Resumo

Las serpientes del género Crotalus ganaron espacio significativo en el campo científico desde el desarrollo de investigaciones con su veneno que involucran la actividad citotóxica. Crotalus durissus cascavella es la única subespecie grabadas del bioma de la Caatinga del nordeste de Brasil y los estudios carecen en sus propiedades del veneno. El presente estudio evaluó el veneno crudo de C. d. cascavella por su actividad citotóxica in vitro contra líneas celulares tumorales y las células normales. El mecanismo de la muerte celular inducida por este veneno también se investigó. C. d. cascavella mostró una alta citotoxicidad (valores de IC50 que oscila desde 2,7 hasta 6,9 g/mL) contra cinco líneas de células tumorales, entre las cuales: OVCAR - 8 y SKOV3 (carcinoma de ovario), PC-3M (carcinoma metastásico de próstata), MCF-7 (carcinoma de mama), SF - 268 (glioblastoma) y PBMC también. Las células tratadas con C. d. cascavella disparó la cascada apoptótica, según lo confirmado por diversos métodos que se muestran en este trabajo. Estos resultados refuerzan así el potencial biomédico y farmacológico de las toxinas del veneno de esta especie.

Snakes from the genus Crotalus gained significant space in the scientific field since the development of researches with their venom involving cytotoxic activity. Crotalus durissus cascavella is the only subspecies recorded of the Caatinga biome of Northeastern Brazil and its noticed a lack of studies on its venom properties. The present study evaluated the crude venom of C. d. cascavella for its cytotoxic activity in vitro against both tumor cell lines and normal cells. The mechanism of cell death induced by this venom was also investigated. C. d. cascavella venom presented high cytotoxicity (IC50 values ranging from 2.7 to 6.9 µg/mL) against five tumor cells lines: OVCAR-8 and SKOV3 (ovarian carcinomas), PC-3M (metastatic prostate carcinoma), MCF-7 (breast carcinoma), and SF-268 (glioblastoma) and PBMC as well. The cells treated with C. d. cascavella venom triggered the apoptotic pathway as confirmed by several methods. These results underline the biomedical potential of toxins from the venom from this species.

Serpentes do Gênero Crotalus ganhou espaço significativo no campo científico, desde o desenvolvimento de pesquisas com seu veneno envolvendo atividade citotóxica. A Crotalus durissus cascavella (C.d.cascavella) é uma subespécie característica da Caatinga do Nordeste do Brasil e faltam estudos sobre as propriedades de seu veneno. O presente estudo avaliou o veneno bruto de C. d. cascavella para a sua atividade citotóxica in vitro contra as linhagens de células tumorais e células normais. O mecanismo de morte celular induzida por este veneno também foi investigado. Observou-se alta citotoxicidade (valores de IC50 entre 2,7-6,9 µg/mL) contra cinco linhagens de células tumorais, dentre elas: OVCAR - 8 e SKOV3 (carcinoma ovariano), PC-3M (carcinoma metastático de próstata), MCF-7 (carcinoma mamário), SF - 268 (glioblastoma) e PBMC. As células tratadas dispararam a cascata apoptótica, como confirmado por vários métodos demonstrados neste trabalho. Esses resultados reforçam, assim, o potencial biomédico e farmacológico das toxinas do veneno dessa espécie.

Resumo

Crotalus durissus cascavella (C.d.cascavella) é uma serpente encontrada na Caatinga do Nordeste Brasileiro. Seu veneno é caracterizado em promover alterações sistêmicas e causar óbitos em suas vítimas logo após o acidente ofídico. Esse estudo teve por objetivo investigar as alterações em mecânica pulmonar (propriedades elásticas, resistivas e viscoelásticas) e histopatologia em pulmões após inoculação intraperitoneal (3,0 g/Kg) do veneno dessa serpente (C.d.cascavella) em camundongos. Os valores médios de resistência Newtoniana (RN), resistência tecidual(G) e elastância tecidual(H) foram significativos em todos os grupos experimentais (1h, 3h, 6h, 12h e 24h), sendo maiores nos dois últimos grupos. A histeresividade () foi significativa em 6h, 12h e 24h. Os valores médios de complacência estática (Cst) foram significativos nos grupos de 6h, 12h e 24h sendo nesse último grupo valores menores. A capacidade inspiratória (CI) mostrou-se significativa em 3h, 6h, 12h e 24h. Após desafio com Metacolina, RN apresentou valores médios significativos nos grupos 6h, 12h e 24h. O veneno da serpente (C.d.cascavella) induziu no tecido pulmonar, atelectasia, enfisema, hemorragia, infiltrado inflamatório com polimorfonucleares, congestão em todos os grupos experimentais e edema apenas no grupo de 24h. O veneno da serpente C.d.cascavella provocou alterações mecânicas e histopatológicas no tecido pulmonar.

Crotalus durissus cascavella (C. d. cascavella) is a snake found in the Brazilian Northeast Caatinga. Its venom is featured on promoting systemic changes and cause death in his victims after the snakebite. This study aimed to investigate the changes in lung mechanics (elastic properties, resistive and viscoelastic) and histopathology in lungs after intraperitoneal injection (3,0 g/Kg) of this snake venom (C. d. cascavella) in mice. The average values of Newtonian resistance (RN), tissue resistance (G) and tissue elastance (H) were significant in all groups (1h, 3h, 6h, 12h and 24h) and higher in the last two groups. The histeresividade () was significant in 6h, 12h and 24h. The static compliance of average values (Cst) were significant in groups of 6h, 12h and 24h and the latter group lower values. The inspiratory capacity (CI) was significant at 3h, 6h, 12h and 24h. After challenge with Methacholine, RN known significant average values in groups 6h, 12h and 24h. The venom of the snake C. d. cascavella also induced in pulmonar tissue atelectasis, emphysema, hemorrhage, inflammatory infiltrate with polymorphonuclear cels, congestion in all experimental groups, and edema only in the 24h group. The venom of the snake C. d. cascavellaca used mechanical and histopathological changes in lung tissue.

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The phospholipase A2 superfamily encompasses 15 groups that are classified into: secreted PLA2 (sPLA2); cytosolic PLA2 (cPLA2); Ca2+-independent intracellular PLA2 (iPLA2); platelet-activating factor acetylhydrolase (PAF-AH); and lysosomal PLA2. Currently, approximately 700 PLA2 sequences are known, of which 200 are obtained from the venom gland of Crotalinae snakes. However, thus far, little information is available on cloning, purification and structural characterization of PLA2 from Crotalus durisssus cascavela venom gland. In the present work, we report the molecular cloning of a novel svPLA2 from C. d. cascavella (Cdc), a predominant rattlesnake subspecies in northeastern Brazil. The Cdc svPLA2 cDNA precursor is 689 nucleotides long and encodes a protein of 138 amino acid residues, with a calculated molecular mass of approximately 13,847 Da and an estimated isoelectric point of 5.14. Phylogenetic analysis of Crotalinae PLA2 reveals that Cdc PLA2 clustered with other acidic type IIA PLA2 homologues is also present in the venom of North American rattlesnakes. Hitherto, this study presents a novel PLA2 cDNA precursor from C. d. cascavella and data reported herein will be useful for further steps in svPLA2 purification and analysis.

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Nas últimas décadas o câncer alcançou grande dimensão, sendo considerado um problema de saúde publica a nível mundial, representando uma das principais causas de morte no mundo. As serpentes do gênero Crotalus vêm ganhando espaço significativo no campo científico, pois pesquisas realizadas com seu veneno estão demostrando que este apresenta mecanismos envolvidos em atividades citotóxicas em linhagens tumorais. Logo, o objetivo deste trabalho foi analisar o efeito citotóxico do veneno bruto da serpente Crotalus durissus cascavella (Cdcasca), in vitro, em linhagens tumorais, bem como, os mecanismos de morte celular induzidos por este veneno. Os efeitos citotóxicos da Cdcasca foram avaliados nas linhagens de carcinoma ovariano, carcinoma de próstata, carcinoma de mama e glioblastoma. Foram realizados também avaliação de alterações no DNA, integridade da membrana celular, ciclo celular e atividade das Caspases 3 e 7. Os resultados demostraram relevante citotoxicidade apresentando valores de CI50 de 2.4 até 6.7 ?g/mL, para as cinco linhagens testadas. As células tratadas com o Cdcasca demostraram alterações morfológicas de forma dosedependente, apresentando redução no volume celular, fragmentação nuclear e formação de corpos apoptóticos. A atividade anti-proliferativa e integridade de membrana celular foi confirmada, com uma significante redução do número de células para a concentração do veneno de 4 ?g/mL. A ocorrência de apoptose foi confirmada através da ativação de Caspases 3 e 7. Em conclusão, o veneno da Crotalus durissus cascavella demostrou efeito citotóxico dose-dependente em diversas linhagens tumorais, demonstrando diversas alterações morfológicas em especial as células de linhagem de carcinoma ovariano, causando morte celular. (AU)

In the last decades cancer has reached a great dimension being considered a worldwide public health problem, representing a major cause of death in world. Snakes from the genus Crotalus has gained significant space in the scientific field, since researches with their venom show that its mechanisms are involved in the cytotoxic activity.Therefore, the aim of the present study was to analyze the crude venom of Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) cytotoxic activity in vitro against tumor cell lines, as well as, the mechanism of cell death induced by this venom. . The cytotoxic effects of Cdcasca were evaluated on ovarian cell carcinoma, prostate carcinoma, breast carcinoma and glioblastoma. Evaluations to DNA fragmentation, cell membrane integrity, cell cycle and the activity of Caspases 3 and 7 were also present in this study. Results showed relevant cytotoxicity presenting values of CI50 of 2.4 to 6.7 μg/mL on the five lineages tested. The cells treated with Cdcasca showed morphologic alterations in a dose - dependent way, presenting reduction on the cell volume, nuclear fragmentation and presence of apoptotic bodies. The antiprolifer active activity and the membrane integrity were confirmed, with a significant reduction of the number of cells to the concentration of the venom of μg/mL. The occurrence of apoptosis was confirmed trough the activation of Caspases 3 and 7. In conclusion, the venom of Crotalus durissus cascavella showed a dose-dependent cytotoxic effect in several tumor cell lines, presenting several morphological alterations, especially to the ovarian cell carcinoma, causing cell death.(AU)

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Nas últimas décadas o câncer alcançou grande dimensão, sendo considerado um problema de saúde publica a nível mundial, representando uma das principais causas de morte no mundo. As serpentes do gênero Crotalus vêm ganhando espaço significativo no campo científico, pois pesquisas realizadas com seu veneno estão demostrando que este apresenta mecanismos envolvidos em atividades citotóxicas em linhagens tumorais. Logo, o objetivo deste trabalho foi analisar o efeito citotóxico do veneno bruto da serpente Crotalus durissus cascavella (Cdcasca), in vitro, em linhagens tumorais, bem como, os mecanismos de morte celular induzidos por este veneno. Os efeitos citotóxicos da Cdcasca foram avaliados nas linhagens de carcinoma ovariano, carcinoma de próstata, carcinoma de mama e glioblastoma. Foram realizados também avaliação de alterações no DNA, integridade da membrana celular, ciclo celular e atividade das Caspases 3 e 7. Os resultados demostraram relevante citotoxicidade apresentando valores de CI50 de 2.4 até 6.7 ?g/mL, para as cinco linhagens testadas. As células tratadas com o Cdcasca demostraram alterações morfológicas de forma dosedependente, apresentando redução no volume celular, fragmentação nuclear e formação de corpos apoptóticos. A atividade anti-proliferativa e integridade de membrana celular foi confirmada, com uma significante redução do número de células para a concentração do veneno de 4 ?g/mL. A ocorrência de apoptose foi confirmada através da ativação de Caspases 3 e 7. Em conclusão, o veneno da Crotalus durissus cascavella demostrou efeito citotóxico dose-dependente em diversas linhagens tumorais, demonstrando diversas alterações morfológicas em especial as células de linhagem de carcinoma ovariano, causando morte celular.

In the last decades cancer has reached a great dimension being considered a worldwide public health problem, representing a major cause of death in world. Snakes from the genus Crotalus has gained significant space in the scientific field, since researches with their venom show that its mechanisms are involved in the cytotoxic activity.Therefore, the aim of the present study was to analyze the crude venom of Crotalus durissus cascavella (Cdcasca) cytotoxic activity in vitro against tumor cell lines, as well as, the mechanism of cell death induced by this venom. . The cytotoxic effects of Cdcasca were evaluated on ovarian cell carcinoma, prostate carcinoma, breast carcinoma and glioblastoma. Evaluations to DNA fragmentation, cell membrane integrity, cell cycle and the activity of Caspases 3 and 7 were also present in this study. Results showed relevant cytotoxicity presenting values of CI50 of 2.4 to 6.7 μg/mL on the five lineages tested. The cells treated with Cdcasca showed morphologic alterations in a dose - dependent way, presenting reduction on the cell volume, nuclear fragmentation and presence of apoptotic bodies. The antiprolifer active activity and the membrane integrity were confirmed, with a significant reduction of the number of cells to the concentration of the venom of μg/mL. The occurrence of apoptosis was confirmed trough the activation of Caspases 3 and 7. In conclusion, the venom of Crotalus durissus cascavella showed a dose-dependent cytotoxic effect in several tumor cell lines, presenting several morphological alterations, especially to the ovarian cell carcinoma, causing cell death.

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ABSTRACT The occurrence of Amblyomma rotundatum on Crotalus durissus cascavella (neotropical rattlesnake) is reported for the first time not only in the State of Pernambuco but also in Brazil.

RESUMO A ocorrência de Amblyomma rotundatum parasitando Crotalus durissus cascavella (cascavel sul-americana) é registrada pela primeira vez não apenas para o Estado de Pernambuco, mas também para o Brasil.