Fibroma cutâneo atípico em uma vaca / Atypical cutaneous fibroma in a cow

Background: Cutaneous fibroma is a benign neoplasm affecting the fibroblasts and collagen matrix that develops in the dermis or subcutaneous tissue. This neoplasm is uncommon in cattle, and few reports have described the treatment and resolution of this neoplasm. Despite its benign character, a veterinarian should consider cutaneous fibroma in the differential diagnosis of skin tumors. This report aims to describe a rare case of large fibroma in the scapular region in a cow, with emphasis on the clinical-surgical and anatomopathological aspects of the condition. Case: A 3-year-old Girolando 3/4 cow was attended to at a rural property in Lagamar-MG, Brazil. According to the owner, the animal presented with a small mass in the right scapular region that grew progressively over 1 year and 6 months. Clinical examination revealed an exuberant and painless increase in volume on palpation in the proximal region of the right thoracic limb, which, in its vertical axis, extended from the proximal end of the scapula to near the olecranon tuberosity, and, in its horizontal axis, extended from the 6th intercostal space to the scapulohumeral joint, reaching the dimensions 66 cm and 62 cm, respectively. It presented with multiple nodules that were firm in consistency with extensive areas of ulceration. Neoplasia was suspected, and surgical excision was decided upon. The cow was sedated and restrained in the left lateral decubitus position. Trichotomy and antisepsis of the operative field were performed followed by an infiltrative anesthetic block around the tumor. The tumor was excised maintaining a safety margin of 1 cm. Dermorrhaphy was not possible, and healing by secondary intention was awaited. In the postoperative period, antibiotic therapy with benzathine penicillin, analgesia with meloxicamand dipyrone and daily dressing of the wound were performed. There were no postoperative complications and complete healing occurred approximately 100 days after surgery. One year after the surgical procedure, the owner reported that the cow did not present with recurrence of the neoplasm. The resected tumor weighed 11.2 kg, and, when cut, presented with solid conformation and whitish coloration. Tumor fragments were harvested, fixed in 10% formalin, and sent for histopathological examination, which revealed neoproliferation of remarkable cellular density composed of dense, well vascularized fibrocollagenous connective tissue arranged in multidirectional bundles and undulating pattern. Mild cellular pleomorphism was identified, and no mitosis figures were observed. Alcian blue staining was negative for mucopolysaccharides, differing from Masson's trichrome staining, which widely stained the fibrocollagenous tissue blue. In view of these findings, the diagnosis of cutaneous fibroma was confirmed. Discussion: Cutaneous fibromas are benign neoplasms of fibrous tissue, and they are uncommon in cattle and may be associated with bovine papillomavirus and/or trauma. Although the origin of cutaneous fibroma is not clear, the present report stands out due to the large size of the tumor mass. The complete healing of the surgical wound, the absence of recurrence one year after surgery and the return of the animal to dairy production demonstrate that the surgical treatment was adequate. The macro- and microscopic characteristics of the cutaneous fibroma in this case corroborate with other cases reported in the literature. Large cutaneous fibroma is uncommon in bovines, and may hinder surgical excision and prolong healing time, as well as the complete recovery of the animal. Moreover, the differential diagnosis with other neoplasms of fibroblastic origin is relevant, especially for those with malignant biological behavior, such as fibrosarcoma and myxosarcoma.

Cytotoxicity of iodine-131 radiopharmaceutical in tumor and non-tumor human cells and radioprotection by integral juices of Vitis labrusca L / Citotoxicidade do radiofarmacêutico iodo-131 em células humanas tumorais e não tumorais e radioprotecção por sucos integrais de Vitis labrusca L

Iodine-131 (I-131) radioisotope it causes the formation of free radicals, which lead to the formation of cell lesions and the reduction of cell viability. Thus, the use of radioprotectors, especially those from natural sources, which reduce the effects of radiation to healthy tissues, while maintaining the sensitivity of tumor cells, stands out. The objective of the present study was to evaluate the cytoprotective/radioprotective effects of whole grape juices manufactured from the conventional or organic production systems, whether or not exposed to ultraviolet (UV-C) light irradiation. The results showed that I-131 presented a cytotoxic effect on human hepatocellular cells (HepG2/C3A) at concentrations above 1.85 MBq/mL, after 24 and 48 hours of treatment, though all concentrations (0.0037 to 7.40 MBq/mL) were cytotoxic to non-tumor human lung fibroblast (MCR-5) cells, after 48 hours. However, grape juices (10 and 20 µL/mL) did not interfere with the cytotoxic effect of the therapeutic dose of I-131 on tumor cells within 48 hours of treatment, while protecting the non-tumor cells, probably due to its high antioxidant activity. In accordance with their nutraceutical potential, antioxidant and radioprotective activity, these data stimulate in vivo studies on the use of natural products as radioprotectants, such as grape juice, in order to confirm the positive beneficial potential in living organisms.

O radioisótopo iodo-131 (I-131) causa a formação de radicais livres, que levam à formação de lesões celulares e redução da viabilidade celular. Assim, destaca-se a utilização de radioprotetores, principalmente de origem natural, que reduzem os efeitos da radiação nos tecidos saudáveis, mantendo a sensibilidade das células tumorais. O objetivo do presente estudo foi avaliar os efeitos citoprotetores/radioprotetores de sucos de uva integral fabricados em sistemas de produção convencional ou orgânico, expostos ou não à radiação ultravioleta (UV-C). Os resultados mostraram que o I-131 apresentou efeito citotóxico nas células hepatocelulares humanas (HepG2/C3A) em concentrações acima de 1,85 MBq/mL, após 24 e 48 horas de tratamento, embora todas as concentrações (0,0037 a 7,40 MBq/mL) fossem citotóxicas para células de fibroblasto de pulmão humano não tumoral (MCR-5), após 48 horas. No entanto, os sucos de uva (10 e 20 µL/mL) não interferiram no efeito citotóxico da dose terapêutica de I-131 nas células tumorais em 48 horas de tratamento, protegendo as células não tumorais, provavelmente devido ao seu alto poder antioxidante. atividade. De acordo com seu potencial nutracêutico, atividade antioxidante e radioprotetora, esses dados estimulam estudos in vivo sobre o uso de produtos naturais como radioprotetores, como o suco de uva, a fim de confirmar o potencial benéfico positivo em organismos vivos.

Efeito do extrato de Bidens pilosa L, Mel e pomadas homeopática e alopática na cicatrização de feridas cutâneas de ratos Wistar / [Effect of Bidens pilosa L, Honey extract and homeopathic and allopathic ointments on the healing of skin wounds of Wistar rats]

Cicatrização de ferida é um processo dinâmico, que tem por objetivo restaurar a continuidade do tecido lesionado. No entanto, em alguns casos, é necessário favorecer condições adequadas para viabilizar o processo fisiológico. Neste estudo foram utilizados ratos Wistar, divididos aleatoriamente entre cinco grupos, com 12 animais cada, sendo eles: grupo P (Bidens pilosa L.), grupo mel, grupo Co1 (pomada comercial alopática), grupo Co2 (pomada comercial homeopática) e grupo CT (controle). As lesões foram geradas por incisão com punch de 8mm, sendo tratadas diariamente de forma tópica. Foram eutanasiados quatro animais por grupo, no terceiro, sétimo e 14º dias do experimento, e o material coletado foi armazenado em formalina 10% e encaminhado para processamento histológico. Posteriormente, realizou-se a contagem de leucócitos mononucleares, fibroblastos e neovasos e avaliou-se a arquitetura de fibras colágenas. Os resultados da contagem foram analisados pela ANOVA, seguida pelo teste de Tukey (P<0,05). O modelo experimental proposto neste estudo demonstrou que todos os tratamentos apresentaram potencial cicatrizante, com exceção do mel. A aplicação tópica do creme do extrato de Bidens pilosa L. a 10% apresentou melhor perfil anti-inflamatório; a pomada alopática apresentou boa aderência à superfície da lesão e a pomada homeopática, grande potencial angiogênico, com menor tempo de cicatrização.(AU)

Wound healing is a dynamic process that aims to restore the continuity of injured tissue. However, in some cases it is necessary to favor adequate conditions to enable the physiological process. Wistar rats were randomly divided into 5 groups with 12 animals each, namely: group P (Bidens pilosa L.), group honey, group Co1 (commercial allopathic ointment), group Co2 (commercial homeopathic ointment) and group CT (control). The lesions were generated by an 8mm punch incision and were treated topically daily. Four animals per group were euthanized on the 3rd, 7th and 14th day of the experiment and the collected material was stored in 10% formalin and sent for histological processing, after which mononuclear, fibroblasts and neovascular leukocytes were counted and collagen fiber architecture was evaluated. Counting results were analyzed by ANOVA, followed by Tukey test (p <0.05). The experimental model proposed in this study showed that all treatments had healing potential, except honey. The topical application of 10% Bidens pilosa L. extract cream showed the best anti-inflammatory profile; Allopathic ointment showed good adhesion to the surface of the lesion and homeopathic ointment showed great angiogenic potential with shorter healing time.(AU)

Estabelecimento de linhagens celulares em felídeos silvestres Uma revisão dos efeitos das condições de cultivo e criopreservação sobre a qualidade celular / Establishment of cell lines in wild felids A review of the effects of culture and cryopreservation conditions on cell quality

Linhagens celulares, principalmente fibroblastos derivados da pele, podem ser ferramentas interessantes para a conservação e multiplicação de felídeos silvestres ameaçados de extinção. Esses animais em virtude de seu quantitativo reduzido têm nos bancos de células somáticas uma alternativa para a conservação de material biológico derivado de pequenas populações, garantindo assim o armazenamento da diversidade genética de diferentes grupos de indivíduos. Isso porque tais linhagens, quando apropriadamente estabelecidas por meio das técnicas de cultivo in vitro e criopreservação, permitem seu emprego na obtenção de embriões por clonagem por transferência nuclear de célula somática e produção de células induzidas à pluripotência. Assim, uma das etapas essenciais para o uso dessas linhagens de maneira eficiente consiste na avaliação dos efeitos das condições de cultivo in vitro e criopreservação das células, visando reconhecer os danos gerados pelas manipulações e identificar os ajustes necessários aos protocolos empregados. Portanto, o objetivo desta revisão consiste em reunir e explorar informações úteis sobre as condições de cultivo in vitro e criopreservação de células derivadas de felídeos silvestres, visando o estabelecimento de linhagens celulares na conservação e multiplicação destas espécies.(AU)

Cell lines, mainly fibroblasts derived from the skin, can be interesting tools for the conservation and multiplication of endangered wild felids. These animals, due to their reduced quantity, have somatic cell banks as an alternative for the conservation of biological material derived from small populations, thus guaranteeing the storage of the genetic diversity of different groups of individuals. This is because such lines, when properly established through in vitro culture and cryopreservation techniques, allow their use in obtaining embryos by cloning by somatic cell nuclear transfer and production of cells induced to pluripotency. Thus, one of the essential steps for the use of these lines in an efficient way consists of the evaluation of the effects of the conditions of in vitro culture and cryopreservation of the cells, aiming to recognize the damages generated by the manipulations and to identify the necessary adjustments to the employed protocols. Therefore, the aim of this review is to gather and explore useful information about in vitro culture and cryopreservation conditions of cells derived from wild felids, aiming at the establishment of cell lines in the conservation and multiplication of these species.(AU)

Efeito do extrato de Bidens pilosa L, mel e pomadas homeopática e alopática na cicatrização de feridas cutâneas de ratos Wistar / [Effect of Bidens pilosa L, honey extract and homeopathic and allopathic ointments on the healing of skin wounds of Wistar rats]

Cicatrização de ferida é um processo dinâmico, que tem por objetivo restaurar a continuidade do tecido lesionado. No entanto, em alguns casos, é necessário favorecer condições adequadas para viabilizar o processo fisiológico. Neste estudo foram utilizados ratos Wistar, divididos aleatoriamente entre cinco grupos, com 12 animais cada, sendo eles: grupo P (Bidens pilosa L.), grupo mel, grupo Co1 (pomada comercial alopática), grupo Co2 (pomada comercial homeopática) e grupo CT (controle). As lesões foram geradas por incisão com punch de 8mm, sendo tratadas diariamente de forma tópica. Foram eutanasiados quatro animais por grupo, no terceiro, sétimo e 14º dias do experimento, e o material coletado foi armazenado em formalina 10% e encaminhado para processamento histológico. Posteriormente, realizou-se a contagem de leucócitos mononucleares, fibroblastos e neovasos e avaliou-se a arquitetura de fibras colágenas. Os resultados da contagem foram analisados pela ANOVA, seguida pelo teste de Tukey (P<0,05). O modelo experimental proposto neste estudo demonstrou que todos os tratamentos apresentaram potencial cicatrizante, com exceção do mel. A aplicação tópica do creme do extrato de Bidens pilosa L. a 10% apresentou melhor perfil anti-inflamatório; a pomada alopática apresentou boa aderência à superfície da lesão e a pomada homeopática, grande potencial angiogênico, com menor tempo de cicatrização.(AU)

Wound healing is a dynamic process that aims to restore the continuity of injured tissue. However, in some cases it is necessary to favor adequate conditions to enable the physiological process. Wistar rats were randomly divided into 5 groups with 12 animals each, namely: group P (Bidens pilosa L.), group honey, group Co1 (commercial allopathic ointment), group Co2 (commercial homeopathic ointment) and group CT (control). The lesions were generated by an 8mm punch incision and were treated topically daily. Four animals per group were euthanized on the 3rd, 7th and 14th day of the experiment and the collected material was stored in 10% formalin and sent for histological processing, after which mononuclear, fibroblasts and neovascular leukocytes were counted and collagen fiber architecture was evaluated. Counting results were analyzed by ANOVA, followed by Tukey test (p <0.05). The experimental model proposed in this study showed that all treatments had healing potential, except honey. The topical application of 10% Bidens pilosa L. extract cream showed the best anti-inflammatory profile; Allopathic ointment showed good adhesion to the surface of the lesion and homeopathic ointment showed great angiogenic potential with shorter healing time.(AU)

Estabelecimento de linhagens celulares em felídeos silvestres – Uma revisão dos efeitos das condições de cultivo e criopreservação sobre a qualidade celular / Establishment of cell lines in wild felids – A review of the effects of culture and cryopreservation conditions on cell quality

Linhagens celulares, principalmente fibroblastos derivados da pele, podem ser ferramentas interessantes para a conservação e multiplicação de felídeos silvestres ameaçados de extinção. Esses animais em virtude de seu quantitativo reduzido têm nos bancos de células somáticas uma alternativa para a conservação de material biológico derivado de pequenas populações, garantindo assim o armazenamento da diversidade genética de diferentes grupos de indivíduos. Isso porque tais linhagens, quando apropriadamente estabelecidas por meio das técnicas de cultivo in vitro e criopreservação, permitem seu emprego na obtenção de embriões por clonagem por transferência nuclear de célula somática e produção de células induzidas à pluripotência. Assim, uma das etapas essenciais para o uso dessas linhagens de maneira eficiente consiste na avaliação dos efeitos das condições de cultivo in vitro e criopreservação das células, visando reconhecer os danos gerados pelas manipulações e identificar os ajustes necessários aos protocolos empregados. Portanto, o objetivo desta revisão consiste em reunir e explorar informações úteis sobre as condições de cultivo in vitro e criopreservação de células derivadas de felídeos silvestres, visando o estabelecimento de linhagens celulares na conservação e multiplicação destas espécies.

Cell lines, mainly fibroblasts derived from the skin, can be interesting tools for the conservation and multiplication of endangered wild felids. These animals, due to their reduced quantity, have somatic cell banks as an alternative for the conservation of biological material derived from small populations, thus guaranteeing the storage of the genetic diversity of different groups of individuals. This is because such lines, when properly established through in vitro culture and cryopreservation techniques, allow their use in obtaining embryos by cloning by somatic cell nuclear transfer and production of cells induced to pluripotency. Thus, one of the essential steps for the use of these lines in an efficient way consists of the evaluation of the effects of the conditions of in vitro culture and cryopreservation of the cells, aiming to recognize the damages generated by the manipulations and to identify the necessary adjustments to the employed protocols. Therefore, the aim of this review is to gather and explore useful information about in vitro culture and cryopreservation conditions of cells derived from wild felids, aiming at the establishment of cell lines in the conservation and multiplication of these species.

EFEITO DA CRIOPRESERVAÇÃO SOBRE CÉLULAS SOMÁTICAS DE BOVINOS DA RAÇA CURRALEIRO PÉ DURO SUBMETIDAS A DIFERENTES CURVAS DE CONGELAÇÃO

Os bovinos da raça Curraleiro Pé Duro possuem grande rusticidade e capacidade de adaptação, o que despertou interesse em cruzamentos genéticos, até a diminuição drástica do número de animais. A técnica de Criopreservação de Células Somáticas, permite estocar por tempo indeterminado o material genético. Logo, o objetivo desse trabalho é observar o efeito de 3 curvas de criopreservação sobre as células somáticas de bovinos Curraleiro Pé Duro. O experimento foi realizado em Teresina-PI, na Universidade Federal do Piauí, no LBRA/CCA, utilizou-se um animal, hígido e com acesso a água e sal à vontade. O mesmo após os exames iniciais passou pelas etapas de assepsia, tricotomia, anestesia e colheita da biópsia, que foi transportada dentro de uma caixa com temperatura controlada. No laboratório, a biópsia foi processada incubadas em atmosfera controlada. Como grupo controle, foram utilizadas células de tecido auricular de bovinos Nelore. As células foram observadas quando a confluência e a morfologia até a quarta passagem e então, criopreservadas em 3 tratamentos (1NEL, 2NEL, 3NEL, 1CPD, 2CPD e 3CPD). Após 10 dias foram descongeladas e analisadas quanto a sua viabilidade celular, pela técnica de Azul de Tripan e em 7 dias, analisadas quando a confluência e morfologia novamente. Os dados passaram por análise de Variância e pelo teste de Tukey. Não foram observadas diferenças estatísticas entre a viabilidade celular e a capacidade de confluência das amostras. Conclui-se que a criopreservação de células auriculares de bovinos Curraleiro Pé Duro, se mostra uma ferramenta positiva para a conservação do material genético de raças nativas em risco de extinção, na forma de bancos de germoplasma, com grande potencial para utilização em biotécnicas de reprodução assistida.

Os bovinos da raça Curraleiro Pé Duro possuem grande rusticidade e capacidade de adaptação, o que despertou interesse em cruzamentos genéticos, até a diminuição drástica do número de animais. A técnica de Criopreservação de Células Somáticas, permite estocar por tempo indeterminado o material genético. Logo, o objetivo desse trabalho é observar o efeito de 3 curvas de criopreservação sobre as células somáticas de bovinos Curraleiro Pé Duro. O experimento foi realizado em Teresina-PI, na Universidade Federal do Piauí, no LBRA/CCA, utilizou-se um animal, hígido e com acesso a água e sal à vontade. O mesmo após os exames iniciais passou pelas etapas de assepsia, tricotomia, anestesia e colheita da biópsia, que foi transportada dentro de uma caixa com temperatura controlada. No laboratório, a biópsia foi processada incubadas em atmosfera controlada. Como grupo controle, foram utilizadas células de tecido auricular de bovinos Nelore. As células foram observadas quando a confluência e a morfologia até a quarta passagem e então, criopreservadas em 3 tratamentos (1NEL, 2NEL, 3NEL, 1CPD, 2CPD e 3CPD). Após 10 dias foram descongeladas e analisadas quanto a sua viabilidade celular, pela técnica de Azul de Tripan e em 7 dias, analisadas quando a confluência e morfologia novamente. Os dados passaram por análise de Variância e pelo teste de Tukey. Não foram observadas diferenças estatísticas entre a viabilidade celular e a capacidade de confluência das amostras. Conclui-se que a criopreservação de células auriculares de bovinos Curraleiro Pé Duro, se mostra uma ferramenta positiva para a conservação do material genético de raças nativas em risco de extinção, na forma de bancos de germoplasma, com grande potencial para utilização em biotécnicas de reprodução assistida.

Avaliação in vitro de propriedades biológicas de Senna occidentalis (L) Link / Evaluation of in vitro biological properties of Senna occidentalis (L) Link

Espécies de Senna são amplamente utilizadas por tribos americanas, africanas e indianas, principalmente para tratar a fraqueza, a constipação, as desordens do fígado e também em preparações tópicas para infecções de pele. A Senna occidentalis (L.) Link é um arbusto perene nativo da América do Sul encontrado em regiões tropicais. Este trabalho avaliou a atividade antimicrobiana de extratos aquosos e hidroalcoólicos de diferentes partes da planta. A atividade antimicrobiana foi estabelecida frente aos microrganismos padrões farmacêuticos por espectrofotometria e técnica de microdiluição. A Escherichia coli apresentou sensibilidade apenas a componentes extraídos das sementes, os quais podem ser de natureza proteica. O espectro mais amplo de atividade antimicrobiana foi obtido com o extrato hidroalcoólico das sementes, principalmente contra Pseudomonas aeruginosa. A toxicidade in vitro utilizando fibroblastos de camundongo indicou que este extrato pode ser um ingrediente biocompatível para formulações de uso tópico. Já o extrato hidroalcoólico de partes aéreas demonstrou ser potencialmente citotóxico.(AU)

Senna species have been widely used by American, African and Indian ethic groups mainly in the treatment of feebleness, constipation, liver disorders and skin infections. Senna occidentalis (L.) Link is a perennial shrub native to South America and indigenous to tropical regions throughout the world. Current study evaluated the antimicrobial activity of aqueous and hydroalcoholic extracts from S. occidentalis prepared from different parts of the plant. Antimicrobial activity was assessed against standard pharmaceutical microorganisms by spectrophotometry and microdilution technique. Escherichia coli was sensitive only to compounds extracted from seeds which may be proteinaceous. A broader antimicrobial spectrum was demonstrated by the hydroalcoholic extract of seeds, mostly against Pseudomonas aeruginosa. The in vitro toxicity using mouse fibroblasts indicated that the extract might be a biocompatible ingredient for topical formulations, while the hydroalcoholic extract of aerial parts demonstrated to be potentially cytotoxic.(AU)

Isolamento e caracterização de células doadoras derivadas da pele para a transferência nuclear / Isolation and characterization of skin-derived donor cells for nuclear transfer

O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.(AU)

The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. In general, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitro culture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.(AU)

Isolamento e caracterização de células doadoras derivadas da pele para a transferência nuclear / Isolation and characterization of skin-derived donor cells for nuclear transfe

O sucesso das biotecnologias reprodutivas assistidas, especialmente a clonagem por transferência nuclear de células somáticas, envolve múltiplos fatores e cada um destes pode influenciar a eficiência final. Em geral, os protocolos de isolamento, caracterização e criopreservação de células das espécies a serem clonadas constituem a etapa inicial para a obtenção de descendência clone viável, além de contribuir para outros estudos relacionados à biotecnologia celular. Neste contexto, o sucesso desta etapa pode ser alcançado pela associação da escolha do tipo celular, estabelecimento de altas taxas de viabilidade, atividade proliferativa e metabólica após o cultivo in vitro e criopreservação, além da sincronia do ciclo celular antes da reconstrução do embrião clone. Os fibroblastos e outras células derivadas da pele oriundas da região auricular de fetos ou animais adultos representam a fonte de fácil manipulação e mais adequada para a obtenção de carioplastos. Adicionalmente, avanços nesta área têm mostrado a possibilidade da produção de células pluripotentes a partir de células somáticas modificadas. Assim, o objetivo deste manuscrito é realizar uma revisão sobre os aspectos práticos da obtenção e estabelecimento de células doadoras de núcleo derivadas da pele para a reconstrução embrionária, descrevendo os fatores relacionados em cada procedimento que interferem no resultado final.

The success of assisted reproductive biotechnology, especially cloning by somatic cell nuclear transfer, involves multiple factors and each of these may influence the final efficiency. Ingeneral, the protocols for the isolation, characterization and cryopreservation of cells of the species to be cloned consist in initial step for obtaining viable clone offspring, and contribute to other studies on cell biotechnology. In this context, the success of this step may be achieved by association of the choice of cell type, establishment of high rates of viability, metabolic and proliferative activities after in vitroculture and cryopreservation, and cell cycle synchronization prior to embryo reconstruction. Fibroblasts and other skin derived-cells from ear region of fetal or adult animals represent a source of easy handling and better appropriate for obtaining caryoplasts. Additionally, advances in this area are showing the possibility of induced pluripotent cells from modified somatic cells. Thus, the aim of this manuscript is to describe the practical aspects of obtaining and establishing skin-derived donor cells for embryo reconstruction, with emphasis to the factors listed in each procedure that affect the final outcome.

Alterações morfológicas que acometem o bulbo do olho de cães infectados naturalmente por Leishmania infantum/chagasi

A leishmaniose visceral é uma zoonose transmitida de forma vetorial, que sucede a picada de flebotomíneos infectados, e possui o agente etiológico protozoário do gênero Leishmania. O objetivo proposto é descrever as alterações oculares que podem afetar o bulbo do olho de cães infectados naturalmente pela leishmaniose e descrever as alterações morfológicas que ocorrem através da interação entre o parasito e as estruturas oculares. Foram realizadas duas coletas no município de São Luís MA do bulbo do olho de 12 cães ao todo. Os animais foram submetidos a uma avaliação clínica oftalmológica e individualizados quanto à presença de doenças oculares. Os cães foram doados com o consentimento do proprietário, de acordo com as regras do Conselho Nacional de Controle de Experimentação Animal (CONCEA). Todos os animais foram classificados como sintomáticos por avaliação clínica e as manifestações oculares observadas foram: uveíte, ceratoconjuntivite seca, úlcera de córnea, conjuntivite e secreção ocular purulenta, principalmente. De acordo com o tipo de infiltrado inflamatório, o mais prevalente foi o linfoplasmático. A conjuntiva bulbar, limbo e córnea foram a região do olho mais afetada por infiltrados. Pela IHC observamos a marcação de amastigotas pelo anticorpo anti-Leishmania nas túnicas bulbares e o anticorpo Vimentina para fibroblastos associados com as formas amastigotas. A marcação dos fibroblastos foi positiva na córnea e limbo do olho. Através da microscopia eletrônica de varredura (MEV), observamos a ultraestrutura do que apresentou hiperplasia do epitélio da córnea, desorganização do estroma e reação inflamatória exacerbada na túnica vascular e fibrosa. Diante os resultados obtidos, as manifestações são caracterizadas pela alta freqüência de infiltrados inflamatórios, principalmente do tipo linfoplasmático. Os fibroblastos presentes na córnea podem atuar como células hospedeiras importantes frente à doença sistêmica, o que traz uma nova perspectiva sobre o modo de ação do parasito nas túnicas oculares.

Visceral leishmaniasis is a vector-borne zoonosis that succeeds the bite of infected sandflies and has the protozoan etiological agent of the genus Leishmania. The main idea of this study is to describe the ocular changes that can affect the eye bulb of dogs naturally infected by leishmaniasis and to describe the morphological changes that occur through the interaction between the parasite and the ocular structures. Two collections were carried out in the city of São Luís - MA from the eye bulb of 12 animals. The animals were submitted to a clinical ophthalmologic evaluation and later individualized for the presence of ocular diseases. The animals were donated with consent of the owner, according to the rules of National Council for Control of Animal Experimentation (CONCEA). All animals were classified as symptomatic by clinical evaluation. Ocular manifestations were: uveitis, keratoconjunctivitis, corneal ulcer, conjunctivitis and purulent ocular secretion mainly. The bulbar conjunctiva, limbus and cornea were the most affected region by infiltrates. By IHC we observed amastigote labeling by anti- Leishmania antibody on bulbar tunics and Vimentin antibody for fibroblasts associated with amastigote forms. Fibroblast labeling was positive in the cornea and limbus of the eye. Through scanning electron microscopy (SEM), we observed the ultrastructure of corneal epithelium hyperplasia, stromal disorganization and exacerbated inflammatory reaction in fibrous tunic. Given the results obtained, the manifestations are characterized by the high frequency of inflammatory infiltrates, mainly lymphoplasmocitic type. Fibroblasts present in cornea may act as important host cells in face of systemic disease, which brings a new perspective on the action of the parasite in eye tunics.

Isolamento e análise do potencial de células tronco MUSE (multilineage-differentiating stress-enduring) derivadas de bovinos e bubalinos adultos

As pesquisas com células tronco são importantes por causa das variadas aplicações. As células tronco adultas são de fácil obtenção, porém possuem um menor potencial. A pele é o maior órgão do corpo e são variadas as células que compõe os tecidos, dentre elas, fibroblastos e SKPs estão em maior quantidade na região da derme. SKPs são células multipotentes encontradas na região da derme que possuem o potencial de diferenciação em diversas células, como da linhagem neuronal e células germinativas. Estudos recentes relataram que é possível obter células na pele com capacidade diferenciação nas três linhagens germinativas e marcadores específicos como SSEA-3 e CD105 e que essas células podem ser separadas por meio de estresse com tripsina, são chamadas de MUSE. Assim, o objetivo deste trabalho é estabelecer células MUSE e gerar SKPs a partir de fibroblastos fetais de bovinos, visando futura aplicação em biotecnologias reprodutivas. Para isso, fibroblastos fetais bovinos foram submetidos a estresse de 3 horas a 37ºC, seguido de 18 horas a 4ºC e cultivados em meio DMEM/F12 mais fatores de crescimento e B27 durante 3 e 6 dias. As avaliações foram quantificação do numero de esferas formadas, ensaio de fosfatase Alcalina e imonocitoquímica. Os resultados mostraram que as células MUSE foram estabelecidas e geraram esferas a partir de fibroblastos fetais bovinos com marcação positivas células multipotentes. Porém, foram negativas para fosfatase alcalina que é marcador de pluripotência, além de serem de menor qualidade quando comparadas ao grupo controle, indicando que não são indicadas para formação de SKPs

Stem cell research is important because of the varied applications. At adult stem cells are easy to obtain, but have a lower potential. The skin is the largest organ of the body and the cells that make up the tissues are varied, fibroblasts and SKPs are in greater quantity in the region of the dermis. SKPs are cells multipotents found in the dermis region that have the potential of differentiation in cells, such as neuronal lineage and germ cells. Recent studies reported that it is possible to obtain cells in the skin with differentiation capacity in the three lineages specific markers such as SSEA-3 and CD105 and that such cells can be separated by trypsin stress, are called MUSE. Thus, the of this work is to establish MUSE cells and to generate SKPs from fetal fibroblasts of for future application in reproductive biotechnologies. For this, fibroblasts were subjected to stress of 3 hours at 37ºC, followed by 18 hours at 4ºC and cultured in DMEM / F12 medium plus growth factors and B27 for 3 and 6 days. At quantification of the number of beads formed, Alkaline phosphatase assay and immunocytochemistry. The results showed that MUSE cells were established and generated beads from bovine fetal fibroblasts with positive cell marking multipotent However, they were negative for alkaline phosphatase which is a marker of pluripotency, besides being of lower quality when compared to the control group, indicating that they are not indicated for formation of SKPs.

Cão jovem com fibrossarcoma em bexiga urinária: relato de caso / Young dog with fibrosarcoma in bladder: case report / Perro joven con fibrosarcoma en vejiga: reporte de caso

Un perro macho, 3 anos de edad, la raza Lhasa Apso, contó con la presencia de quejarse de disuria y hematuria. En el examen físico, el animal mostró sensibilidad en la región hipogástrica y la ecografía abdominal, se evidenció un irregular, estructura ecogénica heterogénea, pared y luz de la vejiga, lo que podría indicar una neoformación. La escisión quirúrgica de la formación se llevó a cabo y la estructura que se refiere retira para el examen histopatológico, que detecta la presencia de fibrosarcoma. La quimioterapia se indicó como opción de tratamiento adyuvante no en posesión del propietario. El animal se evaluó después de tres meses de la cirugía, que no presentan quejas relacionadas con el sistema urinario y sin divulgación de nódulos metastásicos en la radiografía de tórax y una ecografía del abdomen.(AU)

A male dog, 3 years old, breed Lhasa Apso, was attended complaining of dysuria and hematuria. During physical examination, the animal showed sensitivity in hypogastric region and during the abdominal ultrasonography, it was evidenced an irregular, heterogeneous, echogenic as the wall bladder structure in wall and bladder lumen, which indicate a neoformation. Surgical excision of the neoformation was carried out and the removed structure was forwarded to histopathological exams, where the presence of fibrosarcoma was detected. Chemotherapy was indicated as adjunctive treatment, and it wasn't carried out by the owner. The animal was valued after three months of surgery, which didn't show complains related to urinary system and without evidence of metastatic nodule on chest radiography and on ultrasound of the abdomen.(AU)

Um cão macho, de 3 anos de idade, da raça Lhasa Apso, foi atendido com queixa de hematúria e disúria. No exame físico, o animal apresentou sensibilidade em região hipogástrica e ao exame ultrassonográfico abdominal, foi evidenciada uma estrutura irregular, heterogênea, ecogênica em relação à parede vesical, em parede e lúmen vesical, podendo indicar a presença de neoformação. A excisão cirúrgica da neoformação foi realizada e a estrutura retirada encaminhada para exame histopatológico, onde se detectou a presença de fibrossarcoma. Foi indicado quimioterapia como tratamento coadjuvante, não realizada por opção do proprietário. O animal foi avaliado após três meses do procedimento cirúrgico, onde não apresentou queixas referentes ao sistema urinário e sem evidenciação de nódulos metastáticos nos exames de radiografia torácica e ultrassonografia do abdômen.(AU)

Cão jovem com fibrossarcoma em bexiga urinária: relato de caso / Young dog with fibrosarcoma in bladder: case report / Perro joven con fibrosarcoma en vejiga: reporte de caso

Un perro macho, 3 anos de edad, la raza Lhasa Apso, contó con la presencia de quejarse de disuria y hematuria. En el examen físico, el animal mostró sensibilidad en la región hipogástrica y la ecografía abdominal, se evidenció un irregular, estructura ecogénica heterogénea, pared y luz de la vejiga, lo que podría indicar una neoformación. La escisión quirúrgica de la formación se llevó a cabo y la estructura que se refiere retira para el examen histopatológico, que detecta la presencia de fibrosarcoma. La quimioterapia se indicó como opción de tratamiento adyuvante no en posesión del propietario. El animal se evaluó después de tres meses de la cirugía, que no presentan quejas relacionadas con el sistema urinario y sin divulgación de nódulos metastásicos en la radiografía de tórax y una ecografía del abdomen.

A male dog, 3 years old, breed Lhasa Apso, was attended complaining of dysuria and hematuria. During physical examination, the animal showed sensitivity in hypogastric region and during the abdominal ultrasonography, it was evidenced an irregular, heterogeneous, echogenic as the wall bladder structure in wall and bladder lumen, which indicate a neoformation. Surgical excision of the neoformation was carried out and the removed structure was forwarded to histopathological exams, where the presence of fibrosarcoma was detected. Chemotherapy was indicated as adjunctive treatment, and it wasn't carried out by the owner. The animal was valued after three months of surgery, which didn't show complains related to urinary system and without evidence of metastatic nodule on chest radiography and on ultrasound of the abdomen.

Um cão macho, de 3 anos de idade, da raça Lhasa Apso, foi atendido com queixa de hematúria e disúria. No exame físico, o animal apresentou sensibilidade em região hipogástrica e ao exame ultrassonográfico abdominal, foi evidenciada uma estrutura irregular, heterogênea, ecogênica em relação à parede vesical, em parede e lúmen vesical, podendo indicar a presença de neoformação. A excisão cirúrgica da neoformação foi realizada e a estrutura retirada encaminhada para exame histopatológico, onde se detectou a presença de fibrossarcoma. Foi indicado quimioterapia como tratamento coadjuvante, não realizada por opção do proprietário. O animal foi avaliado após três meses do procedimento cirúrgico, onde não apresentou queixas referentes ao sistema urinário e sem evidenciação de nódulos metastáticos nos exames de radiografia torácica e ultrassonografia do abdômen.

In vitro effect of 470 nm LED (Light Emitting Diode) in keloid fibroblasts / Efeito in vitro do LED (Light Emitting Diode) de 470 nm em fibroblastos de queloide

Purpose: To quantify keloid fibroblasts after irradiation with 470nm blue LED, in vitro. Methods: Fibroblasts from keloid and adjacent skin have been obtained from 6 patients. Cells have been cultivated and maintained in DMEM culture medium. In Petri dishes, they were irradiated with energy doses of 6J, 12J and 18J. After 24 h, counting was done by the average of the triplicates for each sample. Results: There were no significant differences in the number of irradiated keloid fibroblasts at the studied doses (p=0.261). In adjacent skin fibroblasts, differences were observed (p=0.025) concerning the doses of 18 J and 6 J (p=0.03). Conclusions: There was a reduction in the number of adjacent skin fibroblasts irradiated with 470nm blue LED at the energy dose of 18 J compared to the ones irradiated at the energy dose of 6 J. There were no changes in keloid fibroblasts counting at any of the doses applied, 24 h after irradiation.(AU)

Objetivo: Quantificar fibroblastos de queloide apos irradiacao com LED azul de 470nm, in vitro. Metodos: Foram obtidos fibroblastos de queloide e pele adjacente, de seis pacientes. As celulas foram cultivadas e mantidas em meio de cultura DMEM. Em placas de Petri, receberam irradiacao com doses de energia de 6J, 12J e 18J. Apos 24 horas a contagem foi feita pela media da triplicata para cada amostra. Resultados: Nao houve diferenca na quantidade de fibroblastos de queloide irradiados nas doses estudadas (p=0,261). Observou-se diferenca nos fibroblastos de pele adjacente (p=0,025), com relacao as doses de 18 J e 6 J (p=0,03). Conclusoes: Houve reducao dos fibroblastos de pele adjacente irradiados com LED azul de 470 nm na dose de energia de 18 J em relacao a dose de 6 J. Nao houve alteracao na quantidade de fibroblastos de queloide nas doses aplicadas apos 24 horas da irradiacao.(AU)

REPROGRAMAÇÃO DE FIBROBLASTOS DE PELE E CÉLULAS DO CORDÃO UMBILICAL POR MEIO DE PLASMÍDEOS VIRAIS E TRANSPOSONS NA PRODUÇÃO DE IPS EQUINAS

As pesquisas envolvendo a biologia das células-tronco aborda um amplo espectro de fenômenos, que vão desde o nível tecidual e celular, até o seu uso em terapias celulares. Esta crescente atenção sugere que é preciso rever conceitos básicos da biologia das células-tronco para compreender completamente os processos de diferenciação funcional. Desta forma, o instrumento da reprogramação celular por meio da manipulação gênica fornece subsídios para melhor compreender os processos de renovação e diferenciação que constituem as características fundamentais das células tronco. A obtenção dessas células em medicina veterinária visa validar diversos modelos experimentais domésticos, como o equino, na busca de novos fármacos e terapias alternativas para reabilitação. Uma série de estudos, porém, ainda são necessários para que tais aplicações sejam viáveis, uma vez que os mecanismos fundamentais das técnicas empregadas ainda não estão totalmente elucidados. Embora a reprogramação celular por meio de plasmídeos virais tenha sido relatada com sucesso em diversas espécies animais, outras técnicas também podem ser empregadas, como o uso de transposons, ou seja, fragmentos de DNAs que podem ser introduzidos nas células para efetuar a reprogramação, eliminando assim a partícula viral indesejada. Não se tem conhecimento de qual o melhor tipo celular a ser utilizado, e nem tão pouco qual a metodologia de reprogramação mais eficiente. Sabe-se que o cordão umbilical possui uma reserva rica em células-tronco mesenquimais, as quais por serem multipotentes podem melhorar a eficiência da obtenção de iPS em comparação ao uso de fibroblastos, pouco eficientes ao serem reprogramados. O objetivo deste trabalho foi obter iPS por meio de transfecção viral e não-viral de fibroblastos adultos e células do cordão umbilical equino, visando observar qual o tipo de transfecção e qual o tipo de célula são mais eficientes para reprogramação celular. Para ambos os tipos celulares utilizamos plasmídeos virais e transposons contendo os genes OCT-4, C-MYC, KLF-4 e SOX2; acompanhamos as modificações na morfologia das células equinas pós-transfecção; avaliamos as células modificadas por imunocitoquímica e citometria de fluxo com os marcadores típicos de células-tronco pluripotentes e avaliamos as alterações causadas no perfil de expressão gênica das células pelo método de PCR em tempo real; por fim induzimos células reprogramadas a se diferenciar em tecidos dos3folhetos germinativos. Os resultados demostraram que tanto os fibroblastos quanto as células do cordão umbilical submetidos à transfecção viral apresentaram características de células pluripotentes como morfologia característica, marcação positiva para fatores de pluripotência e expressão gênica específica. Os corpos embrióides formados também apresentaram marcação imunocitoquimica para ectoderme, mesoderme e endoderme. Apesar do tempo para inicio da formação das colônias serem bem parecidos (7dias para os fibroblastos e 6 dias para as células do cordão umbilical), a expansão das colônias dos fibroblastos reprogramados foi bem lenta, com a 1ª passagem sendo realizada 30 dias após a transfecção em comparação comas colônias de cordão umbilical, nas quais a 1ª passagem foi realizada após 15 dias. Nos cultivos de fibroblastos reprogramados foram contadas 81 colônias e nos cultivos das células do cordão umbilical reprogramados foram contadas 90 colônias indicando que a eficiência de reprogramação é maior em células do cordão. Os transposons foram transfectados nos dois tipos celulares, mas não foi verificada reprogramação efetiva em nenhum deles. Conclui-se que o uso de plasmídeo viral na reprogramação de células de cordão umbilical é mais eficiente do que em fibroblastos e o uso de transposons foi inviável em ambos os cultivos.

Researches on the biology of stem cells cover a broad spectrum of phenomena, ranging from tissue and cellular level, to their use in cell therapy. This growing attention suggests that is necessary to review basic concepts of stem cells organization in order to fully understand the functional differentiation processes. Thus, the cell reprogramming through gene manipulation provides grants to better understand the processes of renewal and differentiation which are the essential characteristics of stem cells. Obtaining these cells in veterinary medicine aims to validate various household experimental models, such as horses, on the search for new drugs and alternative therapies for rehabilitation. However, a number of studies is still necessary for such applications to be feasible, since the fundamental mechanisms of techniques employed are not fully elucidated yet. Although cell reprogramming using viral plasmid has been reported with success in several animal species, other techniques may also be employed, such use transposons, this is, DNA fragments can be introduced into cells to perform reprogramming, eliminating thus unwanted viral particle. The unawereness of what the best cell type to be used, and nor what is the most efficient reprogramming methodology. It is known that the cord has rich reserves mesenchymal stem cells, which are multipotent and can improve the efficiency of obtaining the iPS compared to the use of fibroblast, inefficient to be reprogrammed. The aim of this study was to obtain iPS through viral transfection and non-viral adult fibroblasts and equine cord cells, aiming to observe which transfection and cell type is more efficient for cell reprogramming. For both cell types used viral plasmids and transposons containing the genes OCT-4, SOX-2, C-MYC, and KLF-4; changes in the morphology of equine cells post-transfection have been observed; modifications in cell by immunocytochemistry and flow cytometry with the typical markers of pluripotent stem cells and changes caused in the gene expression profile of the cells by the PCR real time method have been evaluated; finally cells were induced to reprogram to differentiate into three germ layers tissues. The results showed that fibroblasts and cord cells subjected to viral transfection presented pluripotent cell characteristics such as morphology, positive staining for antibodies and specific gene expression, immunocytochemistry of the formed embryoid bodies also showed labeling for ectoderm, mesoderm and endoderm. Despite the time to start colonies formation is very similar (7 days for fibroblasts and 6 days for cord cells), the expansion of reprogrammed fibroblasts colonies was very slow, with the 1st was performed 30 days after transfection and 1st pass on cord colonies after 15 days. In reprogrammed fibroblast cultures were counted 81 colonies and reprogrammed cord cells culture were counted 90 colonies indicating that the reprogramming efficiency is higher in cord cells than in fibroblasts. The transposons were transfected in both cell types, but an effective reprogramming in none was not verified. It follows that the use of viral plasmid in cord cells reprogramming is more efficient than in fibroblasts and the use of transposons was infeasible in both cultures.

AVALIAÇÃO DA CITOTOXICIDADE IN VITRO DE COMPOSIÇÕES DE FOSFATO DE CÁLCIO PARA USO EM REPARAÇÃO ÓSSEA

DUARTE, Cláudia Regina Appio. Avaliação da citotoxicidade in vitro de composições de fosfato de cálcio para uso em reparação óssea. 2015. 69f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Saúde Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós- Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. As biocerâmicas nanoestruturadas de fosfato de cálcio tem se destacado na área de biomateriais de reconstituição óssea pela sua semelhança química e cristalográfica com a apatita óssea do esqueleto humano, reforçando sua importância na ortopedia, odontologia, fixação de implantes e reparação do tecido ósseo. Estes biomateriais apresentam micro e nanoestruturas microporosas interconectadas, formada por finos grãos e microporos, características estas que favorecem seu uso como matriz sintética na recuperação de tecido ósseo lesado. O cultivo de células in vitro é uma valiosa ferramenta para se estudar os mecanismos pelos quais os biomateriais podem produzir reações adversas em nível celular, indicando seu potencial para uso na prática médica. Este trabalho teve como objetivo avaliar a biocompatibilidade das cerâmicas porosas de fosfato de cálcio em condições diferenciadas de morfologia de grãos e de microporos por meio do teste de citotoxicidade MTT, análise da curva de crescimento celular e estudo da interação célula-material por microscopia eletrônica de varredura (MEV). A análise da interação célula-material por MEV mostrou a adesão e proliferação dos fibroblastos na superfície das diferentes biocerâmicas de fosfato de cálcio testadas. Nos resultados obtidos por meio do ensaio colorimétrico MTT e curva de crescimento constatou-se que os biomateriais testados se mostraram biocompatíveis, possuindo grande potencial como substitutos ósseos. O biomaterial composto por 80% TCP-/20% HA (1,67M/1100 °C/2h) apresentou viabilidade celular abaixo de 70% e curva de crescimento descendente, demonstrando grau de citotoxicidade.

DUARTE, Cláudia Regina Appio. In vitro evaluation of cytotoxicity of calcium phosphate ceramics for bone repair. 2015. 54f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Saúde Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. The nanostructured calcium phosphate bioceramics have shown importance in bone repair biomaterials for its chemical and crystallographic similarity with bone tissue crystalline structure, increasing their relevance in orthopedics, dentistry and bone healing. These biomaterials have interconnected microporous nanostructure, made of thin grains and micropores, which favor their use as synthetic matrix in recuperation of injure bone. In vitro cell culture is a value tool for studying the mechanisms whereby biomaterials can cause adverse reactions in cell level, indicating their potential use at medical practice. The aim of this study was to evaluate the biocompatibility of porous calcium phosphate bioceramics with different morphology of grains and microporous by MTT assay, cell growth curve and cell-material interaction study by scanning electron microscope (SEM). The cell-material interaction study by SEM showed fibroblasts adhesion and proliferation in the biomaterials surface. In the results of MTT assay and cell growth curve it was found that the tested biomaterials were biocompatible, making them suitable candidates as bone substitutes. The biomaterial composed by 80% TCP-/20% HA (1,67M/1100 °C/2h) showed cell viability less than 70% and descendant growth curve, indicating certain level of cytotoxicity.

DESENVOLVIMENTO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS USANDO CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DE RATO E FIBROBLASTOS EMBRIONÁRIAS DE CAMUNDONGOS

Diante da importância da produção in vitro de embriões (PIVE) na expansão do melhoramento genético, é importante a busca de inovações tecnológicas que possam potencializar o desenvolvimento embrionário in vitro. Fibroblastos embrionários de camundongo (MEFs) têm sido amplamente utilizados como camada alimentadora para suportar as células-tronco embrionárias, devido à sua liberação de fatores de crescimento. As células-tronco mesenquimais (MSCs) identificadas a partir de diferentes fontes, também liberam fatores bioativos que possam suportar o crescimento celular. Este estudo tem como objetivo investigar o efeito da co-cultura de MSC de medula óssea de rato ou MEF como fonte alimentadora na produção in vitro de embriões bovinos. Complexo cumulus oophorus foram maturados em três grupos distintos: Controle (CTRL), co-cultura com monocamada de células mesenquimais de ratos (MSC) ou co-cultura com monocamada de fibroblastos embrionários de camundongos (MEF). A fecundação foi realizada em condição controle para todos os grupos e os embriões fecundados in vitro foram também cultivados a partir do quarto dia em CTRL, co-cultura com MSC ou co-cultura com MEF, formando os seguintes grupos experimentais: (CTRL/CTRL) maturação e cultivo embrionário em condições CTRL; (CTRL/MSC) maturação em CTRL e cultivo embrionário em MSC a partir do quarto dia após o início do cultivo embrionário in vitro; (CTRL/MEF) maturação em CTRL e cultivo embrionário em MEF a partir do quarto dia após o início do cultivo embrionário in vitro; (MSC/CTRL) maturação em MSC e cultivo embrionário em CTRL; (MSC/MSC) maturação e cultivo embrionário em MSC a partir do quarto dia após o início do cultivo embrionário in vitro; (MEF/CTRL) maturação em MEF e cultivo embrionário em CTRL e (MEF/MEF) maturação e cultivo embrionário em MEF a partir do quarto dia após o início do cultivo embrionário in vitro. Nenhuma diferença significativa foi encontrada entre os oócitos dos grupos CTRL, MSC e MEF, na taxa de estruturas em metáfase II, apoptose e clivagem nos embriões de 4 dias após o início do cultivo in vitro. O número de células da massa celular interna, células do trofoblasto, células em apoptose e células totais foram iguais (P>0,05) entre os embriões dos diferentes grupos experimentais. As taxas de embriões em estágio de blastocisto, blastocisto expandido, blastocisto eclodido e blastocistos totais dos grupos experimentais não se diferiram (P>0,05) no sétimo dia de cultivo embrionário. No oitavo dia de cultivo embrionário houve diferença (P<0,05) da taxa de blastocisto eclodido, sendo maior no grupo CTRL/CTRL quando comparado ao grupo MSC/MSC; no entanto, a proporção de blastocisto, blastocisto expandido e blastocistos totais não foram diferentes (P>0,05) entre os grupos experimentais. Concluímos que não houve melhora significativa no desenvolvimento embrionário bovino utilizando co-culturas com MSC de ratos ou MEF de camundongos, quando comparado com sistema de cultura controle. Entretanto, mais estudos investigando o uso de células-tronco de outras fontes ou seu meio condicionado são necessários para se entender melhor o efeito destas células no desenvolvimento embrionário.

Due to the importance of in vitro embryo production (IVEP) to accelerate genetic improvement is important the search for technological innovation that can enhance the in vitro embryo development. Mouse embryonic fibroblasts (MEFs) have been widely used as a feeder layer to support embryonic stem cells due to their release of growth factors. Mesenchymal stem cells (MSCs) from different sources were also found to release bioactive factors that can support cell growth. This study aims to investigate the effect of co-culture of MSC from rat bone marrow or MEF as a feeder source for in vitro production of bovine embryos. Cumulus oophorus complexes were matured into three groups: control (CTRL), co-culture with monolayer of mesenchymal cells of rats (MSC) or co-cultured with monolayer of embryonic fibroblasts of mice (MEF). Fertilization was performed in control condition for all groups, and in vitro fertilized embryos were cultured from fourth day on in CTRL, co-culture with MSC or co-cultured with MEF, so that the following groups were performed: (CTRL / CTRL) - maturation and embryo development in CTRL conditions; (CTRL / MSC) - maturation in CTRL and embryo development with MSC from the fourth day on after the beginning of the in vitro embryo culture; (CTRL / MEF) - maturation CTRL and embryo development with MEF from the fourth day on after the beginning of the in vitro embryo culture; (MSC / CTRL) - MSC during maturation and embryo development in CTRL; (MSC / MSC) - maturation and embryo development in MSC from the fourth day on after the beginning of the in vitro embryo culture; (MEF / CTRL) - maturation and embryo development in MEF and CTRL (MEF / MEF) - maturation and embryo development in MEF from the fourth day on after the beginning of embryo development in vitro. No significant difference was found among the oocytes matured in CTRL, MSC and MEF conditions for metaphase II and apoptosis rates and for cleavage rate in embryos at 4th day after the beginning of the in vitro culture. The number of cells in the inner cell mass, trophoblast cells, apoptotic cells and total cells were similar (P> 0.05) in the embryos from all experimental groups. The rates of blastocyst formation, expanded, hatched and the total of blastocysts did not differ among experimental groups (P> 0.05) at 7th day of embryo development. At eighth day of embryo culture we observed a difference (P <0.05) in hatched blastocyst rate which was higher in the CTRL /CTRL group when compared to MSC/MSC group, however, the proportion of blastocyst, expanded and total blastocysts was not different (P> 0.05). We conclude that there was no significant improvement in bovine embryo development using co-cultures of MSC from rats or MEF when compared to control culture system. However more studies investigating the use of stem cells from other sources or their conditioned medium are needed to better understand the effect of these cells on embryonic development

The influence of nicotine on the population of fibroblasts in cutaneous scars in rats / A influência da nicotina na população de fibroblastos em cicatrizes cutâneas de ratos

PURPOSE: To study the collagen density and the population of fibroblasts in cutaneous injuries in rats under the influence of nicotine. METHODS: The scars of abdominal wounds in rats were analyzed. 2 mg/kg/d of nicotine was administered to the animals in the experiment group and the solution used as a vehicle for the animals in the control group. Treatment was begun seven days prior to surgery and maintained for seven or fourteen days following surgery. The removed scars were prepared for histopathological study. Histological cuts were stained by Sirius Supra red F3BA for collagen analysis and submitted to the examination using the immunohistochemical technique, which enabled us to recognize the population of fibroblasts. RESULTS: No significant difference was found in type I collagen density after seven days (p=0.912), nor after fourteen days (p=0.211). The control group had more type III collagen after seven days (p=0.004), but after fourteen days there was no significant difference (p=0,720). The total quantification of collagen, although higher in the control group, was not significantly so at any time during the study (p=0.103 after seven days and p=0.549 after fourteen days). The average of fibroblasts per field was lower after seven days (p=0.0001) and after fourteen days (p=0.0000). CONCLUSION: Under the conditions of this experiment, nicotine reduced the fibroblast population without modifying collagen density significantly.(AU)

OBJETIVO: Estudar a densidade de colágeno e a população de fibroblastos em feridas cutâneas de ratos sob a influência da nicotina. MÉTODOS: Analisaram-se as cicatrizes de feridas abdominais de ratos. Foi administrada 2 mg/kg/d de nicotina, por via subcutânea aos animais do grupo experimento e a solução usada como veículo para os animais do grupo controle. O tratamento foi iniciado sete dias antes do ato operatório e mantido por sete ou quatorze dias no pós-operatório. As cicatrizes ressecadas foram preparadas para estudo histo-patológico. Cortes histológicos foram corados pelo Sirius Supra red F3BA para a análise do colágeno e submetidos à exame pela técnica imuno-histoquímica permitiram reconhecer a população de fibroblastos. RESULTADOS: Verificou-se que não existiu diferença significante na densidade de colágeno tipo I, na avaliação feita com sete dias (p=0,912) e com 14 dias (p=0,211). O grupo controle mostrava mais colágeno tipo III com sete dias (p=0,004), mas aos 14 dias não havia diferença significante (p=0,720). A quantificação do colágeno total, embora fosse maior no grupo controle, não o foi de forma significante em nenhum dos tempos estudados (p=0,103 aos sete dias e p=0,549 aos 14 dias). A média de fibroblastos por campo esteve diminuída na avaliação de sete dias (p=0,0001) e na de quatorze dias (p=0,0000). CONCLUSÃO: Nas condições do experimento, a nicotina promoveu diminuição da população de fibroblastos sem modificar a densidade do colágeno de forma significante.(AU)

Ascorbic acid for the healing of skin wounds in rats

BACKGROUND: Healing is a complex process that involves cellular and biochemical events. Several medicines have been used in order to shorten healing time and avoid aesthetic damage. OBJECTIVE: to verify the topical effect of ascorbic acid for the healing of rats' skin wounds through the number of macrophages, new vessels and fibroblast verifications in the experimental period; and analyse the thickness and the collagen fibre organization in the injured tissue. METHODS: Male Rattus norvegicus weighing 270 ± 30 g were used. After thionembutal anesthesia, 15 mm transversal incisions were made in the animals' cervical backs. They were divided into two groups: Control Group (CG, n = 12) - skin wound cleaned with water and soap daily; Treated Group (TG, n = 12) - skin wound cleaned daily and treated with ascorbic acid cream (10%). Samples of skin were collected on the 3rd, 7th and 14th days. The sections were stained with hematoxylin-eosin and picrosirius red for morphologic analysis. The images were obtained and analysed by a Digital Analyser System. RESULTS: The ascorbic acid acted on every stage of the healing process. It reduced the number of macrophages, increased the proliferation of fibroblasts and new vessels, and stimulated the synthesis of thicker and more organized collagen fibres in the wounds when compared to CG. CONCLUSION: Ascorbic acid was shown to have anti-inflammatory and healing effects, guaranteeing a suiTable environment and conditions for faster skin repair.

FUNDAMENTOS: A cicatrização é um processo complexo que envolve eventos celulares e bioquímicos. Vários medicamentos têm sido empregados na tentativa de abreviar a cicatrização e evitar danos estéticos. OBJETIVO: verificar o efeito tópico do ácido ascórbico no processo de cicatrização de feridas cutâneas de ratos através da verificação do número de macrófagos, neovasos e fibroblastos presentes no período experimental; e analisar a espessura e a organização das fibras colágenas no tecido lesado. MÉTODOS: Foram utilizados Rattus norvegicus, machos, pesando 270 ± 30 g. Foi realizada incisão transversal na pele da região dorso-cervical de 15 mm de comprimento, após anestesia com Thionembutal. Os animais foram divididos em 2 grupos: grupo controle (GC, n = 12), feridas higienizadas diariamente com água e sabão; grupo tratado (GT, n = 12), feridas higienizadas e tratadas com creme de ácido ascórbico (10%). Os fragmentos para análise histológica foram coletados no 3º, 7º e 14º dia, e as lâminas coradas com hematoxilina-eosina e picrosírius red para análise morfológica. As imagens foram capturadas e analisadas por um sistema digitalizador. RESULTADOS: O ácido ascórbico atuou em todas as etapas da cicatrização, diminuindo o número de macrófagos, aumentando a proliferação dos fibroblastos e neovasos, e favorecendo a deposição de fibras colágenas mais espessas e organizadas nas feridas. CONCLUSÃO: O ácido ascórbico mostrou ter efeito antiinflamatório e cicatrizante, promovendo ambiente e condições favoráveis para a reparação tecidual, o que abreviou o tempo da cicatrização.