Resumo
Purpose: Remote ischemic preconditioning (RIPC) confers cardioprotection against ischemia reperfusion (IR) injury. However, the precise mechanisms involved in RIPC-induced cardioprotection are not fully explored. The present study was aimed to identify the role of melatonin in RIPC-induced late cardioprotective effects in rats and to explore the role of H2 S, TNF-α and mitoKATP in melatoninmediated effects in RIPC. Methods: Wistar rats were subjected to RIPC in which hind limb was subjected to four alternate cycles of ischemia and reperfusion of 5 min duration by using a neonatal blood pressure cuff. After 24 h of RIPC or ramelteon-induced pharmacological preconditioning, hearts were isolated and subjected to IR injury on the Langendorff apparatus. Results: RIPC and ramelteon preconditioning protected the hearts from IR injury and it was assessed by a decrease in LDH-1, cTnT and increase in left ventricular developed pressure (LVDP). RIPC increased the melatonin levels (in plasma), H2 S (in heart) and decreased TNF-α levels. The effects of RIPC were abolished in the presence of melatonin receptor blocker (luzindole), ganglionic blocker (hexamethonium) and mitochondrial KATP blocker (5-hydroxydecanoic acid). Conclusion: RIPC produce delayed cardioprotection against IR injury through the activation of neuronal pathway, which may increase the plasma melatonin levels to activate the cardioprotective signaling pathway involving the opening of mitochondrial KATP channels, decrease in TNF-α production and increase in H2 S levels. Ramelteon-induced pharmacological preconditioning may also activate the cardioprotective signaling pathway involving the opening of mitochondrial KATP channels, decrease in TNF-α production and increase in H2 S levels.
Assuntos
Animais , Ratos , Troponina/fisiologia , Cardiotônicos , Precondicionamento Isquêmico , Melatonina/análise , Infarto do Miocárdio/veterinária , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Ratos Wistar/fisiologia , MitocôndriasResumo
Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.(AU)
A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo "bovine leukemia virus" (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis "lung" (Tb1Lu) livre de "bovine viral diarrhea virus" (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens "fetal lamb kidney" (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial "Chekit Leucose-Serum". Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA "Chekit Leucose-Serum", o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Bovinos/virologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Leucose Enzoótica Bovina/diagnósticoResumo
Enzootic bovine leukosis (EBL) is an infectious disease caused by bovine leukemia virus (BLV) that affects cattle worldwide. Agar gel immunodiffusion (AGID) was the reference test for EBL diagnosis for many years, but enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) showed higher sensitivity, was faster to perform, and resulted in an objective reading. However, the importation of ELISA kits is lengthy and expensive, and currently, no AGID kits are available in Brazil. The aim of this work was to standardize an indirect ELISA (iELISA) for EBL diagnosis using BLV antigens produced in Tadarida brasiliensis lung (Tb1Lu) cells, which are Bovine viral diarrhea virus (BVDV) free, unlike fetal lamb kidney (FLK) cells, currently used for this purpose. Following standardization, iELISA results were compared with those obtained by AGID and the commercial Chekit Leucose-Serum ELISA. Compared to AGID, iELISA had 94,44% sensitivity, 75.68% specificity, 79.10% positive predictive value (PPV) and 93.30% negative predictive value (NPV), with 84% concordance and a Kappa index of 0.699. Compared to the Chekit Leucose-Serum ELISA, iELISA showed 92.60% sensitivity, 87.09% specificity, 90.27% PPV and 90,00% NPV, with 90.27% concordance and a Kappa index of 0.801. Taking into account the high agreement with the traditional tests and the absence of non-specific reactions with BVDV, the developed assay could be used as diagnostic method to control EBL in Brazil.(AU)
A leucose enzoótica bovina (LEB) é uma doença infecciosa natural dos bovinos com distribuição mundial causada pelo "bovine leukemia virus" (BLV). A imunodifusão em gel de ágar (IDGA) foi considerada por muitos anos o teste de eleição, porém ensaios imunoenzimáticos (ELISA) apresentam sensibilidade mais elevada e leitura mais rápida e objetiva. No entanto, a importação de kits de ELISA é um processo dispendioso e demorado, e atualmente não há kits de IDGA comercialmente disponíveis no Brasil. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi padronizar um ELISA indireto (iELISA) para diagnóstico da LEB utilizando antígenos produzidos a partir do cultivo do BLV em linhagem celular Tadarida brasiliensis "lung" (Tb1Lu) livre de "bovine viral diarrhea virus" (BVDV), diferentemente do que acontece com as linhagens "fetal lamb kidney" (FLK) atualmente utilizadas na produção desses antígenos para uso em ensaios sorológicos. Após a padronização do iELISA, os resultados foram comparados com aqueles obtidos por IDGA e pelo ELISA comercial "Chekit Leucose-Serum". Comparado ao IDGA, o iELISA apresentou 94,44% de sensibilidade, 75,68% de especificidade, valor preditivo positivo (VPP) de 79,1% e valor preditivo negativo (VPN) de 93,3%, com concordância entre os testes de 84% e o índice Kappa 0,699. Quando comparado ao ELISA "Chekit Leucose-Serum", o iELISA apresentou sensibilidade de 92,6%, especificidade de 87,09%, VPP de 90,27% e VPN de 90%, com concordância de 90,27% e o índice Kappa 0,801. Portanto, devido à alta concordância com os testes tradicionais e ausência da ocorrência de reações inespecíficas com BVDV, o ensaio desenvolvido pode ser utilizado como ferramenta diagnóstica para o controle da LEB no Brasil.(AU)
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Animais , Bovinos , Bovinos/virologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Leucose Enzoótica Bovina/diagnósticoResumo
Neospora caninum is an obligate intracellular parasite that can infect many domestic and wild animals, including birds. These animals are important sources for monitoring of environmental contamination, as they could become infected through sporulated oocysts; however, the real role of birds in the biological cycle of N. caninum remains uncertain. This study aimed to determine the prevalence of anti-N. caninum antibodies, evaluate associated factors, detect the parasite by molecular testing of free-range chickens from Brazil, and evaluate different techniques for its serological diagnosis. Blood samples of 366 chickens from 25 farms were collected for serological assays. The indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) were used to detect anti-N. caninum antibodies. Chickens that tested seropositive by IFAT had their brain tissues and a pool of organs (heart, lung, and liver) submitted to PCR for molecular detection of the parasite. Out of 366 chickens, 65 (17.8%) and 163 (44.6%) were seropositive by IFAT and ELISA, respectively. Brain tissues (n=60) and the pools of organs (n=65) were negative in the PCR. Our results showed a high prevalence of antibodies in free-range chickens and that IFAT is the more sensitive technique for the detection of anti-N. caninum antibodies.(AU)
Neospora caninum é um parasita intracelular obrigatório que pode infectar vários animais domésticos e silvestres, incluindo as aves. Esses animais são importantes fontes para o monitoramento da contaminação ambiental, uma vez que eles podem se infectar por meio da ingestão de oocistos. Porém, o real papel das aves no ciclo biológico do N. caninum ainda é incerto. Este estudo teve como objetivos determinar a prevalência de anticorpos anti-N. caninum, avaliar fatores associados, detectar o parasita por meio de teste molecular em galinhas de vida livre do Brasil e avaliar diferentes técnicas para o diagnóstico sorológico. Amostras de sangue de 366 galinhas de 25 fazendas foram coletadas para testes sorológicos. A reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) foram utilizados para detectar anticorpos anti-N. caninum. As amostras de tecidos (cérebro, coração, pulmão e fígado) de galinhas soropositivas na RIFI foram coletadas e submetidas à PCR para detecção molecular do parasita. Das 366 galinhas, 65 (17,8%) e 163 (44,6%) foram soropositivas pela RIFI e ELISA, respectivamente. Nenhuma amostra foi positiva na PCR. Esses resultados demonstram uma elevada prevalência de anticorpos em galinhas de vida livre e que a RIFI é uma técnica mais sensível para a detecção de anticorpos anti-N. caninum.(AU)
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Animais , Galinhas/parasitologia , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Neospora/classificaçãoResumo
Abstract Neospora spp. are intracellular protozoa with worldwide distribution and closely related to Toxoplasma gondii, which can infect a variety of mammals including horses. From September 2013 to June 2014, 185 horses from northern, central and southern parts of mainland Portugal were randomly sampled and tested for detection of immunoglobulin (Ig) G antibodies to Neospora spp. using an indirect multi-species enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) commercial test (ID Screen® Neospora caninum Indirect Multi-species; ID.vet Innovative Diagnostics, Grabels, France). Two horses (1.1%; CI: 0.1-3.8%), one male and one female, were found to be seropositive for Neospora spp. Both seropositive animals were horses housed indoors but with access to outdoors, used for leisure activities and were apparently healthy, with good body condition and with no alterations at physical examination. This was the first serologic survey of antibodies to Neospora spp. carried out in horses from Portugal.
Resumo Neospora spp. são protozoários intracelulares com distribuição mundial e estreitamente relacionados com Toxoplasma gondii, que podem infectar uma variedade de mamíferos, incluindo cavalos. De setembro de 2013 a junho de 2014, 185 cavalos de áreas do Norte, Centro e Sul de Portugal continental foram aleatoriamente amostrados e testados para a detecção de anticorpos imunoglobulinas (Ig) G anti-Neospora spp., utilizando-se um ensaio imunoenzimático (ELISA) indireto multi-espécies comercial (ID Screen® Neospora caninum Indirect Multi-species; ID.vet Innovative Diagnostics, Grabels, France). Dois cavalos (1,1%; IC: 0,1-3,8%), um macho e uma fêmea, foram detectados como seropositivos para Neospora spp. Ambos os animais seropositivos eram cavalos mantidos em cocheiras mas com acesso aos piquetes, eram utilizados para atividades de lazer e estavam aparentemente saudáveis, com boa condição corporal e sem alterações ao exame físico. Essa é o primeiro rastreio de anticorpos para Neospora spp. realizado em cavalos de Portugal.
Resumo
Background: Cryptosporidium is an important protozoan in public health and veterinary medicine that often causes diarrhea in an array of hosts in developed/developing countries. Infection of the gastrointestinal system is the most common, but the respiratory system and other sites can also be affected, especially in birds and immunocompromised individuals. Transmission occurs through ingestion or inhalation of oocysts. The number of wild animals, including those in the class of birds, infected with this parasite has grown in recent years. This study aimed to report parasitism by Cryptosporidium spp. in captive-raised birds of family Psittacidae at the Rio City Zoo in Rio de Janeiro, Brazil.Materials, Methods & Results: Thirty-three pools of fecal samples of the species Amazona aestiva, Amazona amazonica, Anodorhynchus hyacinthinus, Ara auricollis, Ara canga, Ara glaucogularis, Ara macao, Ara manilapa, Ara maracana, Ara rubrogenys, Aratinga erythrogenys, Aratinga cactorum, Aratinga auerea, Aratinga mitrata, Aratinga auricapilla, Aratinga jandaia, Aratinga wagleri, Aratinga leucophthalmus, Brotogeris acuticaudata, Cynoliseus patagonus, Caracopsis vasa, Diopsittaca nobilis, Graydidascalus brachyurus, Muopsitta monachus, Nangayus nenday, Pionites melancephala, Pionites leucogaster, Pionus menstruus, Pionus chalcopteus, Pionus maxiliani, Pyrrhura perlata, Pyrrhura leucotis, and Triclharia malachitacea, kept in separate enclosures, were analyzed using Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) for detection of parasitic antigens. Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR) was conducted in order to identify the species Cryptosporidium in the positive samples targeting the small subunit ribosomal RNA gene (SSU rRNA), followed by sequencing and analysis of the DNA amplicons.[...]
Assuntos
Animais , Animais de Zoológico , Cryptosporidium/patogenicidade , Papagaios/parasitologia , Brasil , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodosResumo
Background: Cryptosporidium is an important protozoan in public health and veterinary medicine that often causes diarrhea in an array of hosts in developed/developing countries. Infection of the gastrointestinal system is the most common, but the respiratory system and other sites can also be affected, especially in birds and immunocompromised individuals. Transmission occurs through ingestion or inhalation of oocysts. The number of wild animals, including those in the class of birds, infected with this parasite has grown in recent years. This study aimed to report parasitism by Cryptosporidium spp. in captive-raised birds of family Psittacidae at the Rio City Zoo in Rio de Janeiro, Brazil.Materials, Methods & Results: Thirty-three pools of fecal samples of the species Amazona aestiva, Amazona amazonica, Anodorhynchus hyacinthinus, Ara auricollis, Ara canga, Ara glaucogularis, Ara macao, Ara manilapa, Ara maracana, Ara rubrogenys, Aratinga erythrogenys, Aratinga cactorum, Aratinga auerea, Aratinga mitrata, Aratinga auricapilla, Aratinga jandaia, Aratinga wagleri, Aratinga leucophthalmus, Brotogeris acuticaudata, Cynoliseus patagonus, Caracopsis vasa, Diopsittaca nobilis, Graydidascalus brachyurus, Muopsitta monachus, Nangayus nenday, Pionites melancephala, Pionites leucogaster, Pionus menstruus, Pionus chalcopteus, Pionus maxiliani, Pyrrhura perlata, Pyrrhura leucotis, and Triclharia malachitacea, kept in separate enclosures, were analyzed using Enzyme-linked Immunosorbent Assay (ELISA) for detection of parasitic antigens. Quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR) was conducted in order to identify the species Cryptosporidium in the positive samples targeting the small subunit ribosomal RNA gene (SSU rRNA), followed by sequencing and analysis of the DNA amplicons.[...](AU)
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Animais , Papagaios/parasitologia , Cryptosporidium/patogenicidade , Animais de Zoológico , Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , BrasilResumo
The objective of this study was to evaluate the frequency of specific IgG antibodies against Toxoplasma gondii in goats belonging to some cities of Semi-Arid region of Bahia, by indirect ELISA (enzyme linked immunonosorbent assay). First, a pilot study was conducted with 49 goats to compare results from ELISA with those obtained by IFAT (indirect fluorescent antibody test) to detect serum antibodies against T. gondii. It was observed 30.6% (15/49) of seropositive by ELISA, while the IFAT showed 40.8% (20/49) reagents goats. Thus, ELISA showed 70% sensitivity and 96.5% specificity. Then, sera samples of goats from the cities Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé and Uauá were analyzed. Among the 375 evaluated animals, 25.1% had positive IgG titers in ELISA for T. gondii. Females have a 1.236 times higher risk of being seropositive compared to males. There was no correlation between age and the presence of anti-T. gondii antibodies in these animals. The city with the biggest number of seropositive goats was Sento Sé, with 46.4% (39/84) and the lowest rate was observed in Juazeiro, with 3.6% (2/55). The results of this study confirm that T. gondii infection is common in goats from the semi-arid climate region of Bahia, which is considered adverse for transmission.(AU)
Este trabalho teve como objetivo avaliar a frequência de anticorpos IgG específicos contra Toxoplasma gondii em caprinos pertencentes a algumas cidades do semiárido baiano, através do ELISA (ensaio imunoadsorvente ligado à enzima) indireto. Primeiramente, foi realizado um estudo piloto com 49 caprinos para comparar os resultados do ELISA com a RIFI (reação de imunofluorescência indireta) para detecção de anticorpos séricos contra T. gondii. Foram observados 30,6% (15/49) de soropositivos pelo ELISA, enquanto pela RIFI houve 40,8% (20/49) de caprinos reagentes. Desta maneira, o ELISA apresentou 70% de sensibilidade e 96,5% de especificidade. Em seguida, foram analisadas amostras de soros de caprinos provenientes das cidades de Casa Nova, Curaçá, Jaguarari, Juazeiro, Sento Sé e Uauá. Dentre os 375 animais avaliados, 25,1% apresentaram títulos de IgG positivos no ELISA para T. gondii. As fêmeas tiveram um risco 1,236 vezes maior de serem soropositivas em relação aos machos. Não houve relação entre idade e presença de anticorpos anti-T. gondii nestes animais. A cidade com maior número de caprinos soropositivos foi Sento Sé, com 46,4% (39/84) e a menor frequência foi observada em Juazeiro, com 3,6% (2/55). Os resultados deste estudo confirmam que a infecção pelo T. gondii é comum em caprinos brasileiros do estado da Bahia, inclusive na região de clima semiárido, considerada mais desfavorável à transmissão.(AU)
Assuntos
Animais , Toxoplasma/imunologia , Toxoplasmose Animal/imunologia , Ruminantes/imunologia , Anticorpos , Imunoglobulina G/imunologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterináriaResumo
Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p<0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.(AU)
Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p <0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.(AU)
Assuntos
Anticorpos , Circovirus , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Sacarose , Centrifugação IsopícnicaResumo
Few studies have described enzyme-linked immunosorbent assays (ELISAs) for the detection of antibodies against porcine circovirus type 2 (PCV2) based on antigens produced in cell culture. Furthermore, few articles have described viral purification techniques for members of the family Circoviridae. This occurs because circoviruses are difficult to isolate, noncytopathogenic, and produce low viral titres in cell culture. Thus, for overcoming these difficulties in the cultivation of PCV2, this study aimed to develop a double-antibody sandwich ELISA based on the cell culture antigen PCV2b for the quantification of anti-PCV2 antibodies. A 20% and 50% discontinuous sucrose cushion was used for viral purification, which enabled the separation of cell culture proteins in the 20% sucrose cushion and a greater viral concentration in the 50% sucrose cushion. Following isopycnic centrifugation, PCV2 was concentrated in the band with density values from 1.330 to 1.395g/cm3. Viral purification was assessed using SDS-PAGE, indirect ELISA and electron microscopy. The standardised ELISA revealed a strong linear correlation (r= 0.826, p < 0.001) when compared with a commercial ELISA kit. The assay exhibited low variability (inter-assay coefficient of variation of 4.24% and intra-assay of 1.80%) and excellent analytical specificity conferred by the capture antibody produced in rabbit. Thus, this ELISA is a rapid, specific and convenient method for the detection of antibodies against PCV2 in studies of experimental and natural infection, and in monitoring the response to vaccination on commercial farms.(AU)
Há poucos relatos na literatura de métodos de ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay), para a detecção de anticorpos contra o circovírus suíno tipo 2 (PCV2), baseados em antígenos produzidos em cultivo celular, bem como uma escassez de trabalhos descrevendo técnicas de purificação viral para os membros da família Circoviridae. Isso ocorre, pois os circovírus são de difícil isolamento, não causam efeito citopático e produzem um baixo título viral em cultivo celular. Assim, para superar essas dificuldades encontradas no cultivo do PCV2, este estudo objetivou desenvolver um sandwich ELISA com duplo anticorpo, baseado no antígeno de PCV2 produzido em cultivo celular, para a quantificação de anticorpos anti-PCV2. Um colchão de sacarose descontínuo a 20% e 50% foi utilizado para a purificação viral, o qual possibilitou a separação das proteínas oriundas do cultivo celular no colchão de sacarose a 20% e uma maior concentração viral no colchão de sacarose a 50%. Com a ultracentrifugação isopícnica, o PCV2 ficou mais concentrado na banda com valores de densidade de 1,330 a 1,395g/cm3. A purificação viral foi avaliada pelas técnicas de SDS-PAGE, ELISA indireto e microscopia eletrônica. Assim, o método de ELISA padronizado revelou uma forte correlação linear (r = 0,826, p < 0,001) quando comparado com um kit de ELISA comercial. O ensaio demonstrou baixa variabilidade (coeficientes de variação inter-teste de 4,24% e intra-teste de 1,80%) e uma excelente especificidade analítica conferida pelo anticorpo de captura produzido em coelho. Portanto, o método de ELISA demonstrou ser rápido, específico e conveniente para a detecção de anticorpos contra o PCV2 em estudos de infecção natural e experimental, além da monitoria da resposta à vacinação contra o PCV2 em granjas comerciais.(AU)
Assuntos
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática , Circovirus , Sacarose , Anticorpos , Centrifugação IsopícnicaResumo
Background Toxoplasmosis is a zoonosis caused by an obligate intracellular parasite, Toxoplasma gondii, which affects warm-blooded animals including humans. Its prevalence rates usually vary in different regions of the planet. Methods In this study, an analysis of the seroprevalence of toxoplasmosis among Brazilian students was proposed by means of IgG specific antibodies detection. The presence of anti-Toxoplasma gondiiantibodies by indirect fluorescent antibody test (IFAT) was also evaluated in order to compare it with enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and to assess the use of 2,2-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) and o-phenylenediamine dihydrochloride chromogens. Results The IFAT method showed a seroprevalence of 22.3%. These results were similar to those obtained by ELISA (24.1%). The seroprevalence was directly estimated from the IgG avidity, which showed that in a sample of 112 students, three of them had acute infection, an incidence of 1.6% in the studied population. Conclusion In this study, the use of different chromogenic substrates in immunoenzymatic ELISA assays did not display different sensitivity in the detection of T. gondii-reagent serum. The extrapolation of results to this population must be carefully considered, since the investigation was conducted on a reduced sample. However, it allows us to emphasize the importance of careful and well prepared studies to identify risk factors for toxoplasmosis, to adopt preventive measures and to offer guidance to at-risk populations about the disease.(AU)
Assuntos
Humanos , Estudos Soroepidemiológicos , Toxoplasmose/epidemiologia , Toxoplasmose/imunologia , Toxoplasma/imunologiaResumo
Essa tese é composta por três artigos. No Capítulo I foi determinada a soroprevalência da infecção por Corynebactetium pseudotuberculosis em ovinos no Nordeste brasileiro por meio da técnica de ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) indireto. Foram coletadas amostras de 2.638 ovinos provenientes de 223 propriedades de cinco estados (Ceará, Paraíba, Piauí, Rio Grande do Norte, e Sergipe). Dos 2.638 ovinos testados, 996 (37,76%; IC 95% = 35,93 39,62%) foram sororeativos e das 223 propriedades avaliadas, 210 (94,17%; IC 95% = 90,28 96,56%) resultaram positivas. O teste de ELISA-indireto apresentou sensibilidade e especificidade de 91,84% e 97,01%, respectivamente, demonstrando ser útil no diagnóstico da linfadenite caseosa (LC) em ovinos. A infecção por C. pseudotuberculosis, encontra-se disseminada nos rebanhos ovinos dos estados da região Nordeste do Brasil. No Capítulo II foram avaliados os fatores associados à sororeatividade para C. pseudotuberculosis na região Nordeste. Foram colhidas amostras de 2.312 ovinos originados de 196 propriedades estudadas no Capítulo I. Foram identificadas 93,88% (184/196) das propriedades e 37,46% (866/2.312) dos animais com resultado sorológico positivo para C. pseudotuberculosis. Animais de raça pura (PR = 1,189; p = 0,017), origem do reprodutor de exposição (PR = 1,192; p = 0,020), separar as crias das mães (PR = 1,132; p = 0,048), origem da água de lagoa (PR = 1,365; p = 0,002) e eliminar animais infectados como medida de controle (PR = 1,263; p = 0,027) foram identificados com fatores associados à soropositividade. Recomendam-se medidas de incrementação do controle da doença nos animais de raças puras e que participam de aglomerações animais, que visem reduzir a contaminação ambiental pelo agente, o estresse no manejo de desmama, o descarte adequado dos infectados e isolamento com inspeção em animais recém adquiridos antes de introduzi-los aos rebanhos, bem como incentivar a utilização do diagnóstico precoce e da vacinação para diminuir a ocorrência da doença. No Capítulo III foi conduzido um estudo de soroprevalência da linfadenite caseosa em caprinos comercializados em feira de animais vivos no semiárido nordestino. Foram coletadas amostras de 233 caprinos e realizado diagnóstico por meio da técnica de ELISA-indireto. Foram identificados 87 (37,34%; IC 95% = 31,38 43,71%) caprinos sororeativos para C. pseudotuberculosis. A infecção por C. pseudotuberculosis está presente nos rebanhos caprinos comercializados. São recomendadas políticas de incentivo ao acesso do diagnóstico precoce da doença pelos produtores e a implementação de um programa de controle da LC com o objetivo de reduzir a alta prevalência observada nas propriedades e nos animais.
This thesis consists of three articles. In Chapter I, seroprevalence of C. pseudotuberculosis infection in sheep in Northeastern Brazil was determined by indirect enzyme linked immunosorbent assay (i-ELISA). Samples were collected from 2,638 sheep from 223 farms of five states (Ceara, Paraiba, Piaui, Rio Grande do Norte, and Sergipe). From 2,638 sheep tested, 996 (37.76%; 95% CI = 35.93 - 39.62%) were seroreactives and from 223 properties evaluated, 210 (94.17%; 95% CI = 90.28 - 96, 56%) were positive. The i-ELISA test showed sensitivity and specificity of 91.84% e 97.01%, repectively, proving to be useful in diagnosis of caseous lymphadenitis (CLA) in sheep. In Chapter II, factors associated with seroreactivity for C. pseudotuberculosis in the Northeast region were evaluated. Samples were collected from 2,312 sheep from 196 farms studied in Chapter I. It was identified 93.88% (184/196) of the properties and 37.46% (866/2312) animals with positive serological result for C. pseudotuberculosis. Purebred animals (PR = 1.189; p = 0.017), source of exposure breeder (PR = 1.192; p = 0.020), separate lambs from ewes (PR = 1.132; p = 0.048), lakes water source ( PR = 1.65; p = 0.002) and eliminating infected animals as a control measure (PR = 1.263; p = 0.027) were identified with factors associated with seropositivity. Measures to increase disease control are recommended in purebred animals that participate in agglomerations of animals, to reduce environmental contamination by the agent, stress in handling weaning, proper disposal of the infected and isolation with inspection on recently acquired animals before introducing them to herds, as well as to encourage the use of early diagnosis and vaccination to reduce the occurrence of the disease. In Chapter III a seroprevalence study of caseous lymphadenitis was conducted in goats sold in animals fair on northeastern semiarid. Samples were collected from 233 goats and the diagnostic was performed by the i-ELISA. Eighty-seven (37.34%; 95% CI = 31.38 - 43.71%) seroreacitive goats were identified. C. pseudotuberculosis infection is present in marketed goat herds. Policies to encourage early access to disease diagnosis by producers and the implementation of a CLA control program are recommended to reduce the high prevalence observed in farms and animals.
Resumo
This study evaluated factors associated with the frequency ofLeishmania spp. antibodies in dogs residing in the Itaguai micro-region, State of Rio de Janeiro, Brazil. Blood samples were collected from 524 dogs. The serum samples were submitted to indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) forLeishmania spp. The frequency of seropositive dogs was 28.24% (n = 148) in the micro-region, and among the three municipalities within that region, the highest frequency (p < 0.05) was observed in Seropedica (59.46%), followed by Itaguai (29.05%) and Mangaratiba (11.49%). Regarding factors associated with the host, mongrel dogs and those over the age of two presented higher frequency of antibodies to Leishmaniaspp. (p < 0.05). Concerning factors related to the environment and habits of the animal, dogs residing in rural areas (FR = 1.67, p = 0.0002), living outside the residence (FR = 1.42, p = 0.0197), with access to forest, streams and pastures (FR = 2.81, p = 0.0007), remaining loose (FR = 1.66, p = 0.0073), and those that had no shelter (FR = 2.16, p < 0.0001) were more likely to be seropositive. Canine leishmaniasis is a disease with high occurrence in the Itaguai micro-region, and aspects such as the definition of breed, age, habits and care by owners showed significant association in this micro-region.
Este estudo avaliou os fatores associados à frequência de anticorpos específicos para Leishmania spp. em cães domiciliados na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro. Foram colhidas amostras de sangue de 524 cães. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) para Leishmania spp. A frequência de cães soropositivos foi de 28,24% (n = 148) na microrregião e, entre os três municípios avaliados, a maior frequência (p < 0,05) foi observada em Seropédica (59,46%), seguida de Itaguaí (29,05%) e Mangaratiba (11,49%). Em relação aos fatores associados ao hospedeiro, observou-se que cães sem raça definida e aqueles com idade acima de dois anos apresentaram maior frequência de anticorpos para Leishmania spp. (p < 0,05). Em relação aos fatores relacionados ao ambiente e ao hábito do animal, os cães residentes em áreas rurais (RF = 1,67, p = 0,0002), animais que vivem fora da residência (RF = 1,42, p = 0,0197), com acesso à mata, córregos e pastagens (FR = 2,81, p = 0,0007), que permanecem soltos (RF = 1,66, p = 0,0073), e aqueles que não possuem abrigo (RF = 2,16, p < 0,0001) apresentaram maior chance de serem soropositivos. A leishmaniose canina é uma enfermidade com elevada ocorrência na microrregião de Itaguai, e aspectos como definição racial, idade, hábitos e cuidados estabelecidos pelo proprietário mostraram associação significativa nessa microrregião.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Cães , Doenças do Cão/epidemiologia , Doenças do Cão/parasitologia , Leishmaniose/epidemiologia , Leishmaniose/veterinária , Anticorpos Antiprotozoários/sangue , Brasil/epidemiologia , Doenças do Cão/sangue , Leishmania/imunologia , Leishmaniose/sangue , Estudos SoroepidemiológicosResumo
This study evaluated factors associated with the frequency ofLeishmania spp. antibodies in dogs residing in the Itaguai micro-region, State of Rio de Janeiro, Brazil. Blood samples were collected from 524 dogs. The serum samples were submitted to indirect fluorescent antibody test (IFAT) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) forLeishmania spp. The frequency of seropositive dogs was 28.24% (n = 148) in the micro-region, and among the three municipalities within that region, the highest frequency (p 0.05) was observed in Seropedica (59.46%), followed by Itaguai (29.05%) and Mangaratiba (11.49%). Regarding factors associated with the host, mongrel dogs and those over the age of two presented higher frequency of antibodies to Leishmaniaspp. (p 0.05). Concerning factors related to the environment and habits of the animal, dogs residing in rural areas (FR = 1.67, p = 0.0002), living outside the residence (FR = 1.42, p = 0.0197), with access to forest, streams and pastures (FR = 2.81, p = 0.0007), remaining loose (FR = 1.66, p = 0.0073), and those that had no shelter (FR = 2.16, p 0.0001) were more likely to be seropositive. Canine leishmaniasis is a disease with high occurrence in the Itaguai micro-region, and aspects such as the definition of breed, age, habits and care by owners showed significant association in this micro-region.
Este estudo avaliou os fatores associados à frequência de anticorpos específicos para Leishmania spp. em cães domiciliados na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro. Foram colhidas amostras de sangue de 524 cães. As amostras de soro foram submetidas a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e ensaio imunoenzimático indireto (ELISA-teste) para Leishmania spp. A frequência de cães soropositivos foi de 28,24% (n = 148) na microrregião e, entre os três municípios avaliados, a maior frequência (p 0,05) foi observada em Seropédica (59,46%), seguida de Itaguaí (29,05%) e Mangaratiba (11,49%). Em relação aos fatores associados ao hospedeiro, observou-se que cães sem raça definida e aqueles com idade acima de dois anos apresentaram maior frequência de anticorpos para Leishmania spp. (p 0,05). Em relação aos fatores relacionados ao ambiente e ao hábito do animal, os cães residentes em áreas rurais (RF = 1,67, p = 0,0002), animais que vivem fora da residência (RF = 1,42, p = 0,0197), com acesso à mata, córregos e pastagens (FR = 2,81, p = 0,0007), que permanecem soltos (RF = 1,66, p = 0,0073), e aqueles que não possuem abrigo (RF = 2,16, p 0,0001) apresentaram maior chance de serem soropositivos. A leishmaniose canina é uma enfermidade com elevada ocorrência na microrregião de Itaguai, e aspectos como definição racial, idade, hábitos e cuidados estabelecidos pelo proprietário mostraram associação significativa nessa microrregião.
Resumo
The snake genus Lachesis provokes 2 to 3% of snakebites in Colombia every year. Two Lachesis species, L. acrochorda and L. muta, share habitats with snakes from another genus, namely Bothrops asper and B. atrox. Lachesis venom causes systemic and local effects such as swelling, hemorrhaging, myonecrosis, hemostatic disorders and nephrotoxic symptoms similar to those induced by Bothrops, Portidium and Bothriechis bites. Bothrops antivenoms neutralize a variety of Lachesis venom toxins. However, these products are unable to avoid coagulation problems provoked by Lachesis snakebites. Thus, it is important to ascertain whether the envenomation was caused by a Bothrops or Lachesis snake. The present study found enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) efficient for detecting Lachesis acrochorda venom in a concentration range of 3.9 to 1000 ng/mL, which did not show a cross-reaction with Bothrops, Portidium, Botriechis and Crotalus venoms. Furthermore, one fraction of L. acrochorda venom that did not show crossreactivity with B. asper venom was isolated using the same ELISA antibodies; some of its proteins were identified including one Gal-specific lectin and one metalloproteinase. This test may be useful to physicians, since it could be applicable for tracking the kinetic distribution of antigens in patients or experimentally envenomed animals.(AU)
Assuntos
Venenos de Serpentes/toxicidade , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Técnicas Imunoenzimáticas/métodos , ViperidaeResumo
The snake genus Lachesis provokes 2 to 3% of snakebites in Colombia every year. Two Lachesis species, L. acrochorda and L. muta, share habitats with snakes from another genus, namely Bothrops asper and B. atrox. Lachesis venom causes systemic and local effects such as swelling, hemorrhaging, myonecrosis, hemostatic disorders and nephrotoxic symptoms similar to those induced by Bothrops, Portidium and Bothriechis bites. Bothrops antivenoms neutralize a variety of Lachesis venom toxins. However, these products are unable to avoid coagulation problems provoked by Lachesis snakebites. Thus, it is important to ascertain whether the envenomation was caused by a Bothrops or Lachesis snake. The present study found enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) efficient for detecting Lachesis acrochorda venom in a concentration range of 3.9 to 1000 ng/mL, which did not show a cross-reaction with Bothrops, Portidium, Botriechis and Crotalus venoms. Furthermore, one fraction of L. acrochorda venom that did not show crossreactivity with B. asper venom was isolated using the same ELISA antibodies; some of its proteins were identified including one Gal-specific lectin and one metalloproteinase. This test may be useful to physicians, since it could be applicable for tracking the kinetic distribution of antigens in patients or experimentally envenomed animals.(AU)
Assuntos
Animais , Venenos de Víboras/enzimologia , /métodos , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Reações CruzadasResumo
Entre as doenças transmitidas por vetores nos seres humanos, a leishmaniose é considerada uma das mais importantes. A leishmaniose visceral é uma doença infecciosa de caráter zoonótico, cosmopolita e de grande impacto na saúde pública, causada por diferentes espécies de protozoários do gênero Leishmania. A transmissão do parasita responsável pela leishmaniose, para animais susceptíveis, ocorre através da picada de fêmeas infectadas do gênero Lutzomyia, sendo no Brasil o vetor mais importante o Lutzomyia longipalpis. A leishmaniose é uma doença de caráter imunossupressor e por isso pode facilitar a co-infecção com outras doenças de caráter oportunista, como a Toxoplasmose. Este estudo teve como objetivo determinar a ocorrência da infecção por Leishmania sp e Toxoplasma gondii em gatos domésticos (Felis catus domesticus), a fim de realizar um estudo sobre os aspectos epidemiológicos e clínicos da doença em felinos no município de São Luís. Foram realizadas coletas de sangue de 113 felinos provenientes de diferentes clínicas veterinárias particulares, diversas residências e três ONGs localizadas em áreas metropolitanas e rurais da cidade, para posterior realização de exames hematológicos e bioquímicos, assim como a realização de teste de Ensaio Imunoenzimático para Leishmania sp. e Toxoplasma gondii. Os exames realizados foram hemograma completo e bioquímicos, tais como: TGO, TGP, Uréia e Creatinina. Os animais estudados foram animais com presença de sintomatologia clínica ou não para a doença, independentes de raça ou sexo e faixa etária a partir de 6 meses de idade. A prevalência de leishmaniose observada através da técnica de ELISA foi de 7,96% e a prevalência de toxoplasmose foi de 36,28%. Dos nove animais sororeagentes para Leishmania sp., sete (77,7%) apresentavam infecção simultânea com Toxoplasma gondii. Houve associação estatisticamente significante entre a ocorrência de leishmaniose e toxoplasmose nos felinos estudados. Sendo assim, o presente estudo mostrou índices elevados de prevalência para ambas as doenças, verificou que a Leishmania sp e o Toxoplasma gondii. são agentes circulantes na cidade de São luís, Maranhão e que os felinos infectados são predispostos à coinfecção com Toxoplasma gondii.
Among the vector-borne diseases in humans, leishmaniasis is considered one of the most important .Visceral leishmaniasis is an infectious disease of zoonotic, cosmopolitan and of great public health impact caused by different species of Leishmania protozoa. The transmission of the parasite responsible for leishmaniasis, to susceptible animals occurs through the bite of infected female of Lutzomyia, and in Brazil the most important vector Lutzomyia longipalpis. Leishmaniasis is disease of immunosuppressive character and so can facilitate coinfection with other opportunistic diseases such as Toxoplasmosis. This study aimed to determine the occurrence of Leishmania sp and Toxoplasma gondii infection in domestic cats (Felis catus domesticus) in order to carry out a study on the epidemiological and clinical aspects of feline disease in the municipality of São Luís. Blood samples were collected from 113 felines which derived from various private veterinary clinics, various residences and three ONGs located in metropolitan and rural areas of the city, for subsequent hematological and biochemical exams, as well as the performance of an enzyme-linked immunosorbent assay for Leishmania sp. and Toxoplasma gondii. The tests performed was complete blood count and biochemists, as ALT, AST, Urea and Creatinine. The studied animals were with or without clinical symptoms for the disease , regardless of race or gender , and age from 6 months old. The prevalence of leishmaniasis observed by ELISA was 7.96% and the prevalence of Toxoplasmosis was 36.28%. Seven (77,7%) of the nine animals reactive to Leishmania sp., had concurrent infection with Toxoplasma gondii. There was a statistically significant association between the occurrence of the two diseases. Thus, this study showed high rates of prevalence of both diseases, found that the Leishmania and Toxoplasma gondii. are circulating agents in São Luís, Maranhão and infected cats are predisposed to co-infection with Toxoplasma gondii.
Resumo
O objetivo do presente estudo foi investigar, por métodos estatísticos, a ocorrência de reações cruzadas entre Leishmania spp. e Ehrlichia spp. com o uso de técnicas sorológicas e moleculares. Um total de 100 amostras sanguíneas de cães foram colhidas e processadas por meio do ELISA (Ensaio Imunoenzimático Indireto) e PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). A análise estatística consistiu nos testes de McNemar e Coeficiente de concordância Kappa. As estatísticas foram consideradas significativas quando p<0,05. A sensibilidade e especificidade dos testes foram determinadas pela curva ROC (Receiver Operator Characteristic), considerando o PCR como teste padrão ouro. A partir das análises pode-se verificar que 48,0% dos animais foram reativos na ELISA e 58,0% foram positivos na PCR, no caso da Leishmania spp. Para Ehrlichia spp., a ocorrência de anticorpos pelo ELISA foi de 54,0% e, pela PCR, 48,0% dos cães foram positivos. Nota-se, também, que 37,0% dos animais foram positivos para os dois patógenos por meio do teste molecular, e quatro cães foram reativos no teste ELISA para ambas as doenças e tiveram resultado negativo apena s no teste molecular de Ehrlichia spp. Estes resultados, na sorologia, podem sugerir possíveis casos de reatividade cruzada entre a Leishmania spp. e Ehrlichia spp.. Entretanto, é mais provável que estes resultados estejam relacionados com a coinfecção desses agentes. Por meio dos resultados obtidos, há mais evidências de coinfecção por estes dois agentes patogênicos no cão, do que reatividade cruzada entre eles.
The aim of this study is to investigate, by statistical methods, the occurrence of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp. using serological and molecular techniques. A total of 100 blood samples from dogs were collected and processed by ELISA (indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) and PCR (polymerase chain reaction). Statistical analysis consists of McNemar tests and agreement coefficient Kappa. The statistics were considered significant when p <0.05. The sensitivity and specificity of the tests were determined by ROC curve (Receiver Operator Characteristic), considering the PCR as gold standard. From the analysis it can be seen that 48,0% of the animals were reactive in ELISA and 58,0% were positive in PCR in the case of Leishmania spp. For Ehrlichia spp., the occurrence of antibodies by ELISA was 54,0% and, by PCR, 48,0% of the dogs were positive. It can be noted also that 37,0% of the animals were positive for both parasites through molecular test and four dogs were reactive in the ELISA test for both diseases and were negative only in molecular test for Ehrlichia spp. These results in serology can suggest possible cases of cross-reactivity between Leishmania spp. and Ehrlichia spp.. However, it is more likely that these results are related to coinfection of these agents. Through the results obtained, there are more evidences of coinfection by these two pathogens in dogs than cross-reactivity between them.
Resumo
A campilobacteriose é uma das principais doenças entéricas de origem alimentar do mundo. É capaz de ocorrer, não só no homem, mas também em primatas não humanos de cativeiro. Sendo, desta forma, importante no monitoramento sanitário destas colô-nias. Causada por bactérias do gênero Campylobacter, seu diagnóstico é realizado pela detecção do micro-organismo nas fezes, pelo método padrão ouro: o cultivo microbioló-gico, incluindo o isolamento, prova de Gram e testes bioquímicos. Todo o processo leva de 5 a 7 dias. Outra forma de diagnóstico são os kits de detecção antigênica por ensaio imunoenzimático que são de fácil realização e o resultado determinado em poucas ho-ras. Entretanto, estes kits utilizam anticorpos produzidos em mamíferos e têm sua efici-ência questionada por conta da acurácia reduzida. Sendo assim, esse estudo teve por principal objetivo, produzir Imunoglobulina Y (IgY) como anticorpo primário extraído de gemas de ovos de galinhas imunizadas com Campylobacter jejuni para sua aplicação em um teste imunoenzimático in house, para pesquisa de coproantigenos de Campylo-bacter sp. em amostras de primatas não humanos do gênero Macaca. Sua realização seguiu a política dos 3Rs, já que desenvolve uma técnica onde são utilizados um nú-mero menor de animais para produção de IgY, quando comparados aos testes tradicio-nais, além de promover produção maior com procedimentos menos invasivos. Para isso galinhas poedeiras foram imunizadas com antígeno bruto de C. jejuni, foram colhidos ovos para isolamento, caracterização de IgY, purificação e utilização como anticorpo primário no ELISA in house frente a amostras de fezes e lavado da ampola retal dos pri-matas avaliados. Após purificação, a IgY demonstrou perfil eletroforético compatível com o descrito para molécula, apresentou reconhecimento frente ao antígeno imunizante por meio de western-blot e ELISA e foi capaz de detectar bactérias do gênero Campylobacter spp. nas amostras fecais do gênero Macaca. O teste de ELISA construído utilizando a IgY como anticorpo primário, demonstrou reconhecimento frente ao antígeno imunizante nas amostras analisadas.
Campylobacteriosis is one of the world's leading enteral food-borne diseases. It can oc-cur not only in man but also in non-human primate of captivity. Thus, it is important in the sanitary monitoring of these colonies. Caused by Campylobacter bacteria, its diag-nosis is performed by the detection of the microorganism in the feces, by the gold stand-ard method: microbiological culture, including isolation, Gram test and biochemical tests. The entire process takes 5 to 7 days. Another form of diagnosis is the antigen detection kits by enzyme immunoassay that are easy to perform, and the result determined in a few hours. However, these kits use antibodies produced in mammals and have their ef-ficiency questioned because of the reduced accuracy. Therefore, the main objective of this study was to produce immunoglobulin Y (IgY) as the primary antibody extracted from egg yolks from chickens immunized with Campylobacter jejuni for its application in an in-house immunoenzymatic test for Campylobacter sp. in samples of non-human pri-mates of the genus Macaca. Its accomplishment followed the policy of the 3Rs, since it develops a technique where a smaller number of animals are used for IgY production, when compared to the traditional tests, besides promoting greater production with less invasive procedures. For this, laying hens were immunized with crude C. jejuni anti-gen, eggs were collected for isolation, IgY characterization, purification and use as pri-mary antibody in the in-house ELISA against faecal samples and lavage of the rectal ampulla of the primates evaluated. After purification, IgY demonstrated an electrophoret-ic profile compatible with that described for the molecule, showed recognition against the immunizing antigen by means of western blot and ELISA and was able to detect bacteria of the genus Campylobacter spp. in the fecal samples of the genus Macaca. The ELISA test constructed using IgY as the primary antibody, demonstrated recognition against the immunizing antigen in the analyzed samples.
Resumo
O Virus da Bronquite Infecciosa, assim como outras doenças infecciosas, e um dos principais limitantes a produção de frango de corte. O coronavírus responsável por causar essa doença influencia na perda de desempenho das aves acometidas prejudicando o perfil financeiro do setor. Considerando o Brasil hoje, o segundo maior exportador mundial de carne de frango e esse coronavírus altamente contagioso por suas perdas em níveis financeiro e industrias, este trabalho objetivou avaliar a presença do vírus em uma região do noroeste paulista sem vacinação compulsória. Para investigar a presença de anticorpos contra o mesmo, foram coletados de 100 aviários 10 soros de cada, os animais eram alojados de forma aleatória em 2 regiões que formam um angulo de 360° com a unidade de abate integradora parceira deste trabalho. Por fim, as amostras foram mensuradas através do teste de ELISA® indireto, que abordou o método estatístico X2. Os resultados indicaram que ha circulação do vírus p<0.1, demonstrando uma necessidade em se adotar um novo protocolo de vacinação para a região.
Infectious Bronchitis Virus is one of the main limiting factors for the production of broiler chickens, and is still responsible for the loss of performance of these birds and even motivating high mortality rates. Considering Brazil today, the second largest exporter of poultry in the world and this highly contagious coronavirus, due to its losses to the financier of the industries, this work aimed to evaluate the presence of the virus in a region of the northwest of Sao Paulo without compulsory vaccination. Thus, to investigate the presence of antibodies against it, 10 sera of each 100 birds were randomly housed in 2 regions that form a 360 degree angle with the integrating slaughter unit partner of this work. Finally, the samples were measured through the indirect ELISA, which approached the chi - square statistical method. The results indicated that there is circulation of the virus p <0.1, demonstrating a need to adopt a new vaccination protocol for the region.