Cellular components and TGF-beta1 content of a closed Tube system for Platelet Rich Plasma acquisition in horse] / [Componentes celulares e TGF-beta1 do plasma rico em plaquetas obtido por sistema fechado em equinos]

Platelet-rich plasma (PRP) has been proposed as an agent to accelerate the healing process and stimulate the regenerative capacity of tissues due to its abundance of growth factors. A large variety of kits and protocols are available to obtain PRP by different cell-separation systems. However, the lack of standardization may lead to inconsistent results. The aim of this study was to characterize cellular composition, platelet parameters using the ADVIA 120 flow cytometer, and TGF-ß1 concentration from the PRP product obtained through a closed system, using simple centrifugation. Six clinically healthy horses were used in this study. The protocol in the closed system resulted in approximately 1.6-fold higher platelet and approximately 2.0-fold lower white blood cell concentrations in comparison with whole blood values. The evaluated system was efficient in concentrating platelets and in retrieving a small number of leukocytes, using a protocol of single centrifugation at low speed.

O plasma rico em plaquetas (PRP) tem sido proposto como um agente para acelerar o processo de cicatrização e estimular a capacidade regenerativa dos tecidos, devido à sua abundância de fatores de crescimento. Uma grande variedade de kits e de protocolos está disponível para obtenção de PRP, utilizando-se diferentes sistemas de separação de células. No entanto, a falta de padronização pode levar a resultados inconsistentes. O objetivo deste estudo foi caracterizar a composição celular, os parâmetros plaquetários pelo citômetro de fluxo ADVIA 120 e a concentração de TGF-ß1 do PRP obtido em sistema fechado, por centrifugação simples. Seis cavalos clinicamente saudáveis ​​foram usados ​​neste estudo. O protocolo no sistema fechado resultou em concentrações de plaquetas aproximadamente 1,6 vez maior e concentrações de leucócitos aproximadamente 2,0 vezes menores em comparação com os valores do sangue total. O sistema avaliado foi eficiente na concentração de plaquetas e na recuperação de um pequeno número de leucócitos, utilizando um protocolo de centrifugação única em baixa velocidade.

Qualitative and quantitative aspects of atresia during mammalian folliculogenesis / Aspectos qualitativos e quantitativos da atresia durante a foliculogênese em mamíferos

Durante a foliculogênese ovariana, cerca de 99,9% dos folículos morrem pelo processo de atresia folicular. O processo de atresia pode ocorrer pelas vias degenerativa ou apoptótica. Este processo compromete todos os estágios de desenvolvimento folicular, sendo os folículos antrais os mais afetados. Por outro lado, os folículos préantrais são mais resistentes, em função de sua menor taxa metabólica, bem como do número reduzido de células e camadas de células somáticas, células da granulosa e/ou da teca. Embora folículos pré-antrais sejam menos afetados pelo processo de atresia, quando este evento ocorre, pode-se classificá-lo de duas formas, degeneração do tipo I e degeneração do tipo II. Na degeneração do tipo I, o oócito é o compartimento mais comprometido, apresentando núcleo picnótico, embora suas células da granulosa apresentem-se bem organizadas e sem picnose nuclear. Já na degeneração do tipo II, os folículos apresentam oócito retraído e células da granulosa edemaciadas, desorganizadas e sem aderência à membrana basal e ao oócito. É importante destacar que a degeneração do tipo I é mais comum em folículos primordiais e primários, enquanto folículos secundários apresentam mais degeneração do tipo II, ou seja, a medida que os folículos evoluem, a degeneração do tipo II é mais frequente. Considerando todos os aspectos aqui relacionados, essa revisão de literatura abordará aspectos relacionados aos processos de foliculogênese e atresia folicular, bem como as substâncias que induzem a atresia durante a foliculogenese in vitro e in vivo e, ainda, os métodos e parâmetros para análise da atresia em folículos ovarianos. Isto se deve a necessidade de desenvolvimento de protocolos mais eficientes de recuperação dos folículos ovarianos, prevenindo essa grande perda folicular e otimizando as possibilidades de utilização desses materiais biológicos no futuro.

During ovarian foliculogenesis, about 99.9% of follicles die by the follicle atresia process. The atresia process can occur via degeneration or apoptosis. This process compromises all the follicle development stages, with antral follicles being those most affected. On the other hand, the preantral follicles are more residents, since their slow metabolic rate, as well as the reduced number and layers of somatic cells, granulosa and/or thecal cells. Although preantral follicles are less affected by the atresia process, when the event occurs, we can classify it in two ways, type I or type II degenerated follicles. In the type I degeneration the oocyte is the most compromised compartment, showing the picnotic nuclei, although its granulosa cells presented well organized and no picnosis. Already in the type II degeneration, the follicles presented shrunken in the oocyte, and swollen, disorganization and no adhered granulosa cells from the basal membrane and oocyte. It is important to highlight that type I degeneration is the most common in primordial and primary follicles, while in secondary follicles present more type II degeneration, which means that the as follicle evolve, type II degeneration is more frequent. Considering all the aspects related here, this literature review will address aspects related to the folliculogenesis and the process of follicle atresia, as well as substances that induce atresia during in vitro and in vivo folliculogenesis and methods and parameters for analyzing atresia in ovarian follicles. This is due to the need to develop more efficient ovarian follicle recovery protocols, which can prevent this great follicular loss and optimizing the possibilities of use of these biological materials in the future.

Allogenic platelet-rich plasma in induced ulcers in rat's cornea / [Plasma rico em plaquetas alogênico em úlceras de córnea induzidas em ratos]

The objective in this study was to evaluate the clinic effect of applying allogenic platelet-rich plasma (PRP) heated or not, for treating cornea ulcers, including the dosage of PDGF-BB in the cornea. The ulcers were induced, standardizing the left eye from 81 rats (Ratus norvegicus, albinus variety), assigned randomly into three groups (N=27): control group (CG) which did not receive any topic treatment; heated PRP group (GA) and PRP group (GP), which received topical treatment every eight hours for five days. Each group underwent evaluation at 24 hours (M1), three days (M3) and five days (M5). The clinical exam evaluated the opacity, vascularization and corneal repair. The corneal PDGF-BB was dosed through the ELISA method. The corneal opacity was decreased in PRP-treated animals (GA and GP) and corneal repair time reduced when compared to CG at M1 and M5. Furthermore, GP showed greater vascularization at M3 compared to M1. Applied allogenic PRP eye drops, heated or not, speed up corneal healing, and reduce corneal repair time. However, the corneal PDGF concentration was not altered in any of the treatments.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito clínico da aplicação de plasma rico em plaquetas alogênico (PRP) aquecido ou não, no tratamento de úlceras de córnea, como a dosagem de PDGF-BB na córnea. As úlceras foram induzidas, padronizando-se o olho esquerdo de 81 ratos (Rattus norvegicus, variedade albinus), aleatoriamente, nos três grupos (N = 27): grupo controle (CG), que não recebeu nenhum tratamento tópico; grupo PRP aquecido (GA) e grupo PRP (GP), que receberam tratamento tópico a cada oito horas, durante cinco dias. Cada grupo foi subdividido em 24 horas (M1), três dias (M3) e cinco dias (M5). O exame clínico avaliou a opacidade, a vascularização e o reparo corneano. O PDGF-BB corneano foi dosado pelo método Elisa. Houve diminuição da opacidade da córnea nos animais tratados com PRP (GA e GP) e diminuição do tempo de reparo da córnea em comparação com CG, M1 e M5. Além disso, foi observada maior vascularização no GP no momento M3 em relação ao M1. A aplicação de colírios de PRP alogênico, aquecidos ou não, acelera a cicatrização da córnea, além de reduzir o tempo de reparo da córnea. No entanto, a concentração de PDGF na córnea não se alterou em nenhum dos tratamentos.(AU)

Associação de plasma rico em plaquetas de equino e pomada comercial no tratamento de feridas em pele de coelho / Rich plasma association in equine platform and commercial oil in writing of rabbit skin

Autologous platelet-rich plasma (PRP) is beneficial in the healing process of reconstructive surgeries, contributing to the stimulation of angiogenesis; however, heterologous plasma has been shown to be more effective. The objective of this study was to verify, by macro- and microscopic evaluation, whether PRP accelerates the healing process as compared to a commercial ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A (study ointment). This study used 24 white New Zealand rabbits, aged 12 months, and each weighing approximately 3 kg. The animals were separated into 4 equal groups and underwent wound induction through skin removal in the thoracic (study wound) and lumbar (control wound) dorsal midline. Study wounds were co-treated with equine PRP and the study ointment. Control wounds were treated with only the study ointment. Group I underwent histological evaluation 3 days after the skin removal procedure, group II after 7 days, group III after 14 days, and group IV after 21 days. A skin fragment was collected from each animal for histological evaluation. The co-treatment with heterologous equine PRP and the study ointment accelerated the healing process in the surgically induced skin wounds, confirming the acceleratory effect of PRP on wound healing.

O plasma rico em plaquetas autólogo é importante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando na estimulação da angiogênese; no entanto, o plasma heterólogo mostrou-se mais eficaz. Utilizou-se 24 coelhos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses, com peso corporal cerca de 3,0 kg. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos a remoção de pele na linha média dorsal torácica (ferida tratada) e lombar (ferida controle). Nas tratadas, foi aplicado plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A e, nas do grupo controle, somente a pomada. Nos do grupo I, foi coletado tecido cutâneo para a avaliação histológica com três dias de pós-operatório, nos do grupo II com sete dias, nos do grupo III com 14 dias e, nos do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação histológica. O uso associado do plasma rico em plaquetas heterólogo de equino com a pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, em feridas de pele induzidas cirurgicamente acelera o processo cicatricial.

Associação de plasma rico em plaquetas de equino e pomada comercial no tratamento de feridas em pele de coelho / Rich plasma association in equine platform and commercial oil in writing of rabbit skin

Autologous platelet-rich plasma (PRP) is beneficial in the healing process of reconstructive surgeries, contributing to the stimulation of angiogenesis; however, heterologous plasma has been shown to be more effective. The objective of this study was to verify, by macro- and microscopic evaluation, whether PRP accelerates the healing process as compared to a commercial ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A (study ointment). This study used 24 white New Zealand rabbits, aged 12 months, and each weighing approximately 3 kg. The animals were separated into 4 equal groups and underwent wound induction through skin removal in the thoracic (study wound) and lumbar (control wound) dorsal midline. Study wounds were co-treated with equine PRP and the study ointment. Control wounds were treated with only the study ointment. Group I underwent histological evaluation 3 days after the skin removal procedure, group II after 7 days, group III after 14 days, and group IV after 21 days. A skin fragment was collected from each animal for histological evaluation. The co-treatment with heterologous equine PRP and the study ointment accelerated the healing process in the surgically induced skin wounds, confirming the acceleratory effect of PRP on wound healing.(AU)

O plasma rico em plaquetas autólogo é importante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando na estimulação da angiogênese; no entanto, o plasma heterólogo mostrou-se mais eficaz. Utilizou-se 24 coelhos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses, com peso corporal cerca de 3,0 kg. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos a remoção de pele na linha média dorsal torácica (ferida tratada) e lombar (ferida controle). Nas tratadas, foi aplicado plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A e, nas do grupo controle, somente a pomada. Nos do grupo I, foi coletado tecido cutâneo para a avaliação histológica com três dias de pós-operatório, nos do grupo II com sete dias, nos do grupo III com 14 dias e, nos do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação histológica. O uso associado do plasma rico em plaquetas heterólogo de equino com a pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, em feridas de pele induzidas cirurgicamente acelera o processo cicatricial.(AU)

Comparison of the protocols for obtaining platelet-rich plasma in dogs: a cellular study / Comparação entre protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas em cães: estudo celular

This study aimed to evaluate two protocols (PA and PB) that are used to obtain canine platelet-rich plasma (PRP) for cellularity. Twenty healthy dogs were used. Blood samples were collected and placed in two tubes of 3.2% sodium citrate. PA used double centrifugation at 210 x g, and 370 x g and PB used double centrifugation with 140 x g and 330 x g. The PRP samples from the protocols were examined in terms of their platelet, erythrocyte, and leukocyte count in the Neubauer chamber, differential leukocyte count and platelet morphological observation in blood smears. Data (mean and standard deviation) were analyzed with the 95% probability t-test (P <0.05) using Pearsons correlation to test the relationship between platelets and erythrocytes, platelets, and leukocytes, and the leukocyte count versus the erythrocytes. Very weak negative correlation between platelets and leukocytes (p= -0.03), weak negative correlation between platelets and erythrocytes (p= -0.3) and a strong positive correlation between leukocytes and erythrocytes (ρ = 0.75) were noted. Although, BP did not reach the desired mean of one million platelets (979300 ± 79631 cells / μL), both protocols, A and B (4.42 ± 1.61 and 3.85 ± 1.55 times more platelets than total blood, respectively) (p <0.05) were efficient in concentrating platelets. Platelet activation was present in 26.55 ± 6.72% of the PA platelets and 26.25 ± 7.03% in PB (p> 0.05). PA and PB presented low erythrocyte concentration (p> 0.05), and PA had more leukocytes (p <0.05) than PB, with higher concentrations of basophils that were segmented, and lymphocytes.(AU)

Foi proposto avaliar dois protocolos (PA e PB) para obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) canino quanto a celularidade. Foram utilizados 20 cães sadios e coletadas amostras sanguíneas, sendo acondicionados em dois tubos de citrato de sódio a 3,2%. O PA utilizando centrifugação dupla com 210 xG e 370 xG e PB utilizando centrifugação dupla com 140 xG e 330 xG. Amostras de PRP dos protocolos foram destinadas a contagem plaquetária, eritrocitária e leucocitária em câmara de Neubauer, contagem diferencial leucocitária e observação morfológica plaquetária em esfregaços sanguíneos. Analisou-se os dados (médias e desvios padrão) pelo Teste t com 95% de probabilidade (p<0,05) utilizando-se correlação de Pearson para testar a relação entre a contagem de plaquetas e eritrócitos, plaquetas e leucócitos e leucócitos em relação aos eritrócitos. Houve correlação negativa muito fraca entre plaquetas e leucócitos (ρ= -0,03), negativa fraca entre plaquetas e eritrócitos (ρ= -0,3) e correlação positiva forte entre leucócitos e eritrócitos (ρ=0,75). Embora o PB não tenha alcançando a média de um milhão de plaquetas desejado (979300 ± 79631 células/µL), ambos os protocolos, A e B (4,42 ± 1,61 e 3,85 ± 1,55 vezes mais plaquetas que o sangue total, respectivamente) (p<0,05), foram eficientes em concentrar plaquetas. A ativação plaquetária esteve presente em 26,55 ± 6,72 % das plaquetas do PA e 26,25 ± 7,03 % nas do PB (p>0,05). PA e PB apresentaram baixa concentração eritrocitária (p>0,05) e PA apresentou mais leucócitos (p<0,05) que PB, com maiores concentrações de basófilos, segmentados e linfócitos.(AU)

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Only VEGF is necessary to stimulate the meiotic competence of caprine oocytes during in vitro maturation / Apenas VEGF é necessário para estimular a competência meiótica de oócitos caprinos durante a maturação in vitro

Para o sucesso da maturação in vitro (MIV), faz-se necessário uma sincronização entre as maturação nuclear e citoplasmática. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo comparar o efeito do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) como fator de crescimento na maturação in vitro (MIV) de oócitos caprinos com os fatores de crescimento epidermal (EGF) e semelhante à insulina I (IGF-I) adicionados juntos. Complexos cúmulos oócito (CCOs) foram isolados por slicing de ovários caprinos (n=40) utilizando bisturi cirúrgico. Apenas oócitos ≥110 μm com citoplasma homogêneo circundado por pelo menos uma camada compacta e coesiva de células do cúmulus foram selecionados para MIV. O meio de cultivo de base foi o TCM199 suplementado com 1% de BSA, 5 g/mL de hormônio luteinizante (LH), 0,5 g/mL de hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH®), 0,911 mMol/L de piruvato,1μg/mL de estradiol, e 100 μM de cisteamina, o qual foi denominado TCM199+. OsCCOs selecionados foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: 1) EGF e IGF-I, TCM199+ Suplementado com 10 ng/mL de EGF e 50 ng/mL de IGF-I; 2) VEGF, TCM199+ suplementado com 100 ng/mL de VEGF. Após a MIV, foram utilizados marcadores fluorescentes para avaliar a configuração da cromatina (Hoechst) e a viabilidade oocitária (calceína-AM e etídio homodímero). De uma maneira geral, ambos os tratamentos VEGF (80.2 e 35.7%) e EGF e IGF-I (70.5 e 29.9%) apresentaram resultados similares de quebra da vesícula germinativa (GVBD) e metáfase II rates (MII), respectivamente, sendo o tratamento VEGF numericamente superior ao EGF e IGF-I. Desta forma, conclui-se que o VEGF atua de forma similar ao EGF e IGF-I na competência oocitária para retomar ameiose.

For successful IVM, oocytes must undergo synchronically nuclear and cytoplasmic maturation. Thus, the aim of the present study was to compare vascular endothelial growth factor (VEGF) as a growth factor to the in vitro maturarion (IVM) to caprine oocytes instead of epidermal growth factor (EGF) plus insulin like growth factor I (IGF-I).Then, cumulus oocyte complexes (COCs) were pooled from slicing of caprine ovaries (n=40) using a surgical blade. Only oocytes ≥110 μm with homogeneous cytoplasm and surrounded by at least one compact layer of shiny and cohesive cumulus cells were selected to the IVM. The basic culture medium consisted of TCM199 supplemented with 1% of BSA, 5 g/mL of luteinizing hormone (LH), 0.5 g/mL of recombinant follicle-stimulanting hormone (rFSH®), 0.911 mMol/L pyruvate,1 μg/mL estradiol, and 100 μM cysteamine named TCM199+. The selected COCs were randomly distributed in the following treatments: 1) EGF plus IGF-I, TCM199+supplemented with 10 ng/ml of EGF and 50 ng/mL of IGF-I; 2) VEGF, TCM199+supplemented only with 100ng/mL of recombinant VEGF-A. After the IVM, oocytes were stained with fluorescent markers for the assessment of chromatin configuration (Hoechst) and to evaluate oocyte viability (calcein-AM and ethidium homodimer). Overall, both VEGF (80.2 and 35.7%) and EGF plus IGF-I (70.5 and 29.9%) treatments presented similar results of germinal vesicle breakdown (GVBD) and metaphase II rates (MII), respectively, being VEGF numerically greater than EGF plus IGF-I. Thus, we can infer that VEGF may act similar to EGF plus IGF-I in in vitro oocyte competence to resumes meiosis.

Only VEGF is necessary to stimulate the meiotic competence of caprine oocytes during in vitro maturation / Apenas VEGF é necessário para estimular a competência meiótica de oócitos caprinos durante a maturação in vitro

Para o sucesso da maturação in vitro (MIV), faz-se necessário uma sincronização entre as maturação nuclear e citoplasmática. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo comparar o efeito do fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) como fator de crescimento na maturação in vitro (MIV) de oócitos caprinos com os fatores de crescimento epidermal (EGF) e semelhante à insulina I (IGF-I) adicionados juntos. Complexos cúmulos oócito (CCOs) foram isolados por slicing de ovários caprinos (n=40) utilizando bisturi cirúrgico. Apenas oócitos ≥110 μm com citoplasma homogêneo circundado por pelo menos uma camada compacta e coesiva de células do cúmulus foram selecionados para MIV. O meio de cultivo de base foi o TCM199 suplementado com 1% de BSA, 5 g/mL de hormônio luteinizante (LH), 0,5 g/mL de hormônio folículo estimulante recombinante (rFSH®), 0,911 mMol/L de piruvato,1μg/mL de estradiol, e 100 μM de cisteamina, o qual foi denominado TCM199+. OsCCOs selecionados foram distribuídos aleatoriamente nos seguintes tratamentos: 1) EGF e IGF-I, TCM199+ Suplementado com 10 ng/mL de EGF e 50 ng/mL de IGF-I; 2) VEGF, TCM199+ suplementado com 100 ng/mL de VEGF. Após a MIV, foram utilizados marcadores fluorescentes para avaliar a configuração da cromatina (Hoechst) e a viabilidade oocitária (calceína-AM e etídio homodímero). De uma maneira geral, ambos os tratamentos VEGF (80.2 e 35.7%) e EGF e IGF-I (70.5 e 29.9%) apresentaram resultados similares de quebra da vesícula germinativa (GVBD) e metáfase II rates (MII), respectivamente, sendo o tratamento VEGF numericamente superior ao EGF e IGF-I. Desta forma, conclui-se que o VEGF atua de forma similar ao EGF e IGF-I na competência oocitária para retomar ameiose.(AU)

For successful IVM, oocytes must undergo synchronically nuclear and cytoplasmic maturation. Thus, the aim of the present study was to compare vascular endothelial growth factor (VEGF) as a growth factor to the in vitro maturarion (IVM) to caprine oocytes instead of epidermal growth factor (EGF) plus insulin like growth factor I (IGF-I).Then, cumulus oocyte complexes (COCs) were pooled from slicing of caprine ovaries (n=40) using a surgical blade. Only oocytes ≥110 μm with homogeneous cytoplasm and surrounded by at least one compact layer of shiny and cohesive cumulus cells were selected to the IVM. The basic culture medium consisted of TCM199 supplemented with 1% of BSA, 5 g/mL of luteinizing hormone (LH), 0.5 g/mL of recombinant follicle-stimulanting hormone (rFSH®), 0.911 mMol/L pyruvate,1 μg/mL estradiol, and 100 μM cysteamine named TCM199+. The selected COCs were randomly distributed in the following treatments: 1) EGF plus IGF-I, TCM199+supplemented with 10 ng/ml of EGF and 50 ng/mL of IGF-I; 2) VEGF, TCM199+supplemented only with 100ng/mL of recombinant VEGF-A. After the IVM, oocytes were stained with fluorescent markers for the assessment of chromatin configuration (Hoechst) and to evaluate oocyte viability (calcein-AM and ethidium homodimer). Overall, both VEGF (80.2 and 35.7%) and EGF plus IGF-I (70.5 and 29.9%) treatments presented similar results of germinal vesicle breakdown (GVBD) and metaphase II rates (MII), respectively, being VEGF numerically greater than EGF plus IGF-I. Thus, we can infer that VEGF may act similar to EGF plus IGF-I in in vitro oocyte competence to resumes meiosis.(AU)

Efeito do gel de plasma rico em plaquetas na cicatrização de enxertos cutâneos em equinos / Effect of platelet-rich plasma gel on graft skin healing in equines

O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.(AU)

The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.(AU)

Efeito do gel de plasma rico em plaquetas na cicatrização de enxertos cutâneos em equinos / Effect of platelet-rich plasma gel on graft skin healing in equines

O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.

The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.

EFEITO DO GEL DE PLASMA RICO EM PLAQUETAS NA CICATRIZAÇÃO DE ENXERTOS CUTÂNEOS EM EQUINOS

Abstract The platelet-rich plasma (PRP) gel is an autologous platelet concentration in a small plasma volume with the potential to improve the integration of the grafts. Eight adult equines were used, performing skin grafts, with 2.5x2.5 centimeters, on both sides of the neck, in which one was the treatment side, using the PRP gel, and the other side was the control. The animals were assessed after the surgery on days 0, 7, 14, 21, and 28, by clinical, histological, morphometric, and culture analysis of the grafts. The clinical, morphological, and biological analysis of tissue grafts revealed no significant differences between the control group and the treatment group with PRP. Histologic evaluation revealed an increase in acute inflammation on day 7 and collagen concentration on day 14, resulting from the release of growth factors by the platelets present in the gel, which did not differ in further moments. According to the experimental conditions used in this study, we concluded there were no significant differences between the side treated with PRP and the control side in skin grafts in horses.

Resumo O gel de plasma rico em plaquetas (PRP) é uma concentração autóloga de plaquetas em um pequeno volume de plasma com potencial de melhorar a integração dos enxertos. Foram utilizados oito equinos adultos, realizando-se enxertos de pele com largura de 2,5 x 2,5 centímetros em cada lado do pescoço, sendo um lado o tratamento, com o uso do gel de PRP e do outro lado o controle. Os animais foram avaliados nos dias 0, 7, 14, 21 e 28 após a cirurgia por meio de avaliação clínica, histológica, morfométrica e cultura bacteriana dos enxertos. As avaliações clínicas, morfométricas e bacteriológicas dos tecidos enxertados não revelaram diferenças significativas entre o grupo controle e o grupo tratamento com PRP. A avaliação histológica revelou um aumento da inflamação aguda no momento 7 e de concentração de colágeno no momento 14 no grupo tratamento, decorrente da liberação de fatores de crescimento pelas plaquetas presentes no gel, que não diferiu nos demais momentos. De acordo com as condições experimentais utilizadas neste estudo, pode-se concluir que não houve diferenças significativas entre o lado tratado com PRP e o lado controle em enxertos cutâneos em equinos.

Plasma rico em plaquetas: estudo comparativo entre a dupla centrifugação e o filtro E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy) / Comparative study of double spin and use of E-PET filter (Equine Platelet Enhancement Therapy) to obtain platelet rich plasma in horses

O plasma rico em plaquetas (PRP) consiste em uma alta concentração de plaquetas em um pequeno volume de plasma, sendo, em média, quatro vezes maior que a concentração sérica. O uso de PRP é justificado pela alta concentração de fatores de crescimento presentes em grânulos no interior das plaquetas, que possuem diversas funções como proliferação celular, quimiotaxia, angiogênese e diferenciação celular, que ampliam o poder de reparação tecidual. Há diversos protocolos para obtenção do PRP em equinos descritos na literatura, dentre os quais destacam-se os de dupla centrifugação, os automatizados e os filtros. Há diferenças substanciais no conteúdo do PRP dependendo do seu método de obtenção, principalmente no que se diz respeito à quantidade de leucócitos, plaquetas e concentração de fatores de crescimento. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi comparar a utilização do concentrado de plaquetas obtido por protocolo de dupla centrifugação e o obtido pelo filtro E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy), levando-se em consideração a concentração plaquetária e leucocitária final, a quantificação de fatores de crescimento (TGFß e PDGF-BB) e a facilidade de realização entre tais métodos. Utilizou-se nove animais para a obtenção de PRP por dupla centrifugação e através do filtro E-PET, não havendo diferença estatística (p>0,05) entre os métodos de obtenção em relação à concentração plaquetária e leucocitária, entretanto, houve diferença estatística (p=0,002; p=0,004, respectivamente) em relação a concentração de TGFß e PDGF-BB. Dessa forma, concluiu-se que o filtro E-PET mostrou-se um método mais efetivo, sendo possível sua utilização à campo, além de proporcionar uma maior concentração de fatores de crescimento TGFß e PDGF-BB.(AU)

The platelet-rich plasma (PRP) consists of a high concentration of platelets in a small volume of plasma, four times greater (average) than the serum concentration. The use of PRP is justified by the high concentration of growth factors present in granules in the platelets, which have several functions such as cell proliferation, chemotaxis, angiogenesis and differenciation, which extend the power of tissue repair. There are several protocols to obtain PRP in horses described in the literature, among which are highlighted the double centrifugation, automated and filters. There are substantial differences in the PRP content depending on its method of production, especially when it concerns the amount of leukocytes, platelets and concentration of growth factors. Thus, the aim of this study was to compare the use of platelet concentrates obtained by double centrifugation protocol and obtained by the filter E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy) taking into account the platelet and leukocyte final concentration, the quantification of growth factors (TGFß and PDGF-BB) and the facility to do those methods. Nine horses were used to obtain PRP by double centrifugation and through the E-PET filter, with no statistical difference (p>0.05) between the methods relative to the platelet and leukocyte concentration; however, there was statistical difference (p=0.002 and p=0.004 respectively) compared with the concentration of TGFß and PDGF-BB. It was concluded that the E-PET filter proved to be a more effective method possible to use in the field and to provide a higher concentration of growth factors (TGFß and PDGF-BB).(AU)

Plasma rico em plaquetas: estudo comparativo entre a dupla centrifugação e o filtro E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy) / Comparative study of double spin and use of E-PET filter (Equine Platelet Enhancement Therapy) to obtain platelet rich plasma in horses

O plasma rico em plaquetas (PRP) consiste em uma alta concentração de plaquetas em um pequeno volume de plasma, sendo, em média, quatro vezes maior que a concentração sérica. O uso de PRP é justificado pela alta concentração de fatores de crescimento presentes em grânulos no interior das plaquetas, que possuem diversas funções como proliferação celular, quimiotaxia, angiogênese e diferenciação celular, que ampliam o poder de reparação tecidual. Há diversos protocolos para obtenção do PRP em equinos descritos na literatura, dentre os quais destacam-se os de dupla centrifugação, os automatizados e os filtros. Há diferenças substanciais no conteúdo do PRP dependendo do seu método de obtenção, principalmente no que se diz respeito à quantidade de leucócitos, plaquetas e concentração de fatores de crescimento. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi comparar a utilização do concentrado de plaquetas obtido por protocolo de dupla centrifugação e o obtido pelo filtro E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy), levando-se em consideração a concentração plaquetária e leucocitária final, a quantificação de fatores de crescimento (TGFß e PDGF-BB) e a facilidade de realização entre tais métodos. Utilizou-se nove animais para a obtenção de PRP por dupla centrifugação e através do filtro E-PET, não havendo diferença estatística (p>0,05) entre os métodos de obtenção em relação à concentração plaquetária e leucocitária, entretanto, houve diferença estatística (p=0,002; p=0,004, respectivamente) em relação a concentração de TGFß e PDGF-BB. Dessa forma, concluiu-se que o filtro E-PET mostrou-se um método mais efetivo, sendo possível sua utilização à campo, além de proporcionar uma maior concentração de fatores de crescimento TGFß e PDGF-BB.(AU)

The platelet-rich plasma (PRP) consists of a high concentration of platelets in a small volume of plasma, four times greater (average) than the serum concentration. The use of PRP is justified by the high concentration of growth factors present in granules in the platelets, which have several functions such as cell proliferation, chemotaxis, angiogenesis and differenciation, which extend the power of tissue repair. There are several protocols to obtain PRP in horses described in the literature, among which are highlighted the double centrifugation, automated and filters. There are substantial differences in the PRP content depending on its method of production, especially when it concerns the amount of leukocytes, platelets and concentration of growth factors. Thus, the aim of this study was to compare the use of platelet concentrates obtained by double centrifugation protocol and obtained by the filter E-PET (Equine Platelet Enhancement Therapy) taking into account the platelet and leukocyte final concentration, the quantification of growth factors (TGFß and PDGF-BB) and the facility to do those methods. Nine horses were used to obtain PRP by double centrifugation and through the E-PET filter, with no statistical difference (p>0.05) between the methods relative to the platelet and leukocyte concentration; however, there was statistical difference (p=0.002 and p=0.004 respectively) compared with the concentration of TGFß and PDGF-BB. It was concluded that the E-PET filter proved to be a more effective method possible to use in the field and to provide a higher concentration of growth factors (TGFß and PDGF-BB).(AU)

Liquid and gel Platelet Rich Plasma as skin healing adjuvant / Plasma Rico em Plaquetas em suas frações líquida e em gel como adjuvantes da cicatrização cutânea

Background: In recent decades, many researches have been conducted on processes involved in tissue repairing, mainly in the development of resources and technology designed to improve the wound healing progress. Platelet rich plasma (PRP) derived from autologous blood is defined as a plasma volume with platelet concentration higher than physiological level. It is an autogenous and low cost source of growth factors, which are essential for tissue regeneration due to their angiogenic, mitogenic, and chemotactic properties. The aim of this study was evaluate two forms of PRP- liquid and gel - regarding their capacity to influence quality and repair time of standardized skin injuries. Materials, Methods & Results: New Zealand healthy rabbits were distributed in three groups (n = 6): control group (CG), liquid platelet rich plasma group (LIQPRP), and gel platelet rich plasma group (GELPRP). Acute skin lesions were inducted in two areas approximately 2 cm close to scapular edge and depth including epidermis, dermis, and hypodermis to external muscular fascia. Animals received treatment according to each group. Injuries were measured with digital pachymeter in two directions: longer length (l) and longer width (w), every two days. Areas and healing rates were calculated. Microscopic analysis samples were collected on days seven and 14 and evaluated through hematoxylin and eosin [...](AU)

Liquid and gel Platelet Rich Plasma as skin healing adjuvant / Plasma Rico em Plaquetas em suas frações líquida e em gel como adjuvantes da cicatrização cutânea

Background: In recent decades, many researches have been conducted on processes involved in tissue repairing, mainly in the development of resources and technology designed to improve the wound healing progress. Platelet rich plasma (PRP) derived from autologous blood is defined as a plasma volume with platelet concentration higher than physiological level. It is an autogenous and low cost source of growth factors, which are essential for tissue regeneration due to their angiogenic, mitogenic, and chemotactic properties. The aim of this study was evaluate two forms of PRP- liquid and gel - regarding their capacity to influence quality and repair time of standardized skin injuries. Materials, Methods & Results: New Zealand healthy rabbits were distributed in three groups (n = 6): control group (CG), liquid platelet rich plasma group (LIQPRP), and gel platelet rich plasma group (GELPRP). Acute skin lesions were inducted in two areas approximately 2 cm close to scapular edge and depth including epidermis, dermis, and hypodermis to external muscular fascia. Animals received treatment according to each group. Injuries were measured with digital pachymeter in two directions: longer length (l) and longer width (w), every two days. Areas and healing rates were calculated. Microscopic analysis samples were collected on days seven and 14 and evaluated through hematoxylin and eosin [...]

EFEITOS DO EXTRATO DE MEMBRANA AMNIÓTICA COMERCIAL NO TEMPO DE EPITELIZAÇÃO E NA CONCENTRAÇÃO DA MMP-9 LACRIMAL EM GATOS COM ÚLCERA DE CÓRNEA INDUZIDA EXPERIMENTALMENTE

Objetivo do estudo foi investigar se um AME disponível comercialmente pode acelerar a cicatrização de feridas na córnea e suprimir a expressão precoce de MMP-9 nas lágrimas de gatos com ceratite ulcerativa superficial induzida experimentalmente. Ao final da ceratectomia, os gatos do grupo de tratamento (TG, n = 8) receberam 40 L de AME (EyeQ ® Amniótico Colírio, Vetrix ®) quatro vezes ao dia, enquanto os gatos do grupo controle (CG, n = 8) recebeu 40 L de solução salina nos mesmos momentos. As lágrimas foram coletadas 24 e 48h após a ceratectomia, e a MMP-9 total foi quantificada por ELISA. A taxa de reepitelização corneana não diferiu entre os grupos (P = 0,26) sendo 0,48 ± 0,05 mm 2 / h no GC e 0,41 ± 0,03 mm 2 / h no GT. Da mesma forma, o tempo médio para atingir a cicatrização da ferida na córnea não diferiu entre os grupos (P = 0,25) e foi de 61,50 ± 3,54 h no GC e 70,50 ± 6,71 h no GT. As dimensões das áreas ulceradas também não diferiram em nenhum momento entre os grupos (P> 0,05). Em ambos os grupos, as córneas cicatrizaram sem cicatrizes, pigmentação ou vascularização. A expressão de MMP-9 nas lágrimas foi semelhante em ambos os grupos 24 horas após a ceratectomia, com uma leve diminuição em 48 horas (P> 0,05). O presente estudo indicou que a instilação de um AME comercial (EyeQ ®) é segura, mas não diminuiu o tempo de reepitelização da córnea e a expressão precoce de MMP-9 nas lágrimas de gatos com ceratite ulcerativa superficial induzida experimentalmente. Portanto, nossos resultados justificam uma investigação mais aprofundada do EyeQ ® em um ambiente clínico com gatos apresentando diferentes tipos de úlceras de córnea que ocorrem naturalmente.

The purpose of the study was investigated whether a commercially available AME can accelerate corneal wound healing and to suppress the early expression of MMP-9 in the tears of cats with experimentally induced superficial ulcerative keratitis. At the end of keratectomy, cats in the treatment group (TG, n = 8) received 40 L of AME (EyeQ ® Amniotic Eye Drops, Vetrix ®) four times daily, while cats in the control group (CG, n = 8) received 40 L of saline at the same time points. Tears were collected 24 and 48h after keratectomy, and the total MMP-9 was quantified by ELISA. The corneal re-epithelialization rate did not differ between groups (P = 0.26) being 0.48 ± 0.05 mm 2/h in the CG and 0.41 ± 0.03 mm 2 /h in the TG. Similarly, the average time to achieve corneal wound healing did not differ between groups (P = 0.25) and was 61.50±3.54 h in the CG and 70.50 ± 6.71 h in the TG. The dimensions of the ulcerated areas also did not differ at any time point between the groups (P > 0.05). In both groups corneas healed without scarring, pigmentation, or vascularization. The expression of MMP-9 in the tears was similar in both groups at 24h post keratectomy, with a slight decrease at 48 h (P > 0.05). The present study indicated that the instillation of a commercial AME (EyeQ ®) is safe, but it did not decrease the corneal re-epithelialization time and the early expression of MMP-9 in the tears of cats with experimentally induced superficial ulcerative keratitis. Hence, our results warrant further investigation of EyeQ ® in a clinical setting with cats presenting different types of naturally occurring corneal ulcers.

Avaliação do processo de cicatrização de feridas em equinos com o usode moxabustão

GRIZENDI, B. M. Avaliação do processo de cicatrização de feridas em equinos com o uso de moxabustão. 2020. 99f. Dissertação (Mestrado) Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2020. A cicatrização de feridas em equinos depende do arranjo efetivo dos diversos acontecimentos envolvidos e este processo é usualmente hermético, resultando na cronicidade e formação de tecido de granulação exuberante. Ademais, quando as feridas localizam-se nos membros, alguns elementos afetam negativamente a cicatrização, como mobilidade constante e predisposição à contaminação. Neste sentido, há uma busca constante por recursos terapêuticos alternativos, como a utilização de métodos da Medicina Tradicional Chinesa (MTC). A moxabustão é uma técnica da MTC para tratamento de doenças por meio da queima de Artemisia. Este estudo tem como objetivo principal a avaliação da cicatrização de feridas de pele em equinos com o uso da moxabustão. Foram utilizados oito equinos para indução e tratamento de feridas, nas regiões metacarpo-falangeanas, sendo as mesmas divididas em dois grupos experimentais, moxabustão (MOXA) e controle (CONT). As feridas do grupo MOXA foram tratadas com água e sabão neutro, associando sessões de moxabustão indireta com moxa palito, em dias alternados, enquanto que as feridas do grupo CONT receberam tratamento apenas com água e sabão neutro, também em dias alternados. Avaliações macroscópicas foram realizadas a cada sete dias, até completar 60 dias após a indução das feridas, sendo mensurado também o tempo necessário para completa cicatrização. Ademais, foram coletadas amostras das feridas para avaliações histológicas e expressões dos fatores de crescimento TGF-1 e VEGFA, por meio de quantificações dos transcritos dos genes, nos dias 0, 3, 7, 15, 30 e 60 após a indução das feridas. O tratamento com moxabustão não interferiu no tempo de completa cicatrização de feridas de pele em equinos e na expressão de TGF- e VEGFA em relação ao grupo tratado com água e sabão, embora observações macroscópicas e histológicas sugeriram alteração visual positiva para as feridas tratadas com moxabustão. Portanto, a moxabustão em forma de moxa palito apresenta-se como um tratamento complementar para feridas de equinos, visto que é de fácil aplicação, controla o processo cicatricial, possui preço acessível e apresenta boa aceitabilidade.

GRIZENDI, B. M. Process evaluation of equine wound healing with the use of moxibustion. 2020. 99 p. M.Sc Dissertation Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos, Universidade de São Paulo, Pirassununga, 2020. Wound healing in horses depends on the effective arrangement of the various events involved and this is usually hermetic, resulting in chronicity and exuberant granulation tissue formation. In addition, when the wounds are located in the limbs, some elements negatively affect healing, such as constant mobilization and contamination predisposition. In this sense, there is a constant search for alternative therapeutic resources, such as the use of Traditional Chinese Medicine (TCM) methods. Moxibustion is a TCM technique for treating diseases by burning Artemisia. The main objective of this study is the evaluation of skin wound healing in horses with the use of moxibustion. Eight horses were used for induction and treatment of surgical wounds in the metacarpophalangeal regions, which were divided into two experimental groups, moxibustion (MOXA) and control (CONT). The wounds from the MOXA group were treated with water and neutral soap, associating indirect technique moxibustion sessions with moxa stick on alternate days, while the wounds of the CONT group received treatment only with water and neutral soap, also on alternate days. Macroscopic evaluations were performed every seven days, until 60 days after wound induction, and the time required for complete healing was measured. In addition, wounds samples were collected for histologic evaluations and expressions of TGF-1 and VEGFA growth factors by quantification of gene transcripts on days 0, 3, 7, 15, 30 and 60 after wound induction. The treatment with moxibustion did not interfere in the time of complete healing of skin wounds in horses and in the expression of TGF- and VEGFA in relation to the group treated with water and soap, although macroscopic and histological observations suggested positive visual alteration for the wounds treated with moxibustion. Therefore, indirect moxibustion with moxa stick presents itself as a complementary treatment for horse wounds, since it is easy to apply, controls the healing process, has an affordable price and good acceptability.

Efeito da irradiação com laser de baixa intensidade na qualidade de membrana induzida pela técnica de Masquelet em coelhos

O estudo avaliou a influência da irradiação laser de baixa intensidade no desenvolvimento e características da membrana de Masquelet, induzida de forma ortotópica em coelhos. Foram utilizados 12 coelhos Norfolk com idade média de três meses. Em ambos os membros torácicos, foi induzida uma falha óssea segmentar de 1,0 cm de comprimento no rádio, a qual foi preenchida com um cilindro de cimento ortopédico. No período pós-operatório, em um dos membros a falha recebeu terapia laser de baixa intensidade (2J de energia) a cada 48 horas, durante 15 dias. As regiões das falhas segmentares foram avaliadas por exames ultrassonográficos e radiográficos. Seis animais foram submetidos à eutanásia com três semanas e seis com seis semanas de pós-operatório, para se proceder os exames histológicos e imuno-histoquímico das membranas de Masquelet. Em ambos os membros, radiograficamente notou-se na terceira semana de pós-operatório a presença de proliferação óssea ativa partindo das extremidades ósseas, sendo que na sexta semana o processo evolutivo mostrou-se em estágio mais avançado. O exame ultrassonográfico visibilizou, em ambos os membros, a presença da membrana induzida com uma semana de pós-operatório. Histologicamente não ocorreram diferenças estatísticas relativas ao escore semiquantitativo da intensidade de inflamação, número total de vasos sanguíneos, metaplasia óssea e colágeno. As espessuras médias das membranas induzidas foram 2050,17 µm e 1451,96 µm no membro controle e 2724,26 µm e 2081,03 µm no membro irradiado com laser, respectivamente na terceira e sexta semanas de pós-operatório. A expressão de VEGF e de PDGF foi presente nas membranas do membro controle e naquelas irradiadas, sem diferenças estatísticas. Foi possível concluir que pelos métodos de avaliação utilizados não foi possível comprovar estatisticamente a influência da irradiação laser de baixa intensidade sobre a membrana de Masquelet.

This study aimed to evaluate the influence of low-intensity laser irradiation on the development and characteristics of the Masquelet membrane induced in orthotopic site in rabbits. Twelve Norfolk rabbits, mean age of 3 months were used. In both forelimbs, a segmental bone defect of 1.0 cm length was induced in the radius, which was filled with a cylinder of polymethylmethacrylate bone cement. Low-level laser therapy was used postoperatively in the bone defect of one of the forelimbs by point technique (2J energy) every 48 hours for 15 days. The bone defect were evaluated by ultrasound and radiographic examinations. Six rabbits were submitted to euthanasia at three weeks postoperatively and six rabbits at six weeks postoperatively to perform the histological and immunohistochemical examinations of the Masquelets membranes. In both forelimbs, radiographs showed new bone growth from the cut ends of the radius on third postoperative week, and more advanced stage on sixth postoperative week. Sonographic examination identified in both forelimbs the presence of the induced membrane one week after the surgery. Histologically, there were no statistically significant differences in semi-quantitative score of inflammation intensity, total number of blood vessels, bone metaplasia and collagen. The average thickness of the induced membranes was 2050.17 µm and 1451.96 µm in the control forelimb and 2724.26 µm and 2081.03 µm in the laser irradiated limb, respectively on third and sixth postoperative weeks. VEGF and PDGF expression were present in the induced membranes of the control and irradiated forelimbs, but showed no significant difference. In conclusion, based on assessment methods was not possible to demonstrate statistically the influence of low-intensity laser irradiation in the Masquelet membrane.