Viability of Toxoplasma gondii in cattle semen cryopreserved with different concentrations of cryoprotectant / Viabilidade do Toxoplasma gondii em sêmen de bovino criopreservado em diferentes concentrações de crioprotetores

ABSTRACT: Toxoplasma gondii can be eliminated in bovine semen. Cryopreserved semen is often used due to the fact that artificial insemination in dairy and beef cattle provides benefits in terms of production. However, little is known regarding the viability and infectivity of T. gondii tachyzoites in cryopreserved bovine semen. In the present study, cattle semen negative for T. gondii were contaminated with 1 x 106 tachyzoites (RH strain) and cryopreserved with and without different cryoprotectants, such as DMSO (concentrations of 2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and glycerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% and 10.0%), followed by freezing in liquid nitrogen (-196°C). After 24 hours, the samples were thawed and inoculated in 10 mice per cryoprotectant concentration. The mice were evaluated for clinical signs of toxoplasmosis (rough coat, diarrhea, hypoactivity and sudden death) as well as serum titers of IgM and IgG and the presence of tachyzoites in the peritoneal lavage. The results revealed that T. gondii remained infective in all samples. Clinical signs of toxoplasmosis were observed in the mice beginning with the 6th day post-inoculation (DPI) and 100% lethality was found between the 7th and 9th DPI. Viable tachyzoites were recovered from peritoneal exudate of dead mice (except for the control group), with higher mean of tachyzoite counts in the intraperitoneal lavage for 5% DMSO (±3.32 x 106), 8% DMSO (±3.53 x 106), 3% glycerol (±4.75 x 106), 7.5% glycerol (±6.26 x 106) and the absence of cryoprotectant (±3.11 x 106). Seroconversion occurred in the treated groups, with titers of IgG from 1:16 to 1:128 and IgM from 1:16 to 1:512. T. gondii viability and infectivity were maintained in cattle semen during 24 hours of cryopreservation at -196°C with and without cryoprotectant. However, further studies are necessary to determine whether cryopreserved semen contributes to the spread of toxoplasmosis through artificial insemination.

RESUMO: Sabe-se que Toxoplasma gondii pode ser eliminado no sêmen bovino. A inseminação artificial em bovinos leiteiros e de corte proporcionou avanços e benefícios nas produções e para isso o sêmen criopreservado é frequentemente utilizado. No entanto, pouco se sabe sobre a viabilidade e infectividade dos taquizoítos de T. gondii em sêmen bovino criopreservado. Para isso o sêmen bovino, negativo para T. gondii, foi contaminado com 1x106 taquizoítos (cepa RH), criopreservados com ou sem diferentes crioprotetores como DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% e 10.0%) e Glicerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% e 10.0%) e congelados em nitrogênio líquido (-196°C). Após 24 horas, essas amostras foram descongeladas e inoculadas em 10 camundongos por diluente de concentração de crioprotetor. Os camundongos foram avaliados quanto a sinais clínicos de toxoplasmose (pele áspera, diarreia, hipoatividade e morte súbita), títulos séricos de IgM e IgG e presença de taquizoítos no lavado peritoneal. Os resultados mostraram que T. gondii se manteve infectante em todas as amostras, inclusive naquelas sem crioprotetor. Sinais clínicos de toxoplasmose foram observados nos camundongos a partir do 6º dia pós-inoculação (DPI) e 100% de letalidade foi verificada entre o 7º ao 9º DPI. Nos camundongos mortos, exceto no grupo controle, taquizoítos viáveis foram recuperados do exsudato peritoneal, com maior média de taquizoítos quantificados na lavagem intraperitoneal para DMSO a 5% (±3.32x106), 8% (±3.53x106) e glicerol 3% (±4.75x106), 7,5% (±6.26x106) e livre de crioprotetor (±3.11x106). A soroconversão ocorreu nos grupos tratados com títulos de IgG (1:16 a 1:128) e IgM (1:16 a 1:512). A viabilidade e infectividade do T. gondii no sêmen bovino durante as 24 horas de criopreservação a -196°C foram mantidas com ou sem crioprotetor. No entanto, mais estudos são necessários para verificar se o sêmen criopreservado contribui para a disseminação da toxoplasmose na inseminação artificial.

EFEITO DA INFUSÃO INTRAUTERINA DE DIMETILSULFÓXIDO SOBRE A VASCULARIZAÇÃO E O PERFIL MICROBIOLÓGICO UTERINO EM ÉGUAS COM ENDOMETRITE

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da utilização intrauterina de dimetilsulfóxido (DMSO) em éguas com endometrite clínica/subclínica, caracterizando sua ação na reação inflamatória, microbiota presente, vascularização uterina e fertilidade. Quarenta e três éguas foram acompanhadas por dois estros (C1 e C2), realizando ultrassonografia uterina Doppler no modo power flow (UPF) após observação de um folículo 35mm e edema endometrial 3 (dia 1 M1) até um dia antes da ovulação. No M1 de cada ciclo, amostras uterinas foram coletadas para exame citológico e microbiológico. Após o exame citológico, foram distribuídos os seguintes grupos: G1 (n = 10): citologia negativa e administração intrauterina de DMSO (C-/ DMSO); G2 (n = 10): citologia negativa e administração de solução fisiológica (C-/SF); G3 (n = 13): citologia positiva e administração de DMSO (C+/DMSO) e G4 (n = 10): citologia positiva e administração solução fisiológica (C+/SF). De acordo com cada grupo experimental, o seguinte protocolo foi realizado - M1: infusão intrauterina de 100 mL de DMSO 30% ou solução fisiológica; M2: lavagem intrauterina com 1000 mL de DMSO 30% ou solução fisiológica e 10 UI de ocitocina, i.m., após o procedimento. O protocolo foi repetido em C2, porém, apenas a solução fisiológica intrauterina foi utilizada. No terceiro ciclo, os animais foram inseminados ou receberam embriões para avaliação da fertilidade. Na análise estatística foi utilizado teste de Tukey para variáveis paramétricas, teste de Kruskal-Wallis para variáveis não paramétricas e teste de Willcoxon para comparação dos gêneros bacterianos com nível de significância de 5%. No C2, o G4 apresentou maior número de neutrófilos / campo que G1, G2 e G3 (P <0,05), enquanto na avaliação entre os ciclos, no C2, o G2 aumentou e o G3 apresentou redução (P<0,05). Quanto ao número de gêneros bacterianos, no C1 e C2, o G4 apresentou maior diversidade que G1, G2 e G3 (P<0,05). Entre os ciclos, no C2, houve redução apenas no G1 (P <0,05). Quanto ao número de gêneros fúngicos, no C1, o G1 não apresentou crescimento e G2, G3 e G4, foram semelhantes (P>0,05). No C2, G4 apresentou maior número de gêneros que G2 e G3 (p <0,05). Entre os ciclos, no C2, G2 o número de gêneros diminuiu no G2 e G3 (P <0,05) e no G4 não sofreu alteração (p> 0,05). Na avaliação da fertilidade, G1, G2 e G3 tiveram gestações confirmadas semelhantes com taxas superiores ao G4 (P<0,05). Na intensidade dos pixels coloridos (IPC), aferida através da UPF uterina, observou-se que: no C1, G1 e G2 tiveram IPC menores que G3 e G4 (P <0,05) e G3 foi maior que G4 (P<0,05). No C2, o IPC foi maior no G4 (P<0,05). Na média geral das éguas que se tornaram gestantes ou não, independente do grupo experimental, entre C1 e C2, observou-se que as éguas não gestantes mantiveram o padrão de IPC (P> 0,05) e aquelas que gestaram apresentaram redução no C2 (P<0,05). Concluiu-se que a utilização do protocolo de infusão / lavagem uterina com DMSO diminuiu o processo inflamatório, eliminou ou alterou a carga microbiológica e aumentou a fertilidade e que a UPF pode ser utilizada como método diagnóstico auxiliar em casos de endometrite clínica

The aim of this study was to evaluate the efficacy of intrauterine use of dimethylsulfoxide (DMSO) in mares with clinical/subclinical endometritis, characterizing its action on the inflammatory reaction, microbiota present, uterine vascularization and fertility. Forty-three mares were followed for two estrus (C1 and C2), performing uterine Doppler ultrasound in power flow mode (UPF) after observation of a follicle 35mm and endometrial edema 3 (day 1 M1) until one day before ovulation. At M1 of each cycle, uterine samples were collected for cytological and microbiological examination. After the cytological examination, the following groups were distributed: G1 (n = 10): negative cytology and intrauterine administration of DMSO (C-/ DMSO); G2 (n = 10): negative cytology and administration of saline solution (C-/SF); G3 (n = 13): positive cytology and administration of DMSO (C+/DMSO) and G4 (n = 10): positive cytology and administration of saline solution (C+/SF). According to each experimental group, the following protocol was performed - M1: intrauterine infusion of 100 mL of 30% DMSO or saline solution; M2: intrauterine lavage with 1000 mL of 30% DMSO or saline and 10 IU of oxytocin, i.m., after the procedure. The protocol was repeated in C2, however, only the intrauterine saline solution was used. In the third cycle, the animals were inseminated or received embryos for fertility assessment. In the statistical analysis, the Tukey test was used for parametric variables, the Kruskal-Wallis test for nonparametric variables and the Willcoxon test for the comparison of bacterial genera with a significance level of 5%. In C2, G4 had a higher number of neutrophils / field than G1, G2 and G3 (P <0.05), while in the evaluation between cycles, in C2, G2 increased and G3 showed a reduction (P <0.05). As for the number of bacterial genera, in C1 and C2, G4 showed greater diversity than G1, G2 and G3 (P<0.05). Between cycles, in C2, there was a reduction only in G1 (P < 0.05). As for the number of fungal genera, in C1, G1 did not show growth and G2, G3 and G4 were similar (P>0.05). In C2, G4 had a greater number of genera than G2 and G3 (p <0.05). Between cycles, in C2, G2 the number of genera decreased in G2 and G3 (P < 0.05) and in G4 it did not change (p > 0.05). In the fertility assessment, G1, G2 and G3 had similar confirmed pregnancies with rates higher than G4 (P<0.05). In the intensity of colored pixels (CPI), measured through the uterine UPF, it was observed that: in C1, G1 and G2 had CPI lower than G3 and G4 (P <0.05) and G3 was greater than G4 (P<0 .05). In C2, the CPI was higher in G4 (P<0.05). In the general average of the mares that became pregnant or not, regardless of the experimental group, between C1 and C2, it was observed that the non-pregnant mares maintained the CPI pattern (P> 0.05) and those that became pregnant showed a reduction in C2 (P<0.05). It was concluded that the use of DMSO uterine infusion / lavage protocol decreased the inflammatory process, eliminated or altered the microbiological load and increased fertility and that UPF can be used as an auxiliary diagnostic method in cases of clinical endometritis.

Cryopreservation protocol for equine platelet-rich plasma / Protocolo de criopreservação para plasma rico em plaquetas de equinos

In this preliminary study, a new equine platelet-rich plasma (PRP) cryopreservation protocol was evaluated. PRP was obtained by a double centrifugation technique of whole blood collected from 8 adult healthy ponies. A fresh sample of PRP was analyzed for total platelet count, mean platelet volume (MPV), and platelet morphology. Upon morphological evaluation, 200 platelets were counted using a differential interference contrast microscope with a 40x phase objective and classified as activated (with pseudopodia), inactivated (normal discoid shape), or uncertain state (spherical shape, without pseudopodia). Two other PRP samples, one containing DMSO as a cryoprotectant and the other without DMSO, were stored in a mechanical freezer at 80ºC. After 14 days, the frozen samples were thawed and submitted to the same analysis as described above. The fresh PRP showed a platelet count of 830 (±95.3) x103 uL-1, an MPV of 5.2 (±0.07) fL, and composed of 4% activated platelets. There was no significant difference in platelet count, MPV, and activated platelets between fresh and 6% DMSO frozen PRP samples (617.9±65.5x103uL-1; 5.3±0.06fL; 9.5%) (p > 0.05). On the other hand, samples frozen without DMSO showed a significantly lower platelet count (519.6±66.1x103uL-1), higher MPV (5.7±0.08fL), and more activated platelets (13.9%) than the other groups (p 0.05). The 6% DMSO was able to...(AU)

Neste estudo preliminar, um novo protocolo de criopreservação de plasma rico em plaquetas (PRP) de equinos foi avaliado. O PRP foi obtido através de dupla centrifugação do sangue total coletado de oito pôneis clinicamente saudáveis. Uma amostra de PRP fresco foi analisada quanto ao número total de plaquetas, volume plaquetário médio (VPM) e morfologia plaquetária. Na avaliação morfológica 200 plaquetas foram contadas utilizando um microscópio com contraste de fase com objetiva de 40x e classificadas como ativadas (com pseudópodes), inativas (forma discóide normal) ou estado incerto (forma esférica, mas sem peseudópodes). Duas outras amostras de PRP foram armazenadas em um freezer mecânico a 80oC, uma contendo dimetil sulfóxido (DMSO) como crioprotetor e outra sem DMSO. Após 14 dias as amostras congeladas foram descongeladas e submetidas às mesmas avaliações das amostras frescas. O PRP fresco apresentou contagem plaquetária de 830 (±95,3) x103 ?L 1, VPM 5,2 (±0,07) fL e 4% de plaquetas ativadas. Não houve diferença na contagem plaquetária, VPM e plaquetas ativadas entre as amostras de PRP frescas e congeladas com 6% de DMSO (617,9±65,5x103 uL-1; 5,3±0,06fL; 9,5%) (p > 0,05). Por outro lado, as amostras congeladas sem DMSO apresentaram uma contagem de plaquetas significativamente menor (519,6±66,1x103 u-1), maior VPM (5,7±0,08fL) e mais plaquetas ativadas (13,9%) do que os...(AU)

Cryopreservation protocol for equine platelet-rich plasma / Protocolo de criopreservação para plasma rico em plaquetas de equinos

In this preliminary study, a new equine platelet-rich plasma (PRP) cryopreservation protocol was evaluated. PRP was obtained by a double centrifugation technique of whole blood collected from 8 adult healthy ponies. A fresh sample of PRP was analyzed for total platelet count, mean platelet volume (MPV), and platelet morphology. Upon morphological evaluation, 200 platelets were counted using a differential interference contrast microscope with a 40x phase objective and classified as activated (with pseudopodia), inactivated (normal discoid shape), or uncertain state (spherical shape, without pseudopodia). Two other PRP samples, one containing DMSO as a cryoprotectant and the other without DMSO, were stored in a mechanical freezer at 80ºC. After 14 days, the frozen samples were thawed and submitted to the same analysis as described above. The fresh PRP showed a platelet count of 830 (±95.3) x103 uL-1, an MPV of 5.2 (±0.07) fL, and composed of 4% activated platelets. There was no significant difference in platelet count, MPV, and activated platelets between fresh and 6% DMSO frozen PRP samples (617.9±65.5x103uL-1; 5.3±0.06fL; 9.5%) (p > 0.05). On the other hand, samples frozen without DMSO showed a significantly lower platelet count (519.6±66.1x103uL-1), higher MPV (5.7±0.08fL), and more activated platelets (13.9%) than the other groups (p 0.05). The 6% DMSO was able to...

Neste estudo preliminar, um novo protocolo de criopreservação de plasma rico em plaquetas (PRP) de equinos foi avaliado. O PRP foi obtido através de dupla centrifugação do sangue total coletado de oito pôneis clinicamente saudáveis. Uma amostra de PRP fresco foi analisada quanto ao número total de plaquetas, volume plaquetário médio (VPM) e morfologia plaquetária. Na avaliação morfológica 200 plaquetas foram contadas utilizando um microscópio com contraste de fase com objetiva de 40x e classificadas como ativadas (com pseudópodes), inativas (forma discóide normal) ou estado incerto (forma esférica, mas sem peseudópodes). Duas outras amostras de PRP foram armazenadas em um freezer mecânico a 80oC, uma contendo dimetil sulfóxido (DMSO) como crioprotetor e outra sem DMSO. Após 14 dias as amostras congeladas foram descongeladas e submetidas às mesmas avaliações das amostras frescas. O PRP fresco apresentou contagem plaquetária de 830 (±95,3) x103 ?L 1, VPM 5,2 (±0,07) fL e 4% de plaquetas ativadas. Não houve diferença na contagem plaquetária, VPM e plaquetas ativadas entre as amostras de PRP frescas e congeladas com 6% de DMSO (617,9±65,5x103 uL-1; 5,3±0,06fL; 9,5%) (p > 0,05). Por outro lado, as amostras congeladas sem DMSO apresentaram uma contagem de plaquetas significativamente menor (519,6±66,1x103 u-1), maior VPM (5,7±0,08fL) e mais plaquetas ativadas (13,9%) do que os...

Criopreservação do plasma rico em plaquetas de equinos / Equine platelet-rich plasma cryopreservation

Avaliou-se o congelamento do plasma rico em plaquetas (PRP) de equinos, a -196ºC em nitrogênio líquido, utilizando-se como crioprotetor o DMSO em duas concentrações (3% e 6%), e, como ponto final, a avaliação da morfologia e da agregometria plaquetária. Foram utilizadas 12 amostras de PRP em duas repetições. Previamente ao congelamento, as amostras foram submetidas a um resfriamento lento (-0,07ºC/minuto) até a temperatura final de 4-5ºC. A criopreservação do PRP equino, incluindo um resfriamento lento a 4-5ºC, previamente ao congelamento a -197ºC em nitrogênio líquido, foi similar para as concentrações do crioprotetor DMSO a 3% ou 6%, quando avaliado o percentual de ativação e de agregação plaquetária.(AU)

Equine platelet-rich plasma (PRP) frozen at -196°C in liquid nitrogen using DMSO as a cryoprotectant in two different concentrations (3% and 6%) was evaluated, using platelet morphology and aggregometry as the final parameters. Twelve PRP samples were used in two repetitions. The samples were submitted to slow cooling prior to frozen (-0.07°C/minute) until they reached the temperature of 4-5°C. Platelet cryopreserved in 3% or 6% DMSO, presented similar efficacy when the percentage of activation and platelet aggregation was evaluated.(AU)

EFEITOS FARMACOLÓGICOS DA ADMINISTRAÇÃO DO DIMETIL SULFÓXIDO EM EQUINOS (Equus caballos)

Quimicamente o dimetil sulfóxido é um líquido dipolar e extremamente higroscópico. É produzido a partir da madeira. A substância é solúvel em água e deve ser preparada em solução a 10% em salina 0.9% ou glicose 5% para uso por via intravenosa. O DMSO tem aplicações médicas amplas em pequenos e grandes animais. Em geral, o DMSO pode ser aplicado por via tópica ou intravenosa. DMSO foi utilizado em equinos da raça crioula por via intravenosa para realização da avaliação clínica comparativa entre a fenilbutazona e determinação dos valores farmacocinéticos, em dois experimentos diferentes, onde não encontramos diferenças clínicas significantes entre os tratamentos realizados em relação a fenilbutazona.

Chemically dimethyl sulfoxide is a dipole liquid and extremely hygroscopic. It is produced from wood processing. The substance is water soluble and should be prepared as a 10% solution in 0.9% saline or 5% glucose for intravenous use. DMSO has broad medical applications in small and large animals. In general, DMSO can be applied topically or intravenously. DMSO was applied intravenous in horses to perform the comparative clinical evaluation between phenylbutazone and determination of pharmacokinetic values in two different experiments, where we did not find significant clinical differences between the treatments performed in relation to phenylbutazone.

Avaliação dos efeitos in vitro do Dimetilsulfóxido em células sinoviais de equinos e de sua utilização intra-articular como tratamento para sinovite aguda

As lesões articulares na espécie equina causam inúmeras perdas econômicas e funcionais, com objetivo de minimizá-las vários estudos sobre técnicas e terapias são realizadas e se fazem necessárias. Acredita-se que o dimetilsulfóxido (DMSO) tenha ação moduladora nos processos inflamatórios articulares agudos e ação sobre radicais livres, porém sua eficácia ainda é dúbia. Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos do DMSO sobre células sinoviais e a lavagem articular com diferentes concentrações de DMSO (5% e 10%), em um modelo experimental de indução da sinovite aguda em equinos, com LPS. Para tanto, este estudo foi dividido em duas etapas. A primeira etapa visou verificar o efeito do DMSO sobre células sinoviais, através da análise de viabilidade celular após a estimulação das células sinoviais pelo LPS e tratamento com o DMSO. Para a segunda etapa do estuo foram utilizadas 26 articulações tibiotársicas, distribuídas aletoriamente em quatro grupos. Os grupos foram tratados e organizados da seguinte forma: grupo solução de ringer lactato; grupo DMSO 5% em solução de ringer lactato; grupo DMSO 10% em solução de ringer lactato; e Grupo controle (apenas indução da sinovite). Foram realizadas coletas do líquido sinovial (LS) antes da infiltração das articulações com LPS, na dose de 0,5 ng (M0), após 1h (M1), antes das lavagens (M8), e após 24h e 48h (M24 e M48) da indução da sinovite, as amostras de LS foram utilizadas para contagem total de células nucleadas e diferenciação celular, quantificação de PGE2, interleucina-1, interleucina-6, TNF-, AH, CS, ureia, proteína total e análise do burst oxidativo. As células sinoviais estimuladas por LPS e tratadas com DMSO 5% apresentaram menor porcentagem de células viáveis após vinte e quatro horas, entretanto após 48h somente as células tratadas com ringer lactato apresentaram menor porcentagem de células viáveis. O equipamento Lameness Locator® foi utilizado para verificar a presença de dor articular, previamente a todas coletas. Todos os grupos apresentaram aumento na contagem total de células nucleadas, concentração de PGE2, IL-1, IL-6 e proteína total no M8. Sendo que os grupos DMSO 5% e DMSO 10% apresentaram diminuição da contagem total de células nucleadas após a lavagem articular. A concentração de PGE2 e IL-1 no grupo DMSO 10% foi menor no M48 em relação ao M8, e o grupo ringer lactato apresentou menor concentração de IL-1 que os grupos DMSO 5% e controle no M24. O grupo DMSO 10% apresentou menor concentração de IL-6 em relação aos grupos DMSO 5% e ringer lactato no momento 24. O TNF- apresentou aumento em todos os grupos no M1. Os grupos DMSO 10% e controle apresentaram menor concentração de TNF- nos M24 e M48 em relação ao M1. Os grupos DMSO 5% e controle não apresentaram diferença na concentração de IL-10, porém os grupos ringer lactato e DMSO 10% apresentaram maior concentração no M48. Os grupos DSMO 10% e ringer lactato apresentaram menor concentração de AH no M24. Todos os grupos apresentaram aumento da concentração de CS após as lavagens articulares. Não houve diferença na avaliação de dor articular, bem como na análise do burst oxidativo e concentração de ureia. Os diferentes grupos apresentaram similaridade de comportamento das células e citocinas estudadas no líquido sinovial ao longo do experimento, contudo o grupo DMSO 10% foi o que apresentou mais rapidamente o retorno próximo aos valores basais. Os resultados apresentados neste estudo permitem concluir que frente à necessidade de se realizar lavagens articulares a utilização de solução de ringer lactato com DMSO 10% é mais indicada que o uso de ringer lactato ou solução com DMSO a 5%. Entretanto, nenhum tratamento foi capaz de demonstrar efeito condroprotetor.

Joint injuries in the equine species cause numerous economic and functional losses, in order to minimize them, several studies on techniques and therapies are performed and are necessary. Dimethylsulfoxide (DMSO) is thought to have modulating action on acute joint inflammatory processes and action on free radicals, but its efficacy is still dubious. This study aimed to evaluate the effects of DMSO on synovial cells and joint lavage with different concentrations of DMSO (5% and 10%) in an experimental model of induction of acute synovitis in horses with LPS. Therefore, this study was divided into two steps. The first step aimed to verify the effect of DMSO on synovial cells by analyzing cell viability after stimulation of synovial cells by LPS and treatment with DMSO. For the second stage of the study, 26 tibiotarsal joints were used, divided into four groups. The groups were treated and organized as follows: ringer lactate solution group; 5% DMSO group in ringer lactate solution; 10% DMSO group in ringer lactate solution; and Control group (synovitis induction only). Synovial fluid (LS) was collected prior to infiltration of the joints with LPS at a dose of 0.5 ng (M0), after 1h (M1), before washes (M8), and after 24h and 48h (M24 and M48), from synovitis induction. LS samples were used for total nucleated cell count and cell differentiation, PGE2 quantification, interleukin-1, interleukin-6, TNF-, HA, CS, urea, total protein and burst oxidative analysis. The synovial cells stimulated by LPS and treated with DMSO 5% presented lower percentage of viable cells-after 24 hours, however after 48h only the cells treated with Ringer lactate showed lower percentage of viable cells. Lameness Locator® equipment was used to verify the presence of joint pain, prior to all collections. All groups showed an increase in total nucleated cell count, PGE2, IL-1, IL-6 and total protein in M8. The DMSO 5% and DMSO 10% groups showed a decrease in the total nucleated cell count after joint washing. The concentration of PGE2 and IL-1 in the 10% DMSO group was lower in M48 compared to M8, and the ringer lactate group presented lower IL-1 concentration than the 5% DMSO and control groups in M24. The 10% DMSO group showed lower IL-6 concentration compared to the 5% DMSO and ringer lactate groups at time 24. TNF- increased in all groups at M1. The 10% DMSO and control groups presented lower TNF- concentration in M24 and M48 in relation to M1. The 5% DMSO and control groups showed no difference in IL-10 concentration, but the ringer lactate and 10% DMSO groups showed higher concentration in M48. The DSMO 10% and ringer lactate groups presented lower HA concentration in M24. All groups showed increased concentration of CS after joint washes. There was no difference in joint pain evaluation, oxidative burst analysis and urea concentration. The different groups showed similarity of behavior of cells and cytokines studied in the synovial fluid throughout the experiment, however the 10% DMSO group showed the fastest return near basal values. The results presented in this study allow us to conclude that in view of the need to perform joint washes, the use of 10% DMSO lactated ringer's solution is better than the use of 5% DMSO lactated ringer's solution. However, no treatment was able to demonstrate chondroprotective effect

Efeitos colaterais do uso da ribavirina, prednisona e DMSO em cães naturalmente infectados pelo vírus da cinomose / The side effects of ribavirin, prednisone and DMSO in dogs naturally infected by canine distemper virus

O estudo tem o objetivo de identificar efeitos indesejáveis da ribavirina, prednisona e DMSO em cães naturalmente infectados com o vírus da cinomose. Foram utilizados 60 cães apresentando quadro neurológico da cinomose com evolução de 10 dias. Os animais foram internados e receberam tratamento de suporte; foram avaliados diariamente e realizados hemograma, dosagem bioquímica e exame de urina tipo I. Os grupos 1 e 2 foram tratados com ribavirina e sua associação com DMSO; os grupos 3 e 4 com DMSO e prednisona e o grupos 5 com ribavirina e prednisona e o grupo 6 com ribavirina, prednisona e DMSO. Os animais foram anestesiados para a colheita de líquor, medula óssea e sangue, antes do tratamento para diagnóstico através da RT-PCR. As amostras negativas foram analisadas pela técnica de hn-PCR. Todos os animais apresentaram resultado positivo em pelo menos uma das duas reações. O efeito adverso da ribavirina e a sua associação com a prednisona foi a anemia hemolítica, que foi confirmada pela observação de bilirrubina na urina apenas dos cães tratados com ribavirina.(AU)

The present study aims at the identification of undesirable effects of ribavirin, predinisone and DMSO in dogs naturally infected by canine distemper virus. The research analyzed 60 dogs with clinical neurological signs and 10 days of evolution. The animals were hospitalized for the appropriate support treatment; were daily observed, and complete blood cells count, biochemical analysis, and urine exam type I were conducted. Groups 1 and 2 were treated with ribavirin and its combination with DMSO; Groups 3 and 4 treated with prednisone and DMSO, Group 5 treated with ribavirin and prednisone, while Group 6 with ribavirin, prednisone and DMSO. Before the treatment, animals were anesthetized for the cerebrospinal fluid, bone marrow and blood samples collection for the diagnosis based on RT-PCR. The negative samples were analyzed using the hn-PCR technique. All the animals presented positive results in at least one of the 2 tests. The adverse result of ribavirin and its association with prednisone was characterized by haemolytic anemia, confirmed by the evaluation of bilirrubin occurrence only in the urine of dogs treated with ribavirin.(AU)

ASSOCIAÇÃO DE CRIOPROTETORES PERMEÁVEIS E NÃO PERMEÁVEIS PARA A CRIOPRESERVAÇÃO DE CÉLULAS TRONCO MESENQUIMAIS DE TECIDO ADIPOSO EQUINO

O uso de células tronco mesenquimais (CTMs) tem sido vastamente investigado para o tratamento de doenças musculoesqueléticas em equinos, principalmente, devido às injúrias sofridas durante a atividade física intensa. É conhecido também que para o sucesso do procedimento, é necessária uma grande quantidade de CTMs viáveis, o que pode ser obtido através de um banco de células. Portanto, a criopreservação é um tema de grande interesse na área da terapia celular, pois pode manter a viabilidade de um material biológico por longos períodos de tempo. No entanto, o uso de agentes crioprotetores (CPAs) permeáveis, como o DMSO, nos processos de criopreservação (congelação lenta ou vitrificação) pode causar injúrias, devido sua toxicidade, o que pode ser minimizado, quando usados em baixas concentrações ou associados a ACPs não permeáveis, como os açúcares ou os polímeros sintéticos. Portanto, o objetivo principal deste estudo foi avaliar a viabilidade, capacidade proliferativa e de diferenciação (linhagens osteogênica, condrogênica e adipogênica) das CTMs equinas oriundas do tecido adiposo após a congelação na presença de diferentes soluções compostas por ACPs, permeável (DMSO) e não permeáveis [(Trealose (T) e SuperCool X-1000 (X-1000)]. A combinação desses ACPs, resultou em sete diferentes soluções de congelação (SC): DMSO; T; X-1000; DMSO+T; DMSO+X-1000; T+X-1000 e DMSO+T+X-1000. Inicialmente, as CTMs equinas frescas (controle) ou congeladas nas diferentes SC foram avaliadas quanto à viabilidade. Posteriormente, a unidade formadora de colônia (CFU - proliferação) e a capacidade de diferenciação celular nas linhagens acima mencionadas foram avaliadas, somente nas células frescas ou que apresentaram viabilidade superior a 40%, após congelação/descongelação. Os dados mostraram que a viabilidade pós congelação das CTMs equinas em todas as SC, reduziu significativamente em relação ao controle (100%). No entanto, a viabilidade das CTMs congeladas na presença apenas do DMSO (80.3 ± 0.6) foi superior (P<0.05) à observada nas demais SC. Para a CFU, não houve diferença (P>0.05) entre as células frescas e as congeladas. Independente do tratamento, as CTMs apresentaram potencial de diferenciação nas três linhagens. Porém, apesar da redução significativa na capacidade de diferenciação osteogênica, não houve diferença (P>0.05) entre as SC testadas e o controle. Por outro lado, células congeladas em DMSO+X-1000 reduziram (P<0.05) seu potencial de diferenciação na linhagem condrogênica em relação ao controle, porém, foi semelhante às demais SC (P>0.05). No tocante à diferenciação adipogênica, não houve diferença entre os tratamentos (P>0.05). Em conclusão, esse estudo confirmou o sucesso da congelação de CTMs na presença do DMSO e evidenciou o potencial de utilização do polímero sintético Super Cool X-1000 na congelação de células tronco, abrindo novas perspectivas para investigação do uso desse polímero e o DMSO em diferentes concentrações e combinações.

The mesenchymal stem cells (MSCs) have been widely investigated for the treatment of musculoskeletal diseases in horses mainly due to the injuries suffered during the intensive physical activity. Likewise, it is well known that for the success of the procedure is necessary a great quantity of viable MSCs, which can be obtained through a cell banking. Therefore, the cryopreservation is a theme of high interest in the cellular therapy area once it can maintain the viability of biological material for long periods of time. However, the use of permeable cryoprotectant agents (CPAs), such as DMSO can cause injuries due to its toxicity, which can be minimized when used in low concentrations or association with non-permeable cryoprotectants, such as sugars or the synthetic polymers. Therefore, the goal of this study was to evaluate the viability, proliferative capacity and the differentiation of the equine MSCs originated from the adipose tissue after freezing in the presence of different solutions comprised by permeable (DMSO) and non- permeable [(Trehalose (T), and SuperCool X-1000 (X-1000)] CPAs. The combination of these CPAs resulted in seven different freezing solutions (FS): DMSO; T; X-1000; DMSO+T; DMSO+X-1000; T+X-1000, and DMSO+T+X-1000. Firstly, fresh or frozen/thawed equine MSCs in the different FS were evaluated concerning viability. After that, the colony forming unit (CFU - proliferation) and the cellular differentiation capacity in the abovementioned lineages were evaluated only in fresh cells or that showed viability superior to 40% after frozen/thawing. The data demonstrated that the viability after freezing of the equine MSCs reduced significantly (100%) to the control. Nonetheless, the viability of the frozen MSCs in the presence only of DMSO (80.3 ± 0.6) was superior (P<0.05) to the others FS. Regarding CFU, no difference (P>0.05) was observed between fresh and frozen cells. Independently of the treatment, the MSCs demonstrated differentiation potential in the three lineages. Nevertheless, despite the significate reduction in the osteogenic differentiation capacity, no differences (P>0.05) among the tested FS and the control. By the other hand, frozen cells in DMSO+X solution reduced (P<0.05) the differentiation potential for the chondrogenic lineages to the control, but similarly to the other FS (P>0.05). Concerning the adipogenic differentiation, no difference was observed between the treatments (P>0.05). In conclusion, this study confirmed the success of the freezing of MSCs in the presence of DMSO, and emphasized the potential utilization of the synthetic polymer Super Cool X-1000 in the freezing of stem cells, opening new perspectives for the investigation of X-1000 and DMSO in different concentrations and combinations.

Anormalidades espermáticas de Piaractus mesopotamicus após descongelamento utilizando diferentes metodologias / Abnormalities of sperm after thawing Piaractus mesopotamicus using different methodologies

Avaliou-se a influência de crioprotetores, temperatura e tempo de descongelamento sobre as anormalidades espermáticas de pacu (Piaractus mesopotamicus). Amostras de sêmen de quatro pacus foram coletadas e diluídas em duas soluções crioprotetoras, dimetilsulfóxido (DMSO) 10% e metanol 10%. Após o descongelamento, foram avaliadas anormalidades primárias e secundárias. Não foi verificada interação (P>0,05) nas anormalidades secundárias, nas anormalidades totais e nos espermatozoides normais nos diferentes tratamentos empregados. Nas anormalidades primárias, foi verificada interação temperatura versus tempo de descongelamento, em que a maior temperatura associada ao menor tempo, 60°C por 8s, ou a menor temperatura associada ao maior tempo de descongelamento, 40°C por 12s, proporcionaram menor (P<0,05) porcentagem de espermatozoides com anormalidades primárias. No processo de criopreservação do sêmen de pacu utilizando os crioprotetores DMSO ou o metanol, recomenda-se que o descongelamento seja realizado a 40°C por 12 segundos ou a 60°C por oito segundos.(AU)

This study aimed to evaluate the influence of cryoprotectants, thawing times and temperatures on pacu (Piaractus mesopotamicus) sperm abnormalities. Semen samples from four pacu were collected and diluted in 2 solutions, cryoprotectant dimethylsulfoxide (DMSO) 10% and methanol 10%. After thawing, semen was collected for morphological analysis, evaluating primary and secondary abnormalities. There was no interaction (P>0.05) of secondary abnormalities, abnormalities in total and normal sperm in the different treatments. The primary abnormalities showed interaction between temperature and thawing time, where the higher temperature was associated with the shortest time (60°C for 8s) or the lowest temperature associated with longer thawing (40°C for 12s) provided under (P<0.05) percentages of spermatozoa with primary abnormalities. In the process of semen cryopreservation of P. mesopotamicus using the cryoprotectants DMSO and methanol, it is recommended that thawing be performed at 40° C for 12 seconds or 60°C for 8 seconds.(AU)

PLASMA RICO EM PLAQUETAS DE EQUINOS RESFRIADO E CRIOPRESERVADO COM DIMETILSULFÓXIDO E TREALOSE

O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado na medicina equina para o tratamento de lesões ósseas, articulares, tendíneas e ligamentares. No entanto o PRP deve ser preparado no momento de cada aplicação, pois seu tempo máximo de utilização após o preparo é de apenas oito horas. O objetivo deste estudo foi avaliar o resfriamento e criopreservação como métodos de armazenamento do PRP equino utilizando dois crioprotetores: dimetil sulfóxido (DMSO) e trealose, na tentativa de manter a viabilidade plaquetária após o armazenamento a baixas temperaturas. Duas amostras de PRP foram preparadas a partir da centrifugação do sangue de seis pôneis saudáveis e foram destinadas à criopreservação a -196º C ou ao resfriamento a 4º C. Cada amostra de PRP preparada foi dividida em quatro alíquotas: fresca, com DMSO, com trealose ou sem crioprotetor. As amostras frescas foram avaliadas quanto à contagem plaquetária, determinação do volume plaquetário médio (VPM), concentração plaquetária em relação ao sangue total e quantificação do fator de crescimento de transformação beta 1 (TGF -1). As amostras criopreservadas e resfriadas ficaram armazenadas por 14 dias e foram então submetidas às mesmas análises laboratoriais. O número de plaquetas e concentração plaquetária foram similares entre as amostras frescas e resfriadas com ou sem crioprotetor, mas foram superiores nas amost ras frescas em relação às amostras criopreservadas. Observou-se aumento do VPM em todas as amostras armazenadas, indicando que as plaquetas sofreram lesões durante o armazenamento. A liberação de TGF-1 foi superior no PRP fresco em relação ao PRP resfriado ou criopreservado, não havendo diferença entre as amostras que continham ou não crioprotetores. A adição dos crioprotetores DMSO e trealose não impediu as lesões plaquetárias de armazenamento. Por outro lado, tanto as amostras resfriadas quanto as criopreservadas liberaram quantidades significativas de TGF-1.

Platelet rich plasma (PRP) is used in equine medicine for treatment of bone, joint, tendon and ligament injuries. However the PRP must be prepared at the time of each application, since its maximum time of use after the pre paration is only eight hours. The objective of this study was to evaluate cooling and cryopreservation of equine PRP as storage methods using two cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (DMSO) and trehalose, in an attempt to maintain platelet viability after storage at low temperatures. Two PRP samples were prepared from the blood centrifugation of six healthy ponies and were intended for cryopreservation at -196 ° C or cooling at 4 ° C. Each prepared PRP sample was divided into four aliquots: fresh, DMSO, trehalose or without cryoprotectant. The fresh samples were evaluated for platelet count, determination of mean platelet volume (MVP), platelet concentration in relation to whole blood and quantification of transforming growth factor beta 1 (TGF-1). The cryopreserved and cooled samples were stored for 14 days and then submitted to the same laboratory tests. The number of platelets and platelet concentrations were similar between fresh and cooled samples with or without cryoprotectant, but were higher in fresh samples than in cryopreserved samples. An increase in MPV was observed in all stored samples, indicating that platelets suffered lesions during storage. The release of TGF -1 was higher in fresh PRP than in cold or cryopreserved PRP, with no difference between samples containing or not cryoprotectants. The addition of DMSO and trehalose cryoprotectants did not prevent platelet storage lesions. On the other hand, both the cooled and cryopreserved samples released significant amounts of TGF-1.

CONSERVAÇÃO DE ESPERMATOZOIDES EPIDIDIMÁRIOS DE PREÁS (Galea spixii WAGLER, 1831) EM DIFERENTES MEIOS

O preá é um roedor silvestre que ocorre em todo o bioma caatinga. Bem adaptado ao cativeiro, pode ser utilizado como fonte de proteina animal pela população. Contudo há escassez de biotécnicas reprodutivas descritas para os machos dessa espécie. Desse modo, o objetivo do estudo foi estabelecer um protocolo de crioperservação de espermatozoides epididimário de preás. Para tanto, o trabalho foi dividido em dois experimentos. No primeito experimento foram utilizados 9 complexos testículo-epidídimo para coleta dos espermatozoides que foi feita pelo método de flutuação, no qual foi os espermatozoides foram colhidos pelos diluentes TES e TRIS, para avaliar qual seria ideal para colheita. Para o segundo experimento, foram usados 12 complexos testículo-epidídimo, submetidos a coleta dos espermatozoides epididimários pelo método de lavagem retrógrada com o diluente TRIS que proporcionou maior longevidade aos espermatozoides no primeiro experimento. As amostra foram criopreservadas em TRIS acrescido de 20% de gema de ovo, e adicionadas dos crioprotetores glicerol e DMSO em concentrações finais de 3%, 6% e 9%, atingindo-se uma concentração de 100 x 106 espermatozoides/ml. Os dados foram expressos em média e erro padrão e submetidos ao do teste de Fisher PLSD (P < 0,05). Os resultados indicam que o diluente TRIS foi mais eficiente que o TES (P < 0,05), o qual proporcional maior longevidade aos espermatozoides epididimarios. Ainda na criopreservação o glicerol, indepentede de sua concentração, foi mais eficiente na conservação dos gametas durane o processo de criopreservação. Em conclusão, indica-se o uso do diluente tris para a recuperação e a manutenção da longevidade de espermatozoides epididimários de preás. Ainda, sugerese o uso do diluente tris acrescido de 20% de gema de ovo e 6% de glicerol para a criopreservação de espermatozoides epididimários de preás (Galea spixii).

The Spixs yellow-toothed cavies is a wild rodent that occurs throughout the savanna biome. Well adapted to captivity, could be used as source of animal protein for the population. However no shortage of reproductive biotechnologies described for the males of this species. Thus, the aim of the study was to establish a crioperservação protocol epididymal sperm of cavies. To this end, the work was divided into two experiments. In the experiment were used primeito 9 complex testicle-epididymis to collect the sperm that was taken by flotation method, which was the sperm were collected by TES and TRIS thinners to assess which would be ideal for harvesting. For the second experiment, they used 12 complex testicle-epididymis, sperm undergo collection of epididymal by retrograde washing method with TRIS diluent which provided greater longevity to sperm in the first experiment. The sample was cryopreserved in TRIS plus 20% egg yolk, and added to the cryoprotectant DMSO and glycerol in final concentrations of 3%, 6% and 9%, reaching a concentration of 100 X 106 sperm / ml. Data were expressed as mean and standard error and submitted to the Fisher PLSD test (P <0.05). The results indicate that the TRIS diluent was more efficient than the TES (P <0.05), which proportionally greater longevity to epididymal sperm. Still in cryopreservation glycerol, indepentede his concentration was more efficient in conserving gametes Durane the cryopreservation process. In conclusion, it indicates the use of the diluent tris to recovery and maintaining the longevity of epididymal sperm cavies. Still, it is suggested the use of tris diluent plus 20% egg yolk and 6% glycerol for cryopreservation of epididymal sperm of Spixs yellow-toothed cavies (Galea spixii)

Dimethyl sulfoxide effects on the febrile response to lipopolysaccharide injection in rabbits / Efeitos do dimetil sulfóxido sobre a resposta febril induzida pela injeção de lipopolissacarídeo em coelhos

The present study was designed to determine whether DMSO causes an inhibition on the development of fever in rabbits. The intravenous administration of LPS (1.5µg.kg-1 body weight) caused fever in both saline+LPS and DMSO+LPS group, but the onset and magnitude of the induced fever were significantly different. The saline+LPS group presented a prototypic biphasic fever whereas the DMSO+LPS group presented an attenuated febrile response, but it was not abolished. These results suggest that DMSO may provide a protective mechanism against pyrogen LPS, probably through the modulation of NF-kB mediated events, such as fever.(AU)

Estudaram-se os efeitos do DMSO na resposta febril induzida pela administração intravenosa de LPS em coelhos. A administração intravenosa de LPS (1,5µg.kg-1 peso vivo) causou febre mesmo na presença do DMSO. No entanto, o início e a magnitude da febre induzida foram significativamente menores no grupo tratado com DMSO enquanto o LPS isolado induziu resposta febril bifásica. Estes resultados sugerem que o DMSO pode exercer um mecanismo protetor contra a ação pirogênica do LPS, provavelmente por meio da modulação dos eventos mediados pelo NF-kB, entre eles, a febre.(AU)

Intoxicação experimental com extratos de Mascagnia rigida (Malpighiaceae) em camundongos / Experimental intoxication in mice with extracts of Mascagnia rigida (Malpighiaceae)

Foi realizado o fracionamento químico do extrato aquoso da Mascagnia rigida Griseb., uma importante planta tóxica no Brasil, para se obter cinco substratos ricos em diferentes grupos químicos - alcalóides, flavanóides, taninos, saponinas e açúcares, ácidos orgânicos e aminoácidos -, e investigar a toxicidade dessas frações, exceto a última, em 75 camundongos. Os animais, distribuídos aleatoriamente em cinco grupos, receberam: grupo I - alcalóides; grupo II - flavanóides; grupo III - taninos; grupo IV - saponinas e grupo V - placebo, este último funcionando como controle negativo. Todos os grupos, com exceção do grupo-controle, redistribuídos em três subgrupos, A, B e C, com cinco animais cada, receberam, respectivamente, 9g/kg, 18g/kg e 27g/kg de cada substrato. As frações foram fornecidas via oral, diariamente, por sete dias; no sétimo dia, foi coletado sangue para o estudo do perfil sangüíneo e dosagem de enzimas musculares. As frações de alcalóides e taninos foram capazes de causar alteração no perfil enzimático-muscular, com aumento significativo da enzima miocárdica. Observou-se, também, aumento significativo na porcentagem da CK-MB após a administração das frações de saponinas e taninos, comprovando a ação tóxica da M. rigida sobre a fibra muscular cardíaca.(AU)

A study was carried out to examine the toxic effects of Mascagnia rigida Griseb. Four classes of compounds were extracted from the plant by phytochemistry study and the individual effect of each one on mice was examined as follows: group I - alkaloids; group II- flavones; group III - tannins; group IV - saponins; and group V - water (control). Each group was further divided in three subgroups, A (9g/kg), B (18g/kg), and C (27g/kg), with five mice orally receiving a particular dose, once per day for one week. On the 7th day, blood was collected and hematological exams and levels of muscle enzymes were analyzed. The results showed that both alkaloids and tannins caused a significant increase in myocardial enzyme. Administration of either saponins or tannins fractions caused an increase of CK-MB enzyme. This study showed that Mascagnia rigida Griseb has the ability to cause damage to myocardial fibers.(AU)

Viabilidade de Tritrichomonas foetus após congelamento com diferentes crioprotetores

The aim of this work was to evaluate the viabilitity of Tritrichomonas foetus cryopreservated with glycerol and dimethilsulphosyde (DMSO) at -196ºC. Samples of the protozoa were thaw two days and 6, 12, 18, and 26 months after freezing to be evaluated. In the time analyzed, the freezing was viable in 60% and 90% of freeze samples with glycerol at 10% and DMSO at 12%, respectively.

Este trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade de um isolado de Tritrichomonas foetus criopreservada com glicerol e dimetilsulfóxido (DMSO) a -196ºC. Isolados do protozoário foram descongeladas dois dias após o congelamento e 6, 12, 18 e 26 meses, para avaliação de sua viabilidade. Em todos os tempos analisados, o congelamento foi viável em 60% e 90% das amostras congeladas com glicerol a 10% e DMSO a 12%, respectivamente.

Comparação da viabilidade das células mononucleares totais da medula óssea de suínos em diferentes protocolos de congelamento / Comparison of the viability of the mononuclear total cells of the bone marrow of pigs in different protocols of freezing

A necessidade de tratamentos mais eficazes e menos invasivos para os pacientes, em adição à capacidade de diferenciação celular da medula óssea sugere que o transplante de células mononucleares totais poderia ser uma das melhores formas de tratamento para as diversas patologias existentes. Entretanto, vários fatores implicam sobre a viabilidade das células da medula óssea dos quais destacamos a ausência de padronização de protocolo de criopreservação que permita a manutenção da viabilidade celular, sendo altamente necessário o desenvolvimento de estudos nesta área. Deste modo, neste estudo, após a anestesia de um grupo de animais foi realizada punção da medula óssea, separação das células mononucleares e avaliação da viabilidade. Foram testados oito meios diferentes para criopreservação das células. O meio de congelamento A é composto por 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco´s Modified Eagle´s Médium (DMEM) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento B contém 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 40% de Plasma Autólogo, o meio de congelamento C tem em sua composição 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% soro fetal bovino (SFB) e 40% plasma autólogo, o meio de congelamento D é composto de 20% dimetilsulfóxido (DMSO) e 80% de plasma autólogo, o meio E constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) e 47,5% de plasma autólogo, o meio F contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) e 47,5% de plasma autólogo, o meio G contém 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de soro fetal bovino (SFB) e 47,5% de plasma autólogo e o meio H constitui-se de 5% dimetilsulfóxido (DMSO) e 95% de plasma autólogo. Após as análises realizadas pela técnica de citometria de fluxo, o meio mais eficiente na criopreservação das células mononucleares de suínos foi o protocolo D por possuir maior concentração de plasma autólogo e crioprotetor

The necessity of the most efficient and less invasive treatments for the patients, in addition to the capacity of cellular differentiation of the bone marrow suggests that the transplant of mononuclear total cells might be one of the best treatment for several pathologies. Meantime, several factors influence on the viability of the cells of the bone marrow as the absence of standardization of criopreservação protocol which could allow the maintenance of the cellular viability, being an important issue of investigation. In this study, after the anaesthesia of a group of animals, samples of bone marrow were collected, following the separation of the mononuclear cells and evaluation of the viability. Eight different protocols were tested for cells criopreservation. The protocol A by 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 40% autologus plasma, B protocol conatained 20% dimetilsulfóxido (DMSO), 40% Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 40% autologus plasma, the C protocol was composed 20 % dimetilsulfóxido (DMSO), 40% bovine fetal serum (SFB) e 40% autologus plasma, D protocol was made using 20% dimetilsulfóxido (DMSO) and 80% autologus plasma, E protocol was constituted by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Dulbecco\'s Modified Eagle\'s Médium (DMEM) and 47,5% autólogo plasma, the F contains 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de Roswell Park Memorial Institute (RPMI) and 47,5% autologo plasma, the protocol G was compoed by 5% dimetilsulfóxido (DMSO), 47,5% de bovine feta serum (SFB) and 47,5% autologus plasma and the H protocol was 5% dimetilsulfóxido (DMSO) and 95% autologus plasma. After flux citometer analyses, the most efficient protocol in criopreservation of the mononuclear cells of pigs was the protocol D which was composed the by the most amount of autologus plasma and crioprotectant