Febre maculosa brasileira no estado de São Paulo

A febre maculosa brasileira (FMB), causada pelabactéria Rickettsia rickettsii, é a zoonose transmitida porcarrapatos mais importante no Brasil. No estado de SãoPaulo, onde a doença apresenta letalidade ao redor de50%, os carrapatos Amblyomma aureolatum e Amblyomma sculptum são os principais vetores. O primeiro, associado a cães domésticos e fragmentos de Mata Atlântica,transmite a doença na Região Metropolitana de São Paulo.Já A. sculptum, é vetor no interior do estado, especialmente nas regiões de Campinas, Piracicaba e Marília, onde oscarrapatos infectados são mantidos principalmente porcapivaras. O período de incubação da FMB em humanosvaria de 2 a 14 dias, sendo febre, mialgia e cefaleia os principais sintomas. Posteriormente, podem aparecer exantema, insuficiências respiratória e renal, lesões neurológicase icterícia. A letalidade da doença depende do retardo doinício da terapia com antibióticos específicos, tais comodoxiciclina e cloranfenicol. O cão também adoece, porémcom taxa de letalidade abaixo de 20%. Não existem vacinas disponíveis para proteção contra a FMB. A prevençãose baseia primariamente no controle e prevenção das infestações por carrapatos nas áreas endêmicas da doença.Práticas de controle reprodutivo de capivaras estão sendoaplicadas para diminuir os riscos de transmissão da FMB nointerior do estado de São Paulo.

Febre maculosa brasileira no estado de São Paulo

A febre maculosa brasileira (FMB), causada pelabactéria Rickettsia rickettsii, é a zoonose transmitida porcarrapatos mais importante no Brasil. No estado de SãoPaulo, onde a doença apresenta letalidade ao redor de50%, os carrapatos Amblyomma aureolatum e Amblyomma sculptum são os principais vetores. O primeiro, associado a cães domésticos e fragmentos de Mata Atlântica,transmite a doença na Região Metropolitana de São Paulo.Já A. sculptum, é vetor no interior do estado, especialmente nas regiões de Campinas, Piracicaba e Marília, onde oscarrapatos infectados são mantidos principalmente porcapivaras. O período de incubação da FMB em humanosvaria de 2 a 14 dias, sendo febre, mialgia e cefaleia os principais sintomas. Posteriormente, podem aparecer exantema, insuficiências respiratória e renal, lesões neurológicase icterícia. A letalidade da doença depende do retardo doinício da terapia com antibióticos específicos, tais comodoxiciclina e cloranfenicol. O cão também adoece, porémcom taxa de letalidade abaixo de 20%. Não existem vacinas disponíveis para proteção contra a FMB. A prevençãose baseia primariamente no controle e prevenção das infestações por carrapatos nas áreas endêmicas da doença.Práticas de controle reprodutivo de capivaras estão sendoaplicadas para diminuir os riscos de transmissão da FMB nointerior do estado de São Paulo. (AU)

In vitro acaricidal activity of different ectoparasiticide classes against Amblyomma sculptum larvae / Atividade acaricida in vitro de diferentes classes de ectoparasiticidas frente a larvas de Amblyomma sculptum

Zoonoses are major causes of morbidity and mortality worldwide. Among them, Brazilian Spotted Fever (BSF) is an important one that occurs in some regions of South America and can be transmitted by the “star tick” Amblyomma sculptum. Application of acaricides against the larval stage is important as strategy of population control. However, there is still a deficiency of studies on chemical control of A. sculptum and the present work aims to evaluate the in vitro acaricidal activity of cypermethrin, flumethrin, deltamethrin, fipronil, coumaphos and chlorpyrifos against A. sculptum larvae. Bioassays were performed using the larval immersion test method. A discriminatory analysis between the antiparasitic classes most used for tick control was carried out, which made it possible to determine the classes with higher potential for controlling A. sculptum larvae. Our results showed that A. sculptum larvae present highest sensitivity to the synthetic pyrethroid group, followed by the phenylpyrazole, organophosphate and macrocyclic lactone groups. These findings may support studies on improvement of tick control as in animals as in the environment.(AU)

As zoonoses são a maior causa de morbidade de mortalidade no mundo. A Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma importante zoonose que ocorre em algumas regiões da América do Sul e pode ser transmitida pelo “carrapato-estrela” Amblyomma sculptum. A aplicação de acaricidas, frente ao estágio larval, é importante como estratégia no controle da população. No entanto, ainda há uma deficiência de estudos para o controle químico de A. sculptum. Devido à necessidade de mais informações sobre o controle de A. sculptum, o presente trabalho tem como objetivo avaliar a atividade acaricida in vitro de cipermetrina, flumetrina, deltametrina, fipronil, coumafós e clorpirifós frente a larvas de A. sculptum. Os bioensaios foram realizados pelo método Teste de Imersão de Larva. Foi realizada uma análise discriminatória entre as classes antiparasitárias mais utilizadas para controle de carrapatos, possibilitando determinar classes com maior potencial para o controle de larvas de A. sculptum. Os resultados deste trabalho mostraram que as larvas de A. sculptum apresentam maior sensibilidade ao grupo dos piretroides sintéticos, seguido pelos grupos fenilpirazóis, organofosforados e lactonas macrocíclicas. Esses achados poderiam apoiar estudos visando ao controle do carrapato tanto em animais quanto no meio ambiente.(AU)~ipt

ATIVIDADE REPELENTE E CARRAPATICIDA DE COMPOSTOS DERIVADOS DO ÓLEO DE COCO CONTRA Amblyomma sculptum

Amblyomma sculptum pode parasitar diversos mamíferos, incluindo humanos, e é o principal vetor da bactéria Rickettsia rickettsii no Brasil, agente etiológico da febre maculosa brasileira. Diversos estudos vêm sendo realizados com produtos de origem vegetal para controle de carrapatos. Além disso, o uso de repelentes é uma importante ferramenta para evitar infestações. O presente estudo teve como objetivo avaliar a repelência de ninfas não alimentadas de A. sculptum frente a substâncias derivadas de óleo de coco (éster metílico de ácido dodecanóico- C12; éster metílico de ácido decanóico- C10; óleo de catnip- Nepeta cataria; e ácido graxo livre de coco em formulação de óleo de lavanda) por meio de bioensaios de placa de Petri modificado e, avaliar a atividade carrapaticida dessas substâncias por meio do teste de pacote de larvas. Para o teste de placa de Petri, um semicírculo de papel filtro contendo a substância a ser testada na concentração de 10% diluída em etanol e outro semicírculo contendo o solvente (etanol), foram posicionadas dentro da placa; seis ninfas não alimentadas foram colocadas no centro de cada placa e sua localização foi avaliada aos 1, 3, 5, 10, 15 e 30 minutos e às 24, 48, 72, 96 e 168 horas após o início do teste. Para o teste de pacote de larvas as substâncias foram utilizadas em cinco concentrações (2,5; 5; 10; 15 e 20 mg/mL) sobre larvas não alimentadas de A. sculptum para avaliação de mortalidade após 24 horas do tratamento. Como resultado, todas as substâncias apresentaram repelência, sendo que o ácido graxo livre de óleo de coco conferiu repelência por 7 dias, enquanto o óleo de catnip (Nepeta cataria) e o éster metílico de C10 apresentaram repelência por 4 e 3 dias, respectivamente. A concentração do éster metílico de C12, efetiva contra mais de 93% das larvas testadas, foi de 15 mg/mL e a concentração, dessa mesma substância, de 20mg/mL conferiu 100% de mortalidade. Assim, nossos resultados indicam que compostos derivados do óleo de coco possuem efeito repelente e carrapaticida sobre fases imaturas de A. sculptum e podem ser formulados para proteger humanos e outros animais de infestação, bem como contra patógenos transmitidos por essa espécie de carrapato.

Amblyomma sculptum can parasitize several mammals, including humans, and is the main vector of the Rickettsia rickettsii bacterium in Brazil, the etiological agent of Brazilian spotted fever. Several studies have been carried out with products of plant origin to control ticks. In addition, the use of repellents is an important tool to prevent infestations. The present study aimed to evaluate the repellency of non-fed nymphs of A. sculptum against substances derived from coconut oil (methyl ester of dodecanoic acid-C12; methyl ester of decanoic acid-C10; catnip oil- Nepeta cataria; and fatty acid free of coconut in lavender oil formulation) using modified Petri dish bioassays and, to evaluate the tick activity of these substances by means of the larval pack test. For the Petri dish test, a semicircle of filter paper containing the substance to be tested at a concentration of 10% diluted in ethanol and another semicircle containing the solvent (ethanol), were placed inside the dish; six non-fed nymphs were placed in the center of each plate and their location was assessed at 1, 3, 5, 10, 15 and 30 minutes and at 24, 48, 72, 96 and 168 hours after the start of the test. For the larval packet test the substances were used in five concentrations (2.5, 5, 10, 15 and 20 mg / mL) on non-fed larvae of A. sculptum to assess mortality after 24 hours of treatment. As a result, all substances showed repellency, with fatty acid free of coconut oil conferring repellency for 7 days, while catnip oil (Nepeta cataria) and C10 methyl ester showed repellency for 4 and 3 days, respectively. The concentration of C12 methyl ester, effective against more than 93% of the tested larvae, was 15 mg / mL and the concentration, of that same substance, of 20mg / mL conferred 100% mortality. Thus, our results indicate that compounds derived from coconut oil have a repellent and tick effect on immature stages of A. sculptum and can be formulated to protect humans and other animals from infestation, as well as against pathogens transmitted by this species of tick.

Estabelecimento e caracterização de linhagens celulares embrionárias de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (RBME-6) e Amblyomma sculptum (ASE-14) (Acari: Ixodida) do Brasil

Os carrapatos são artrópodes de grande importância médica e veterinária, sendo responsáveis pela transmissão de vírus, bactérias e protozoários aos seus hospedeiros. Alguns dos patógenos transmitidos por carrapatos são difíceis de crescer in vitro e não crescem em meios artificiais ou outros substratos. As linhagens de células de carrapatos representam uma ferramenta útil para estudar muitos aspectos da pesquisa de carrapatos e patógenos transmitidos por eles. Aqui, estabelecemos e caracterizamos duas linhagens celulares RBME-6 e ASE-14 derivadas de embriões de Rhipicephalus microplus e Amblyomma sculptum, respectivamente, ambos coletados no Brasil. Culturas primárias de células foram preparadas a partir de ovos embrionados das duas espécies de carrapatos, em meio L-15B, e mantidas à 30 °C. Quando as culturas atingiram uma densidade celular adequada, foram subcultivadas e criopreservadas em várias passagens. As análises citológicas foram feitas usando microscopia de contraste de fase, com células que foram submetidas à citocentrifugação e coradas com Giemsa, enquanto as técnicas de coloração com ácido periódico de Schiff e azul de bromofenol foram usadas para detectar polissacarídeos e proteinas, respectivamente. Não foi detectado o DNA de Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp, Bartonella spp., Coxiella spp., Ehrlichia canis, Rickettsia spp. ou Mycoplasma spp. nas células através de ensaios de PCR. Além disso, realizamos a caracterização cromossômica das linhagens celulares de ambas espécies de carrapatos e confirmamos a origem dessas linhagens por meio de PCR convencional e sequenciamento de um fragmento do gene mitocondrial 16S rRNA. Em conclusão, duas novas linhagens celulares derivadas dos embriões de carrapatos foram geradas e caracterizadas neste estudo. Essas linhagens celulares poderão ser usadas em estudos futuros sobre diferentes aspectos, como as relações entre carrapatos e patógenos transmitidos por eles, expressão de proteínas em células infectadas e não infectadas e obtenção de antígenos. Além disso, é importante ter um painel maior de linhagens de células de carrapatos, pois elas podem servir como ferramentas eficientes para o avanço de pesquisas em várias áreas da virologia, bacteriologia, biologia e controle desses carrapatos.

Ticks are arthropods of great medical and veterinary importance, being responsible for the transmission of viruses, bacteria, and protozoa to their hosts. Some of the tick-borne pathogens are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media or other substrates. Tick cell lines represent a useful tool for studying many aspects of tick and tick-borne pathogen research. Here, we established and characterized two cell lines RBME-6 and ASE-14 derived from embryos of Rhipicephalus microplus and Amblyomma sculptum, respectively, both from Brazil. Primary tick cell cultures were prepared in L-15B at 30°C.When they reached an adequate density, the cells were subcultured and cryopreserved in several passages. Cytological analysis were performed using phase contrast microscopy and cytocentrifuge smears stained with Giemsa, while periodic acid-Schiff and bromophenol blue staining techniques were used to detect total polysaccharides and the total protein, respectively. Anaplasma spp., Anaplasma marginale, Babesia/Theileria spp., Coxiella spp., Ehrichia canis, Mycoplasma spp. and Rickettsia sp. were not detected in the cells through PCR assays. In addition, we performed chromosomal characterization of the tick cell line and confirmed the origin of the cell line through conventional PCR and sequencing of the 16S rRNA gene mitochondrial fragment. In conclusion, two new cell lines derived from embryos of ticks were generated and characterized in this study. These cell lines can be used in future studies on different aspects, such as the relationship between ticks and pathogens transmitted by them, expression of proteins in infected and non-infected cells and obtaining antigens. In addition, it is important to have a larger panel of tick cell lines, as they can serve as efficient tools for advancing research in various areas of virology, bacteriology, biology and control of these ticks.

Avaliação da repelência de composto "non-host", identificado em asininos, contra o parasitismo por Amblyomma sculptum em humanos

O carrapato Amblyomma sculptum tem como hospedeiros preferenciais capivaras e equinos, porém não possui especificidade nos estágios imaturos, podendo ser encontrado em bovinos, cães, humanos, dentre outros animais. Essa espécie se destaca por estar associada à transmissão da bactéria Rickettsia rickettsii, causadora da Febre Maculosa Brasileira para humanos. No contexto da saúde pública os repelentes desempenham um importante papel na proteção pessoal contra a transmissão de doenças transmitidas por vetores. Sabe-se que repelentes naturais são produzidos por animais que apresentam menor parasitismo (non-host) em detrimento a animais mais susceptíveis, que apresentam maior parasitismo. Esta pesquisa teve por objetivo avaliar a repelência de ninfas não ingurgitadas de A. sculptumfrente ao (E)-2-octenal, um composto repelente identificado em asininos (non-host). Foram realizados bioensaios do papel de filtro, da ponta do dedo sobre ninfas de A. sculptum e a avaliação da repelência a campo sobre adultos. O bioensaio do papel de filtro foi realizado com cinco concentrações de (E)-2-octenal (0,031; 0,062; 0,125; 0,25 e 0,5 M), sendo que a concentração que apesentou melhor repelência foi a 0,5 M com 77,5% no primeiro momento de observação e 50% após cinco horas(p<0,05). No bioensaio da ponta do dedo a maior repelência foi observada no tempo de 10 para as formulações F3 (microemulsão com propelenoglicol, tween 80 e óleo de canola e (E)-2-octenal) e F4 (microemulsão com propelenoglicol, tween 80 e (E)-2-octenal) com 80 e 100% de repelência, respectivamente. Contudo, os controles destas duas formulações também apresentaram efeito repelente. Quando as formulações foram comparadas com seus respectivos controles não foi observada diferença significativa. No teste de campo, com uso de formulação de liberação lenta, o (E)-2-octenal conferiu repelência significativa por até seis dias contra adultos de A. sculptum. Compostos repelentes naturais isolados de hospedeiros podem viabilizar uma forma de controledestes artrópodes e o desenvolvimento de métodos de controle alternativos que integram os pilares da saúde ambiental, animal e humana. O uso de formulação de liberação lenta com(E)-2-octenal poderá propiciar a prevenção de fixação de carrapatos em humanos e consequenteredução de casos de febre maculosa brasileira.

Amblyomma sculptum tick has capybaras and horses as its preferred hosts. However, immature stages have no specificity and can be found in cattle, dogs, humans, among other animals. This species stands out for being associated with the transmission of the Rickettsia rickettsii bacterium, which causes Brazilian Spotted Fever in humans. In the context of public health, repellents play an important role in personal protection against the transmission of vector-borne diseases. It is known that natural repellents are produced by hosts which are less parasitized by ticks (non-host) when compared with more susceptible animals, which have greater loads of ticks. This research aimed to evaluate the repellency of unfed nymphs and adults of A. sculptum to (E)-2-octenal, a non-host compound identified on asinine, a known tick resistant host. Filter paper and fingertip bioassays were evaluated on A. sculptum nymphs, while a field test was carried out to evaluate repellency of adults.The filter paper bioassay was performed with five concentrations of (E)-2-octenal (0.031; 0.062; 0.125; 0.25 and 0.5M). The concentration that showed the best repellency was 0.5M, resulting in 77.5% at 10 min observation and 50% after five hours (p <0.05). The finger tip bioassay showed the greatest repellency in the 10 min for formulations F3 (microemulsion with propyleneglycol, tween 80, canola oil and (E) -2-octenal) and F4 (microemulsion with propylenoglycol, tween 80 and (E) -2-octenal) with repellency of 80% and 100%, respectively. Its important note that controls of these two formulations (without (E) -2-octenal) also showed repellent effect. No significant difference was observed in fingertip bioassay when comparing different formulations and their controls. In the field test a slow-release formulation of (E)-2-octenal repelled adults of A. sculptum for up to six days . Natural repellent compounds isolated from resistant hosts can enable the control of these arthropods in a way which attends. One Health approach integrating environmental, animal and human health. The use of slow-release formulation with (E)-2-octenal may provide prevention of tick attachmentin humans and consequently reduction of Brazilian spotted fevercases.

Effect of the entomopathogenic nematode Steinernema Glaseri (Rhabditida: Steinernematidae) isolate Santa Rosa on the biological parameters of engorged nymphs of Amblyomma Cajennense (Acari: Ixodidae) / Os efeitos do nematoide entomopatogênico steinernema glaseri (rhabditida: steinernematidae) isolado Santa Maria sobre os parâmetros Biológicos de ninfas ingurgitadas de amblyomma cajennense (acari: Ixodidae)

This work evaluated the in vitro effects of Steinernema glaseri on the biology of engorged Amblyomma cajennense nymphs. The ticks were exposed to infective juveniles (IJs) of S. glaseri at different concentrations. Each treatment was composed by 10 experimental units (EU = repetitions) in Petri dishes maintained at 27 ± 1º C and relative humidity (RH) > 80 ± 10% for 72 hours. Then the nymphs were transferred to Petri dishes free of nematodes for observation of the following parameters: pre-ecdysis period (PEP), ecdysis period (EP), molting period (MP), ecdysis percentage (%Ec) and mortality percentage (%Mt). The groups treated with 5,000 and 10,000 IJs/EU showed significant alterations in the PEP when compared to the control, while for the EP only the treatment with 10,000 IJs/EU produced any significant changes compared to the control. The MP did not differ significantly from the control in any of the treated groups. For the %Ec only the group treated with 10,000 IJs/EU differed significantly from the control. The greatest efficiency was obtained at the concentration of 10,000 IJs/EU, in which the mortality percentage was 13%. This demonstrates that the nematode utilized was not able to cause high mortality in engorged A. cajennense nymphs and agrees with other reports indicating that immature ticks are not highly susceptible to entomopathogenic nematodes.

Esse trabalho avaliou os efeitos in vitro de Steinernema glaseri sobre a biologia de ninfas ingurgitadas de Amblyomma cajennense. Os carrapatos foram expostos a juvenis infectantes (JI) de S. glaseri sob diferentes concentrações. Cada tratamento foi composto de 10 unidades experimentais (EU = repetições) em placas de Petri mantidas sob 27 ± 1º C e UR > 80 ± 10% por 72 horas. Em seguida, as ninfas foram transferidas para placas de Petri isentas de nematoides para observação dos seguintes parâmetros: período de pré-ecdise (PPE), período de ecdise (PE), período de muda (PM), porcentagem de ecdise (%Ec) e porcentagem de mortalidade (%Mt). Os grupos tratados com 5.000 e 10.000 JI/UE mostraram alterações significativas no PPE quando comparados com o controle, enquanto para o PE somente o tratamento com 10.000 JI/UE produziu mudanças significativas quando comparado com o controle. Não houve diferença significativa do PM em relação ao grupo controle em nenhum dos tratamentos e, para a %Ec, somente o grupo tratado com 10.000 JI/UE diferiu significativamente do controle. A maior eficiência foi obtida com a concentração de 10.000 JI/EU na qual a mortalidade foi de 13%. Isso demonstra que o nematoide utilizado não foi capaz de causar alta mortalidade em ninfas ingurgitadas de A. cajennese e concorda com outros relatos indicando que carrapatos imaturos não são altamente susceptíveis a nematoides entomopatogênicos.

Effect of the entomopathogenic nematode Steinernema Glaseri (Rhabditida: Steinernematidae) isolate Santa Rosa on the biological parameters of engorged nymphs of Amblyomma Cajennense (Acari: Ixodidae) / Os efeitos do nematoide entomopatogênico steinernema glaseri (rhabditida: steinernematidae) isolado Santa Maria sobre os parâmetros Biológicos de ninfas ingurgitadas de amblyomma cajennense (acari: Ixodidae)

This work evaluated the in vitro effects of Steinernema glaseri on the biology of engorged Amblyomma cajennense nymphs. The ticks were exposed to infective juveniles (IJs) of S. glaseri at different concentrations. Each treatment was composed by 10 experimental units (EU = repetitions) in Petri dishes maintained at 27 ± 1º C and relative humidity (RH) > 80 ± 10% for 72 hours. Then the nymphs were transferred to Petri dishes free of nematodes for observation of the following parameters: pre-ecdysis period (PEP), ecdysis period (EP), molting period (MP), ecdysis percentage (%Ec) and mortality percentage (%Mt). The groups treated with 5,000 and 10,000 IJs/EU showed significant alterations in the PEP when compared to the control, while for the EP only the treatment with 10,000 IJs/EU produced any significant changes compared to the control. The MP did not differ significantly from the control in any of the treated groups. For the %Ec only the group treated with 10,000 IJs/EU differed significantly from the control. The greatest efficiency was obtained at the concentration of 10,000 IJs/EU, in which the mortality percentage was 13%. This demonstrates that the nematode utilized was not able to cause high mortality in engorged A. cajennense nymphs and agrees with other reports indicating that immature ticks are not highly susceptible to entomopathogenic nematodes.(AU)

Esse trabalho avaliou os efeitos in vitro de Steinernema glaseri sobre a biologia de ninfas ingurgitadas de Amblyomma cajennense. Os carrapatos foram expostos a juvenis infectantes (JI) de S. glaseri sob diferentes concentrações. Cada tratamento foi composto de 10 unidades experimentais (EU = repetições) em placas de Petri mantidas sob 27 ± 1º C e UR > 80 ± 10% por 72 horas. Em seguida, as ninfas foram transferidas para placas de Petri isentas de nematoides para observação dos seguintes parâmetros: período de pré-ecdise (PPE), período de ecdise (PE), período de muda (PM), porcentagem de ecdise (%Ec) e porcentagem de mortalidade (%Mt). Os grupos tratados com 5.000 e 10.000 JI/UE mostraram alterações significativas no PPE quando comparados com o controle, enquanto para o PE somente o tratamento com 10.000 JI/UE produziu mudanças significativas quando comparado com o controle. Não houve diferença significativa do PM em relação ao grupo controle em nenhum dos tratamentos e, para a %Ec, somente o grupo tratado com 10.000 JI/UE diferiu significativamente do controle. A maior eficiência foi obtida com a concentração de 10.000 JI/EU na qual a mortalidade foi de 13%. Isso demonstra que o nematoide utilizado não foi capaz de causar alta mortalidade em ninfas ingurgitadas de A. cajennese e concorda com outros relatos indicando que carrapatos imaturos não são altamente susceptíveis a nematoides entomopatogênicos.(AU)