Resumo
Abstract The aim of this study was to determine the allergenic activity of components present in crude extracts of Pterobothrium crassicolle plerocerci (CPE) and blastocysts (CBE) obtained from Micropogonias furnieri in a murine model. Two groups of seven animals each received 50 µg of CPE or CBE on days 1, 35 and 120. Serum samples were tested by ELISA and Immunoblotting. Specific IgG and IgE levels were detected by ELISA, showing specific humoral responses for the primary immunization for both immunoglobulins and continuously growing titers for IgE. Positive Passive Cutaneous Anaphylaxis tests in rats sensitized with anti-CBE sera and tested by CBE, showed biologically, the allergenic activity of the extracts. The CPE and CBE showed some different recognition regions but both experimental groups recognized all regions of the extracts when tested for cross reactions, showing that CPE and CBE could share antigenic recognition sites.
Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a atividade alergênica de componentes presentes em extratos crus de plerocercos (CPE) e de blastocistos de Pterobothrium crassicolle (CBE), obtidos de Micropogonias furnieri, em modelo murino. Dois grupos de sete animais receberam cada um 50 µg de CPE ou CBE nos dias 1, 35 e 120. As amostras de soro foram testadas por ELISA e Imunoblot. Os níveis específicos de IgG e IgE foram detectados por ELISA, mostrando respostas humorais específicas para a imunização primária para ambas as imunoglobulinas e títulos crescentes de IgE. Testes positivos de Anafilaxia Cutânea Passiva em ratos sensibilizados com soros anti-CBE e testados por CBE, demonstraram biologicamente, a atividade alergênica dos extratos. O CPE e o CBE evidenciaram algumas regiões de reconhecimento diferentes, mas ambos os grupos experimentais reconheceram todas as regiões dos extratos, quando testados para reações cruzadas, mostrando que o CPE e o CBE poderiam compartilhar locais de reconhecimento antigênico.
Resumo
The aim of this study was to determine the allergenic activity of components present in crude extracts of Pterobothrium crassicolle plerocerci (CPE) and blastocysts (CBE) obtained from Micropogonias furnieri in a murine model. Two groups of seven animals each received 50 µg of CPE or CBE on days 1, 35 and 120. Serum samples were tested by ELISA and Immunoblotting. Specific IgG and IgE levels were detected by ELISA, showing specific humoral responses for the primary immunization for both immunoglobulins and continuously growing titers for IgE. Positive Passive Cutaneous Anaphylaxis tests in rats sensitized with anti-CBE sera and tested by CBE, showed biologically, the allergenic activity of the extracts. The CPE and CBE showed some different recognition regions but both experimental groups recognized all regions of the extracts when tested for cross reactions, showing that CPE and CBE could share antigenic recognition sites.(AU)
O objetivo deste estudo foi determinar a atividade alergênica de componentes presentes em extratos crus de plerocercos (CPE) e de blastocistos de Pterobothrium crassicolle (CBE), obtidos de Micropogonias furnieri, em modelo murino. Dois grupos de sete animais receberam cada um 50 µg de CPE ou CBE nos dias 1, 35 e 120. As amostras de soro foram testadas por ELISA e Imunoblot. Os níveis específicos de IgG e IgE foram detectados por ELISA, mostrando respostas humorais específicas para a imunização primária para ambas as imunoglobulinas e títulos crescentes de IgE. Testes positivos de Anafilaxia Cutânea Passiva em ratos sensibilizados com soros anti-CBE e testados por CBE, demonstraram biologicamente, a atividade alergênica dos extratos. O CPE e o CBE evidenciaram algumas regiões de reconhecimento diferentes, mas ambos os grupos experimentais reconheceram todas as regiões dos extratos, quando testados para reações cruzadas, mostrando que o CPE e o CBE poderiam compartilhar locais de reconhecimento antigênico.(AU)
Assuntos
Animais , Infecções por Cestoides/tratamento farmacológico , Peixes/parasitologia , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/métodos , Anafilaxia Cutânea Passiva , Cestoides/imunologiaResumo
Abstract The aim of this study was to determine the prevalence of infection by Sarcocystis neurona in horses and identify potential risk factors. Were analyzed 427 samples from 36 farms in 21 municipalities in the Alagoas State, Brazil. Presence of anti-S. neurona antibodies was diagnosed by indirect immunofluorescence antibody test (IFAT) and was confirmed using the immunoblot test. Risk factors were assessed through investigative questionnaires on animal management on the farms. The prevalence of anti-S.neurona antibodies was 2.8% (confidence interval, CI: 1.5-4.9%) from IFAT and 1.6% (CI:0.8-3.34%) from immunoblot, and there were positive horses on 16.6% of the studied farms. None of the variables studied presented associations with serological status for S. neurona. This is the first report on infection by S. neurona in horses reared in Alagoas, Brazil showing a low exposure to S. neurona in this region, but with significant numbers of foci.
Resumo Objetivou-se neste estudo determinar a prevalência e os fatores de risco associados à infecção por Sarcocystis neurona em equinos. Foram analisadas 427 amostras de 36 propriedades localizadas em 21 municípios do estado de Alagoas. O diagnóstico de anticorpos anti-S. neurona foi realizado pela técnica de Imunofluorescência Indireta (IFI) e confirmada por immunoblot. O estudo dos fatores de risco foi realizado a partir de questionários investigativos sobre o manejo dos animais nas propriedades. A prevalência de anticorpos anti-S. neurona foi de 2,8% (I.C. 1,5-4,9%) na IFI e de 1,6% (I.C. 0,8-3,34%) no immunoblot com equinos positivos em 16,6% das propriedades estudadas. Nenhuma variável estudada apresentou associação com o status sorológico para S. neurona. Este é o primeiro relato da infecção por S. neurona em equinos criados no Estado de Alagoas, Brasil, confirmando que os animais desta região têm baixa exposição a S. neurona, mas com significativo número de focos.
Assuntos
Animais , Masculino , Feminino , Anticorpos Antiprotozoários/sangue , Sarcocystis/imunologia , Sarcocistose/veterinária , Doenças dos Cavalos/epidemiologia , Brasil/epidemiologia , Immunoblotting , Estudos Soroepidemiológicos , Prevalência , Estudos Transversais , Fatores de Risco , Sarcocistose/diagnóstico , Sarcocistose/epidemiologia , Técnica Indireta de Fluorescência para Anticorpo/veterinária , Doenças dos Cavalos/diagnóstico , CavalosResumo
Com o objetivo de diagnosticar a situação do complexo teníase-cisticercose bovina no município de Salinas, Minas Gerais, foram coletadas amostras de sangue de 355 bovinos distribuídos em 18 propriedades rurais, sorteadas aleatoriamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário socioeconômico para a análise de fatores que favorecem a manutenção do complexo teníase-cisticercose bovina. Foi realizado também um levantamento epidemiológico dos casos de teníase diagnosticados nos laboratórios credenciados pela Secretaria Municipal de Saúde de Salinas, no período de 2007 a 2010. A prevalência de cisticercose bovina foi de 4,70% enquanto as prevalências de teníase, encontradas durante os quatro períodos avaliados, foram de 0,29%, 0,36%, 0,24% e 0,24%. Entre os fatores de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose analisados, foi observada uma relação estatisticamente significativa entre a ocorrência de cisticercose bovina e a ingestão de carne malpassada pelos entrevistados. Foi concluído que a cisticercose bovina está presente no município de Salinas, Minas Gerais, sendo o tratamento térmico ineficiente da carne bovina o principal fator de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose, o que reforça a necessidade da adoção de medidas de controle com contínua vigilância epidemiológica e sanitária.(AU)
In order to diagnose the situation of bovine taeniasis-cysticercosis complex in the municipality of Salinas, Minas Gerais, Brazil, blood samples were collected from 355 cattle in 18 randomly selected farms. A socioeconomic questionnaire was filled in each farm for the analysis of factors which favor the maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex. An epidemiological survey of human taeniasis was performed through analyses of the Municipal Health Department in the 2007-2010 period. A prevalence of 4.7% for bovine cysticercosis and the frequency of 0.29, 0.36, 0.24 and 0.24% for human taeniasis, during the evaluated period, was found. Among the risk factors, a statistically significant correlation was found between the occurrence of bovine cysticercosis and the ingestion of undercooked meat. It was concluded that bovine cysticercosis is present in the municipality of Salinas, due to inefficient heat treatment of the meat as the main risk factor for maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex, reinforcing the need to adopt control measures with continuous epidemiological and health surveillance.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Cisticercose/diagnóstico , Teníase/diagnóstico , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Estudos Epidemiológicos , Immunoblotting/veterináriaResumo
O complexo teníase cisticercose é uma zoonose cosmopolita, causada pelos parasitas Taenia solium e Taenia saginata. Este complexo pertence ao grupo das doenças tropicais negligenciadas, causando grande impacto na produção animal e na saúde pública em países em desenvolvimento. Não obstante, a sua importância, os dados sobre a ocorrência da doença em regiões endêmicas como Angola são limitados. Assim, a pesquisa teve como objetivo avaliar a situação sanitária, epidemiológica, o impacto econômico e social do complexo teníase-cisticercose em municípios da Província do Huambo-Angola. Foi realizado um estudo transversal em propriedades rurais de municípios da Província do Huambo (Caála, Chinjenje, Huambo, Longonjo e Ukuma), com a coleta de sangue bovino (541) e suíno (367) para o diagnóstico sorológico da cisticercose animal através do teste ELISA (triagem) e confirmado no immunoblot. Um questionário epidemiológico e o georreferenciamento de 115 propriedades e a coleta de 228 amostras de fezes dos indivíduos residentes nas propriedades foram realizados para determinar indivíduos com a teníase, a distribuição e fatores de risco associados a transmissão do complexo teníase cisticercose. Um levantamento dos registros de abate de bovinos e suínos no Departamento Provincial do Instituto dos Serviços de Veterinária do Huambo (de 2015 a 2019) foi realizado para avaliar a prevalência da doença na inspeção post-mortem. Em uma abordagem de Saúde Unificada, outra etapa da pesquisa consistiu no levantamento da prevalência, do impacto econômico e social da neurocisticercose (NCC), através da avaliação dos registros de indivíduos diagnosticados com a neurocisticercose no setor de imagem do Hospital Geral da Província de Huambo. Foram também aplicados 286 questionários nos municípios de Caála, Chinjenje, Huambo, Longonjo e Ukuma, com o propósito de avaliar a associação entre as condições socioeconômicas, o conhecimento da população sobre zoonoses com a adoção de comportamentos de risco para a transmissão da teníase e cisticercose. Não foram identificados indivíduos parasitados por Taenia spp. A prevalência da cisticercose suína pelo teste laboratorial foi de 6,81% e 0,81% na inspeção post- mortem. A prevalência da cisticercose bovina pelo teste laboratorial foi de 4,99%; com ausência na inspeção post-mortem. Os fatores de risco associados a transmissão do complexo teníase cisticercose foram a origem dos animais, não inspecionar e não vermifugar os animais, o sistema de criação mista e sempre solta dos animais e o consumo de carne originaria no mercado informal. No período analisado, a prevalência da NCC foi estimada em 55%, o impacto social em 208 anos vividos com incapacidade (YLD), o impacto econômico em US$ 9.493.878,51. Comportamentos de risco para a transmissão da teníase e cisticercose como o consumo de legumes, vegetais e de água não tratada, o consumo de carne com origem no mercado informal, a defecação ao ar livre, a não vermifugação e o uso de esterco como fertilizante na agricultura apresentaram associação com as baixas condições socioeconômicas e com o conhecimento limitado da população sobre zoonoses, T. saginata e T. solium. Os achados da pesquisa evidenciam a ocorrência do complexo teníase cisticercose na província do Huambo, carecendo de intervenções para o seu controle.
The taeniasis cysticercosis complex is a cosmopolitan zoonosis, caused by the parasites Taenia solium and Taenia saginata. This complex belongs to the group of neglected tropical diseases, causing great impact on animal production and public health in developing countries. Despite its importance, data on the occurrence of the disease in endemic regions such as Angola are limited. Thus, the research aimed to evaluate the sanitary, epidemiological situation, the economic and social impact of the taeniasis-cysticercosis complex in municipalities in the Province of Huambo-Angola. A cross-sectional study was carried out in rural properties in municipalities in the Province of Huambo (Caala, Chinjenje, Huambo, Longonjo and Ukuma), with the collection of bovine (541) and swine (367) blood for the serological diagnosis of animal cysticercosis through the test ELISA (screening) and confirmed on immunoblot. An epidemiological questionnaire and georeferencing of 115 properties and the collection of 228 stool samples from individuals residing on properties were performed to determine individuals with taeniasis, the distribution and risk factors associated with transmission of the taeniasis cysticercosis complex. A survey of cattle and pig slaughter records at the Provincial Department of the Instituto dos Serviços de Veterinária do Huambo (from 2015 to 2019) was carried out to assess the prevalence of the disease in post-mortem inspection. In a "Unified Health" approach, another stage of the research consisted of surveying the prevalence, economic and social impact of neurocysticercosis (NCC), through the evaluation of the records of individuals diagnosed with neurocysticercosis in the imaging sector of the General Hospital of the Province from Huambo. 286 questionnaires were also applied in the municipalities of Caala, Chinjenje, Huambo, Longonjo and Ukuma, with the purpose of evaluating the association between socioeconomic conditions, the population's knowledge about zoonoses and the adoption of risk behaviors for the transmission of taeniasis and cysticercosis. No individuals parasitized by Taenia spp. The prevalence of swine cysticercosis by laboratory test was 6.81% and 0.81% at post-mortem inspection. The prevalence of bovine cysticercosis by laboratory test was 4.99%; absent from post- mortem inspection. The risk factors associated with the transmission of the complex taeniasis cysticercosis were the origin of the animals, not inspecting and not deworming the animals, the mixed breeding system and always loose animals and the consumption of meat originated in the informal market. In the analyzed period, the prevalence of NCC was estimated at 55%, the social impact in 208 years lived with disability (YLD), the economic impact in US$ 9,493,878.51. Risk behaviors for the transmission of taeniasis and cysticercosis, such as the consumption of vegetables, vegetables and untreated water, the consumption of meat from the informal market, open defecation, not deworming and the use of manure as a fertilizer in the agriculture were associated with low socioeconomic conditions and limited knowledge of the population about zoonoses, T. saginata and T. solium. The research findings show the occurrence of the taeniasis cysticercosis complex in the province of Huambo, lacking interventions for its control.
Resumo
The aim of this study was to examine the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens, determining the number of foals with detectable concentrations of antibodies against these agents in the serum, before colostrum ingestion and collect data about exposure of horses to the parasite. Serum samples were collected from 195 thoroughbred mares and their newborns in two farms from southern Brazil. Parasite specific antibody responses to Sarcocystis antigens were detected using the indirect immunofluorescent antibody test (IFAT) and immunoblot analysis. In 84.1% (159/189) of the pregnant mares and in 7.4% (14/189) of foals we detected antibodies anti-Sarcocystis spp. by IFAT. All samples seropositive from foals were also positive in their respective mares. Serum samples of seropositive foals by IFAT, showed no reactivity on the immunoblot, having as antigens S. neurona merozoites. In conclusion, the intra-uterine exposure to Sarcocystis spp. antigens in horses was demonstrated, with occurrence not only in mares, but also in their foals, before colostrum ingestion these occurrences were reduced.
O objetivo deste estudo foi avaliar a exposição intrauterina ao Sarcocystis spp., para determinar o número de potros que possuem concentrações detectáveis de anticorpos contra esses agentes no soro, antes da ingestão do colostro, por meio da coleta de dados sobre a exposição a esses protozoários nos equinos. Amostras de soro foram coletadas de 195 éguas puro-sangue e seus respectivos potros recém-nascidos, em duas fazendas localizadas na região Sul do Brasil. Os testes utilizados na detecção de anticorpos específicos para o Sarcocystis foram a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e análise por meio de immunoblot. Pela RIFI, em 84,1% (159/189) das éguas e em 7,4% (14/189) dos potros foram detectados anticorpos anti-Sarcocystis spp. Todas as amostras soropositivas dos potros também foram positivas para suas respectivas mães. As amostras de soro dos potros soropositivos na RIFI, não apresentaram reatividade no immunoblot, tendo como antígenos merozoítos de S. neurona. Em conclusão, foi demonstrada a exposição intrauterina de Sarcocystis spp. em equinos, com ocorrência em éguas, porém, em seus respectivos potros, antes da ingestão de colostro a ocorrência foi reduzida.
Assuntos
Animais , Anticorpos Antiprotozoários/análise , Cavalos/parasitologia , Diagnóstico Pré-Natal/veterinária , Sarcocystis/patogenicidade , Encefalomielite/veterinária , Estudos Soroepidemiológicos , Immunoblotting , Immunoblotting/veterinária , Troca Materno-FetalResumo
A cisticercose pode acometer o bovino, que desenvolve a larva da Taenia saginata. Apesar da importância da cisticercose para a saúde pública, para a saúde animal e para economia, a realidade epidemiológica da ocorrência dessa zoonose no Brasil é pouco conhecida. No estado de Minas Gerais a maioria dos dados é obtida dos serviços oficiais de Inspeção Sanitária nos matadouros-frigoríficos, sendo poucas as informações baseadas em dados de campo oriundos de animais vivos. Com o objetivo de avaliar a situação epidemiológica da cisticercose bovina em pequenas e médias propriedades rurais de quatro municípios, situados na região do Triângulo Mineiro, se pesquisou a ocorrência e os principais fatores de risco associados à transmissão da doença nessas propriedades. Dessa forma, foi realizado um estudo epidemiológico de corte transversal envolvendo as 68 propriedades localizadas nas zonas rurais dos quatro municípios, onde foram coletadas 1002 amostras de sangue bovino e aplicado um questionário epidemiológico. O diagnóstico sorológico da cisticercose foi realizado por triagem pelo teste ELISA indireto e os casos suspeitos foram submetidos ao Imunoblot para confirmação. Este estudo revelou a prevalência de 4,7% de cisticercose bovina nas propriedades da zona rural dos municípios amostrados, no período de julho a agosto de 2013. Os fatores que se mostraram estatisticamente significantes para a transmissão da cisticercose foram a expertiness do responsável pela propriedade (RC 5,81 IC 1,87-8,66), a renda familiar (RC 6,02 IC 1,33-8,77) e a qualidade da água da propriedade (RC 9,40 IC 1,97-9,59). Outros fatores foram observados com menor significância. Esses resultados identificaram os principais fatores que interferem na transmissão da cisticercose bovina, permitindo subsidiar medidas de prevenção e controle dessa importante zoonose na região do Triângulo Mineiro.(AU)
Cysticercosis can affect cattle which develop the larvae Taenia saginata. Despite the importance of cysticercosis for public animal health and for the economy, the epidemiological reality of such zoonosis in Brazil is little known. In the southeastern region of the State of Minas Gerais most of the data are obtained from the official Sanitary InspectionServices in slaughterhouses, but little information based on field data from live animals. In order to assess the epidemiological situation of bovine cysticercosis in small and medium-sized rural properties of four municipalities, located in the region of Triângulo Mineiro, we searched the occurrence and the major risk factors associated with transmission of the disease in those properties. We conducted a cross-sectional epidemiological study involving 68 properties located in rural areas of the four municipalities, where there were collected 1002 bovine blood samples and applied an epidemiological questionnaire. The serological diagnosis of cysticercosis was conducted by sorting through indirect ELISA test, and the suspected cases were subjected to Immunoblot for confirmation. This study revealed the prevalence of 4.7% of bovine cysticercosis in rural properties of the municipalities sampled from July to August 2013. The factors which were statistically significant for the transmission of cysticercosis were the expertise of those responsible for the property (OR 5.81 IC 1,87-8.66), the family income (OR 6.02 IC 1.33-8.77) and the water quality of the property (OR 9.40 IC 1.97-9.59). Other factors observed were of lower significance. These results identified the main factors which interfere in the transmission of bovine cysticercosis, allowing to subsidize preventive measures and to control this important zoonotic disease in the region of Triângulo Mineiro.(AU)
Assuntos
Animais , Bovinos , Cisticercose/epidemiologia , Cisticercose/transmissão , Cisticercose/veterinária , Zona Rural , Controle de Doenças Transmissíveis , Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária , Taenia saginataResumo
Com o objetivo de diagnosticar a situação do complexo teníase-cisticercose bovina em Minas Gerais, Brasil, foi selecionado o município de São João Evangelista, onde foram coletadas amostras de sangue de 339 bovinos em 15 propriedades rurais, sorteadas aleatoriamente. Em cada propriedade, foi aplicado um questionário socioeconômico para a análise de fatores que favorecem a manutenção do complexo teníase-cisticercose bovina. Foi realizado também o diagnóstico de teníase humana por meio de exame coproparasitológico dos habitantes das propriedades. Encontrou-se a prevalência de 4,1% para cisticercose bovina e a frequência de 2,94% para teníase humana. Entre os fatores de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose analisados, foi observada uma relação estatisticamente significativa (P=0,042) entre a ocorrência de cisticercose bovina e a ingestão de carne malpassada pelos entrevistados. Concluiu-se que a cisticercose bovina está presente no município de São João Evangelista, MG, em índices considerados endêmicos, sendo o consumo de carne malpassada e não inspecionada o principal fator de risco para a manutenção do complexo teníase-cisticercose, o que reforça a necessidade da adoção de medidas de controle com contínua vigilância epidemiológica e sanitária.
In order to diagnose the situation of bovine taeniasis-cysticercosis complex in the state of Minas Gerais, Brazil, the city of São João Evangelista was selected, and blood samples were collected from 339 cattle in 15 randomly selected farms. A socioeconomic questionnaire was filled in each property for the analysis of the factors that favor the maintenance of the taeniasis-cysticercosis complex. Additionally, there was the diagnosis of human taeniasis verified by stool examinations of the properties' inhabitants. A prevalence of 4.1% for bovine cysticercosis and the frequency of 2.94% for human taeniasis were found. Among the risk factors, a statistically significant relation (p = 0.042) was found between the occurrence of bovine cysticercosis and the ingestion of undercooked meat. It was concluded that bovine cysticercosis is broadly distributed in the city of São João Evangelista, with rates considered endemic, being the consumption of raw and not-inspected meat the main risk factors for the maintenance of complex taeniasis-cysticercosis, reinforcing the need to adopt control measures with continuous epidemiological and health surveillance.
Assuntos
Animais , Bovinos , Cisticercose/diagnóstico , Cisticercose/veterinária , Fatores de Risco , Teníase/diagnóstico , Teníase/veterinária , Doenças Endêmicas/prevenção & controle , Doenças Endêmicas/veterinária , Inquéritos EpidemiológicosResumo
Given the limited knowledge about the diagnosis of bovine cysticercosis by immunoblot, the aim of this study was to assess the applicability of this test, identifying key peptides with diagnostic value. Immunoblot assays were performed using total larval antigen of Taenia crassiceps and 60 sera of positive bovines for cysticercosis (30 naturally and 30 experimentally infected with T. saginata eggs), 30 sera of negative bovines for cysticercosis and 30 sera of bovines with other diseases (fascioliasis, hydatidosis and tuberculosis). The peptides of greater diagnostic importance, in descending order of accuracy (%), were as follows: 6-8kDa (90.8%), 129-143kDa (74.2%), 99-105kDa (71.7%) and 14-19kDa (71.1%). Cross-reactions, due to fascioliasis and hydatidosis, were observed in the four intervals of peptides highlighted. The results demonstrate that the total antigen of T. crassiceps has peptides with a high diagnostic potential; therefore, the immunoblot is useful in the diagnosis of bovine cysticercosis.
Tendo em vista o conhecimento limitado sobre o diagnóstico da cisticercose bovina pelo immunoblot, o objetivo deste trabalho foi avaliar a aplicabilidade desse teste, identificando os principais peptídeos com valor diagnóstico. Foram realizados ensaios de immunoblot, utilizando antígeno total de larva de Taenia crassiceps e 60 soros de bovinos positivos para a cisticercose (30 naturalmente e 30 experimentalmente infectados com ovos de T. saginata), 30 soros de bovinos negativos para a cisticercose e 30 soros de bovinos com outras patologias (fasciolose, hidatidose e tuberculose). Os peptídeos de maior importância diagnóstica, em ordem decrescente de acurácia (%), foram os seguintes: 6-8 kDa (90,8%), 129-143 kDa (74,2%), 99-105 kDa (71,7%) e 14-19 kDa (71,1%). Reações cruzadas, em decorrência da fasciolose e hidatidose, foram observadas nos quatro intervalos de peptídeos ressaltados. Os resultados demonstram que o antígeno total de T. crassiceps possui peptídeos com alto potencial diagnóstico, sendo, portanto, o immunoblot útil no diagnóstico da cisticercose bovina.
Assuntos
Animais , Bovinos/parasitologia , Cisticercose/veterinária , Immunoblotting/veterinária , Taenia saginata/parasitologia , Antígenos , Cisticercose , PeptídeosResumo
BORGES-SILVA, W. Comparação antigênica entre Sarcocystis neurona e uma cepa de Sarcocystis falcatula-like isolado in vitro na Bahia. Salvador, 2019. 56p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos). Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona é um protozoário coccídio, considerado o principal causador da mieloencefalite protozoária equina. Gambás do gênero Didelphis são os hospedeiros definitivos deste protozoário. O Brasil possui, pelo menos, quatro Didelphis spp., favorecendo uma maior recombinação genética entre as espécies de Sarcocystis. Objetivou-se com este estudo comparar antigenicamente um isolado nacional de Sarcocystis falcatula-like (Sarco-BA1) com potencial para uso em testes sorológicos com uma cepa norte-americana de S. neurona (SN138). Foram testadas 409 amostras (217 provenientes da Bahia e 192 do Rio Grande do Sul) de soro equino pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI), utilizando-se merozoítos produzidos em cultivo celular dos dois parasitos. Os resultados obtidos na RIFI indicam uma frequência de animais expostos a S. neurona de 17,1%, a S. falcatula-like de 10,5%, e aos dois parasitos simultaneamente, de 6,1%. Soros de 13 animais (6 positivos para S. neurona, 4 positivos para S. falcatula-like e 3 negativos na RIFI) foram testados por meio de Imunoblot empregando-se antígeno reduzido de SN138 e Sarco-BA1. Em três amostras foi possível identificar proteína de peso molecular de 16 kDa, compatível com antígeno imunodominante do parasito. Os resultados, com reação positiva entre ambas as cepas testadas, permitem duas possíveis conclusões, de que os animais foram expostos aos dois parasitos testados, ou que os animais foram expostos a um dos parasitos, mas reagem de forma cruzada na RIFI. A caracterização da mesma proteína imunodominante para ambas as cepas testadas no Imunoblot possibilitou constatar que existem semelhanças antigênicas no reconhecimento da proteína específica de 16 kDa pelo imunoblot.
BORGES-SILVA, W. Antigenic comparison between Sarcocystis neurona and Sarcocystis falcatula-like isolated in vitro in Bahia. Salvador, 2019. 56p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos). Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona is a coccidian protozoan, considered the main agent of equine protozoal mieloencephalitis. Opossums of the Didelphis genus are the definitive hosts of that protozoan. Brazil has at least four Didelphis spp., favoring a greater genetic recombination among the species of Sarcocystis. The aim of this study was to compare antigenically a national isolate of Sarcocystis falcatula-like (Sarco-BA1) with potential for use in serological tests with a North American strain of S. neurona (SN138). A total of 409 samples (217 from Bahia and 192 from Rio Grande do Sul) of equine serum were tested by the immunofluorescence antibody test (IFAT), using merozoites produced in cell culture of the two parasites. The results obtained in IFAT indicate a frequency of 17.1% animals exposed to S. neurona, 10.5% to S. falcatula-like, and 6.1% to both parasites. Sera from 13 animals (6 S. neurona positive, 4 S. falcatula-like positive and 3 negative on IFAT) were tested by immunoblot using reduced SN138 antigen and Sarco-BA1. In three samples it was possible to identify a 16 kDa molecular weight protein, which is compatible with the parasite's immunodominant antigen. These results, with positive reaction to both tested strains, allow two possible conclusions, that the animals were exposed to both tested parasites, or that the animals were exposed to one of the parasites, but they cross-react in the IFAT. The characterization of the same immunodominant protein for both tested strains in immunoblot allowed to conclude that there are antigenic similarities in the recognition of the 16 kDa specific protein by the immunoblot.
Resumo
OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Exposição de cães a Sarcocystis neurona na zona rural do município de Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona é um protozoário coccídio, considerado o principal causador da mieloencefalite protozoária equina. A infecção por S. neurona e indução de doença neurológica em cães têm sido relatadas na América do Norte, sendo o cão considerado um hospedeiro aberrante ou acidental do protozoário. Objetivou-se com este estudo testar soros caninos provenientes da zona rural de Ilhéus, Bahia, quanto à reatividade a S. neurona. Avaliou-se também a reatividade cruzada com o protozoário Sarcocystis cruzi, que tem cães como hospedeiros definitivos. Foram testadas 353 amostras de soro caninos pela técnica da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) com ponto de corte de 1:25, utilizando-se merozoítos de S. neurona produzidos em cultivo celular e bradizoítos de S. cruzi obtidos a partir de cistos de miocárdio bovino confirmados na PCR e sequenciamento, e 14 amostras aleatórias foram testadas no WB/imunoblot. Os resultados obtidos foram comparados com os seguintes dados dos cães: idade, sexo, domicílio, hábito de caça, contato com cavalos, bovinos e animais silvestres, zona de mata e disfunção neurológica para traçar um perfil epidemiológico. Os resultados da RIFI indicaram uma frequência de animais expostos a S. neurona de 3,39% (12/353) e a S. cruzi de 4,81% (17/353). Duas amostras (0,56%) foram positivas para ambas as espécies. No WB/imunoblot bandas de proteínas específicas para S. neurona foram observadas em oito amostras reativas na RIFI. A análise estatística demonstrou associação entre a variável contato com animais silvestres e a presença de anticorpos anti-S. neurona. Em conclusão, os soros dos cães foram reativos a antígenos de S. neurona e S. cruzi na região estudada, sem evidência de reação sorológica cruzada entre os parasitos na RIFI, porém, apresentam reatividade cruzada no imunoblot. Provavelmente, os animais foram expostos a formas infectantes de ambos os parasitos ou a espécies de Sarcocystis geneticamente semelhantes.
OLIVEIRA DEIRÓ, C. M. C. Dogs exposure to Sarcocystis neurona in rural areas of the city of Ilhéus, Bahia. Salvador, 2018. 44p. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal nos Trópicos. Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal da Bahia. Sarcocystis neurona is a coccidian parasite that is the major cause of equine protozoal myeloencephalitis. Infection by S. neurona and induction of neurologic disease in dogs have been reported in North America, where the dog is considered an aberrant or accidental host of the protozoa. The aim of this study was to test dog sera from rural areas of the city of Ilhéus, Bahia, to S. neurona .Potential serologic cross-reactivity to the protozoan Sarcocystis cruzi was also evaluated, as the dog is definitive host of this parasite. Sera from 353 dogs were tested by immunofluorescent antibody technique (IFAT) to S. neurona with a cut of 1:25, using merozoites produced in cell culture, and to S. cruzi, employing bradyzoites extracted from bovine myocardium confirmed by PCR and sequencing, and 14 samples were random chosen for immunoblot. The results obtained were evaluated with the following data about the dogs: age, gender, residence, hunting habits, contact with horses, stockyard and wild animals, inhabiting close to forest and neurological disease in order to gather better epidemiological information. The results obtained by IFAT indicated a frequency of 3.83% (12/353) of dogs exposed to S. neurona, and 4.81% (17/353) to S. cruzi. Two samples (0.56%) were simultaneously positive for both antigens. In the immunoblot, proteins bands for S. neurona were observed in eight samples that tested positive in IFAT. Statistical analysis indicate association between the variable contact with wild animals and antibodies to S. neurona. In conclusion, sera from dogs were reactive to S. neurona and S. cruzi antigens in the studied region, without evidence of serologic cross-reactivity between the parasites by IFAT, however, cross-reactivity occurred in immunoblot. The dogs were probably exposed to infectivity forms from both parasites or to genetically-related Sarcocystis species.
Resumo
The diagnosis of cysticercosis in bovines that presents discreet infection is committed by the conventional methodology of detection employed in slaughterhouses. This deficiency leads to the development of alternative methods, such as immunoblot, in order to improve the detection of this disease. An immunoblot assay was developed to detect peptides from Taenia crassiceps antigenand it was used to test 56 samples of bovine serum (28 confirmed as negative and 28 from experimentally infected animals with Taenia saginata eggs). The peptides 4-6, 14 and 18 kDa showed better performance in bovine cysticercosis diagnosis due to an enhanced appearance, once they showed higher area and wide, contrasting with medium and high molecular weight peptides, that showed unspecific reactions and discreet appearance. The obtained results indicated that immunoblot can represent a potential alternative in bovine cysticercosis diagnosis, including its use in live animals, improving the detection of this disease even in epidemiological studies.
A dificuldade de se localizar cisticercos em bovinos com infecção discreta torna o diagnóstico tradicional da cisticercose bovina em matadouros um recurso de baixa sensibilidade, o que gera uma demanda de diagnóstico por métodos alternativos como o immunoblot. Para tanto, neste trabalho, foram realizados ensaios de immunoblot a fim de analisar os peptídeos responsáveis pela reação do antígeno vesicular de Taenia crassiceps. Foram utilizadas 28 amostras de soro de bovinos comprovadamente negativos e 28 amostras coletadas de bovinos infectados experimentalmente com ovos de Taenia saginata. Os resultados dos ensaios de immunoblot com as amostras de soros-controle mencionadas indicaram que os peptídeos de 4-6, 14 e 18kDa destacaram-se entre os demais, mostrando altas taxas de desempenho no diagnóstico da cisticercose bovina e uma aparência diferenciada, com área e largura maiores, ao contrário dos peptídeos de média e alta massa molecular, que se apresentaram sob a forma de linha e com reações inespecíficas. O immunoblot mostrou ter um potencial como uma alternativa de diagnóstico da cisticercose bovina, incluindo sua aplicação em animais vivos, como método auxiliar de diagnóstico em estudos epidemiológicos da doença.
Resumo
ABSTRACT The serodiagnosis of small ruminant lentivirus (SRLV) infections in goats and sheep is usually performed by the agar-gel immunodiffusion technique (AGID) and by ELISA. Therefore, the western blot (WB) is the choice for the definition of antigen recognition patterns during the disease progression, being potentially useful for the diagnosis itself. In the present study, the antigen used for WB was obtained by a novel simple purification procedure: the dialysis of the supernatant of infected cultured cells, followed by centrifugation in sucrose gradient. Proteins in the pellet were separated by SDS-PAGE at 10% density and transferred to nitrocellulose membranes in a semi-dry blotting device. After development, five viral proteins were recognized by the standard positive serum sample, with molecular weights of 14-16, 25, 40, 50 and 70 kDa respectively. All 8 AGID positive goat serum samples recognized at least one band in the immunoblot, with different intensities. The total number of bands recognized by each serum sample varied considerably. A positive reaction to gp40 was observed with 4 sera, although rather weak in 3 cases. Two samples were reactive to p16 and two others to gp50, although weakly. Curiously, no serum was reactive to the 70 kDa antigen, recognized by the standard positive serum sample. These results suggest that the WB can be effectively used for the routine serodiagnosis of viral caprine arthritis encephalitis infection (CAEV). It can also support further studies on antigen recognition patterns with the new antigen provided by the novel simplified purification system of viral components described here.
RESUMO O sorodiagnóstico das lentiviroses de caprinos e ovinos é realizado principalmente pela imunodifusão em gel de agar (AGID) e/ou ELISA. Embora relativamente simples, esses métodos não identificam os antígenos virais reconhecidos na resposta imune do animal examinado, por isso o western blot (WB) vem ganhando maior relevância como ferramenta de diagnóstico dessas enfermidades. Neste trabalho, o antígeno utilizado no WB foi obtido através de um sistema simplificado de purificação: concentração por diálise do sobrenadante de culturas celulares infectadas, seguido de centrifugação em gradiente contínuo de sacarose. A separação das proteínas virais foi obtida por SDS-PAGE a 10% e a transferência para membranas de nitrocelulose realizada pelo sistema semi-úmido. A revelação das membranas mostrou reconhecimento pelo soro padrão positivo de cinco proteínas, com pesos moleculares de 14-16, 25, 40, 50 e 70 kDa. Todas as 8 amostras de soro caprino, positivas na ADIG, reconheceram pelo menos uma banda proteíca no immunoblot, variando contudo o número de bandas reconhecidas. Reação positiva à glícoproteína 40 (gp 40) foi observada em quatro animais, com intensidade de reação discreta em três deles. Dois animais apresentaram reação positiva à proteína 16 (p16), e dois à gp 50, de pouca intensidade. Quanto à gp 70, proteína que, embora reagisse com o soro padrão positivo, não foi reconhecida por nenhum dos soros testados. Estes resultados sugerem que o WB pode ser empregado para o sorodiagnóstico rotineiro das lentiviroses, ensejando estudos mais amplos do padrão de reconhecimento dos antígenos apresentados por este novo sistema de purificação parcial de componentes virais.