Kinetic vitrification: concepts and perspectives in animal sperm cryopreservation

Sperm cryopreservation is an important tool for genetic diversity management programs and the conservation of endangered breeds and species. The most widely used method of sperm conservation is slow freezing, however, during the process, sperm cells suffer from cryoinjury, which reduces their viability and fertility rates. One of the alternatives to slow freezing is vitrification, that consist on rapid freezing, in which viable cells undergo glass-like solidification. This technology requires large concentrations of permeable cryoprotectants (P- CPA's) which increase the viscosity of the medium to prevent intracellular ice formation during cooling and warming, obtaining successful results in vitrification of oocytes and embryos. Unfortunately, this technology failed when applied to vitrification of sperm due to its higher sensitivity to increasing concentrations of P-CPAs. Alternatively, a technique termed 'kinetic sperm vitrification' has been used and consists in a technique of permeant cryoprotectant-free cryopreservation by direct plunging of a sperm suspension into liquid nitrogen. Some of the advantages of kinetic vitrification are the speed of execution and no rate-controlled equipment required. This technique has been used successfully and with better results for motility in human (50-70% motility recovery), dog (42%), fish (82%) and donkey (21.7%). However, more studies are required to improve sperm viability after devitrification, especially when it comes to motility recovery. The objective of this review is to present the principles of kinetic vitrification, the main findings in the literature, and the perspectives for the utilization of this technique as a cryopreservation method.(AU)

Eficiência de três diluidores inespecíficos na refrigeração do sêmen de coelho (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) / Efficiency of three unspecific diluents in refrigeration of rabbit (Oryctolagus cuniculus f. domesticus) semen / Eficiencia de tres diluyentes inespecíficos en la refrigeración de semen de conejo (Oryctolagus cuniculus f. domesticus)

Objetivou-se com este trabalho avaliar a viabilidade seminal de coelhos após refrigeração a 5°C utilizando três diluentes comerciais, indicados para refrigeração de sêmen de outras espécies monogástricas. Foram realizadas dez colheitas de sêmen de cada reprodutor. Os ejaculados de cada coelho eram misturados, obtendo-se um pool de sêmen. Em seguida, o pool heterospérmico foi dividido em três tratamentos, de acordo com o diluente utilizado: BotuDogⓇ (cães); BotuSemen® (equinos); e Beltsville Thawing Solution - BTS (suínos). As amostras foram avaliadas quanto aos parâmetros macroscópicos, microscópicos e funcionais em quatro momentos: sêmen fresco (0 h) e refrigerado (16, 24 e 48 h). Os valores médios de motilidade, vigor e defeitos totais do sêmen fresco foram de 86,0%, 3,05 e 11,5%, respectivamente. Após o início do resfriamento, observou-se comportamento linear decrescente para a motilidade e vigor espermático do sêmen em função do tempo, diferindo (P < 0,05) entre os tratamentos. Destaca-se que o tratamento diluído em BTS apresentou redução na manutenção dos parâmetros avaliados de forma mais pronunciada (P < 0.05) ao longo do tempo, apresentando os menores valores para motilidade e vigor espermático dentro de cada tempo avaliado: 16h [20,6 ± 7,28 e 0,75 (0,375 1,5)], 24h [12,0 ± 6,80 e 0 (0 - 1,0)] e 48h [3,0 ± 2,13 e 0 (0 - 0,125)]. Após 48 h de resfriamento, o BotuDogⓇ foi o que apresentou maior valor para motilidade espermática (71,0 ± 2,08) e, juntamente, com o BotuSemenⓇ apresentaram maior valor para vigor espermático (2,5). De acordo com os dados obtidos os diluentes BotuDogⓇ e BotuSemenⓇ mostraram-se eficientes em manter parâmetros espermáticos adequados, apresentando boa viabilidade espermática em até 48h pós refrigeração a 5°C. Foram obtidos, resultados inéditos quanto a parâmetros espermáticos do sêmen de coelho refrigerado que podem ser utilizados como valores de referência para o manejo reprodutivo e processamento do semen desses animais, visto a inexistênca dessas recomendações técnicas.

The objective of this work was to evaluate the seminal viability of rabbits after refrigeration at 5°C using three commercial diluents, indicated for refrigeration of semen from other monogastric species. Ten semen collections were performed from each breeder. The ejaculates of each rabbit were mixed, obtaining a pool of semen. Then, the heterospermic pool was divided into three treatments, according to the diluent used: BotuDog (dogs); BotuSemenⓇ (horses); and Beltsville Thawing Solution - BTS (pigs). The samples were evaluated for macroscopic, microscopic, and functional parameters in four moments: fresh (0 h) and refrigerated (16, 24, and 48 h) semen. The average values of motility, vigor, and total defects of fresh semen were 86.0%, 3.05 and 11.5%, respectively. After the beginning of cooling, a decreasing linear behavior was observed for motility and sperm vigor of semen as a function of time, differing (P < 0.05) between treatments. It is noteworthy that the treatment diluted in BTS® showed a more pronounced reduction in the maintenance of the evaluated parameters (P < 0.05) over time, with the lowest values for sperm motility and vigor within each evaluated time: 16h [20.6 +7.28 and 0.75 (0.375 - 1.5)], 24h [12.0± 6.80 and 0 (0 - 1.0)] and 48h [3.0±2.13 and 0 (0 - 0.125)]. After 48 h of cooling, BotuDog presented the highest value for sperm motility (71.0 ± 2.08) and, together with BotuSemenⓇ, presented the highest value for sperm vigor (2.5). According to the data obtained, BotuDog and BotuSemenⓇ diluents were efficient in maintaining adequate sperm parameters, showing good sperm viability in up to 48 hours after refrigeration at 5°C. Through this work, unpublished results were obtained regarding spermatic parameters of refrigerated rabbit semen that can be used as reference values for reproductive management and semen processing of these animals, given the lack of these technical recommendations.

El objetivo de este trabajo fue evaluar la viabilidad seminal de conejos después de refrigeración a 5°C utilizando tres diluyentes comerciales, indicados para la refrigeración de semen de otras especies monogástricas. Se realizaron diez colectas de semen de cada reproductora. Se mezclaron los eyaculados de cada conejo, obteniendo un pool de semen. Luego, el pool heterospérmico se dividió en tres tratamientos, según el diluyente utilizado: BotuDogⓇ (perros); BotuSemenⓇ (caballos); y Beltsville Thawing Solution - BTS® (cerdos). Las muestras fueron evaluadas para parámetros macroscópicos, microscópicos y funcionales en cuatro momentos: semen fresco (0 h) y refrigerado (16, 24 y 48 h). Los valores promedio de motilidad, vigor y defectos totales del semen fresco fueron 86,0%, 3,05 y 11,5%, respectivamente. Después del inicio del enfriamiento, se observó un comportamiento lineal decreciente para la motilidad y el vigor espermático del semen en función del tiempo, difiriendo (P < 0.05) entre tratamientos. Cabe destacar que el tratamiento diluido en BTS® mostró una reducción más pronunciada en el mantenimiento de los parámetros evaluados (P<0,05) a lo largo del tiempo, con los valores más bajos de motilidad espermática y vigor dentro de cada tiempo evaluado: 16h [20,6 ± 7,28 y 0,75 (0,375 -1.5)], 24h [12,0 ± 6,80 y 0 (0 - 1,0)] y 48h [3,0±2,13 y 0 (0 - 0,125)]. Después de 48 h de enfriamiento, BotuDogⓇ presentó el valor más alto de motilidad espermática (71,0 +2,08) y, junto con BotuSemenⓇ, presentó el valor más alto de vigor espermático (2,5). De acuerdo con los datos obtenidos, los diluyentes BotuDogⓇ y BotuSemenⓇ fueron eficientes en mantener parámetros espermáticos adecuados, mostrando buena viabilidad espermática hasta 48 horas después de la refrigeración a 5°C. A través de este trabajo se obtuvieron resultados inéditos respecto a parámetros espermáticos de semen de conejo refrigerado que pueden ser utilizados como valores de referencia para el manejo reproductivo y procesamiento de semen de estos animales, dada la falta de estas recomendaciones técnicas.

Viability of Toxoplasma gondii in cattle semen cryopreserved with different concentrations of cryoprotectant / Viabilidade do Toxoplasma gondii em sêmen de bovino criopreservado em diferentes concentrações de crioprotetores

ABSTRACT: Toxoplasma gondii can be eliminated in bovine semen. Cryopreserved semen is often used due to the fact that artificial insemination in dairy and beef cattle provides benefits in terms of production. However, little is known regarding the viability and infectivity of T. gondii tachyzoites in cryopreserved bovine semen. In the present study, cattle semen negative for T. gondii were contaminated with 1 x 106 tachyzoites (RH strain) and cryopreserved with and without different cryoprotectants, such as DMSO (concentrations of 2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and glycerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% and 10.0%), followed by freezing in liquid nitrogen (-196°C). After 24 hours, the samples were thawed and inoculated in 10 mice per cryoprotectant concentration. The mice were evaluated for clinical signs of toxoplasmosis (rough coat, diarrhea, hypoactivity and sudden death) as well as serum titers of IgM and IgG and the presence of tachyzoites in the peritoneal lavage. The results revealed that T. gondii remained infective in all samples. Clinical signs of toxoplasmosis were observed in the mice beginning with the 6th day post-inoculation (DPI) and 100% lethality was found between the 7th and 9th DPI. Viable tachyzoites were recovered from peritoneal exudate of dead mice (except for the control group), with higher mean of tachyzoite counts in the intraperitoneal lavage for 5% DMSO (±3.32 x 106), 8% DMSO (±3.53 x 106), 3% glycerol (±4.75 x 106), 7.5% glycerol (±6.26 x 106) and the absence of cryoprotectant (±3.11 x 106). Seroconversion occurred in the treated groups, with titers of IgG from 1:16 to 1:128 and IgM from 1:16 to 1:512. T. gondii viability and infectivity were maintained in cattle semen during 24 hours of cryopreservation at -196°C with and without cryoprotectant. However, further studies are necessary to determine whether cryopreserved semen contributes to the spread of toxoplasmosis through artificial insemination.

RESUMO: Sabe-se que Toxoplasma gondii pode ser eliminado no sêmen bovino. A inseminação artificial em bovinos leiteiros e de corte proporcionou avanços e benefícios nas produções e para isso o sêmen criopreservado é frequentemente utilizado. No entanto, pouco se sabe sobre a viabilidade e infectividade dos taquizoítos de T. gondii em sêmen bovino criopreservado. Para isso o sêmen bovino, negativo para T. gondii, foi contaminado com 1x106 taquizoítos (cepa RH), criopreservados com ou sem diferentes crioprotetores como DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% e 10.0%) e Glicerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% e 10.0%) e congelados em nitrogênio líquido (-196°C). Após 24 horas, essas amostras foram descongeladas e inoculadas em 10 camundongos por diluente de concentração de crioprotetor. Os camundongos foram avaliados quanto a sinais clínicos de toxoplasmose (pele áspera, diarreia, hipoatividade e morte súbita), títulos séricos de IgM e IgG e presença de taquizoítos no lavado peritoneal. Os resultados mostraram que T. gondii se manteve infectante em todas as amostras, inclusive naquelas sem crioprotetor. Sinais clínicos de toxoplasmose foram observados nos camundongos a partir do 6º dia pós-inoculação (DPI) e 100% de letalidade foi verificada entre o 7º ao 9º DPI. Nos camundongos mortos, exceto no grupo controle, taquizoítos viáveis foram recuperados do exsudato peritoneal, com maior média de taquizoítos quantificados na lavagem intraperitoneal para DMSO a 5% (±3.32x106), 8% (±3.53x106) e glicerol 3% (±4.75x106), 7,5% (±6.26x106) e livre de crioprotetor (±3.11x106). A soroconversão ocorreu nos grupos tratados com títulos de IgG (1:16 a 1:128) e IgM (1:16 a 1:512). A viabilidade e infectividade do T. gondii no sêmen bovino durante as 24 horas de criopreservação a -196°C foram mantidas com ou sem crioprotetor. No entanto, mais estudos são necessários para verificar se o sêmen criopreservado contribui para a disseminação da toxoplasmose na inseminação artificial.

Assessment of coconut water added to Numida meleagris egg yolk as cryoprotectant for goat semen

Effects were assessed of the dilutants TRIS and ACP - 101c® with the addition of different guinea fowl (Numida meleagris) egg yolk concentrations. Fifteen ejaculates were collected from five goats of the Anglo Nubian breed. The ejaculates were pooled and then divided into 12 groups, two control groups (GC1 TRIS, with 2.5% Gallus gallus domesticus hen egg yolk GOGD), (GC2 Control Group ACP - 101c®, with the addition of 2.5% Gallus gallus domesticus hen egg yolk GOGD) and ten experimental groups (EG), containing TRIS and ACP added with different concentrations of egg yolk from guinea hen (Numida meleagris) (TRIS 2,5% GONM; TRIS 5% GONM; TRIS 10% GONM; TRIS 15% GONM; TRIS 20% GONM; ACP® 2,5% GONM; ACP® 5% GONM; ACP® 10% GONM; ACP® 15% GONM; ACP® 20% GONM). Then cryopreservation was carried out and the samples stored in liquid nitrogen (-196 °C). After seven days, the samples were thawed and assessed for spermatic kinetics, immunofluorescence and sperm morphology. Analysis of GOMN by the CASA system showed that the various parameters were similar to those of GOGD (P>0.05). The membrane integrity, mitochondrial potential and the acrosome were not influenced by the treatment (P>0.05) nor by the dilutant used for cryopreservation (P>0.05). The spermatic morphology was also preserved by the different GOGD and GONM concentrations in the ACP® and TRIS dilutants, with no statistically significant differences (P<0.05). It was concluded that Numida meleagris egg yolk, as external membrane cryoproctant added to the dilutants ACP-101c® and TRIS, improved goat semen quality.(AU)

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.

Adição de colesterol carregado com ciclodextrina ao sêmen ovino na criopreservação / Addition of cholesterol loaded with cyclodextrin to sheep semen in cryopreservation

Objetivou-se avaliar o efeito da adição de diferentes concentrações do colesterol carregado por ciclodextrina (CCC) sobre os espermatozoides congelados de ovinos. Foram coletados dois ejaculados de 10 carneiros (n=20) e diluídos em Tris-Gema de ovo até a concentração final de 200 x106 sptz/mL e mantidos em banho maria a 32 °C. O CCC foi adicionado: controle (0,0mg), 1,5mg, 3,0mg e 6,0mg de CCC/120 x106 sptz/mL. Após adição, o sêmen foi resfriado a 5 °C por duas horas, após esse período, envasado em palhetas de 0,5mL e então acondicionado sob vapor de nitrogênio líquido (N2L), a 8 cm da lâmina líquida/15 minutos e depois imersos no N2L. As amostras foram analisadas quanto à motilidade espermática, integridade da membrana plasmática e da membrana acrossomal, atividade mitocondrial e teste de ligação. As variáveis foram submetidas à análise de variância e médias comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. O maior percentual de integridade da membrana plasmática, acrossomal e a maior atividade mitocondrial foram obtidos utilizando 6,0mg de CCC. A adição de3,0mg de CCC manteve o percentual de motilidade espermática após a criopreservação, quando comparado aos demais tratamentos e controle. A adição de 1,5 e 3,0mg de CCC mantiveram o percentual de viabilidade espermática após a criopreservação acima de 65%. O número de espermatozoides com capacidade de ligação a membrana perivitelina da gema de ovo foi maior (p<0,05) no tratamento com 3,0mg de CCC. Concluiu se que a adição de CCC ao sêmen diluído, nas concentrações avaliadas, melhora a qualidade espermática após descongelação.(AU)

The objective was to evaluate the effect of adding different concentrations of cholesterol carried by cyclodextrin (CCC) on frozen ovine sperm. Two ejaculates were collected from 10 rams (n=20) and diluted in Tris-Yolk until the final concentration of 200 x 106 sptz/mL was reached and kept in a water bath at 32 °C. The CCC was added: control (0,0mg), 1.5mg, 3.0mg, and 6.0mg of CCC/120 x 106 sptz/mL. After the addition, the semen was cooled at 5 °C for two hours, after that period, filled in 0.5 mL straws, and then conditioned under liquid nitrogen vapor (N2L), at 8 cm of the liquid/15 minutes, and then immersed in N2L. The samples were analyzed for sperm motility, plasma membrane and acrosomal membrane integrity, mitochondrial activity, and binding test. The variables were subjected to analysis of variance and means compared by Tukey's test at 5% probability. The highest percentage of plasma membrane integrity and the highest mitochondrial activity were obtained using 6.0mg of CCC. The addition of 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm motility after cryopreservation, when compared to other treatments and control. The addition of 1.5 and 3.0mg of CCC maintained the percentage of sperm viability after cryopreservation, above 65%. The count of sperm with ability to bind to the egg yolk perivitelline membrane was higher (p<0.05) with 3.0mg of CCC. It is concluded that the addition of CCC to the diluted semen, in the evaluated concentrations, improves the sperm quality after thawing.(AU)

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Effect of cryoprotectant on the motility, viability, fertilization, and DNA integrity of naleh fish Barbonymus sp. (Cyprinidae) sperm / Efeito do crioprotetor na motilidade, viabilidade, fertilização e integridade do DNA no sêmen de peixes naleh Barbonymus sp. (Cyprinidae)

Naleh fish Barbonymus sp. is a commercial freshwater fish, which is indigenous to Aceh, Indonesia. The population of this species has declined over the years as a result of habitat perturbations and overfishing. Hence, the crucial need to develop a cryopreservation method to support breeding programs. This involved the use of a cryoprotectant as an important component. The objective of this study, therefore, was to explore the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa, and a total of five types were tested. These include the DMSO, Methanol, Ethanol, Glycerol, and Ethylene Glycol at a similar concentration of 10%, which were individually combined with 15% egg yolk, and every treatment was performed in three replications. Conversely, Ringer's solution was adopted as an extender, and the sperm was cryopreserved in liquid nitrogen for 15 days. The results showed significant influence on sperm motility and viability, as well as egg fertility of naleh fish (P <0.05), although the DMSO provided the best outcome, compared to others at 47.17%, 50.13%, and 45.67%, respectively. Furthermore, DNA fragmentation had not occurred in the fresh and cryopreserved sperm samples, indicating the protective effect of tested cryoprotectants. It is concluded that the 10% DMSO and 15% egg yolk is the best cryoprotectant for naleh fish spermatozoa.(AU)

O peixe naleh Barbonymus sp. é um peixe comercial de água doce, originário de Aceh, Indonésia. Durante vários anos, as perturbações provocadas no seu habitat e a pesca predatória determinaram o declínio da sua população, cuja preservação deve apoiar-se em um programa de reprodução controlada, com o emprego de espermatozoides criopreservados. O presente trabalho realizou um estudo comparativo de cinco crioprotetores: dimetilsultóxido, metanol, etanol, glicerol e etileno glicol. Todos os crioprotetores foram testados na concentração de 10%, combinados a 15% de gema de ovo. Cada tratamento foi efetuado em triplicatas. A solução de ringer foi utilizada como extensor e o esperma foi criopreservado em nitrogênio líquido por 15 dias. Os resultados obtidos revelaram a existência de influência significante (P<0,05) na viabilidade e motilidade espermática bem como na fertilidade dos ovos do peixe naleh, em que o dimetilsulfóxido apresentou o melhor resultado com os valores de 47,17%, 50,13% e 45,67%, respectivamente. Por outro lado, a fragmentação do DNA não ocorreu nas amostras de esperma fresco e criopreservado, indicando o efeito protetor dos crioprotetores testados. A conclusão obtida foi que o dimetilsulfóxido e 15% de gema de ovo foram o melhor crioprotetor para os espermatozoides do peixe naleh.(AU)

Uso de gema de ovo em diferentes concentrações na congelação espermática de Prochilodus brevis e sua influência em parâmetros cinéticos / Use of egg yolk on Prochilodus brevis sperm freezing and its influence on kinect parameters

Prochilodus brevis is a fish species with an important ecological and economic role. Therefore, its captive breeding, together with sperm cryopreservation, come as an alternative to improve its availability. To perform sperm cryopreservation with quality results, it is necessary to develop studies on cryomedia composition, such as non-permeable cryoprotectants. The aim of the study was to test the efficacy of two non-permeable cryoprotectants on post-thawed kinetic parameters of Prochilodus brevis sperm. Twenty reproductive mature P. brevis males were selected and induced to sperm with carp pituitary extract. The sperm was collected, and five pools were made. Pools were diluted in 5% glucose and 10% DMSO added or not with three different concentrations of egg yolk (5; 10 or 12%). The samples were placed on French straws, frozen in dry shipper and stored in liquid nitrogen. After thawing, the kinetic analyses of computer assisted sperm analysis (CASA) were performed. There were no significant differences between the total motility of the control (60.48%) and treatments (49.0; 47.8 and 51.68%, respectively). The other kinetic parameters also showed no statistical difference. Thus, there is no need to use egg yolk in the freezing of P. brevis sperm when using a glucose and DMSO extender.

Uso de gema de ovo em diferentes concentrações na congelação espermática de Prochilodus brevis e sua influência em parâmetros cinéticos / Use of egg yolk on Prochilodus brevis sperm freezing and its influence on kinect parameters

Prochilodus brevis is a fish species with an important ecological and economic role. Therefore, its captive breeding, together with sperm cryopreservation, come as an alternative to improve its availability. To perform sperm cryopreservation with quality results, it is necessary to develop studies on cryomedia composition, such as non-permeable cryoprotectants. The aim of the study was to test the efficacy of two non-permeable cryoprotectants on post-thawed kinetic parameters of Prochilodus brevis sperm. Twenty reproductive mature P. brevis males were selected and induced to sperm with carp pituitary extract. The sperm was collected, and five pools were made. Pools were diluted in 5% glucose and 10% DMSO added or not with three different concentrations of egg yolk (5; 10 or 12%). The samples were placed on French straws, frozen in dry shipper and stored in liquid nitrogen. After thawing, the kinetic analyses of computer assisted sperm analysis (CASA) were performed. There were no significant differences between the total motility of the control (60.48%) and treatments (49.0; 47.8 and 51.68%, respectively). The other kinetic parameters also showed no statistical difference. Thus, there is no need to use egg yolk in the freezing of P. brevis sperm when using a glucose and DMSO extender.(AU)

Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Ultraestrutura e criopreservação de sêmen de jundiá amazônico (Leiarius marmoratus) em cativeiro / Ultrastructure and sperm cryopreservation of the amazon catfish (Leiarius marmoratus) in captivity

Os objetivos do presente estudo foram analisar a ultraestrutura do espermatozoide do jundiá amazônico e avaliar a sua criopreservação com três agentes crioprotetores (metanol 10%, DMSO 10% e etilenoglicol 10%) e duas soluções ativadoras (NaCl 0,29% e NaHCO3 1%). Como diluente, foi utilizada uma solução de glicose a 5%, sendo o sêmen envasado em palhetas de 0,25mL e congelado em vapor de nitrogênio (botijão dry shipper). No sêmen fresco, o espermatozoide apresentou comprimento de 25,46±2,54µm, cabeça esférica (1,51±0,18µm), ausência de acrossoma, peça intermediária com formato cônico (0,93±0,17µm), ligeiramente assimétrica, com presença de vesículas, e flagelo único (21,48±2,45µm). O sêmen descongelado apresentou valores mais altos (P<0,05) para duração, vigor e taxa de motilidade espermática com os crioprotetores metanol 10% e DMSO 10%. A duração da motilidade espermática foi maior (P<0,05) com o ativador NaHCO3 1% (21-96 s). O sêmen de Leiarius marmoratus criopreservado com DMSO e metanol apresentou, respectivamente, 7,32±4,21% e 8,94±6,69% de taxa de motilidade. No entanto, os resultados não foram satisfatórios para estabelecer um protocolo para a espécie.(AU)

The aims of this study were to describe the spermatozoon ultrastructure and to evaluate the sperm cryopreservation of the amazon catfish with three cryoprotectant agents (10% methanol, 10% DMSO, and 10% ethylene glycol) and two activator agents (0.29% NaCl and 1% NaHCO3). Glucose 5% extender was used as a diluent solution and sperm loaded in 0.25 straws was frozen in nitrogen vapor (dry shipper). Fresh spermatozoon was 25.46±2.54µm long, the head was spherical (1.51±0.18µm) with no acrosome, the midpiece was cone shaped (0.93±0.17µm) with presence of vesicles, slightly asymmetric, and the flagellum was single (21.48±2.45µm). Post-thawed semen presented higher values (P< 0.05) for duration, vigor and sperm motility rate with cryoprotectants 10% methanol and 10% DMSO. The duration of sperm motility was longer (P< 0,05) when triggered in 1% NaHCO3 (96-21 s). Leiarius marmoratus semen cryopreserved with DMSO and methanol, presented respectively 7.32±4.21% and 8.94±6.69% of motility. However, the results were not satisfactory to establish a protocol for the specie.(AU)

Influence of glycerol addition on the quality of cat epididymal sperm during the freeze-thaw process / Influência da adição do glicerol sobre a qualidade dos espermatozoides epididimários de gato durante as etapas da congelação-descongelação

Cryopreservation of epididymal sperm is a useful tool for preserving the genetic potential of valuable animal specimens. The domestic cat is used as a model to study and develop cryogenics for other felines. However, regulation of the entire cryopreservation process is essential for the success of this biotechnology. Thus, our aim was to evaluate the effects of glycerol equilibration time and freezethaw stages on the quality of epididymal sperm obtained from domestic cats. Epididymal sperm were recovered with TRIS and immediately evaluated for total motility (TM), vigor, viability, membrane functionality (HOST), and morphology. Then, TRIS-20% egg yolk was added to the samples, which were equally divided into two 1.5 mL tubes and refrigerated at 4 ºC for 1 hour. Subsequently, glycerol was added at a final concentration of 5%. The samples were incubated with glycerol (equilibration time) for either 5 or 10 minutes (groups G5 and G10, respectively) and then frozen. Thawing occurred at 37 ºC for 30 seconds. The samples were evaluated at all stages. A reduction in TM was observed only after thawing; however, it was higher in G5 (39.00 ± 4.07%) than in G10 (18.50 ± 4.54%). Vigor declined in both groups after thawing; however, they did not differ from each other. Sperm viability was maintained in G5 after glycerolization (53.60 ± 2.59%); in G10, sperm viability decreased in the glycerolized sample (48.80 ± 2.93%) when compared to that in the fresh sample (59.90 ± 1.74%). Post-thaw viability of G5 (33.80 ± 1.89%) was higher than that of G10 (18.80 ± 3.01%). In the HOST, a decrease in viability was only observed after thawing, with no difference between the groups (41.50 ± 2.84% for G5 and 40.20 ± 3.49% for G10). With regard to sperm morphology, normal sperm decreased while sperm with post-thaw secondary defects increased in both groups. In conclusion, a shorter equilibration time for glycerolization preserves epididymal sperm quality better and the freeze-thaw process is the most critical stage of thawing.(AU)

A criopreservação dos espermatozoides epididimários é uma ferramenta útil para preservar o potencial genético de um animal valioso. Além disso, o gato doméstico é modelo eleito para o estudo e desenvolvimento da criogenia para os demais felinos. Contudo, para o sucesso dessa biotécnica é essencial o controle de todo o processo de criopreservação. Assim, objetivou-se avaliar o efeito do tempo de equilíbrio da glicerolização e das etapas da congelação-descongelação sobre a qualidade dos espermatozoides epididimários de gato doméstico. Para tanto, espermatozoides epididimários foram recuperados com TRIS e imediatamente avaliados quanto à motilidade total (MT), vigor, viabilidade, funcionalidade de membrana (HOST) e morfologia. Em seguida, as amostras foram adicionadas de TRIS-gema a 20%, fracionadas igualmente em dois tubos de 1,5 mL, refrigeradas a 4 ºC por 1 hora e, posteriormente, adicionadas de glicerol na concentração final de 5%. As amostras foram incubadas com glicerol (tempo de equilíbrio) por 5 ou 10 minutos (grupos G5 e G10, respectivamente) e depois congeladas. A descongelação ocorreu a 37 ºC por 30 segundos. As amostras foram avaliadas em todas as etapas. Uma redução na MT foi observada apenas na pós-descongelação, no entanto G5 (39,00 ± 4,07%) foi superior ao G10 (18,50 ± 4,54%). O vigor declinou pós-descongelação em ambos os grupos; contudo, não diferiram entre si. A viabilidade espermática foi mantida no G5 pós-glicerolização (53,60 ± 2,59%), diferentemente do observado em G10, em que a amostra glicerolizada (48,80 ± 2,93%) reduziu em relação à fresca (59,90 ± 1,74%). A viabilidade pós-descongelação de G5 (33,80 ± 1,89%) foi superior à de G10 (18,80 ± 3,01%). No HOST, uma redução da viabilidade só foi observada pósdescongelação, não havendo diferença entre os grupos (41,50 ± 2,84% para G5 e 40,20 ± 3,49% para G10). Em relação à morfologia espermática, os espermatozoides normais diminuíram, enquanto os espermatozoides com defeitos secundários pós-descongelação aumentaram em ambos os grupos. Conclui-se que um menor tempo de equilíbrio para a glicerolização preserva melhor a qualidade dos espermatozoides epididimários e a etapa mais crítica do processo de congelação-descongelação é a descongelação.(AU)

Vitrificação de embriões equinos: alternativas para melhorar as taxas de sobrevivência embrionária / Vitrification of equine embryos: alternatives to improve embryonic survival rates

A criopreservação de embriões permite a criação de um banco genético de alto valor zootécnico, aproveitando-se do melhor momento reprodutivo das doadoras, facilitando a comercialização de material genético. Os crioprotetores utilizados durante o processo de vitrificação, afetam o equilíbrio osmótico, evitando a formação de cristais de gelo durante a diminuição de temperatura. Além da escolha adequada dos crioprotetores, o sistema de envase utilizado e a característica de manipulação prévia a vitrificação, impactam a viabilidade embrionária pós aquecimento. Apesar dos protocolos de vitrificação para embriões pequenos (300 µm), que apresentam maior taxa de recuperação, os mesmos protocolos não apresentam sucesso. A eficiência do processo de vitrificação em estruturas maiores está relacionada a redução do tamanho da blastocele, exigindo equipamentos de maior custo. O objetivo dessa revisão é descrever o “estado da arte” da vitrificação de embriões equinos, descrevendo diferentes protocolos de vitrificação, manipulação prévia e sistema de envase.(AU)

Embryo cryopreservation allows the formation of a genetic bank from high genetical value animals, taking advantage of the best reproductive moment of the mares, facilitating its genetic material commercialization. Cryoprotectants used during the vitrification process act in osmotic equilibrium, preventing ice crystals formation during the temperature decrease. In addition to the appropriate choice of cryoprotectants, the characteristic of support/packaging used and the type of manipulation prior to vitrification impact the embryonic viability after heating. Although vitrification protocols for small embryos ( 300 µm) have higher recovery rates but low survival rates when the same protocols are used. Vitrification efficiency in larger structures is related to the reduction of blastocele size, requiring equipment with higher cost. The purpose of this review is to describe the state of the art of equine embryo vitrification by describing different vitrification protocols, previous manipulation and different storage systems.(AU)

Vitrificação de embriões equinos: alternativas para melhorar as taxas de sobrevivência embrionária / Vitrification of equine embryos: alternatives to improve embryonic survival rates

A criopreservação de embriões permite a criação de um banco genético de alto valor zootécnico, aproveitando-se do melhor momento reprodutivo das doadoras, facilitando a comercialização de material genético. Os crioprotetores utilizados durante o processo de vitrificação, afetam o equilíbrio osmótico, evitando a formação de cristais de gelo durante a diminuição de temperatura. Além da escolha adequada dos crioprotetores, o sistema de envase utilizado e a característica de manipulação prévia a vitrificação, impactam a viabilidade embrionária pós aquecimento. Apesar dos protocolos de vitrificação para embriões pequenos (300 µm), que apresentam maior taxa de recuperação, os mesmos protocolos não apresentam sucesso. A eficiência do processo de vitrificação em estruturas maiores está relacionada a redução do tamanho da blastocele, exigindo equipamentos de maior custo. O objetivo dessa revisão é descrever o “estado da arte” da vitrificação de embriões equinos, descrevendo diferentes protocolos de vitrificação, manipulação prévia e sistema de envase.

Embryo cryopreservation allows the formation of a genetic bank from high genetical value animals, taking advantage of the best reproductive moment of the mares, facilitating its genetic material commercialization. Cryoprotectants used during the vitrification process act in osmotic equilibrium, preventing ice crystals formation during the temperature decrease. In addition to the appropriate choice of cryoprotectants, the characteristic of support/packaging used and the type of manipulation prior to vitrification impact the embryonic viability after heating. Although vitrification protocols for small embryos ( 300 µm) have higher recovery rates but low survival rates when the same protocols are used. Vitrification efficiency in larger structures is related to the reduction of blastocele size, requiring equipment with higher cost. The purpose of this review is to describe the state of the art of equine embryo vitrification by describing different vitrification protocols, previous manipulation and different storage systems.

Aspectos gerais da criopreservação de sêmen suíno / General aspects of boar semen cryopreservation

A utilização de sêmen congelado para inseminações artificiais já vem sendo estudada há mais de 30 anos e os avanços nesta área se devem principalmente às pesquisas dos diferentes fatores que influenciam a conservação do sêmen e fertilidade de um ejaculado. O protocolo ideal de criopreservação não foi totalmente elucidado por pesquisadores da área, apesar de ser bastante utilizado para conservação de tecidos e de células, como os espermatozoides. Isto se deve ao fato de que o sucesso da criopreservação depende de diferentes parâmetros, entre eles a utilização de crioprotetores; bem como uma concentração adequada, o que varia de espécie para espécie. Vários estudos foram feitos para se obter uma melhor congelação de sêmen suíno, com o objetivo de diminuir os índices de crioinjúrias causados pelo abaixamento de temperatura. Apesar de ainda existirem muitos problemas no processo de criopreservação de sêmen do varrão, alguns autores relatam que o uso do sêmen congelado superará o do sêmen resfriado, por ser um procedimento que permite preservar células por longos períodos de tempo. Este trabalho teve como objetivo relatar os principais problemas ligados à congelação de sêmen e os avanços da técnica utilizada para tal, através de um levantamento geral acerca dos principais aspectos ligados à criopreservação, com ênfase na espécie suína.

The use of frozen semen for artificial insemination has been studied for over 30 years and the advances in this area are mainly due to research the different factors that influence the semen retention and fertility of an ejaculate. The optimal protocol for cryopreservation has not been fully elucidated by researchers in the field, even though it is often used for preservation of tissues and cells such as sperm cells. This is due to the fact that the success of cryopreservation depends on different parameters, among them the use of cryoprotectants as well as a suitable concentration, which differ between species. Several studies were made seeking a better freezing of boar semen, also, aiming to reduce the rates of freezing damages caused by the lowering of temperature. Although there are still many problems in the process of cryopreservation of boar semen, some authors report that the use of frozen semen, outrank the cooled semen, due to a procedure that preserves cells for long periods of time. This study aimed to report the main problems associated with freezing semen, and technique advances through a general survey about the main aspects of cryopreservation with emphasis on swine.

Aspectos gerais da criopreservação de sêmen suíno / General aspects of boar semen cryopreservation

A utilização de sêmen congelado para inseminações artificiais já vem sendo estudada há mais de 30 anos e os avanços nesta área se devem principalmente às pesquisas dos diferentes fatores que influenciam a conservação do sêmen e fertilidade de um ejaculado. O protocolo ideal de criopreservação não foi totalmente elucidado por pesquisadores da área, apesar de ser bastante utilizado para conservação de tecidos e de células, como os espermatozoides. Isto se deve ao fato de que o sucesso da criopreservação depende de diferentes parâmetros, entre eles a utilização de crioprotetores; bem como uma concentração adequada, o que varia de espécie para espécie. Vários estudos foram feitos para se obter uma melhor congelação de sêmen suíno, com o objetivo de diminuir os índices de crioinjúrias causados pelo abaixamento de temperatura. Apesar de ainda existirem muitos problemas no processo de criopreservação de sêmen do varrão, alguns autores relatam que o uso do sêmen congelado superará o do sêmen resfriado, por ser um procedimento que permite preservar células por longos períodos de tempo. Este trabalho teve como objetivo relatar os principais problemas ligados à congelação de sêmen e os avanços da técnica utilizada para tal, através de um levantamento geral acerca dos principais aspectos ligados à criopreservação, com ênfase na espécie suína.(AU)

The use of frozen semen for artificial insemination has been studied for over 30 years and the advances in this area are mainly due to research the different factors that influence the semen retention and fertility of an ejaculate. The optimal protocol for cryopreservation has not been fully elucidated by researchers in the field, even though it is often used for preservation of tissues and cells such as sperm cells. This is due to the fact that the success of cryopreservation depends on different parameters, among them the use of cryoprotectants as well as a suitable concentration, which differ between species. Several studies were made seeking a better freezing of boar semen, also, aiming to reduce the rates of freezing damages caused by the lowering of temperature. Although there are still many problems in the process of cryopreservation of boar semen, some authors report that the use of frozen semen, outrank the cooled semen, due to a procedure that preserves cells for long periods of time. This study aimed to report the main problems associated with freezing semen, and technique advances through a general survey about the main aspects of cryopreservation with emphasis on swine.(AU)

Effect of glycerol, n, n-dimethylformamide and n-methyl-2-pyrrolidone on rabbit sperm stored at 4 °C and 16 °C

Artificial insemination with cooled semen is the most common practice in rabbit farms and any improvement on it helps to increase the efficiency and productivity of rabbit meat farms. Therefore, the aim of this study was to assess whether different cryoprotectant agents (CPA) as glycerol, N, N-Dimethylformamide (DMF) and N-Methyl-2-Pyrrolidone (NMP) can improve cooled rabbit sperm quality stored at 4ºC and 16ºC. Sperm samples were diluted with INRA 96® (Extender A), INRA 96® with 6% glycerol (Extender B) or 6% DMF (Extender C) or 6% NMP (Extender D) respectively and stored at 4ºC and 16ºC. Samples were then analysed at 4, 24, 48 and 72 hours after refrigeration by integrated sperm analysis system (ISAS®), eosin-nigrosin stain (vitality), hypo-osmotic swelling test (HOS test) and acrosome integrity test. Extender C showed higher percentage of motility, vitality and HOS test than extender B and D (p<0.05). Whereas sperm quality decreased over time (p<0.05), data showed that the addition of DMF kept the motility and sperm plasma membrane integrity after 24 hours of storage better than other diluents. These results suggest that the addition of DMF to INRA 96® exerts a protective effect on the membrane of spermatozoa improving seminal quality.(AU)

Effect of glycerol, n, n-dimethylformamide and n-methyl-2-pyrrolidone on rabbit sperm stored at 4 °C and 16 °C

Artificial insemination with cooled semen is the most common practice in rabbit farms and any improvement on it helps to increase the efficiency and productivity of rabbit meat farms. Therefore, the aim of this study was to assess whether different cryoprotectant agents (CPA) as glycerol, N, N-Dimethylformamide (DMF) and N-Methyl-2-Pyrrolidone (NMP) can improve cooled rabbit sperm quality stored at 4ºC and 16ºC. Sperm samples were diluted with INRA 96® (Extender A), INRA 96® with 6% glycerol (Extender B) or 6% DMF (Extender C) or 6% NMP (Extender D) respectively and stored at 4ºC and 16ºC. Samples were then analysed at 4, 24, 48 and 72 hours after refrigeration by integrated sperm analysis system (ISAS®), eosin-nigrosin stain (vitality), hypo-osmotic swelling test (HOS test) and acrosome integrity test. Extender C showed higher percentage of motility, vitality and HOS test than extender B and D (p<0.05). Whereas sperm quality decreased over time (p<0.05), data showed that the addition of DMF kept the motility and sperm plasma membrane integrity after 24 hours of storage better than other diluents. These results suggest that the addition of DMF to INRA 96® exerts a protective effect on the membrane of spermatozoa improving seminal quality.

Uso do extrato de Aloe vera na criopreservação do sêmen suíno / Use of Aloe vera extract in swine semen criopreservation

A gema de ovo é utilizada como agente crioprotetor em diluentes de congelação de sêmen visando à proteção contra o choque térmico, apesar de apresentar uma possibilidade de contaminação microbiológica. Autores buscam no Aloe vera, um meio alternativo para a conservação do sêmen. O objetivo foi avaliar o uso do crioprotetor Aloe vera na criopreservação do sêmen de suíno. Foram utilizados 25 ejaculados, coletados através da técnica da mão enluvada. As amostras foram diluídas no diluente de refrigeração (gema de ovo 10,0%, Aloe vera 10, 20 e 30%) a 17 °C, diluente de congelação (diluente de refrigeração + glicerol 6,0%) 5 °C e armazenados em palhetas. As palhetas foram avaliadas quanto ao vigor, motilidade, funcionalidade da membrana, vitalidade, integridade de acrossoma e na análise de sêmen assistida (CASA). Os dados foram avaliados quanto à normalidade, em seguida analisados utilizando ANOVA e comparações múltiplas, as análises foram realizadas com nível significância de 5,0%, utilizando o programa R3.4.0. Utilizou-se estatística descritiva para dados de vigor, motilidade e CASA. Na avaliação do sêmen descongelado para a funcionalidade da membrana, vitalidade e integridade de acrossoma, os maiores valores foram encontrados para as amostras com a gema de ovo (p0,05). Os dados de vigor, motilidade e CASA, das amostras utilizando o Aloe vera, apresentaram valores de 0,0. Os resultados mostraram que as diferentes concentrações de Aloe vera não exerceram o efeito crioprotetor desejado sobre a célula espermática, sendo assim, entende-se que são necessários maiores estudos sobre a sua ação na conservação de sêmen, bem como uma possível interação com os espermatozoides suínos...

Egg yolk is used as a cryoprotective agent in semen freezing diluents for protection against thermal shock, despite the possibility of microbiological contamination. Authors search for Aloe vera, an alternative medium for the conservation of semen. The objective was to evaluate the use of the cryoprotectant Aloe vera in the cryopreservation of swine semen. We used 25 ejaculates, collected through the gloved hand technique. The samples were diluted in the coolant diluent (10.0% egg yolk, Aloe vera 10, 20 and 30%) at 17 °C, freezing diluent (refrigerant diluent + glycerol 6.0%) at 5 °C and stored in vales. The vanes were evaluated for vigor, motility, membrane functionality, vitality, acrosome integrity and assisted semen analysis (CASA). The data were evaluated for normality, then analyzed using ANOVA and multiple comparisons, the analyzes were performed with a significance level of 5.0%, using the program R3.4.0. Descriptive statistics were used for data on vigor, motility and CASA. In the evaluation of thawed semen for membrane functionality, acrosome integrity and vitality, the highest values were found for the egg yolk samples (p0.05). The data of vigor, motility and CASA, of the samples using Aloe vera presented values of 0.0. The results showed that the different concentrations of Aloe vera did not exert the desired cryoprotective effect on the sperm cell, so it is understood that further studies are needed on its action on semen conservation, as well as a possible interaction with swine spermatozoa. On the other hand, it is believed that additional studies on the cooling curve of the porcine semen are still necessary, aiming at its cryopreservation.