e 25% de C. ambrosioides apresentaram eficácias médias de 13,27%, 22,56% e 31,87%, respectivamente. Estes resultados indicam que, nas concentrações usadas, os extratos de C. ambrosioides não apresentam potencial para o controle das cepas pesquisadas de R. (B.) microplus.

In vitro efficacy of Chenopodium ambrosioides extracts on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females. Chenopodium ambrosioides L. (Amaranthaceae) (wormseed) is a strongly aromatic plant employed popularly for its antiparasitic properties. This study evaluated the in vitro efficacy on laying and hatchability of eggs of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) (Acari: Ixodidae) of hydroethanolic extracts from C. ambrosioides, using the adult immersion test. The treatments consisted of hydroethanolic extracts made with 5%, 10% and 25% of C. ambrosioides (weight/volume), distilled water and vehicle solution (consisting of propylene glycol at 5%, ethanol at 25% and distilled water). Ten ticks were distributed evenly for each group and immersed for 5 minutes in each of the tested extracts. The extracts containing 5%, 10% and 25% of C. ambrosioides showed average efficacies 13.27%, 22.56% and 31.87% respectively. These results indicate that extracts of C. ambrosioides, at the concentrations used, do not present potential for the control of the R. (B.) microplus strains researched.

Eficácia In Vitro De Extratos De Chenopodium Ambrosioides Sobre Teleóginas De Rhipicephalus (Boophilus) Microplus / In vitro efficacy of Chenopodium ambrosioides extracts on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females

Chenopodium ambrosioides L. (Amaranthaceae) (erva-de-santa-maria) é uma planta fortemente aromática usada popularmente por suas propriedades antiparasitárias.Avaliou-se com este estudo a eficácia in vitro de extratos hidroetanólicos de C. ambrosioides sobre a postura e a eclodibilidade larval de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) (Acari: Ixodidae), usando o teste de imersão de fêmeas ingurgitadas adultas.Os tratamentos foram constituídos por extratos feitos com 5%, 10% e 25% de C. ambrosioides (massa/volume), água destilada e veículo (constituído de propilenoglicol a 5%, etanol a 25% e água destilada). Dez teleóginas foram distribuídas de forma homogênea para cada grupo e imersas por 5 minutos em cada um dos extratos testados. Os extratos feitos com 5%, 10% e 25% de C. ambrosioides apresentaram eficácias médias de 13,27%, 22,56% e 31,87%, respectivamente. Estes resultados indicam que, nas concentrações usadas, os extratos de C. ambrosioides não apresentam potencial para o controle das cepas pesquisadas de R. (B.) microplus. (AU)

In vitro efficacy of Chenopodium ambrosioides extracts on Rhipicephalus (Boophilus) microplus engorged females. Chenopodium ambrosioides L. (Amaranthaceae) (wormseed) is a strongly aromatic plant employed popularly for its antiparasitic properties. This study evaluated the in vitro efficacy on laying and hatchability of eggs of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) (Acari: Ixodidae) of hydroethanolic extracts from C. ambrosioides, using the adult immersion test. The treatments consisted of hydroethanolic extracts made with 5%, 10% and 25% of C. ambrosioides (weight/volume), distilled water and vehicle solution (consisting of propylene glycol at 5%, ethanol at 25% and distilled water). Ten ticks were distributed evenly for each group and immersed for 5 minutes in each of the tested extracts. The extracts containing 5%, 10% and 25% of C. ambrosioides showed average efficacies 13.27%, 22.56% and 31.87% respectively. These results indicate that extracts of C. ambrosioides, at the concentrations used, do not present potential for the control of the R. (B.) microplus strains researched. (AU)

PERFIL FARMACOCINÉTICO E ATIVIDADE ECTOPARASITICIDA DE UMA NOVA MOLÉCULA (ARILPIRAZOL) EM BOVINOS

Com o aumento da resistência dos ectoparasitos frente aos diversos princípios ativos existentes, os pecuaristas e a indústria têm disposto cada vez menos de alternativas eficazes para o controle destes agentes, que são responsáveis por inúmeras perdas à bovinocultura. Tal fato desencadeia uma incessante demanda por novos métodos capazes de controlar tais ectoparasitos, inclusive a pesquisa por novos ativos quimioterápicos. O objetivo deste estudo foi avaliar as concentrações plasmáticas e os efeitos terapêutico e residual de uma formulação inédita à base de Arilpirazol (nome comum Sisapronil), contra Rhipicephalus (Boophilus) microplus (dois estudos), Haematobia irritans, larvas de Dermatobia hominis e de Cochliomyia hominivorax, administrada via subcutânea (2,0 mg/kg). Nenhum sinal clínico de intoxicação sistêmica ou de reação no local de aplicação foi observado antes e após a administração de Arilpirazol nos animais. De acordo com os resultados farmacocinéticos, Arilpirazol apresentou pico médio plasmático de 74,8 ng/mL (Cmax), detectado com 15,8 dias (Tmax) e tempo de meia vida (T1/2) de 23,0 dias. Foram realizados dois estudos contra R. (B.) microplus, com bovinos naturalmente e artificialmente infestados. No primeiro estudo, 20 animais foram randomizados em dois grupos (T01: Controle; T02: Arilpirazol), com base na média de três contagens consecutivas (dias -3, -2 e -1) de partenóginas, entre 4,5 e 8,0 mm de comprimento. Os índices de eficácia foram calculados nos dias 3, 7 e semanalmente, até o 91º DPT. O composto alcançou eficácia anti-ixodídica superior a 90,00% do 7o ao 63o DPT. No segundo, foram utilizados 16 bovinos experimentalmente infestados, randomizados em dois grupos, com base na média de três contagens consecutivas (dias -3, -2 e -1) de teleóginas desprendidas de cada animal. Quantificações pós-tratamento foram realizadas diariamente até o 121º DPT. Os efeitos do Arilpirazol sobre os parâmetros reprodutivos das teleóginas pré-selecionadas, também foram avaliados. Foram observados níveis de eficácia superiores a 90,00% a partir do 8º DPT, alcançando eficácia média de 90,27% (7º ao 115º DPT). A partir da 16ª semana pós-tratamento, tais índices decresceram (<83,00%), permanecendo, entretanto, superiores a 70% até o 120º DPT. Arilpirazol diminuiu significativamente (P0,05) os pesos das teleóginas (8º-14º/92º-119º DPT), os pesos da massa de ovos (0º-7º DPT) e os percentuais de eclodibilidade (0º-14º DPT), em comparação às fêmeas desprendidas do grupo controle. No estudo contra H. irritans (mosca-dos-chifres), 30 bovinos naturalmente infestados, foram randomizados em dois grupos, com base na média de duas contagens consecutivas de moscas (dias -2 e -1). Os percentuais de eficácia foram calculados por meio de quantificações destas moscas, nos dias 3, 7, 14, 21, 28 e 35 pós-tratamento. Arilpirazol alcançou eficácia mosquicida máxima de 89,73% no 3o DPT. Contra larvas de D. hominis (berne), foram utilizados dois grupos de 10 animais cada, naturalmente infestados. O Arilpirazol alcançou eficácia anti-cuterebrídica de 100,00% entre o 14º e 28º DPT, que manteve-se superior a 90,00% até o 63o dia pós-tratamento. No estudo contra larvas de C. hominivorax (miíases), 30 bovinos orquiectomizados foram distribuídos em dois grupos de 15 animais cada. A presença de miíases foi avaliada do 1º ao 15º dia pós-castração. A referida formulação alcançou 100,00% de eficácia a partir do 6º DPT. Bovinos medicados com Arilpirazol apresentaram quantificações de ectoparasitos estatisticamente inferiores (P0,05) às do grupo controle em todos os cinco estudos conduzidos. Em síntese, Arilpirazol, na dose e via empregadas, constitui uma inédita e promissora alternativa quimioterápica no tratamento e controle das ectoparasitoses bovinas.

With the increase in resistance of ectoparasites against various existing active principles, veterinary industry and cattle owners have less and less effective alternatives to control these agents, which are responsible for innumerable losses to cattle breeding. This fact triggers an incessant demand for new methods capable of controlling such parasites, including the research by new chemotherapeutic actives. Therefore, the objective of this study was to evaluate plasma concentrations and therapeutic and residual effects of an unpublished Arylpyrazole (common name Sisapronil) formulation, against Rhipicephalus (Boophilus) microplus (two studies), Haematobia irritans, as well as Dermatobia hominis and Cochliomyia hominivorax larvae. The compound was administered subcutaneously (2.0 mg/kg), and no clinical signs of systemic intoxication or reaction at application site were observed before and after administration of Arylpyrazole in animals. According to the pharmacokinetic results, Arylpyrazole presented a mean plasma peak of 74.8 ng/mL (Cmax), detected at 15.8 days (Tmax), and half-life (T1/2) of 23.0 days. Two studies were carried out against R. (B.) microplus, with naturally and artificially infested bovines. In the first study, 20 animals were randomized into two groups (T01: control; T02: Arylpyrazole treatment), based on the mean of three consecutive counts (days -3, -2 and -1) of partially engorged female ticks, measuring between 4.5 and 8, 0 mm in length. Efficacy rates were calculated on 3 and 7 DAT, and then weekly, until the 91st day. The compound achieved anti-tick efficacy superior to 905.00% from the 7th to the 563th DAT. In the second, 16 experimentally infested bovines were randomized into two groups, based on the mean of three consecutive counts (days -3, -2 and -1) of fully engorged female ticks naturally detached from each animal. Post-treatment quantifications were performed daily, up to the 121st DAT. The effects of Arylpyrazole on the reproductive parameters of preselected recovered female ticks were also evaluated. Efficacy levels above 90.00% were observed from the 8th DAT on, reaching an average efficiency of 90.27% (7th to 115th DAT). From the 16th week after treatment, these indexes decreased (< 83%), remaining, however, higher than 70% until the 120th DAT. Arylpyrazole significantly reduced (P 0.05) the weights of fully engorged ticks (8th - 14th / 92nd - 119th DAT), egg mass weights (0 - 7th DAT) and hatchability percentages (0 - 14th DAT), when compared to female ticks detached from animals belonging to the control group. In the study against H. irritans (horn flies), 30 naturally infested bovines were randomized into two groups, based on the mean of two consecutive flies counts (days -2 and -1). Efficacy percentages were calculated by quantification of these flies on days 3, 7, 14, 21, 28 and 35 post-treatment. Arylpyrazole reached maximum efficiency of 89.73% against flies on the 3rd DAT. Against D. hominis larvae (grubs), two groups, with 10 naturally infested animals each, were used. Arylpyrazole achieved anti-grub efficacy of 100.00% between the 14th and 28th DAT, which remained higher than 90.00% until the 63rd day after treatment. In the study against C. hominivorax larvae (myiasis), 30 orchiectomized bovines were distributed in two groups of 15 animals each. The presence of myiasis was evaluated from the 1st to the 15th day after castration. Said formulation reached 100.00% efficacy from the 6th DAT onwards. Bovines treated with Arylpyrazole presented statistically lower ectoparasites (P 0.05) burdens than those of control groups, in all five studies conducted. In summary, Arylpyrazole, at the dosage and route employed, constitutes an unpublished and promising chemotherapeutic alternative in the treatment and control of bovine ectoparasitosis.

Metabolismo de NADPH para o controle do equilíbrio redox após desafio oxidativo em células embrionárias do carrapato bovino Rhipicephalus microplus (BME26)

O potencial redox desempenha um papel importante na sobrevivência celular, sendo o NADPHP principal redutor intracelular, produzido principalmente na via das pentoses fosfato. Desta forma, existem ainda mecanismo adicionais de proteção para evitar danos celulares mantendo concentrações de superóxido e peróxido de hidrogênio sob controle. As células BME26 quando tratadas com H²O² mM não apresentam queda da viabilidade ou alterações morfológicas significativas. Essa aparente tolerância ao H²O² é objeto de estudo desde teste, onde se observa uma tolerância maior do que outras células de linhagens de mamíferos, sugerindo um mecanismo acessório de eliminação de H²O². A marcação de ROS, pela sonda DHE, diminui ao longo do tempo após o tratamento com H²O². Foi visto ainda que diferentes tratamentos com H²O² não alteraram a atividade de catalase, mas são suficiente para aumentar sua transcrição genética. Curiosamente, o consumo de oxigênio e a captação de glicose das células BME26 aumentaram no momento em que o superóxido mitocondrial diminui. Neste trabalho, observou-se também que as células BME26 são capazes de ativar genes do metabolismo em resposta ao tratamento com H²O² e com aumento nos níveis de NADPH. Este processo induziu alterações transcripcionais e atividade de enzimas redutoras de NADP+, como G6PDH,IDH-NADP+. Foi evidenciado que existe ainda um controle metabólico acoplado a este processo sustentando energeticamente esta situação. Com estes resultados concluímos que o aumento da atividade de HK (sem aumentar a PK) em 2 h, após o desafio, seguida do aumento de captação de glicose sugere que a glicose 6-fosfato pode estar sendo direcionada para a via das pentoses fosfatos e menos direcionada no sentido de via glicolítica. Por outro lado, o aumento da transcrição do gene de G6PDH pode estar relacionado a um aumento potencial redutor associado ao desafio pelo H²O². Neste sentido, o silenciamento de gene G6PDH não alterou a tolerância a BME26 H²O², mas aumentou a transcrição de IDH-NADP+ . Esses dados indicam que há um mecanismo adaptativo a exposição ao H²O² para manter a sobrevivência celular e o equilíbrio redox nas células BME26. Este estudo tem ajudado a esclarecer como a resistência ao H²O²pode contribuir para a fisiologia e/ou o metabolismo das células BME26 e futuramente pode ser estendido para compreensão de alguns mecanismos no próprio carrapato.

The redox potential plays an important role in cell survival, with the major intracellular reductant NADPHP, mainly produced in the pentoses phosphate pathway. In this way, there are still additional protection mechanisms to prevent cell damage by keeping concentrations of superoxide and hydrogen peroxide under control. BME26 cells when treated with H 2 O 2 mM do not present a significant decrease in viability or morphological changes. This apparent tolerance to H²O² is the subject of a test study, which shows a higher tolerance than other cells of mammalian strains, suggesting an accessory mechanism to eliminate H²O². The ROS marking by the DHE probe decreases over time after treatment with H 2 O 2. It was also seen that different treatments with H 2 O 2 did not alter the activity of catalase, but are sufficient to increase its genetic transcription. Interestingly, the oxygen uptake and uptake of glucose from BME26 cells increased at a time when mitochondrial superoxide decreased. In this work, it was also observed that BME26 cells are capable of activating metabolic genes in response to treatment with H 2 O 2 and with increased levels of NADPH. This process induced transcriptional alterations and activity of NADP + reducing enzymes, such as G6PDH, IDH-NADP +. It was evidenced that there is still a metabolic control coupled to this process, sustaining this situation energetically. With these results we conclude that the increase in HK activity (without increasing PK) in 2 h after challenge, followed by increased glucose uptake suggests that glucose 6-phosphate may be directed towards the pentoses phosphate pathway and less directed towards the glycolytic pathway. On the other hand, the increased transcription of the G6PDH gene may be related to a potential reduction increase associated with the challenge by H²O². In this sense, G6PDH gene silencing did not alter the tolerance to BME26 H²O², but increased HDR-NADP + transcription. These data indicate that there is an adaptive mechanism to exposure to H 2 O 2 to maintain cell survival and redox balance in BME cells26. This study has helped to clarify how resistance to H 2 O 2 may contribute to the physiology and / or metabolism of BME cells26 and in the future may be extended to understanding some mechanisms in the tick itself.

Acaricide resistance mechanisms in Rhipicephalus (Boophilus) microplus / Mecanismos de resistência aos acaricidas em Rhipicephalus (Boophilus) microplus

Acaricide resistance has become widespread in countries where cattle ticks, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, are a problem. Resistance arises through genetic changes in a cattle tick population that causes modifications to the target site, increased metabolism or sequestration of the acaricide, or reduced ability of the acaricide to penetrate through the outer protective layers of the ticks body. We review the molecular and biochemical mechanisms of acaricide resistance that have been shown to be functional in R. (B.) microplus. From a mechanistic point of view, resistance to pyrethroids has been characterized to a greater degree than any other acaricide class. Although a great deal of research has gone into discovery of the mechanisms that cause organophosphate resistance, very little is defined at the molecular level and organophosphate resistance seems to be maintained through a complex and multifactorial process. The resistance mechanisms for other acaricides are less well understood. The target sites of fipronil and the macrocyclic lactones are known and resistance mechanism studies are in the early stages. The target site of amitraz has not been definitively identified and this is hampering mechanistic studies on this acaricide.(AU)

A resistência aos acaricidas tornou-se amplamente difundida nos países onde os carrapatos bovinos, Rhipicephalus .Boophilus. microplus, são um problema. A resistência surge por meio de alterações genéticas em umapopulação de carrapatos que causam modificações no local de ação, aumento do metabolismo ou sequestro do acaricida, ou ainda redução na capacidade do acaricida em penetrar através das camadas protetoras do corpo do carrapato. Neste artigo, foram revisados os mecanismos moleculares e bioquímicos da resistência aos acaricidas que ocorrem em R. (B.) microplus. A partir de um ponto de vista dos mecanismos envolvidos, a resistência aos piretróides tem sido caracterizada em maior grau do que em qualquer outra classe de acaricida. Embora uma grande quantidade de pesquisas têm sido direcionada para a descoberta de mecanismos que causam resistência aos organofosforados, muito pouco é conhecido ao nível molecular, e essa resistência parece ser mantida por intermédio de um processo multifatorial e complexo. Os mecanismos de resistência para os demais acaricidas são bem menos compreendidos. Os alvos de ação do fipronil e das lactonas macrocíclicas são conhecidos, e os estudos dos mecanismos de ação envolvidos estão ainda em estágios iniciais. O alvo de ação do amitraz ainda não foi definitivamente identificado, e isso é limitante aos estudos dos mecanismos envolvidos na resistência a esse acaricida.(AU)

ASPECTOS ECOLÓGICOS, BIOLÓGICOS E DE RESISTÊNCIA DE Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) NA REGIÃO DE JABOTICABAL, SÃO PAULO, BRASIL

Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) é o mais importante ectoparasito da pecuária brasileira, cujo controle exige conhecimentos comportamentais de seu ciclo biológico para melhor sucesso na atuação sobre e fora do hospedeiro, combatendo-o em épocas do ano desfavoráveis ao mesmo. A maioria das informações sobre sua biologia e ecologia foi originada em outros países ou então há muito tempo. Baseado nas mudanças climáticas recentes e ausência de informações sobre ecologia e biologia deste ixodídeo na região, este estudo, conduzido em bioma de Cerrado e clima tropical com estação seca (Aw), obteve tais dados pela observação, ao longo de dois anos, dos fatores envolvidos nas suas fases de vida parasitária e não parasitária, além de avaliar o comportamento desta cepa quanto à evolução do perfil de resistência/susceptibilidade aos acaricidas. Observando a fase de vida parasitária deste carrapato, foi possível perceber sua adaptação às mudanças climáticas, com cinco gerações anuais registradas em dois anos consecutivos pela primeira vez na literatura. Constatou-se que não houve correlações significativas entre seu ciclo parasitando bovinos e os níveis de chuva, temperaturas ambiental e ao nível do solo e umidade relativa do ar. Já a fase de vida livre foi influenciada pelos fatores climáticos, com correlação positiva entre pluviosidade/pré-postura, correlações negativas entre temperatura/pré-postura, incubação e pré-eclosão, entre umidade relativa do ar/incubação e pré-eclosão. Os dados obtidos indicaram que o período de seca (outono e inverno) é mais favorável à manutenção do carrapato bovino no ambiente, além de albergar as maiores cargas parasitárias nos hospedeiros. A dinâmica populacional calculada reforça a adaptação deste ixodídeo às mudanças climáticas, culminando na existência de 5,212 gerações anuais mesmo em condições climáticas e ambientais distintas, oscilando entre 2,6 e 8,3 gerações/ano. Considerando estes dados, foi proposta uma metodologia de controle estratégico específica, tratando os animais entre a segunda metade da primavera e a primeira metade do verão (outubro a fevereiro). Estes tratamentos na estação chuvosa levariam a populações menores na estação seca, reduzindo também o spring rise. A análise da eficácia de diferentes compostos químicos por meio do Teste de Pacote de Larvas gerou resultados contraditórios, com alta eficácia registrada para piretróides e organofosforados, e oscilações na eficácia do amitraz. Estes valores levantaram questionamentos sobre a aplicabilidade desta técnica no monitoramento da resistência. Futuros estudos devem ser propostos, analisando a real eficácia dos Testes de Pacote de Larvas, confrontando diferentes metodologias in vivo e in vitro; comparando a dinâmica populacional deste ixodídeo em diferentes pastagens, formas de manejo, taxas de lotação, altitudes e biomas; atestando a eficácia da metodologia de controle estratégico proposta e, principalmente, confirmando a possibilidade de observarem-se mais de oito gerações de R. microplus por ano em condições climáticas ideais.

Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini, 1888) is the main ectoparasite in Brazilian cattle industry, and its control demands behavioral knowledge of its biologic cycle, for increased success in actions over and out of the hosts, with treatments in periods of the year less favorable to this tick. Most of the information about its biology and ecology was originated in other countries or a long time ago. Based in recent climate changes and absence of ecologic and biologic data on this region, the present study, conducted in the Brazilian Cerrado biome and tropical savanna climate (Aw), obtained such data through the observation, during two consecutive years, of factors involved on parasitic and free living phases of its cycle, also evaluating the behavior of this strain regarding evolution of its resistance/susceptibility profile against acaricides. Observing the parasitic phase of the Southern Cattle Tick, it was possible to detect adaptations of this ixodid to climate changes, with five annual generations in two consecutive years being registered for the first time in literature, without significant correlations between its period parasitizing bovines and rain levels, environmental and soil level temperatures and relative air humidity. The free living period of its cycle was affected by climatic variables, with positive correlation between rainfall and the period before oviposition, and negative correlations between temperatures and the period before oviposition, egg incubation and period before hatching, and between relative air humidity and egg incubation and the period before larval hatching. Obtained data indicate that the dry season (autumn and winter) is more favorable for maintenance of the Southern Cattle Tick on the environment, as well as presenting highest parasitic burdens in hosts. Population dynamics calculated reinforces the adaptations of such ixodid to climate changes, leading to the existence of 5.212 yearly generations even in distinct climatic and environmental conditions, varying between 2.6 and 8.3 generations per year. Considering such data, a specific strategic control methodology was proposed, treating animals between the second half of spring and the first half of summer (October to February). Such treatments in rainy seasons would lead to smaller populations on the dry season, also reducing the spring rise. Analysis of efficacy of different chemical compounds using the Larval Packet Test generated contrasting results, with high efficacy indexes registered for pyrethroids and organophosphates, with variations in amitraz efficiency. Such values lead to a questioning of the applicability of such technique in monitoring resistance. Future studies must be proposed, analyzing the real efficacy of Larval Packet Tests, confronting different in vivo and in vitro methodologies; comparing population dynamics of such ixodid in different pastures, husbandry methods, stocking rates, altitudes and biomes; confirming the efficacy of the proposed strategic control method and, above all, confirming the possibility of observing more than eight R. microplus yearly generations in ideal climatic conditions.