Resumo
Purpose: The aim of this study was to determine the protective and antioxidative effects of intensive exercise on streptozotocin (STZ)-induced testicular damage, apoptotic spermatognial cells death, and oxidative stress. Methods: 36 male Sprague Dawley rats were divided into three groups: control, diabetes, and diabetes+intensive exercise (IE) groups. Testicular tissues were examined histopathologically and antioxidant enzymes, including catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD), glutathione peroxidase (GPx), and malondialdehyde (MDA) activity, as well as serum testosterone level, were measured. Results: Seminiferous tubules and germ cells were found to be better in the testis tissue of the intense exercise group than in the diabetes group. Diabetes suppressed antioxidant enzymes CAT, SOD, GPx and testosterone levels were significantly decreased, and increased MDA level in the diabetic group compared to diabetes+IE group (p < 0.001). Following four weeks of treatment, intensive exercise improved the antioxidant defense, significantly decreased MDA activity, and increased testosterone levels in testicular tissue in the diabetic group compared to diabetes+IE group (p < 0.01). Conclusion: STZ-induced diabetes causes damage to the testis tissue. In order to prevent these damages, exercise practice has become very popular nowadays. In present study, our intensive exercise protocol, histological, and biochemical analysis of the effect of diabetes on the testicular tissues is shown.
Assuntos
Animais , Masculino , Ratos , Espermatozoides/fisiologia , Exercício Físico/fisiologia , Apoptose , Estresse Oxidativo , Diabetes Mellitus Experimental , AntioxidantesResumo
The use of medicinal plants as raw material for extracts production and pure substances isolation and subsequence development of new drugs represents a constantly growing area. However, some stages are indispensable before pharmacologically evaluating natural products such as medicines. Toxicity tests in mammalian cells are essential to initiate new drugs development or verify the substance's biocompatibility. Thus, we verified the toxicity of crude extracts and fractions with different polarities obtained from the leaves and stems of eight plant species. The toxic effect was evaluated on macrophages obtained from the bone marrow and peritoneal cavity of a Swiss webster mouse and J774 macrophages. G8 cell lineage. These macrophages were cultured in a 96-well plate, and the compounds were added at a concentration of 100 µg/mL for 24 hours. After this time, the supernatant was removed. The toxicity was evaluated for lactate dehydrogenase (LDH) release assay and the resazurin assay, which uses an indicator dye to measure oxidation-reduction reactions. The results showed a difference in the percentage of toxicity when comparing the same extract in different types of macrophages. This outcome indicates that these cells from different origins may exhibit different responses when exposed to the same natural compounds.
A utilização de plantas medicinais como matéria-prima para a produção de extratos e isolamento de substâncias puras para o desenvolvimento de novos fármacos representa uma área em constante crescimento. No entanto, existem processos a serem realizados antes de avaliar farmacologicamente produtos naturais como medicamentos. Os testes de toxicidade em células de mamíferos são fundamentais para iniciar o desenvolvimento de novas drogas ou verificar a biocompatibilidade de substâncias. Assim, verificamos a toxicidade de extratos brutos e frações com diferentes polaridades obtidos de folhas e caule de oito espécies de planta. Para comparar o efeito tóxico, os testes foram realizados em macrófagos obtidos da medula óssea e cavidade do peritônio de camundongo Swiss webster, bem como no macrófago da linhagem celular J774.G8. Esses macrófagos foram cultivados em placa de 96 poços e os compostos adicionados na concentração de 100 µg/mL por 24 horas. Após esse período o sobrenadante foi removido. A toxicidade foi avaliada pelos ensaios de detecção da enzima lactato-desidrogenase (LDH) e pelo ensaio de resazurina, que usa um corante indicador para medir as reações de oxidação-redução. Os resultados mostraram uma diferença na porcentagem de toxicidade quando comparamos o mesmo extrato em diferentes tipos de macrófagos. Este resultado indica que essas células de várias origens podem exibir respostas distintas quando expostas aos mesmos compostos naturais.
Assuntos
Animais , Camundongos , Plantas Medicinais/toxicidade , Extratos Vegetais , MacrófagosResumo
Relationships among water uptake rate and temperatures were investigated in five soybean seeds lots cv. M 6410 IPRO. Germination, field emergence and electrical conductivity tests were applied to determine seed performance after fast (complete immersion in water), control (moist substrate) and slow (moist atmosphere) imbibitions both at 20 °C and 30 °C. The fresh weight increment over time in soybean seeds during imbibition was recorded. In parallel, analysis of the DNA integrity of seedlings obtained from such seeds was performed in gel electrophoresis. Absorption pattern of soybean seeds were similar among temperatures, but absorption characteristics vary with time progress according to the way of water entrance into the seeds. Upon fast imbibition seeds germinated lower than non-fast-imbibed seeds, besides loss of seed performance. In contrast, slow-imbibed seeds showed high germination, low abnormal seedlings and maintenance of seeds performance. DNA isolation from fast imbibed seeds was highly degraded; although, some considerably degraded samples were reported in controlled imbibed seeds and the best preserved DNA was found in slow-imbibed seeds. The pattern of DNA degradation is typically passive or non programmed cell death. Our results showed it is important to consider the water uptake rate during germination test, since DNA integrity plays a critical role during seed imbibition, preserving soybean seed performance.(AU)
As relações entre a taxa de embebição em água e temperaturas foram estudadas em cinco lotes de sementes de soja cv. M 6410 IPRO. Testes de germinação, emergência a campo e condutividade elétrica foram aplicados para avaliar o desempenho das sementes após rápida embebição (imersão direta em água), controlada (substrato úmido) e lenta (atmosfera úmida), ambos a 20 °C e 30 °C. O incremento no peso fresco das sementes durante a embebição foi registrado. Paralelamente, a integridade do DNA de plântulas oriundas das sementes foi avaliado em gel por eletroforese. O padrão de embebição das sementes de soja foi similar entre as temperaturas, mas houve variações com o tempo de acordo com o modo de entrada de água nas sementes. Após a embebição rápida, as sementes apresentam menor germinação e desempenho que as sementes submetidas aos demais métodos de embebição. O DNA isolado a partir de sementes que embeberam rapidamente encontrava-se degradado, embora em sementes que foram hidratadas de forma controlada também fosse encontrada degradação do DNA. O DNA mais preservado foi encontrado em sementes que embebem lentamente. O padrão de degradação do DNA é típico de morte passiva ou não programada de células. Os resultados indicam que é importante considerar a taxa de embebição em água durante o teste de germinação, pois a integridade do DNA desempenha uma função importante durante a embebição, preservando o desempenho das sementes de soja.(AU)
Assuntos
Glycine max/crescimento & desenvolvimento , Glycine max/genética , Germinação , DNA/análiseResumo
The antitumor properties of ticks salivary gland extracts or recombinant proteins have been reported recently, but little is known about the antitumor properties of the secreted components of saliva. The goal of this study was to investigate the in vitro effect of the saliva of the hard tick Amblyomma sculptum on neuroblastoma cell lines. SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32, and CHLA-20 cells were susceptible to saliva, with 80% reduction in their viability compared to untreated controls, as demonstrated by the methylene blue assay. Further investigation using CHLA-20 revealed apoptosis, with approximately 30% of annexin-V positive cells, and G0/G1-phase accumulation (>60%) after treatment with saliva. Mitochondrial membrane potential (m) was slightly, but significantly (p 0.05), reduced and the actin cytoskeleton was disarranged, as indicated by fluorescent microscopy. The viability of human fibroblast (HFF-1 cells) used as a non-tumoral control decreased by approximately 40%. However, no alterations in cell cycle progression, morphology, and m were observed in these cells. The present work provides new perspectives for the characterization of the molecules present in saliva and their antitumor properties.(AU)
As propriedades antitumorais de extratos de glândulas salivares de carrapatos ou proteínas recombinantes foram relatadas recentemente, mas pouco se sabe sobre as propriedades antitumorais dos componentes secretados da saliva. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito in vitro da saliva bruta do carrapato duro Amblyomma sculptum sobre as linhagens celulares de neuroblastoma. Células SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32 e CHLA-20 foram suscetíveis à saliva, com redução de 80% na sua viabilidade em comparação com controles não tratados, como demonstrado pelo ensaio de Azul de Metileno. Investigações posteriores utilizando CHLA-20 revelaram apoptose, com aproximadamente 30% de células positivas para anexina-V, e G0/G1 (> 60%) após tratamento com saliva. O potencial de membrana mitocondrial (m) foi reduzido significativamente (p 0,05), e o citoesqueleto de actina foi desestruturado, como indicado pela microscopia de fluorescência. A viabilidade do fibroblasto humano (células HFF-1), usado como controle não tumoral, diminuiu em aproximadamente 40%. No entanto, não foram observadas alterações na progressão do ciclo celular, morfologia e m nestas células. O presente trabalho fornece novas perspectivas para a caracterização das moléculas presentes na saliva e suas propriedades antitumorais.(AU)
Assuntos
Animais , Ixodidae/parasitologia , Anticorpos Antineoplásicos/análise , Neuroblastoma , CitoesqueletoResumo
The antitumor properties of ticks salivary gland extracts or recombinant proteins have been reported recently, but little is known about the antitumor properties of the secreted components of saliva. The goal of this study was to investigate the in vitro effect of the saliva of the hard tick Amblyomma sculptum on neuroblastoma cell lines. SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32, and CHLA-20 cells were susceptible to saliva, with 80% reduction in their viability compared to untreated controls, as demonstrated by the methylene blue assay. Further investigation using CHLA-20 revealed apoptosis, with approximately 30% of annexin-V positive cells, and G0/G1-phase accumulation (>60%) after treatment with saliva. Mitochondrial membrane potential (m) was slightly, but significantly (p 0.05), reduced and the actin cytoskeleton was disarranged, as indicated by fluorescent microscopy. The viability of human fibroblast (HFF-1 cells) used as a non-tumoral control decreased by approximately 40%. However, no alterations in cell cycle progression, morphology, and m were observed in these cells. The present work provides new perspectives for the characterization of the molecules present in saliva and their antitumor properties.(AU)
As propriedades antitumorais de extratos de glândulas salivares de carrapatos ou proteínas recombinantes foram relatadas recentemente, mas pouco se sabe sobre as propriedades antitumorais dos componentes secretados da saliva. O objetivo deste estudo foi investigar o efeito in vitro da saliva bruta do carrapato duro Amblyomma sculptum sobre as linhagens celulares de neuroblastoma. Células SK-N-SK, SH-SY5Y, Be(2)-M17, IMR-32 e CHLA-20 foram suscetíveis à saliva, com redução de 80% na sua viabilidade em comparação com controles não tratados, como demonstrado pelo ensaio de Azul de Metileno. Investigações posteriores utilizando CHLA-20 revelaram apoptose, com aproximadamente 30% de células positivas para anexina-V, e G0/G1 (> 60%) após tratamento com saliva. O potencial de membrana mitocondrial (m) foi reduzido significativamente (p 0,05), e o citoesqueleto de actina foi desestruturado, como indicado pela microscopia de fluorescência. A viabilidade do fibroblasto humano (células HFF-1), usado como controle não tumoral, diminuiu em aproximadamente 40%. No entanto, não foram observadas alterações na progressão do ciclo celular, morfologia e m nestas células. O presente trabalho fornece novas perspectivas para a caracterização das moléculas presentes na saliva e suas propriedades antitumorais.(AU)
Assuntos
Animais , Parasitologia , Ixodidae/fisiologia , Neuroblastoma/veterinária , CitoesqueletoResumo
Objetivou-se avaliar e comparar a expressão de Bcl-xL, Bax e caspase-3 em células 12 tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) e do tecido adiposo (CTM-TA) de13 ratas submetidas à diferenciação condrogênica in vitro na ausência ou presença de 14 triiodotironina (T3). CTM foram submetidas à diferenciação condrogênica por 21 dias 15 sem T3 (grupo controle) e com diferentes concentrações de T3 (0,01; 1; 100 e 1000 16 nM). Ao final da diferenciação, foi realizada imunohistoquímica para marcação das 17 proteínas Bcl-xL, Bax e caspase-3. O software de análise de imagem digital IHC 18 profile foi utilizado para avaliação das imunomarcações. Realizou-se análise de 19 variância e os testes de Shapiro Wilk, Tukey e Teste t. T3 reduziu significativamente 20 a expressão de Bcl-xL nas concentrações de 0,01; 1 e 100 nM, nas CTM-MO, mas 21 aumentou sua expressão nas CTM-TA na concentração de 0,01 nM. T3 aumentou a22 expressão de Bax nas concentrações de 0,01 e 100 nM, nas CTM-MO e na 23 concentração de 1000 nM, nas CTM-TA. A T3 não alterou significativamente a 24 expressão de caspase 3 nas CTM-MO, mas a reduziu significativamente nas 25 concentrações de 1 e 1000 nM, nas CTM-TA. Comparando-se as duas fontes de 26 CTM, a expressão de Bax e de caspase-3 foi significativamente maior nas CTM-MO 27 tratadas com T3, quando comparadas às CTM-TA. Conclui-se que a T3 influencia de 28 forma distinta a imuno-expressão de marcadores anti- e pró-apoptóticos em CTM29 MO e CTM-TA submetidas à diferenciação condrogênica. A T3 reduz a expressão 30 de Bcl-xL, aumenta a expressão de Bax e não altera a expressão de caspase-3 nas 31 CTM-MO e aumenta a expressão de Bcl-xL e de Bax e reduz a expressão de 32 caspase 3 nas CTM-TA. Essa diferença de resposta pode ser um dos mecanismos 33 para explicar os efeitos diferentes da T3 durante a diferenciação condrogênica das 34 CTM da medula óssea e do tecido adiposo.
The aim of this study was to evaluate and compare the expression of Bcl-xL, Bax and 12 caspase-3 in mesenchymal stem cells from bone marrow (BMMSCs) and adipose 13 tissue (ADSCs) of female rats submitted to in vitro chondrogenic differentiation in the 14 absence or presence of triiodothyronine (T3). MSC were subjected to chondrogenic 15 differentiation for 21 days without T3 (control group) and with different concentrations 16 of T3 (0.01; 1; 100 and 1000 nM). At the end of differentiation, immunohistochemistry 17 was performed to label the Bcl-xL, Bax and caspase-3 proteins. The IHC profile 18 digital image analysis software was used to assess immunostaining. Analysis of 19 variance and Shapiro Wilk, Tukey and t-test were performed. T3 significantly reduced 20 Bcl-xL expression at concentrations of 0.01; 1 and 100 nM, in BMMSCs, but 21 increased its expression in ADSCs at a concentration of 0.01 nM. T3 increased Bax 22 expression at concentrations of 0.01 and 100 nM in BMMSCs and at a concentration 23 of 1000 nM in ADSCs. T3 did not significantly alter caspase 3 expression in 24 BMMSCs, but significantly reduced it at concentrations of 1 and 1000 nM in ADSCs. 25 Comparing the two MSC sources, the expression of Bax and caspase-3 was 26 significantly higher in BMMSCs treated with T3 when compared to ADSCs. It is 27 concluded that T3 distinctly influences the immunoexpression of anti- and pro28 apoptotic markers in BMMSCs and ADSCs submitted to chondrogenic differentiation. 29 T3 reduces the expression of Bcl-xL, increases the expression of Bax and does not 30 alter the expression of caspase-3 in the BMMSCs and increases the expression of 31 Bcl-xL and Bax and reduces the expression of caspase 3 in the ADSCs. This 32 difference in response may be one of the mechanisms to explain the different effects 33 of T3 during the chondrogenic differentiation of MSCs from bone marrow and 34 adipose tissue.
Resumo
Background:This investigation aimed to evaluate the occurrence of some apoptotic features induced by Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae infection in young BALB/c mice during 2, 4, 7, 10, 14 and 21 days post-infection (dpi).Methods:The animals were euthanized and lung, liver and kidneys were harvested to histopathology analysis and immunohistochemistry to caspase-3 antigen detection was performed.Results:Chromatin condensation in kidney and liver tissues, but not in lung tissue, was observed. Caspase-3 reactive cells, mainly characterized as renal epithelial cells, were detected in the days 14 and 21 at high levels when compared to days 2,4 and 7 (p = 0.025; p <0.05). Lung sections revealed caspase-3 labeled alveolar cells in 10 and 14 days post-infection was higher than observed at 7 days (p = 0.0497; p < 0.05). Liver sections demonstrated reactive cells at a highest level at 14 and 21 days post-infection when comparison to 2,4, 7 and 10 days (p = 0.0069; p<0.05).Conclusions:Our results suggest that infection of L interrogans induce in kidney, liver and lung an activation of apoptosis mediated by caspase-3 dependent pathway in later phases of infectious process.(AU)
Assuntos
Animais , Camundongos , Imuno-Histoquímica , Apoptose , Leptospira interrogans serovar icterohaemorrhagiae , Caspase 3Resumo
Background: This investigation aimed to evaluate the occurrence of some apoptotic features induced by Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae infection in young BALB/c mice during 2, 4, 7, 10, 14 and 21 days post-infection (dpi). Methods: The animals were euthanized and lung, liver and kidneys were harvested to histopathology analysis and immunohistochemistry to caspase-3 antigen detection was performed. Results: Chromatin condensation in kidney and liver tissues, but not in lung tissue, was observed. Caspase-3 reactive cells, mainly characterized as renal epithelial cells, were detected in the days 14 and 21 at high levels when compared to days 2,4 and 7 (p = 0.025; p <0.05). Lung sections revealed caspase-3 labeled alveolar cells in 10 and 14 days post-infection was higher than observed at 7 days (p = 0.0497; p < 0.05). Liver sections demonstrated reactive cells at a highest level at 14 and 21 days post-infection when comparison to 2,4, 7 and 10 days (p = 0.0069; p<0.05). Conclusions: Our results suggest that infection of L interrogans induce in kidney, liver and lung an activation of apoptosis mediated by caspase-3 dependent pathway in later phases of infectious process.(AU)
Assuntos
Animais , Camundongos , Apoptose , Leptospira interrogans serovar icterohaemorrhagiae , Doença de Weil/veterináriaResumo
Background: This investigation aimed to evaluate the occurrence of some apoptotic features induced by Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae infection in young BALB/c mice during 2, 4, 7, 10, 14 and 21 days post-infection (dpi). Methods: The animals were euthanized and lung, liver and kidneys were harvested to histopathology analysis and immunohistochemistry to caspase-3 antigen detection was performed. Results: Chromatin condensation in kidney and liver tissues, but not in lung tissue, was observed. Caspase-3 reactive cells, mainly characterized as renal epithelial cells, were detected in the days 14 and 21 at high levels when compared to days 2,4 and 7 (p = 0.025; p <0.05). Lung sections revealed caspase-3 labeled alveolar cells in 10 and 14 days post-infection was higher than observed at 7 days (p = 0.0497; p < 0.05). Liver sections demonstrated reactive cells at a highest level at 14 and 21 days post-infection when comparison to 2,4, 7 and 10 days (p = 0.0069; p<0.05). Conclusions: Our results suggest that infection of L interrogans induce in kidney, liver and lung an activation of apoptosis mediated by caspase-3 dependent pathway in later phases of infectious process.
Assuntos
Animais , Camundongos , Apoptose , Doença de Weil/veterinária , Leptospira interrogans serovar icterohaemorrhagiaeResumo
O imidacloprido (IMD) é um inseticida neonicotinóide de uso veterinário e agronômico utilizado mundialmente em larga escala. Este composto, apresenta toxicidade seletiva para os receptores pós-sinápticos da acetilcolina (nAChRs) em insetos e baixa toxicidade para mamíferos. Porém, dados na literatura demonstram efeitos nocivos induzidos pela substância em vários animais, sendo o fígado apontado como o principal órgão afetado. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos do IMD em células de hepatoblastoma humano (HepG2) para elucidar os mecanismos envolvidos na ação tóxica da substância. As células HepG2 foram expostas ao IMD (250 - 2000M) durante 24 e 48 horas. Após a exposição o IMD causou perda da viabilidade celular a partir da concentração de 500 M no tempo 24 horas e a partir de 250 M no tempo 48 horas de forma concentração e tempo-dependente. A capacidade metabólica das células, avaliada pelo teste do MTT, também foi afetada em ambos os tempos investigados resultando em uma diminuição a partir da concentração de 250 M no tempo 24 horas, enquanto que no tempo de 48 horas esse resultado só foi significante a partir da concentração de 500 M. O IMD diminuiu o potencial de membrana mitocondrial nas células HepG2 apenas na maior concentração testada (2000 M) em ambos os tempos de incubação e induziu danos na membrana celular conforme observado pelos aumentos significantes na liberação da enzima lactato desidrogenase em relação ao controle a partir da concentração de 1000 µM em 24 horas e a partir de 500 µM em 48 horas exercendo também efeito concentração e tempo-dependente. O inseticida também induziu um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio (ERON) em taxas superiores a 50% em relação ao controle nas concentrações acima de 500 µM, após 24 horas de incubação e já na concentração de 250 µM no tempo 48 horas. Os resultados do presente estudo indicam que o IMD induz citotoxicidade nas células HepG2 e que esse efeito pode estar associado ao aumento na geração de ERON, causando morte celular por necrose
Imidacloprid (IMD) is a neonicotinoid insecticide for veterinary and agronomic use used worldwide on a large scale.This compound has selective toxicity to postsynaptic acetylcholine receptors (nAChRs) in insects and low toxicity to mammals.However, data in the literature demonstrate harmful effects induced by the substance in several animals, with the liver being identified as the main affected organ.In this sense, the objective of this work was to evaluate the effects of IMD in human hepatoblastoma (HepG2) cells to elucidate the mechanisms involved in the toxic action of the substance.HepG2 cells were exposed to IMD (250 - 2000 M) for 24 and 48 hours.After exposure, IMD caused loss of cell viability from the concentration of 500 M in 24 hours and from 250 M in 48 hours in a concentration and time-dependent manner.The metabolic capacity of the cells, assessed by the MTT test, was also affected at both times investigated, resulting in a decrease from the concentration of 250 M in 24 hours, whereas in 48 hours this result was only significant from 500 M concentration.IMD decreased the mitochondrial membrane potential in HepG2 cells only at the highest concentration tested (2000 M) at both incubation times and induced damage to the cell membrane as observed by the significant increases in the release of the enzyme lactate dehydrogenase compared to the control from concentration of 1000 µM in 24 hours and from 500 µM in 48 hours, also having a concentration and time-dependent effect.The insecticide also induced an increase in the production of reactive oxygen and nitrogen species (ERON) at rates greater than 50% in relation to the control in concentrations above 500 µM, after 24 hours of incubation and already in the concentration of 250 µM in time 48 hours.The results of the present study indicate that IMD induces cytotoxicity in HepG2 cells and that this effect may be associated with an increase in the generation of ERON, causing cell death by necrosis
Resumo
Coronavirus são RNA vírus sentido positivo, envelopados, comumente associados a infecções brandas em aves e mamíferos. A infecção por CCoV é comum em cães jovens, principalmente em animais que vivem em canis e abrigos, associada à ocorrência de diarreia branda e autolimitante, causada pela infecção das células das vilosidades do intestino delgado. São conhecidos dois genótipos: CCoV-I e CCoV-II, o qual é subdividido em CCoV-IIa e CCoV-IIb. O CCoV-IIa, é uma variante altamente patogênica associada à doença sistêmica e acentuada linfopenia. Diferentemente de outros CCoV realiza viremia e, assim, determina a disseminação do vírus para diversos órgãos, incluindo tecidos linfóides. Nesse sentido, o envolvimento da infecção de macrófagos correlacionada à gravidade da doença e linfopenia, vem sendo sugerido. Este trabalho teve por objetivo promover a infecção de macrófagos caninos derivados de monócitos sanguíneos e avaliar a replicação viral, despolarização da membrana mitocondrial e os complexos da cadeia respiratória mitocondrial às 6, 12, 18 e 24 horas pós-infecção. A estatística descritiva incluiu média ± desvio padrão (s.d.). As médias foram comparadas através da análise de variância, ANOVA. Foi possível observar que a infecção por CCoV induziu a liberação de novas partículas virais entre 18 e 24 horas pós-infecção. Ainda, a infecção viral esteve associada à despolarização e disfunção da membrana mitocondrial, afetando o complexo III da cadeia respiratória. Desse modo, acreditase que o CCoV induz a uma falha bioenergética mitocondrial, atuando como um desacoplador da cadeia respiratória no complexo III dos macrófagos caninos infectados, sem comprometer a replicação viral. A patogenia da doença causada pela variante pantrópica do CCoV é pouco elucidada e, assim, os achados desse estudo podem auxiliar na compreensão da interação vírus-hospedeiro.
Coronaviruses are enveloped positive-sense RNA viruses commonly associated with mild infections in birds and mammals. CCoV infection is common in young dogs, especially kennel and shelter animals, associated with the occurrence of mild, selflimiting diarrhea caused by infection of small intestinal villus cells. Two genotypes are known: CCoV-I and CCoV-II, which is subdivided into CCoV-IIa and CCoV-IIb. CCoV-IIa is a highly pathogenic variant associated with systemic disease and marked lymphopenia. Unlike other CCoV it carries viremia and thus determines the spread of the virus to various organs including lymphoid tissues. In this sense, the involvement of macrophage infection correlated with disease severity and lymphopenia has been suggested. This study aimed to promote the infection of canine macrophages derived from blood monocytes and to evaluate viral replication, mitochondrial membrane depolarization and mitochondrial respiratory chain complexes at 6, 12, 18 and 24 hours post-infection. Descriptive statistics included mean ± standard deviation (s.d.). Means were compared by analysis of variance, ANOVA. It was observed that CCoV infection induced the release of new viral particles between 18 and 24 hours after infection. Moreover, viral infection was associated with depolarization and mitochondrial membrane dysfunction, affecting respiratory chain complex III. Thus, CCoV is believed to induce mitochondrial bioenergetic failure, acting as a decoupler of the respiratory chain in complex III of infected canine macrophages, without compromising viral replication. The pathogenesis of the disease caused by the CCoV pantropic variant is poorly understood, and thus the findings of this study may help in understanding the virushost interaction.
Resumo
In recent years, uremic toxins have been widely investigated as an immunosuppressive factor for nephropathic patients. This study aimed to test the hypothesis that, as it was similarly observed in humans, the rate of apoptosis and superoxide production in polymorphonuclear leukocytes are changed in dogs treated with uremic serum. The superoxide production of polymorphonuclear leukocytes and apoptotic index of 10 healthy dogs incubated with autologous and homologous serum from healthy and uremic dogs was compared. Thus, there was an effect of partial inhibition of oxidative metabolism in uremia without correlation with the acceleration of polymorphonuclear leukocytes apoptosis in dogs.
Nos últimos anos, as toxinas urêmicas têm sido amplamente investigadas como elemento imunossupressor em pacientes nefropatas. Este trabalho objetivou testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre em humanos, a taxa de apoptose e a produção de superóxido em leucócitos polimorfonucleares de cães tratados com soro urêmico se alteram. Foi comparada a produção de superóxido e o índice apoptótico de leucócitos polimorfonucleares de 10 cães sadios incubados com o soro autólogo e homólogo de indivíduos sadios e urêmicos. Com isso, verificou-se efeito parcial de inibição do metabolismo oxidativo na uremia sem correlação com a aceleração da apoptose dos leucócitos polimorfonucleares de cães.
Assuntos
Animais , Cães , Apoptose , Insuficiência Renal/veterinária , Leucócitos , Superóxidos , UremiaResumo
In recent years, uremic toxins have been widely investigated as an immunosuppressive factor for nephropathic patients. This study aimed to test the hypothesis that, as it was similarly observed in humans, the rate of apoptosis and superoxide production in polymorphonuclear leukocytes are changed in dogs treated with uremic serum. The superoxide production of polymorphonuclear leukocytes and apoptotic index of 10 healthy dogs incubated with autologous and homologous serum from healthy and uremic dogs was compared. Thus, there was an effect of partial inhibition of oxidative metabolism in uremia without correlation with the acceleration of polymorphonuclear leukocytes apoptosis in dogs.(AU)
Nos últimos anos, as toxinas urêmicas têm sido amplamente investigadas como elemento imunossupressor em pacientes nefropatas. Este trabalho objetivou testar a hipótese de que, à semelhança do que ocorre em humanos, a taxa de apoptose e a produção de superóxido em leucócitos polimorfonucleares de cães tratados com soro urêmico se alteram. Foi comparada a produção de superóxido e o índice apoptótico de leucócitos polimorfonucleares de 10 cães sadios incubados com o soro autólogo e homólogo de indivíduos sadios e urêmicos. Com isso, verificou-se efeito parcial de inibição do metabolismo oxidativo na uremia sem correlação com a aceleração da apoptose dos leucócitos polimorfonucleares de cães.(AU)
Assuntos
Animais , Cães , Apoptose , Insuficiência Renal/veterinária , Leucócitos , Uremia , SuperóxidosResumo
O objetivo do presente estudo foi analisar a presença da caspase-3 ativada em folículos ovarianos dos lagartos Tropidurus hispidus e T. semitaeniatus, oriundos de uma região semiárida do Brasil. Foram utilizados 20 folículos para cada espécie (sendo 10 para a fase pré-vitelogênica e 10 para a vitelogênica). Inicialmente, fez-se a mensuração da espessura da camada da granulosa a fim de saber se há diferença estatística entre as fases da foliculogênese intra e interespécies. Posteriormente, os mesmos folículos foram submetidos à técnica de imunohistoquímica para a análise de marcação da caspase-3 ativada das referidas fases da foliculogênese. A imunomarcação dos folículos foi analisada a partir da intensidade dos pixels provenientes da marcação em marrom na camada da granulosa. Os resultados mostraram que a fase pré-vitelogênica possui uma espessura significativamente maior quando comparada com a fase vitelogênica. A análise imunohistoquímica evidenciou a presença da caspase-3 ativada nos folículos da fase pré-vitelogênica para as duas espécies. No entanto, a fase vitelogênica não houve nenhuma marcação. Quando a nutrição do oócito pelas células da camada da granulosa se torna suficiente, esta regride sua espessura via apoptose. Haverá então, a inativação da caspase-3 ativada, resultando em uma única camada de células cuboides, caracterizando a fase vitelogênica.
The aim of the present study was to analyze the presence of activated caspase-3 in ovarian follicles of Tropidurus hispidus and T. semitaeniatus lizards from a semi-arid region of Brazil. Twenty follicles were used for each species (10 for one previtellogenic phase and 10 for vitellogenic). Initially, the thickness of the granulosa layer was measured in order to know if there is statistical difference between the phases of the intra and interspecies folliculogenesis. Subsequently, the same follicles were submitted to the immunohistochemical technique for a marking analysis of the activated caspase-3 of the folliculogenesis phases. An immunostaining of leaflets to analyze from the mean of the marking pixels in brown on the granulosa layer. The results showed that the pre-vitellogenic phase has a greater thickness when compared to a rapid-oedogenic phase. An immunohistochemical analysis evidenced a presence of activated caspase-3 in the follicles of the pre-vitellogenic phase as two species. However, the vitellogenic stage is not in marked noise. When an oocyte nourishes the cells of the granulosa layer, and regresses its thickness via apoptosis. There will then be an inactivation of caspase-3 activated, resulting in a single layer of cuboid cells, characterizing a vitellogenic phase.
Resumo
PURPOSE: To evaluate the effect of N-acetylcysteine (NAC) combined with fluid resuscitation on pulmonary cell death in rats induced with controlled hemorrhagic shock (HS). METHODS: Two arteries (MAP calculation and exsanguination) and one vein (treatments) were catheterized in 22 anesthetized rats. Two groups of male albino rats were induced with controlled HS at 35mmHg MAP for 60 min. After this period, the RL group was resuscitated with Ringer's lactate and the RL+NAC group was resuscitated with Ringer's lactate combined with 150mg/Kg NAC. The control group animals were cannulated only. The animals were euthanized after 120 min of fluid resuscitation. Lung tissue samples were collected to evaluate the following: histopathology, TUNEL and imunohistochemical expression of caspase 3. RESULTS: RL showed a greater number of cells stained by TUNEL than RL + NAC, but there was no change in caspase 3 expression in any group. CONCLUSION: N-acetylcysteine associate to fluid resuscitation, after hemorrhagic shock, decreased cell death attenuating lung injury.(AU)
OBJETIVO: Avaliar o efeito da N-acetilcisteína (NAC) combinada ao fluido de reposição volêmica na morte celular pulmonar de ratos submetidos ao choque hemorrágico (CH) controlado. MÉTODOS: Duas artérias (cálculo da PAM e exsanguinação) e uma veia (tratamentos) foram cateterizadas em 22 ratos anestesiados. Dois grupos de ratos machos albinos foram induzidos ao CH controlado com PAM de 35mmHg por 60 min. Após este período, o grupo RL foi ressuscitado com Ringer lactato e o grupo RL+NAC foi ressuscitado com Ringer lactato associado com 150mg/Kg de NAC. O grupo controle sofreu somente o procedimento cirúrgico de cateterização. Os animais sofreram eutanásia após 120 min. da ressuscitação. Amostras de tecido pulmonar foram coletadas para histopatologia, TUNEL e a imuno-expressão da caspase 3. RESULTADOS: RL apresentou maior número de células marcadas pelo TUNEL do que RL+NAC, porém sem alteração na expressão da caspase 3 em nenhum dos grupos estudados. CONCLUSÃO: A N-acetilcisteína teve um papel protetor na morte celular em modelo de choque hemorrágico controlado.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ratos , Acetilcisteína/uso terapêutico , Morte Celular , Pulmão/citologia , Ressuscitação/métodos , Choque Hemorrágico/tratamento farmacológico , Caspase 3/metabolismo , Modelos Animais de Doenças , Hidratação , Marcação In Situ das Extremidades Cortadas , Lesão Pulmonar/prevenção & controle , Choque Hemorrágico/patologia , Fatores de TempoResumo
O Brasil possui um dos maiores rebanhos de bovinos mundialmente. Estes animais estão expostos constantemente a agentes virais causadores de patologias. Dentre estes, o herpesvírus bovino 1 (BHV1) e 5 (BHV5) apresentam grande importância epidemiológica. O BHV1 causa infecções respiratórias e genitais, enquanto que o BHV5 meningoencefalite. As proteínas de membrana presentes nos herpesvírus os tornam capazes de infectar as células do hospedeiro. Com afinidade a distintas células, desenvolvem sua capacidade de infecção, apresentam mecanismos de sobrevivência à morte celular programada e a resposta imunológica. As interações vírus-hospedeiro são fundamentais no entendimento de aspectos relacionados a transmissão viral, capacidade de infecção e progressão da doença. Para este fim, se faz necessário compreender elementos fundamentais, como a modulação da função mitocondrial e a replicação do BHV, bem como os níveis de apoptose nas células do hospedeiro. De igual importância, é indispensável entender o comportamento de genes apoptóticos que estão relacionados à infecção por BHV5 e seus envolvimentos na viabilidade celular. Estes achados contribuem para o entendimento da imunopatogenia do BHV, auxiliam a evitar a disseminação destes agentes e são de grande valia para o desenvolvimento de vacinas.
Brazil has one of the largest cattle hers worldwide. These animals are constantly exposed to pathological viral agents. Bovine herpesvirus 1 (BHV1) and BHV5 have great epidemiological importance. BHV1 is causative agent of respiratory and genital infections, while BHV5 causes meningoencephalitis. Herpesvirus membrane proteins allow them to infect the host cells. They present affinity to different types of cells, develop mechanisms to survive programmed cell death, and immune response. Virus-host interactions are essential to understand aspects related to viral transmission, capacity of infection and disease progression. To this end, it is necessary to understand the fundamental elements related to the modulation of mitochondrial function and replication of BHV, as well as apoptosis levels in the host cells. It is crucial to understand the behavior of apoptotic genes related to BHV5 infection and cell viability. These findings contribute to understanding the BHV immunopathogenesis, help to prevent the spread of these agents, and are of great value to the development of vaccines.
Resumo
PURPOSE: This study aimed to assess the effects of preconditioning with mixtures of oils containing high/low ratio of ω-6/ω-3 and ω-9/ω-6, respectively, in an experimental model of cerebral ischemia-reperfusion (I/R). METHODS: Forty-two Wistar rats were randomly distributed into two groups: control (n=24) and test (n=18). Control group was subdivided in 4 subgroups (n=6): G1: Sham-Water; G2: I/R-Water; G3: Sham-Isolipidic and G4: I/R-Isolipid. The animals received water or a isolipid mixture containing ω-3 oils (8:1 ratio) and ω-9/ω-6 (0.4:1 ratio) by gavage for seven days. Test group included 3 subgroups (n=6) G5: I/R-Mix1, G: 6 I/R-Mix2 and G7: I/R-Mix3. Test group animals received oily mixtures of ω-3 (1.4:1 ratio) and ω-6 (3.4:1 ratio), differing only in source of ω-3: G5 (alpha-linolenic acid); G6 (alpha-linolenic, docosahexaenoic and eicosapentaenoic acids), and G7 (alpha-linolenic and docosahexaenoic acids). On day 7 I/R rats underwent cerebral ischemia with bilateral occlusion of common carotid arteries for 1 hour followed by reperfusion for 3 hours. G1 and G3 animals underwent sham operation. Concluded the experiment, animals were decapitated and their brains sliced for red neurons (RN) count in CA3 area of the hippocampus. Variables were compared using ANOVA-Tukey test. RESULTS: The use of different mix preparations promoted a decrease in red cell count in all three groups (G5/G6/G7), compared with G2/G4, confirming the protective effect of different oil blends, regardless of ω-3 source. CONCLUSION: Pre-conditioning with mixtures of oils containing high ratio ω-6/ω-3 and low ω-9/ω-6 relationship protects brain neurons against I/R injury in an experimental model.(AU)
OBJETIVO: Avaliar os efeitos do pré-condicionamento com misturas de óleos contendo relação alta/baixa de ω-6/ω-3 e ω-9/ω-6, respectivamente, em um modelo experimental de isquemia/reperfusão (I/R) cerebral. MÉTODOS: Quarenta e dois ratos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: controle (n=24) e teste (n=18). Grupo controle foi subdividido em quatro subgrupos (n=6): G1: Sham-Água; G2: I/R-Água; G3: Sham-Isolipídico e G4: I/R-Isolipídico. Os animais receberam água ou uma mistura isolipidica contendo ω-6/ω-3 óleos (8:1) e ω-9/ω-6 (0,4:1) por gavagem, durante sete dias. O grupo teste incluiu três subgrupos (n=6) G5: I/R-Mix1, G: 6 I/R-Mix2 e G7: I/R-Mix3. Animais do grupo teste receberam de misturas de óleos ω-6/ω-3 (1,4:1) e ω-9/ω-6 (3,4:1), diferindo apenas na fonte de -3: G5:alpha-linolênico; G6: ácidos alpha-linolênico, eicosapentaenóico e docosahexaenóico e G7:ácidos alpha-linolênico e docosahexaenóico. No 7º dia os grupos I/R foram submetidos à isquemia cerebral (1h) por oclusão bilateral das artérias carótidas comuns seguida de reperfusão (3h). Ratos G1 e G3 foram submetidos à operação simulada. Concluído o experimento, os animais foram decapitados e seus cérebros fatiados para contagem dos neurônios vermelhos na área CA3 do hipocampo. As variáveis foram comparadas pelo teste de ANOVA-Tukey. RESULTADOS: A utilização de diferentes misturas de óleos promoveu uma diminuição na contagem de células vermelhas nos grupos G5/G6/G7, em comparação com G2/G4, confirmando o efeito protetor das misturas de óleos, independentemente da origem de ω-3. CONCLUSÃO: O pré-condicionamento com misturas de óleos contendo alta proporção de ω-6/ω-3 e baixa proporção de ω-9/ω-6 protege os neurônios cerebrais da lesão de I/R em um modelo experimental.(AU)
Assuntos
Animais , Isquemia Encefálica/patologia , Reperfusão , Óleos/química , Ratos/classificação , Morte CelularResumo
Canine distemper virus (CDV) may induce multifocal demyelination in the central nervous system of infected dogs. The present work investigated apoptosis in white and gray matter (granular layer) in the cerebellum of naturally infected dogs by the analysis of the expression of the pro-apoptotic antigens caspase 2 and 3 , b(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL-staining) positivity, annexin-V immunodetection, and the presence of the anti-apoptotic antigens, BCl-2 and p53. Cerebellum specimens were obtained from the Laboratory of Animal Pathology, from 1995 to 2009, and the 5-µm thick fragments were stained both with hematoxylin-eosin and Shorr. All samples were diagnosed as positive for CDV genome by reverse transcriptase polymerase chain reaction targeting the nucleocapsid gene. The anti-apoptotic pathways evidenced in this study were BCl-2 and p53 proteins that were intensively detected in cerebellum of CDV positive slides (40-80% of labeled cells/mm2). In addition, the apoptosis markers annexin-V and TUNEL are directly correlated among the same samples (80 and 40% of labeled cells, respectively). This is the first description of p53 and annexin-V expression, characterized as anti-apoptotic and apoptotic proteins, involvement in canine natural cases of CDV infections. (AU)
Assuntos
Animais , Vírus da Cinomose Canina/isolamento & purificação , Caspase 2/análise , Caspase 2 , Caspase 3/análise , Caspase 3 , Proteína Supressora de Tumor p53/análise , Proteína Supressora de Tumor p53 , Anexina A5/biossíntese , Hematoxilina , Amarelo de Eosina-(YS) , Coloração e Rotulagem/métodos , Coloração e Rotulagem/veterináriaResumo
Canine distemper virus (CDV) may induce multifocal demyelination in the central nervous system of infected dogs. The present work investigated apoptosis in white and gray matter (granular layer) in the cerebellum of naturally infected dogs by the analysis of the expression of the pro-apoptotic antigens caspase 2 and 3 , b(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL-staining) positivity, annexin-V immunodetection, and the presence of the anti-apoptotic antigens, BCl-2 and p53. Cerebellum specimens were obtained from the Laboratory of Animal Pathology, from 1995 to 2009, and the 5-µm thick fragments were stained both with hematoxylin-eosin and Shorr. All samples were diagnosed as positive for CDV genome by reverse transcriptase polymerase chain reaction targeting the nucleocapsid gene. The anti-apoptotic pathways evidenced in this study were BCl-2 and p53 proteins that were intensively detected in cerebellum of CDV positive slides (40-80% of labeled cells/mm2). In addition, the apoptosis markers annexin-V and TUNEL are directly correlated among the same samples (80 and 40% of labeled cells, respectively). This is the first description of p53 and annexin-V expression, characterized as anti-apoptotic and apoptotic proteins, involvement in canine natural cases of CDV infections.
Assuntos
Animais , /análise , /análise , /análise , Vírus da Cinomose Canina/isolamento & purificação , Amarelo de Eosina-(YS) , /biossíntese , Coloração e Rotulagem/métodos , Coloração e Rotulagem/veterinária , HematoxilinaResumo
PURPOSE: To investigate the proliferation and neuronal death in brain tissue heterotopia in the lung in an experimental model during both fetal and neonatal periods. METHODS: Twenty four pregnant female Swiss mice were used to induce brain tissue heterotopia on the 15th gestational day. Briefly, the brain of one fetus of each dam was extracted, disaggregated and injected into the right hemithorax of siblings. Six of these fetuses with pulmonary brain tissue implantation (PBI) were collected on the 18th gestational day (group E18) and six other on the 8th postnatal day (group P8). Immunohistochemical staining for PCNA and Bcl2 were used to assess proliferation and cell death. RESULTS: PCNA Labelling Index (LI) in heterotopic brain tissue was greater in fetal than postnatal period (E18 > P8) (p<0.05) and the immunostaining with Bcl2 antibody did not show difference. CONCLUSION: Cell proliferation is maintained in brain tissue heterotopia, although apoptosis is also observed.(AU)
OBJETIVO: Investigar a proliferação e morte neuronal na heterotopia encefálica pulmonar em modelo experimental durante o período fetal e neonatal. MÉTODOS: Foram utilizados 24 camundongos Swiss fêmeas prenhes para induzir a heterotopia encefálica no pulmão. O tecido encefálico de um feto de cada fêmea prenha foi removido, picotado e injetado no pulmão dos irmãos. Seis fetos com Implantação Encefálica Pulmonar (IEP) foram coletados no 18º dia gestacional (grupo E18) e seis outros fetos no 8º dia pós-natal (grupo P8). Foi realizada a reação Imuno-histoquímica para PCNA e Bcl2 para analisar a proliferação e morte celular. RESULTADOS: O índice de marcação (IM) para PCNA era maior no período fetal quando comparado com o período pós-natal (E8 > P18) (p<0,05) e a imunomarcação para o anticorpo Bcl2 não apresentou diferença. CONCLUSÃO: A proliferação celular foi mantida no tecido heterotópico encefálico, embora a apoptose também foi observada.(AU)