Determining anthelmintic residues in goat milk in Brazil / Determinação de resíduos anti-helmínticos no leite caprino no Brasil

Anthelmintics are used to combat nematodes. The misuse of anthelmintics can raise the cost of milk production. The objective of this research was to determine the presence of anthelmintics in goat milk. Twenty goats were used, divided into four groups of five animals: I- animals treated with an ivermectin-based anthelmintic; II- animals treated with moxidectin; III- animals treated with levamisole hydrochloride; and IV: animals treated with albendazole. Milk samples were collected individually: before, and 1, 2, 3, 15 and 21 days after administration of the anthelmintics. Determination of anthelmintic residues was performed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). According to the results, there was an exponential effect (P<0.05) for ivermectin and moxidectin. Moxidectin was the anthelmintic that left a residue in the milk for the longest time, up to 21 days. However, with all the anthelmintics researched, residues were below the maximum limit recommended by the inspecting agencies.(AU)

Anthelmintics são usados ​​para combater nematodes. O mau uso de anti-helmínticos pode aumentar o custo da produção de leite. O objetivo desta pesquisa foi determinar a presença de anti-helmínticos no leite de cabra. Foram utilizados vinte cabras, divididos em quatro grupos de cinco animais: I - animais tratados com um antihelmíntico à base de ivermectina; II - animais tratados com moxidectina; III- animais tratados com cloridrato de levamisol; E IV: animais tratados com albendazole. Amostras de leite foram coletadas individualmente: antes, e 1, 2, 3, 15 e 21 dias após a administração dos anti-helmínticos. A determinação dos resíduos antihelmínticos foi realizada por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS). De acordo com os resultados, houve um efeito exponencial (P <0.05) para ivermectina e moxidectina. A moxidectina foi o anti-helmíntico que deixou um resíduo no leite por mais tempo, até 21 dias. Contudo, com todos os anthelmintics pesquisados, os resíduos estavam abaixo do limite máximo recomendado pelas agências de inspeção.(AU)

Determining anthelmintic residues in goat milk in Brazil / Determinação de resíduos anti-helmínticos no leite caprino no Brasil

Anthelmintics are used to combat nematodes. The misuse of anthelmintics can raise the cost of milk production. The objective of this research was to determine the presence of anthelmintics in goat milk. Twenty goats were used, divided into four groups of five animals: I- animals treated with an ivermectin-based anthelmintic; II- animals treated with moxidectin; III- animals treated with levamisole hydrochloride; and IV: animals treated with albendazole. Milk samples were collected individually: before, and 1, 2, 3, 15 and 21 days after administration of the anthelmintics. Determination of anthelmintic residues was performed by liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS). According to the results, there was an exponential effect (P<0.05) for ivermectin and moxidectin. Moxidectin was the anthelmintic that left a residue in the milk for the longest time, up to 21 days. However, with all the anthelmintics researched, residues were below the maximum limit recommended by the inspecting agencies.

Anthelmintics são usados ​​para combater nematodes. O mau uso de anti-helmínticos pode aumentar o custo da produção de leite. O objetivo desta pesquisa foi determinar a presença de anti-helmínticos no leite de cabra. Foram utilizados vinte cabras, divididos em quatro grupos de cinco animais: I - animais tratados com um antihelmíntico à base de ivermectina; II - animais tratados com moxidectina; III- animais tratados com cloridrato de levamisol; E IV: animais tratados com albendazole. Amostras de leite foram coletadas individualmente: antes, e 1, 2, 3, 15 e 21 dias após a administração dos anti-helmínticos. A determinação dos resíduos antihelmínticos foi realizada por cromatografia líquida-espectrometria de massa (LC-MS). De acordo com os resultados, houve um efeito exponencial (P <0.05) para ivermectina e moxidectina. A moxidectina foi o anti-helmíntico que deixou um resíduo no leite por mais tempo, até 21 dias. Contudo, com todos os anthelmintics pesquisados, os resíduos estavam abaixo do limite máximo recomendado pelas agências de inspeção.

Residues of veterinary drugs in milk in Brazil / Resíduos de medicamentos veterinários em leite no Brasil

ABSTRACT: Veterinary drugs are used in dairy cattle management mainly for therapy and prophylaxis of diseases, which chemicals may leave residues in milk. Human exposure and the unintentional consumption of residues of drugs can lead to side effects and development of resistant bacteria, representing a considerable concern to consumer health. This paper presents the occurrence of residues of veterinary drugs in milk from 2009 to 2011 in Brazil, monitored by the Official Program for Analysis of Residues of Veterinary Drugs in Foods of Animal Origin. A total of 961 samples were collected in the retail and evaluated for the main -lactams, tetracyclines, amphenicol, aminoglycosides, quinolones, sulfonamides and avermectins. Residues of veterinary drugs did not exceed maximum residue limit (MRL); although, there is a considerable use of critically/highly important antimicrobials and avermectins in dairy cows, especially quinolones and tetracyclines. Doxycycline (9%) and abamectin (1.6%) were detected, even though these substances are not intended to be used in milk producing animals for human consumption. Norfloxacin (15%) was observed; although, there are no MRL established, consequently, no residue level should have been detected. No residues of streptomycin, chloramphenicol and -lactams were confirmed. Milk in Brazil contains low levels of veterinary drugs so that toxicological risk regarding milk consumption could not be considered as a public health concern. However, due to the nature of the samples, which correspond to milk from several farms, it could occur a dilution effect.

RESUMO: Medicamentos veterinários são utilizados no manejo do gado leiteiro para tratamento e profilaxia de doenças, podendo deixar resíduos no leite. A exposição humana e o consumo não intencional de resíduos de drogas podem causar efeitos adversos e desenvolvimento de bactérias resistentes, representando importante preocupação para saúde do consumidor. Neste estudo é apresentada a ocorrência de resíduos de medicamentos veterinários no leite de 2009 a 2011 no Brasil, monitorado pelo Programa Oficial de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal. Total de 961 amostras foram coletadas no comércio e avaliadas para os principais -lactâmicos, tetraciclinas, anfenicol, aminoglicosídeos, quinolonas, sulfonamidas e avermectinas. Resíduos de medicamentos veterinários não excederam os LMR, embora exista uso considerável de antimicrobianos criticamente/altamente importantes e avermectinas em vacas leiteiras, especialmente quinolonas e tetraciclinas. Doxiciclina (1,9%) e abamectina (1,6%) foram detectadas, embora não se destinem ao uso em animais produtores de leite para consumo humano. Norfloxacino (15%) foi observado, mesmo não havendo LMR estabelecido, consequentemente, não deveria ter sido detectado qualquer nível de resíduos. Não foram confirmados resíduos de estreptomicina, cloranfenicol e -lactâmicos. Conclui-se que o leite no Brasil contém baixos níveis de resíduos de medicamentos veterinários, de forma que o risco toxicológico relativo ao seu consumo não deve ser considerado problema de saúde coletiva. Contudo, é importante ressaltar a natureza das amostras, que correspondem ao leite de diversas fazendas e o efeito de diluição pode ter ocorrido.

Residues of veterinary drugs in milk in Brazil / Resíduos de medicamentos veterinários em leite no Brasil

ABSTRACT: Veterinary drugs are used in dairy cattle management mainly for therapy and prophylaxis of diseases, which chemicals may leave residues in milk. Human exposure and the unintentional consumption of residues of drugs can lead to side effects and development of resistant bacteria, representing a considerable concern to consumer health. This paper presents the occurrence of residues of veterinary drugs in milk from 2009 to 2011 in Brazil, monitored by the Official Program for Analysis of Residues of Veterinary Drugs in Foods of Animal Origin. A total of 961 samples were collected in the retail and evaluated for the main -lactams, tetracyclines, amphenicol, aminoglycosides, quinolones, sulfonamides and avermectins. Residues of veterinary drugs did not exceed maximum residue limit (MRL); although, there is a considerable use of critically/highly important antimicrobials and avermectins in dairy cows, especially quinolones and tetracyclines. Doxycycline (9%) and abamectin (1.6%) were detected, even though these substances are not intended to be used in milk producing animals for human consumption. Norfloxacin (15%) was observed; although, there are no MRL established, consequently, no residue level should have been detected. No residues of streptomycin, chloramphenicol and -lactams were confirmed. Milk in Brazil contains low levels of veterinary drugs so that toxicological risk regarding milk consumption could not be considered as a public health concern. However, due to the nature of the samples, which correspond to milk from several farms, it could occur a dilution effect.(AU)

RESUMO: Medicamentos veterinários são utilizados no manejo do gado leiteiro para tratamento e profilaxia de doenças, podendo deixar resíduos no leite. A exposição humana e o consumo não intencional de resíduos de drogas podem causar efeitos adversos e desenvolvimento de bactérias resistentes, representando importante preocupação para saúde do consumidor. Neste estudo é apresentada a ocorrência de resíduos de medicamentos veterinários no leite de 2009 a 2011 no Brasil, monitorado pelo Programa Oficial de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal. Total de 961 amostras foram coletadas no comércio e avaliadas para os principais -lactâmicos, tetraciclinas, anfenicol, aminoglicosídeos, quinolonas, sulfonamidas e avermectinas. Resíduos de medicamentos veterinários não excederam os LMR, embora exista uso considerável de antimicrobianos criticamente/altamente importantes e avermectinas em vacas leiteiras, especialmente quinolonas e tetraciclinas. Doxiciclina (1,9%) e abamectina (1,6%) foram detectadas, embora não se destinem ao uso em animais produtores de leite para consumo humano. Norfloxacino (15%) foi observado, mesmo não havendo LMR estabelecido, consequentemente, não deveria ter sido detectado qualquer nível de resíduos. Não foram confirmados resíduos de estreptomicina, cloranfenicol e -lactâmicos. Conclui-se que o leite no Brasil contém baixos níveis de resíduos de medicamentos veterinários, de forma que o risco toxicológico relativo ao seu consumo não deve ser considerado problema de saúde coletiva. Contudo, é importante ressaltar a natureza das amostras, que correspondem ao leite de diversas fazendas e o efeito de diluição pode ter ocorrido.(AU)

Distribuição de resíduos de ivermectina e eprinomectina em diferentes tecidos bovinos e em produtos cárneos enlatados termicamente processados

Um total de 168 machos Bos indicus foram abatidos depois de 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 e 154 dias após a aplicação de eprinomectina e ivermectina (convencional e longa ação), e 18 diferentes tecidos comestíveis foram avaliados quanto à concentração de resíduos dessas moléculas para verificar se o período de carência estabelecido garante o esgotamento em todos eles, em níveis abaixo dos limites máximos estabelecidos por agências reguladoras internacionais, com o objetivo de abordar questões relacionadas à barreiras técnico-comerciais entre países. Além disso, visou analisar se a concentração desses resíduos é afetada pelo processamento térmico, para avaliar a coerência de se considerar para produtos enlatados, os mesmos limites determinados para produtos crus. As análises de concentração de resíduos foram feitas por HPLC (sistema LC-MS/MS). Os dados foram transformados para escala logaritmo natural e foi realizada análise de variância, teste de comparação múltipla, análises de regressão e de correlação. Os resultados demonstraram que os níveis de eprinomectina encontrados foram abaixo de todos os limites máximos de resíduos (LMR), ao longo de todos os períodos e tecidos avaliados. Com relação à ivermectina, padrões diferenciados de distribuição foram observados, porém ao final do período de carência, dos 18 tecidos avaliados, 17 apresentaram concentrações dentro dos LMR, com exceção do sítio de aplicação, em que se observou alto nível de dispersão e valores acima de alguns LMR, mesmo após cumprido o período de carência indicado na bula. Foram observadas correlações significativas (P<0,01) entre concentrações residuais em fígado e em tecidos musculares, sendo que as equações obtidas podem ser úteis em programas de vigilância. O processamento térmico afetou os resultados de concentração de resíduos de ivermectina em alguns músculos testados, que apresentaram concentração significativamente mais elevada (P<0,05) após a esterilização. Conclui-se que a eprinomectina é mais recomendada que a ivermectina, no que tange ao propósito de se evitar violações de LMR; que foram distintos os padrões de distribuição de resíduos em cada tecido avaliado, mas que se respeitado o período de carência, praticamente todos os tecidos estarão abaixo dos LMR estabelecidos internacionalmente, exceto pelo sítio de aplicação; portanto, que o tempo de depleção de resíduos do sítio de aplicação (até abaixo dos LMR) deveria ser considerado para a determinação do período de carência dos medicamentos; e que é fundamental haver uma harmonização dos LMR em esfera global. Além disso, observou-se que o processamento térmico a que os enlatados são submetidos provoca níveis discrepantes (mais elevados) de resíduos em relação aos produtos crus e isso deve ser levado em consideração nas análises de vigilância, pois pode gerar incertezas quanto à possibilidade de violação em mercados importadores.

A total of 168 Bos indicus males were slaughtered after 8, 15, 35, 49, 63, 91, 120 and 154 days post-application of eprinomectin and ivermectin (conventional and long-acting), and 18 different edible tissues were evaluated for the residue concentration of these molecules to verify if the established withdrawal period guarantees depletion in all of them, at levels below the maximum limits established by regulatory agencies around the world, in order to address issues related to technical trade barriers between countries. In addition, it aimed to analyze if the concentration of these residues is affected by thermal processing, to evaluate the consistency of considering for canned goods, the same limits determined for raw products. Residue concentration analyzes were performed using HPLC (LC-MS / MS system). Data were converted into "natural logarithm" scale and analysis of variance, multiple comparison test, regression and correlation analysis were performed. Results showed that eprinomectin levels were found to be below all maximum residue limits (MRL) throughout all periods and tissues evaluated. Regarding ivermectin, differentiated distribution patterns were observed, but at the end of the withdraw period, 17 of the 18 tissues evaluated had concentrations within the MRLs, except for the injection site, where a high level of dispersion was observed and values above some of MRLs recommended by the main international regulations, even after having been completed the withdraw period indicated in the instructions. Significant correlations (P <0.01) were observed between residual concentrations in liver and muscle tissues, and the equations obtained may be useful in surveillance programs. The thermal processing affected ivermectin concentration results in some tested muscle types, which had a significantly higher residue concentration (P <0.05) after sterilization. It was concluded that eprinomectin is more recommended than ivermectin for the purpose of avoiding MRL violations; that the residue distribution patterns in each tissue were different, but if the withdrawal period is met, almost all tissues will be below internationally established MRLs except for the application site; therefore, that the depletion time of injection site residues (to below the MRL) should be considered for the determination of the drug withdrawal period; and that harmonization of MRLs is essential in the global sphere. In addition, it has been observed that the thermal processing to which the canned products are subjected causes discrepant (higher) levels of residues in relation to the raw products and this must be taken into account in surveillance analyzes, since it may generate uncertainties as to the possibility of violation in importers markets.

PANORAMA DE ANÁLISES OFICIAIS DE MONITORAMENTO DA QUALIDADE DO LEITE BENEFICIADO NO BRASIL

O leite compõe uma parte importante dos alimentos mais consumidos e comercializados no mundo. A qualidade e a segurança da matriz alimentícia têm recebido cada vez mais atenção da população, especialmente acerca da presença de perigos microbiológicos e químicos. No que se refere a perigos químicos, há grande preocupação com os medicamentos veterinários que são utilizados no manejo do gado leiteiro, os quais podem deixar resíduos no leite, cujo consumo não intencional pode causar efeitos adversos e determinar a seleção de bactérias resistentes. Objetivou-se com este estudo analisar a qualidade do leite beneficiado comercializado no Brasil, incluindo o pasteurizado, o UHT e o leite em pó, totalizando 1556 amostras monitoradas pelo Programa Oficial do Centro Integrado de Monitoramento da Qualidade de Alimentos (CQUALI-Leite), durante os anos de 2013 e 2014, como subsídio para melhoria e aperfeiçoamento deste programa, direcionando ações corretivas para melhoria de produtos com foco em regiões de maior problemática. Em complementação, foi avaliada a ocorrência de resíduos de medicamentos veterinários no leite beneficiado de 961 amostras, durante os anos de 2009 a 2011, para os principais -lactâmicos, tetraciclinas, anfenicol, aminoglicosídeos, quinolonas, sulfonamidas e avermectinas, monitoradas pelo Programa Oficial de Análise de Resíduos de Medicamentos Veterinários em Alimentos de Origem Animal (Pamvet). Em 37% das amostras foram obtidos resultados insatisfatórios no CQUALI-leite, sendo observado o leite pasteurizado como a categoria com maior índice de irregularidades e o leite em pó a categoria de melhor qualidade, apesar de evidenciar a presença de Bacillus cereus. Os estados da região Nordeste e Norte do Brasil foram aqueles que possuíram maiores números de irregularidades em laudos oficiais de monitoramento. Os resíduos de medicamentos veterinários não excederam os limites máximos, embora exista uso considerável de antimicrobianos criticamente/altamente importantes e avermectinas em vacas leiteiras, especialmente quinolonas e tetraciclinas. Doxiciclina (1,9%) e abamectina (1,6%) foram detectadas, embora não se destinem ao uso em animais produtores de leite para consumo humano. Não foram confirmados resíduos de estreptomicina, cloranfenicol e -lactâmicos. Assim, conclui-se que toda cadeia de processamento do leite no Brasil ainda necessita de aprimoramento e monitoramento contínuos e que para aperfeiçoamento do CQUALI-Leite infere-se que o direcionamento de ações corretivas para melhoria de produtos deverá ter foco nas regiões Norte e Nordeste, principalmente quanto ao leite pasteurizado. Foram obtidos baixos níveis de resíduos de medicamentos veterinários no leite, de forma que o risco toxicológico relativo ao seu consumo não deve ser considerado problema de saúde coletiva. Contudo, é importante ressaltar a natureza das amostras, que correspondem ao leite como matéria prima de diversas fazendas e o efeito de diluição pode ter ocorrido. A detecção de certos antimicrobianos e avermectinas pode estar associada ao uso extra-label ou ao desrespeito dos períodos de carência, sugerindo que Boas Práticas Veterinárias não estejam sendo seguidas, visto que resíduos de fármacos não autorizados foram detectados.

Milk makes up an important part of the food consumed and marketed in the world. The quality and safety have received increasing attention from the population, especially about the presence of microbiological and chemical hazards. Concerning chemical hazards, there is a great concern about veterinary drugs that are used in dairy cattle management, which chemicals may leave residues in milk, whose unintended consumption may cause side effects and determine the selection of resistant bacteria. The aim of this study was to analyze the quality of milk marketed in Brazil, including pasteurized milk, UHT milk and powered milk, totaling 1556 samples monitored by the Official Program of the Integrated Center for Food Quality Monitoring (CQUALI-Leite), during 2013 and 2014, as a subsidy for improvement and enhancement of this program, focusing corrective actions to improve products with attention on challenging regions. In addition, the occurrence of veterinary drugs residues in 961 milk samples was evaluated, during 2009 and 2011, for the main -lactams, tetracyclines, amphionicol, aminoglycosides, quinolones, sulfonamides and avermectins monitored by the Official Program for Analysis of Residues of Veterinary Drugs in Foods of Animal Origin (Pamvet). Thus, 37% of the milk samples yielded unsatisfactory results in CQUALI-milk, showing pasteurized milk as the category with the highest rate of irregularities and the milk powder the category exhibiting the best quality, despite the evidence of Bacillus cereus. The states of the Northeast and North of Brazil were the ones that presented the greatest number of irregularities in official monitoring reports. Residues of veterinary drugs did not exceed maximum limits, although there is a considerable use of critically/highly important antimicrobials and avermectins in dairy cows, especially quinolones and tetracyclines. Doxycycline (9%) and abamectin (1.6%) were detected, even though these substances are not intended to be used in milk producing animals for human consumption. No residues of streptomycin, chloramphenicol and -lactams were confirmed. Therefore, it is concluded that the whole milk chain in Brazil still needs improvement and continuous quality monitoring, and to enhance the CQUALI-milk we shall infer that the targeting of corrective actions to improve products should be focused in the North and Northeast regions, especially regarding the pasteurized milks. The milk showed low levels of veterinary drugs so that toxicological risk regarding milk consumption could not be considered as a public health concern. However, it is important to highlight the nature of the samples, which correspond to milk from several farms and a dilution effect can be occurred. The detection of some antimicrobials and avermectins may be linked to extra-label use or noncompliance withdrawal periods suggesting that Good Veterinary Practices are not being followed, since residues of unauthorized drugs have been detected.

RESÍDUOS DE ANTIMICROBIANOS EM LEITE PASTEURIZADO E O EFEITO INIBIDOR SOBRE BACTÉRIAS LÁCTICAS PARA ELABORAÇÃO DE PRODUTOS LÁCTEOS FERMENTADOS

A presença de resíduos de antimicrobianos em leite pode representar grave problema de saúde pública. Por este motivo, algumas medidas legais foram tomadas pelos órgãos competentes, como a venda de medicamentos antimicrobianos sob prescrição médica ou médico veterinária, a observância de Boas Práticas Agropecuárias, e a definição de limites máximos de resíduos (LMR) em alimentos de origem animal. No entanto, os LMR estabelecidos não visam os efeitos sobre tecnologia e fabricação de produtos lácteos, mas sim a proteção da saúde pública. Sob o aspecto tecnológico, as bactérias lácticas são indispensáveis na produção de derivados lácteos fermentados, pois promovem a acidificação controlada e melhoram a textura e o sabor do produto. Assim, a hipótese norteadora deste estudo é que resíduos de antimicrobianos em leite, mesmo abaixo do LMR, são capazes de alterar negativamente a resposta fermentativa das bactérias lácticas. Para tal, foram empregados cinco antimicrobianos (amoxicilina, ceftiofur, gentamicina, sulfametazina e tetraciclina, representante dos cinco principais grupos de antimicrobianos constantes do Plano Nacional de Controle de Resíduos e Contaminantes do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento - MAPA), em cinco diferentes concentrações (0; 0,50; 0,75; 1,0 e 1,25 do respectivo LMR), que foram testados frente a três fermentos comerciais, DELVO® FRESH FC-211 (Lactococcus lactis subsp. lactis e Lactococcus lactis subsp. cremoris), DELVO® CHEESE CP-101 (Streptococcus thermophilus) e DELVO® FRESH YS-131 (Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus), amplamente utilizados na fabricação de queijos e iogurtes. O leite foi proveniente de três animais diferentes, comprovadamente não-tratados com antimicrobianos. Os controles e tratamentos experimentais foram analisados com respeito à cinética fermentativa. O efeito inibitório das substâncias antimicrobianos foi determinado pela variação na curva de acidificação, bem como quanto ao tempo para se atingir o pH final de referência de cada fermentação. Ceftiofur e tetraciclina inibiram a atividade de cultura contendo Streptococcus thermophilus, mesmo quando empregados em concentrações abaixo de seus respectivos LMR. A cultura composta por Lactococcus lactis ssp. lactis e Lactococcus lactis ssp. cremoris foi inibida pelos antimicrobianos ceftiofur e gentamicina, mesmo quando empregados em concentrações abaixo dos respectivos LMR. Ceftiofur também inibiu a cultura mista de Streptococcus thermophilus e Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, em concentrações abaixo de seu LMR. Assim, os resultados do presente estudo indicam que concentrações abaixo do LMR de antimicrobianos em leite podem interferir negativamente na atividade fermentativa de bactérias lácticas.

The presence of antimicrobial residues in milk represents a serious public health problem. For this reason, some legal measures have been taken by the governments, as a sale of antimicrobial drugs under medical or veterinary medical prescription, observation of Good Agricultural Practices, and the definition of maximum residue limits (MRLs) in foods of animal origin. However, the established MRL do not take into account effects on technology and manufacturing of dairy products, but only the protection of public health. Under the technological aspect, lactic bacteria are indispensable in the production of fermented dairy products, because promote controlled acidification and improve the texture and flavor of the product. Thus, the guiding hypothesis of this study is that antimicrobial residues in milk, even below the MRL, are capable of negatively altering the fermentative response of lactic bacteria. Five antimicrobials (amoxicillin, ceftiofur, gentamicin, sulfamethazine and tetracycline, representing the five main antimicrobial groups included in the National Plan for the Control of Residues and Contaminants of the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA), in five different concentrations (0, 0.50, 0.75, 1.0 and 1.25 of the respective MRL), which were tested against three commercial lactic cultures, DELVO® FRESH FC-211 (Lactococcus lactis subsp. lactis e Lactococcus lactis subsp. cremoris), DELVO® CHEESE CP-101 (Streptococcus thermophilus) and DELVO® FRESH YS-131 (Lactobacillus bulgaricus e Streptococcus thermophilus). Widely used in the manufacture of cheeses and yogurts. The milk came from three different animals, proven untreated with antimicrobials. Experimental controls and treatments were analyzed with respect to fermentative kinetics. The inhibitory effect of the antimicrobial substances was determined by the variation in the acidification curve as well as the time to reach the final reference pH of each fermentation. Ceftiofur and tetracycline inhibited the culture activity containing Streptococcus thermophilus, even when employed at concentrations below their respective MRL. The culture composed of Lactococcus lactis ssp. lactis and Lactococcus lactis ssp. cremoris was inhibited by ceftiofur and gentamicin antimicrobials, even when used at concentrations below their MRL. Ceftiofur also inhibited the mixed culture of Streptococcus thermophilus and Lactobacillus delbrueckii ssp. bulgaricus, at concentrations below its MRL. Thus, the results of the present study indicate that concentrations below the antimicrobial MRL in milk may negatively interfere with the fermentative activity of lactic acid bacteria.

MÉTODOS DE CONTROLE PARASITÁRIO, PRODUTIVIDADE E RESÍDUOS DE MOXIDECTINA EM TECIDOS DE CORDEIROS Tese apresentada ao Programa

O uso indiscriminado dos anti-helmínticos, além de favorecer a seleção de populações de parasitas resistentes, está diretamente relacionado com a presença de resíduos dos fármacos na carne e subprodutos dos ruminantes. A tese está composta por quatro estudos. O primeiro estudo teve como objetivo determinar a sensibilidade e a especificidade do método FAMACHA (FMC), usado para detectar a anemia causada por Haemonchus contortus, a partir dos dados coletados da avaliação da conjuntiva ocular de 42 cordeiros lactentes e 35 ovelhas em lactação, em intervalos de 14 dias, durante 5 meses. Para tanto, o hematócrito (Ht) foi utilizado como padrão-ouro na avaliação clínica da anemia dos animais. Três valores de corte para Ht (22, 19 ou 15%) foram utilizados para confirmar a anemia. Os resultados obtidos indicam que o FMC pode ser utilizado para identificar os cordeiros lactentes e ovelhas em fase de lactação com sinais clínicos de anemia decorrentes da infecção por H. contortus, sendo necessária a inclusão do FMC 3 como positivo para aumentar a sensibilidade do método, reduzindo o risco de morte de animais anêmicos não diagnosticados (falsos negativos). O segundo estudo teve como objetivo determinar o tempo mínimo para que as concentrações de moxidectina (MOX) atingissem níveis inferiores ao limite máximo de resíduo (LMR), no músculo próximo ao local de aplicação (50 g/kg) e gordura (500 g/kg). Foram utilizados 22 cordeiros, machos e fêmeas, abatidos 2; 4; 7; 14; 28 e 42 dias após o tratamento (DPT) com dose única de MOX (0,2 mg/kg de PC). A curva de depleção da MOX obtida para o músculo demonstrou alta concentração do fármaco 2 DPT (1854,2 g/kg), seguida por rápida absorção no local de administração, atingindo concentração abaixo do LMR 5 DPT. A gordura apresentou longo período de persistência do resíduo de MOX em alta concentração, atingindo níveis inferiores ao LMR 17 DPT. No terceiro e quarto estudo avaliou-se a produtividade animal, o estado sanitário e a concentração de resíduos de MOX nos tecidos (músculo e gordura), órgãos (rim e fígado) e soro, no momento do abate, de cordeiros submetidos a três programas para controle de endoparasitas: (T1) tratamento preventivo a cada 28 dias; (T2) tratamento após contagem de ovos por grama de fezes (OPG) igual ou superior a 700 e (T3) tratamento seletivo pelo método FMC. Para ambos os estudos (terceiro e quarto), 42 cordeiros foram mantidos com suas mães em pastagem de verão (Tifton-85) até o abate e avaliados a cada 14 dias para as variáveis: ganho médio diário de peso (GMD), OPG e FMC. Ao final do período experimental obteve-se o número total de aplicações do anti-helmíntico por cordeiro. No momento do abate foram realizadas as avaliações das carcaças (peso e rendimento) e coleta das amostras para determinação de resíduos de MOX. A quantificação de MOX no soro, tecidos e órgãos dos cordeiros foi realizada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a espectrometria de massas (LC-MS/MS). Entre os gêneros de nematódeos observados nas coproculturas, o Haemonchus spp. (61,5%) e Ostertagia spp. (21,3%) foram os mais prevalentes. A implantação de programas seletivos, OPG e FMC, no controle de endoparasitas para cordeiros terminados em pastagem permitiu a obtenção de desempenho individual e por área semelhantes (P>0,05) aos dos animais submetidos ao tratamento preventivo a cada 28 dias. As características de peso, rendimento e deposição de gordura também não diferiram (P>0,05) entre os animais submetidos aos três programas para controle de endoparasitas. Das 756 amostras analisadas a partir das coletas realizadas no momento do abate dos cordeiros terminados em pastagem, submetidos a três métodos para controle de endoparasitas, apenas uma amostra de gordura proveniente do tratamento seletivo apresentou concentração (586,3 g/kg) acima do LMR. Em nenhuma das amostras de soro avaliadas foi detectado resíduo do fármaco. Houve correlação significativa da concentração de resíduo de MOX na gordura com o peso de gordura omental (P<0,05; r=0,5310), indicando que animais com maior deposição de gordura podem apresentar maior persistência de resíduo no organismo. Os resultados obtidos indicam que os métodos seletivos, OPG e FMC, podem ser indicados no controle de endoparasitas para cordeiros não desmamados e terminados em pastagem de verão, em substituição ao método preventivo de tratamento a cada 28 dias, sem prejuízos na produtividade animal e características da carcaça, com mínimo risco de ocorrência de violação do LMR quando o tempo de carência é respeitado.

The indiscriminate use of anthelmintics has been promoted the selection of resists parasites populations and is directly related to the presence of drugs residues in meat and ruminants products. This thesis is divided in four studies. The first study aimed to determine the sensitivity and specificity of the FAMACHA method (FMC) to detect clinical anemia caused by Haemonchus spp. in lambs and sheep. Ocular conjunctivae of 42 suckling lambs and 35 lactating ewes was evaluated in intervals of 14 days during five months. Hematocrit (Ht) served as the gold standard for anemia evaluation. Three standard values of Ht (22, 19 or 15%) were used to confirm anemia. The results indicate that the FMC is a safe method to be used in lambs and lactating ewes with clinical anemia from Haemonchus spp infection and need treatment. For both categories, it was necessary to include FMC 3 as a positive to increase the sensitivity of the method and to reduce the risk of death of undiagnosed anemic animals (false negatives). The second study aimed to determine the time it took for concentration of moxidectin (MOX) to reach levels below the maximum residue limit (MRL) in the muscle near the site of application (50 g/kg) and fat (500 g/kg). Twenty-two lambs, males and females, used in the study, were slaughtered 2; 4; 7; 14; 28 and 42 days after treatment (DAT) with a single dose of MOX (0.2 mg kg-1/body weight). The depletion curve for MOX obtained for the muscle showed a high drug concentration at 2 DAT (1854.2 g/kg) followed a rapid absorption of the drug at the site of administration, reaching a concentration below MRL of 5 DAT. The fat had a long persistence of MOX with high concentration, reaching levels below the MRL 17 DAT. The third and fourth studies evaluated the animal productivity, health status and the concentration of MOX residues in tissues (muscle and fat), organs (kidney and liver) and serum at slaughtered lambs submitted to three programs for control of nematode parasites: (T1) preventive treatment every 28 days; (T2) treatment after fecal egg count (EPG) equal or higher than 700; and (T3) selective treatment with FMC. For both studies, 42 lambs were kept with the ewes in summer pastures (Tifton-85) until slaughter (30 kg) and evaluated every 14 days for the values of: average daily gain (ADG), EPG and FMC. At the end of the experiment, the number of anthelmintic applications was calculated per lamb. Samples for determination of MOX residue were collected at slaughter, as well as the measurement of weight and carcass. MOX residue was determined using liquid chromatography ultra-high pressure with mass spectrometry (LCMS/ MS). Among the prevalent genera of helminths, Haemonchus spp. (61.5%) and Ostertagia sp. (21.3%) were the most predominant in the coproculture. The implementation of selective programs, EPG and FMC, to endoparasites control of lambs finished in pasture allowed to obtained similar productive (P>0.05) individual and per area when compared to preventive treatment every 28 days. The carcass traits (weight, yield and fat deposition) also did not differ (P>0.05) among the programs. Of the 756 samples analyzed for MOX residues of slaughtered lambs submitted to three methods of endoparasites control, just one sample of fat from the selective treatment group showed a concentration (586.3 ml kg-1) above the MRL. No sample of serum showed MOX residue levels above the LOQ of the analytical method. A significant correlation was observed with MOX residue and omental fat (P<0.05; r=0.5310), suggesting that animals with more fat deposition may have increased residue persistence in their body. The results indicate that selective methods, EPG and FMC, may be used to control endoparasites in suckling lambs in summer pastures, replacing the preventive method of treatment every 28 days without losses in animal productivity and carcass characteristics, with low risk of violation of the maximum residue limit when the lack of time is regarded.

Pesticide residues in organic and conventional pasteurized milks / Resíduos de agrotóxicos em leites pasteurizados orgânicos e convencionais

The production of organic milk has been gaining attention due to global market demand for ecological products. However, data about this product are still very limited in Brazil. The aim of this study was to investigate the chemical residue contamination of organic and conventional pasteurized milk sold in three brazilian states. Five certified brands of pasteurized organic milk and five conventional milk brands were analyzed. The samples were subjected to the determination of 88 compounds (79 pesticides and 9 veterinary drugs). For the extraction of the analytes we applied the modified QuEChERS method and for the identification and quantification of the residue we used Liquid Chromatography Coupled to Mass Spectrometry in Series (LC-MS/MS). Results showed that both organic and conventional milk presented only pesticides contamination. Of the 56 samples, five (8.9%) contained pesticides residues. Three of them being samples of organic milk; two of which, were positive for clomazone and one for chlorpyrifos. In the conventional milk positive samples, one showed monocrotophos the other presented chlorpyrifos. Although there was a low frequency of positive samples and three of the pesticides detected were below the limit of quantification, there is concern regarding these results since the use of monocrotophos has been prohibited in Brazil, and chlorpyrifos showed concentrations ab

A produção de leite orgânico vem ganhando destaque como resposta à demanda global do mercado por produtos ecológicos. São escassos os dados sobre este produto no Brasil. O objetivo do estudo foi verificar a contaminação por resíduos químicos de leites pasteurizados orgânicos e convencionais comercializados em três Estados brasileiros. Foram analisadas cinco marcas de leite pasteurizado orgânico certificadas e cinco marcas de leite pasteurizado convencional. As amostras foram submetidas à determinação de 88 compostos (79 agrotóxicos e 9 medicamentos veterinários). Para a extração dos analitos aplicou-se o método QuEChERS modificado. Para identificação e quantificação dos resíduos utilizou-se Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas em Série (LC-MS/ MS). Os resultados mostraram que tanto o leite orgânico quanto o convencional apresentaram apenas contaminação por agrotóxicos. Das 56 amostras obtidas, cinco (8,9%) continham resíduos de agrotóxicos, sendo que destas, três eram amostras de leite orgânico (duas foram positivas para clomazone e uma para clorpirifós). Nas duas amostras positivas do leite convencional, em uma detectou-se monocrotofós e em outra clorpirifós. Embora tenha havido baixa frequência de amostras positivas e três dos agrotóxicos detectados estavam abaixo dos limites de quantificação, os dados encontrados preocupam, pois o monocrotofós teve seu

Pesticide residues in organic and conventional pasteurized milks / Resíduos de agrotóxicos em leites pasteurizados orgânicos e convencionais

The production of organic milk has been gaining attention due to global market demand for ecological products. However, data about this product are still very limited in Brazil. The aim of this study was to investigate the chemical residue contamination of organic and conventional pasteurized milk sold in three brazilian states. Five certified brands of pasteurized organic milk and five conventional milk brands were analyzed. The samples were subjected to the determination of 88 compounds (79 pesticides and 9 veterinary drugs). For the extraction of the analytes we applied the modified QuEChERS method and for the identification and quantification of the residue we used Liquid Chromatography Coupled to Mass Spectrometry in Series (LC-MS/MS). Results showed that both organic and conventional milk presented only pesticides contamination. Of the 56 samples, five (8.9%) contained pesticides residues. Three of them being samples of organic milk; two of which, were positive for clomazone and one for chlorpyrifos. In the conventional milk positive samples, one showed monocrotophos the other presented chlorpyrifos. Although there was a low frequency of positive samples and three of the pesticides detected were below the limit of quantification, there is concern regarding these results since the use of monocrotophos has been prohibited in Brazil, and chlorpyrifos showed concentrations ab

 A produção de leite orgânico vem ganhando destaque como resposta à demanda global do mercado por produtos ecológicos. São escassos os dados sobre este produto no Brasil. O objetivo do estudo foi verificar a contaminação por resíduos químicos de leites pasteurizados orgânicos e convencionais comercializados em três Estados brasileiros. Foram analisadas cinco marcas de leite pasteurizado orgânico certificadas e cinco marcas de leite pasteurizado convencional. As amostras foram submetidas à determinação de 88 compostos (79 agrotóxicos e 9 medicamentos veterinários). Para a extração dos analitos aplicou-se o método QuEChERS modificado. Para identificação e quantificação dos resíduos utilizou-se Cromatografia Líquida Acoplada à Espectrometria de Massas em Série (LC-MS/ MS). Os resultados mostraram que tanto o leite orgânico quanto o convencional apresentaram apenas contaminação por agrotóxicos. Das 56 amostras obtidas, cinco (8,9%) continham resíduos de agrotóxicos, sendo que destas, três eram amostras de leite orgânico (duas foram positivas para clomazone e uma para clorpirifós). Nas duas amostras positivas do leite convencional, em uma detectou-se monocrotofós e em outra clorpirifós. Embora tenha havido baixa frequência de amostras positivas e três dos agrotóxicos detectados estavam abaixo dos limites de quantificação, os dados encontrados preocupam, pois o monocrotofós teve seu

Fenitrothion determination in wheat flour / Determinação de fenitrotiona em farinha de trigo

Fenitrothion is an organophophorus insecticide of moderate toxicity to mammals, which is used in agriculture to control insects on some cultures and on stored grains. ANVISA/ Brazilian Ministry of Health established the fenitrothion maximum limit residue (MLR) of 1.0mg/kg in wheat. The aim of this investigation was to verify this compound residues in white wheat flour to comply the São Paulo State Health Programme Programa Paulista 2006. For this purpose a survey of fenitrothion residues was carried out in 62 flour samples from varied market sites and bakeries of São Paulo State, collected by Sanitary Surveillance Service from April to June 2006. Fenitrothion residues were determined by means of gas chromatography with flame photometric detection (GC-FPD). Recovery studies were performed at two different levels, 0.05 e 0.50mg/kg, and the mean recoveries on the established levels were between 93% - 113% and 78% - 91%, respectively. The limit of detection was estimated as 0.02mg/kg, and the limit of quantification was 0.05mg/kg. The data showed values of fenitrothion lower than the established MRL to wheat (1.0mg/kg), which corroborate the needs to establish MRL for processed products, such as wheat flour. MRLs are the basis for calculating the daily dietary consumption of pesticides. They also provide factual data for estimating the daily pesticide residue intake by a person t

A fenitrotiona é um inseticida organofosforado de toxicidade moderada para mamíferos, usado para o controle de insetos em algumas culturas e em grãos armazenados. No Brasil, seu limite máximo de resíduo (LMR) em trigo estabelecido pela ANVISA/MS é 1,0mg/kg. Com a finalidade de verificar seus resíduos em farinha de trigo branca atendendo o Programa Paulista 2006, foram analisadas 62 amostras coletadas no período de abril a junho de 2006 pela Vigilância Sanitária do Estado de São Paulo, em vários pontos de comércio e padarias do estado. A fenitrotiona foi determinada por cromatografia em fase gasosa com detector fotométrico de chama (FPD). Foram realizados estudos de recuperação em dois níveis, 0,05 e 0,50mg/kg, cujos resultados variaram de 93% a 113% e 78% a 91%, respectivamente. O limite de detecção do método foi 0,02mg/kg e o de quantificação foi 0,05mg/kg. Os dados obtidos são inferiores ao LMR vigente para trigo de 1,0mg/kg e corroboram a importância do estabelecimento de LMR para produtos processados, neste caso, a farinha de trigo. Os LMR são a base para o cálculo do consumo diário dos pesticidas, proporcionando dados mais realistas para o cálculo da quantidade de resíduos de pesticidas realmente ingeridos por uma pessoa consumindo uma dieta que lhe é habitual (Ingestão Diária Aceitável).