Resumo

In the last few decades, there has been a global increase in the adoption of reptiles as companion animals, mainly turtles and tortoises. Considering the popularity of reptiles as pets in Brazil, and a notable lack of data about potentially pathogenic staphylococci in these animals, this study isolated and evaluate the antimicrobial susceptibility of staphylococcal species from healthy tortoises (Chelonoidis carbonaria) in Brazil. During a 12-month period (February 2019 to February 2020), cloacal swabs from 66 healthy tortoises were collected at the Wild Animals Screening Center in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil. The swabs were plated onto mannitol salt agar for staphylococci isolation, and species identification was performed using MALDI-TOF MS. Antimicrobial susceptibility was investigated using the disk diffusion method, and the presence of the mecA gene was investigated by PCR to detect methicillin resistance. Of the tested animals, 72.7% were positive for staphylococcal isolation. All isolates were coagulase-negative staphylococci (CoNS), and Staphylococcus sciuri (81.3%), and S. xylosus (12.5%) were the most frequently isolated species. The majority of the isolates (56%) were resistant to at least one antimicrobial agent. A high frequency of resistance was observed for penicillin (35.5%) and tetracycline (29.1 %). All strains were susceptible to cefoxitin, chloramphenicol, ciprofloxacin, erythromycin, and gentamicin. All isolates were negative for the mecA gene. The present work suggests that healthy tortoises are mainly colonized by CoNS, especially S. sciuri. Half of the isolates were resistant to at least one antimicrobial, raising questions regarding the possible role of these animals as reservoirs of antimicrobial resistance genes.

Nas últimas décadas, houve um aumento global na adoção de répteis como animais de companhia, principalmente tartarugas e jabutis. Considerando a popularidade dos répteis como animais de estimação no Brasil e a notável falta de dados sobre estafilococos potencialmente patogênicos nesses animais, o objetivo deste estudo foi isolar e avaliar a susceptibilidade antimicrobiana de espécies estafilocócicas de jabutis (Chelonoidis carbonaria) saudáveis no Brasil. Durante um período de 12 meses (fevereiro de 2019 a fevereiro de 2020), suabes cloacais de 66 jabutis saudáveis foram coletados no Centro de Triagem de Animais Silvestres em Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil. Os suabes foram plaqueados em ágar manitol salgado para isolamento de estafilococos e a identificação das espécies foi realizada usando MALDI-TOF MS. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi investigada pelo método de difusão em disco, e a presença do gene mecA foi investigada por PCR para detectar resistência à meticilina. Dos animais testados, 72,7% foram positivos para o isolamento estafilocócico. Todos os isolados eram estafilococos coagulase-negativos (CoNS), sendo Staphylococcus sciuri (81,3%) e S. xylosus (12,5%) as espécies mais frequentemente isoladas. A maioria dos isolados (56%) foi resistente a pelo menos um antimicrobiano. Alta frequência de resistência foi observada para penicilina (35,5%) e tetraciclina (29,1%). Todas as estirpes foram sensíveis à cefoxitina, cloranfenicol, ciprofloxacina, eritromicina e gentamicina. Todos os isolados foram negativos para o gene mecA. O presente trabalho sugere que jabutis saudáveis são colonizados principalmente por CoNS, especialmente S. sciuri. Metade dos isolados foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano, levantando questões sobre o possível papel desses animais como reservatórios de genes de resistência aos antimicrobianos.

Resumo

The present paper is a case report of a one-year old nulliparous Alpine Goat belonging to a dairy goat farm in semi-arid region of Brazil. Both glands were naturally infected by α-hemolytic Staphylococcus simulans and evolved similar clinical signs. The mammary glands presented an acute catarrhal mastitis with systemic clinical signs that responded positively to treatment with gentamicin associated with amoxicillin. The present report suggests the importance of the pathogenic potential of non-aureus Staphylococci strains (NAS) as a cause of clinical mastitis also in nulliparous animals. The isolate showed resistance to tetracycline and contained staphylococcal toxin production genes (sec, sec and TSST-1). Moreover, it has been reported that Staphylococcus simulans is an emerging pathogen in humans causing cutaneous and osteoarticular infections, mainly in those in close contact with farm animals. To the best of our knowledge, this is the first report of a clinical mastitis in a nulliparous goat caused by Staphylococcus simulans(AU)

O presente trabalho é o relato do caso de uma cabra nulípara da raça Parda Alpina, de um ano de idade, pertencente ao Setor de Caprinocultura da Universidade Federal da Paraíba ­ Bananeiras - Brasil. Ambas as glândulas foram naturalmente infectadas por Staphylococcus simulans α-hemolítico. As glândulas mamárias apresentaram mastite aguda catarral com envolvimento sistêmico, respondendo positivamente ao tratamento sistêmico com gentamicina associada a amoxicilina. O presente relato sugere a importância do potencial patogênico de Staphylococcus não-aureus (SNA) como causador de mastite clínica também em animais nulíparos. O isolado mostrou resistência a tetraciclina e continha genes de produção de toxinas estafilocócicas (sec, seg e TSST-1). Além disso, tem sido relatado que Staphylococcus simulans é um patógeno emergente em seres humanos causando infecções cutâneas e osteoarticulares, principalmente naqueles que têm contato íntimo com animais de fazenda. Até onde sabemos, este é o primeiro relato de uma mastite clínica em uma cabra nulípara causada por Staphylococcus simulans.(AU)

Resumo

[...] As bactérias foram isoladas de amostras de leite compostas de todos os quartos mamários de cada vaca após descartar os primeiros três ou quatro jatos de leite. Para acessar os potenciais fatores de risco, características dos animais foram obtidas através de uma entrevista com os produtores. Os exames laboratoriais foram realizados de acordo com as recomendações do National Mastitis Council. Um total de 242 isolados foi obtido de 195 vacas a partir da amostra do rebanho total (251 vacas). A prevalência de infecções foi descrita em grupos de acordo com o perfil epidemiológico: bactérias ambientais, contagiosas e outras. Estas perfizeram 57,3 por cento, 26,3 por cento e 11,2 por cento, respectivamente, dos animais amostrados. Testes de suscetibilidade antimicrobiana contra 12 diferentes antimicrobianos foram realizados em 159 isolados. No total, 30 por cento dos isolados testados mostraram resistência a pelo menos três grupos diferentes de antimicrobianos e foram classificados como multirresistentes. Foram observadas as freqüências mais elevadas de resistência contra a ampicilina para os estafilococos coagulase-negativo, seguida de eritromicina para estafilococos coagulase-positivo e tetraciclina para estreptococos. A análise de regressão logística mostrou uma relação significativa entre a idade das vacas e a presença de estafilococos coagulase-positivo multirresistentes e distribuição de classes diferentes de bactérias nos diferentes estratos etários, o que sugere uma concorrência dinâmica ao longo do tempo (p < 0,05). Animais com três a quatro anos tiveram 13,7 vezes mais chances (IC95 por cento 1,4 - 130,2, p = 0,02) de ter estafilococos coagulase-positivo multirresistentes em comparação com aqueles com dois ou três anos. O tempo de exposição a agentes infecciosos e consequentes terapias sugere uma maior chance de colonização do úbere por patógenos resistentes devido à pressão de seleção repetida durante a vida.

[...] Bacteria were isolated from composite milk samples obtained from all quarters of each cow after discarding the initial three or four streams of milk. To access potential risk factors, animal characteristics were obtained through an interview with the producers. Laboratory tests were done according to National Mastitis Council recommendations. A total of 242 isolates was obtained from 195 cows out of 251 cows sampled. The prevalence of animal infections was described in groups according to the epidemiological profile: environmental, contagious and other bacteria. These were 57.3 percent, 26.3 percent and 11.2 percent, respectively of the sampled animals. Antimicrobial susceptibility tests against 12 different antimicrobials were performed in 159 isolates. Altogether, 30 percent of the isolates tested showed resistance to at least three different antimicrobial groups and were classified as multidrug-resistant. Higher frequencies of resistance were observed against ampicillin to coagulase-negative staphylococci, followed by erythromycin to coagulase-positive staphylococci and tetracycline to streptococci. The logistic regression analysis showed a significant relationship between age of the cows and presence of multidrug-resistant coagulase-positive staphylococci and distribution of different class of bacteria, suggesting a competition dynamic throughout the ages (p < 0.05). Animals with three to four years old had 13.7 times more chances (IC95 percent 1.4 - 130.2; p = 0,02) to have multidrug-resistant coagulase-positive staphylococci compared to those with two to three years. Time of exposure to infectious agents and consequent therapies suggests a greater chance of udder's colonization by resistant pathogens due to repeatedly selection pressure during lifetime.

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Estafilococos coagulase negativa (ECN) são frequentemente isolados de quartos mamários com mastite subclínica, ápice do teto e ambiente. Os fatores espécie-específicos associados à esta infecção ainda não foram identificados e a susceptibilidade difere entre vacas e quartos. Diante disto, foi comparada a viabilidade, produção de espécies reativas de oxigênio (ERO) e fagocitose de neutrófilos sanguíneos frente à distintas cepas de estafilococos, entre vacas em lactação. Até onde se sabe, não existem relatos na literatura sobre esta investigação na espécie alvo, ou seja, bovinos sendo este o principal objetivo deste estudo. Foram utilizadas doze vacas sadias (seis primíparas e seis multíparas) em terço médio de lactação e 50 cepas de estafilococos (38 ECN e doze Staphylococcus aureus) isoladas de diferentes nichos ecológicos. O valor de P < 0.05 foi considerado significativo. Os resultados demonstraram que não houve diferença estatística na viabilidade de neutrófilos (P = 0.55), produção de ERO (P = 0.12) e atividade funcional dos fagócitos (P = 0.33) entre primíparas e multíparas. Foram observadas diferenças estatísticas (P < 0.05) entre os grupos de patógenos de espécies e nichos ecológicos distintos, ao serem comparados com isolados de S. aureus, provenientes de infecção intramamária persistente, considerados padrão. Conclui-se que a variação substancial epidemiológica entre os ECN resulta no surgimento de diferentes perfis de infecção intramamária. Portanto, tem que se é por fatores inerentes aos patógenos.

Coagulase negative staphylococci (CNS) are often isolated from mammary quarters with subclinical mastitis, teat apex and environment. The species-specific factors associated with this infection have not yet been identified and the susceptibility differs between cows and quarters. In view of this, the viability, reactive oxygen species production (ROS) and blood neutrophil phagocytosis were compared to different strains of staphylococci among lactating cows. As far as is known, there are no reports in the literature about this research in the target species, that is, cattle - this being the main objective of this study. Twelve healthy cows (six primiparous and six multiparous) were used in the middle third of lactation and 50 strains of staphylococci (38 CNS and 12 Staphylococcus aureus) isolated from different ecological niches. The value of P < 0.05 was considered significant. The results showed that there was no statistical difference in the viability of neutrophils (P = 0.55), ROS production (P = 0.12) and phagocyte functional activity (P = 0.33) between primiparous and multiparous. Statistical differences (P < 0.05) were observed between groups of species pathogens and distinct ecological niches when compared to isolates of S. aureus from persistent intramammary infection, considered standard. It is concluded that the substantial epidemiological variation among CNS results in the appearance of different profiles of intramammary infection. Therefore, it has to be whether it is due to factors inherent to pathogens

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The present study evaluated the pheno- and genotypical antimicrobial resistance profile of coagulase-negative Staphylococcus (CNS) species isolated from dairy cows milk, specially concerning to oxacillin. Of 100 CNS isolates, the S. xylosus was the prevalent species, followed by S. cohnii, S. hominis, S. capitis and S. haemolyticus. Only 6% were phenotypically susceptible to the antimicrobial agents tested in disk diffusion assay. Penicillin and ampicillin resistance rates were significantly higher than others antimicrobials. Four isolates were positive to mecA gene (4%), all represented by the S. xylosus species. The blaZ gene was detected in 16% of the isolates (16/100). It was noticed that all mecA + were also positive to this gene and the presence of both genes was correlated to phenotypic beta-lactamic resistance. We conclude that CNS species from bovine milk presented significantly distinct antimicrobial resistance profiles, evaluated by phenotypic and genotypic tests, which has implications for treatment and management decisions.

O presente estudo avaliou o perfil fenogenotípico de resistência aos antimicrobianos em espécies de Staphylococcus coagulase-negativo (ECN) isoladas do leite de vacas com mastite, em especial considerando a oxacilina. Dos 100 isolados de ECN, S.xylosus foi a espécie predominante, seguida por S. cohnii, S. hominis, S. capitis and S. haemolyticus Apenas 6% dos isolados foram fenotipicamente suscetíveis aos agentes antimicrobianos testados no ensaio de difusão em disco. O percentual de resistência à penicilina e ampicilina foi significativamente maior que aos outros antimicrobianos. Quatro isolados foram positivos para o gene mecA (4%), sendo todos representados pela espécie S.xylosus. O gene blaZ foi detectado em 16% dos isolados (16/100), sendo todos mecA positivos e a presença de ambos os genes foi correlacionada com a resistência fenotípica aos beta-lactâmicos. Foi possível concluir que as espécies de ECN provenientes de leite bovino apresentaram distintos perfis de resistência antimicrobiana, avaliados por testes fenotípicos e genotípicos, podendo dificultar a adoção de medidas de tratamento e manejo dos animais.

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O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37°C por 18 horas (T2) e congeladas a -20°C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.

Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37°C (T2) and thawing at -20°C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes' milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.

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In this paper we carried out a study about prevalence of the clinically significant coagulase negative staphylococcal (CNS) isolates found in an university hospital. Two hundred four CNS isolates from 191 patients obtained between the period of 1998 to 2002, were studied. About 27 percent (52/191) of the infection cases studied were confirmed as CNS-associated diseases. Blood stream infection (BSI) was the most frequent CNS associated-disease (25 percent; 13/52). The great majority of the BSI was verified in the Neonatal Intensive Care Unit (NICU). The analysis of the 52 patients medical history showed that 85 percent of the BSI was acquired in hospital. Most of the CNS nosocomial infections were associated with the use of indwelling medical devices. The incidence of methicillin-resistance among significant CNS isolates was 38 percent. In this study, a high percentage of exogenous contaminant was verified (60 percent), indicating that contamination of clinical specimens during sample collection is critical.

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O objetivo deste trabalho foi identificar espécies de Staphylococcus (n=100) isoladas de mastite em rebanhos bovinos do Estado de Minas Gerais. Para esta finalidade foram utilizadas reações de PCR empregando oligonucleotídeos iniciadores descritos anteriormente para amplificar genes específicos de S. aureus (femA), S. intermedius (rDNA 16S) e S. hyicus (rDNA 16S-23S) e o sequenciamento do rDNA 16S. De acordo com as reações de PCR, 83 isolados foram identificados como S. aureus, 13 isolados como S. intermedius, dois como S. hyicus e dois isolados não foram identificados. Foram submetidos ao sequenciamento do rDNA 16S seis isolados identificados como S. aureus e os 17 restantes. Os seis isolados identificados como S. aureus confirmaram essa identificação. Dos outros 17 isolados, 13 foram identificados como S. chromogenes e quatro como S. hyicus, com similaridade igual ou superior a 99%. Baseando-se nos resultados da reação de PCR do gene femA e do sequenciamento do rDNA 16S, foram identificados 83 S. aureus, 13 S. chromogenes e quatro S. hyicus. Neste estudo os oligonucleotídeos iniciadores empregados na reação de PCR para S. intermedius não foram específicos, pois amplificaram também S. chromogenes; e os empregados na reação de PCR para S. hyicus não foram sensíveis, pois falharam na identificação de dois isolados de S. hyicus. A identificação definitiva das duas últimas espécies somente foi possível pelo sequenciamento do rDNA 16S.

The objective of this study was to identify the species of 100 isolates of Staphylococcus from mastitis in dairy cows from herds located in the state of Minas Gerais, Brazil. PCR reactions were carried out using specific primers described previously for S. aureus (femA gene), S. intermedius (16S rDNA) and S. hyicus (16S-23S rDNA spacer region). In addition, products of amplification of variable regions of the 16S rDNA gene of the strains were sequenced. According to the results of the PCR, 83 strains were identified as S. aureus, 13 as S. intermedius, two as S. hyicus and two isolates were not identified. The sequencing of 16S rDNA was applied to 23 strains identified by PCR amplifications: six S. aureus and the strains identified as S. intermedius (n=13), S. hyicus (n=2) or not identified (n=2). The sequencing of 16S rDNA confirmed the six strains as S. aureus. The others 17 strains were identified as S. chromogenes (13 isolates) and S. hyicus (four isolates). Each sample was related to a specie according to the smallest E-value and highest similarity (≥ 99%). The identification of S. hyicus and S. chromogenes was accomplished only by 16S rDNA sequencing.

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Food handlers, an important factor in food quality, may contain bacteria that are able to cause foodborne disease. The present study aimed to research coagulase-negative (CNS) and -positive staphylococci (CPS) in 82 food handlers, analyzing nasal and hand swabs, with identification of 62 CNS (75.6 percent) and 20 CPS strains (24.4 percent). Staphylococcal enterotoxins genes were investigated by PCR. In 20 CPS strains, 19 were positive for one or more genes. The percentage of CNS presenting genes for enterotoxins was high (46.8 percent). Despite of the staphylococcal species, the most common gene was sea (35.4 percent), followed by seh and sej (29.2 percent). The detection of new staphylococcal enterotoxins (SEs) genes showed a higher pathogenic potential in this genus. The presence of these gene points out the importance of CNS not only as contaminant bacteria but also as a pathogen.

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Avaliou-se a sensibilidade antimicrobiana in vitro de 121 cepas de estafilococos coagulase-negativa isolada de leite de ovelhas Santa Inês, aos fármacos: penicilina, amoxicilina, ampicilina, estreptomicina, oxaciclina, neomicina, cefalotina, gentamicina e sulfonamida. A resistência à sulfonamida foi a mais frequente (27,3 por cento), seguida pela estreptomicina (14,0 por cento) e pela oxaciclina (14,0 por cento), enquanto da gentamicina (1,6 por cento) foi a menos frequente. Todas as cepas foram sensíveis a pelo menos um antimicrobiano, e 20,3 por cento das cepas apresentaram resistência múltipla. Os resultados mostram a importância de Staphylococci coagulase-negativas como agentes causadores de mastite em ovinos, e o perfil de resistência múltipla indica a importância da determinação da resistência à oxaciclina como indicador da presença de ilhas de patogenicidade que contêm fatores de virulência e resistência a outros antimicrobianos que contribuem para a sobrevivência da bactéria ao tratamento.

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O leite e derivados são reconhecidos como veículos de patógenos para humanos, secundário a contaminação pós-ordenha ou de infecções do próprio animal, particularmente na mastite. Foi estudada a ocorrência de mastite e aspectos do manejo em cabras de três propriedades criadas em sistema orgânico. O exame clínico da glândula mamária de 64 cabras em diferentes períodos de lactação, não acusou a presença de mastite clínica. Entretanto, o Califórnia Mastitis Test (CMT) identificou 54 (22,7 por cento) metades mamárias reagentes (+ ou ++). Foram colhidas 238 amostras de leite, das quais houve isolamento bacteriano em 37 (15,6 por cento). Em apenas oito amostras houve coincidência entre o isolamento bacteriano e o resultado do CMT, indicando sensibilidade de 21,6 por cento para este teste no diagnóstico de mastite subclínica em caprinos. Staphylococcus coagulase negativa (SCN) foi o microrganismo mais freqüente (83,8 por cento). O teste de sensibilidade microbiana in vitro revelou resistência das linhagens de SCN ao cotrimoxazol (50 por cento), ampicilina (48,1 por cento), nitrofurantoína (7,7 por cento), cefaclor (7,14 por cento) e oxacilina (3,85 por cento). Cefalotina, gentamicina, neomicina, estreptomicina e tetraciclina foram os antimicrobianos mais efetivos frente aos isolados. Não se evidenciou relação entre a ocorrência de mastite subclínica com a raça, a fase de lactação, sistema de ordenha ou qualidade da água utilizada nas propriedades.

Milk and derivates are recognized as vehicle of different pathogens for humans. These micoorganisms may manifest as post-milking contamination or as in infections in the animal itself, particularly in mastitis. The aim of present study was characterizes the occurrence of mastitis and management aspects in dairy-goats raised in three farms of organic milk. The correlation between mastitis and goat husbandry was also investigated. The clinical exam of the mammary glands of 64 dairy-goats did not reveal the presence of clinical mastitis. Nevertheless, the California Mastitis Test (CMT) identified 54 (22.7 percent) reactive mammary halves (+ or ++). From 238 milk samples collected, 37 (15.6 percent) were positive for bacterial isolates. Coincident positive results for bacterial isolate tests and CMT were observed in only eight samples, which indicate a sensitivity index of 21.6 percent for the caprine subclinical mastitis diagnosis test. Coagulase-negative staphylococci (CNS) were identified as the most frequent pathogen in milk samples (83.8 percent). The in vitro sensitivity test revealed CNS strains resistant to cotrimoxazole (50 percent), ampicillin (48.1 percent), nitrofurantoine (7.7 percent), cefaclor (7.14 percent), and oxacilline (3.85 percent). Cefalotine, gentamicin, neomycin, streptomycin, and tetracycline were the most effective drugs. No correlation was observed between the occurrence of subclinical mastitis and race, lactation period, drinking water quality in farms, or milking system as adopted in the present study.

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In addition to their capacity to attach to surfaces, various groups of microorganisms also produce an extracellular polymeric substance known as "slime". This slime forms a thin layer around cells known as biofilm. Thus, biofilm structure comprises bacterial cells and an extracellular polymeric substance. It also presents a defined architecture, providing the microorganisms with an excellent protective environment and favoring the exchange of genetic material between cells as well as intercellular communication. The ability to produce biofilm is observed in a large group of bacteria, including coagulase-negative staphylococci (CNS) which are the predominant microorganisms of normal skin flora and have been implicated as the causative agents of hospital infections. Bacteremia caused by these agents is common in immunodepressed persons, in patients with cancer, in adult and neonatal intensive care units (ICU) and in patients using catheters or other prosthetic devices. The pathogenicity of CNS infections is probably related to the production of slime, which adheres preferentially to plastic and smooth surfaces, forming a biofilm that protects against attacks from the immune system and against antibiotic treatment, a fact hindering the eradication of these infections. The main objective of the present review was to describe basic and genetic aspects of biofilm formation and methods for its detection, with emphasis on biofilm creation by CNS and its relationship with diseases caused by these microorganisms which are becoming increasingly more frequent in the hospital environment.

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Os estafilococos coagulase-negativos (ECN) fazem parte da microbiota normal da pele e, apesar de terem sido considerados saprófitas por muito tempo, o seu significado clínico como agente etiológico tem aumentado com o passar dos anos. Neste estudo, foram obtidos 72 isolados de ECN a partir de amostras do conduto auditivo de cães, de mastite bovina e de infecções humanas. Staphylococcus xylosus foi o microrganismo mais isolado, nas amostras animais, e S. cohnii subsp. cohnii em humanos. Os isolados foram avaliados de modo a traçar o perfil fenotípico de sua resistência aos antimicrobianos mais indicados no tratamento de infecções estafilocócicas. Foi detectado um elevado nível de resistência à penicilina e ampicilina. A gentamicina, a vancomicina e a associação ampicilina+sulbactam foram eficientes frente aos isolados testados. A resistência à oxacilina foi avaliada por meio dos testes de difusão em disco modificada, ágar screen, microdiluição em caldo e diluição em ágar para constatar, se à semelhança do que ocorre com os estafilococos coagulase-positivo, esta pode ser mediada pelo gene mecA e apresentada de forma heterogênea. A presença do gene mecA foi determinada pelo método da Reação em Cadeia de Polimerase (PCR), sendo 5,6 por cento dos isolados mecA positivos.

Coagulase-negative staphylococci (SCN) make part of the normal microbiota skin and although they have been considered saprophytics for years, nowadays their clinical significance as an etiologic agent has increased. In this study, 72 SCN isolates obtained from external ear canals of dogs, bovine mastitis and human nosocomial infections were evaluated. Staphylococcus xylosus was the most prevalent microorganism in animal samples and S. cohnii subsp. cohnii in human samples. SCN isolates were evaluated in order to establish a phenotypical resistance pattern towards the most indicated antibiotics for staphyloccocal infections. A high level of resistance to penicillin and ampicillin was detected. The most efficient antibiotics evaluated were gentamicin, vancomicin and the association between ampicillin and sulbactam. To certify the heterogeneous resistance pattern, oxacillin resistance was phenotypically detected by a modified-disc-diffusion test, agar screen, broth micro-dilution and agar dilution. The presence of the mecA gene was detected in 5.6 percent of the SCN isolates by Polimerase Chain Reaction (PCR).

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In the last decades, coagulase-negative staphylococci (CoNS), especially Staphylococcus epidermidis have become an important cause of bloodstream infections. In addition, rates of methicillin-resistance among CoNS have increased substantially, leading to the use of glicopeptides for therapy. The objective of this study was to evaluate eleven consecutives clinically relevant cases of oxacillin-resistant CoNS bacteremia in a general hospital localized in São Paulo city, Brazil. Five different species were identified by different phenotypic methods, including S. epidermidis (5), S. haemolyticus (3), S. hominis (1), S. warneri (1) and S. cohnii subsp urealyticus (1). A variety of Pulsed Field Gel Electrophoresis profiles was observed by macrorestriction DNA analysis in S. epidermidis isolates, but two of three S. haemolyticus isolates presented the same profile. These data indicated the heterogeneity of the CoNS isolates, suggesting that horizontal dissemination of these microorganisms in the investigated hospital was not frequent. One S. epidermidis and one S. haemolyticus isolates were resistant to teicoplanin and susceptible to vancomycin. The selective pressure due to the use of teicoplanin in this hospital is relevant.

Staphylococcus coagulase negativos (SCoN), especialmente Staphylococcus epidermidis tem se tornado causa importante de infecções da corrente circulatória nas últimas décadas. Além disso, percentuais de resistência a meticilina entre os SCoN têm aumentado significativamente, levando ao uso de glicopeptídeos nestes pacientes. O objetivo deste estudo foi avaliar onze casos consecutivos de bacteremia clinicamente relevantes por SCoN oxacilina resistentes em um hospital localizado na cidade de São Paulo, Brasil. Cinco diferentes espécies foram identificadas por diferentes métodos fenotípicos, incluindo S. epidermidis (5), S. haemolyticus (3), S. hominis (1), S. warneri (1) e S. cohnii subsp urealyticus (1). Diferentes perfis eletroforéticos obtidos pela técnica de "Pulsed Field Gel Electrophoresis" foram observados na análise da macrorestrição do DNA nos isolados de S. epidermidis, mas dois dos três isolados de S. haemolyticus apresentaram o mesmo perfil. Esses dados indicam uma heterogeneidade nos isolados SCoN, sugerindo que a disseminação horizontal no hospital investigado não é freqüente. Um isolado de S. epidermidis e um de S. haemolyticus foram resistentes à teicoplanina e sensíveis à vancomicina. Observa-se a relevância da pressão seletiva pelo uso de teicoplanina nos pacientes deste hospital.

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Um total de 109 cepas de Staphylococci coagulase-negativa foi isolado de leite de vacas com mastite clínica e subclínica, em 35 fazendas, situadas em nove estados brasileiros, no período de fevereiro a maio de 2005. Os isolados foram investigados em relação a susceptibilidade in vitro a diversos agentes antimicrobianos. A resistência à penicilina foi a observação mais freqüente (93,5 por cento), seguida por sulfonamida (88,9 por cento), novobiocina (88,6 por cento) e ampicilina (85,3 por cento). Todas as cepas examinadas mostraram resistência a pelo menos uma das drogas antimicrobianas testadas. Cepas apresentando resistência múltipla foram extremamente comuns, com 10,0 por cento dos microrganismos isolados apresentando resistência a todas as drogas antimicrobianas. Os resultados obtidos indicaram que as cepas de Staphylococci coagulase-negativas, isoladas no Brasil, apresentaram um alto grau de resistência a antimicrobianos. Estes resultados são, provavelmente, uma conseqüência da pressão devida ao uso intensivo de drogas antimicrobianas.

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O objetivo deste estudo foi investigar os padrões higiênicos do leite de mistura caprino produzido por oito propriedades associadas a uma cooperativa na região do Vale do Taquari - RS. Foram realizadas duas visitas às propriedades durante o período de maior produção leiteira. As propriedades foram avaliadas quanto às instalações, ao manejo de ordenha e ao armazenamento do leite.Foram coletadas amostras de leite e água em cada visita. As amostras de água apresentaram contagem de coliformes dentro dos limites propostos pela legislação vigente, já as de leite apresentaram contagens de coliformes totais que variaram de zero a 1,4 x 10(6)UFC mL-1. Em apenas duas propriedades foram encontrados coliformes fecais. Não foram identificados estafilococos coagulase-positiva nas amostras. Não foi evidenciada relação significativa entre os sistemas de resfriamento e ordenha empregados na propriedade e a presença de coliformes no leite.

The aim of this work was to evaluate the current hygiene-sanitary quality of milk produced by eight dairy goat farms located in Vale do Taquari region, state of Rio Grande do Sul, Brazil. On each farm, two samplings were performed during the highest milk yield period. At each sampling, bulk milk and water samples were taken, and farms were checked for their facilities, milking management and milk storage. Water samples were subjected to fecal coliform enumeration, while milk samples were tested for total and fecal colifoms as well as for coagulase-positive staphylococci. Water samples presented fecal coliform levels according to the national legislation. In milk samples total coliform counts up to 1.4 x 10(6)CFU mL-1 were found. Coagulase-positive staphylococci were not isolated and fecal coliforms were detected in two farms. No correlation was observed between the number of total coliforms and milking management and milk storage.

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This prospective study evaluated semiquantitative and qualitative catheter-culture methods for diagnosis of catheter-related infection (CRI) in newborns. Catheter tips from newborns admitted to the Neonatal Unit of the University Hospital of the Botucatu Medical School, UNESP were included in the study. Catheter cultures were performed with both semiquantitative and qualitative techniques. For CRI diagnosis, microorganisms isolated from catheter cultures and from peripheral blood cultures were identified and submitted to agent susceptibility test. The gold standard was the certain CRI diagnosis when same microorganism (specie and profile of susceptibility to agents) was isolated from both catheter tips and peripheral blood culture. A total of 85 catheters from 63 newborns were included in the study. The semiquantitative culture method, despite presenting lower sensitivity (90 percent), showed higher specificity (71 percent) when compared to 100 percent of sensitivity and 60 percent of specificity in the qualitative method. The identification of the microorganisms obtained from the catheter cultures showed a prevalence of coagulase-negative staphylococci(CNS) species. The specie Staphylococcus epidermidis (77.5 percent) was the prevalent in the catheters with positive semiquantitative cultures. Among 11 episodes with CRI diagnosis, 8 (72.7 percent) were associated with CNS species, of which 6 were S. epidermidis. Two episodes of CRI by S. aureus and one by Candida parapsilosis were also detected. The semiquantitative catheter-culture method showed advantages for CRI diagnosis in newborns when compared to the conservative qualitative method.

Este estudo prospectivo avaliou os métodos semiquantitativo e qualitativo de cultura de cateter para o diagnóstico de infecção relacionada a cateter (IRC) em recém-nascidos (RN). Foram incluídas pontas de cateteres provenientes de recém-nascidos internados na Unidade Neonatal do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Botucatu, UNESP. Foram utilizadas as técnicas semiquantitativa e qualitativa de cultura de cateter. Para o diagnóstico de IRC, os microrganismos isolados das culturas de cateteres e de hemoculturas periféricas foram identificados e submetidos ao teste de sensibilidade a antimicrobianos. O padrão ouro correspondeu ao diagnóstico de certeza de IRC, com o isolamento do mesmo microrganismo (espécie e perfil de sensibilidade a antimicrobianos) isolado em hemocultura periférica. Foram estudados 85 cateteres provenientes de 63 RN. A cultura semiquantitativa, embora tenha apresentado menor sensibilidade (90 por cento), apresentou uma maior especificidade (71 por cento) em comparação à sensibilidade de 100 por cento e especificidade de 60 por cento encontradas na cultura qualitativa. Através da identificação dos microrganismos obtidos nas culturas de cateteres, observou-se uma predominância de espécies de Estafilococos coagulase-negativa (ECN). A espécie Staphylococcus epidermidis foi a prevalente (77,5 por cento) nos cateteres com culturas semiquantitativas positivas. Dos 11 episódios de IRC diagnosticados, 8 (72,7 por cento) foram associados a espécies de ECN, dos quais 6 eram da espécie S. epidermidis. Também foram detectados dois casos de IRC por S. aureus e um caso por Candida parapsilosis. O método de cultura semiquantitativo cateter apresentou vantagens para o diagnóstico de IRC em RN quando comparado com o método qualitativo tradicional.

Resumo

O objetivo desta pesquisa foi identificar a ocorrência dos patógenos causadores de mastite subclínica em um rebanho leiteiro tipo B no município de Jaguapitã, estado do Paraná, Brasil. Foram realizados 400 testes de Califórnia Mastite Teste (CMT) em amostras de leite de 100 animais, totalizando 400 tetos. Dentre os animais testados 55% reagiram ao CMT apresentando grau dois ou superior, com 157 tetos positivos. Após as amostras de leite dos 157 tetos serem submetidos à cultura em ágar sangue, 25,48% (40/157) não apresentaram crescimento ou houve crescimento de mais de duas colônias bacterianas, 28,03% (44/157) foram observadas Staphylococcus coagulase negativa (CNS), 8,28% (13/157) Streptococcus uberis, 7,64% (12/157) Staphylococcus aureus, 7,64% (12/157) Corynebacterium spp, 7,01% (11/157) Staphylococcus intermedius, 4,46% (7/157) Staphylococcus hyicus, 3,82% (6/157) Bacillus spp., 2,55% (4/157) para Streptococcus dysgalacteae, Enterobactéria e Leveduras. Conclui-se que a CNS é o mais relevante agente causador de mastite subclínica.

The aim of this research was to identify the occurrence of pathogens causing subclinical mastitis in grade B milk farms of the Jaguapitã county, state of Paraná, Brazil. California Mastitis Test (CMT) were carried out in 400 milk samples from 100 animals and 157 teats from 55 animals (55%) were positive, showed score two or higher to CMT. When these 157 positive samples to CMT were transported for bacterial culture in blood agar, 25.48% (40/157) samples showed no bacterial growth or more than two types of bacterial colonies grew, 28.03% (44/157) were Coagulase-negative staphylococci (CNS), 8.28% (13/157) were Streptococcus uberis, 7.64% (12/157) were Staphylococcus aureus, 7.64% (12/157) were Corynebacterium spp, 7.01% (11/157) were Staphylococcus intermedius, 4.46% (7/157) were Staphylococcus hyicus, 3.82% (6/157) were Bacillus spp., 2.55% (4/157) were Streptococcus dysgalacteae, Enterobacteria and Yeasts. We conclude that CNS is the most relevant subclinical mastitis causative agent.

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Milk samples from 45 halves were collected from lactating ewes to evaluate the effect of freezing and incubation of the whole milk on the qualitative results of bacteriologic culture. Thus, these milk samples were submitted to the following treatments: standard culture technique (T1), incubation for 18h at 37C (T2) and thawing at -20C for 24h (T3). After these periods, the milk samples from T2 and T3 were submitted to standard culture technique. The T2 showed an increase in the proportion of coagulase-negative staphylococci (CNS) recovery compared to T1, although the same cannot be predicted by T3. Conversely, the T2 allows the growth of some bacteria present in clinically healthy teats ducts as Bacillus spp.. The results of the present study indicated that the incubation of the whole milk can be applied to detection of CNS in ewes milk in attempt to reduce the false-negative culture milk samples that can lead to a more efficient use of laboratory resources and reduce costs to herd owners.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito do congelamento e da incubação do leite de ovelhas da raça Santa Inês sobre os resultados da cultura bacteriológica. Desta forma, 45 amostras de leite ovino foram coletadas, e submetidas aos seguintes tratamentos: cultura bacteriológica (T1), e simultaneamente incubadas a 37C por 18 horas (T2) e congeladas a -20C por 24 horas (T3). Após esses períodos, as amostras dos T2 e T3 foram submetidas à cultura bacteriológica. O T2 possibilitou aumento no isolamento de estafilococos coagulase-negativo (ECN) comparadas ao T1, não ocorrendo o mesmo com o T3. No entanto, o T2 permitiu o desenvolvimento de bactérias normalmente presentes na microbiota dos ductos dos tetos em ovelhas sadias, como o Bacillus spp.. Os resultados do presente estudo indicam que a incubação pode ser aplicada para a detecção de ECN na tentativa de reduzir resultados falso-negativos na cultura bacteriológica do leite de ovelhas da raça Santa Inês, determinando o uso mais eficiente dos recursos laboratoriais e a redução dos custos para os proprietários.

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Mastitis is a multifactorial disease whose prevalence is affected by the type of pathogenic agent involved, the constitution of the animal, and environmental conditions. This study evaluated the physical and laboratory characteristics of colostrum from dairy goats in the postpartum period, and the physical characteristics of the mammary glands in the same period. Of the 71 mammary glands evaluated, 12 were positive for bacterial isolates and the most frequent pathogenic agents were coagulase-negative staphylococci (CNS) (n = 11). Median somatic cell counts (SCC) in animals positive for bacterial isolates were greater than in animals without bacterial isolates at parturition (696.0 vs. 256.0 x 103 mL –1) and 48 h postpartum (1,350 vs. 437.0 x 103 mL-1). In addition, 34 samples were positive for the California Mastitis Test (CMT; score >1+), indicating a positive relationship between this test and bacterial isolation. Coagulase-negative staphylococci (CNS) were the most prevalent pathogenic agents, resulting in increase in SCC. Postpartum changes in mammary secretions were not good predictors of bacterial mastitis. Physical examination of mammary glands did not reveal significant changes for the diagnosis of mastitis in the postpartum period.

A mastite é uma doença multifatorial que sofre influência do tipo de patógeno envolvido, constituição dos animais e condições ambientais. Foi realizado estudo com objetivo de avaliar as características físicas e laboratoriais do colostro de cabras no período pós-parto, assim como características físicas das glândulas mamárias no mesmo período. As glândulas mamárias foram submetidas a avaliações físicas que não resultaram em alterações significativas ao longo dos momentos pesquisados. Das 71 metades mamárias analisadas, 12 apresentaram isolamento microbiológico e o agente mais frequente foi Staphylococcus coagulase negativo (n=11). A mediana da contagem de células somáticas (CCS) dos animais positivos à lactocultura foi maior do que daqueles que não tiveram isolamento microbiano nas colheitas realizadas no momento do parto (696 x 10³ mL –1) e após 48h (1.350 x 10³ mL-1). O California Mastitis Test (CMT) mostrou-se positivo (>1+) em 34 amostras analisadas logo após o parto, revelando uma associação entre o referido teste e o isolamento microbiano. O grupo de agentes mais prevalente no período pós-parto foi Staphylococcus coagulase negativo, resultando em aumento na CCS. Alterações nas secreções lácteas vistas nesse período não podem ser consideradas como preditoras de mastites bacterianas. O exame físico das glândulas mamárias não revelou alterações relevantes para o diagnóstico de mastite no referido período.