Hemotropic mycoplasmas in bats from forest fragments, state of Paraná, southern Brazil / Detecção e caracterização de micoplasmas hemotrópicos em morcegos de fragmentos florestais, Paraná, Sul do Brasil

The order Chiroptera is the second largest group of mammals with bats being identified as reservoir of several viral zoonoses, although, little is known about their role in other groups of pathogens, including hemotropic Mycoplasma spp. To date, hemoplasma species have been found infecting several species of bats with high genetic diversity between 16S rRNA gene sequences. On this study, we aimed to identify the occurrence and characterize 16S and 23S rRNA genes of hemoplasma species in four bats species (Artibeus lituratus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium and Sturnira tildae) from forest fragments in Paraná State, southern Brazil, using PCR-based assays. Spleen tissue samples were collected, DNA extracted and further screened by a pan hemoplasma PCR assay. All samples consistently amplified the mammal endogenous gapdh gene. One out of 15 (6.66%; 95% CI: 0.2-31%) bats tested positive for hemotropic Mycoplasma sp. by the PCR assay targeting the 16S rRNA gene. Sequencing of the 16S rRNA gene fragment from the hemoplasma-positive bat showed 99.14% identity with hemotropic Mycoplasma sp. detected in Sturnira parvidens from Belize. Sequencing of the 23S rRNA gene fragment from the hemoplasma-positive bat showed 86.17% identity with 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus' detected in orange-spined hairy dwarf porcupines (Sphiggurus villosus) from Southern Brazil.(AU)

A ordem Chiroptera é considerada a segunda maior ordem de mamíferos do mundo, sendo os morcegos identificados como reservatórios de diversas zoonoses de origem viral, contudo, pouco se sabe sobre seu papel em outros grupos de patógenos, incluindo Mycoplasma spp. Até o momento, Mycoplasma sp., foi encontrado infectando várias espécies de morcegos ao redor do mundo, com alta diversidade genética entre sequências de genes 16S rRNA. O objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por hemoplasmas em quinze morcegos insetívoros de quatro diferentes espécies (Artibeus lituratus, Carollia perspicillata, Sturnira lilium and Sturnira tildae) provenientes de fragmentos florestais dos municípios de Mandaguaçu, Maringá e Paiçandu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Amostras de tecido foram coletadas e o DNA extraído, para posterior análise por PCR para detecção de hemoplasmas. Todas as amostras amplificaram o gene gapdh. Um morcego, do total de 15 (6.66%; 95% CI: 0.2-31%), foi positivo para Mycoplasma sp. na análise do gene16S rRNA. O sequenciamento deste fragmento genético mostrou 99,14% de identidade com Mycoplasma sp. detectado em Sturnira parvidens em Belize. O sequenciamento do fragmento do gene 23S rRNA do morcego positivo mostrou 86,17% de identidade com 'Candidatus Mycoplasma haemosphiggurus' detectado em ouriço-cacheiro (Sphiggurus villosus) no sul do Brasil.(AU)

‘Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris and tick-borne pathogens screening in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Curitiba and Foz do Iguaçu Cities, Paraná State, southern Brazil / ‘Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris e triagem para patógenos transmitidos por carrapatos em gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) das cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, Estado do Paraná, sul do Brasil

Hemoplasmas are epierythrocytic bacteria that infect mammals. ‘Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris was detected in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from southern and central-western Brazil. The present study aimed at: i) screening opossums for tick-borne (TBP) pathogens (Piroplasmida and Anaplasmataceae) and ii) detecting and characterizing hemoplasma species infecting opossums from Curitiba and Foz do Iguaçu cities in the Paraná State, southern Brazil. Thirty blood samples from white-eared opossums were evaluated by PCR assays. Animals were not infested by ectoparasites. The mammalian endogenous gapdh gene was consistently amplified in all samples. All opossums tested negative for Theileria/Babesia spp. and Ehrlichia/Anaplasma spp. by PCR based on 18S rRNA and 16S rRNA genes, respectively. A genus-specific PCR assay based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas showed that three/13 (23.08%; CI 95%: 8.18-50.26%) opossums from Foz do Iguaçu were positive for hemotropic Mycoplasma sp. All opossums from Curitiba tested negative for hemoplasmas. Sequencing of both the 16S and 23S rRNA genes revealed that the animals were infected by ‘Ca. M. haemoalbiventris. Although ‘Ca. M. haemoalbiventris is prevalent in opossums in Brazil, clinical signs associated with its infection and its putative vectors remain unknown.(AU)

Hemoplasmas são bactérias epieritrocíticas que infectam mamíferos. ‘Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris foi detectado previamente em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) das regiões sul e centro-oeste do Brasil. O presente estudo objetivou: i) triar os gambás para as doenças transmitidas por carrapatos (Piroplasmida e Anaplasmataceae); e ii) detectar e caracterizar as espécies de hemoplasma que infectam gambás nas cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Trinta amostras de sangue de gambás-de-orelha-branca foram analisadas por PCR. Os animais não estavam infestados por ectoparasitos. O gene endógeno de mamífero gapdh foi amplificado em todas as amostras. Todos os gambás testaram negativos para Theileria/Babesia spp. e Ehrlichia/Anaplasma spp. por PCR, respectivamente, para os genes 18S rRNA e 16S rRNA. Uma PCR gene-específica, baseada no gene 16S rRNA de hemoplasmas, mostrou que três/13 (23,08%; CI 95%: 8,18-50,26%) gambás de Foz do Iguaçu foram positivos para Mycoplasma sp. hemotrópico. Todos os gambás de Curitiba testaram negativos para hemoplasmas. O sequenciamento de fragmentos dos genes 16S e 23S rRNA revelou que os animais estavam infectados pelo ‘Ca. M. haemoalbiventris. Embora ‘Ca. M. haemoalbiventris seja prevalente em gambás no Brasil, os sinais clínicos associados à infecção e os prováveis vetores permanecem desconhecidos.(AU)

'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' and tick-borne pathogens screening in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Curitiba and Foz do Iguaçu Cities, Paraná State, southern Brazil / 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' e triagem para patógenos transmitidos por carrapatos em gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) das cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, Estado do Paraná, sul do Brasil

Abstract Hemoplasmas are epierythrocytic bacteria that infect mammals. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' was detected in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from southern and central-western Brazil. The present study aimed at: i) screening opossums for tick-borne (TBP) pathogens (Piroplasmida and Anaplasmataceae) and ii) detecting and characterizing hemoplasma species infecting opossums from Curitiba and Foz do Iguaçu cities in the Paraná State, southern Brazil. Thirty blood samples from white-eared opossums were evaluated by PCR assays. Animals were not infested by ectoparasites. The mammalian endogenous gapdh gene was consistently amplified in all samples. All opossums tested negative for Theileria/Babesia spp. and Ehrlichia/Anaplasma spp. by PCR based on 18S rRNA and 16S rRNA genes, respectively. A genus-specific PCR assay based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas showed that three/13 (23.08%; CI 95%: 8.18-50.26%) opossums from Foz do Iguaçu were positive for hemotropic Mycoplasma sp. All opossums from Curitiba tested negative for hemoplasmas. Sequencing of both the 16S and 23S rRNA genes revealed that the animals were infected by 'Ca. M. haemoalbiventris'. Although 'Ca. M. haemoalbiventris' is prevalent in opossums in Brazil, clinical signs associated with its infection and its putative vectors remain unknown.

Resumo Hemoplasmas são bactérias epieritrocíticas que infectam mamíferos. 'Candidatus Mycoplasma haemoalbiventris' foi detectado previamente em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) das regiões sul e centro-oeste do Brasil. O presente estudo objetivou: i) triar os gambás para as doenças transmitidas por carrapatos (Piroplasmida e Anaplasmataceae); e ii) detectar e caracterizar as espécies de hemoplasma que infectam gambás nas cidades de Curitiba e Foz do Iguaçu, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Trinta amostras de sangue de gambás-de-orelha-branca foram analisadas por PCR. Os animais não estavam infestados por ectoparasitos. O gene endógeno de mamífero gapdh foi amplificado em todas as amostras. Todos os gambás testaram negativos para Theileria/Babesia spp. e Ehrlichia/Anaplasma spp. por PCR, respectivamente, para os genes 18S rRNA e 16S rRNA. Uma PCR gene-específica, baseada no gene 16S rRNA de hemoplasmas, mostrou que três/13 (23,08%; CI 95%: 8,18-50,26%) gambás de Foz do Iguaçu foram positivos para Mycoplasma sp. hemotrópico. Todos os gambás de Curitiba testaram negativos para hemoplasmas. O sequenciamento de fragmentos dos genes 16S e 23S rRNA revelou que os animais estavam infectados pelo 'Ca. M. haemoalbiventris'. Embora 'Ca. M. haemoalbiventris' seja prevalente em gambás no Brasil, os sinais clínicos associados à infecção e os prováveis vetores permanecem desconhecidos.

Survey of vector-borne and nematode parasites involved in the etiology of anemic syndrome in sheep from Southern Brazil / Pesquisa de hemoparasitos transmitidos por vetores e nematódeos envolvidos na etiologia de síndrome anêmica em ovinos no Sul do Brasil

Although anemia has been historically linked to Haemonchus contortus infection, other infectious agents, such as hemotropic mycoplasmas and tick-borne disease pathogens, may also lead to anemic crisis in sheep. This study has aimed to investigate infections related to anemia in a sheep herd from Bandeirantes City, Paraná State, southern Brazil. Seven out of forty-two (16.6%; 95% CI: 8.3230.6%) sheep were positive for hemoplasmas by a PCR targeting the 16S rRNA gene and all tested negative for A. marginale/A. ovis and Babesia/Theileria spp. by PCR based on msp4 and 18S rRNA genes, respectively. Two (4.7%; 95% CI: 1.3215.79%) animals were infested with Rhipicephalus microplus ticks. Fecal egg counting was performed in 38 sheep and 24 (63.15%; 95% CI: 47.276.6%) presented > 500 eggs per gram. Phylogenetic analysis of partial sequences of the detected hemotropic Mycoplasma sp. 16S and 23S rRNA genes confirmed that the animals were infected with Mycoplasma ovis. Polymorphism analysis of partial 16S rRNA sequences showed three different genotypes of M. ovis infecting sheep assessed in the present study. Mycoplasma ovis and gastrointestinal nematodes occurs in sheep from the northern region of Paraná State.(AU)

Embora a principal causa de anemia seja historicamente relacionada à infecção por Haemonchus contortus, outros agentes infecciosos, como micoplasmas hemotrópicos e patógenos transmitidos por carrapatos, também podem causar quadros anêmicos em ovinos. O presente estudo objetivou investigar infecções relacionadas à anemia em um rebanho de ovinos, na cidade de Bandeirantes, Estado do Paraná, sul do Brasil. Sete (16,6%; 95% CI: 8,3230,6%) de 42 ovinos foram positivos para hemoplasmas pela PCR do gene 16S rRNA, enquanto todos foram negativos para A. marginale/A. ovis e Babesia/Theileria spp. por ensaios da PCR baseados nos genes msp4 e 18S rRNA, respectivamente. Dois (4,7%; 95% CI: 1,3215,79%) animais estavam infestados por carrapatos Rhipicephalus microplus. Dos 38 animais nos quais foi realizada a contagem de ovos por grama de fezes (OPG), 24 (63,15%; 95% CI: 47,276,6%) apresentaram valores >500 para OPG. A análise filogenética das sequências parciais dos genes 16S rRNA e 23S rRNA de hemoplasmas confirmou a infecção por Mycoplasma ovis. A análise de polimorfismos de um fragmento do gene 16S rRNA mostrou a ocorrência de três genótipos diferentes de M. ovis nos animais. Mycoplasma ovis e nematódeos gastrointestinais ocorrem em ovinos da região nordeste do Estado do Paraná.(AU)

Detection of Hemotropic Mycoplasma sp. in white-eared opossums (Didelphis albiventris) from Southern Brazil / Detecção de Mycoplasma sp. hemotrópico em gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) no Sul do Brasil

Opossums are marsupials from the New World of the genus Didelphis and known as synanthropic animals due to their proximity with human beings. To date, Candidatus Mycoplasma haemodidelphis has been solely found infecting the North American opossum (Didelphis virginiana). Accordingly, the aim of this study was to screen eight white-eared opossums (Didelphis albiventris) from a public park in Maringa city, Paraná State, southern Brazil, for hemoplasma infection. Blood samples were taken from caudal venipuncture, and DNA was extracted and further screened by a pan-hemoplasma PCR assay. Seven out of eight (87.50%; CI 95%: 47.35-99.68%) white-eared opossums were positive for Mycoplasma spp. Sequencing of the 16S rRNA fragment showed 98,97% identity with Ca. M. haemodidelphis detected in the USA. Three out of eight (37.50%; CI 95%: 8.52-75.51%) white-eared opossums were infested by Amblyomma dubitatum ticks. This is the first report on detection of a potentially novel hemotropic Mycoplasma sp. infecting opossums from South America.(AU)

Gambás são marsupiais do Novo Mundo, pertencentes ao gênero Didelphis, e considerados animais sinantrópicos devido à sua proximidade com seres humanos. Atualmente, a espécie Candidatus Mycoplasma haemodidelphis só foi encontrada infectando gambá norte americano (Didelphis virginiana). O objetivo do presente estudo foi detectar a infecção por hemoplasmas em oito gambás-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) capturados em um parque público da cidade de Maringá, no Estado do Paraná, sul do Brasil. Amostras de sangue foram coletadas por venopunção caudal para a extração do DNA e posterior análise pela PCR para espécies de hemoplasmas. Sete de oito animais (87,50%; CI 95%: 47,35-99,68%) foram considerados positivos para Mycoplasma spp. O sequenciamento do fragmento do gene 16S rRNA obtido apresentou 98.97% de similaridade com sequências de Ca. M. haemodidelphis detectadas nos Estados Unidos. Três gambás (37,50%; CI 95%: 8,52-75,51%) estavam infestados por carrapatos da espécie Amblyomma dubitatum. Esse é o primeiro relato de detecção de uma potencial nova espécie de Mycoplasma hemotrópico infectando gambás na América do Sul.(AU)

First molecular detection of Mycoplasma ovis (Hemotropic mycoplasmas) from Sheep in Brazil / Primeira detecção molecular de Mycoplasma ovis (Micoplasmas Hemotrópicos) em Ovinos no Brasil

Mycoplasma ovis is an emerging zoonotic pathogen with a worldwide distribution and can cause mild to severe hemolytic anemia, icterus, and poor weight gain in animals. Although M. ovis has been described in small ruminants worldwide, data on M. ovis in sheep in Brazil is unknown. The objective of the present study was to present the first report of hemotropic mycoplasma (HM) in sheep from Brazil. We evaluated factors associated with this infection, such age group, tick presence, and anemia. Blood samples were collected from 33 sheep from a farm in southern Brazil and screened for hemoplasmas using PCR. Out of 33 samples, 26 (78.8%) tested positive for M. ovis. The sequencing of positive samples showed 100% identity with multiple M. ovis 16S rDNA sequences. No association was observed between the presence of M. ovis and the FAMACHA© score (p = 0.620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45.4%) was the tick species found on the animals. No significant association between M. ovis infection and presence of ticks (p = 0.4134) and age group (p = 0.4221) was observed. This is the first report of M. ovis infection in sheep from Brazil and only the second report of this pathogen in sheep in Latin America.(AU)

Mycoplasma ovis é um patógeno zoonótico emergente com distribuição mundial e pode causar anemia hemolítica de leve a grave, icterícia e baixo ganho de peso em animais. Embora M. ovis tenha sido descrito em pequenos ruminantes em todo o mundo, os dados sobre M. ovis em ovinos no Brasil são desconhecidos. O objetivo deste estudo foi apresentar o primeiro relato de micoplasmas hemotrópicos em ovinos no Brasil. Avaliamos os fatores associados a essa infecção, como faixa etária, presença de carrapatos e anemia. Amostras de sangue foram coletadas de 33 ovelhas de uma fazenda no sul do Brasil e testadas para hemoplasmas usando a PCR. Das 33 amostras, 26 (78,8%) apresentaram resultado positivo. O sequenciamento das amostras positivas mostrou 100% de identidade com múltiplas sequências de M. ovis 16S rDNA. Não foi observada associação entre a presença de M. ovis e o escore FAMACHA© (p = 0,620). Rhipicephalus (Boophilus) microplus (15/33, 45,4%) foi a espécie de carrapato encontrada nos animais. Não houve associação significativa entre infecção por M. ovis e presença de carrapatos (p = 0,4134) e faixa etária (p = 0,4221). Este é o primeiro relato de infecção por M. ovis em ovinos no Brasil e o segundo relato deste patógeno em ovinos na América Latina.(AU)

Hemotropic mycoplasmas in naturally infected cats in Northeastern Brazil / Micoplasmas hemotróficos em gatos naturalmente infectados no Nordeste do Brasil

This study aimed to determine the prevalence, factors associated, laboratory findings (with and without coinfection by retroviruses) among naturally infected cats by hemoplasmas in northeastern Brazil. For convenience, 200 domesticated and healthy cats were selected. Blood samples were taken to perform complete blood counts, serum biochemical, immunochromatography tests and nPCR for FIV and FeLV, and PCR for hemoplasma recognition. An interview was conducted to determine the factors associated with hemoplasmas. A total of 71/200 (35.5%) cats were positive for at least one hemoplasma species. Isolated infections were observed in 12,5% for 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% for Mycoplasma haemofelis and 3% for 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Regarding copositivity, 2% of the animals were positive for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1.5% for M. haemofelis and 'Candidatus Mycoplasma turicensis', and 4.5% for 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' and 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. No clinical and laboratory changes were observed in the animals that were concomitantly positive for retroviruses and hemoplasmas. Periurban region cats were more likely to be infected by M. haemofelis, while contact with other cats and infection by 'Candidatus Mycoplasma turicensis' were associated with 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. This study indicates that infection by hemoplasmas is a common find in cats from northeastern Brazil.(AU)

Objetivou-se com este estudo determinar a prevalência, fatores associados, achados laboratoriais (com e sem coinfecção com retrovírus) em gatos naturalmente infectados por hemoplasmas no Nordeste do Brasil. Selecionou-se, por conveniência, 200 gatos domiciliados, hígidos, sendo colhidas amostras de sangue para realização do hemograma, bioquímica sérica, imunocromatografia e nested-PCR para FIV e FeLV, e PCR para identificação dos hemoplasmas. Uma entrevista foi realizada para determinação dos fatores associados aos hemoplasmas. A frequência de positividade foi de 35,5% (71/200). Infecções isoladas foram observadas em 12,5% dos animais para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 12% para Mycoplasma haemofelis e 3% para 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Quanto a co-positividades, 2% dos animais foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma haemominutum', 1,5% foram positivos para M. haemofelis e 'Candidatus Mycoplasma turicensis', e 4,5% foram positivos para 'Candidatus Mycoplasma haemominutum' e 'Candidatus Mycoplasma turicensis'. Não foram observadas alterações clínicas ou laboratoriais nos animais positivos para retrovírus e hemoplasmas, concomitantemente. A região periurbana foi identificada como fator de risco associado a M. haemofelis. Enquanto o contato com outros gatos e a infecção por 'Candidatus Mycoplasma turicensis' foi associado à 'Candidatus Mycoplasma haemominutum'. Este estudo indica que a presença dos agentes da micoplasmose hemotrópica felina é comum no Nordeste brasileiro.(AU)

Prevalence of 'Candidatus Mycoplasma haemobos' detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil

ABSTRACT: The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of ' Candidatus Mycoplasma haemobos' by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of 'Ca. M. haemobos' was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with ' Ca. M. haemobos' infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health.

RESUMO: O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de ' Candidatus Mycoplasma haemobos' usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de ' Ca. M. haemobos' foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por ' Ca. M. haemobos'. Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho.

Prevalence of "Candidatus Mycoplasma haemobos" detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil / Prevalência de Candidatus Mycoplasma haemobos pela PCR, em bovinos leiteiros de Ji-Paraná na região norte do Brasil

The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of " Candidatus Mycoplasma haemobos" by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of "Ca. M. haemobos" was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with " Ca. M. haemobos" infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health.

O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de " Candidatus Mycoplasma haemobos" usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de " Ca. M. haemobos" foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por " Ca. M. haemobos". Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho.

Prevalence of "Candidatus Mycoplasma haemobos" detected by PCR, in dairy cattle from Ji-Paraná in the north region of Brazil / Prevalência de Candidatus Mycoplasma haemobos pela PCR, em bovinos leiteiros de Ji-Paraná na região norte do Brasil

The municipality of Ji-Paraná, Rondônia, is one of the major dairy production areas in the north region of Brazil. Thus, it is important to evaluate infectious agents that have the potential to negatively affect productivity in the industry. The objective of this study was to investigate the prevalence of " Candidatus Mycoplasma haemobos" by using a PCR-based detection method and correlate this with dairy herd variables (abortion frequency, weak calf birth rate, total cattle number, >24-month-old cow number, farm size, and production system) in family farms of the Ji-Paraná municipality, north region, Brazil. Blood samples were collected from 320 dairy cows located across 64 farms (i.e., five animals per farm) from September 2012 to November 2013. Overall prevalence of "Ca. M. haemobos" was 64.2% and prevalence per herd was 95.3%; the number of >24-month-old cows in the farms studied correlated with " Ca. M. haemobos" infection rates. Considering the importance of the dairy industry to the study area, additional investigations are necessary to evaluate the effect of chronic infection in these animals on milk production and herd health. (AU)

O município de Ji-Paraná, Rondônia, é uma das principais áreas de produção leiteira na região norte do Brasil. Assim, é importante avaliar agentes infecciosos que apresentam potencial para afetar negativamente a produtividade na indústria. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de " Candidatus Mycoplasma haemobos" usando um método de detecção baseado na PCR e relacionar com variáveis do rebanho leiteiro (frequência de aborto, nascimento de bezerros fracos, número total de vacas, número de vacas >24 meses de idade, tamanho da propriedade e, sistema de produção) na agricultura familiar do município de Ji-Paraná, região norte, Brasil. Amostras de sangue foram coletadas de 320 vacas leiteiras localizadas em 64 fazendas (ou seja, cinco animais por exploração) de setembro de 2012 a novembro de 2013. A prevalência total de " Ca. M. haemobos" foi de 64,2% e a prevalência por rebanho foi de 95,3%; o número de vacas >24 meses de idade nas propriedades estudadas correlacionou-se com as taxas de infecção por " Ca. M. haemobos". Considerando a importância da indústria de laticínios para a área de estudo, investigações adicionais são necessárias para avaliar o efeito da infecção crônica nestes animais na produção de leite e saúde do rebanho. (AU)

Occurrence and phylogenetic analysis of Candidatus Mycoplasma haemominutum in wild felines from Paraná, Brazil / Ocorrência e análise filogenética de Candidatus Mycoplasma haemominutum em felinos selvagens no Paraná, Brasil

Hemoplasma infections are emerging and wild fauna can represent an important reservoir of these pathogens. However, there are very few epidemiological studies about the occurrence of hemoplasmas in wild cats around the world. The purpose of this study is twofold: (1) evaluate the occurrence and phylogeny of hemoplasmas in captive wild felines at a zoo in the state of Paraná, Brazil, and (2) verify the correlation between subpopulations of these bacteria and the hematological and biochemical parameters of the animals. PCR was used to detect hemoplasmas in the blood of three cougars (Puma concolor), a jaguar (Panthera onca), a tiger (Panthera tigris) and a lion (Panthera leo), followed by sequencing and phylogenetic analysis. The cougars and jaguar were found to be hemoplasma-positive by PCR. The phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene sequences enabled the identification of genotypes of Candidatus Mycoplasma haemominutum circulating in this zoo. The identified sequences were closely related to hemoplasma sequences originating from domestic cats and other wild cats, but the infected cougars and jaguar were healthy and showed no hematological or biochemical changes. It was concluded that P. concolor and P. onca are exposed to Candidatus Mycoplasma haemominutum in Paraná, but further research is suggested to assess the resistance of wild cats to different hemoplasma subpopulations.

Infecções por hemoplasmas são emergentes e os animais selvagens podem representar um importante reservatório desses patógenos. Entretanto, são escassos os estudos epidemiológicos sobre a ocorrência de hemoplasmas em felinos selvagens em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi (1) avaliar a ocorrência e a filogenia de hemoplasmas em felinos selvagens cativos em um zoológico do Estado do Paraná, Brasil, (2) e verificar a correlação entre as subpopulações destas bactérias e os parâmetros hematológicos e bioquímicos dos animais. A PCR foi utilizada para detecção de hemoplasmas em sangue de três pumas (Puma concolor), uma onça (Panthera onca), um tigre (Panthera tigris) e uma leoa (Panthera leo), seguida de sequenciamento e análise filogenética. Constatou-se que os pumas e a onça foram PCR-positivos para hemoplasma. A análise filogenética das sequências do gene 16S rRNA permitiu identificar genótipos de Candidatus Mycoplasma haemominutum circulando neste zoo. As sequências identificadas apresentaram relações estreitas com sequências de hemoplasmas procedentes de gatos domésticos e de outros felinos selvagens; contudo, os pumas e a onça infectados apresentaram-se saudáveis e sem alterações hematológicas ou bioquímicas. Conclui-se que P. concolor e P. onca são expostos à Candidatus Mycoplasma haemominutum no Paraná, porém sugere-se a realização de pesquisas futuras para avaliar a resistência dos felinos selvagens frente à diferentes subpopulações dehemoplasmas.

Occurrence and phylogenetic analysis of Candidatus Mycoplasma haemominutum in wild felines from Paraná, Brazil / Ocorrência e análise filogenética de Candidatus Mycoplasma haemominutum em felinos selvagens no Paraná, Brasil

Hemoplasma infections are emerging and wild fauna can represent an important reservoir of these pathogens. However, there are very few epidemiological studies about the occurrence of hemoplasmas in wild cats around the world. The purpose of this study is twofold: (1) evaluate the occurrence and phylogeny of hemoplasmas in captive wild felines at a zoo in the state of Paraná, Brazil, and (2) verify the correlation between subpopulations of these bacteria and the hematological and biochemical parameters of the animals. PCR was used to detect hemoplasmas in the blood of three cougars (Puma concolor), a jaguar (Panthera onca), a tiger (Panthera tigris) and a lion (Panthera leo), followed by sequencing and phylogenetic analysis. The cougars and jaguar were found to be hemoplasma-positive by PCR. The phylogenetic analysis of the 16S rRNA gene sequences enabled the identification of genotypes of Candidatus Mycoplasma haemominutum circulating in this zoo. The identified sequences were closely related to hemoplasma sequences originating from domestic cats and other wild cats, but the infected cougars and jaguar were healthy and showed no hematological or biochemical changes. It was concluded that P. concolor and P. onca are exposed to Candidatus Mycoplasma haemominutum in Paraná, but further research is suggested to assess the resistance of wild cats to different hemoplasma subpopulations.(AU)

Infecções por hemoplasmas são emergentes e os animais selvagens podem representar um importante reservatório desses patógenos. Entretanto, são escassos os estudos epidemiológicos sobre a ocorrência de hemoplasmas em felinos selvagens em todo o mundo. O objetivo deste estudo foi (1) avaliar a ocorrência e a filogenia de hemoplasmas em felinos selvagens cativos em um zoológico do Estado do Paraná, Brasil, (2) e verificar a correlação entre as subpopulações destas bactérias e os parâmetros hematológicos e bioquímicos dos animais. A PCR foi utilizada para detecção de hemoplasmas em sangue de três pumas (Puma concolor), uma onça (Panthera onca), um tigre (Panthera tigris) e uma leoa (Panthera leo), seguida de sequenciamento e análise filogenética. Constatou-se que os pumas e a onça foram PCR-positivos para hemoplasma. A análise filogenética das sequências do gene 16S rRNA permitiu identificar genótipos de Candidatus Mycoplasma haemominutum circulando neste zoo. As sequências identificadas apresentaram relações estreitas com sequências de hemoplasmas procedentes de gatos domésticos e de outros felinos selvagens; contudo, os pumas e a onça infectados apresentaram-se saudáveis e sem alterações hematológicas ou bioquímicas. Conclui-se que P. concolor e P. onca são expostos à Candidatus Mycoplasma haemominutum no Paraná, porém sugere-se a realização de pesquisas futuras para avaliar a resistência dos felinos selvagens frente à diferentes subpopulações dehemoplasmas.(AU)

Occurrence, clinical and laboratorial characteristics of dogs infected by hemotropic mycoplasmas (Mycoplasma haemocanis and Candidatus Mycoplasma haematoparvum): a four years study in animals attended in a veterinary hospital located in São Paulo, town, Brazil / Ocorrência e características clínicas e laboratoriais de cães infectados por micoplasmas hemotrópicos (Mycoplasma haemocanis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum): estudo de quatro anos em animais atendidos em hospital veterinário localizado no município de São Paulo, Brasil

Canine hemoplasma infections are usually chronicand asymptomatic, and under immunosuppression,coinfections with other etiological agents, or splenectomy,they can cause anemia and emaciation, among otherclinical manifestations. This study analyzed the medicalrecords of 194 dogs treated at the Pet Care VeterinaryHospital, São Paulo, Brazil, between 2011 and 2015,subjected to real-time PCR for Mycoplasma haemocanisand Candidatus Mycoplasma haematoparvum, anddescribes the main clinical and laboratory characteristicsof the infected patients. Five males (71.42%) andtwo females (28.57%) had become infected by thesehemoplasmas, determining a 3.6% frequency. Amongthese animals, six were elderly (87.71%), between eightand 18 years old, and all patients had comorbidities,especially Ehrlichiosis (57.14%). Anemia was found intwo dogs (28.57%), and thrombocytopenia in three(42.85%). All animals with decreased platelet count werecoinfected by E. canis. No correlation was found betweenmycoplasma infection, fever, and leukocyte count inpositive animals. The conclusion reached was that inthe population investigated, frequency of hemoplasmainfection was low, and the cases observed predominatedin males and elderly patients coinfected by Ehrlichia canis.

As infecções caninas por hemoplasmas são geralmente crônicase assintomáticas e, sob situações de imunossupressão,coinfecções com outros agentes etiológicos ou esplenectomia,podem gerar anemia e emaciação, dentre outras manifestaçõesclínicas. O presente trabalho analisou os prontuários de194 animais da espécie canina atendidos no Hospital VeterinárioPet Care, na cidade de São Paulo, Brasil, no períodode 2011 a 2015 e submetidos à PCR em tempo real paraMycoplasma haemocanis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum,e descrevendo as principais características clínicase laboratoriais dos pacientes infectados. Dos 194 animais observados,cinco machos (71,42%) e duas fêmeas (28,57%)apresentaram-se infectados pelos hemoplasmas acima referidos,determinando uma frequência de ocorrência de 3,6%.Dos sete pacientes positivos, seis eram idosos, com idade entreoito e 18 anos (87,71%) e todos apresentavam comorbidades,com destaque para erliquiose (57,14%). Anemia foiencontrada em dois cães (28,57%) e trombocitopenia emtrês (42,85%), e todos os animais com contagem plaquetáriadiminuída apresentaram-se coinfectados por E. canis. Não seobservou correlação entre a infecção pelos micoplasmas, febree contagem leucocitária nos animais positivos. A conclusãoobtida é de que, na população investigada, a frequênciade ocorrência de infecção por Micoplasmas hemotrópicos foibaixa e os casos observados predomina

Occurrence, clinical and laboratorial characteristics of dogs infected by hemotropic mycoplasmas (Mycoplasma haemocanis and Candidatus Mycoplasma haematoparvum): a four years study in animals attended in a veterinary hospital located in São Paulo, town, Brazil / Ocorrência e características clínicas e laboratoriais de cães infectados por micoplasmas hemotrópicos (Mycoplasma haemocanis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum): estudo de quatro anos em animais atendidos em hospital veterinário localizado no município de São Paulo, Brasil

Canine hemoplasma infections are usually chronicand asymptomatic, and under immunosuppression,coinfections with other etiological agents, or splenectomy,they can cause anemia and emaciation, among otherclinical manifestations. This study analyzed the medicalrecords of 194 dogs treated at the Pet Care VeterinaryHospital, São Paulo, Brazil, between 2011 and 2015,subjected to real-time PCR for Mycoplasma haemocanisand Candidatus Mycoplasma haematoparvum, anddescribes the main clinical and laboratory characteristicsof the infected patients. Five males (71.42%) andtwo females (28.57%) had become infected by thesehemoplasmas, determining a 3.6% frequency. Amongthese animals, six were elderly (87.71%), between eightand 18 years old, and all patients had comorbidities,especially Ehrlichiosis (57.14%). Anemia was found intwo dogs (28.57%), and thrombocytopenia in three(42.85%). All animals with decreased platelet count werecoinfected by E. canis. No correlation was found betweenmycoplasma infection, fever, and leukocyte count inpositive animals. The conclusion reached was that inthe population investigated, frequency of hemoplasmainfection was low, and the cases observed predominatedin males and elderly patients coinfected by Ehrlichia canis.(AU)

As infecções caninas por hemoplasmas são geralmente crônicase assintomáticas e, sob situações de imunossupressão,coinfecções com outros agentes etiológicos ou esplenectomia,podem gerar anemia e emaciação, dentre outras manifestaçõesclínicas. O presente trabalho analisou os prontuários de194 animais da espécie canina atendidos no Hospital VeterinárioPet Care, na cidade de São Paulo, Brasil, no períodode 2011 a 2015 e submetidos à PCR em tempo real paraMycoplasma haemocanis e Candidatus Mycoplasma haematoparvum,e descrevendo as principais características clínicase laboratoriais dos pacientes infectados. Dos 194 animais observados,cinco machos (71,42%) e duas fêmeas (28,57%)apresentaram-se infectados pelos hemoplasmas acima referidos,determinando uma frequência de ocorrência de 3,6%.Dos sete pacientes positivos, seis eram idosos, com idade entreoito e 18 anos (87,71%) e todos apresentavam comorbidades,com destaque para erliquiose (57,14%). Anemia foiencontrada em dois cães (28,57%) e trombocitopenia emtrês (42,85%), e todos os animais com contagem plaquetáriadiminuída apresentaram-se coinfectados por E. canis. Não seobservou correlação entre a infecção pelos micoplasmas, febree contagem leucocitária nos animais positivos. A conclusãoobtida é de que, na população investigada, a frequênciade ocorrência de infecção por Micoplasmas hemotrópicos foibaixa e os casos observados predomina(AU)

DETECÇÃO E CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE MICOPLASMAS HEMOTRÓPICOS E Coxiella burnetii EM MAMÍFEROS DA SUPERORDEM XENARTHRA NO BRASIL

Embora mamíferos da superordem Xenarthra sejam considerados hospedeiros de uma ampla gama de agentes zoonóticos, são raros os trabalhos que visam investigar o papel desses animais como hospedeiros de bactérias com potencial zoonótico. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência e caracterizar molecularmente o DNA de Coxiella burnetii e hemoplasma (micoplasmas hemotrópicos) em amostras de sangue e baço de 397 mamíferos Xenarthra de vida livre (233 preguiças, 107 tamanduás e 57 tatus) em cinco estados brasileiros (Mato Grosso do Sul, São Paulo, Pará, Rondônia e Rio Grande do Sul). Todas as amostras biológicas de Xenarthra foram negativas na qPCR para Coxiella burnetii com base no gene IS1111. A ausência de DNA de C. burnetii em amostras de sangue e baço de Xenarthra sugere que esses mamíferos podem não atuar como possíveis hospedeiros desse agente nas localidades estudadas. Quando realizados ensaios de PCR convencionais para o gene endógeno (gapdh) de mamífero, 386 amostras foram positivas. Quando triados por ensaios moleculares baseados no gene 16S rRNA de hemoplasmas, 81 amostras foram positivas, sendo 15,54% (60/386) positivas por PCR convencional e 5,44% (21/386) positivas por PCR em tempo real; três amostras foram positivas em ambos os ensaios. Destes, 39,74% (31/78) também foram positivos para o gene 23S rRNA e 7,69% (6/78) para o gene hemoplasma RNAse P. Entre as amostras positivas para hemoplasmas, 25,64% (20/78) foram obtidas de tamanduás, 39,74% (31/78) de preguiças e 34,61% (27/78) de tatus. Com base na baixa identidade e no posicionamento filogenético das sequências 16S rRNA e 23S rRNA de hemoplasmas detectados em tamanduás, tatus e preguiças, o presente estudo mostrou, pela primeira vez, a ocorrência de um novo putativo de Candidatus hemotrópico Mycoplasma spp. ('Candidatus Mycoplasma haematotetradactyla', 'Candidatus Mycoplasma haematomaximus' e 'Candidatus Mycoplasma haematotridactylus').

Although mammals of the superorder Xenarthra are considered hosts of a wide range of zoonotic agents, works aiming at investigating the role of these animals as hosts for bacteria with zoonotic potential are rare. The present study aimed to investigate the occurrence and molecularly characterize Coxiella burnetii and hemoplasma (hemotropic mycoplasmas) DNA in blood and spleen samples from 397 free-living Xenarthra mammals (233 sloths, 107 anteaters, and 57 armadillos) in five Brazilian states (Mato Grosso do Sul, São Paulo, Pará, Rondônia, and Rio Grande do Sul). All biological samples from Xenarthra were negative in the qPCR for Coxiella burnetii based on the IS1111 gene. The absence of C. burnetii DNA in blood and spleen samples from Xenarthra suggests that these mammals may not act as possible hosts for this agent in the locations studied. When performed conventional PCR assays for the endogenous (gapdh) mammalian gene, 386 samples were positive. When screened by molecular assays based on the 16S rRNA gene of hemoplasmas, 81 samples were positive, of which 15.54% (60/386) were positive by conventional PCR and 5.44% (21/386) were positive by real-time PCR; three samples were positive in both assays. Of these, 39.74% (31/78) were also positive for the 23S rRNA gene and 7.69% (6/78) for the hemoplasma RNAse P gene. Among the samples positive for hemoplasmas, 25.64% (20/78) were obtained from anteaters, 39.74% (31/78) from sloths, and 34.61% (27/78) from armadillos. Based on the low identity and phylogenetic positioning of 16S rRNA and 23S rRNA sequences of hemoplasmas detected in anteaters, armadillos and sloths, the present study showed, for the first time, the occurrence of putative new Candidatus hemotropic Mycoplasma spp. ('Candidatus Mycoplasma haematotetradactyla', 'Candidatus Mycoplasma haematomaximus', and 'Candidatus Mycoplasma haematotridactylus').

MOLECULAR DETECTION AND GENETIC DIVERSITY OF ARTHROPOD AND TREMATODE-BORNE AGENTS IN NON-HEMATOPHAGOUS BATS FROM MIDWESTERN BRAZIL

Estima-se que 75% das doenças emergentes compreendam zoonoses, cuja maioria tem como fontes de infecção animais selvagens; destas, cerca de 22,8% são veiculadas por vetores artrópodes. Desta forma, monitorar a presença de patógenos em animais selvagens em nichos compartilhados com seres humanos se torna um importante método preventivo de infecções zoonóticas. As famílias Bartonellaceae e Anaplasmataceae englobam Alphaproteobactérias Gram-negativas, intracelulares facultativas e obrigatórias, respectivamente, que vêm sendo identificadas em uma ampla variedade de mamíferos, incluindo seres humanos. Já os micoplasmas hemotróficos são bactérias Gram-negativas sem parede celular, de localização epieritrocitária, que podem causar desde infecções assintomáticas até anemia hemolítica severa, tanto em animais como em humanos. Coxiella burnetii é o principal representante da família Coxiellaceae (Gammaproteobactérias) e é conhecida por causar a Febre Q em humanos. Apesar de ser transmitido por aerossóis, esse agente vem sendo detectado em diversos ectoparasitos que talvez possam atuar em seu ciclo de vida. Já os piroplasmas são protozoários da ordem Piroplasmida e causam principalmente anemia hemolítica em animais de produção, domésticos e, eventualmente, em seres humanos. Embora esses agentes supracitados vêm sendo cada vez mais estudados em quirópteros, ainda pouco se sabe a respeito de sua ocorrência e diversidade genética em morcegos no Brasil. Os principais ectoparasitos encontrados nesses animais são representados por moscas das famílias Streblidae e Nycteribiidae, carrapatos, e ácaros das famílias Spinturnicidae e Macronyssidae. Considerando os patógenos de interesse em Saúde Pública supracitados e a expressiva representatividade de animais da ordem Chiroptera no Brasil, objetivou-se obter informações sobre a ocorrência e diversidade genética de agentes Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae e protozoários da ordem Piroplasmida em quirópteros e seus respectivos ectoparasitos coletados em área periurbana da cidade de Campo Grande, estado do Mato Grosso do Sul, no centro-oeste brasileiro. Um total de 418 amostras (135 amostras de baço, 133 de sangue e 150 ectoparasitos) foram coletados de 135 animais das famílias Phyllostomidae, Vespertillionidae e Mollossidae. Por meio de técnicas moleculares verificou-se positividade de 18,13% (34/418) para Bartonella spp. dentre todas as amostras coletadas. Dessas, 17 amostras foram clonadas para o gene gltA a fim de obter 3 clones de cada uma para acessar a diversidade genotípica dentro da mesma amostra biológica. Com os 51 gltA-clones obtidos foi possível observar 13 genótipos diferentes, sendo que pelo menos dois ocorreram dentro de uma mesma amostra. Análises filogenéticas baseadas nos genes ftsZ, rpoB e nuoG confirmaram a alta diversidade de genótipos de Bartonella spp. em quirópteros e seus ectoparasitos. Para agentes Anaplasmataceae, foi observada positividade de 1,67% (7/418), 11,96% (50/418) e 13,63% (57/418) das amostras testadas para Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) e Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectivamente. As sequências obtidas mostraram-se similares a Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, e Neorickettsia findlayensis por análise iv pelo nBLAST, e filogeneticamente relacionado a Ehrlichia ruminantium baseado no gene gltA. Trata-se da primeira evidência molecular de agentes Anaplasmataceae em quirópteros e ectoparasitos associados no Brasil. Já para hemoplasmas, positividade de 13,6% (57/418) foi observada. Dentre as 24 sequências obtidas pelo gene 16S rRNA foi possível encontrar 12 genótipos diferentes que se distribuíram pelo macroclado do grupo haemofelis. As duas sequências 23S rRNA obtidas se posicionaram próximas a Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis e M. haemocanis. Todas as amostras de sangue e baço dos morcegos amostrados mostraram-se negativas na qPCR para C. burnetii baseada no gene IS1111. Para piroplasmídeos, 17 dos 135 (12,6%) morcegos amostrados mostraram-se positivos para agentes da ordem Piroplasmida (gene 18S rRNA). Trata-se do primeiro relato molecular de piroplasmídeos em quirópteros no Brasil. A análise filogenética mostrou a possível ocorrência de duas novas espécies: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., posicionado filogeneticamente próximo a Babesia canis e B. vogeli, e Piroplasmid n. sp. P. discolor, que formou um clado monofilético. Infelizmente, as amostras de ectoparasitos não puderam ser utilizadas na detecção de piroplasmídeos e C. burnetii. Enquanto moscas Streblidae mostraram positividade nos ensaios moleculares para Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) e Mycoplasma spp. (1/64), carrapatos Ornithodoros hasei mostraram-se positivos para Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) e Neorickettsia spp. (1/19); por fim, ácaros Spinturniciidae e Macronyssidae apresentaram positividade para Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) e Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae e 6/46 Spinturnicidae). Ainda, co-positividade para os diversos agentes pesquisados foi observada no presente estudo. Como conclusão, morcegos não-hematófagos de área periurbana do centro-oeste brasileiro atuam como hospedeiros para diversos genótipos de Bartonella spp. e hemoplasmas, para Ehrlichia spp. filogeneticamente associadas a E. ruminantium e para duas possíveis novas espécies de piroplasmídeos.

It is estimated that 75% of emerging diseases comprise zoonoses, most of which have wild animals as sources of infection; of these, about 22.8% are carried by arthropod vectors. Thus, monitoring the presence of pathogens in wild animals in niches shared with humans becomes an important preventive method for zoonotic infections. Bartonellaceae and Anaplasmataceae families comprise Gram-negative, facultative and obligate intracellular Alphaproteobacteria, respectively, that have been identified in a wide variety of mammals, including humans. On the other hand, hemotrophic mycoplasmas are epierythrocytic Gram-negative bacteria lacking cell wall, which can cause from asymptomatic infections to severe hemolytic anemia, both in animals and in humans. Coxiella burnetii is the main representative of the Coxiellaceae family (Gammaproteobacteria) and is known to cause Q fever in humans. Despite being transmitted by aerosols, this agent has been detected in several ectoparasites that may act in its life cycle. Piroplasmids, on the other hand, are protozoa of the order Piroplasmida, which can cause hemolytic anemia in farm and domestic animals and, occasionally, in humans. Although the abovementioned agents have been increasingly studied in bats, little is known about their occurrence and genetic diversity in bats from Brazil. The main ectoparasites found in these animals are Streblidae and Nycteribiidae flies, soft ticks, and Spinturnicidae and Macronyssidae mites. Considering the abovementioned pathogens of interest in Public Health and the expressive representation of animals of the order Chiroptera in Brazil, this study aimed to investigate the occurrence and genetic diversity of Anaplasmataceae, Bartonellaceae, Mycoplasmataceae, Coxiellaceae agents and protozoa of the order Piroplasmida in chiropterans and their respective ectoparasites collected in a periurban area of the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, in central-western Brazil. A total of 418 samples (135 spleen, 133 blood and 150 ectoparasites) were collected from 135 animals of the Phyllostomidae, Vespertillionidae and Mollossidae families. Based on molecular assays, positivity of 18.13% (34/418) for Bartonella spp. was found among all collected samples. Out of these, 17 samples had their amplified Bartonella gltA amplicons cloned in order to obtain 3 clones of each one aiming at assessing the genotypic diversity within the same sample. Among the 51 Bartonella gltA-clones obtained, 13 different genotypes were found, with at least two occurring within individual samples. Phylogenetic analyses based on the ftsZ, rpoB and nuoG genes confirmed the high genotype diversity of Bartonella spp. in bats and their ectoparasites. For Anaplasmataceae agents, positivity of 1.67% (7/418), 11.96% (50/418) and 13.63% (57/418) was observed for Anaplasma spp. (16S rRNA), Ehrlichia spp. (dsb) and Neorickettsia spp. (16S rRNA), respectively. The sequences obtained were closely related to Anaplasma phagocytophilum, Ehrlichia minasensis, Neorickettsia risticii, and Neorickettsia findlayensis by BLASTn analyses, and phylogenetically related to Ehrlichia ruminantium based on gltA gene. This is the first molecular evidence of Anaplasmataceae agents in bats and associated ectoparasites from Brazil. Positivity of 13.6% (57/418) for hemoplasmas was found. Among the 24 sequences obtained by the 16S rRNA gene, it was possible to find 12 different vi hemoplasma genotypes that were distributed into Haemofelis group. The two obtained 23S rRNA hemoplasma sequences were closely related to Candidatus Mycoplasma haematohydrochaerus, M. haemofelis and M. haemocanis. All bats blood and spleen samples were negative in the qPCR for C. burnetii based on the IS1111 gene. Seventeen of the 135 (12.6%) bats were positive for Piroplasmida (18S rRNA gene). This is the first molecular report of piroplasmids in bats from Brazil. Phylogenetic analysis showed the possible occurrence of two new species: Piroplasmid n. sp. Artibeus spp., which was closely related to Babesia canis and B. vogeli, and Piroplasmid n. sp. P. discolor, which formed a monophyletic clade. Unfortunately, the ectoparasite samples could not be used in the PCR assays for piroplasmids and C. burnetii. While Streblidae flies showed positivity in molecular assays for Bartonella spp. (11/64), Ehrlichia spp. (7/64) and Mycoplasma spp. (1/64), Ornithodoros hasei ticks were positive for Ehrlichia spp. (3/19), Anaplasma spp. (1/19) and Neorickettsia spp. (1/19). Spinturnicidae and Macronyssidae mites were positive for Bartonella spp. (4/21 Macronyssidae) and Ehrlichia spp. (18/21 Macronyssidae and 6/46 Spinturnicidae). Also, co-positivity for the different agents studied was observed. In conclusion, non-hematophagous bats from a periurban area of central-western Brazil act as hosts for several genotypes of Bartonella spp. and hemoplasms, Ehrlichia spp. closely related to E. ruminantium, and for two possible new species of piroplasmids.

Occurrence of Mycoplasma haemocanis in dogs infested by ticks in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Ocorrência de Mycoplasma haemocanis em cães infestados por carrapatos em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

Abstract Hemotropic mycoplasmas in dogs, such as Mycoplasma haemocanis, have been described worldwide. Recently, these pathogens have been reported to be causative agent of zoonosis. It is known that its transmission may occur through the action of blood-sucking arthropods (e.g. ticks or fleas), through blood transfusion, contaminated fomites and/or transplacentally. In Brazil, M. haemocanis is present in practically all regions and the tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato is suspected the main vector. In the municipality of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, there is little information about infection of dogs by M. haemocanis, or on the main epidemiological features associated with it. Thus, the aim of the present study was to determine the occurrence of M. haemocanis among dogs infested by ticks and to assess possible associations with some epidemiological factors. The polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing were used to analyze dog blood samples (n = 94). DNA from M. haemocanis was detected in four samples. No significant associations were observed with any epidemiological parameter analyzed here. However, the results from this study confirm that this pathogen is circulating in this region and should be considered in the differential diagnosis of diseases among anemic dogs.

Resumo Micoplasmas hemotrópicos de cães, como Mycoplasma haemocanis, já foram descritos em todo o mundo. Recentemente, esses patógenos têm sido apontados como causadores de zoonoses. É sabido que a transmissão pode ocorrer devido à ação de artrópodes sugadores de sangue (carrapatos, pulgas), transfusão sanguínea e/ou fômites contaminados e por via transplacentária. No Brasil, Mycoplasma haemocanis está presente em praticamente todas as regiões, e o carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato é suspeito como principal vetor. No município de Campo Grande, Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil não existem muitas informações acerca de infecções de cães por M. haemocanis, assim como quais são os principais aspectos epidemiológicos associados a este patógeno. Assim, o objetivo, no presente estudo, foi determinar a ocorrência de M. haemocanis em cães infestados por carrapatos e analisar possíveis associações com alguns fatores epidemiológicos. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e o sequenciamento de DNA foram utilizados para analisar amostras de sangue de cães (n = 94). DNA de M. haemocanis foi identificado em quatro amostras. Não foram observadas associações significativas com qualquer parâmetro epidemiológico analisado. No entanto, os resultados deste estudo confirmam que esse patógeno está circulando na região e deve ser considerado no diagnóstico diferencial de causas de anemia em cães.

Occurrence of Mycoplasma haemocanis in dogs infested by ticks in Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brazil / Ocorrência de Mycoplasma haemocanis em cães infestados por carrapatos em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Brasil

Abstract Hemotropic mycoplasmas in dogs, such as Mycoplasma haemocanis, have been described worldwide. Recently, these pathogens have been reported to be causative agent of zoonosis. It is known that its transmission may occur through the action of blood-sucking arthropods (e.g. ticks or fleas), through blood transfusion, contaminated fomites and/or transplacentally. In Brazil, M. haemocanis is present in practically all regions and the tick Rhipicephalus sanguineus sensu lato is suspected the main vector. In the municipality of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, there is little information about infection of dogs by M. haemocanis, or on the main epidemiological features associated with it. Thus, the aim of the present study was to determine the occurrence of M. haemocanis among dogs infested by ticks and to assess possible associations with some epidemiological factors. The polymerase chain reaction (PCR) and DNA sequencing were used to analyze dog blood samples (n = 94). DNA from M. haemocanis was detected in four samples. No significant associations were observed with any epidemiological parameter analyzed here. However, the results from this study confirm that this pathogen is circulating in this region and should be considered in the differential diagnosis of diseases among anemic dogs.(AU)

Resumo Micoplasmas hemotrópicos de cães, como Mycoplasma haemocanis, já foram descritos em todo o mundo. Recentemente, esses patógenos têm sido apontados como causadores de zoonoses. É sabido que a transmissão pode ocorrer devido à ação de artrópodes sugadores de sangue (carrapatos, pulgas), transfusão sanguínea e/ou fômites contaminados e por via transplacentária. No Brasil, Mycoplasma haemocanis está presente em praticamente todas as regiões, e o carrapato Rhipicephalus sanguineus sensu lato é suspeito como principal vetor. No município de Campo Grande, Estado de Mato Grosso do Sul, Brasil não existem muitas informações acerca de infecções de cães por M. haemocanis, assim como quais são os principais aspectos epidemiológicos associados a este patógeno. Assim, o objetivo, no presente estudo, foi determinar a ocorrência de M. haemocanis em cães infestados por carrapatos e analisar possíveis associações com alguns fatores epidemiológicos. A Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) e o sequenciamento de DNA foram utilizados para analisar amostras de sangue de cães (n = 94). DNA de M. haemocanis foi identificado em quatro amostras. Não foram observadas associações significativas com qualquer parâmetro epidemiológico analisado. No entanto, os resultados deste estudo confirmam que esse patógeno está circulando na região e deve ser considerado no diagnóstico diferencial de causas de anemia em cães.(AU)

DETECÇÃO DE MICOPLASMAS HEMOTRÓPICOS EM GAMBÁS (DIDELPHIS ALBIVENTRIS) E MORCEGOS (ARTIBEUS LITURATUS) DE FRAGMENTOS FLORESTAIS DA REGIÃO NORTE DO PARANÁ, BRASIL

Os micoplasmas hemotrópicos (hemoplasmas), bactérias gram negativas eritrocíticas e pleomórficas são responsáveis por causar uma anemia hemolítica imunomediada tanto em animais quanto em humanos. A análise da sequência do gene 16S rRNA e 23S rRNA tem impulsionado o estudo de hemoplasmas. Os gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) assim como os morcegos, ordem Chiroptera, são importantes representantes da relação entre homem-ambiente pois são de fácil adaptação e distribuídos nas áreas urbanas e rurais. Estudos com estas espécies são importantes uma vez que são reservatórios competentes de diferentes patógenos transmitidos por vetores (DTV) e hemoplasmas, além de servirem como sentinelas para diferentes doenças tropicais. No Brasil, apenas um gambá de orelha branca foi avaliado e este foi negativo para Mycoplasma sp. por meio da PCR. Em morcegos Mycoplasma sp. foi detectado tanto em animais hematófagos quanto em não-hematófagos provenientes de cinco estados brasileiros (Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo e Tocantins) e algumas sequências detectadas foram correlacionadas a Mycoplasma sp. provenientes de morcegos da América Central e do Sul. Neste contexto, o objetivo do presente estudo foi avaliar a presença de Mycoplasma sp. em gambás de orelha branca (Didelphis albiventris) e em morcegos (Chiropteros) provenientes de fragmentos florestais da região norte do Estado do Paraná, Sul do Brasil. Sete de oito gambás de orelha branca (87.50%; CI 95%: 47, 35-99, 68%) foram considerados positivos para Mycoplasma spp. O sequenciamento do fragmento do gene 16S rRNA obtido apresentou 98.97% de similaridade com sequências de Candidatus Mycoplasma haemodidelphis (AF178676) detectadas até o momento apenas nos Estados Unidos. Três gambás (37.50%; CI 95%: 8.52-75, 51%) estavam infestados por carrapatos da espécie Amblyomma dubitatum. Esse foi o primeiro relato de detecção de uma potencial nova espécie de micoplasma hemotrópico infectando gambás na América do Sul. Três espécies de morcegos foram identificadas, Artibeus lituratus (7/11, 63%), Carollia perspicillata (2/11, 18%) e Sturnira tildae (2/11, 18%). Apenas um/11 (0.9%; IC 95%) morcego (A. lituratus) foi positivo para Mycoplasma sp. O sequenciamento do fragmento do gene 16S rRNA obtido apresentou 99% de identidade com Mycoplasma sp. identificado em estudos prévios em Desmodus rotundus na América Central. Os resultados obtidos sugerem que esta potencial nova espécie de hemoplasma infecte morcegos hematófagos e não hematófagos na América Central e do Sul. Na análise do fragmento do gene 23S rRNA o Mycoplasma sp. detectado no presente estudo formou um clado com Mycoplasma sp. detectado em porcos espinhos (Sphiggurus villosus) provenientes do estado do Paraná.

Hemotropic mycoplasmas (hemoplasmas), erythrocytic and pleomorphic gram-negative bacteria are responsible for causing immune-mediated hemolytic anemia in both animals and humans. The sequence analysis of the 16S rRNA and 23S rRNA gene has driven the study of hemoplasms. White-eared possums (Didelphis albiventris) as well as bats, order Chiroptera, are important representatives of the relationship between man and the environment as they are easy to adapt and distributed in urban and rural areas. Studies with these species are important since they are competent reservoirs of different pathogens transmitted by vectors (DTV) and hemoplasms, in addition to serving as sentinels for different tropical diseases. In Brazil, only one white-eared possum was evaluated and it was negative for Mycoplasma sp. through PCR. In bats Mycoplasma sp. was detected in both hematophagous and non-hematophagous animals from five Brazilian states (Mato Grosso, Pará, Paraná, São Paulo and Tocantins) and some detected sequences were correlated to Mycoplasma sp. from bats in Central and South America. In this context, the objective of the present study was to evaluate the presence of Mycoplasma sp. in white-eared possums and in bats (Chiropteros) from forest fragments in the northern region of the State of Paraná, southern Brazil. Seven out of eight white-eared possums (87,50%; CI 95%: 47, 35-99, 68%) were considered positive for Mycoplasma spp. The sequencing of the fragment of the 16S rRNA gene obtained showed 98,97% similarity with 'Candidatus Mycoplasma haemodidelphis' (AF178676) sequences detected so far only in the United States. Three possums (37,50 %; CI 95%: 8,52-75,51%) were infested with ticks of the species Amblyomma dubitatum. This was the first report of detection of a potential new species of hemotropic mycoplasma infecting opossums in South America. Three species of bats were identified, Artibeus lituratus (7/11: 63%), Carollia perspicillata (2/11: 18%) and Sturnira tildae (2/11:18%). Only one / 11 (0,9%; CI 95%) bat (A. lituratus) was positive for Mycoplasma sp. The sequencing of the fragment of the 16S rRNA gene obtained showed 99% identity with Mycoplasma sp. identified in previous studies on Desmodus rotundus in Central America. The results obtained suggest that this potential new species of hemoplasma infects hematophagous and non-hematophagous bats in Central and South America. In the analysis of the 23S rRNA gene fragment, Mycoplasma sp. detected in the present study formed a clade with Mycoplasma sp. detected in porcupines (Sphiggurus villosus) from the state of Paraná.

OCORRÊNCIA E DIVERSIDADE GENÉTICA ASSOCIADA A INFECÇÃO POR MICOPLASMAS HEMOTRÓPICOS EM SUÍNOS DOMÉSTICOS NO BRASIL

Mycoplasma suis e Mycoplasma parvum se ligam fortemente aos eritrócitos e causam hemoplasmose em suínos. Os animais infectados podem ser portadores assintomáticos ou apresentar sinais inespecíficos, acometendo todas as faixas etárias. No Brasil, os estudos sobre a ocorrência e a diversidade genética associada aos hemoplasmas suínos (HS) são escassos. Portanto, este trabalho teve como objetivo detectar, quantificar e caracterizar a diversidade genética da HS em animais terminados de granjas tecnificadas no estado de Goiás, Brasil. Amostras de sangue total de 450 de 30 granjas diferentes localizadas no estado de Goiás, foram coletadas em tubos contendo ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) e armazenadas a -80 °C. A extração de DNA seguiu o método in house descrito previamente. A PCR convencional (cPCR) direcionada ao gene endógeno gapdh foi realizada para evitar resultados falso-negativos nos testes seguintes. Os ensaios de PCR em tempo real quantitativa (qPCR) foram realizados a fim de detectar e quantificar DNA de Mycoplasma baseado no gene 16S rRNA para HS. Para avaliar a diversidade genética da HS, realizou-se a clonagem e sequenciamento dos genes 16S rRNA e 23S rRNA para hemoplasmas. Os resultados da qPCR mostraram uma ocorrência de HS de 68,89%, onde todas as fazendas tinham pelo menos dois animais positivos. A quantificação na qPCR variou de 8.43x10-1 a 4.69x106 µL, e 52.71% das amostras apresentaram 1x103 copies/µL. Além disso, o teste do coeficiente de Spearman revelou que a ocorrência de HS está inversamente associada ao número de partos por semana, leitões desmamados por semana e peso de abate. Já a análise filogenética utilizando os métodos de Máxima Verossimilhança e Bayesiana, demonstrou que os 22 clones obtidos a partir do fragmento 16S rRNA formaram um único cluster intimamente relacionado a M. parvum. Ainda, sete genótipos foram encontrados nas análises genéticas dessas 22 sequências, mesmo se tratando de um gene conservado. Análises filogenéticas por Máxima Verossimilhança e Bayesiana realizadas para os sete clones do fragmento 23S rRNA, resultaram em um clado associado a M. parvum (NR121958). Portanto, os resultados demonstram pela primeira vez a presença de M. parvum em suínos amostrados no estado de Goiás, e confirmam a existência de diferentes genótipos de M. parvum circulando entre granjas de suínos no Brasil.

Mycoplasma suis and Mycoplasma parvum are strongly bound to erythrocytes and cause hemoplasmosis in pigs. Infected animals can be asymptomatic carriers or have nonspecific signs, affecting all age groups. In Brazil, studies on the occurrence and genetic diversity associated with porcine hemoplasmas (PH) are scarce. Therefore, this work aimed to detect, quantify and characterize the genetic diversity of PH in finished animals from technified farms in the state of Goiás, Brazil. Whole blood samples from 450 animals from 30 different farms located in the state of Goiás, were collected in tubes containing ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) and stored at -80°C. DNA extraction followed the "in house" method previously described. Conventional PCR (cPCR) targeting the gapdh endogenous gene was performed to avoid false negative results in the following tests. Quantitative real-time PCR (qPCR) assays were performed in order to detect and quantify Mycoplasma DNA based on the 16S rRNA gene for PH. To assess the genetic diversity of PH, cloning and sequencing of the 16S rRNA and 23S rRNA genes for hemoplasmas was performed. The results of the qPCR showed a PH occurrence of 68.89%, where all farms had at least two positive animals. The quantification in the qPCR varied from 8.43x10-1 to 4.69x106 µL, and 52.71% of the samples presented 1x103 copies / µL. Furthermore, the Spearman coefficient test revealed that the occurrence of PH is inversely associated with the number of births per week, piglets weaned per week and slaughter weight. Phylogenetic analysis using the Maximum Likelihood and Bayesian methods, demonstrated that the 22 clones obtained from the 16S rRNA fragment formed a single cluster closely related to M. parvum. In addition, seven genotypes were found in the genetic analysis of these 22 sequences, even though it is a conserved gene. Phylogenetic analyzes by Maximum Likelihood and Bayesian performed for the seven clones of the 23S rRNA fragment, resulted in a clade associated with M. parvum (NR121958). Furthermore, the results demonstrate for the first time the presence of M. parvum in pigs sampled in the state of Goiás and confirm the existence of different genotypes of M. parvum circulating among pig farms in Brazil.