Diferentes concentrações antibióticas adicionadas ao diluente de sêmen suíno / Different antibiotic concentrations added to the swine semen extender

Devido a contaminação bacteriana, utiliza-se antibióticos nos diluentes de sêmen para inibir o crescimento bacteriano durante a sua estocagem. Assim, este trabalho teve por objetivo determinar o limite de toxicidade de diferentes concentrações antibióticas da penicilina/estreptomicina adicionadas ao meio diluente do sêmen e investigar a influência sobre a motilidade espermática. Para isso, o sêmen de cinco reprodutores híbridos comerciais foi coletado uma vez por semana, durante nove semanas, através da técnica da mão enluvada. Cada ejaculado foi distribuído de forma igual entre todos os tratamentos, que consistiram em diferentes concentrações de solução de antibióticos, sendo: T1 = 0,0g/L (controle); T2 = 4,2g/L; e T3 = 12,6g/L. O sêmen diluído em água de coco em pó (ACP-103@) foi conservado por cinco dias e analisado nos dias: D0 (dia da coleta), D2 e D4 (último dia de conservação) quanto ao vigor e à motilidade espermática. Em D0, o sêmen conservado em diluente acrescido de 12,6g de solução antibiótica apresentou menor valor de vigor espermático em relação aos demais tratamentos (p<0,05). Já em D2 e D4, os tratamentos contendo antibióticos apresentaram resultados de vigor aquém dos obtidos no grupo controle (p<0,05). Em relação à motilidade espermática, os maiores percentuais de células móveis foram observados nas amostras de sêmen conservadas em ACP 0,0g/L (controle) quando comparados aos demais tratamentos (p<0,05). Conclui-se que as concentrações antibióticas utilizadas no estudo (4,2 e 12,6 g/L) mostraram efeitos tóxicos logo após a diluição do sêmen suíno, afetando de forma negativa parâmetros seminais durante a conservação a 17 °C.

Due to bacterial contamination, antibiotics are used in semen extenders to inhibit bacterial growth during storage. Thus, the present study aimed to determine the toxicity limit of different antibiotic concentrations of penicillin/streptomycin added to the semen extender and investigate the influence on sperm motility. For this purpose, semen from five commercial hybrid breeders was collected once a week for 9 weeks, using the gloved hand technique. Each ejaculate was distributed equally among all treatments, which consisted of different concentrations of antibiotic solution: T1 = 0.0g/L (control); T2 = 4.2g/L; T3 = 12.6g/L. The semen diluted in powdered coconut water (ACP-103@) was kept for 5 days and analyzed on the following days: D0 (collection day), D2, and D4 (last conservation day) for sperm vigor and motility. In D0, the semen preserved in the diluent added with 12.6 g of antibiotic solution showed a lower sperm vigor value compared to the other treatments (p<0.05). In D2 and D4, treatments containing antibiotics presented vigor results below those obtained in the control group (p<0.05). Regarding sperm motility, higher percentages of mobile cells were observed in semen samples conserved in ACP 0.0 g/L (control) when compared to the other treatments (p<0.05). It is concluded that the antibiotic concentrations used in the study (4.2 and 12.6 g/L) showed toxic effects soon after the swine semen, negatively affecting seminal parameters during storage at 17 °C.

Trauma decorrente de queda provocada pelo cabo extensor de um bezerreiro tropical / Trauma resulting from a fall caused by the extension cable of a tropical calf

A criação de bezerras é uma das fases mais importantes na bovinocultura leiteira e um manejo profilático em ambientes físicos de alojamento é crucial para evitar acidentes que possam comprometer a vida produtiva dos animais futuramente. O bezerreiro tropical é um dos alojamentos mais comuns utilizados no Nordeste brasileiro em grandes criações, possivelmente devido ao baixo custo. Diante disso, objetivou-se nesse trabalho relatar um acidente provocado por tropeço em fio extensor de superfície do bezerreiro tropical, no qual ocasionou um traumatismo tibial em uma bezerra Girolando de dois meses de idade. O atendimento ocorreu no Hospital Veterinário de Grandes Animais do Centro Universitário Inta (Uninta) em Sobral/CE e o animal foi proveniente de uma fazenda de alta produção leiteira da cidade de Umirim/CE. O exame clínico revelou que a região afetada foi próxima ao jarrete. O exame radiográfico constatou fratura na região epifisária da tíbia proximal. Após avaliação pela equipe clínica e cirúrgica, o paciente foi encaminhado para cirurgia de correção, mas antes foi estabelecida imobilização e bandagens para manter o membro afetado imóvel até a realização do procedimento cirúrgico. O tratamento clínico medicamentoso pós-cirúrgico foi conduzido, além de foram instituídos cuidados diários de limpeza do ferimento cirúrgico com antisséptico local. Após a realização da cirurgia de correção da fratura, estando o paciente estabilizado, este mesmo animal recebeu alta médica 17 dias depois da internação. Desta forma, o bezerreiro tropical está passando por mudanças estruturais e de manejo para evitar mais traumas provocados pelo tropeço, enroscamento e quedas das bezerras.

Calf rearing is one of the most important stages in dairy cattle and, prophylactic management in physical accommodation environments is crucial to avoid accidents that could compromise the productive life of these animals in the future. The tropical calf is one of the most common housings used in the Brazilian Northeast in large creations, possibly due to the low cost. This study aimed to report an accident caused by tripping over surface extender wire of the tropical calf, which caused a tibial trauma in a 2-months-old Girolando heifer. The attendance took place at the Veterinary Hospital for Large Animals of the Inta University Center (Uninta) in Sobral/Ce and the animal came from a high-production dairy farm in the city of Umirim/Ce. The clinical examination revealed that the affected region was close to the knuckle. The radiographic examination showed a fracture in the epiphyseal region of the proximal tibia. After evaluation by the clinical and surgical team, the patient was referred for corrective surgery, but before that, immobilization and bandages were established to keep the affected limb immobile until the surgical procedure was performed. The post-surgical medical treatment was conducted, in addition to the daily care of cleaning the surgical wound with local antiseptic. After the surgery, to correct the fracture with the patient stabilized, the hospital discharge occurred 17 days after hospitalization. Thus, the tropical calf, is undergoing structural and management changes to avoid further trauma caused by stumbling, tangling, and falling.

Addition of orange, pineapple and beet juices as extenders for cryopreservation of ram semen / Adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diluidor para criopreservação de sêmen de carneiros

Searching for improvements in semen cryopreservation, natural substances are commonly studied focusing to improve the sperm quality. The aim of this study were evaluated the effect of adding orange, pineapple, and beet juices in different concentrations and combinations to the ram semen cryopreservation extender. Five ejaculates from five adult rams were used. The semen pool was diluted in egg yolk-based extender and mixed with the following 15 treatments (at a final concentration of 400.106 sptz/mL): orange 10% (O10) and 15% (O15); pineapple 10% (P10) and 15% (P15); beet 10% (B10) and 15% (B15); pineapple + orange 10% (PO10) and 15% (PO15); pineapple + beet 10% (PB10) and 15% (PB15); beet + orange 10% (BO10) and 15% (BO15); pineapple + beet + orange 10% (PBO10) and 15% (PBO15); and the control group (CON). Post-thaw in 0.25 mL straws semen quality analysis of cryopreserved semen was performed by CASA and flow cytometry. Analysis of variance (PROC GLM) was carried out and the averages were compared using the SNK test. Pearson's correlation test was also performed. No effect was noted in the addition of juices to the semen extender prior to cryopreservation. Post-thawed, although, statistically similar to the control group, the total motility of the B10 group reached acceptable standards of total motility. In addition, B10 group showed the highest values (p< 0.05) of progressive motility than control group or other treatments. The addition of 10% beet juice to the ram semen extender can improve the cryopreservation of sperm motility.

Em busca de melhorias na criopreservação do sêmen, substâncias naturais são comumente estudadas com o objetivo de melhorar a qualidade do sêmen. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da adição de sucos de laranja, abacaxi e beterraba em diferentes concentrações e combinações ao diluidor de criopreservação de sêmen ovino. Foram utilizados cinco ejaculados de cinco carneiros adultos. O pool de sêmen foi diluído em diluente à base de gema de ovo e misturado com os seguintes 15 tratamentos (na concentração final de 400x106 sptz/ml): laranja 10% (O10) e 15% (O15); abacaxi 10% (P10) e 15% (P15); beterraba 10% (B10) e 15% (B15); abacaxi + laranja 10% (PO10) e 15% (PO15); abacaxi + beterraba 10% (PB10) e 15% (PB15); beterraba + laranja 10% (BO10) e 15% (BO15); abacaxi + beterraba + laranja 10% (PBO10) e 15% (PBO15); e o grupo controle (CON). Pós-descongelação em palhetas de 0,25 ml a análise da qualidade do sêmen criopreservado foi realizada pelo CASA e citometria de fluxo. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. O teste de correlação de Pearson também foi realizado. Nenhum efeito foi observado na adição de sucos ao diluidor de sêmen antes da criopreservação. Após o descongelamento, embora estatisticamente semelhante ao grupo controle, a motilidade total do grupo B10 atingiu padrões aceitáveis de motilidade total. Além disso, o grupo B10 apresentou os maiores valores (p<0,05) de motilidade progressiva que o grupo controle ou os outros tratamentos. A adição de 10% de suco de beterraba ao diluente de sêmen ovino pode melhorar a criopreservação da motilidade espermática.

Sperm cryopreservation of Prochilodus brevis using different concentrations of non-permeable cryoprotectants

Abstract The action of substances with non-permeable cryoprotectant potential, besides glucose, has not yet been studied for the species Prochilodus brevis. The objective of this work was to evaluate the action of four non-permeable cryoprotectants on this species sperm cryopreservation. Five pools were cryopreserved in a solution of 5% glucose and 10% dimethyl sulfoxide (Me2SO) associated or not (control) with cryoprotectants egg yolk (5, 10 or 12%), soy lecithin (2.5, 7.5 or 10%), sucrose (5, 10 or 20%) and lactose (5, 8 or 15%). After thawing, samples were evaluated for sperm kinetics (total motility, motility duration, velocities, and wobble - WOB), morphology and membrane and DNA integrity. The treatments containing egg yolk improved significantly (P<0.05) results when compared the control for the membrane integrity parameter. When compared to other treatments, egg yolk, at any concentration, presented higher results (P<0.05) for membrane integrity, total motility, curvilinear velocity (VCL) and average path velocity (VAP) parameters. Egg yolk also showed the best results for WOB, but it did not differ from 5% and 8% lactose and 5% and 20% sucrose. Soy lecithin had the lowest percentages of morphologically normal sperm (P<0.05), while the other treatments did not differ from each other. There was no difference regarding DNA integrity data. Thus, 5% egg yolk is indicated as a non-permeable cryoprotectant for P. brevis, in association with 5% glucose and 10% Me2SO.

Sperm cryopreservation of Prochilodus brevis using different concentrations of non-permeable cryoprotectants

The action of substances with non-permeable cryoprotectant potential, besides glucose, has not yet been studied for the species Prochilodus brevis. The objective of this work was to evaluate the action of four non-permeable cryoprotectants on this species sperm cryopreservation. Five pools were cryopreserved in a solution of 5% glucose and 10% dimethyl sulfoxide (Me2SO) associated or not (control) with cryoprotectants egg yolk (5, 10 or 12%), soy lecithin (2.5, 7.5 or 10%), sucrose (5, 10 or 20%) and lactose (5, 8 or 15%). After thawing, samples were evaluated for sperm kinetics (total motility, motility duration, velocities, and wobble - WOB), morphology and membrane and DNA integrity. The treatments containing egg yolk improved significantly (P<0.05) results when compared the control for the membrane integrity parameter. When compared to other treatments, egg yolk, at any concentration, presented higher results (P<0.05) for membrane integrity, total motility, curvilinear velocity (VCL) and average path velocity (VAP) parameters. Egg yolk also showed the best results for WOB, but it did not differ from 5% and 8% lactose and 5% and 20% sucrose. Soy lecithin had the lowest percentages of morphologically normal sperm (P<0.05), while the other treatments did not differ from each other. There was no difference regarding DNA integrity data. Thus, 5% egg yolk is indicated as a non-permeable cryoprotectant for P. brevis, in association with 5% glucose and 10% Me2SO.(AU)

Reproductive performance of single fixed-time inseminated sows with semen doses submitted to different semen storage times

This study aimed to evaluate the reproductive performance of sows submitted to single fixed-time insemination (SFTAI) using boars according to capacity for liquid in vitro semen preservation, type of extender, and storage time. Boars (n = 12) were classified into two groups based on progressive motility (PM) at 120 h of semen storage: low (PM - 64.5%) - and high-preservation (PM - 83.9%) capacity for semen storage. Weaned sows (n = 397, parity - 1 to 7) were inseminated (1.5×109 sperm cells) in a factorial design: two classes of boars (low- or high-preservation), two types of extenders (short- or long-term), and two semen storage times at insemination (24 or 72 h). An adapted triptorelin acetate protocol was used for SFTAI. Total sperm motility (TM) and PM at insemination were greater in high-preservation boars at 72 h compared with low-preservation boars at 24 or 72 h (P < 0.01). Short- or long-term extender did not affect (P ≥ 0.68) TM and PM in high-preservation boars; however, long-term extender improved these parameters in low-preservation boars (P < 0.01). Pregnancy and farrowing rates were not affected by groups (P > 0.05). Total piglets born (TPB) was reduced (P = 0.05) in low-preservation boars with 72 h of storage (13.6 ± 0.5) compared to high-preservation boars with semen stored for 24 or 72 h (15.2 ± 0.5 and 15.5 ± 0.5, respectively). The low-preservation boars reduced the TPB in sows submitted to SFTAI, and this reduction was greater using semen stored for 72 h.(AU)

Parâmetros espermáticos do sêmen suíno conservado a 10 e 17o C, em diluentes comerciais e alternativos / Spermatic parameters of swine semen conserved at 10 and 17o C, in commercial and alternative extenders

O uso de diluentes adequados é importante para o sucesso da inseminação artificial. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficiência de diluentes em diferentes temperaturas. Foram utilizados os seguintes diluentes: Beltsville Thwaing Solution (BTS); TRIS (Tris-hidroximetil-aminometano - H2NC(CH2OH)3); TRIS + gema de ovo (TGO) e Leite em pó desnatado (LPD). Cinquenta ejaculados foram analisados quanto ao vigor, à motilidade, à funcionalidade de membrana e à atividade mitocondrial. Os diluentes TGO e LPD mantiveram os maiores valores para vigor e motilidade a 10 °C, em comparação aos demais tratamentos (p<0,05). A 17 °C, esses diluentes apresentaram resultados melhores de vigor e motilidade em relação aos demais, somente até D1 (p<0,05). A partir de D2, o BTS mostrou-se como o melhor diluente para a preservação dessas características. Maior percentual de espermatozoides com membrana funcional foi observado no TGO a 10 °C, seguido do LPD, BTS e TRIS (p<0,05). A 17 °C, o BTS manteve essa característica, exceto em D0, em que o TGO e o LPD apresentaram melhores resultados. Quanto a atividade mitocondrial, maiores valores foram observados a 10 °C no TGO em todos os dias de análise e em D0 à temperatura de 17 °C. O diluente TRIS + gema de ovo mostrou-se como uma alternativa para conservação do sêmen suíno a 10 °C, assim como o LPD. Além disso, esses mesmos diluentes constituem alternativas para conservação a curto prazo a 17 °C.

The use of suitable extenders is important to artificial insemination success. Therefore, the objective of this study was to evaluate the efficiency of extenders at different temperatures. The following extenders were used: Beltsville Thawing Solution (BTS); TRIS (Tris-hidroximetil-aminometano - H2NC(CH2OH)3); TRIS + egg yolk (TGO), and skim powdered milk (SPM). Fifty ejaculates were analyzed regarding sperm vigor, motility, membrane functionality, and mitochondrial activity. The TGO and SPM extenders maintained the highest values for vigor and motility at 10 °C, in comparison to the other treatments (p<0.05). At 17 °C, these extenders showed better results of vigor and motility compared to the others, only until D1 (p<0.05). From D2, BTS proved to be the best extender to preserve these characteristics. A higher percentage of sperm with a functional membrane was observed for TGO at 10 °C, followed by SPM, BTS, and TRIS (p<0.05). At 17 °C, BTS maintained this characteristic, except for DO, which showed better results for TGO and SPM. Regarding the mitochondrial activity, higher values were observed at 10 °C for TGO on all days of analysis and D0 at a temperature of 17 °C. The extender TRIS + egg yolk was shown as an alternative for the conservation of swine semen at 10 °C, as well as the SPM. In addition, these same extenders are alternatives for short-term conservation at 17 °C.

Effects of insulin on sperm cell quality in ram semen cooled at 5°C / Efeitos da insulina sobre a qualidade das células espermáticas no sêmen ovino refrigerado a 5oC

Insulin is present in the seminal plasma and is involved in sperm activities like motility and capacitation. However, the effects of insulin on the viability of cooled ram sperm are not fully understood. Therefore, the objective of the current study was to evaluate the effect of insulin addition on ram sperm maintained at 5ºC. Sperm samples were collected from six healthy, mature Santa Inês rams. The ejaculates were divided into two aliquots with (insulin group) or without (control group) insulin (3 IU mL-1) in the semen extender, and then cooled at 5°C for 48 hours. Subsequently, the sperm cells were evaluated for motility and kinetics using computer-assisted semen analysis. The samples were evaluated for acrosomal integrity by fluorescein using isothiocyanate combined with peanut agglutinin (FITC-PNA) and membrane functionality by the hypoosmotic swelling test. The semen analysis was performed after 24 or 48 hours of cooling. There was an increased percentage of progressive sperm motility (%), straightness (%), linearity (%) and beat caudal frequency (Hz) in the insulin group after 24 and 48 hours of cooling (p < 0.05). However, insulin did not affect total sperm motility, sperm velocities (VSL, VAP and VCL) (µm seg-1), acrosomal integrity and membrane functionality during cooling (p > 0.05). In conclusion, the addition of 3 IU mL-1 insulin to ram semen extender improved the quality of sperm motility after cooling.(AU)

A insulina está presente no plasma seminal e participa de atividades espermáticas, como a motilidade e capacitação. Entretanto, os efeitos da insulina sobre a viabilidade do espermatozoide ovino resfriado ainda não estão elucidadas. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos da adição de insulina sobre o espermatozoide ovino durante o tempo de armazenamento à 5º C. Amostras espermáticas de seis carneiros da raça Santa Inês foram utilizadas. Os ejaculados foram divididos em duas aliquotas, com (grupo insulina) ou sem (grupo controle) adição de insulina (3 UI mL-1) no diluidor seminal e, posteriormente, resfriados até 5oC e mantidos armazenados por 48 horas. Em seguida, os espermatozoides foram avaliados quanto a motilidade e cinética utilizando um Sistema Computadorizado de Análise de Sêmen (CASA). Adicionalmente, as amostras espermáticas foram analizadas quanto a integridade acrosomal por meio de sondas fluorescentes (FITC-PNA) e, funcionalidade de membrana pelo teste hiposmótico. As análises seminais foram realizadas após 24 ou 48 horas de resfriamento. Foram verificados aumentos de espermatozoides com motilidade progressiva (%), retilinearidade (%), linearidade (%) e frequência de batimento caudal (BCF) (Hz) no grupo insulina após 24 ou 48 horas de resfriamento (p < 0.05). Entretanto, não houve efeito da adição de insulina sobre a porcentagem de espermatozoides moveis (%) e das velocidades espermáticas (VSL, VAP e VCL) (µm seg-1), integridade acrossomal e funcionalidade de membrana durante o resfriamento (p > 0.05). Conclui-se que adição de insulina (3 UI mL-1) no diluidor seminal melhora a qualidade da motilidade espermática durante o resfriamento.(AU)

Estresse oxidativo na preservação do sêmen suíno: como lidar com ele? / Oxidative stress in pig semen preservation: How to deal with it?

O estresse oxidativo é caracterizado pelo desequilíbrio entre a produção de espécies reativas de oxigênio e a atuação de sistemas antioxidantes da própria célula e tecido. O espermatozoide de mamíferos apresenta metabolismo oxidativo e por isso é um potencial produtor destas espécies reativas que podem causar danos a estrutura lipídicas, proteínas e mesmo ao DNA espermático. Na espécie suína, o plasma seminal confere importante proteção antioxidante ao espermatozoide ejaculado no útero da fêmea, onde os desafios à sua sobrevivência são inúmeros. Contudo, esta defesa natural do plasma seminal não é suficiente para garantir o máximo de resultado de fertilidade com o sêmen submetido a processos de refrigeração ou congelação e utilizado na inseminação artificial. Na presente revisão, serão abordados os temas estresse oxidativo e metabolismo espermático, bem como apresentados alguns dados sobre a aplicação de antioxidantes na andrologia suína.

Oxidative stress is characterized by an imbalance between the production of reactive oxygen species and the action of antioxidant systems present in the cell and tissue. Mammalian sperm have oxidative metabolism and are therefore a potential producers of these reactive species which can lead to damage to lipids, proteins and even sperm DNA. In the swine species, seminal plasma provides an important antioxidant protection to spermatozoa that are ejaculated and deposited in the uterus, where the challenges to their survival are numerous. However, this natural seminal plasma defense is not sufficient to guarantee maximum fertility when semen is processed for artificial insemination, and later used after preservation by refrigeration or freezing. In this review, the topics related to oxidative stress and sperm metabolism will be addressed, and results about the application of antioxidants in swine andrology will be presented as well as.

Effect of egg yolk-based extender and seminal plasma removal on sperm viability of cooled donkey semen / Efeito do diluente à base de gema de ovo e remoção do plasma seminal na viabilidade espermática do sêmen refrigerado de jumento

Developing effective cooled semen protocols is essential to increase pregnancy rates and reproductive efficiency in donkeys. This study aimed to evaluate the effect on sperm kinetic parameters and membrane integrity in cooled donkey semen diluted with defined milk proteins extender with 1% or 2% of egg yolk and the removal of seminal plasma. Twenty-four ejaculates from six jackasses were collected. Each ejaculate was divided into four aliquots that were diluted in extender with 1% (EY1) or 2% (EY2) egg yolk. One sample from each group was centrifuged, seminal plasma was removed (CEY1, CEY2 groups, respectively), and the samples were then refrigerated at 5 °C for 24 h. Fresh and cooled semen samples were assessed for sperm motility, morphology, and plasma membrane integrity. Total motility, progressive motility, sperm kinetic parameters, or live sperm cells were not statistically different when semen was cooled with an extender supplemented with 1% or 2% of egg yolk. Seminal plasma removal does not affect total motility or sperm kinetic parameters. However, progressive motility decreased (P<0.05) when semen was extended with 2% of egg yolk and seminal plasma was removed. Membrane integrity was affected (P<0.05) in centrifuged samples. In conclusion, the obtained results suggest that there is no difference in sperm kinetics and membrane integrity when 1% or 2% of egg yolk was added to the Equiplus extender. Also, the removal of seminal plasma by centrifugation did not have any beneficial effect on cooled donkey semen. Further studies are needed to relate these results with in vivo fertility tests with cooled donkey semen.(AU)

O desenvolvimento de protocolos de sêmen resfriado eficazes é essencial para aumentar as taxas de prenhez e eficiência reprodutiva em jumentos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do diluente à base de proteínas do leite com 1 ou 2% de gema de ovo sobre os parâmetros cinéticos do sêmen e integridade da membrana em sêmen resfriado de jumento, com ou sem a remoção do plasma seminal. Vinte e quatro ejaculados de seis jumentos foram coletados. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas e diluído em diluente com 1% (EY1) ou 2% (EY2) de gema de ovo. Uma amostra por grupo foi centrifugada e o plasma seminal removido (grupos CEY1 e CEY2, respectivamente). Os pellets foram novamente ressuspendidos nas mesmas concentrações e diluentes. Em seguida, as quatro alíquotas foram refrigeradas a 5°C por 24 horas. Amostras de sêmen fresco e refrigerado foram avaliadas quanto à motilidade espermática e integridade da membrana plasmática. Motilidade total, motilidade progressiva, parâmetros de cinética espermática ou células espermáticas vivas não apresentaram diferença significativa quando o sêmen foi resfriado com diluente suplementado com 1% ou 2% de gema de ovo. A remoção do plasma seminal não afetou a motilidade total ou os parâmetros de cinética espermática; entretanto, a motilidade progressiva diminuiu (P<0,05) quando o sêmen foi diluído com 2% de gema de ovo e o plasma seminal removido. Nas amostras centrifugadas, a integridade da membrana foi afetada (P<0,05). Em conclusão, os resultados sugerem que não há diferença na cinética espermática e na integridade da membrana quando 1% ou 2% de gema de ovo são adicionados ao diluente Equiplus e a remoção do plasma seminal por centrifugação não teve nenhum efeito benéfico no resfriamento de sêmen de jumento. Mais estudos são necessários para relacionar esses resultados com testes de fertilidade in vivo com sêmen resfriado em jumentos.(AU)

Effect of egg yolk-based extender and seminal plasma removal on sperm viability of cooled donkey semen / Efeito do diluente à base de gema de ovo e remoção do plasma seminal na viabilidade espermática do sêmen refrigerado de jumento

Developing effective cooled semen protocols is essential to increase pregnancy rates and reproductive efficiency in donkeys. This study aimed to evaluate the effect on sperm kinetic parameters and membrane integrity in cooled donkey semen diluted with defined milk proteins extender with 1% or 2% of egg yolk and the removal of seminal plasma. Twenty-four ejaculates from six jackasses were collected. Each ejaculate was divided into four aliquots that were diluted in extender with 1% (EY1) or 2% (EY2) egg yolk. One sample from each group was centrifuged, seminal plasma was removed (CEY1, CEY2 groups, respectively), and the samples were then refrigerated at 5 °C for 24 h. Fresh and cooled semen samples were assessed for sperm motility, morphology, and plasma membrane integrity. Total motility, progressive motility, sperm kinetic parameters, or live sperm cells were not statistically different when semen was cooled with an extender supplemented with 1% or 2% of egg yolk. Seminal plasma removal does not affect total motility or sperm kinetic parameters. However, progressive motility decreased (P<0.05) when semen was extended with 2% of egg yolk and seminal plasma was removed. Membrane integrity was affected (P<0.05) in centrifuged samples. In conclusion, the obtained results suggest that there is no difference in sperm kinetics and membrane integrity when 1% or 2% of egg yolk was added to the Equiplus extender. Also, the removal of seminal plasma by centrifugation did not have any beneficial effect on cooled donkey semen. Further studies are needed to relate these results with in vivo fertility tests with cooled donkey semen.(AU)

O desenvolvimento de protocolos de sêmen resfriado eficazes é essencial para aumentar as taxas de prenhez e eficiência reprodutiva em jumentos. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do diluente à base de proteínas do leite com 1 ou 2% de gema de ovo sobre os parâmetros cinéticos do sêmen e integridade da membrana em sêmen resfriado de jumento, com ou sem a remoção do plasma seminal. Vinte e quatro ejaculados de seis jumentos foram coletados. Cada ejaculado foi dividido em quatro alíquotas e diluído em diluente com 1% (EY1) ou 2% (EY2) de gema de ovo. Uma amostra por grupo foi centrifugada e o plasma seminal removido (grupos CEY1 e CEY2, respectivamente). Os pellets foram novamente ressuspendidos nas mesmas concentrações e diluentes. Em seguida, as quatro alíquotas foram refrigeradas a 5°C por 24 horas. Amostras de sêmen fresco e refrigerado foram avaliadas quanto à motilidade espermática e integridade da membrana plasmática. Motilidade total, motilidade progressiva, parâmetros de cinética espermática ou células espermáticas vivas não apresentaram diferença significativa quando o sêmen foi resfriado com diluente suplementado com 1% ou 2% de gema de ovo. A remoção do plasma seminal não afetou a motilidade total ou os parâmetros de cinética espermática; entretanto, a motilidade progressiva diminuiu (P<0,05) quando o sêmen foi diluído com 2% de gema de ovo e o plasma seminal removido. Nas amostras centrifugadas, a integridade da membrana foi afetada (P<0,05). Em conclusão, os resultados sugerem que não há diferença na cinética espermática e na integridade da membrana quando 1% ou 2% de gema de ovo são adicionados ao diluente Equiplus e a remoção do plasma seminal por centrifugação não teve nenhum efeito benéfico no resfriamento de sêmen de jumento. Mais estudos são necessários para relacionar esses resultados com testes de fertilidade in vivo com sêmen resfriado em jumentos.(AU)

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.(AU)

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.(AU)

Características seminais pós-descongelamento em garanhões da raça crioula / Post-thaw seminal characteristics of Criollo breed stallions

Este trabalho teve como objetivo avaliar as características seminais de garanhões da raça Crioula após o processo de criopreservação utilizando o BotuCrio® . Foram utilizados 24 garanhões alojados nas proximidades de Porto Alegre, RS, Brasil. As análises do sêmen foram realizadas pré e pósdescongelamento através do sistema Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision®. Somente foram utilizadas amostras com motilidade total ≥ 60 % e vigor ≥ 3, estas foram envasadas em palhetas de 0,5 ml, dispostas horizontalmente a 5ºC durante 20 minutos. Após colocadas a 6 cm acima do nível de nitrogênio líquido durante 20 minutos. Sendo finalmente imersas em nitrogênio líquido, após descongeladas em banho-maria a 37ºC durante 30 segundos. Os valores médios e desvios padrões das variáveis pós-descongelamento foram: motilidade total (52,85 % ± 7,27); motilidade progressiva (31,15 % ± 10,21); motilidade rápida (4,78 % ± 5,37); motilidade local (22,44 % ± 8,68); velocidade curvilinear (97,67 μm/s ± 35,25); velocidade em linha reta (35,33 μm/s ± 15,29); velocidade da trajetória média (44,99 μm/s ± 17,98); linearidade (0,3 % ± 0,15); BCF (2,5 Hz ± 1,7); ALH (0,35 μm ± 0,3); integridade funcional da membrana (42,73 % ± 7,06) e integridade estrutural da membrana (48,06 % ± 8,99). Concluímos que o protocolo utilizando diluente BotuCrio® é viável para criopreservação do sêmen de cavalos da raça Crioula, pois garante motilidade acima de 30 % pós-descongelamento que é recomendado pelo Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.

The aim of this study was to evaluate seminal characteristics of Criollo breed stallions, after cryopreservation process using the BotuCrio®. One ejaculate from twenty-four stallions located near to Porto Alegre, RS, Brazil were used. Semen analysis were performed pre and post-freezing through the Computer Assisted Sperm Analysis AndroVision® system. Only samples with total motility ≥ 60 % and vigor ≥ 3 were used. The samples were placed in 0.5 ml straws, arranged horizontally at 5ºC for 20 minutes. Then, 6 cm above the level of liquid nitrogen in vapor for 20 minutes. Finally, being immersed in liquid nitrogen, the samples thawed in a water bath at 37ºC for 30 seconds. Mean values and standard deviations of post-freeze variables were: total motility (52.85 % ± 7.27); progressive motility (31.15 % ± 10.21); rapid motility (4.78 % ± 5.37); local motility (22.44 % ± 8.68); Curvilinear Velocity (97.67 μm/s ± 35.25); Straight Line Velocity (35.33 μm/s ± 15.29); Average Path Velocity (44.99 μm/s ± 17.98); Linearity (0.3 % ± 0.15); BCF (2.5 Hz ± 1.7); ALH (0.35 μm ± 0.3) functional integrity (42.73 % ± 7.06) and physical integrity (48.06 % ± 8.99). We conclude that the protocol used for semen cryopreservation is feasible for use in the Criollo breed, because it has motility above 30 % post-freezing semen parameters, wich is the recommended by the Brazilian College of Animal Reproduction.

Utilização de leite com diferentes concentrações de gordura como diluentes para sêmen equino refrigerado / Use of milk with different fat concentrations as extenders for equine cooled semen

Dois experimentos foram realizados para verificar a viabilidade de diluentes para sêmen equino refrigerado. O objetivo do primeiro experimento foi verificar a eficiência do leite UHT integral e semidesnatado, comparado ao leite desnatado. Amostras foram analisadas a fresco e posteriormente diluídas em leite UHT integral, semidesnatado e desnatado. Foram realizados exames de motilidade espermática e vigor, CFDA/PI e HOST pós-diluição (0h), e no sêmen refrigerado a 5 ºC após 24 e 48 horas. Não houve diferença entre os três diluentes, quanto à motilidade espermática (p=0,9880), vigor (p=0,7249), CFDA/PI (p=0,3382) e HOST (p > 0,01). Houve uma diminuição na qualidade do sêmen, no decorrer do tempo (p < 0,01), independente do diluente utilizado. Pode-se afirmar que, na falta de leite UHT desnatado, o semidesnatado e o integral podem ser usados, uma vez que eles não provocam prejuízo na qualidade do sêmen refrigerado armazenado por até 48 horas. No segundo experimento, o objetivo foi verificar a eficácia do leite desnatado em comparação com diluentes comerciais (Botusemen® (BS) e Botusemen Special® (BSS)). Logo após a coleta do sêmen, as amostras foram diluídas com leite UHT desnatado (LD), Botusemen® (BS) e Botusemen Special®(BSS). A análise de sêmen seguiu o mesmo protocolo do primeiro experimento. As amostras de sêmen refrigeradas com BSS apresentaram HOST e CFDA/PI (p< 0,001) maiores nas 24h e 48 h o que indica que o diluente BSS promove aumento da longevidade dos espermatozoides em comparação com os outros analisados.

Two trials were performed to verify the viability of extenders equine cooled semen. The objective of the first trial was to verify the efficacy of whole and semi-skimmed UHT milk compared to skim milk. Fresh semen samples were analyzed and later diluted in UHT whole milk, semi skimmed and skimmed milk. Sperm motility and vigor, CFDA / PI and HOST tests were performed post-dilution (0h), and in semen cooled at 5oC after 24 and 48h. There was no difference between the 3 extenders, for sperm motility (p = 0.9880), vigor (p = 0.7249), CFDA / PI (p = 0.3882) and HOST (p> 0.01). There was a decrease in semen quality over time (p <0.01), regardless of the extender used. It can be stated that in the absence of skimmed UHT milk, semi-skimmed and whole milk can be used since they do not impair the quality of refrigerated semen stored for up to 48 hours. In the second trial the objective was to verify the efficacy of the skim milk compared to commercial extenders (Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS)). Soon after semen collection, the samples were diluted with UHT skim milk (LD), Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS). Semen analysis followed the same protocol as the first experiment. BSS-cooled semen showed higher HOST and CFDA / PI (p <0.001) in 24h and 48h indicating that BSS diluent promotes increased sperm longevity compared to the others analyzed.

Utilização de leite com diferentes concentrações de gordura como diluentes para sêmen equino refrigerado / Use of milk with different fat concentrations as extenders for equine cooled semen

Dois experimentos foram realizados para verificar a viabilidade de diluentes para sêmen equino refrigerado. O objetivo do primeiro experimento foi verificar a eficiência do leite UHT integral e semidesnatado, comparado ao leite desnatado. Amostras foram analisadas a fresco e posteriormente diluídas em leite UHT integral, semidesnatado e desnatado. Foram realizados exames de motilidade espermática e vigor, CFDA/PI e HOST pós-diluição (0h), e no sêmen refrigerado a 5 ºC após 24 e 48 horas. Não houve diferença entre os três diluentes, quanto à motilidade espermática (p=0,9880), vigor (p=0,7249), CFDA/PI (p=0,3382) e HOST (p > 0,01). Houve uma diminuição na qualidade do sêmen, no decorrer do tempo (p < 0,01), independente do diluente utilizado. Pode-se afirmar que, na falta de leite UHT desnatado, o semidesnatado e o integral podem ser usados, uma vez que eles não provocam prejuízo na qualidade do sêmen refrigerado armazenado por até 48 horas. No segundo experimento, o objetivo foi verificar a eficácia do leite desnatado em comparação com diluentes comerciais (Botusemen® (BS) e Botusemen Special® (BSS)). Logo após a coleta do sêmen, as amostras foram diluídas com leite UHT desnatado (LD), Botusemen® (BS) e Botusemen Special®(BSS). A análise de sêmen seguiu o mesmo protocolo do primeiro experimento. As amostras de sêmen refrigeradas com BSS apresentaram HOST e CFDA/PI (p< 0,001) maiores nas 24h e 48 h o que indica que o diluente BSS promove aumento da longevidade dos espermatozoides em comparação com os outros analisados.(AU)

Two trials were performed to verify the viability of extenders equine cooled semen. The objective of the first trial was to verify the efficacy of whole and semi-skimmed UHT milk compared to skim milk. Fresh semen samples were analyzed and later diluted in UHT whole milk, semi skimmed and skimmed milk. Sperm motility and vigor, CFDA / PI and HOST tests were performed post-dilution (0h), and in semen cooled at 5oC after 24 and 48h. There was no difference between the 3 extenders, for sperm motility (p = 0.9880), vigor (p = 0.7249), CFDA / PI (p = 0.3882) and HOST (p> 0.01). There was a decrease in semen quality over time (p <0.01), regardless of the extender used. It can be stated that in the absence of skimmed UHT milk, semi-skimmed and whole milk can be used since they do not impair the quality of refrigerated semen stored for up to 48 hours. In the second trial the objective was to verify the efficacy of the skim milk compared to commercial extenders (Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS)). Soon after semen collection, the samples were diluted with UHT skim milk (LD), Botusemen® (BS) and Botusemen Special® (BSS). Semen analysis followed the same protocol as the first experiment. BSS-cooled semen showed higher HOST and CFDA / PI (p <0.001) in 24h and 48h indicating that BSS diluent promotes increased sperm longevity compared to the others analyzed.(AU)

Comparison of extenders and storage temperature in chilling canine semen / Diferentes diluentes e temperaturas de armazenamento para a refrigeração de sêmen canino

This study aimed to compare the effects a commercial milk-based extender and a self-made egg yolk extender had on the quality of canine semen stored at two different temperatures, 5ºC or 15ºC. The ejaculate obtained was split into two aliquots of equal volume and diluted with the milk or egg yolk extender. The final concentration was 100×106 spermatozoa/mL. Diluted semen was placed in transport containers and maintained at final storage temperatures of 5ºC and 15ºC. The quality of the chilled semen was assessed 12, 24, and 36 hours after storage. Semen diluted with the milk extender had higher motility, vigour, and plasma membrane integrity (p<0.05) of the spermatozoa than that diluted with the egg yolk extender. No difference in the semen quality was observed between the stored temperatures in both the groups. The difference observed between the extenders could be due to the standard formulation of the commercial milk extender and the presence of glucose in the mixture. In conclusion, the milk extender was better than the egg yolk extender at preserving the motility, viability, and membrane integrity of chilled canine semen for up to 36 hours. The storage temperature did not seem to affect the semen quality, suggesting that canine semen can be refrigerated at 15ºC.

O objetivo desse estudo foi avaliar a influência de um diluente comercial à base de leite, comparado à um diluente preparado com de gema de ovo na qualidade do sêmen de cão, armazenado em duas diferentes temperaturas (5º C ou 15º C). O ejaculado obtido foi dividido em duas alíquotas de volumes iguais, que foram diluídas com o diluente leite ou o diluente gema de ovo, apresentando uma concentração final de 100x106 espermatozoides/mL. O sêmen diluído foi colocado em caixas de transporte, mantendo temperaturas finais de refrigeração de 5º C e 15º C. A qualidade do sêmen refrigerado foi avaliada após 12, 24 e 36h de armazenamento. O sêmen diluído com o diluente leite resultou em maior motilidade, vigor e integridade de membrana plasmática (p<0,05) dos espermatozoides que o diluído com o diluente gema de ovo. Dentro de cada grupo, não foi encontrada nenhuma influencia da temperatura de armazenamento em relação à qualidade do sêmen. A diferença observada entre os diluentes, pode ter ocorrido devido à formulação padrão do diluente comercial à base de leite, além da presença de glicose em sua composição. Em conclusão, o diluente leite apresentou superior preservação da motilidade, viabilidade e integridade de membrana plasmática do sêmen de cão refrigerado, por até 36h de armazenamento, que o diluente gema de ovo, e a temperatura de armazenamento não interferiu na qualidade seminal, sugerindo que 15º C também pode ser utilizado para a refrigeração do sêmen canino.

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)

Comparison of extenders and storage temperature in chilling canine semen / Diferentes diluentes e temperaturas de armazenamento para a refrigeração de sêmen canino

This study aimed to compare the effects a commercial milk-based extender and a self-made egg yolk extender had on the quality of canine semen stored at two different temperatures, 5ºC or 15ºC. The ejaculate obtained was split into two aliquots of equal volume and diluted with the milk or egg yolk extender. The final concentration was 100×106 spermatozoa/mL. Diluted semen was placed in transport containers and maintained at final storage temperatures of 5ºC and 15ºC. The quality of the chilled semen was assessed 12, 24, and 36 hours after storage. Semen diluted with the milk extender had higher motility, vigour, and plasma membrane integrity (p<0.05) of the spermatozoa than that diluted with the egg yolk extender. No difference in the semen quality was observed between the stored temperatures in both the groups. The difference observed between the extenders could be due to the standard formulation of the commercial milk extender and the presence of glucose in the mixture. In conclusion, the milk extender was better than the egg yolk extender at preserving the motility, viability, and membrane integrity of chilled canine semen for up to 36 hours. The storage temperature did not seem to affect the semen quality, suggesting that canine semen can be refrigerated at 15ºC.(AU)

O objetivo desse estudo foi avaliar a influência de um diluente comercial à base de leite, comparado à um diluente preparado com de gema de ovo na qualidade do sêmen de cão, armazenado em duas diferentes temperaturas (5º C ou 15º C). O ejaculado obtido foi dividido em duas alíquotas de volumes iguais, que foram diluídas com o diluente leite ou o diluente gema de ovo, apresentando uma concentração final de 100x106 espermatozoides/mL. O sêmen diluído foi colocado em caixas de transporte, mantendo temperaturas finais de refrigeração de 5º C e 15º C. A qualidade do sêmen refrigerado foi avaliada após 12, 24 e 36h de armazenamento. O sêmen diluído com o diluente leite resultou em maior motilidade, vigor e integridade de membrana plasmática (p<0,05) dos espermatozoides que o diluído com o diluente gema de ovo. Dentro de cada grupo, não foi encontrada nenhuma influencia da temperatura de armazenamento em relação à qualidade do sêmen. A diferença observada entre os diluentes, pode ter ocorrido devido à formulação padrão do diluente comercial à base de leite, além da presença de glicose em sua composição. Em conclusão, o diluente leite apresentou superior preservação da motilidade, viabilidade e integridade de membrana plasmática do sêmen de cão refrigerado, por até 36h de armazenamento, que o diluente gema de ovo, e a temperatura de armazenamento não interferiu na qualidade seminal, sugerindo que 15º C também pode ser utilizado para a refrigeração do sêmen canino.(AU)

Effect of refrigeration at -1°C on spermatozoa quality of domestic cats / Efeito da refrigeração a -1°C na qualidade de espermatozoides de gatos domésticos

The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%...(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%...(AU)

Storage of boar semen at 16-18 °C in the long-term commercial extender prepared with deionized water or nanowater

The aim of this study was to assess the usefulness of nanowater (NW; water declusterized using cold plasma treatment) as a diluent for a commercial boar semen extender during the 15-day storage (Days 1 to 15) at 16-18 °C. Ejaculates collected from 8 boars were subjected to the standard evaluation and then diluted in the extender prepared with deionized water (DW) or NW to a final concentration of 3×109 spermatozoa/ml. The proportion of defective spermatozoa increased (P<0.05) from Day 10 to Day 15 of storage (22.8±16.6% to 41.8±26.4% in DW group and 18.6±11.7% to 34.8±25.4% in NW group) and it was significantly greater in DW group compared with NW group on Days 5 and 10 due mainly to a greater (P<0.05) number of mid-piece defects in semen stored in the DW-containing extender. Sperm progressive motility decreased (P<0.05) in both groups between Days 2 and 6, Days 6 and 10, and Days 10 and 12, whereas the percentage of motile spermatozoa declined (P<0.05) to Day 14 only in NW group. Sperm motility was greater (P<0.05) in NW group compared with DW group from Day 5 to Day 13. A decline in sperm progressive motility below 40% in all semen samples occurred by Day 11 in DW group and by Day 12 in NW group. The mean survival time of sperm at 37 °C ex situ was greater in NW group than in DW group on Day 5 (314±87 min compared with 284±87 min) and Day 10 (223±34 min compared with 182±27 min; NW group compared with DW group, respectively). There were no differences (P>0.05) between the two groups in the concentrations of alkaline phosphatase and aspartate aminotransferase in semen extender. To summarize, the use of NW as an extender diluent exerts cytoprotective effects on boar spermatozoa and delays a decline in sperm progressive motility.(AU)