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1.
Arq. bras. med. vet. zootec. (Online) ; 75(4): 703-708, July-Aug. 2023. tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1447353

Resumo

A March male Golden, weighing 7.6kg, presented with gradual weight loss, high body temperature, depression, poor appetite and thirst, and vomiting before consultation. The results showed that the erythrocytes, hematocrit, hemoglobin, and platelets were lower than the reference values. The diagnosis of mixed infection with haematocrit and eosinophilic bodies was confirmed by real-time fluorescence PCR of whole blood, which was positive for haematocrit and eosinophilic bodies. The dog was treated with doxycycline and ceftriaxone, and the dog fully recovered after 2 weeks with blood transfusion, symptomatic treatment, and supportive therapy. This indicates that the disease can be treated well by a comprehensive treatment approach.


Um March Golden macho, pesando 7,6kg, apresentou perda de peso gradual, temperatura corporal alta, depressão, falta de apetite e sede, e vômitos antes da consulta. Os resultados mostraram que os eritrócitos, hematócrito, hemoglobina e plaquetas eram menores que os valores de referência. O diagnóstico de infecção mista com hematócrito e corpos eosinófilos foi confirmado por PCR de fluorescência em tempo real de sangue total, o que foi positivo para hematócrito e corpos eosinófilos. O cão foi tratado com doxiciclina e ceftriaxona, e o cão recuperou-se completamente após duas semanas com transfusão de sangue, tratamento sintomático e terapia de suporte. Isto indica que a doença pode ser bem tratada através de uma abordagem de tratamento abrangente.


Assuntos
Animais , Cães , Infecções por Bartonella/veterinária , Doenças do Cão , Infecções por Mycoplasma/veterinária
2.
Braz. J. Vet. Res. Anim. Sci. (Online) ; 56(1): e150972, jun. 2019. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1007823

Resumo

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)


Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)


Assuntos
Expressão Gênica , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Herpesvirus Bovino 5/classificação , Biologia Molecular
3.
Braz. j. vet. res. anim. sci ; 56(1): e150972, jun. 2019. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-22075

Resumo

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The expression of viral genes transcripts was not altered by increasing number of viral particles added to the culture. All viral genes included here demonstrated the same expression pattern over time and there was no difference in the expression of viral genes among the various time points. Our data show important differences comparing to classical studies regarding herpesvirus alpha, beta, and gamma genes expression. More research is necessary to improve our understanding about the BoHV-5 biology during infection. Studies employing next-generation sequencing (i.e., RNA-seq), using both in vitro and in vivo models, would be the next logical step to grasp the virus and host cell's transcriptome changes over the course of infection.(AU)


Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser recomendado para normalização em células bovinas infectadas pelo vírus. A expressão de mRNA viral não foi alterada pela quantidade de vírus usada. Todos os genes virais demonstraram o mesmo padrão de expressão ao longo do tempo de infecção. Nossos resultados trazem importantes diferenças comparando aos estudos clássicos que avaliaram a expressão de genes alfa, beta e gama. Mais estudos são necessários para aumentar o conhecimento da biologia molecular do BoHV-5. Estudo utilizando sequenciamento de última geração (i.e., RNA-seq), usando modelos in vitro e in vivo, aparentam ser o próximo passo lógico para acessar as alterações do transcriptoma do hospedeiro e viral ao longo do curso da infecção.(AU)


Assuntos
Expressão Gênica , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Herpesvirus Bovino 5/classificação , Biologia Molecular
4.
Pesqui. vet. bras ; 37(7): 701-707, jul. 2017. tab, graf
Artigo em Português | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-895486

Resumo

O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.(AU)


The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs' capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.(AU)


Assuntos
Animais , Cães , Doenças Parasitárias/transmissão , Psychodidae , Leishmania infantum/isolamento & purificação , Xenodiagnóstico/veterinária , Vetores de Doenças , Leishmaniose Visceral/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Quimioterapia Combinada/veterinária
5.
Pesqui. vet. bras ; 37(7): 701-707, jul. 2017. tab, graf
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-13648

Resumo

O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.(AU)


The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs' capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.(AU)


Assuntos
Animais , Cães , Doenças Parasitárias/transmissão , Psychodidae , Leishmania infantum/isolamento & purificação , Xenodiagnóstico/veterinária , Vetores de Doenças , Leishmaniose Visceral/veterinária , Reação em Cadeia da Polimerase/veterinária , Quimioterapia Combinada/veterinária
6.
Pesqui. vet. bras ; 37(7)2017.
Artigo em Português | VETINDEX | ID: vti-743666

Resumo

ABSTRACT: The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.


RESUMO: O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.

7.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-212937

Resumo

A conjuntivite felina é a enfermidade mais frequente nos locais de grandes concentrações populacionais como abrigos e gatis. Herpesvirus felino 1 (FHV-1) é o microrganismo mais associado aos casos de conjuntivite em felinos. O diagnóstico laboratorial é essencial para o estabelecimento de um controle adequado e recentemente vem sendo realizado por meio de técnicas moleculares. O objetivo desse estudo foi realizar a determinação da carga viral de FHV-1 por meio de PCR em tempo real ou PCR quantitativa (qPCR) em amostras conjuntivais e de cavidade oral de felinos com e sem sintomatologia ocular oriundos de diferentes modelos de abrigo e correlacionar a carga viral com a gravidade dos sinais clínicos e com a estrutura física dos abrigos. Esse estudo se deu com amostras de 70 gatos entre dois e dez meses de idade (41 sintomáticos e 29 assintomáticos). Quatro abrigos foram visitados. Cada animal foi cadastrado em uma ficha clínica própria. Todos os animais foram examinados pela mesma médica veterinária. Os sinais oftalmológicos e de orofaringe foram categorizados de acordo com a gravidade dos sinais clínicos. As amostras de secreção conjuntival e orofaríngea foram coletadas separadamente, com o uso de escova citobrush®. O genoma viral foi extraído e foram realizados ensaios de qPCR utilizando sistema de sondas de hidrólise TaqMan® e curva padrão sintética. O uso da curva padrão sintética para FHV-1 foi implementada nesse estudo. FHV-1 foi detectado em igual proporção em animais sintomáticos e assintomáticos (90%) mas houve diferença estatística (P<0,05) entre as cargas virais dos animais sintomáticos e dos assintomáticos. Cargas virais mais altas de FHV-1 foram relacionadas a animais sintomáticos e nesses, os escores associados aos sinais clínicos mais graves apresentaram maiores cargas virais. A comparação da carga viral com relação a características dos abrigos mostrou ser estatisticamente significante (P<0,05). Maior carga viral foi observada no abrigo com alta densidade populacional, alta rotatividade de animais e circulação de ar inadequada no ambiente. A correlação entre as cargas virais obtidas de amostras de região ocular com amostras da região orofaríngea foi alta (r²=0,889), sugerindo que essa região é um importante sítio de excreção e transmissão de FHV-1


Feline conjunctivis is a common disease in places of great population concentrations such as shelters. Feline herpesvirus 1 (FHV-1) is the most frequently microorganism associated with cases of conjunctivitis in felines. Laboratory diagnosis is essential for the establishment of appropriate control of the disease, Recently, molecular diagnosis are more commonly used as diagnostic methods.The objective of this study was to determine FHV-1 viral load by real-time PCR or quantitative PCR (qPCR) in conjunctival and oral cavity samples of felines with and without conjunctivitis from different shelters models and correlate viral load with conunctivitis severity and shelters characteristics. This study was carried out with samples of 70 cats between two and ten months of age (41 symptomatics and 29 asymptomatics). Four different shelters were visited. Each animal was registered on its own clinical file. All animals underwent a clinical and ophthalmological examination by the same veterinarian. Ophthalmologic and oropharyngeal signs were categorized according to the severity of clinical signs. Conjunctiva and oropharyngeal secretion samples were collected separately using a cytobrush®. The viral genome was extracted and qPCR assays were performed using TaqMan® hydrolysis probes system and synthetic standard curve. The use of synthetic curve for FHV-1 methodology was implemented in this study. FHV-1 was detected in the same proportion in symptomatic and asymptomatic animals (90%) but there was statistical difference (P <0.05) between the viral loads of symptomatic and asymptomatic animals. Higher viral loads of FHV-1 were related to symptomatic animals and in these, scores associated with more severe clinical signs had higher viral loads. The comparison of the viral load with some shelter charactheristics were statistically significant (P <0.05). The highest viral load was observed in shelter with high population density, high turnover of animals and inadequate circulation of air in the environment. The correlation between the viral loads obtained from ocular region samples and samples from the oropharyngeal region was high (r²=0,889), suggesting that this region is an important site of excretion and transmission of FHV-1. Vaccinated and unvaccinated animals have statistically different viral loads (P <0.05). Lower viral loads are found in vaccinated animals.

8.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-216702

Resumo

Senecavirus A (SVA) é a única espécie do gênero Senecavirus, família Picornaviridae. SVA é um vírus RNA fita simples, de polaridade positiva, não envelopado e genoma com aproximadamente 7,2 kb. Desde 2007, SVA tem sido associado à doença vesicular em suínos nos Estados Unidos da América, Brasil, Colômbia, China e Tailândia. A partir de 2015, uma nova síndrome multissistêmica associada à infecção por SVA tem sido relatada em leitões recém-nascidos nesses países. SVA foi identificado por técnicas moleculares (RT-PCR, qRT-PCR e nested-RT-PCR), imuno-histoquímica e/ou hibridização in situ em diferentes órgãos de leitões recém-nascidos. Embora a RT-PCR quantitativa (qRT-PCR) tenha sido utilizada para detectar RNA de SVA a partir de amostras biológicas de suínos, não há relatos da determinação da carga viral nos diferentes tecidos de leitões recém-nascidos com sinais clínicos consistentes com a infecção pelo vírus. O objetivo deste estudo foi avaliar a distribuição tecidual e a carga viral de SVA em diferentes amostras biológicas de leitões sintomáticos, naturalmente infectados, provenientes de rebanhos suínos com histórico de doença vesicular. No primeiro estudo foi validado um teste de qRT-PCR utilizando TaqMan como ferramenta para a detecção e quantificação de RNA de SVA em amostras biológicas de suínos. Um conjunto de primers e probe específicos para amplificar um produto de 118 pb da região VP1 do genoma do vírus foi desenhado para ser utilizado na técnica de qRT-PCR. A avaliação da eficiência da qRT-PCR TaqMan foi realizada em 45 amostras de tecidos de 15 leitões sintomáticos (n = 38) e quatro (n = 7) assintomáticos previamente caracterizados como positivos ou negativos para SVA por RT-PCR convencional. Entre amostras biológicas provenientes de leitões sintomáticos, 18 (47,4%) e 30 (78,9%) foram positivas por RT-PCR convencional e qRT-PCR, respectivamente. Todas as amostras obtidas de leitões assintomáticos foram negativas para o vírus em ambas as técnicas utilizado. Os resultados demonstram que a técnica de qRT-PCR utilizando TaqMan padronizada neste estudo é rápida e apresenta alta sensibilidade, especificidade e repetibilidade, sendo capaz de gerar resultados confiáveis na detecção e quantificação de RNA de SVA em amostras biológicas de suínos. O segundo estudo avaliou a distribuição e a carga viral de SVA em diferentes amostras de órgãos/tecidos provenientes de leitões recém-nascidos sintomáticos. Por meio da técnica qRT-PCR previamente padronizada no primeiro estudo, foram analisados fragmentos de tronco encefálico, cerebelo, cérebro, coração, rim, fígado, pulmões, intestino delgado, baço, bexiga e tonsila provenientes de sete leitões recém-nascidos. O RNA de SVA foi detectado em 81,4% (57/70) das amostras avaliadas. A carga viral variou de 4,07 a 10,38 log10 cópias genômicas/g de tecido. Os resultados demonstram que o SVA tem tropismo por diferentes órgãos em leitões recém-nascidos naturalmente infectados, principalmente tonsilas, baço, pulmão e fígado. Órgãos linfoides apresentam altas cargas virais e podem ser importantes sítios de replicação de SVA. A ampla distribuição de RNA de SVA em órgãos/tecidos dos sistemas cardiovascular, respiratório, digestório, urinário, neurológico e linfático demonstra a capacidade do vírus em causar infecção multissistêmica em leitões recém-nascidos e a sua participação nas manifestações clínicas observadas.


Senecavirus A (SVA) is the only member of the Senecavirus genus, Picornaviridae family. SVA is a single-stranded, positive-sense, non-enveloped RNA virus with a genome size of approximately 7.2 kb. Since 2007 reports have revealed SVA-associated vesicular disease in pigs in the USA, Brazil, China, Colômbia, and Thailand. From 2015, a novel multisystemic syndrome associated with SVA infection has been reported in newborn piglets from these countries. SVA was detected by techniques such as molecular (RT-PCR, qRT-PCR and nested-RT-PCR), immunohistochemical, and/or in situ hybridization assays in different organs/tissues of newborn piglets. Although quantitative RT-PCR (qRT-PCR) assays have been used to detect the SVA genome from organ samples of piglets, there are no reports of the SVA RNA loads in tissues of newborn piglets with clinical signs consistent with SVA infection. The aim of this study was evaluate the SVA distribution and RNA loads in different biological samples of naturally infected symptomatic piglets originating from vesicular disease-affected pig herds. In the first study a TaqMan-based qRT-PCR assay was validated for SVA RNA detection and quantification in biological porcine specimens. A set of specific primers and probe was designed to amplify a 118 bp length fragment within the VP1 gene of the SVA genome. The efficiency of TaqMan-based qRT-PCR was evaluated in 45 tissue samples of 15 symptomatic (n = 38) and 4 (n = 7) asymptomatic piglets, previously caracterized as positive or negative for SVA by conventional RT-PCR. Among the biological samples of symptomatic piglets, 18 (47.4%) and 30 (78.9%) were positive for SVA in conventional RT-PCR and qRT-PCR assays, respectively. All samples obtained from asymptomatic piglets were negative for the virus in both assays. The results demonstrated that the TaqMan-based qRT-PCR assay in this study is a rapid technique with high sensitivity, specificity and reproducibility, able to generate reliable results to simultaneously detect and quantify SVA RNA in porcine biological samples. The second study determined the SVA RNA distribution and loads in different organs/tissues from symptomatic newborn piglets. Using the qRT-PCR assay previously developed in the first study, fragments of brainstem, cerebellum, cerebrum, heart, kidney, liver, lungs, small intestine, spleen, urinary bladder, and tonsils of seven newborn piglets were analyzed. SVA was detected in 81.4% (57/70) of the tissue samples. Viral loads ranged from 4.07 to 10.38 log10 genomic copies/g of tissue. The results show that SVA has tropism for different organs in naturally infected newborn piglets, mainly tonsils, spleen, lungs, and liver. Lymphoid organs contained the highest viral loads and may be important sites for SVA replication. The wide SVA RNA distribution in organs/tissues of the cardiovascular, repiratory, digestive, urinary, neurological, and lymphatic systems demonstrate the virus ability to cause multisystemic infection in newborn piglets and the participation of SVA in the observed clinical manifestations.

9.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203276

Resumo

Yersinia enterocolitica é uma bactéria Gram-negativa emergente que possui potencial zoonótico e está associada a quadros de infecção alimentar em humanos. Os suínos são considerados o principal reservatório de Y. enterocolitica, abrigando-a principalmente nas tonsilas. Tendo em vista a carne suína como uma das mais consumidas no mundo e a importância deste agente zoonótico, o objetivo deste trabalho foi avaliar a ocorrência de Y. enterocolitica patogênica em tonsila de suínos no momento do abate no estado de Santa Catarina. Para isto, foi utilizada uma PCR convencional multiplex que detecta a presença de genes de virulência (ail, yadA e virF) e comparou-se esta técnica com a PCR quantitativa em tempo real (qPCR), somente para o gene ail. Foram coletadas aleatoriamente tonsilas de 400 suínos provenientes de quatro frigoríficos com inspeção federal em diferentes regiões do estado. Foi realizado o sequenciamento do DNA dos genes amplificados das amostras positivas na cPCR e posteriormente foi feita a análise filogenética. Apenas uma amostra foi positiva para os três genes pesquisados na PCR convencional, os quais foram confirmados por sequenciamento. A análise das sequências parciais dos três genes de virulência identificou três mudanças de aminoácidos exclusivas, sendo uma no gene virF e duas no gene yadA. Na qPCR esta amostra apresentou 11.058.398 moléculas/L. Ao comparar as duas técnicas, a qPCR foi 100 vezes mais sensível que a PCR convencional. Isso demonstra uma baixa ocorrência de Y. enterocolitica patogênica em suínos sadios ao abate em frigoríficos com inspeção federal em Santa Catarina.


Yersinia enterocolitica is a Gram-negative bacteria with zoonotic potential. It is associated with the occurrence of enteric diseases in humans. Pigs are considered the main source of Y. enterocolitica and the bacteria is mainly found in the pigs palatine tonsils. The objective of this study was to evaluate the occurrence of pathogenic Y. enterocolitica in palatine tonsils of healthy pigs from Santa Catarina, during the slaughter process. In order to achieve this goal, a multiplex PCR technique was performed so as to detect the presence of virulence genes (ail, yadA and virF). This technique was compared to quantitative real time PCR (qPCR), only for the ail gene. Palatine tonsils were randomly collected from 400 pigs from four federally inspected slaughterhouses of the state of Santa Catarina. One positive sample was found for the three studied virulence genes, which were confirmed by DNA sequencing. The analysis of partial sequences of the three virulence genes identified three unique amino acid changes, one in the virF gene and two in YadA gene. This sample had 11.058.398 molecules/L detected by qPCR. By comparing the two techniques, qPCR was 100 times more sensitive than standard PCR. This result shows low occurrence of pathogenic Y. enterocolitica in healthy pigs from federally inspected slaughterhouses in Santa Catarina.

10.
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-743135

Resumo

Bovine herpesvirus 5 is an alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis in cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Although previous studies elucidated crucial aspects involved in the pathogenesis of the disease, there is a paucity of information regarding the molecular events contributing to infection and replication of BoHV-5. The objective of the present study was to determine the in vitro gene expression pattern of BoHV-5 (e.g., alpha, beta, and gamma genes) and host cells genes (GAPDH and 18S) over time utilizing different quantities of inoculated virus. Three BoHV-5 genes (bICP0, UL9, US4) and one structural bovine cell gene had their expression accessed by real-time PCR. While the expression of BoHV-5 genes increased during the course of infection, GAPDH gene expression decreased in the host cells, evidencing the effect of viral infection on the expression of bovine cell genes. The 18S ribosomal RNA (rRNA) gene was constitutively expressed throughout BoHV-5 infection. Our data clearly demonstrates that GAPDH gene should not be used as a reference gene in studies of BoHV-5 infection because it was influenced by viral infection. However, 18S rRNA was constitutively expressed and, therefore, is recommended for normalization of BoHV-5 infection studies in bovine cells. The


Herpesvirus bovino 5 é um alfaherpesvírus causador de meningoencefalite não supurativa em bovinos. Esta doença possui ocorrência natural em surtos ou casos isolados, associadas a baixa morbidade e alta letalidade. Embora estudos anteriores tenham elucidado aspectos relacionados a patogenia da doença, há uma lacuna de conhecimento relacionado aos eventos moleculares que contribuem para a infecção e replicação do BoHV-5. O objetivo do presente estudo foi determinar a expressão gênica in vitro de genes virais (i.e., alfa, beta e gama) e das células hospedeiras (GAPDH e 18S) durante a infecção considerando diferentes momentos de infecção e quantidade de vírus utilizado. Três genes do BoHV-5 (bICP0, UL9, US4), um gene estrutural (GAPDH) e um gene constitutivo (18S) da célula bovina tiveram suas expressões avaliadas por PCR quantitativa (qPCR). Enquanto os genes virais tiveram sua expressão aumentada ao longo do tempo de infecção, o gene hospedeiro teve sua expressão diminuída, demonstrando a ação do vírus na expressão gênica de células bovinas in vitro. O gene constitutivo 18S teve sua expressão mantida durante todos os momentos do experimento. Nossos resultados claramente demonstraram que o GAPDH não deve ser usado como gene de referência em estudos com infecção por BoHV-5 pois é influenciado pela infecção viral. Entretanto, o 18S rRNA foi constitutivamente expresso e pode ser reco

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