Resumo
This study performed the characterization of coccidiosis in broilers and evaluated the occurrence of suggestive cases of necrotic enteritis (NE), seeking if there is an association between the diseases in Brazilian flocks. Two hundred and fifty-six birds from 32 flocks were evaluated. Macroscopic and histopathological lesions were graduated for coccidiosis and NE. Intestinal content was investigated by polymerase chain reaction (PCR) for seven species of Eimeria and by selective anaerobic culture for Clostridium perfringens and identification of the NetB gene. Flocks positive for coccidiosis represented 93.8%. Macroscopic lesions of coccidiosis were Grade 1 for E. acervulina (27%); E. tenella (9.7%) and E. maxima (8.9%). Histopathological evaluation showed Grade 1 in duodenum (38.2%); jejunum (21.4%); cecum (9.3%) and ileum (5%). PCR demonstrated positivity for E. tenella (21.9%), E. maxima (18.8%), and E. acervulina (3.1%). Suggestive macroscopic lesions of necrotic enteritis ranged from Grade 1 (16%), 2 (23%) and 3 (10,9%). Histopathology indicated the absence of necrosis, showing only hemorrhage in the mucosa and submucosa, with the presence of Eimeria spp. Clostridium perfringens type A netB+ was not isolated, demonstrating that macroscopic lesions found mostly in the jejunum did not characterize NE, based on histopathology and negativity of the NetB gene. The study suggests that, due to the high occurrence of coccidiosis, many macroscopic findings suggestive of NE are, in fact, attributed to atypical lesions caused by the reproduction of Eimeria spp.
Este estudo realizou a caracterização de coccidiose em frangos de corte e avaliou a ocorrência de casos sugestivos de enterite necrótica (EN), buscando se há alguma associação entre estas duas enfermidades em lotes de frango de corte no Brasil. Foram avaliadas 256 aves de 32 lotes. Lesões macroscópicas e histopatológicas foram graduadas para coccidiose e EN. O conteúdo intestinal foi investigado por reação em cadeia da polimerase (PCR) para sete espécies de Eimeria e por cultura anaeróbia seletiva para Clostridium perfringens e identificação do gene NetB. Os lotes positivos para coccidiose representaram 93,8%. Lesões macroscópicas de coccidiose foram de Grau 1 para E. acervulina (27%); E. tenella (9,7%) e E. maxima (8,9%). A avaliação histopatológica mostrou Grau 1 no duodeno (38,2%); jejuno (21,4%); ceco (9,3%) e íleo (5%). A PCR demonstrou positividade para E. tenella (21,9%), E. maxima (18,8%) e E. acervulina (3,1%). Lesões macroscópicas sugestivas de enterite necrótica variaram de grau 1 (16%), 2 (23%) e 3 (10,9%). A histopatologia indicou ausência de necrose, apresentando apenas hemorragia em mucosa e submucosa, com presença de Eimeria spp. Clostridium perfringens tipo A netB + não foi isolado, demonstrando que lesões macroscópicas encontradas principalmente no jejuno não caracterizaram NE, com base na histopatologia e negatividade do gene NetB. O estudo sugere que, em virtude da alta ocorrência de coccidiose nos lotes, muitos achados macroscópicos sugestivos de EN são, na verdade, atribuídos a lesões atípicas provocadas pela reprodução de Eimeria spp.
Assuntos
Animais , Feminino , Galinhas/microbiologia , Coccidiose/patologia , Coccidiose/veterinária , Coccidiose/epidemiologia , Enterite/diagnóstico , Enterite/veterinária , Enterite/patologiaResumo
Clostridial infections, particularly clostridial myonecrosis, can be fulminant and fatal; they often arise without an obvious history of trauma. The majority of equine clostridial myonecrosis cases are associated with intramuscular injection. This paper presents the first report of clostridial myositis by C. perfringens in a donkey after an injection of flunixin meglumine on the neck, describing the clinical, necroscopic, and histopathological events. Bacterial isolation and biochemical tests confirmed the definitive diagnosis of C. perfringens.
Clostridioses, particularmente a mionecrose clostridial, podem ser fulminantes e fatais; elas geralmente surgem sem um histórico óbvio de trauma. A maioria dos casos de mionecrose clostridial equina está associada à injeção intramuscular. Este artigo apresenta o primeiro relato de miosite clostridial por C. perfringens em jumento após injeção de flunixina meglumina no pescoço, descrevendo os achados clínicos, necroscópicos e histopatológicos. Isolamento bacteriano e testes bioquímicos confirmaram o diagnóstico definitivo de C. perfringens.
Assuntos
Animais , Infecções por Clostridium/veterinária , Clostridium perfringens/isolamento & purificação , Equidae/microbiologia , Meglumina/efeitos adversos , Miosite/veterinária , Injeções Intramusculares/veterináriaResumo
Background: Malignant edema is one of the terms used to designate severe necrotizing syndromes in soft tissues by Clostridium spp. which are potentially fatal in farm animals. These species are responsible for myonecrosis, belonging to the group of histotoxic clostridia, and may also culminate in toxemia with the worsening of the lesions. These clostridia and their spores require a gateway such as wounds on mucous membranes or skin, which may occur due to shear, tail cut, injuries during delivery, castration or injections by contaminated needles. This report aims to describe the clinicalpathological findings of a case of malignant edema caused by Clostridium perfringens type A in an equine. Case: A female equine, undefined breed, used as traction animal, had a history of abdominal pain. According to the requisitioning veterinary, the tutor reused needles for medication. On palpation, a compact mass was noticed in the pelvic f lexure, as well as edema on the region of head and neck with crackling areas. After surgical intervention for compactation correction, the animal did not show anesthetic recovery and was submited to euthanasia. Tissue samples were collected, f ixed in 10% buffered formalin solution, routinely processed for histopathology and stained with hematoxylin and eosin and Gram stain. Samples of serous-sanguineous edema fluid and fragments of the abdominal muscles and neck were collected. The samples were kept under refrigeration and sent for microbiological culture. Necropsy showed the subcutaneous region of the pectoral was markedly gelatinous and yellowish (edema) and subcutaneous emphysema characterized by accumulation of serous-sanguineous fluid and gas bubbles. In microscopy, we verified fibrous-haemorrhagic...
Assuntos
Feminino , Animais , Cavalos/microbiologia , Clostridium perfringens/isolamento & purificação , Edema/veterinária , Infecções por Clostridium/diagnóstico , Infecções por Clostridium/veterinária , Enfisema Pulmonar/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterináriaResumo
Background: Malignant edema is one of the terms used to designate severe necrotizing syndromes in soft tissues by Clostridium spp. which are potentially fatal in farm animals. These species are responsible for myonecrosis, belonging to the group of histotoxic clostridia, and may also culminate in toxemia with the worsening of the lesions. These clostridia and their spores require a gateway such as wounds on mucous membranes or skin, which may occur due to shear, tail cut, injuries during delivery, castration or injections by contaminated needles. This report aims to describe the clinicalpathological findings of a case of malignant edema caused by Clostridium perfringens type A in an equine. Case: A female equine, undefined breed, used as traction animal, had a history of abdominal pain. According to the requisitioning veterinary, the tutor reused needles for medication. On palpation, a compact mass was noticed in the pelvic f lexure, as well as edema on the region of head and neck with crackling areas. After surgical intervention for compactation correction, the animal did not show anesthetic recovery and was submited to euthanasia. Tissue samples were collected, f ixed in 10% buffered formalin solution, routinely processed for histopathology and stained with hematoxylin and eosin and Gram stain. Samples of serous-sanguineous edema fluid and fragments of the abdominal muscles and neck were collected. The samples were kept under refrigeration and sent for microbiological culture. Necropsy showed the subcutaneous region of the pectoral was markedly gelatinous and yellowish (edema) and subcutaneous emphysema characterized by accumulation of serous-sanguineous fluid and gas bubbles. In microscopy, we verified fibrous-haemorrhagic...(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Clostridium perfringens/isolamento & purificação , Infecções por Clostridium/diagnóstico , Infecções por Clostridium/veterinária , Cavalos/microbiologia , Edema/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Enfisema Pulmonar/veterináriaResumo
This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.
Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...
Assuntos
Feminino , Animais , Clostridium perfringens , Enterotoxemia/diagnóstico , Enterotoxemia/epidemiologia , Enterotoxemia/patologia , Ovinos , Surtos de Doenças/veterináriaResumo
This work describes the first Brazilian laboratory-confirmed outbreak of enterotoxemia caused by Clostridium perfringens type D in sheep, which occurred in the state of Paraná. We address the epidemiological aspects involved, the diagnostic modalities employed, and the clinical signs and pathological findings observed. Eight healthy pregnant female sheep with no history of vaccination for clostridiosis presented with a history of abrupt feeding changes and neurological manifestations that quickly evolved to illness, coma and death. Four other females with clinical neurological signs were referred to the Veterinary Hospital of the Universidade Federal do Paraná, Palotina Sector. These animals presented with lethargy, motor incoordination, opisthotonus, pedal movements, muscle tremors, spastic paralysis, bruxism, mandibular trismus, sialorrhea, hyperexcitability and the inability to stand. They were examined and euthanized due to the seriousness of the clinical picture with an unfavorable prognosis. We performed gross anatomical and microscopic analyses of the organs and intestinal contents. We also performed bacterial isolation with molecular typing. From the intestinal contents, we detected toxins by means of the seroneutralization technique in mice. At necropsy, we noted pulmonary edema (2/4), necrotizing enteritis (4/4) and hyperemia of the leptomeninges (1/4). Microscopically, we observed lymphohistiocytic interstitial pneumonia, necrotic enteritis associated with the presence of rods, and nephrosis with interstitial lymphohistiocytic nephritis. No significant brain lesions were observed. Using serum neutralization, we identified epsilon toxin in the intestinal contents of all four animals. C. perfringens type D was identified. Based on the history, clinical signs, postmortem findings, and laboratory confirmation of the presence of epsilon toxin, we concluded that C. perfringens type D enterotoxemia caused this outbreak of sheep deaths.(AU)
Este trabalho descreve o primeiro surto brasileiro com confirmação laboratorial de enterotoxemia em ovinos por Clostridium perfringens tipo D, ocorrido no estado do Paraná, abordando os aspectos epidemiológicos envolvidos, sinais clínicos observados, achados patológicos e diagnóstico empregado. Oito fêmeas ovina, gestantes, em bom estado corporal e com histórico de mudanças bruscas na alimentação, sem histórico de vacinação para clostridioses, apresentaram manifestações clínicas neurológicas que logo evoluíram para decúbito, coma e morte. Outras quatro fêmeas apresentaram os sinais clínicos neurológicos e foram encaminhadas ao Hospital Veterinário da Universidade Federal do Paraná, setor Palotina. Os animais foram examinados e submetidos à eutanásia devido à gravidade do quadro clínico e prognóstico desfavorável. Destes quatro animais foram coletados fragmentos de órgãos e do conteúdo intestinal. Foi realizada análise macroscópica e microscópica dos órgãos, bem como isolamento bacteriano, tipificação molecular do agente e a detecção das toxinas por meio da técnica de soroneutralização em camundongos a partir do conteúdo intestinal. Os quatro ovinos examinados apresentaram letargia, incoordenação motora, opistótono, movimentos de pedalagem, tremores musculares, paralisia espástica, bruxismo, trismo mandibular, sialorréia, hiperexcitabilidade e decúbito. Na necropsia, constatou-se edema pulmonar (2/4), enterite necrohemorrágica (4/4) e hiperemia de leptomeninges (1/4). Microscopicamente havia pneumonia intersticial linfohistiocitária, enterite necrótica associada com a presença de bastonetes e nefrose com nefrite intersticial linfohistiocitária. Não foram observadas lesões encefálicas dignas de nota em função do quadro agudo da doença. Por meio da soroneutralização foi possível identificar a presença da toxina épsilon no conteúdo intestinal dos quatro...(AU)
Assuntos
Animais , Feminino , Ovinos , Clostridium perfringens , Enterotoxemia/epidemiologia , Enterotoxemia/patologia , Enterotoxemia/diagnóstico , Surtos de Doenças/veterináriaResumo
O Botulismo é uma doença causada pela ação da toxina produzida pelo Clostridium botulinumque age no sistema nervoso periférico causando paralisia flácida devido à interrupção da transmissão neuromuscular. Adiciona-se aos sintomas: o decúbito externa ou lateral, visão dupla, turva, além de anorexia, falta de coordenação e ataxia. Em ruminantes, a transmissão dessa doença ocorre principalmente pela ingestão de toxina via alimentos incorretamente armazenados (silagem, ração e feno) e carcaças abandonada nas pastagens. Está diretamente relacionada à osteofagia, decorrente da deficiência mineral (fósforo) nos solos e consequentemente nas forrageiras. O diagnóstico é baseado no histórico e quadro clínico-patológico e o tratamento no fornecimento, o mais breve possível, de solução saturada de hidróxido de magnésio e a administração de soro antibotulínico a fim de facilitar a eliminação da toxina circulante na musculatura do animal. Entretanto, nos quadros mais graves da doença a letalidade em geral pode chegar a 100%. Sendo assim, o objetivo desse trabalho é fornecer informações descritivas sobre as principais causas, sintomas, tratamento e prevenção do Botulismo em búfalos.(AU)
Botulism is a disease caused by the toxin produced by Clostridium botulinumthat acts on the peripheral nervous system causing flaccid paralysis due to the interruption of the neuromuscular transmission. Adds to the symptoms: external or lateral decubitus, doube vision, blurred, besides anorexia, lack of coordination and ataxia. In ruminants, the transmission of this disease occurs mainly by the ingestion of toxin via improperly stored food (silage, feed and hay) and abandoned carcasses in the pastures. It is directly related to osteophage, due to mineral deficiency (phosphorus) in soils and consequently in forages. Thus, the spore develops producing toxins that permeate the porous bones, tendons and ligaments which are later ingested by the animals. The diagnosis is based on the history and clinical-pathological picture and treatment in the shortest possible supply of saturated magnesium hydroxide solution and the administration of antibotulin serum in order to facilitate the elimination of the circulating toxin in the musculature of the animal. However, in the most severe cases of the disease, lethality in general can reach 100%. Thus, the objective of this work is to provide descriptive information on the main causes, symptoms, treatment and prevention of botulism in buffaloes.(AU)
El botulismo es una enfermedad causada por la acción de la toxina producida por el Clostridium botulinum que actúa en el sistema nervioso periférico causando parálisis flácida debido a la interrupción de la transmisión neuromuscular. Se agrega a los síntomas: el decúbito externo o lateral, visión doble, turbia, además de anorexia, falta de coordinación y ataxia. En rumiantes, la transmisión de esta enfermedad ocurre principalmente por la ingestión de toxina vía alimentos incorrectamente almacenados (silaje, ración y heno) y canales abandonadas en los pastizales. Está directamente relacionada a la osteofagia, derivada de la deficiencia mineral (fósforo) en los suelos y consecuentemente en las forrajeras. Así, la espora se desarrolla produciendo toxinas que impregnan en los huesos porosos, tendones y ligamentos que serán posteriormente ingeridos por los animales. El diagnóstico se basa en el historial y cuadro clínico-patológico y el tratamiento en el suministro lo más breve posible de solución saturada de hidróxido de magnesio y la administración de suero antibotulínico para facilitar la eliminación de la toxina circulante en la musculatura del animal. Sin embargo, en los cuadros más graves de la enfermedad la letalidad en general puede llegar al 100%. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es proporcionar información descriptiva sobre las principales causas, síntomas, tratamiento y prevención del botulismo en búfalos.(AU)
Assuntos
Animais , Búfalos , Botulismo/diagnóstico , Botulismo/etiologia , Botulismo/prevenção & controle , Botulismo/veterinária , Infecções por Clostridium/veterinária , Clostridium botulinum , NeurotoxinasResumo
O Botulismo é uma doença causada pela ação da toxina produzida pelo Clostridium botulinumque age no sistema nervoso periférico causando paralisia flácida devido à interrupção da transmissão neuromuscular. Adiciona-se aos sintomas: o decúbito externa ou lateral, visão dupla, turva, além de anorexia, falta de coordenação e ataxia. Em ruminantes, a transmissão dessa doença ocorre principalmente pela ingestão de toxina via alimentos incorretamente armazenados (silagem, ração e feno) e carcaças abandonada nas pastagens. Está diretamente relacionada à osteofagia, decorrente da deficiência mineral (fósforo) nos solos e consequentemente nas forrageiras. O diagnóstico é baseado no histórico e quadro clínico-patológico e o tratamento no fornecimento, o mais breve possível, de solução saturada de hidróxido de magnésio e a administração de soro antibotulínico a fim de facilitar a eliminação da toxina circulante na musculatura do animal. Entretanto, nos quadros mais graves da doença a letalidade em geral pode chegar a 100%. Sendo assim, o objetivo desse trabalho é fornecer informações descritivas sobre as principais causas, sintomas, tratamento e prevenção do Botulismo em búfalos.
Botulism is a disease caused by the toxin produced by Clostridium botulinumthat acts on the peripheral nervous system causing flaccid paralysis due to the interruption of the neuromuscular transmission. Adds to the symptoms: external or lateral decubitus, doube vision, blurred, besides anorexia, lack of coordination and ataxia. In ruminants, the transmission of this disease occurs mainly by the ingestion of toxin via improperly stored food (silage, feed and hay) and abandoned carcasses in the pastures. It is directly related to osteophage, due to mineral deficiency (phosphorus) in soils and consequently in forages. Thus, the spore develops producing toxins that permeate the porous bones, tendons and ligaments which are later ingested by the animals. The diagnosis is based on the history and clinical-pathological picture and treatment in the shortest possible supply of saturated magnesium hydroxide solution and the administration of antibotulin serum in order to facilitate the elimination of the circulating toxin in the musculature of the animal. However, in the most severe cases of the disease, lethality in general can reach 100%. Thus, the objective of this work is to provide descriptive information on the main causes, symptoms, treatment and prevention of botulism in buffaloes.
El botulismo es una enfermedad causada por la acción de la toxina producida por el Clostridium botulinum que actúa en el sistema nervioso periférico causando parálisis flácida debido a la interrupción de la transmisión neuromuscular. Se agrega a los síntomas: el decúbito externo o lateral, visión doble, turbia, además de anorexia, falta de coordinación y ataxia. En rumiantes, la transmisión de esta enfermedad ocurre principalmente por la ingestión de toxina vía alimentos incorrectamente almacenados (silaje, ración y heno) y canales abandonadas en los pastizales. Está directamente relacionada a la osteofagia, derivada de la deficiencia mineral (fósforo) en los suelos y consecuentemente en las forrajeras. Así, la espora se desarrolla produciendo toxinas que impregnan en los huesos porosos, tendones y ligamentos que serán posteriormente ingeridos por los animales. El diagnóstico se basa en el historial y cuadro clínico-patológico y el tratamiento en el suministro lo más breve posible de solución saturada de hidróxido de magnesio y la administración de suero antibotulínico para facilitar la eliminación de la toxina circulante en la musculatura del animal. Sin embargo, en los cuadros más graves de la enfermedad la letalidad en general puede llegar al 100%. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo es proporcionar información descriptiva sobre las principales causas, síntomas, tratamiento y prevención del botulismo en búfalos.
Assuntos
Animais , Botulismo/diagnóstico , Botulismo/etiologia , Botulismo/prevenção & controle , Botulismo/veterinária , Búfalos , Clostridium botulinum , Infecções por Clostridium/veterinária , NeurotoxinasResumo
Clostridium perfringens tem sido classificado como principal agente patogênico gastrointestinal em potros com até 10 dias de idade, apesar dos quadros de enterocolites serem mais comuns em neonatos, animais jovens e adultos também podem ser acometidos. O quadro clínico que se manifesta na forma de cólica, diarreia sanguinolenta e evolui rapidamente para choque circulatório, é causado por ação da toxina (CPB) de C. perfringens tipo C. Esse agente bacteriano também está associado a graves quadros de mionecrose, geralmente fatais, por envolvimento da toxina (CPA) de C. perfringens tipo A. Para equinocultura, a importância dessas enfermidades deve-se a elevada mortalidade e a inexistência de vacinas comerciais, que garantam a imunização, principal forma de prevenção. Assim o objetivo deste trabalho foi ser o pioneiro em utilizar e avaliar a longevidade da resposta imune humoral no período de um ano, em equinos imunizados com diferentes concentrações (100, 200 e 400µg) de toxóides recombinantes CPA e CPB de C. perfringens tipos A e C, respectivamente, bem como comparar aos resultados obtidos em animais inoculados com toxóide comercial. Foram utilizados 50 animais da espécie equina, raça Mangalarga Marchador, de ambos os sexos, a partir de um ano de idade, sem histórico vacinal contra clostridioses. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos de dez equinos: Grupo Vacina Recombinante 100µg (G1), Grupo Vacina Recombinante 200µg (G2), Grupo Vacina Recombinante 400µg (G3), Grupo Vacina Comercial (G4) e Grupo Controle Negativo (G5). Os equinos do G1, G2 e G3 foram vacinados com a vacina recombinante contendo diferentes concentrações dos toxóides recombinantes CPA e CPB 100, 200 e 400µg, respectivamente, G4 com vacina comercial e o G5 recebeu solução salina estéril (NaCl 0,9%). Todos os animais receberam duas doses de 2ml, por via intramuscular, na tábua do pescoço, nos dias zero e 28 após a primeira dose. As amostras de soro sanguíneo foram coletadas nos dias zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 e 360 após a primeira vacinação. Os soros obtidos, após centrifugação foram submetidos a técnica de soroneutralização em camundongos. O teste de potência realizado no dia 56, demonstrou que as formulações de 200 e 400µg foram capazes de induzir resposta imune em todos os equinos inoculados, de acordo com os níveis exigidos na legislação, assim como, ao avaliar a longevidade (teste de eficiência) da resposta imune vacinal, as mesmas concentrações apresentaram níveis de anticorpos detectáveis até o dia 180, não havendo diferenças significativas entre os resultados obtidos. A vacina recombinante nas concentrações acima de 200µg foi capaz de estimular resposta imune humoral satisfatória em equinos.
Clostridium perfringens has been rated as the main gastrointestinal pathogen in foals up to age 10 days old, although enterocolitis is more common in neonates, young and adult animals may also be affected. The clinical picture which manifests itself in a form of colic, bloody diarrhoea and progresses rapidly towards a circulatory shock, is caused by the action of toxin (CPB) of C. perfringens type C. This bacterial agent is also associated with severe myonecrosis, usually fatal, due to the involvement of toxin (CPA) of C. perfringens type A. For equinoculture, the importance of these diseases is due to the high mortality and the absence of commercial vaccines, which ensure immunization, the main form to prevent. Therefore, the aim of the present work was to be pioneer in using and to analyse the longevity of humoral immune response in the period of one year, in horses immunized with different concentrations (100, 200 and 400µg) of recombinant toxoids CPA and CPB of C. perfringens types A and C, respectively, as well as compare to results acquired from inoculated animals with commercial toxoid. Fifty horses were used, Mangalarga Marchador breed, of both sexes, from the age of one year and up, no vaccine history against clostridiosis. The animals were randomly divided into five groups of ten horses: Recombinant Vaccine Group 100µg (G1), Recombinant Vaccine Group 200µg (G2), Recombinant Vaccine Group 400µg (G3), Commercial Vaccine Group (G4) and Negative Control Group (G5). G1, G2 and G3 horses have been vaccinated with the recombinant vaccine containing different concentrations of recombinant toxoids CPA and CPB 100, 200 and 400µg, respectively, G4 with commercial vaccine and G5 received sterile saline (NaCl 0.9%). All animals received two doses of 2ml, intramuscularly, in the neck, on days zero and 28 after the first dose. Blood serum samples were collected on days zero, 28, 56, 90, 120, 150, 180, 210, 240, 270, 300, 330 and 360 after the first vaccination. The serum obtained after centrifugation was submitted to the serum neutralization technique in mice. The potency test held on day 56 has demonstrated that the formulations of 200 and 400µg were able to induce an immune response in all inoculated horses, according to levels required by legislation, as well as, when assessing the longevity (efficiency test) of the immune response, the same concentrations presented levels of detectable antibodies until day 180, without significant differences between the results obtained. The recombinant vaccine in above concentrations 200 µg was able to stimulate a satisfactory humoral immune response in horses.
Resumo
A saúde intestinal dos frangos de corte é um fator importante que influencia a produtividade na avicultura de forma que, uma mucosa intestinal prejudicada tem baixa digestão e absorção de nutrientes e isso afetará as funções fisiológicas do hospedeiro, resultando em um sistema imunológico enfraquecido, mais susceptível a doenças e, consequentemente, causará perda econômica e de bem-estar animal. Desde que os antibióticos foram banidos na produção animal de vários países, métodos alternativos foram desenvolvidos para melhorar a performance dos frangos, como por exemplo os probióticos, que estimulam o crescimento de bactérias produtoras de ácido-lático consideradas benéficas para o intestino, aumentam o ganho de peso, promovem o equilíbrio da microbiota, melhoram a morfologia intestinal e modulam a imunidade intestinal. Neste trabalho foi realizado um estudo sobre probióticos e um experimento específico sobre os efeitos do Bacillus subtilis DSM 29784. O experimento foi realizado com frangos de corte desafiados com C. perfringens e Eimeria spp. ou não desafiados, e suplementados com B. subtilis DSM 29784, enramicina ou não-suplementados. Aos 7, 14 e 21 dias de idade foi avaliada a performance das aves, a saúde intestinal com o método histológico I See Inside (ISI) e a reposta imunológica com quantificação celular de linfócitos T (CD4+, CD8+ e macrófagos). Não foi encontrado diferença estatística para resultado de performance em aves suplementadas com o probiótico ou com a Enramicina, apenas entre desafiados e não desafiados. O resultado do ISI demonstrou maior escore de índice histológico em aves desafias, quando comparadas com não desafiadas em todos os períodos. O grupo desafiado e suplementado com B. subtilis DSM 29784 apresentou menor escore total ISI aos 7 e 14 dias quando comparado com o desafiado e não-suplementado. Aos 21 dias, o grupo não-desafiado e suplementado com Enramicina teve o menor escore total ISI dentre todos os grupos. Aves suplementadas com o probiótico tiveram um menor escore de células CD4+ e CD8+ aos 7 dias, um pico aos 14 e posterior queda aos 21 dias. A contagem de macrófagos foi elevada em aves não desafiadas aos 7 dias de idade. Os resultados deste experimento demonstraram que o probiótico teve um impacto positivo na saúde intestinal de frangos de corte desafiados.
Chicken intestinal health is an important factor that concerns aviculture productivity somehow that disruptive mucosa has poorer nutrient digestion and absorption that will physiologically affect the host resulting in weaker immunological system, more susceptible to diseases and, consequently will cause economical losses and failed animal well-being. Since antibiotic ban in animal production of many countries, alternative methods have been developed to enhance broiler chicken performance, for instance probiotics stimulate the grown of lactic-acid producer bacterias considered beneficial for intestinal health, improving body weight gain, promoting microbiota balance, enhancing intestinal morphology and modulating intestinal immunity. In this dissertation it was accomplished a study about probiotics and then it was performed a trial specifically on Bacillus subtilis DSM 29784. In the experiment it was evaluated broiler chickens challenged or not with C. perfringens e Eimeria spp. and supplemented with B. subtilis DSM 29784 or Enramycin or not supplemented at all. At 7, 14 and 21 days of age it was evaluated birds performance, intestinal health with the histological method I See Inside (ISI) and immunological response through lymphocyte T cell (CD4+, CD8+ and macrophage) quantification. No statistical difference was found on performance in birds supplemented or not with probiotic or Enramycin, except among challenged or non-challenged birds. ISI results demonstrated higher total score in challenged birds when compared to non-challenge ones at all ages. The challenged group supplemented with B. subtilis DSM 29784 presented lower ISI total score at 7 and 14 days, when compared to challenged and non-supplemented group. At 21 days, the non-challenged and supplemented with Enramycin group had the lowest ISI total score among all groups. Birds supplemented with the probiotic had a lower CD4+ and CD8+ cell counts at 7 days, followed by a peak at 14 days and posterior decrease at 21 days. Macrophage cell counts was higher in non-challenged birds at 7 days of age. Results demonstrated that B. subtilis DSM 29784 had a positive impact over intestinal health of challenged birds.
Resumo
This study aimed to assess and standardize the ELISA and modified ToBI test in vitro methods in order to verify the potency of epsilon toxicoid in comparison with the in vivo TCP method. The following epsilon toxoids were used: NIBSC standard from batches 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 and 378/07. These were evaluated using a TCP test, ELISA and ToBI tests. The results indicate that the correlation ratio between the dilutions of standard NIBSC toxicoid and absorbance values of 89.44% obtained with the ELISA method support the use of the curve to evaluate epsilon toxoids. However, it was observed that the absorbance values were similar for all toxoids, thus presenting no significant difference between higher and lower concentration toxoids. For the ToBI test, the correlation ratio of 96.76, obtained in the curve pattern, demonstrates the effectiveness of the curve to be used in the epsilon toxoid evaluation. The correlation ratio between the titration degrees of toxoids obtained through TCP and ToBI tests was higher than 90%. It is concluded that the type of ELISA test used does present discriminative power for toxoids with different concentrations, which does not support the use of this technique for such a purpose. The ToBI test can be used as a screening method for it is sensitive and effective to detect epsilon toxicoid produced by C. perfringens type D.(AU)
Teve-se por objetivo avaliar e padronizar as metodologias in vitro, ELISA e ToBI-test modificado, para a análise de toxoide épsilon, em comparação com a metodologia in vivo TCP. Foram utilizados os seguintes toxoides épsilon: padrão NIBSC e os lotes 375/07, 532/08, 551/08, 373/07 e 378/07, os quais foram avaliados por métodos in vivo, TCP, e in vitro, ELISA e ToBI-test. A análise do título de toxoide épsilon por meio dos métodos in vitro foi realizada a partir de uma curva-padrão, estabelecida previamente. Os principais resultados mostram que os valores de absorbância foram semelhantes para todos os toxoides, não apresentando diferença significativa entre os toxoides mais concentrados e menos concentrados. No ToBI-test, o coeficiente de correlação de 96,76%, obtido na curva-padrão, demonstra a eficiência da curva para avaliação do toxoide épsilon. O coeficiente de correlação entre os títulos de toxoide obtidos pelo TCP e ToBI-test foi superior a 90%. Conclui-se que o tipo de ELISA utilizado não apresenta poder discriminativo para toxoides com diferentes concentrações, inviabilizando a técnica para esse fim. O ToBI-test pode ser utilizado como um método de triagem sensível e eficaz para a detecção de toxoide épsilon de C. perfringens tipo D.(AU)
Assuntos
Clostridium/isolamento & purificação , Toxoides/antagonistas & inibidores , Vacinas , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Imunoensaio/métodosResumo
Clostridioides (Clostridium) difficile é um dos maiores causadores de diarreia neonatal em suínos e estudos tem apontado para um possível potencial zoonótico deste microrganismo. Apesar da importância do patógeno, não existem medidas específicas para a prevenção e controle da infecção por C. difficile (ICD). Desta forma, o objetivo do presente estudo foi caracterizar genotipicamente e avaliar o potencial de proteção de uma estirpe não toxigênica de C. difficile (NTCD), nomeada de Z31, contra a ICD em suínos. Para tal, o estudo foi dividido em cinco etapas: (1) Caracterização genotípica da estirpe Z31; (2) Avaliação da capacidade preventiva da estirpe Z31 contra a ICD em modelo experimental suíno; (3) Avaliação da capacidade preventiva da estirpe Z31 contra a ICD em uma granja comercial; (4) Avaliação de cinco meios de cultura para a produção e esporulação da estirpe Z31; e (5) Avaliação da viabilidade temporal de esporos liofilizados da estirpe Z31. O sequenciamento genômico revelou que a estirpe Z31 possui um cromossomo circular de 4.298.263 pares de base (bp), contendo genes responsáveis por produção e estabilidade dos esporos (spo0A), aderência intestinal (slpA) e formação de biofilme (fliD), porém, ausência dos genes codificadores das toxinas. Em modelo experimental em suínos neonatos, a Z31 preveniu a ICD, reduzindo os sinais clínicos, as lesões macro e microscópicas e a eliminação fecal do agente. Em uma granja comercial, mesmo na presença de outros enteropatógenos, a Z31 reduziu a ocorrência de ICD, a eliminação fecal de C. difficile toxigênico e a ocorrência de diarreia neonatal suína. Os meios BHI e RCM proporcionaram as maiores taxas de crescimento in vitro da estirpe Z31, atingindo concentrações de 6,57 × 106 UFC/mL com proporção de esporos superiores a 98%. Quando liofilizada, a estirpe Z31 manteve uma viabilidade aceitável tanto em temperatura ambiente quanto resfriada, de forma que 40-50% da carga total ainda se encontrava viável após 2 anos de armazenamento. Como conclusão, a estirpe Z31 foi capaz de prevenir a ICD em suínos e demonstrou características desejáveis para o seu potencial uso comercial.
Clostridioides (Clostridium) difficile is one of the main causes of porcine neonatal diarrhea and studies has shown the possible zoonotic potential of this microorganism. Despite the importance of this pathogen, there are no specific measures for the prevention and control of C. difficile infection (CDI). Thus, the aim of the present study was to characterize genotypically and evaluate the protective potential of a non-toxigenic C. difficile strain (NTCD), named Z31, against CDI in piglets. For this purpose, the study was divided into five stages: (1) Genotypic characterization of the strain Z31; (2) Evaluation of the preventive capacity of the strain Z31 against the CDI in experimental pig model; (3) Evaluation of the preventive capacity of the strain Z31 against CDI in a commercial farm; (4) Evaluation of five culture media for the production and sporulation of the strain Z31; and (5) Evaluation of the temporal viability of freeze-dried spores of the strain Z31. Genomic sequencing revealed that the strain Z31 has a circular chromosome of 4,298,263 base pairs (bp) containing genes responsible for spore production and stability (spo0A), intestinal adhesion (slpA) and biofilm formation (fliD), but absence of toxins encoding genes. In an experimental model in neonatal pigs, the strain Z31 prevented CDI, reducing clinical signs, macro and microscopic lesions and fecal elimination of the agent. In a commercial farm, even in the presence of other enteropathogens, the Z31 reduced the occurrence of CDI, the fecal elimination of toxigenic C. difficile and the occurrence of neonatal porcine diarrhea. The BHI and RCM media provided the highest in vitro growth rates of the strain Z31, reaching concentrations of 6.57 × 106 CFU/ml with spore ratio greater than 98%. After lyophilization, the strain Z31 maintained acceptable viability at both, ambient and cooled temperatures, so that 40-50% of the total charge was still viable after 2 years of storage. In conclusion, the strain Z31 was able to prevent CDI in pigs and demonstrated desirable characteristics for its potential commercial use.
Resumo
As clostridioses formam o grupo de infecções e intoxicações causadas por micro-organismos anaeróbios do gênero Clostridium. Dentre estas enfermidades, a principal doença que determina mionecrose é o carbúnculo sintomático, uma infecção endógena e aguda que acomete principalmente os bovinos, cujo agente etiológico é Clostridium chauvoei. O controle desta enfermidade se baseia em medidas adequadas de manejo e vacinações sistemáticas de todo o rebanho. As vacinas contra o carbúnculo sintomático comercializadas no Brasil são, no geral, compostas de múltiplos antígenos e seguem as normas para o controle da qualidade e eficiência definidas na legislação publicada pela Secretaria de Defesa Agropecuária (SDA) do Ministério de Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). No entanto, são escassos os trabalhos com evidências científicas que comprovem a eficiência da vacina, assim como trabalhos que indiquem o grau de similaridade entre cepas de C. chauvoei utilizadas na produção destas vacinas, cepas de maior ocorrência no campo e a cepa padrão utilizada no teste de eficiência da vacina pelo MAPA. Da mesma forma os relatos acerca de falhas vacinais são informais e as circunstâncias destas falhas não são claramente elucidadas. Os principais fatores de virulência de C. chauvoei são a neuraminidase, citotoxina A (CctA) e a flagelina, sendo que a CctA parece ser o principal. Esta tese teve por objetivo avaliar a eficácia protetiva de vacinas comerciais frente ao desafio com C. chauvoei, bem como realizar a comparação genômica das cepas utilizadas no desafio vacinal (manuscrito 2). A diversidade molecular foi investigada, a partir do sequenciamento parcial dos genes da neuraminidase (nanA), CctA (cctA) e flagelina (fliC) de dezessete cepas de C. chauvoei isoladas de casos clínicos em bovinos (manuscrito 3). Também pretendeu à comparação genômica de seis cepas isoladas de casos de carbúnculo sintomático no Brasil com vistas a pesquisar diferenças moleculares na única cepa com apresentação clínica visceral (manuscrito 4). Dessa forma, discutir as implicações da caracterização molecular e antigênica no entendimento do carbúnculo sintomático, e subsidiar futuras pesquisas a fim de melhorar o controle da doença. Concluímos que o desempenho equivalente das duas cepas de C. chauvoei após o desafio in vivo e a incapacidade de infectar os animais vacinados estão correlacionados com a homologia genética das cepas, sugerindo que as falhas vacinais não estão relacionadas à variabilidade antigênica. O sequenciamento parcial dos genes nanA e cctA mostrou alta homologia entre as cepas. Por essa razão, estes antígenos solúveis são bons candidatos a antígenos vacinais. Além disso, três alelos foram detectados no gene fliC. Na comparação genômica as seis cepas brasileiras se mostraram altamente conservadas, tal como foi observado no sequenciamento parcial dos genes e na comparação das cepas utilizadas no desafio vacinal. Os resultados apresentados nesta tese podem ser um indicativo de que neste momento evolutivo C. chauvoei não está sendo desafiado a desenvolver mutações
Clostridioses are the group of infections and intoxications caused by anaerobic microorganisms of the genus Clostridium. Among these diseases, the main disease that causes myonecrosis is blackleg, an endogenous and acute infection that mainly affects cattle, whose etiological agent is Clostridium chauvoei. Control of this disease is based on adequate management measures and systematic vaccinations of herd. Vaccines against blackleg marketed in Brazil are, in general, composed of multiple antigens and follow the standards for quality and efficiency control defined in the legislation published by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA). However, there are few studies with scientific evidence to prove the effectiveness of the vaccine, as well as studies indicating the degree of similarity between strains of C. chauvoei used in the production of these vaccines, strains occurring in the field and the standard strain. Likewise reports of vaccine failures are informal and the circumstances of these failures are not clearly elucidated. The main virulence factors of C. chauvoei are neuraminidase, cytotoxin A (CctA) and flagellin, and CctA appears to be the main. This thesis aimed to evaluate the protective efficacy of commercial vaccines against the challenge with C. chauvoei, as well as to carry out the genomic comparison of the strains used in the vaccine challenge (manuscript 2). The molecular diversity, from the partial sequencing of the neuraminidase (nanA), CctA (cctA) and flagellin (fliC) genes of seventeen strains of C. chauvoei isolated from clinical cases in cattle was investigated (manuscript 3). It also aimed to the genomic comparison of six strains isolated from cases of blackleg in Brazil with a view to investigate molecular differences in the only strain with visceral clinical presentation (manuscript 4). Thus, to discuss the implications of molecular and antigenic characterization in the understanding of blackleg, and to support future research with the objective of improving disease control. We concluded that the similar performance observed between the strains in challenge in vivo and the inability to infect the vaccinated animals are correlated with the genetic homology of the strains, suggesting that vaccine failures are not related to antigenic variability. Partial sequencing of nanA and cctA genes showed high homology between strains. For this reason, these soluble antigens are good candidates for vaccine antigens. Moreover, three different fliC alleles were detected among the strains studied. In the genomic comparison, the six Brazilian strains were highly conserved, as observed in the partial sequencing of the genes and in the comparison of the strains used in the vaccine challenge. The results presented in this thesis may be indicative that at this evolutionary time C. chauvoei is not being challenged to develop mutations.
Resumo
Clostridium difficile is an emerging enteropathogen of humans and domestic animals. The bacterium was recently confirmed to be present in foals and dogs in Brazil, with some recent studies suggesting that C. difficile is one of the most important causes of piglet diarrhea in the country. Moreover, some reports also suggest the transmission of this microorganism between animals and humans, raising the possibility that C. difficile is a zoonotic disease. Therefore, the aim of the present review is to describe the main features of C. difficile infection in domestic animals and outline the occurrence of the disease in horses, dogs and pigs in Brazil.
Clostridium difficile é considerado um enteropatógeno emergente que acomete humanos e animais domésticos. A presença da doença em equinos e cães já foi relatada no Brasil e trabalhos sugerem que atualmente C. difficile seja um dos principais causadores de diarreia neonatal em suínos no país. Além disso, relatos recentes sugerem a transmissão do agente entre o homem e animais, gerando a hipótese de C. difficile ser um agente zoonótico. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo revisar as principais características da doença, além de fornecer dados recentes sobre a ocorrência no Brasil da infecção por C. difficile nas principais espécies de animais domésticos.
Resumo
Clostridium difficile is an emerging enteropathogen of humans and domestic animals. The bacterium was recently confirmed to be present in foals and dogs in Brazil, with some recent studies suggesting that C. difficile is one of the most important causes of piglet diarrhea in the country. Moreover, some reports also suggest the transmission of this microorganism between animals and humans, raising the possibility that C. difficile is a zoonotic disease. Therefore, the aim of the present review is to describe the main features of C. difficile infection in domestic animals and outline the occurrence of the disease in horses, dogs and pigs in Brazil.
Clostridium difficile é considerado um enteropatógeno emergente que acomete humanos e animais domésticos. A presença da doença em equinos e cães já foi relatada no Brasil e trabalhos sugerem que atualmente C. difficile seja um dos principais causadores de diarreia neonatal em suínos no país. Além disso, relatos recentes sugerem a transmissão do agente entre o homem e animais, gerando a hipótese de C. difficile ser um agente zoonótico. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo revisar as principais características da doença, além de fornecer dados recentes sobre a ocorrência no Brasil da infecção por C. difficile nas principais espécies de animais domésticos.
Resumo
Clostridium difficile is an emerging enteropathogen of humans and domestic animals. The bacterium was recently confirmed to be present in foals and dogs in Brazil, with some recent studies suggesting that C. difficile is one of the most important causes of piglet diarrhea in the country. Moreover, some reports also suggest the transmission of this microorganism between animals and humans, raising the possibility that C. difficile is a zoonotic disease. Therefore, the aim of the present review is to describe the main features of C. difficile infection in domestic animals and outline the occurrence of the disease in horses, dogs and pigs in Brazil.
Clostridium difficile é considerado um enteropatógeno emergente que acomete humanos e animais domésticos. A presença da doença em equinos e cães já foi relatada no Brasil e trabalhos sugerem que atualmente C. difficile seja um dos principais causadores de diarreia neonatal em suínos no país. Além disso, relatos recentes sugerem a transmissão do agente entre o homem e animais, gerando a hipótese de C. difficile ser um agente zoonótico. Com isso, o presente trabalho tem como objetivo revisar as principais características da doença, além de fornecer dados recentes sobre a ocorrência no Brasil da infecção por C. difficile nas principais espécies de animais domésticos.
Resumo
Enterotoxaemia, a common disease that affects domestic small ruminants, is mainly caused by the epsilon toxin of Clostridium perfringens type D. The present study tested four distinct immunization protocols to evaluate humoral response in lambs, a progeny of non-vaccinated sheep during gestation. Twenty-four lambs were randomly allocated into four groups according to age (7, 15, 30 and 45 days), receiving the first dose of epsilon toxoid commercial vaccine against clostridiosis with booster after 30 days post vaccination. Indirect ELISA was performed after the first vaccine dose and booster to evaluate the immune response of the lambs. Results showed that for the four protocols tested all lambs presented serum title considered protective (≥0.2UI/ml epsilon antitoxin antibodies) and also showed that the anticipation of primovaccination of lambs against enterotoxaemia conferred serum title considered protective allowing the optimization of mass vaccination of lambs.(AU)
Enterotoxemia, uma das mais comuns enfermidades que acomete os pequenos ruminantes domésticos, é causada principalmente pela toxina épsilon de Clostridium perfringens tipo D. O presente estudo avaliou a resposta humoral conferida por quatro protocolos distintos de primovacinação na progênie de ovelhas não vacinadas durante a gestação. Vinte e quatro cordeiros foram aleatoriamente divididos em quatro grupos de acordo com a idade (dias) que receberam a primeira dose da vacina comercial contra clostridiose contendo toxóide epsilon na sua formulação. Todos os cordeiros foram vacinados aos 7, 15, 30 ou 45 dias de idade e receberam um reforço da dose 30 dias após a vacinação. A avaliação sorológica dos cordeiros pelo teste de ELISA indireto foi realizada por ocasião da administração da primeira dose da vacina. Os resultados elucidaram não haver comprometimento da resposta imune de cordeiros vacinados tanto aos 7, 15, 30 ou 45 dias de idade associada ao reforço da dose 30 dias após, demonstrando assim que a antecipação da primeira vacinação conferiu proteção aos cordeiros contra a enterotoxemia, permitindo otimizar o planejamento da vacinação em massa dos cordeiros.(AU)
Assuntos
Animais , Cinética , Anticorpos/imunologia , Antitoxinas/toxicidade , Clostridium , Ruminantes/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Imunização/veterináriaResumo
Background: Blackleg is an acute and often fatal infection in bovine caused by the bacterium Clostridium chauvoei. The absence of conclusive diagnosis of blackleg usually occurs due to absence of practical and economical methods to send samples to microbiology laboratory. The goal of this work was to verify the possibility of using ordinary fi lter paper as a practical and economically feasible method for collecting, storing and shipping material to the laboratory to be used in a rapid and direct PCR approach to detect Clostridium chauvoei DNA.Materials, Methods & Results: The PCR technique for the diagnosis of blackleg from common fi lter paper was tested for specifi city, sensitivity and feasibility. To test the specifi city, the papers were impregnated with a suspension of the following microorganisms: C. chauvoei, C. perfringens, C. septicum, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli. To test the sensitivity different concentration of C. chauvoei (ATCC 10092) were pipetted on common fi lter paper. To both test, DNA extraction of impregnated ordinary fi lter paper and their respective controls followed the method previously described and tested under different storage times (0 h, 24 h, 72 h and a week later). To test the feasibility, 12 bovine livers were collected and tissues samples were impregnate on common fi lter paper with suspension of C. cha
Background: Blackleg is an acute and often fatal infection in bovine caused by the bacterium Clostridium chauvoei. The absence of conclusive diagnosis of blackleg usually occurs due to absence of practical and economical methods to send samples to microbiology laboratory. The goal of this work was to verify the possibility of using ordinary fi lter paper as a practical and economically feasible method for collecting, storing and shipping material to the laboratory to be used in a rapid and direct PCR approach to detect Clostridium chauvoei DNA.Materials, Methods & Results: The PCR technique for the diagnosis of blackleg from common fi lter paper was tested for specifi city, sensitivity and feasibility. To test the specifi city, the papers were impregnated with a suspension of the following microorganisms: C. chauvoei, C. perfringens, C. septicum, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli. To test the sensitivity different concentration of C. chauvoei (ATCC 10092) were pipetted on common fi lter paper. To both test, DNA extraction of impregnated ordinary fi lter paper and their respective controls followed the method previously described and tested under different storage times (0 h, 24 h, 72 h and a week later). To test the feasibility, 12 bovine livers were collected and tissues samples were impregnate on common fi lter paper with suspension of C. cha
Resumo
Background: Blackleg is an acute and often fatal infection in bovine caused by the bacterium Clostridium chauvoei. The absence of conclusive diagnosis of blackleg usually occurs due to absence of practical and economical methods to send samples to microbiology laboratory. The goal of this work was to verify the possibility of using ordinary filter paper as a practical and economically feasible method for collecting, storing and shipping material to the laboratory to be used in a rapid and direct PCR approach to detect Clostridium chauvoei DNA. Materials, Methods & Results: The PCR technique for the diagnosis of blackleg from common filter paper was tested for specificity, sensitivity and feasibility. To test the specificity, the papers were impregnated with a suspension of the following microorganisms: C. chauvoei, C. perfringens, C. septicum, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli. To test the sensitivity different concentration of C. chauvoei (ATCC 10092) were pipetted on common filter paper. To both test, DNA extraction of impregnated ordinary filter paper and their respective controls followed the method previously described and tested under different storage times (0 h, 24 h, 72 h and a week later). To test the feasibility, 12 bovine livers were collected and tissues samples were impregnate on common filter paper with suspension of C. chauvoei. The filter paper was stored for 48 h, 72 h and one week. Subsequently, a rapid and direct PCR approach to detect C. chauvoei was performed. All procedures were performed in triplicate and was performed by PCR using the same primers employed to amplify the flic gene encoding flagellin (FliC). There was no cross reaction with any tested microorganism, confirming the specificity of the flic gene previously studied. It was possible to visualize the amplification until the corresponding to 100 CFU. Specific PCR amplification products were visualized in 100% of the trials at 48 h, 70% at 72 h, and 90% within one week of storage at room temperature using direct PCR. Discussion: This report describes a rapid, highly sensitive method for the detection of C. chauvoei DNA from liver tissue bovine samples stored on filter papers. It was observed a high sensitivity and a specificity of 100%. The selection of hepatic tissue was based on previous studies that identified C. chauvoei in this tissue by PCR assays. Besides, blackleg in visceral form can be detected in hepatic tissue but does not in muscle. According to others researchers, the direct PCR procedure exhibits several advantages, such as costs and time reduction through omission of DNA extraction as well as avoid any cross contamination with other agents. However, current substances in the blood and tissues may inhibit the PCR amplification. For this reason, a methanol fixation and preheating the samples before the direct PCR assay was performed, mainly because the amplicon is relatively large (535 bp). Some authors consider the use of direct PCR from filter paper simple and inexpensive which offer a handy tool for epidemiologic studies and to clinicians, particularly in many tropical countries where collection and storage of clinical specimens for this purpose are logistically complicated. Furthermore, this procedure can simplify the material shipment for laboratory diagnosis, since it can also be transported in standard envelops by regular mail. The current results propose the use of the direct PCR from common filter paper as practical and economical alternative to diagnosis of blackleg.
Assuntos
Animais , Doenças dos Bovinos/genética , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Infecções por Clostridium/veterinária , Clostridium chauvoei/isolamento & purificaçãoResumo
This study evaluated the use of the TOBI test as a substitute for the in vivo technique of the mouse serum neutralization test to manage quality control of vaccines against clostridiosis. Serum samples with known concentrations of anti-epsilon antibodies were obtained from 3 sheep immunized with vaccine against C. perfringens type D epsilon toxoid. The main results obtained indicate correlation coefficients above 97%, corroborating literature data. The inter and intraplate coefficients of variation were low (less than 1.3%). In conclusion, the in vitro TOBI test is suitable to evaluate the potency of clostridial vaccines. However, the TOBI test must be first validated before it can replace the in vivo serum neutralization methodology used in mice.