Proliferative activity of oocytes in multi-oocyte follicles of bovine ovary / Atividade proliferativa em folículos multi-oócitos na espécie bovina

We characterized the proliferative activity of multi-oocyte follicles with anti-nuclear antigen of proliferating cells (PCNA). Ovaries (n = 12) from heifers were processed for histology. From 789 multi-oocytes follicles observed, only 11 were considered appropriated for immunostaining, since they presented all nuclei of the oocytes clearly visible. All multi-oocyte follicles were positive for PCNA, but some oocytes showed no proliferative activity. We conclude that oocytes in multi-oocyte follicles seem to be in different stages of the cell cycle.

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a atividade proliferativa de folículos multi-oócitos com antígeno marcador de proliferação celular (PCNA). Ovários (n = 12) de novilhas foram processados para histologia. A partir de 789 folículos multi-oócitos identificados, somente 11 foram considerados adequados para imunohistoquímica por apresentarem todos os núcleos claramente visíveis. Todos os folículos multi-oócitos foram positivos para PCNA, mas alguns oócitos não apresentaram marcação. Concluímos que oócitos presentes em folículos multi-oócitos parecem estar em diferentes fases do ciclo celular.

Proliferative activity of oocytes in multi-oocyte follicles of bovine ovary / Atividade proliferativa em folículos multi-oócitos na espécie bovina

We characterized the proliferative activity of multi-oocyte follicles with anti-nuclear antigen of proliferating cells (PCNA). Ovaries (n = 12) from heifers were processed for histology. From 789 multi-oocytes follicles observed, only 11 were considered appropriated for immunostaining, since they presented all nuclei of the oocytes clearly visible. All multi-oocyte follicles were positive for PCNA, but some oocytes showed no proliferative activity. We conclude that oocytes in multi-oocyte follicles seem to be in different stages of the cell cycle.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a atividade proliferativa de folículos multi-oócitos com antígeno marcador de proliferação celular (PCNA). Ovários (n = 12) de novilhas foram processados para histologia. A partir de 789 folículos multi-oócitos identificados, somente 11 foram considerados adequados para imunohistoquímica por apresentarem todos os núcleos claramente visíveis. Todos os folículos multi-oócitos foram positivos para PCNA, mas alguns oócitos não apresentaram marcação. Concluímos que oócitos presentes em folículos multi-oócitos parecem estar em diferentes fases do ciclo celular.(AU)

Cell proliferation in ovarian follicles fromBos taurus indicus females with different antral follicle count

The aim of this study was to compare the cell proliferation rate of follicles from Bostaurus indicusfemales with different antral follicle counts (AFCs). Thirty pairs of ovaries were classified as having low(≤ 31 follicles), intermediate (≥ 46 and ≤ 76 follicles) or high AFC (≥ 91 follicles). The ovaries were cut into 1 x 1 x 0.3 cm fragments, fixed in 10% buffered formalin solution and subjected to immunohistochemical analysis for proliferating cell nuclear antigen (PCNA). PCNA detection was detected in all stages of follicular development, being 1,388 (82.23%) primordial, 197 (11.67%) primary, 29 (1.72%) secondary and 74 (4.83%) antral follicles. The PCNA detection rate was higher (P ≤ 0.05) for antral and secondary follicles in ovaries with intermediate and low AFCs. This study showed that higher PCNA at early stages of follicular growth is detected in animals with high AFC, whereas a higher PCNA is seen in secondary and antral follicles of animals with low AFC.

Cell proliferation in ovarian follicles fromBos taurus indicus females with different antral follicle count

The aim of this study was to compare the cell proliferation rate of follicles from Bostaurus indicusfemales with different antral follicle counts (AFCs). Thirty pairs of ovaries were classified as having low(≤ 31 follicles), intermediate (≥ 46 and ≤ 76 follicles) or high AFC (≥ 91 follicles). The ovaries were cut into 1 x 1 x 0.3 cm fragments, fixed in 10% buffered formalin solution and subjected to immunohistochemical analysis for proliferating cell nuclear antigen (PCNA). PCNA detection was detected in all stages of follicular development, being 1,388 (82.23%) primordial, 197 (11.67%) primary, 29 (1.72%) secondary and 74 (4.83%) antral follicles. The PCNA detection rate was higher (P ≤ 0.05) for antral and secondary follicles in ovaries with intermediate and low AFCs. This study showed that higher PCNA at early stages of follicular growth is detected in animals with high AFC, whereas a higher PCNA is seen in secondary and antral follicles of animals with low AFC.(AU)

Avaliação histomorfométrica e da proliferação celular em úlceras de córnea superficiais, induzidas em coelhos, após o uso de colírio de Citrus lemon / Histomorphometry evaluation and cellular proliferation in superficial corneal ulcer, induced in rabbits, after using eyedrops of Citrus lemon

O objetivo do presente estudo foi avaliar e comparar, por meio de histomorfometria e imuno-histoquímica para PCNA (Antígeno Nuclear de Proliferação Celular), o processo de reparação corneal de úlceras superficiais induzidas em coelhos e tratadas com colírios de óleo essencial de Citrus lemon (CL). Foram utilizadas 40 fêmeas da espécie leporina, constituindo-se quatro grupos experimentais de 10 animais cada. Todos os animais foram submetidos à indução da úlcera superficial experimental por meio da aplicação tópica de n-heptanol. Em dois grupos foram instilados colírios à base de óleo essencial de Citrus lemon, em diferentes concentrações, sendo 3% (GL3) e 5% (GL5). Outro grupo foi tratado com Tween 80 8% (GT), que é o diluente utilizado na produção dos colírios de CL; o grupo controle (GC) recebeu apenas substituto da lágrima. Todos os colírios foram aplicados quatro vezes ao dia. Os grupos experimentais foram distribuídos em dois subgrupos, com cinco animais cada, de acordo com os períodos finais de avaliação. O primeiro subgrupo (M1) foi avaliado após 24 horas e o segundo (M2), após cinco dias. Nas comparações entre os momentos iniciais e finais, os grupos tratados com substituto da lágrima, Tween 80 8% e colírio à base de óleo essencial deCitrus lemon 5% promoveram aumento na espessura epitelial na periferia da córnea e maior percentual de proliferação celular. Não houve diferença de celularidade entre os tratamentos. Os colírios à base de óleo essencial de Citrus lemon, nas diferentes concentrações, promoveram a reepitelização corneal, sem causar lesões adicionais ao epitélio ou estroma corneal, podendo ser utilizado na superfície ocular(AU)

The aim of this study was to evaluate and compare through histomorphometry and immunohistochemistry for PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen), the repair process in superficial corneal ulcers induced in rabbits and treated with eyedrops of Citrus lemon (CL) essential oil. Fifty female rabbits were used and divided into 4 experimental groups of 10 animals each one. Every animal underwent induction of experimental superficial ulcer by topical application of n-heptanol. Three groups were treated with eyedrops of Citrus lemon essential oil in two different concentrations: 3% (GL3) and 5% (GL5). Another group was treated with Tween 80 8% (GT), which is the solvent used in the production of eyedrops of CL; the control group (CG) received only tear substitute. All eyedrops were applied four times daily. The experimental groups were divided into two subgroups with five animals in each one, according to the final evaluation periods. The first subgroup (M1) was evaluated after 24 hours and the second (M2) after 5 days. In the comparison between the initial and final moments, the groups treated with tear substitute, Tween 80 8% and eyedrops of Citrus lemon essential oil 5% had an increase in epithelial thickness at the periphery of the cornea and a higher percentage of cell proliferation. There was no difference in cellularity between treatments. The eyedrops of Citrus lemon essential oil, at different concentrations, promoted corneal reepithelialization without causing further injury to the epithelium and corneal stroma, so they can be used on the ocular surface(AU)

Oral fibrosarcoma in jararaca (Bothrops pubescens): anatomopathological and immunohistochemical aspects / Fibrossarcoma oral em jararaca (Bothrops pubescens): aspectos anatomopatológicos e imuno-histoquímicos

A 4-year-old female captive-bred snake of the genus Bothrops showed swelling on the left side of the oral cavity, suggesting the development of neoplasia. The mass was removed surgically and sent for pathological examination. Two months later a new increase in volume in the same site was observed, suggesting recurrence. The lesion was completely removed and sent for pathological analysis. Histologically, the two-samples consisted of a mass with highly-cell density composed of spindle-shaped anaplastic cells arranged in interwoven bundles, distributed throughout the tissue extension and, occasionally, polygonal cells arranged in irregular fascicles. The Masson trichrome staining showed modest amount of collagen supporting the neoplastic cells. PAS-positive content was not observed in the cytoplasm of neoplastic cells. Histological and histochemical findings indicated that it was a spindle cell neoplasm, but the classification was not possible. Immunohistochemistry was requested and performed using the streptavidin-biotin-peroxidase method. The markers used were anti-vimentin, anti-PCNA, anti-EMA, anti-melan A and anti-melanosome, anti-desmin, anti-actin, anti-CD68 and anti- S100protein. The neoplastic cells were immunoreactive for vimentin and PCNA and negative for the other antibodies. The morphology characterization, histochemical and immunohistochemical analysis of neoplastic cells allowed the definitive diagnosis of oral fibrosarcoma.(AU)

Uma serpente de cativeiro, fêmea, quatro anos de idade, do gênero Bothrops apresentou aumento de volume no lado esquerdo da cavidade oral, sugerindo tratar-se de neoplasma. A massa foi removida cirurgicamente e enviada para exame anatomopatológico. Dois meses depois foi observado novo aumento de volume no mesmo local, sugerindo recidiva. A lesão foi removida por completo e também enviada para análise. Histologicamente, as duas amostras consistiam de massa altamente celular, composta por células anaplásicas fusiformes organizadas em feixes entrelaçados e distribuídos por toda extensão tecidual e, ocasionalmente, células poligonais arranjadas em fascículos irregulares. A coloração de tricrômico de Masson apresentou quantidade modesta de colágeno sustentando as células neoplásicas. Não foi observado conteúdo PAS-positivo no citoplasma das células neoplásicas. Os achados histológicos e histoquímicos indicavam tratar-se de neoplasma de células fusiformes, porém não era possível sua classificação. A imuno-histoquímica foi requisitada e realizada pelo método streptavidina-biotina-peroxidase, utilizando os anticorpos anti-vimentina, anti-PCNA, Anti-EMA, anti-melan A, anti-HMB45, anti-desmina, anti-actina, anti-CD68 e anti-proteína S-100. As células neoplásicas foram imunorreativas para vimentina e PCNA e, negativas para os demais anticorpos. A caracterização morfológica, histoquímica e imuno-histoquímica das células neoplásicas permitiu o diagnóstico definitivo de fibrossarcoma oral.(AU)

Expression of proliferating cell nuclear antigen in the endometrium of mares during estrus and at early diestrus / Expressão do antígeno núcleo celular proliferante no endométrio de éguas durante o estro e início do diestro

Immunohistochemical expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) was evaluated in the endometrium of mares during estrus and at early diestrus. Three samples were collected by endometrial biopsy from 10 mares, on estrus/ second day, in the ovulation day and seven days after the ovulation day. PCNA expression was high in luminal epithelium and low in endometrial glands on samples taken on estrus/second day and on the ovulation day (p 0.05). For samples collected on the seventh day following ovulation, the averaged PCNA immunostaining was higher in glandular epithelium (p 0.05). The study revealed that luminal epithelial cells exhibit higher proliferation during estrus and glandular epithelial cells exhibited higher proliferation during diestrus(AU)

A expressão do antígeno núcleo celular proliferante (ANCP) foi avaliada no endométrio de éguas durante o estro e início do diestro. Em cada uma de dez éguas foram efetuadas biópsias do endométrio em três momentos dos respectivos ciclos reprodutivos: segundo dia do estro, dia da ovulação e sete dias após a ovulação. Nas amostras colhidas no segundo dia do estro e no dia da ovulação, a expressão do ANCP foi elevada no epitélio luminal e baixa nas glândulas endometriais (p 0,05). Nas amostras colhidas no sétimo dia após a ovulação, a média de ANCP imunologicamente corado foi maior no epitélio glandular (p 0,05). O estudo revelou que as células do epitélio luminal apresentaram a maior proliferação durante o estro e que as células epiteliais glandulares apresentaram a maior proliferação durante o diestro(AU)

Análise morfométrica e imunohistoquímica das gônadas da prole de matrizes induzidas ao hipotireoidismo e tratadas com melatonina

O desenvolvimento fetal é vulnerável a complicações originadas pelo hipotireoidismo na gestação, levando à uma taxa elevada de abortos, partos prematuros e alteração no peso. A melatonina é um hormônio que está intimamente relacionado à manutenção da gestação, além de regular a fisiologia tireoidiana. Nosso objetivo foi investigar o efeito da ação da melatonina, na dose 10mg/kg, em ratas induzidas ao hipotireoidismo durante a gestação, bem como nas gônadas da sua prole. Foram utilizadas 15 ratas prenhes, divididas em 3 grupos: GC: ratas sem indução ao hipotireoidismo; GH: ratas induzidas ao hipotireoidismo; GHM: ratas induzidas ao hipotireoidismo e tratadas com melatonina. O hipotireoidismo foi induzido pela administração oral de propiltiouracil (1mg/animal) e a melatonina foi administrada via subcutânea (10mg/kg). Ambos os tratamentos foram realizados durante a gestação e lactação. Foram coletadas as gônadas dos filhotes para análise morfométrica e imunohistoquímica de proliferação celular e as tireóides dos filhotes e matrizes para análise morfométrica. Os resultados mostraram que a dosagem de TSH confirmou o hipotireoidismo nas matrizes do grupo sem tratamento, onde houve uma redução significativa (p<0,05) quando comparados com os grupos controle e tratado com melatonina. Já nos filhotes, não houve diferença significativa (p>0,05) nos níveis de TSH entre os grupos. O peso dos ovários, tireóides e o número de filhotes das matrizes com hipotireoidismo apresentaram redução signiticativa (p<0,05) quando comparados aos demais grupos. Da mesma forma na tireóide houve diminuição (p<0,05) do diâmetro folicular, da altura e proporção epitelial no grupo hipotireoidético. Já o ganho de peso corporal mostrou uma redução significativa (p<0,05) do grupo hipotireoidético quando comparado ao grupo controle, porém o grupo tratado com melatonina não diferiu de nenhum dos grupos. A prole das matrizes do grupo hipotireoidismo apresentou redução significativa (p<0,05) do peso corporal, peso das gônadas e da tireóide, além do índice de proliferação celular das gônadas, quando comparados aos filhotes dos grupos controle e hipotireoidismo tratado com melatonina. Diante dos resultados, pode-se concluir que o tratamento com melatonina se mostrou benéfico para prevenir os efeitos do hipotireoidismo materno na prole de ratos, reforçando sua capacidade de regular a organogênese durante a gestação.

Fetal development is vulnerable to complications of hypothyroidism in pregnancy, leading to a high rate of miscarriages, premature births, and weight changes. Melatonin is a hormone that is closely related to the maintenance of gestation, in addition to regulating thyroid physiology. Our objective was to investigate the effect of the action of melatonin at 10 mg / kg in rats induced hypothyroidism during gestation, as well as in the gonads of their offspring. Fifteen pregnant rats were used, divided into 3 groups: GC: rats without induction to hypothyroidism; GH: rats induced hypothyroidism; GHM: rats induced hypothyroidism and treated with melatonin. Hypothyroidism was induced by oral administration of propylthiouracil (1mg/animal) and melatonin was administered subcutaneously (10mg/kg). Both treatments were performed during gestation and lactation. The gonads of the pups were collected for morphometric analysis and immunohistochemistry of cell proliferation and the thyroids of pups and matrices for morphometric analysis. The results showed that TSH dosing confirmed hypothyroidism in the matrices of the untreated group, where there was a significant reduction (p <0.05) when compared to the control and treated groups with melatonin. In the pups, there was no significant difference (p> 0.05) in TSH levels between groups. The weight of the ovaries, thyroids and the number of pups of the matrices with hypothyroidism presented a significant reduction (p <0.05) when compared to the other groups. Similarly in the thyroid, there was a decrease (p <0.05) in follicular diameter, height and epithelial proportion in the hypothyroid group. Body weight gain, however, showed a significant reduction (p <0.05) in the hypothyroid group when compared to the control group, but the melatonin group did not differ from any of the groups. The offspring of the matrices of the hypothyroid group showed a significant (p <0.05) reduction in body weight, gonads and thyroid weight, as well as the gonad cell proliferation index, when compared to controls and hypothalamus groups treated with melatonin. In view of the results, it can be concluded that the treatment with melatonin proved to be beneficial to prevent the effects of maternal hypothyroidism on the offspring of rats, reinforcing their ability to regulate organogenesis during gestation

NEOPLASIAS EPITELIAIS FOLICULARES E EPIDÉRMICAS EM CÃES: AVALIAÇÃO HISTOPATOLÓGICA E DA IMUNOEXPRESSÃO DO RECEPTOR DO FATOR DE CRESCIMENTO EPIDÉRMICO HUMANO TIPO 2 (HER-2) E DO ANTÍGENO NUCLEAR DE PROLIFERAÇÃO CELULAR (PCNA).

As neoplasias têm sido frequentemente diagnosticadas na rotina clínica veterinária, acometendo principalmente cães mais idosos, como uma possível consequência do aumento da expectativa de vida. As neoplasias de pele estão entre as mais frequentes nessa espécie, sendo que o diagnóstico e o prognóstico correto dependem da anatomopatologia do tumor, realizada por meio do exame histopatológico e da técnica de imuno-histoquímica. Neste sentido, o objetivo deste estudo foi avaliar os padrões histopatológicos e a expressão dos marcadores HER2 e PCNA através da técnica de imuno-histoquímica nas neoplasias epiteliais cutâneas, epidérmicas e foliculares em cães. Foram realizadas análises histopatológicas de 42 nódulos neoplásicos cutâneos provenientes de trinta e quatro cães (14 machos e 20 fêmeas, com idades de 3 a 14 anos), obtidos da rotina do Setor de Anatomia Patológica Veterinária da Universidade Federal Fluminense. Alguns animais apresentaram mais de um nódulo neoplásico cutâneo. Na avaliação histopatológica, dos 42 nódulos neoplásicos, 30 (71,4%) foram malignos e 12 (28,6%) foram benignos. Dos 30 nódulos malignos, 9/30 (30%) foram classificadas como Carcinoma de células escamosas bem diferenciados (CCE BD), 18/30 (60%) Carcinoma de células escamosas moderadamente diferenciados (CCE MD) e 2/30 (6,67%) Carcinoma de células escamosas pobremente diferenciados (CCE PD), e um caso de Tricoepitelioma maligno (3,33%). Dos 12 tipos neoplásicos benignos, 5/12 (41,67%) casos foram de Tricoepitelioma benigno, 7/12 (58,33%) de Tricoblastoma tipo fita. A análise imuno-histoquímica com o anticorpo anti-PCNA foi realizada em 30 nódulos neoplásicos cutâneos. A marcação positiva nas neoplasias malignas de cães foi de 41,88% enquanto nas benignas foi de 30,67%. A marcação do anticorpo anti-HER-2 foi realizada em 28 nódulos neoplásicos cutâneos. Do total de amostras, 28,6% (2/7) do tipo neoplásico CCE BD apresentaram score 2+ de marcação e 71,4% (5/7) para o score 3+ para o anticorpo anti-HER-2. O tipo neoplásico CCE MD apresentou 33,3% (3/9) para score 1+, 44,4% (4/9) para o score 2+ e 22,2% (2/9) para o score 3+. O único nódulo de CCE PD foi classificado em score 3+. O único nódulo de tricoepitelioma maligno foi classificado com score 3+. Os tricoepiteliomas benignos apresentaram 40% (2/5) de marcação com score 1+, 60% (3/5) para o score 3+. Os Tricoblastomas tipo fita apresentaram 20% (1/5) para o score 1+ e 80% (4/5) para o score 2+. Não houve associação estatística entre os scores de marcação do anticorpo anti-HER-2 1+,2+,3+ com o percentual de positividade para o anticorpo anti-PCNA (P=0,46) através do teste de Kruskal Wallis. Nesse estudo, por meio da avaliação histopatológica e da expressão dos marcadores HER-2 e PCNA através da imuno-histoquímica nas neoplasias epiteliais cutâneas, em cães, podemos concluir que tanto o anticorpo anti-PCNA quanto o anticorpo antiHER-2 apresentaram maior imunomarcação nas neoplasias malignas e não apresentaram associação entre si com o diagnóstico das neoplasias cutâneas nessa espécie.

Neoplasms have often been diagnosed in the veterinary clinical routine, mainly affecting older dogs, as a possible consequence of increased life expectancy. Skin neoplasms are among the most frequent in this species, and the correct diagnosis and prognosis depend on the anatomopathology of the tumor, performed by histopathological examination and immunohistochemical technique. In this sense, the aim of this study was to evaluate the histopathological patterns and expression of HER2 and PCNA markers by immunohistochemistry in cutaneous, epidermal and follicular epithelial neoplasms in dogs. Histopathological analyzes of 42 cutaneous neoplastic nodules from thirty-four dogs (14 males and 20 females, aged 3 to 14 years), obtained from the routine of the Veterinary Pathological Anatomy Department of the Fluminense Federal University, were performed. Some animals presented more than one cutaneous neoplastic nodule. In the histopathological evaluation of the 42 neoplastic nodules, 30 (71.4%) were malignant and 12 (28.6%) were benign. Of the 30 malignant nodules, 9/30 (30%) were classified as well-differentiated squamous cell carcinoma (BCC BD), 18/30 (60%) moderately differentiated squamous cell carcinoma (BCC MD) and 2/30 (6, 67%) Poorly differentiated squamous cell carcinoma (SCC PD), and one case of malignant trichoepithelioma (3.33%). Of the 12 benign neoplastic types, 5/12 (41.67%) cases were benign trichoepithelioma, 7/12 (58.33%) were trichoblastoma. Immunohistochemical analysis with anti-PCNA antibody was performed on 30 cutaneous neoplastic nodules. The positive mark in malignant neoplasms of dogs was 41.88% while in benign was 30.67%. Anti-HER-2 antibody labeling was performed on 28 cutaneous neoplastic nodules. Of the total samples, 28.6% (2/7) of the CCE BD neoplastic type had a score of 2+ and 71.4% (5/7) of a score of 3+ for the anti-HER-2 antibody. The neoplastic type CCE MD presented 33.3% (3/9) for score 1+, 44.4% (4/9) for score 2+ and 22.2% (2/9) for score 3+. The only SCC PD nodule was classified as score 3+. The only nodule of malignant trichoepithelioma was classified with score 3+. Benign trichoepitheliomas presented 40% (2/5) of score with score 1+, 60% (3/5) for score 3+. Tape-type trichoblastomas presented 20% (1/5) for score 1+ and 80% (4/5) for score 2+. There was no statistical association between anti-HER-2 antibody labeling scores 1 +, 2 +, 3 + and anti-PCNA antibody positivity percentage (P = 0.46) using the Kruskal Wallis test. In this study, through histopathological evaluation and expression of HER-2 and PCNA markers through immunohistochemistry in cutaneous epithelial neoplasms in dogs, we can conclude that both anti-PCNA antibody and antiHER-2 antibody presented higher immunostaining in malignant neoplasms and were not associated with the diagnosis of skin neoplasms in this species.

Expression of progranulin during the first stages of liver development in rat Fischer 344 / Expressão da progranulina durante os primeiros estágios de desenvolvimento hepático em ratos Fischer 344

Transplants are the only effective therapy for the treatment of advanced liver diseases such as cirrhosis. Given the limited number of organ donors, regenerative medicine has sought for sources of cells and tissues for replacement therapy. Embryonic stem cells are a promising source of material for transplantation vecause of their exclusive property of being expanded indefinitely in culture, thus they are a source of replacement tissue. Morcover, they are capable of differentiating into practically all cell types, and may be utilized in replacement therapy in various diseases. The liver bud has bipotent stem cells that gave not yet differentiated into hepatocytes or bibliary duct-cells: however, they have great potential of proliferation and differentiation. Thus, the challenge is to identify methods that promote their differentiation tential of proliferation and and differentiation is specific and functional strains.(AU)

Os transplantes são a única terapia para o tratamento de doenças hepáticas avançadas como a cirrose. Dado o número limitado de doadores de orgões, á medicina regenerativa tem procurado fontes de células para a terapia de substituição. As células embrionárias são uma fonte promissora de matéria para o transplante devido à sua propriedade exclusiva de ser expandida indefinidamente em cultura, assim, elas são uma fonte de tecidos de substituição. Além disso, são capazes de se diferenciar em pratimcante todos os tipos celulares, e podem ser utilizadas na terapia de substituição em várias doenças. O broto hepático tem células tronco (CT) bipotenciais que ainda não se diferenciam em hepatócitos ou células do dueto biliar, contudo, elas têm um grande potencial de proliferação e de diferenciação.Desse modo, o desafio é identificar métidis que promovam sua diferenciação em linhagens específicas e funcionais.(AU)

Avaliação da imunoexpressão de HER-2 e PCNA em tumores sebáceos neoplásicos e não neoplásicos de cães

Tumores sebáceos são comuns em cães e incluem lesões não neoplásicas e neoplásicas, benignas ou malignas. O incremento da avaliação imuno-histoquímica de tumores sebáceos agrega informações quanto à origem e ao grau de malignidade das lesões, assim como seleciona marcadores prognósticos úteis. O objetivo deste estudo foi avaliar por meio da imuno-histoquímica a expressão das proteínas HER-2 e PCNA em tumores sebáceos neoplásicos e não neoplásicos de cães, de diferentes tipos histopatológicos. Foram selecionadas 71 amostras de tumores sebáceos de cães de raças e idades variadas, machos e fêmeas, apresentando um ou mais tumores sebáceos, remetidas ao serviço de Anatomia Patológica Veterinária da UFF. As amostras passaram por processamento histológico e coloração de rotina. Foi realizada análise estatística descritiva, teste de Wilcoxon-MannWhitney e teste de qui-quadrado. A idade média dos animais acometidos foi de 10,42 anos. Não houve predileção sexual. Os tumores acometeram com maior frequência os Poodles, os animais sem raça definida (SRD) e os Cocker Spaniels. A maioria dos tumores eram neoplasias (56,4%), e destes, 72,5% eram benignos, sendo o adenoma sebáceo a neoplasia de maior frequência (31%); o diagnóstico não neoplásico mais frequente foi o de hiperplasia sebácea (40,8%). Quanto à localização, as lesões neoplásicas localizaram-se mais frequentemente nas regiões perianal e palpebral, e as não neoplásicas, no tronco e membros. De modo geral, foi observada maior expressão de HER-2 em tumores não neoplásicos e em neoplasias benignas, quando comparados aos epiteliomas e carcinomas sebáceos. Houve maior marcação de PCNA em tumores malignos ou potencialmente malignos. Não foram encontrados estudos prévios utilizando ambos os anticorpos em amostras de tumores sebáceos de cães. Dessa forma, mais estudos são necessários para dar maior clareza quanto à presença desses marcadores na pele e glândula sebácea normais de cães, assim como a utilização dos mesmos como fatores preditivos e prognósticos de tumores sebáceos, auxiliando no diagnóstico e orientação terapêutica.

Sebaceous tumors are common in dogs and include non-neoplastic and neoplastic lesions, benign or malignant. The increase in the immunohistochemical evaluation of sebaceous tumors aggregates information regarding the origin and degree of malignancy of the lesions, as well as selects useful prognostic markers. The objective of this study was to evaluate the histochemical expression of HER-2 and PCNA in neoplastic and non-neoplastic sebaceous tumors of dogs of different histopathological types. Seventy-one samples of sebaceous tumors were selected from dogs of various breeds and ages, male and female, presenting one or more sebaceous tumors, sent to the Veterinary Pathology Service of Universidade Federal Fluminense. Samples passed through histological processing and routine staining. Descriptive statistical analysis, Wilcoxon-Mann-Whitney and chi-square tests were performed. The mean age of the affected animals was 10.42 years. There was no sexual predilection. Tumors more frequently affected Poodles, mixed-breed dogs and Cocker Spaniels. Most of the tumors were neoplasms (56.4%), and of these, 72.5% were benign. The sebaceous adenoma was the most frequent neoplasm (31%), and the most frequent non neoplastic lesion was the sebaceous hyperplasia (40.8%). Regarding localization, neoplastic lesions were found more frequently in perianal and palpebral regions, and non-neoplastic lesions in the trunk and limbs. In general, higher HER-2 expression was observed in non-neoplastic tumors and in benign neoplasms, when compared to epitheliomas and sebaceous carcinomas. There was greater PCNA labelling in malignant or potentially malignant tumors. No previous studies were found using both antibodies in sebaceous tumors samples of dogs. Thus, more studies are needed to provide greater clarity regarding the presence of these markers on the normal skin and sebaceous gland of dogs, as well as their use as predictive and prognostic factors of sebaceous tumors, assisting in diagnosis and therapeutic orientation.

PROLIFERAÇÃO CELULAR EM GESTAÇÕES NATURAIS E DE CONCEPTOS BOVINOS TRANSGÊNICOS E CLONADOS, QUE EXPRESSAM A PROTEÍNA FLUORESCENTE VERDE (GFP)

RESUMO - Para o crescimento placentário e a nutrição fetal, altas taxas de crescimento e diferenciação celular são necessárias para um balanço adequado entre proliferação e morte celular das células placentárias. Estas células possuem propriedades específicas em relação a suas funções metabólicas, endócrinas e angiogênicas, sendo fundamentais para o desenvolvimento do concepto ao longo da prenhez. Neste estudo, foi avaliada a ocorrência de proliferação celular em placentônios provenientes de conceptos bovinos transgênicos clonados (n=5) e de inseminação artificial (IA) (n=18), nos períodos de 60 e 90 dias de gestação, que tiveram seu desenvolvimento interrompido e houve a recuperação do útero gestante. As amostras de placentônio foram recortadas e fixadas em solução aquosa de paraformoldeído a 4% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, para verificação da morfologia, e realização da técnica de imuno-histoquímica. Os resultados obtidos foram comparados entre bovinos clonados transgênicos e de IA. Em todos os grupos e períodos gestacionais, o epitélio fetal apresentou marcação positiva para proliferação celular. Aos 60 dias a marcação positiva no epitélio uterino das gestações manipuladas foi pouco evidente em relação às de gestações naturais. Por sua vez aos 90 dias a imunorreatividade dos placentônios dos conceptos clonados, foi muito intensa não só no epitélio, mas também no tecido conjuntivo fetal, fato não observado na gestação natural, onde a reação positiva foi pouco evidente no tecido conjuntivo fetal. Neste estudo foi demonstrado um possível desequilíbrio nos padrões de proliferação celular nos conceptos bovinos clonados transgênicos, pois no início da gestação (60 dias) apresentaram menor atividade proliferativa e aos 90 dias um aumento, podendo ser este fato um dos fatores que levam às anormalidades placentárias. Desse modo os resultados da verificação da proliferação celular, nas fases de gestação estudadas, e seu entendimento são, portanto, importantes para a compreensão de possíveis falhas no desenvolvimento gestacional em técnicas avançadas de manipulação embrionárias, como a produção de animais transgênicos e clonados.

ABSTRACT For the placental growth and fetal nutrition, high rates of growth and differentiation are necessary for a proper balance between proliferation and cell death of placental cells. These cells have specific properties in relation to its metabolic, endocrine and angiogenic function and they are fundamental to the development of the fetus throughout pregnancy. In this study, the occurrence of cell proliferation was assessed in placentomes by cloned transgenic bovine conceptuses (n=5) and by artificial insemination (AI), in the 60 and 90 days of gestation, and they development were interrupted and recovering the pregnant uterus. The samples were cut and fixed in paraformaldehyde 4% aqueous solution in sodium phosphate buffer (PBS) 0.1M at pH 7.4, for verification of the morphology and performing immunohistochemistry. The results were compared with bovine cloned and AI. The reults obtained were compared between transgenic cloned bovine conceptuses and AI. In all groups and gestational periods, the fetal epithelium presents positive labeling to cell proliferation. In 60 days gestation the positive labeling of the manipulated gestations was less evident in relation to the natural gestations. On the other hand, in 90 days gestation the immunoreactivity of the placentomes of the cloned conceptuses was more intense, not just in the epithelium, but also in the fetal connective tissue, fact not observed in the natural gestation, were the positive reaction was less evident in the fetal connective tissue. In this study was noted a possible imbalance in the patterns of the cell proliferation in the transgenic cloned bovine conceptuses, because in the early gestation (60 days) they presented a lesser proliferative activity, and in the 90 days a increase, may be this fact one of the factors leading to placental abnormalities. Therefore, the results of verification of cell proliferation and understanding are important for the understanding of possible fails in gestational development, leading to fetal and placental abnormalities in advanced techniques of embryonic manipulation, such as the production of cloned and transgenic animals.

Avaliação da proliferação celular como indicador prognóstico para mastocitomas cutâneos caninos / Evaluation of cellular proliferation as prognostic indicator for canine cutaneous mast cell tumors

Este estudo teve como objetivo avaliar o valor prognóstico de marcadores de proliferação celular em casos de mastocitomas cutâneos caninos. Vinte e três casos foram analisados quanto à expressão imuno-histoquímica de Ki67 e do Antígeno Nuclear de Proliferação Celular (PCNA), sendo subsequentemente acompanhados clinicamente. Observou-se que a expressão de Ki67 mantém relação negativa com a tradicional graduação histopatológica (p= 0,0418; p<0,05 entre os graus I e III), sendo um indicador confiável para o tempo de sobrevida pós-cirúrgica (p=0,0089). A imunoexpressão de PCNA, apesar de estar correlacionada à marcação por Ki67, não apresentou valores estatisticamente significantes na predição da mortalidade em função da doença e do tempo de sobrevida pós-cirúrgico. Os resultados obtidos confirmam que informações sobre a atividade proliferativa tumoral pela detecção imuno-histoquímica de Ki67 podem incrementar a classificação de mastocitomas cutâneos caninos quanto à malignidade.(AU)

This study evaluated the prognostic value of cell proliferation markers for canine cutaneous mast cell tumor cases. Twenty-three cases were analyzed with regard to immuno-histochemical expression of Ki67 and Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA), and were clinically followed up. Ki67 expression was related to the traditional histopathological grading (p= 0.0418; p<0.05 between grades I and III), and was a reliable indicator of post-surgical survival (p=0.0089). PCNA immunoexpression did not show statistically significant values in the prediction of disease-related mortality and survival, although it is correlated to Ki67 expression. These results confirm that information about tumoral proliferative activity through Ki67 immunohistochemical detection can improve canine cutaneous mast cell tumor grading with regard to malignancy.(AU)

Canine hemangiopericytomas: cell proliferation and apoptosis in the perivascular, storiform and epithelioid histological subtypes and their significance for prognosis

Canine hemangiopericytomas (CHP) are soft tissue neoplasms, originary from pericytes. They are frequently diagnosed in dogs and can be seen more frequently in limbs as circumscribed and firm nodules. The histopathology of CHP reveals the presence of spindle cells around blood vessels, forming whorls. In this study, cases of CHP from the Animal Pathology Service of the Veterinary Hospital of the School of Veterinary Medicine and Animal Science, registered from 1990 to 2003, were studied. All cases were reviewed and classified in the three histological subtypes recently described - perivascular (PVHP), storiform (SHP) and epithelioid (EHP). Immunohistochemical markers (vimentin, S-100 protein, CD34, Factor VIII and glial fibrillary acidic protein - GFAP) were applied to all tumors. Samples were submitted to the immunostaining of PCNA, and the labeling indexes were obtained. The mitotic index was also quantified in each subtype. Apoptosis bodies were morphologically identified in H&E stained sections, subsequently confirmed by fluorescence microscopy and then quantified in the three histological subtypes. Dog owners were contacted by telephone, and asked to inform about the outcome of their dogs. The survey revealed 61 cases of CHP, in which 21 (34.43.%) belonged to the perivascular subtype, 18 cases (29.51.%) belonged to the storiform subtype, and 22 cases (36.06.%) belonged to the epithelioid subtype. PCNA labeling index, mitotic and apoptotic indexes were significantly higher in the epithelioid subtype. Records of the follow-up of each case revealed 59% of recurrence rate in the epithelioid subtype, 55% in the storiform subtype and 17% in the perivascular subtype. According to these results, epithelioid hemangiopericytomas seem to be the most aggressive CHP subtype. Therefore, we conclude that the histopathological analysis with classification in subtypes, as well as the quantification of cell proliferation and apoptosis rates, can help in the establishment of prognosis for CHP.

Marcadores de proliferação celular na avaliação do crescimento do tumor sólido e ascítico de Ehrlich / Cell proliferation markers for evaluating the growth of solid and ascitic forms of Ehrlich tumor

Twenty BALB/c mice were inoculated with cell suspension of Ehrlich tumor. Ten mice were inoculated in the cushion plant (solid form) and the other 10 in the peritoneum (ascitic form). Animals were euthanized on different times (7 and 14 days). Cytological and histological slides, immunohistochemical (PCNA) analysis and NORs silver impregnation technique were performed. The results showed more proliferation on the 7th day in the ascitic form and on 14th day in the solid form, using both analyses (PCNA and AgNORs). The alterations observed in the Ehrlich tumors proliferation activity suggested that the growth curve is different between ascitic and solid forms. In the first one, the proliferation peak occurs on the seventh day and in the solid tumor the growth curve was more delayed, showing increased proliferative potential after seven days.(AU)

Efeito da temperatura ambiente c?clica elevada sobre os parâmetros produtivos, fisiológicos, morfométricos e proliferação celular da mucosa intestinal de frangos de corte resumo de tese

Este estudo objetivou verificar os efeitos da temperatura ambiente cíclica elevada sobre os parâmetros produtivos, fisiológicos, morfométricos e proliferação celular da mucosa intestinal de frangos de corte machos. Estes foram submetidos diariamente, durante uma hora, à temperatura ambiente elevada do primeiro até o 42º dia de idade (tratamento 1) e analisou-se o peso corporal, ganhos de pesos absoluto e relativo, freqüência respiratória, temperatura cloacal e análises no intestino delgado, quais sejam, comprimento intestinal, crescimentos absoluto e relativo dos intestinos, morfometria da mucosa intestinal e porcentagem de células em proliferação, comparando-se com aves mantidas em temperatura de conforto térmico (tratamento 2). Para as análises no intestino delgado foram sacrificadas, semanalmente, até o 42º dia de idade, cinco aves de cada tratamento, num total de 70 aves. Para as demais variáveis foram utilizadas dez aves de cada tratamento para pesagem, obtenção da temperatura corporal e contagem de movimentos respiratórios por minuto. Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado em esquema fatorial (2x7), com dois tratamentos (tratamentos 1 e 2), sete idades (um, sete, 14, 21, 28, 35 e 42 dias). Aplicouse o de teste de Kolmogorov-Smirmov para verificar o comportamento de distribuição dos dados da morfometria das mucosas do duodeno, jejuno e íleo e da proliferação c

Neoplasias intracranianas em cães: avaliação imuno-histoquímica de marcadores de proliferação celular e expressão de p53 / Intracranial neoplasia in dogs: immunohistochemistry evaluation of cellular proliferation markers and p53 expression

O estudo das alterações neoplásicas do sistema nervoso (SN) de cães apresenta enorme desafio devido suas particularidades, entre as espécies de animais domésticos o cão Canis familiares é o que apresenta a maior ocorrência destes neoplasmas. O desenvolvimento deste trabalho visa estabelecer o estudo anátomopatológico, molecular e epidemiológico em neurooncologia veterinária, avaliando pela técnica de imuno-histoquímica marcadores da proliferação celular PCNA e Ki-67, expressão da proteína p53 e marcadores de diferenciação celular. Foram utilizados neste estudo 18 animais, da espécie canina, que deram entrada ao Serviço de Patologia vinculado ao Hospital veterinário (HOVET) e ao Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, e que tiveram diagnóstico de neoplasia intracraniana primária confirmado, entre eles (8) meningiomas e (3) astrocitomas. Não houve predileção sexual e a idade média do aparecimento tumoral foi de 9 anos. O valor médio do índice proliferativo (IP) de meningiomas benignos para PCNA é 4,8% e Ki-67 é 2,8%, no astrocitoma fibrilar o valor do IP é para PCNA 1% e Ki-67 1%, no astrocitoma anaplásico o valor do IP é para PCNA 10% e Ki-67 5% e no xantoastrocitoma pleomórfico o valor do IP é para PCNA 20% e Ki-67 4%.Não foi detectada alterações em p53 e o IP foi útil para definir o comportamento tumoral benigno ou maligno e dois tipos tumorais que não haviam sido descritos em cães: xantoastrocitoma pleomórfico e tumor de parênquima pineal de diferenciação intermediária puderam ser diagnosticados graças ao conjunto de informações coletadas, morfologia celular, marcadores de diferenciação celular e índice proliferativo

The study of neoplastic alterations of dogs nervous system (NS) presents huge challenges due their particularities, between domestic animals species the dog Canis familiars presents the highest of these neoplasms. The development of this research aims to establish the anatomical-pathological, molecular and epidemiology study in veterinary neuro-oncology, evaluating by Immunohistochemistry technique markers of cell proliferation PCNA and Ki-67, expression of p53 protein and markers of cell differentiation. In this study were used 18 animals, dogs, which had entry at the Pathology Service of the Veterinary Hospital (HOVET) and at the Department of pathology from Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia of University of São Paulo, which had confirmed diagnose of primary intracranial neoplasia, among them (8) meningiomas and (3) astrocytomas. There wasn\'t sexual preference and the mean age of tumor manifestation was 9 years old. The mean value of labelling index (LI) of benign meningiomas for PCNA is 4,8% and Ki-67 is 2,8%, in fibrillary astrocytoma the mean value of LI is 1% for PCNA and 1% for Ki-67, in anaplastic astrocytoma the mean value of LI is 10% for PCNA and 5% for Ki-67 and in pleomorphic xanthoastrocytoma the mean value of LI is 20% for PCNA and 4% for Ki-67. The p53 alterations wasn\'t detected and the LI was useful to set the benign or malign tumor behavior and two tumor types which had not been described in dogs: pleomorphic xanthoastrocytoma and pineal parenchymal tumour of intermediate differentiation could be diagnosed through the set of information collected, cell morphology, markers of cell differentiation and labelling index

Canine hemangiopericytomas: cell proliferation and apoptosis in the perivascular, storiform and epithelioid histological subtypes and their significance for prognosis

Canine hemangiopericytomas (CHP) are soft tissue neoplasms, originary from pericytes. They are frequently diagnosed in dogs and can be seen more frequently in limbs as circumscribed and firm nodules. The histopathology of CHP reveals the presence of spindle cells around blood vessels, forming whorls. In this study, cases of CHP from the Animal Pathology Service of the Veterinary Hospital of the School of Veterinary Medicine and Animal Science, registered from 1990 to 2003, were studied. All cases were reviewed and classified in the three histological subtypes recently described perivascular (PVHP), storiform (SHP) and epithelioid (EHP). Immunohistochemical markers (vimentin, S-100 protein, CD34, Factor VIII and glial fibrillary acidic protein GFAP) were applied to all tumors. Samples were submitted to the immunostaining of PCNA, and the labeling indexes were obtained. The mitotic index was also quantified in each subtype. Apoptosis bodies were morphologically identified in H&E stained sections, subsequently confirmed by fluorescence microscopy and then quantified in the three histological subtypes. Dog owners were contacted by telephone, and asked to inform about the outcome of their dogs. The survey revealed 61 cases of CHP, in which 21 (34.43.%) belonged to the perivascular subtype, 18 cases (29.51.%) belonged to the storiform subtype, and 22 cases (36.06.%) belonged

Antígeno nuclear de proliferação celular (pcna) em carcinoma de células transicionais de bexiga

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression was described as marker of the proliferative activity in urothelial tumors. We compared the PCNA immunostaining index with the outcome of patients with bladder cancer. We revised 90 patients, with age varying from 29 to 93 years (mean 71 yrs), being 77.8% men and 22.2% women; mean follow-up of 55 months (2-231 months). Fifty per cent of tumors were grade I; 32.2% grade II and 17.8% grade III. Primary tumor stage was: invasive (> >pT1=31.1% and superficial (pTA-1=68.9%). Eighty-seven tumors (96.6%) expressed PCNA (median 72.5%, mean 60.1%). The mean PCNA index was not different (p = 0.39) in superficial or invasive tumors. The comparison of immunostaining mean values between G1/G2 (p = 0.087), /G1/G3 (p = 0.11) and G2//g3 (p = 0.66) was not statistically significant, as well among recurring and non-recurring tumors (p = 0.84) but PCNA expression correlated with survival rate (p = 0.003) and metastases free intervals (p = 0.01) but not with recurrent free intervals (p = 0.86). In conclusion, PCNA over expression correlated with survival and metastasis free intervals, but was not significant to differentiate invasive stages, agressive grades and recurring tumors.

O antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) foi descrito como marcador da atividade proliferativa. Correlacionamos a marcação do PCNA com a evolução dos pacientes com carcinoma de células transicionais de bexiga. Revisamos 90 pacientes do HC-FMRP-USP de 1980-2000; com idade variando de 29 a 93 anos e média de 71 anos; sendo 77,8% homens e 22,2% mulheres; seguimento médio de 55 meses (2-231 meses). Constatamos 50% de tumores grau I, (32,2%) grau II e 17,8% grau III; estadiados em pTA-60%, pT1-8,9% e >pT1 31,1%. Utilizamos o anticorpo primário Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) Clone PC10 (DAKO). Foram contadas 500 células (X400), e utilizado ponto de corte de 50%. A análise estatística foi realizada com o teste de Mann-Whitney. Kaplan-Meier e Logrank Oitenta e sete tumores (96,66%) expressaram PCNA (mediana 72.5%, média 60,16%). Observamos diferença não significativa (P=0,39) na imunomarcação do PCNA entre tumores pT2-4 e pTA-1. A comparação de medias entre G1 e G2 (P=0,087), G1 e G3 (P=0,11) e entre G2 e G3 (P=0,66) não mostraram significado estatístico,assim como entre tumores com recidiva e sem recidiva (P=0,84). Os indivíduos PCNA positivos não tiveram intervalo livre de doença significativamente diferente (P=0,86); entretanto foi significativa a diferença nas curvas de sobrevida (P=0,003) e nas curvas de intervalos livres de metástase (P=0,01). A expressão imunohistoquímica do PCNA não foi efetiva para diferenciar os tumores mais avançados e agressivos, assim como para predizer recidivas. Desta forma, apesar da correlação com o tempo livre de metástase e a sobrevida, não mostrou utilidade prática.

ANTÍGENO NUCLEAR DE PROLIFERAÇÃO CELULAR (PCNA) EM CARCINOMA DE CÉLULAS TRANSICIONAIS DE BEXIGA

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression was described as marker of the proliferative activity in urothelial tumors. We compared the PCNA immunostaining index with the outcome of patients with bladder cancer. We revised 90 patients, with age varying from 29 to 93 years (mean 71 yrs), being 77.8% men and 22.2% women; mean follow-up of 55 months (2-231 months). Fifty per cent of tumors were grade I; 32.2% grade II and 17.8% grade III. Primary tumor stage was: invasive (> >pT1=31.1% and superficial (pTA-1=68.9%). Eighty-seven tumors (96.6%) expressed PCNA (median 72.5%, mean 60.1%). The mean PCNA index was not different (p = 0.39) in superficial or invasive tumors. The comparison of immunostaining mean values between G1/G2 (p = 0.087), /G1/G3 (p = 0.11) and G2//g3 (p = 0.66) was not statistically significant, as well among recurring and non-recurring tumors (p = 0.84) but PCNA expression correlated with survival rate (p = 0.003) and metastases free intervals (p = 0.01) but not with recurrent free intervals (p = 0.86). In conclusion, PCNA over expression correlated with survival and metastasis free intervals, but was not significant to differentiate invasive stages, agressive grades and recurring tumors.

O antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) foi descrito como marcador da atividade proliferativa. Correlacionamos a marcação do PCNA com a evolução dos pacientes com carcinoma de células transicionais de bexiga. Revisamos 90 pacientes do HC-FMRP-USP de 1980-2000; com idade variando de 29 a 93 anos e média de 71 anos; sendo 77,8% homens e 22,2% mulheres; seguimento médio de 55 meses (2-231 meses). Constatamos 50% de tumores grau I, (32,2%) grau II e 17,8% grau III; estadiados em pTA-60%, pT1-8,9% e >pT1 31,1%. Utilizamos o anticorpo primário Monoclonal Mouse Anti-Proliferating Cell Nuclear Antigen (PCNA) Clone PC10 (DAKO). Foram contadas 500 células (X400), e utilizado ponto de corte de 50%. A análise estatística foi realizada com o teste de Mann-Whitney. Kaplan-Meier e Logrank Oitenta e sete tumores (96,66%) expressaram PCNA (mediana 72.5%, média 60,16%). Observamos diferença não significativa (P=0,39) na imunomarcação do PCNA entre tumores pT2-4 e pTA-1. A comparação de medias entre G1 e G2 (P=0,087), G1 e G3 (P=0,11) e entre G2 e G3 (P=0,66) não mostraram significado estatístico,assim como entre tumores com recidiva e sem recidiva (P=0,84). Os indivíduos PCNA positivos não tiveram intervalo livre de doença significativamente diferente (P=0,86); entretanto foi significativa a diferença nas curvas de sobrevida (P=0,003) e nas curvas de intervalos livres de metástase (P=0,01). A expressão imunohistoquímica do PCNA não foi efetiva para diferenciar os tumores mais avançados e agressivos, assim como para predizer recidivas. Desta forma, apesar da correlação com o tempo livre de metástase e a sobrevida, não mostrou utilidade prática.