Resumo
There is a growing interest in the study of unspecialized mesenchymal stem cells, for there are still some discussions about their in vitro behavior. Regenerative medicine is a science undergoing improvement which develops treatments as cell therapy using somatic stem cells. In several studies, adipose tissue is presented as a source of multipotent adult cells that has several advantages over other tissue sources. This study aimed to characterize and evaluate the tagging of mesenchymal stem cells from the agoutis adipose tissue (Dasyprocta prymonolopha), with fluorescent intracytoplasmic nanocrystals. Fibroblast cells were observed, plastic adherent, with extended self-renewal, ability to form colonies, multipotency by differentiation into three lineages, population CD90 + and CD45 - expression, which issued high red fluorescence after the tagging with fluorescent nanocrystals by different paths and cryopreserved for future use. It is possible to conclude that mesenchymal stem cells from agouti adipose tissue have biological characteristics and in vitro behavior that demonstrate its potential for use in clinical tests.(AU)
Há um interesse crescente no estudo das células estaminais mesenquimais, não especializadas, pois ainda existem algumas discussões sobre seu comportamento in vitro. A medicina regenerativa é uma ciência em fase de crescimento que desenvolve tratamentos como terapia celular utilizando células estaminais somáticas. Em vários estudos, o tecido adiposo é apresentado como uma fonte de células adultas multipotentes que tem várias vantagens em relação a outras fontes de tecido. Este estudo teve como objetivo caracterizar e avaliar a marcação de células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias (Dasyprocta prymnolopha) com nanocristais intracitoplasmáticos fluorescentes. Observaram-se células fibroblásticas, aderentes ao plástico, com autorrenovação prolongada, capacidade de formar colônias, diferenciação em três linhagens, população CD90 + e expressão CD45, que emitiram alta fluorescência vermelha após a marcação com nanocristais fluorescentes por diferentes vias, e criopreservadas para uso futuro. É possível concluir que as células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias têm características biológicas e comportamentos in vitro que demonstram seu potencial para uso em testes clínicos.(AU)
Assuntos
Animais , Tecido Adiposo/citologia , Imunofenotipagem/veterinária , Medicina Regenerativa/métodos , Nanopartículas , Células-Tronco Mesenquimais , Dasyproctidae/genéticaResumo
There is a growing interest in the study of unspecialized mesenchymal stem cells, for there are still some discussions about their in vitro behavior. Regenerative medicine is a science undergoing improvement which develops treatments as cell therapy using somatic stem cells. In several studies, adipose tissue is presented as a source of multipotent adult cells that has several advantages over other tissue sources. This study aimed to characterize and evaluate the tagging of mesenchymal stem cells from the agoutis adipose tissue (Dasyprocta prymonolopha), with fluorescent intracytoplasmic nanocrystals. Fibroblast cells were observed, plastic adherent, with extended self-renewal, ability to form colonies, multipotency by differentiation into three lineages, population CD90 + and CD45 - expression, which issued high red fluorescence after the tagging with fluorescent nanocrystals by different paths and cryopreserved for future use. It is possible to conclude that mesenchymal stem cells from agouti adipose tissue have biological characteristics and in vitro behavior that demonstrate its potential for use in clinical tests.(AU)
Há um interesse crescente no estudo das células estaminais mesenquimais, não especializadas, pois ainda existem algumas discussões sobre seu comportamento in vitro. A medicina regenerativa é uma ciência em fase de crescimento que desenvolve tratamentos como terapia celular utilizando células estaminais somáticas. Em vários estudos, o tecido adiposo é apresentado como uma fonte de células adultas multipotentes que tem várias vantagens em relação a outras fontes de tecido. Este estudo teve como objetivo caracterizar e avaliar a marcação de células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias (Dasyprocta prymnolopha) com nanocristais intracitoplasmáticos fluorescentes. Observaram-se células fibroblásticas, aderentes ao plástico, com autorrenovação prolongada, capacidade de formar colônias, diferenciação em três linhagens, população CD90 + e expressão CD45, que emitiram alta fluorescência vermelha após a marcação com nanocristais fluorescentes por diferentes vias, e criopreservadas para uso futuro. É possível concluir que as células estaminais mesenquimais do tecido adiposo de cutias têm características biológicas e comportamentos in vitro que demonstram seu potencial para uso em testes clínicos.(AU)
Assuntos
Animais , Tecido Adiposo/citologia , Imunofenotipagem/veterinária , Medicina Regenerativa/métodos , Nanopartículas , Células-Tronco Mesenquimais , Dasyproctidae/genéticaResumo
As células-tronco adultas exibem relevante potencial clonogênico, fácil interação com biomateriais e capacidade de originar tecidos mesodermais e não mesodermais, sem implicações éticas e com mínimos riscos ao paciente. A busca constante por modelos biológicos que mimetizem a fisiologia e as doenças que acometem humanos, a introdução de novos modelos animais é promissora para a pesquisa médica aplicada. Dentre as qualidades que se destacam em um modelo animal, são relevantes o fácil manejo, alta prolificidade, longevidade e resistência a múltiplos procedimentos. As cutias, Ordem Rodentia, Subordem Histricognatha, são animais rústicos, com maior porte que os roedores comumente utilizados em laboratório, bastante estudadas em seus aspectos morfofisiológicos e como modelo experimental em ensaio pré-clínico. Este estudo teve como objetivo caracterizar células-tronco mesenquimais (CTM) da medula óssea e do tecido adiposo de cutias, visando à conservação destas células, para formação de biobanco, com a finalidade de preservar material genético da espécie, bem como na utilização de sua multipotencialidade em futuras terapias celulares e pesquisas na área da medicina regenerativa. Foram utilizados seis animais criados no Núcleo de Estudos e Preservação de Animais Silvestres (NEPAS) da Universidade Federal do Piauí UFPI. As cutias foram anestesiadas para coleta da medula óssea do fêmur e do tecido adiposo subcutâneo da região cervical dorsal. O isolamento das células-tronco mesenquimais da medula óssea (CTMMO) e do tecido adiposo (CTMTA) foi realizado em cultura celular a partir da fração mononuclear obtida pela separação por gradiente de densidade com Ficoll-Paque, e de fragmentos teciduais resultantes da dissociação física e química com colagenase, respectivamente. Foram realizados procedimentos de estudo in vitro com as duas linhagens celulares: Ensaio de Unidade Formadora de Colônia Fibroblastóide; curva de crescimento celular; diferenciação nas linhagens adipogênica, osteogênica e condrogênica; imunofenotipagem pela análise da expressão dos marcadores CD90, CD45 e CD14 por citometria de fluxo; e marcação com nanocristais para análise de sua manutenção por cinco passagens do cultivo. Os resultados demonstraram que as CTM das duas fontes são plástico aderentes, apresentam morfologia fibroblastóide e organizam-se em colônias mesmo quando uma baixa densidade celular inicial é semeada. Foram observadas três fases na curva de crescimento de CTMMO e CTMTA, relacionadas à fase de adaptação, proliferação exponencial e estabilidade da cinética celular. Quando induzidas à diferenciação adipogênica, osteogênica e condrogênica, demonstraram características morfológicas especializadas de cada linhagem celular, alterações semelhantes foram visualizadas em CTMMO que foram criopreservadas quando induzidas à diferenciação adipogênica e osteogênica. A análise imunofenotípica revelou que CTMMO e CTMTA não expressaram marcação de células hematopoéticas e que expressam o CD90 em diferentes níveis. Além disso, estas células incorporam nanocristais fluorescentes e podem ser identificadas através desta marcação por várias gerações celulares. Portanto, as células-tronco mesenquimais destes dois sítios apresentam elevada autorrenovação, com as CTMTA apresentando maior atividade proliferativa. A capacidade para diferenciação em três linhagens diferentes confirma a multipotencialidade destas células, que expressam marcação comum às células-tronco mesenquimais obtidas de outras fontes e animais. Ademais, a possibilidade de conservação por criopreservação e identificação por nanocristais fluorescentes favorecem sua futura aplicação em terapia celular.
Adult stem cells exhibit relevant clonogenic potential, easy interaction with biomaterials and ability to originate mesodermal and non mesodermal tissues without ethical implications and with minimal risk to the patient. Considering the constant search for biological models that mimic the physiology and diseases that affect humans, the introduction of new animal models is promising for applied medical research. Among the qualities that stand out in an animal model, they are relevant for easy handling, high prolificacy, longevity and resistance to multiple procedures. The agouti are rustic animals, Order Rodentia, Suborder Histricognatha, in addition to these characteristics, they are larger than common rodents used in the laboratory, and have been studied in their morphophysiological aspects and performed experimental preclinical tests. The objective of this study was to characterize mesenchymal stem cells (MSCs) from agoutis bone marrow and adipose tissue, aiming at the conservation of these cells to form biobank, in order to preserve genetic material of the species and the use of their multipotentiality in future cell therapies and research in the field of regenerative medicine. Six animals kept in the Núcleo de Estudos e Preservação de Animais Silvestres (NEPAS) of the Federal University of Piauí - UFPI. Agoutis were anesthetized to collect the bone marrow of the femur and the subcutaneous fatty tissue of the dorsal cervical region. The isolation of mesenchymal stem cells from bone marrow (BMSC) and adipose tissue (CTMTA) was performed in cell culture from the mononuclear fraction obtained through separation by density gradient with FicollPaque, and tissue fragments from physical and chemical dissociation with collagenase, respectively. After expansion of these two-cell types in vitro study procedures were performed: colony forming unity essay; cell growth curve; differentiation in adipogenic, osteogenic and chondrogenic lineages; analysis of the expression of CD90+, CD45- and CD14- markers by flow cytometry; and marking with nanocrystals of different passages of cultivation. The results demonstrated that MSCs from the two sources are adherent plastic, and exhibit organized fibroblastoid colonies into even when a low initial cell density. Three stages were observed in the growth curve of BMSC and CTMTA, related to the adjustment phase, exponential proliferation and stability of cell kinetics. When induced to adipogenic differentiation, osteogenic and chondrogenic demonstrated specialized morphological characteristics of each cell line, similar changes were viewed in BMSC were cryopreserved when induced with adipogenic and osteogenic differentiation. Phenotypic analysis revealed that BMSC and CTMTA not express hematopoietic cell marking and expressing CD90 at different levels. Moreover, these cells incorporate fluorescent nanocrystals and can be identified by several cell generations. Therefore, the mesenchymal stem cells of these two sites have high self renewal, with CTMTA showing higher proliferative activity. The ability to differentiate into three different lineages confirms the multipotentiality these cells, which express common marking of the mesenchymal stem cells obtained from other sources and animals. Furthermore, the possibility of preservation, cryopreservation and identification of fluorescent nanocrystals favor their use in future cell therapies.