Q fever and coxiellosis in Brazil: an underestimated disease? A brief review / Febre Q e coxielose no Brasil: uma doença subestimada? Uma breve revisão

Q fever, caused by the γ-proteobacterium Coxiella burnetii, is a zoonosis of great importance and global impact. This agent has high transmissibility and can spread over long distances via wind, in which a small number of aerosolized particles are needed to infect susceptible hosts. The clinical diagnosis of Q fever is difficult owing to the variety of clinical signs shared with other diseases. In Brazil, studies related to C. burnetii are constantly being conducted, and this review aims to increase the number of approaches already studied, leading to the following question: is Q fever an unknown, neglected disease, or does it have a focal occurrence in certain areas (exotic/rare) in the country?(AU)

A febre Q, causada pela γ-proteobactéria Coxiella burnetii, é uma zoonose de grande importância e impacto global. Este agente tem alta transmissibilidade e pode se espalhar por longas distâncias via vento, em que um pequeno número de partículas aerossolizadas são necessárias para infectar hospedeiros suscetíveis. O diagnóstico clínico da febre Q é difícil devido à variedade de sinais clínicos compartilhados com outras doenças. No Brasil, estudos relacionados à C. burnetii são constantemente realizados. Esta revisão visa aumentar o número de abordagens já estudadas, levando ao seguinte questionamento: a febre Q é uma doença desconhecida, negligenciada ou tem ocorrência focal em certas áreas (exóticas/raras) no país?(AU)

Causes of abortion in dairy cows in Uruguay / Causas de aborto em bovinos de leite no Uruguai

A case series study was conducted to determine the frequency of causes of abortion in dairy cattle in Uruguay. The sample size of 102 cases was composed of 53 fetuses, 35 fetuses with placentas, and 14 placentas without an associated fetus. All cases underwent gross and microscopic pathologic examinations as well as microbiological and serological testing. The etiology was determined in 54 (53%) of cases, 51 of which were caused by infectious agents. Within the observed 102 cases, 30 (29%) were caused by Neospora caninum, six (6%) by Coxiella burnetii and two (2%) by Campylobacter fetus subsp. venerealis. Bovine Parainfluenza-3 virus and Salmonella enterica serovar Newport caused one abortion each. Opportunistic bacteria (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes, and Providencia stuartii) were associated with 11 abortions. In two cases the fetal death was attributed to dystocia, and in one case the fetus had a congenital mesothelioma. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection was identified in three fetuses; two of which were co-infected with and had typical lesions of N. caninum. No lesions were observed in the other fetus infected by BVDV. Leptospira interrogans was identified in one fetus without lesions. Despite the relatively low overall success rate in establishing an etiological diagnosis in cases of abortion in cattle, a systemic workup of bovine abortion is necessary to establish prevention and control strategies. This also facilitates monitoring and surveillance of reproductive diseases in dairy cattle, some of which represent a risk to public health.(AU)

Uma série de casos foi estudada para determinar a frequência de causas do aborto em bovinos leiteiros no Uruguai. A amostra, de 102 casos, foi composta por 53 fetos, 35 fetos com placentas e 14 placentas sem feto associado. Todos os casos foram submetidos a exames patológicos macroscópicos e microscópicos, além de testes microbiológicos e sorológicos. A etiologia foi determinada em 54 (53%) dos casos, 51 dos quais foram causados por agentes infecciosos. Nos 102 casos observados, 30 (29%) foram causados por Neospora caninum, seis (6%) por Coxiella burnetii e dois (2%) por Campylobacter fetus subsp. venerealis. O vírus da Parainfluenza-3 e Salmonella enterica serovar Newport causaram um aborto cada. Bactérias oportunistas (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes e Providencia stuartii) foram associadas a 11 abortos. Em dois casos, a morte fetal foi atribuída a distocia e, em um caso, o feto apresentava mesotelioma congênito. A infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) foi identificada em três fetos; dois dos quais foram co-infectados e apresentavam lesões típicas de N. caninum. Não foram observadas lesões no outro feto infectado pelo BVDV. Leptospira interrogans foi identificada em um feto sem lesões. Apesar da relativamente baixa taxa de sucesso no diagnóstico etiológico nos casos de aborto em bovinos, é necessário o diagnóstico sistemático dos abortos para estabelecer estratégias de prevenção e controle. Isso também facilita o monitoramento e a vigilância de doenças reprodutivas em bovinos leiteiros, algumas das quais representam um risco para a saúde pública.(AU)

Causes of abortion in dairy cows in Uruguay / Causas de aborto em bovinos de leite no Uruguai

A case series study was conducted to determine the frequency of causes of abortion in dairy cattle in Uruguay. The sample size of 102 cases was composed of 53 fetuses, 35 fetuses with placentas, and 14 placentas without an associated fetus. All cases underwent gross and microscopic pathologic examinations as well as microbiological and serological testing. The etiology was determined in 54 (53%) of cases, 51 of which were caused by infectious agents. Within the observed 102 cases, 30 (29%) were caused by Neospora caninum, six (6%) by Coxiella burnetii and two (2%) by Campylobacter fetus subsp. venerealis. Bovine Parainfluenza-3 virus and Salmonella enterica serovar Newport caused one abortion each. Opportunistic bacteria (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes, and Providencia stuartii) were associated with 11 abortions. In two cases the fetal death was attributed to dystocia, and in one case the fetus had a congenital mesothelioma. Bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection was identified in three fetuses; two of which were co-infected with and had typical lesions of N. caninum. No lesions were observed in the other fetus infected by BVDV. Leptospira interrogans was identified in one fetus without lesions. Despite the relatively low overall success rate in establishing an etiological diagnosis in cases of abortion in cattle, a systemic workup of bovine abortion is necessary to establish prevention and control strategies. This also facilitates monitoring and surveillance of reproductive diseases in dairy cattle, some of which represent a risk to public health.(AU)

Uma série de casos foi estudada para determinar a frequência de causas do aborto em bovinos leiteiros no Uruguai. A amostra, de 102 casos, foi composta por 53 fetos, 35 fetos com placentas e 14 placentas sem feto associado. Todos os casos foram submetidos a exames patológicos macroscópicos e microscópicos, além de testes microbiológicos e sorológicos. A etiologia foi determinada em 54 (53%) dos casos, 51 dos quais foram causados por agentes infecciosos. Nos 102 casos observados, 30 (29%) foram causados por Neospora caninum, seis (6%) por Coxiella burnetii e dois (2%) por Campylobacter fetus subsp. venerealis. O vírus da Parainfluenza-3 e Salmonella enterica serovar Newport causaram um aborto cada. Bactérias oportunistas (Escherichia coli, Streptococcus sp., Staphylococcus sp., Mannheimia sp., Trueperella pyogenes e Providencia stuartii) foram associadas a 11 abortos. Em dois casos, a morte fetal foi atribuída a distocia e, em um caso, o feto apresentava mesotelioma congênito. A infecção pelo vírus da diarreia viral bovina (BVDV) foi identificada em três fetos; dois dos quais foram co-infectados e apresentavam lesões típicas de N. caninum. Não foram observadas lesões no outro feto infectado pelo BVDV. Leptospira interrogans foi identificada em um feto sem lesões. Apesar da relativamente baixa taxa de sucesso no diagnóstico etiológico nos casos de aborto em bovinos, é necessário o diagnóstico sistemático dos abortos para estabelecer estratégias de prevenção e controle. Isso também facilita o monitoramento e a vigilância de doenças reprodutivas em bovinos leiteiros, algumas das quais representam um risco para a saúde pública.(AU)

Transmission of Coxiella burnetii to calves from infected cows

Background: Coxiella burnetii is the causative agent of a very important disease with zoonotic potential. Infected cowsrepresent risk for spreading of infection to humans and to other animals on farm and also to their offspring. There is possibility for calves from infected cows to be infected nearly after parturition or during intrauterine life. Studies have shownthat Coxiella burnetii initially infects the placenta and subsequent spread to the fetus may occur either by haematogenousor by the amniotic-oral route providing congenital infection. The main objective of the present study is to determine thepresence of Coxiella burnetii genome in milk serum of infected cows and blood serum of calves.Materials, Methods & Results: A total of 200 blood serums from dairy cows were tested for presence of antibodies toCoxiella burnetii and nine of those were found positive. These animals compiled experimental group. From animals inexperimental group milk samples during lactation, pregnancy and the postpartum period were collected. Samples wereused for performing PCR test for determination of Coxiella burnetii presence in milk serum. On calving of each cow bloodsamples were taken from calves during first 24 hours after calving, from jugular vein. These blood samples were also usedfor PCR test to determine the presence of Coxiella burnetii. Milk serum analysis showed presence of Coxiella burnetiigenome in serum, indicating on intermittent excretion. During lactation, the excretion of bacteria was greatest in the second stage when 80% of milk serum samples were positive for Coxiella burnetii. In the colostrums stage, there was a highpercentage of Coxiella burnetii excretion through milk (50% of positive milk serum samples). The lowest percentage ofexcretion through milk was in the first stage of lactation. Analyzing blood serum samples from calves, taken on first dayat calving using PCR method, all serums were positive for presence of Coxiella...

Transmission of Coxiella burnetii to calves from infected cows

Background: Coxiella burnetii is the causative agent of a very important disease with zoonotic potential. Infected cowsrepresent risk for spreading of infection to humans and to other animals on farm and also to their offspring. There is possibility for calves from infected cows to be infected nearly after parturition or during intrauterine life. Studies have shownthat Coxiella burnetii initially infects the placenta and subsequent spread to the fetus may occur either by haematogenousor by the amniotic-oral route providing congenital infection. The main objective of the present study is to determine thepresence of Coxiella burnetii genome in milk serum of infected cows and blood serum of calves.Materials, Methods & Results: A total of 200 blood serums from dairy cows were tested for presence of antibodies toCoxiella burnetii and nine of those were found positive. These animals compiled experimental group. From animals inexperimental group milk samples during lactation, pregnancy and the postpartum period were collected. Samples wereused for performing PCR test for determination of Coxiella burnetii presence in milk serum. On calving of each cow bloodsamples were taken from calves during first 24 hours after calving, from jugular vein. These blood samples were also usedfor PCR test to determine the presence of Coxiella burnetii. Milk serum analysis showed presence of Coxiella burnetiigenome in serum, indicating on intermittent excretion. During lactation, the excretion of bacteria was greatest in the second stage when 80% of milk serum samples were positive for Coxiella burnetii. In the colostrums stage, there was a highpercentage of Coxiella burnetii excretion through milk (50% of positive milk serum samples). The lowest percentage ofexcretion through milk was in the first stage of lactation. Analyzing blood serum samples from calves, taken on first dayat calving using PCR method, all serums were positive for presence of Coxiella...(AU)

Coxiella burnetii associated with BVDV (Bovine Viral Diarrhea Virus), BoHV (Bovine Herpesvirus), Leptospira spp., Neospora caninum, Toxoplasma gondii and Trypanosoma vivax in reproductive disorders in cattle / Coxiella burnetii associada ao BVDV (Vírus da Diarreia Viral Bovina), BoHV (Vírus do Herpes Bovino), Leptospira spp., Neospora caninum, Toxoplasma gondii e Trypanosoma vivax em distúrbios reprodutivos em bovinos

This is a cross-sectional study to assess the presence of antibodies in ruminants against selected pathogens associated with reproductive disorders in cattle in four Brazilian states, including the zoonotic agent Coxiella burnetii. The used tests were Virus Neutralization Assay for IBR and BVD, Microscopic Agglutination Test for Leptospira spp., Indirect Fluorescent Antibody Test (IFAT) for C. burnetii and Toxoplasma gondii, and Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Neospora caninum and Trypanosoma vivax. Seropositivity for C. burnetii was 13.7% with titers from 128 to 131,072; 57.8% for BoHV-1, with titers between 2 and 1,024; 47.1% for BVDV-1a, with titers from 10 to 5,120; 89.2% for N. caninum; 50% for T. vivax; and 52.0% for Leptospira spp., with titers between 100 to 800 (the following serovars were found: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona and Icterohaemorrhagiae); 19.6% for T. gondii with titer of 40. This is the first study that has identified C. burnetii in cattle associated with BoHV and BVDV, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii and T. vivax. Thus, future studies should be conducted to investigate how widespread this pathogen is in Brazilian cattle herds.(AU)

Este é um estudo transversal para avaliar a presença de anticorpos em ruminantes contra patógenos selecionados e associados a distúrbios reprodutivos em bovinos de quatro estados brasileiros, incluindo o agente zoonótico Coxiella burnetii. Os testes utilizados foram Teste de Vírus-Neutralização para BoHV e BVDV, teste de Aglutinação Microscópica para Leptospira spp., Reação de Imunofluorescência Indireta for C. burnetii e Toxoplasma gondii, e Ensaio de Imunoabsorção Enzimática para Neospora caninum e Trypanosoma vivax. A soropositividade para C. burnetii foi de 13,7% com títulos de 128 a 131.072; 57,8% para BoHV-1, com títulos entre 2 a 1.024; 47,1% para BVDV-1a, com títulos de 10 a 5.120; 89,2% para N. caninum; 50% para T. vivax; e 52,0% para Leptospira spp., com títulos entre 100 a 800 (sorovares encontrados: Tarassovi, Grippotyphosa, Canicola, Copenhageni, Wolffi, Hardjo, Pomona e Icterohaemorrhagiae) 19,6% para T. gondii com título de 40. Este é o primeiro estudo que evidencia a participação de C. burnetii em bovinos associada ao Vírus da Rinotraqueíte bovina infecciosa e da diarreia viral bovina, N. caninum, Leptospira spp., T. gondii e T. vivax em bovinos. Desta forma, futuros estudos devem ser conduzidos a fim de investigar o quão disseminado se encontra este patógeno em rebanhos bovinos brasileiros.(AU)

Clinical and epidemiological use of nested PCR targeting the repetitive element IS1111 associated with the transposase gene from Coxiella burnetii

Q fever is a worldwide zoonosis caused by Coxiella burnetii—a small obligate intracellular Gram-negative bacterium found in a variety of animals. It is transmitted to humans by inhalation of contaminated aerosols from urine, feces, milk, amniotic fluid, placenta, abortion products, wool, and rarely by ingestion of raw milk from infected animals. Nested PCR can improve the sensitivity and specificity of testing while offering a suitable amplicon size for sequencing. Serial dilutions were performed tenfold to test the limit of detection, and the result was 10× detection of C. burnetti DNA with internal nested PCR primers relative to trans-PCR. Different biological samples were tested and identified only in nested PCR. This demonstrates the efficiency and effectiveness of the primers. Of the 19 samples, which amplify the partial sequence of C. burnetii, 12 were positive by conventional PCR and nested PCR. Seven samples—five spleen tissue samples from rodents and two tick samples—were only positive in nested PCR. With these new internal primers for trans-PCR, we demonstrate that our nested PCR assay for C. burnetii can achieve better results than conventional PCR.(AU)

PESQUISA DE INFECÇÃO POR Coxiella burnetii E Toxoplasma gondii EM FÊMEAS DE PRIMATAS NÃO HUMANOS EM UM INSTITUTO DE PESQUISA NO RIO DE JANEIRO

Desordens reprodutivas ocasionam grandes perdas para colônias de primatas, principalmente quando, por exemplo, se tem como objetivo que um determinado animal tenha descendentes com determinadas características genéticas. Este problema pode estar relacionado a diversos fatores, entre eles, fatores genéticos, questões de obesidade, comportamental/bem-estar e fatores de origem infecciosa. Em relação a este último fator, além dos gêneros Mycoplasma e Brucella, a proteobactéria Coxiella burnetii que é o agente etiológico da febre Q em humanos e coxielose em animais, assim como o protozoário Toxoplasma gondii, causador da toxoplasmose humana e animal, são agentes infecciosos que também precisam ser considerados, especialmente em animais com histórico de aborto e de outros distúrbios reprodutivos. Neste contexto, este projeto teve como proposta desenvolver um estudo descritivo seccional com o objetivo de verificar a presença de anticorpos anti-C. burnetii e anti-T. gondii pela reação de imunofluorescênica indireta (RIFI), além da reação em cadeia da polimerase (PCR) para pesquisa de C. burnetii em amostras de soro de fêmeas de PNHs, com e sem histórico de distúrbios reprodutivos, mantidas em cativeiro no Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB. Das 152 amostras de soro dos PNHs, espécies Saimiri ustus, S. sciureus, Macaca fascicularis (Cynomolgus) e Macaca mulatta (Rhesus), submetidas à análise sorológica (RIFI) e molecular (PCR) para a pesquisa de infecção por C burnetii, todas foram negativas. Quanto à pesquisa de infecção por T.gondii, a presença de anticorpos foi detectadaemsetedas 152 amostras (4,6 %). Quatro destas sete fêmeas tinham histórico de abortos e todas pertenciam a espécie M. mulatta. Nossos resultados sugerem que em casos de abortos a pesquisa de T. gondii deve ser considerada.

Reproductive disorders cause great losses to primate colonies, especially when, for example, the goal is for a particular animal to have offspring with certain genetic characteristics. This problem may be related to several factors, among them, genetic factors, obesity issues, behavioral/well-being and infectiousorigin factors. Regarding this last factor, besides the Mycoplasma and Brucella genera, the proteobacterium Coxiella burnetii, which is the etiological agent of Q fever in humans and coxielosis in animals, as well as the protozoan Toxoplasma gondii, which causes human and animal toxoplasmosis, are infectious agents that also need to be considered, especially in animals with a history of abortion and other reproductive disorders. In this context, the purpose of this project was to develop a descriptive sectional study to verify the presence of anti-C. burnetii and anti-T. gondii antibodies by indirect immunofluorescence reaction (IFT), and polymerase chain reaction (PCR) to search for C. burnetii in serum samples from NHP females, with and without a history of reproductive disorders, kept in captivity at the Instituto de Ciência e Tecnologia em Biomodelos - ICTB. Of the 152 serum samples from NHP, species Saimiri ustus, S. sciureus, Macaca fascicularis (Cynomolgus) and Macaca mulatta (Rhesus), submitted to serological (RIFI) and molecular (PCR) analysis for C burnetii infection, all were negative. For T gondii infection, antibodies were detected in seven of 152 samples (4.6%). Four of these seven females had a history of abortion and all belonged to the species M. mulatta. Our results suggest that in cases of abortions the investigation for T. gondii should be considered.

MOLECULAR DETECTION AND GENETIC DIVERSITY OF ARTHROPOD AND TREMATODE-BORNE AGENTS IN NON-HEMATOPHAGOUS BATS FROM MIDWESTERN BRAZIL

Estima-se que 75% das doenças emergentes compreendam zoonoses, cuja maioria tem como fontes de infecção animais selvagens; destas, cerca de 22,8% são veiculadas por vetores artrópodes. Desta forma, monitorar a presença de patógenos em animais selvagens em nichos compartilhados com seres humanos se torna um importante método preventivo de infecções zoonóticas. As famílias Bartonellaceae e Anaplasmataceae englobam Alphaproteobactérias Gram-negativas, intracelulares facultativas e obrigatórias, respectivamente, que vêm sendo identificadas em uma ampla variedade de mamíferos, incluindo seres humanos. Já os micoplasmas hemotróficos são bactérias Gram-negativas sem parede celular, de localização epieritrocitária, que podem causar desde infecções assintomáticas até anemia hemolítica severa, tanto em animais como em humanos. Coxiella burnetii é o principal representante da família Coxiellaceae (Gammaproteobactérias) e é conhecida por causar a Febre Q em humanos. Apesar de ser transmitido por aerossóis, esse agente vem sendo detectado em diversos ectoparasitos que talvez possam atuar em seu ciclo de vida. Já os piroplasmas são protozoários da ordem Piroplasmida e causam principalmente anemia hemolítica em animais de produção, domésticos e, eventualmente, em seres humanos. Embora esses agentes supracitados vêm sendo cada vez mais estudados em quirópteros, ainda pouco se sabe a respeito de sua ocorrência e diversidade genética em morcegos no Brasil. Os principais ectoparasitos encontrados nesses animais são representados por moscas das famílias Streblidae e Nycteribiidae, carrapatos, e ácaros das famílias Spinturnicidae e Macronyssidae. Considerando os patógenos de interesse em Saúde Pública supracitados e a expressiva representatividade de animais da ordem Chiroptera no Brasil, objetivou-se obter informações sobre a ocorrência e diversidade genética de agentes Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae e protozoários da ordem Piroplasmida em quirópteros e seus respectivos ectoparasitos coletados em área periurbana da cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no centro-oeste brasileiro. Um total de 418 amostras (135 amostras de baço, 133 de sangue e 150 ectoparasitos) foram coletados de 135 animais das famílias Phyllostomidae, Vespertillionidae e Mollossidae. Por meio de técnicas moleculares verificou-se positividade de 18,13% (34/418) para Bartonella spp. dentre todas as amostras coletadas. Dessas, 17 amostras foram clonadas para o gene gltA a fim de obter 3 clones de cada uma para acessar a diversidade genotípica dentro da mesma amostra biológica. Com os 51 gltA-clones obtidos foi possível observar 13 genótipos diferentes, sendo que pelo menos dois ocorreram dentro de uma mesma amostra. Análises filogenéticas baseadas nos genes ftsZ, rpoB e nuoG confirmaram a alta diversidade de genótipos de Bartonella spp. em quirópteros e seus ectoparasitos. Para agentes Anaplasmataceae, foi observada positividade de 1,67% (7/418), 11,96% (50/418) e 13,63% (57/418) das amostras testadas para Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) e Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectivamente. As sequências obtidas mostraram-se similares a Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, e Neorickettsia findlayensis por análise iv pelo nBLAST, e filogeneticamente relacionado a Ehrlichia ruminantium baseado no gene gltA. Trata-se da primeira evidência molecular de agentes Anaplasmataceae em quirópteros e ectoparasitos associados no Brasil. Já para hemoplasmas, positividade de 13,6% (57/418) foi observada. Dentre as 24 sequências obtidas pelo gene 16S rRNA foi possível encontrar 12 genótipos diferentes que se distribuíram pelo macroclado do grupo haemofelis. As duas sequências 23S rRNA obtidas se posicionaram próximas a Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis e M. haemocanis. Todas as amostras de sangue e baço dos morcegos amostrados mostraram-se negativas na qPCR para C. burnetii baseada no gene IS1111. Para piroplasmídeos, 17 dos 135 (12,6%) morcegos amostrados mostraram-se positivos para agentes da ordem Piroplasmida (gene 18S rRNA). Trata-se do primeiro relato molecular de piroplasmídeos em quirópteros no Brasil. A análise filogenética mostrou a possível ocorrência de duas novas espécies: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., posicionado filogeneticamente próximo a Babesia canis e B. vogeli, e Piroplasmid n. sp. P. discolor, que formou um clado monofilético. Infelizmente, as amostras de ectoparasitos não puderam ser utilizadas na detecção de piroplasmídeos e C. burnetii. Enquanto moscas Streblidae mostraram positividade nos ensaios moleculares para Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) e Mycoplasma spp. (1/64), carrapatos Ornithodoros hasei mostraram-se positivos para Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) e Neorickettsia spp. (1/19); por fim, ácaros Spinturniciidae e Macronyssidae apresentaram positividade para Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) e Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae e 6/46 Spinturnicidae). Ainda, co-positividade para os diversos agentes pesquisados foi observada no presente estudo. Como conclusão, morcegos não-hematófagos de área periurbana do centro-oeste brasileiro atuam como hospedeiros para diversos genótipos de Bartonella spp. e hemoplasmas, para Ehrlichia spp. filogeneticamente associadas a E. ruminantium e para duas possíveis novas espécies de piroplasmídeos.

It is estimated that 75% of emerging diseases comprise zoonoses, most of which have wild animals as sources of infection; of these, about 22.8% are carried by arthropod vectors. Thus, monitoring the presence of pathogens in wild animals in niches shared with humans becomes an important preventive method for zoonotic infections. Bartonellaceae and Anaplasmataceae families comprise Gram-negative, facultative and obligate intracellular Alphaproteobacteria, respectively, that have been identified in a wide variety of mammals, including humans. On the other hand, hemotrophic mycoplasmas are epierythrocytic Gram-negative bacteria lacking cell wall, which can cause from asymptomatic infections to severe hemolytic anemia, both in animals and in humans. Coxiella burnetii is the main representative of the Coxiellaceae family (Gammaproteobacteria) and is known to cause Q fever in humans. Despite being transmitted by aerosols, this agent has been detected in several ectoparasites that may act in its life cycle. Piroplasmids, on the other hand, are protozoa of the order Piroplasmida, which can cause hemolytic anemia in farm and domestic animals and, occasionally, in humans. Although the abovementioned agents have been increasingly studied in bats, little is known about their occurrence and genetic diversity in bats from Brazil. The main ectoparasites found in these animals are Streblidae and Nycteribiidae flies, soft ticks, and Spinturnicidae and Macronyssidae mites. Considering the abovementioned pathogens of interest in Public Health and the expressive representation of animals of the order Chiroptera in Brazil, this study aimed to investigate the occurrence and genetic diversity of Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae agents and protozoa of the order Piroplasmida in chiropterans and their respective ectoparasites collected in a periurban area of the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, in central-western Brazil. A total of 418 samples (135 spleen, 133 blood and 150 ectoparasites) were collected from 135 animals of the Phyllostomidae, Vespertillionidae and Mollossidae families. Based on molecular assays, positivity of 18.13% (34/418) for Bartonella spp. was found among all collected samples. Out of these, 17 samples had their amplified Bartonella gltA amplicons cloned in order to obtain 3 clones of each one aiming at assessing the genotypic diversity within the same sample. Among the 51 Bartonella gltA-clones obtained, 13 different genotypes were found, with at least two occurring within individual samples. Phylogenetic analyses based on the ftsZ, rpoB and nuoG genes confirmed the high genotype diversity of Bartonella spp. in bats and their ectoparasites. For Anaplasmataceae agents, positivity of 1.67% (7/418), 11.96% (50/418) and 13.63% (57/418) was observed for Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) and Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectively. The sequences obtained were closely related to Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, and Neorickettsia findlayensis by BLASTn analyses, and phylogenetically related to Ehrlichia ruminantium based on gltA gene. This is the first molecular evidence of Anaplasmataceae agents in bats and associated ectoparasites from Brazil. Positivity of 13.6% (57/418) for hemoplasmas was found. Among the 24 sequences obtained by the 16S rRNA gene, it was possible to find 12 different vi hemoplasma genotypes that were distributed into Haemofelis group. The two obtained 23S rRNA hemoplasma sequences were closely related to Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis and M. haemocanis. All bats blood and spleen samples were negative in the qPCR for C. burnetii based on the IS1111 gene. Seventeen of the 135 (12.6%) bats were positive for Piroplasmida (18S rRNA gene). This is the first molecular report of piroplasmids in bats from Brazil. Phylogenetic analysis showed the possible occurrence of two new species: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., which was closely related to Babesia canis and B. vogeli, and Piroplasmid n. sp. P. discolor, which formed a monophyletic clade. Unfortunately, the ectoparasite samples could not be used in the PCR assays for piroplasmids and C. burnetii. While Streblidae flies showed positivity in molecular assays for Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) and Mycoplasma spp. (1/64), Ornithodoros hasei ticks were positive for Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) and Neorickettsia spp. (1/19). Spinturnicidae and Macronyssidae mites were positive for Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) and Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae and 6/46 Spinturnicidae). Also, co-positivity for the different agents studied was observed. In conclusion, non-hematophagous bats from a periurban area of central-western Brazil act as hosts for several genotypes of Bartonella spp. and hemoplasms, Ehrlichia spp. closely related to E. ruminantium, and for two possible new species of piroplasmids.

Patógenos transmitidos por carrapatos em cães, pequenos mamíferos silvestres e seus respectivos ectoparasitas no sertão nordestino, Brasil

Microrganismos representantes das ordens Rickettsiales e Legionellales podem ser transmitidos através da picada de ectoparasitas, e causar infecções em animais domésticos, silvestres e humanos. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de Rickettsia spp., Ehrlichia spp. e Coxiella burnetii em mamíferos silvestres, cães domésticos e seus respectivos ectoparasitas no semiárido nordestino do Brasil, utilizando técnicas sorológicas e moleculares. Entre agosto de 2014 e novembro de 2016, foi coletado sangue total de 147 cães, 51 roedores, 18 marsupiais e um canídeo silvestre. Todas as amostras de plasma (extraídas de sangue total) foram testadas individualmente utilizando a Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para detectar anticorpos contra Rickettsia rickettsii, Rickettsia amblyommatis e Coxiella burnetii, e amostras de cães domésticos foram posteriormente testadas para Ehrlichia canis. As amostras de DNA de mamíferos e ectoparasitos foram analisadas por meio da Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) para a presença dos genes gltA (Rickettsia spp.), dsb (Ehrlichia spp.) e cap (Coxiella spp.), seguidas de sequenciamento e análises filogenéticas. Um total de 222 carrapatos, 84 pulgas e seis piolhos foram coletados, parasitando os animais amostrados. Pertencendo aos seguintes gêneros e espécies: Carrapatos (Rhipicephalus sanguineus sensu lato, 119 Ixodes loricatus, 32 Amblyomma parvum, 15 Amblyomma sp., 13 Amblyomma auricularium, 3 Ornithodoros rietcorreai e 2 Haemaphysalis sp.), Pulgas (52 Ctenocephalides felis felis, 19 Pulex sp. e 13 Polygenis (Polygenis) bohlsi jordani), e piolhos (4 Polyplax sp. e 2 Gyropus sp.). No total, 77,5% dos cães e 7,1% dos mamíferos silvestres foram soropositivos (título 40 para E. canis, 64 para C. burnetii e Rickettsia spp.) para pelo menos uma espécie de patógeno. Foi observada soropositividade para E. canis em 102 cães (69,3%), para R. amblyommatis em 41 cães (27,8%), dois roedores (3,9%) e no único canídeo silvestre, para R. rickettsii em 14 cães (9,5%) e dois roedores (3,9%), para C. burnetii em cinco cães (3,4%), um marsupial (5,5%) e um roedor (1,9%). Treze amostras de sangue de cães (8,8%), uma amostra de sangue marsupial (5,5%) e cinco amostras de carrapato (4,2%) mostraram positividade em testes de PCR para Ehrlichia sp., e quatro amostras de pulgas e três de carrapato foram positivas para Rickettsia spp., todas as amostras testadas foram negativas para Coxiella spp. As análises de sequenciamento e Blast mostraram 100% de identidade com E. canis em seqüências obtidas do gene dsb em amostras de sangue de cão e R. sanguineus s.l., Ehrlichia sp. do gene dsb em amostras de sangue de marsupial, Rickettsia felis do gene glta em quatro amostras de C. felis felis, "Candidatus Rickettsia andeanae" do gene glta em duas amostras de A. parvum e R. amblyommatis do gene glta em uma amostra de A. auricularium. O presente trabalho confirma a circulação dos agentes investigados na região estudada, relatando de forma inédita a presença de um marsupial silvestre infectado por Ehrlichia sp., sendo necessário novos estudos para gerar conhecimento sobre a epidemiologia dos agentes na região.

Microorganisms representing the orders Rickettsiales and Legionellales, can be transmitted through the bite of ectoparasites, and cause infections in domestic animals, wild animals and humans. The present study aimed to investigate the occurrence of Rickettsia spp., Ehrlichia spp. and Coxiella burnetii in wild mammals, domestic dogs and their respective ectoparasites in the Northeastern semi-arid of Brazil, using serological and molecular techniques. Between August 2014 and November 2016, whole blood was collected from 147 dogs, 51 rodents, 18 marsupials, and one wild canid. All plasma samples (extracted from whole blood) were individually tested using indirect fluorescent antibody test (IFAT) to detect antibodies against Rickettsia rickettsii, Rickettsia amblyommatis, and Coxiella burnetii, and samples of domestic dogs were further tested for Ehrlichia canis. The DNA samples from mammals and ectoparasites were analyzed by Polymerase Chain Reaction (PCR) for the presence of gltA (Rickettsia spp.), dsb (Ehrlichia spp.) and cap (Coxiella spp.) genes, followed by sequencing and phylogenetic analyses. A total of 222 ticks, 84 fleas, and six lice were collected which parasitized the animals sampled. They belong to the following genera and species: Ticks (119 Rhipicephalus sanguineus sensu lato, 38 Ixodes loricatus, 32 Amblyomma parvum, 15 Amblyomma sp., 13 Amblyomma auricularium, 3 Ornithodoros rietcorreai, and 2 Haemaphysalis sp.), Fleas (52 Ctenocephalides felis felis, 19 Pulex sp and 13 Polygenis (Polygenis) bohlsi jordani), and lice (4 Polyplax sp. and 2 Gyropus sp.). Overall, 77.5% of the dogs and 7.1% of the wild mammals were seropositive (titer 40 for E. canis, 64 for C. burnetii and Rickettsia spp.) for at least one species of pathogen. Seropositivity was verified for E. canis in 102 dogs (69.3%), for R. amblyommatis in 41 dogs (27.8%), two rodents (3.9%) and in the only wild canid, for R. rickettsii in 14 dogs (9.5%) and two rodents (3.9%), for C. burnetii in five dogs (3.4%), one marsupial (5.5%) and one rodent (1.9%). Thirteen dog blood samples (8.8%), one marsupial blood sample (5.5%), and five ticks samples (4.2%) showed positivity in PCR assays for Ehrlichia sp., as well as four fleas and three ticks samples were positive for Rickettsia spp., all samples tested were negative for Coxiella spp. The sequencing and Blast analyses showed 100% identity with E. canis in sequences obtained from dsb gene in dog blood and R. sanguineus s.l. samples, uncultured Ehrlichia sp. from dsb gene in marsupial blood sample, R. felis from glta gene in four C. felis felis samples, Candidatus Rickettsia andeanae from glta gene in two A. parvum samples and R. amblyommatis from glta gene in one A. auricularium sample. The present work confirms the circulation of the investigated agents in the studied region, reporting an unprecedented way the presence of a wild marsupial infected with Ehrlichia sp., requiring further studies to generate knowledge on the epidemiology of agents in the region.

Inquérito soro-epidemiológico das infecções por Coxiella burnetii em bovinos da região Oeste do estado de São Paulo

A coxielose é uma zoonose associada à bactéria intracelular Coxiella burnetii sendo uma infecção comum em ruminantes e humanos de países asiáticos e europeus. No Brasil estudos epidemiológicos sobre a enfermidade são escassos. O presente estudo avaliou a presença de anticorpos anti-Coxiella (fase II) em 231 amostras de soro bovino provenientes de doze fazendas de leite e corte da região Oeste do estado de São Paulo, colhidas entre os anos de 2012-2018, que estavam mantidas em estoque sob congelamento a -25oC, utilizadas em outras rotinas diagnósticas. As amostras foram testadas pelo método ELISA, utilizando kit comercial importado (Bio-X - Diagnostics®). Do total avaliado, 176 (76,2%) animais foram sorologicamente positivos. Onze (91,6%) das 12 propriedades apresentaram ao menos um animal positivo, com prevalências variando entre 20 e 100%. Os resultados denotam alta prevalência da coxielose em bovinos de leite e corte na região Oeste Paulista, sugerindo que a enfermidade deve ser avaliada com relação aos potencias impactos na reprodução dos animais, incluindo diagnóstico diferencial com patógenos abortivos. Considerando-se o risco de transmissão zoonótica e o desconhecimento acerca da doença, as autoridades de saúde locais devem estar atentas a possíveis casos humanos subdiagnosticados ou confundidos com outras enfermidades similares.

Coxielose is a zoonosis associated with the intracellular bacterium Coxiella burnetii being a common infection in ruminants and humans from Asian and European countries. In Brazil, epidemiological studies on the disease are scarce. The present study evaluated the presence of anti-Coxiella antibodies (phase II) in 231 bovine serum samples from 12 dairy farms in the western region of the state of São Paulo, collected between the years of 2012-2018, which were maintained in stock under freezing at -25oC, used in other diagnostic routines. Samples were tested by the ELISA method using imported commercial kit (Bio-X - Diagnostics®). Of the total evaluated, 176 (76.2%) animals were serologically positive. Eleven (91.6%) of the 12 farms presented at least one positive animal, with prevalence varying between 20 and 100%. The results indicate a high prevalence of coxielose in milk and beef cattle in the western region of São Paulo, suggesting that the disease should be evaluated in relation to the potential impacts on animal reproduction, including differential diagnosis with abortive pathogens. Considering the risk of zoonotic transmission and lack of knowledge about the disease, local health authorities should be aware of possible human cases that are underdiagnosed or confused with other similar diseases.