Resumo
The aim of this study was to examine the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens, determining the number of foals with detectable concentrations of antibodies against these agents in the serum, before colostrum ingestion and collect data about exposure of horses to the parasite. Serum samples were collected from 195 thoroughbred mares and their newborns in two farms from southern Brazil. Parasite specific antibody responses to Sarcocystis antigens were detected using the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunoblot analysis. In 84.1% (159/189) of the pregnant mares and in 7.4% (14/189) of foals we detected antibodies anti-Sarcocystis spp. by IFAT. All samples seropositive from foals were also positive in their respective mares. Serum samples of seropositive foals by IFAT, showed no reactivity on the immunoblot, having as antigens S. neurona merozoites. In conclusion, the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens in horses was demonstrated, with occurrence not only in mares, but also in their foals, before colostrum ingestion these occurrences were reduced.
O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição intrauterina ao Sarcocystis spp., para determinar o número de potros que possuem concentrações detectáveis de anticorpos contra esses agentes no soro, antes da ingestão do colostro, por meio da coleta de dados sobre a exposição a esses protozoários nos equinos. Amostras de soro foram coletadas de 195 éguas puro-sangue e seus respectivos potros recém-nascidos, em duas fazendas localizadas na região Sul do Brasil. Os testes utilizados na detecção de anticorpos específicos para o Sarcocystis foram a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e análise por meio de immunoblot. Pela RIFI, em 84,1% (159/189) das éguas e em 7,4% (14/189) dos potros foram detectados anticorpos anti-Sarcocystis spp. Todas as amostras soropositivas dos potros também foram positivas para suas respectivas mães. As amostras de soro dos potros soropositivos na RIFI, não apresentaram reatividade no immunoblot, tendo como antígenos merozoítos de S. neurona. Em conclusão, foi demonstrada a exposição intrauterina de Sarcocystis spp. em equinos, com ocorrência em éguas, porém, em seus respectivos potros, antes da ingestão de colostro a ocorrência foi reduzida.
Assuntos
Animais , Anticorpos Antiprotozoários/análise , Cavalos/parasitologia , Diagnóstico Pré-Natal/veterinária , Sarcocystis/patogenicidade , Encefalomielite/veterinária , Estudos Soroepidemiológicos , Immunoblotting , Immunoblotting/veterinária , Troca Materno-FetalResumo
A Mieloencefalite Protozoária Equina (EPM) è uma doença neurológica frequentemente encontrada em cavalos na América. A principal etiologia è o protozoário Sarcocystis neurona, parasito encontrado principalmente no Sistema Nervoso Central dos equinos. O teste padrão-ouro para diagnóstico da infecção pelo parasito nos Estados Unidos é Western Blotting e não está disponível no Brasil. O objetivo deste estudo foi desenvolver um teste sensível e específico para o diagnóstico da infecção baseado no uso de peptídeos recombinantes para obtenção de antígenos que contem as sequências SnSAG1-SnSAG5 presentes na superfície do agente. Neste trabalho, epítopos antigênicos definidos por metodologias de bioinformática foram desenhados para produção de um gene sintético. Posteriormente, os peptídeos heterólogos foram produzidos por sistema de expressão em leveduras Pichia pastoris e esses antígenos recombinantes recuperados e utilizados como alvo em testes imunoenzimáticos para diagnostico de EPM. Testes iniciais de afinidade de anticorpos anti-S. neurona pelos peptídeos através da técnica de DOT - ELISA demostraram potencial para seu uso como alvo proteico em ferramentas de imunodiagnóstico. No entanto, ficou demonstrada a reatividade cruzada com outros parasitos apicomplexa relacionados devido á homologia de proteínas recombinantes delineadas e as proteínas que contem domínio SRS como no caso de N. caninum e T. gondii. É imprescindível determinar as regiões de similaridade com outros parasitos apicomplexa relacionados para o desenho de uma proteína heteróloga capaz de diferenciar S. neurona de outros parasitos que ocasionam EPM.
Equine Protozoal Mieloencephalitis (EPM) is a neurological disease often found in horses in America. The main etiology is the protozoan Sarcocystis neurona, a parasite found mainly in the Central Nervous System of equines. The gold standard for diagnosis of parasite infection in the United States is Western blotting and it is not available in Brazil. The objective of this study was to develop a sensitive and specific test for the diagnosis of infection based on the use of recombinant peptides to obtain antigens containing the SnSAG1-SnSAG5 sequences present on the agent surface. In this work, antigenic epitopes defined by bioinformatics methodologies were designed to produce a synthetic gene. Subsequently, heterologous peptides were produced by the Pichia pastoris yeast expression system and these recombinant antigens were recovered and used as targets in enzyme-linked immunosorbent assays for the diagnosis of EPM. Initial anti- S. neurona antibody affinity tests. by peptides using the DOT - ELISA technique demonstrated potential for its use as a protein target in immunodiagnostic tools. However, cross-reactivity with other apicomplex related parasites has been demonstrated because the homology of delineated recombinant proteins and proteins containing SRS domain as like N. caninum and T. gondii case. It is essential to determinate the regions of similarity with other apicomplex related parasites for design of a heterologous protein capable of differentiating S. neurona from other parasites that cause EPM.