Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos d’água do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an Invasive species in Central Punjab Pakistan

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos dágua do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an Invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos d'água do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.

Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): an invasive species in Central Punjab Pakistan / Molecular Phylogenetics of Physa acuta (Pulmonata: Basommatophora): uma espécie invasora no centro de Punjab, Paquistão

Physids belong to Class Gastropoda; belong to Phylum Mollusca and being bioindicators, intermediate hosts of parasites and pests hold a key position in the ecosystem. There are three species of Genus Physa i.e. P. fontinalis, Physa acuta and P. gyrina water bodies of Central Punjab and were characterized on the basis of molecular markers High level of genetic diversity was revealed by polymorphic RAPD, however SSR markers were not amplified. The multivariate analysis revealed polymorphism ranging from 9.09 percent to 50 percent among the three Physid species. Total number of 79 loci were observed for the three species under study and 24 loci were observed to be polymorphic. These RAPD fragment(s) can be developed into co dominant markers (SCAR) by cloning and can be further sequenced for the development of the Physa species specific markers to identify the introduced and native species in Pakistan.(AU)

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; pertencem ao filo Mollusca e, sendo bioindicadores, hospedeiros intermediários de parasitas e pragas, ocupam uma posição-chave no ecossistema. Existem três espécies do gênero Physa, ou seja, P. fontinalis, Physa acuta e P. gyrina em corpos dágua do Punjab Central e foram caracterizadas com base em marcadores moleculares. Alto nível de diversidade genética foi revelado por RAPD polimórfico, no entanto os marcadores SSR não foram amplificados. A análise multivariada revelou polimorfismo variando de 9,09% a 50% entre as três espécies de Physid. Um número total de 79 loci foi observado para as três espécies em estudo e 24 loci foram observados como polimórficos. Esses fragmentos RAPD podem ser desenvolvidos em marcadores codominantes (SCAR) por clonagem e podem ser posteriormente sequenciados para o desenvolvimento de marcadores específicos da espécie Physa para identificar as espécies introduzidas e nativas no Paquistão.(AU)

Characterization of the species of genus Physa on the basis of typological species concept from Central Punjab / Caracterização das espécies do gênero Physa com base no conceito tipológico de espécie do Punjab Central

Physids belong to Class Gastropoda; Phylum Mollusca have important position in food web and act as bio indicators, pests and intermediate host. Being resistant these are called cockroaches of malacology. Physid snails were collected from different water bodies of Faisalabad (Punjab) and were identified up to species using morphological markers. The morphometry of the specimens was carried out with the help of a digital Vernier caliper in millimeters (mm) using linear measurement of shell characters. Linear regression analysis of the AL/SW ratio vs AL and SL/SW ratiovs AL indicated that allometric growth exists only in Physa acuta when compared with P.gyrina and P. fontinalis. This study will lead to assess the status of the Physid species in Central Punjab. The Principal component analysis shows that the Component 1 (Shell Length) and component 2 (Shell Width) are the most prolific components and nearly 80 percent of the identification. The distance between P. acuta and P. fontinalis is 5.4699, P. acuta and P. gyrina is 7.6411, P. fontinalis and P. gyrina is 16.6080 showing that P. acuta resembles with P. fontinalis, and both these specimens donot resemble with P. gyrina. P.acuta is an invasive species and shows bioactivity making it a potent candidate for bioactive substances.

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; o filo Mollusca possui importante posição na teia alimentar e atua como bioindicador, praga e hospedeiro intermediário. Por serem resistentes, são chamadas baratas de malacologia. Os caramujos físidos foram coletados em diferentes corpos d’água de Faisalabad (Punjab) e identificados até as espécies por meio de marcadores morfológicos. A morfometria dos corpos de prova foi realizada com auxílio de paquímetro digital Vernier em milímetros (mm) por meio de medida linear dos caracteres da casca. A análise de regressão linear da razão AL / SW vs. AL e razão SL / SW vs. AL indicou que o crescimento alométrico existe apenas em Physa acuta quando comparado com P. gyrina e P. fontinalis. Este estudo levará a avaliar a situação das espécies de físido no Punjab Central. A análise do componente principal mostra que o componente 1 (comprimento da casca) e o componente 2 (largura da casca) são os componentes mais prolíficos e quase 80% da identificação. A distância entre P. acuta e P. fontinalis é 5,4699, P. acuta e P. gyrina é 7,6411, P. fontinalis e P. gyrina é 16,6080, mostrando que P. acuta se assemelha a P. fontinalis, e ambos os espécimes não se parecem com P. gyrina. P. acuta é uma espécie invasora e apresenta bioatividade, tornando-se uma candidata potente para substâncias bioativas.

Characterization of the species of genus Physa on the basis of typological species concept from Central Punjab

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; Phylum Mollusca have important position in food web and act as bio indicators, pests and intermediate host. Being resistant these are called cockroaches of malacology. Physid snails were collected from different water bodies of Faisalabad (Punjab) and were identified up to species using morphological markers. The morphometry of the specimens was carried out with the help of a digital Vernier caliper in millimeters (mm) using linear measurement of shell characters. Linear regression analysis of the AL/SW ratio vs AL and SL/SW ratio vs AL indicated that allometric growth exists only in Physa acuta when compared with P.gyrina and P. fontinalis. This study will lead to assess the status of the Physid species in Central Punjab. The Principal component analysis shows that the Component 1 (Shell Length) and component 2 (Shell Width) are the most prolific components and nearly 80 percent of the identification. The distance between P. acuta and P. fontinalis is 5.4699, P. acuta and P. gyrina is 7.6411, P. fontinalis and P. gyrina is 16.6080 showing that P. acuta resembles with P. fontinalis, and both these specimens donot resemble with P. gyrina. P.acuta is an invasive species and shows bioactivity making it a potent candidate for bioactive substances.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; o filo Mollusca possui importante posição na teia alimentar e atua como bioindicador, praga e hospedeiro intermediário. Por serem resistentes, são chamadas baratas de malacologia. Os caramujos físidos foram coletados em diferentes corpos dágua de Faisalabad (Punjab) e identificados até as espécies por meio de marcadores morfológicos. A morfometria dos corpos de prova foi realizada com auxílio de paquímetro digital Vernier em milímetros (mm) por meio de medida linear dos caracteres da casca. A análise de regressão linear da razão AL / SW vs. AL e razão SL / SW vs. AL indicou que o crescimento alométrico existe apenas em Physa acuta quando comparado com P. gyrina e P. fontinalis. Este estudo levará a avaliar a situação das espécies de físido no Punjab Central. A análise do componente principal mostra que o componente 1 (comprimento da casca) e o componente 2 (largura da casca) são os componentes mais prolíficos e quase 80% da identificação. A distância entre P. acuta e P. fontinalis é 5,4699, P. acuta e P. gyrina é 7,6411, P. fontinalis e P. gyrina é 16,6080, mostrando que P. acuta se assemelha a P. fontinalis, e ambos os espécimes não se parecem com P. gyrina. P. acuta é uma espécie invasora e apresenta bioatividade, tornando-se uma candidata potente para substâncias bioativas.

Characterization of the species of genus Physa on the basis of typological species concept from Central Punjab / Caracterização das espécies do gênero Physa com base no conceito tipológico de espécie do Punjab Central

Abstract Physids belong to Class Gastropoda; Phylum Mollusca have important position in food web and act as bio indicators, pests and intermediate host. Being resistant these are called cockroaches of malacology. Physid snails were collected from different water bodies of Faisalabad (Punjab) and were identified up to species using morphological markers. The morphometry of the specimens was carried out with the help of a digital Vernier caliper in millimeters (mm) using linear measurement of shell characters. Linear regression analysis of the AL/SW ratio vs AL and SL/SW ratio vs AL indicated that allometric growth exists only in Physa acuta when compared with P.gyrina and P. fontinalis. This study will lead to assess the status of the Physid species in Central Punjab. The Principal component analysis shows that the Component 1 (Shell Length) and component 2 (Shell Width) are the most prolific components and nearly 80 percent of the identification. The distance between P. acuta and P. fontinalis is 5.4699, P. acuta and P. gyrina is 7.6411, P. fontinalis and P. gyrina is 16.6080 showing that P. acuta resembles with P. fontinalis, and both these specimens donot resemble with P. gyrina. P.acuta is an invasive species and shows bioactivity making it a potent candidate for bioactive substances.

Resumo Os físidos pertencem à classe Gastropoda; o filo Mollusca possui importante posição na teia alimentar e atua como bioindicador, praga e hospedeiro intermediário. Por serem resistentes, são chamadas baratas de malacologia. Os caramujos físidos foram coletados em diferentes corpos d'água de Faisalabad (Punjab) e identificados até as espécies por meio de marcadores morfológicos. A morfometria dos corpos de prova foi realizada com auxílio de paquímetro digital Vernier em milímetros (mm) por meio de medida linear dos caracteres da casca. A análise de regressão linear da razão AL / SW vs. AL e razão SL / SW vs. AL indicou que o crescimento alométrico existe apenas em Physa acuta quando comparado com P. gyrina e P. fontinalis. Este estudo levará a avaliar a situação das espécies de físido no Punjab Central. A análise do componente principal mostra que o componente 1 (comprimento da casca) e o componente 2 (largura da casca) são os componentes mais prolíficos e quase 80% da identificação. A distância entre P. acuta e P. fontinalis é 5,4699, P. acuta e P. gyrina é 7,6411, P. fontinalis e P. gyrina é 16,6080, mostrando que P. acuta se assemelha a P. fontinalis, e ambos os espécimes não se parecem com P. gyrina. P. acuta é uma espécie invasora e apresenta bioatividade, tornando-se uma candidata potente para substâncias bioativas.

Characterization of the species of genus Physa on the basis of typological species concept from Central Punjab / Caracterização das espécies do gênero Physa com base no conceito tipológico de espécie do Punjab Central

Physids belong to Class Gastropoda; Phylum Mollusca have important position in food web and act as bio indicators, pests and intermediate host. Being resistant these are called cockroaches of malacology. Physid snails were collected from different water bodies of Faisalabad (Punjab) and were identified up to species using morphological markers. The morphometry of the specimens was carried out with the help of a digital Vernier caliper in millimeters (mm) using linear measurement of shell characters. Linear regression analysis of the AL/SW ratio vs AL and SL/SW ratiovs AL indicated that allometric growth exists only in Physa acuta when compared with P.gyrina and P. fontinalis. This study will lead to assess the status of the Physid species in Central Punjab. The Principal component analysis shows that the Component 1 (Shell Length) and component 2 (Shell Width) are the most prolific components and nearly 80 percent of the identification. The distance between P. acuta and P. fontinalis is 5.4699, P. acuta and P. gyrina is 7.6411, P. fontinalis and P. gyrina is 16.6080 showing that P. acuta resembles with P. fontinalis, and both these specimens donot resemble with P. gyrina. P.acuta is an invasive species and shows bioactivity making it a potent candidate for bioactive substances.(AU)

Os físidos pertencem à classe Gastropoda; o filo Mollusca possui importante posição na teia alimentar e atua como bioindicador, praga e hospedeiro intermediário. Por serem resistentes, são chamadas baratas de malacologia. Os caramujos físidos foram coletados em diferentes corpos dágua de Faisalabad (Punjab) e identificados até as espécies por meio de marcadores morfológicos. A morfometria dos corpos de prova foi realizada com auxílio de paquímetro digital Vernier em milímetros (mm) por meio de medida linear dos caracteres da casca. A análise de regressão linear da razão AL / SW vs. AL e razão SL / SW vs. AL indicou que o crescimento alométrico existe apenas em Physa acuta quando comparado com P. gyrina e P. fontinalis. Este estudo levará a avaliar a situação das espécies de físido no Punjab Central. A análise do componente principal mostra que o componente 1 (comprimento da casca) e o componente 2 (largura da casca) são os componentes mais prolíficos e quase 80% da identificação. A distância entre P. acuta e P. fontinalis é 5,4699, P. acuta e P. gyrina é 7,6411, P. fontinalis e P. gyrina é 16,6080, mostrando que P. acuta se assemelha a P. fontinalis, e ambos os espécimes não se parecem com P. gyrina. P. acuta é uma espécie invasora e apresenta bioatividade, tornando-se uma candidata potente para substâncias bioativas.(AU)

Differences on allocation of available resources, in growth, reproduction, and survival, in an exotic gastropod of Physidae compared to an endemic one

Physa acuta Draparnaud, 1805 es un gasterópodo invasor que puede afectar las poblaciones de especies locales. En Argentina, se encuentra ampliamente distribuida y en altas densidades, incluso en ambientes habitados por la especie nativa Stenophysa marmorata Guilding, 1828. Su predominancia podría ser explicada por un uso más exitoso de la energía en las demandas funcionales (crecimiento, reproducción y supervivencia) con respecto a S. marmorata. El objetivo de este trabajo fue comparar las constantes de crecimiento de ambas especies, teniendo en cuenta también los valores de supervivencia y fecundidad, en condiciones de laboratorio. Los individuos nacidos el mismo día fueron agrupados de a cuatro por acuario y mantenidos en condiciones controladas de alimentación, luz y temperatura. La longitud máxima de conchilla de los caracoles fue medida semanalmente, y la constante de crecimiento fue calculada usando la ecuación de Von Bertalanffy. El número de huevos y sobrevivientes era contado cada semana. Los ejemplares de S. marmorata nacieron con un tamaño mayor que los de Physa acuta e invirtieron más energía en el crecimiento, retardando su madurez sexual. Esto se tradujo en una desventaja en fecundidad y supervivencia con respecto a P. acuta, la cual presentó una constante de crecimiento menor pero maduró más tempranamente y sobrevivió más tiempo. Además, P. acuta no vio afectado su crecimiento por la reproducción y presentó un período reproductivo más prolongado, depositando así una mayor cantidad de huevos que S. marmorata.

Physa acuta Draparnaud, 1805 is an invasive gastropod that can affect local species. In Argentina, it is widespread and abundant, even in environments inhabited by the native species Stenophysa marmorata Guilding, 1828. Its predominance raises the question whether this could be explained by a more successful energy allocation in functional requirements (growth, reproduction and survival) compared to S. marmorata. This study was aimed at comparing growth rates, as well as survival and fecundity, between both species under laboratory conditions. Individuals born on the same day were grouped in four per aquaria and kept under controlled conditions of food, light, and temperature. Snails were weekly measured (maximum shell length), and growth rates were calculated using the Von Bertalanffy's equation. The number of eggs and survivors were grouped by week. Stenophysa marmorata was larger at birth than Physa acuta and invested more energy in growth, delaying sexual maturity. This resulted in a disadvantage in fecundity and survival compared to P. acuta, which had a lower growth rate but matured earlier and survived longer. Furthermore, the growth of P. acuta was not affected by reproduction, its reproductive period was longer, consequently with more eggs laid than S. marmorata.

Differences on allocation of available resources, in growth, reproduction, and survival, in an exotic gastropod of Physidae compared to an endemic one

Physa acuta Draparnaud, 1805 es un gasterópodo invasor que puede afectar las poblaciones de especies locales. En Argentina, se encuentra ampliamente distribuida y en altas densidades, incluso en ambientes habitados por la especie nativa Stenophysa marmorata Guilding, 1828. Su predominancia podría ser explicada por un uso más exitoso de la energía en las demandas funcionales (crecimiento, reproducción y supervivencia) con respecto a S. marmorata. El objetivo de este trabajo fue comparar las constantes de crecimiento de ambas especies, teniendo en cuenta también los valores de supervivencia y fecundidad, en condiciones de laboratorio. Los individuos nacidos el mismo día fueron agrupados de a cuatro por acuario y mantenidos en condiciones controladas de alimentación, luz y temperatura. La longitud máxima de conchilla de los caracoles fue medida semanalmente, y la constante de crecimiento fue calculada usando la ecuación de Von Bertalanffy. El número de huevos y sobrevivientes era contado cada semana. Los ejemplares de S. marmorata nacieron con un tamaño mayor que los de Physa acuta e invirtieron más energía en el crecimiento, retardando su madurez sexual. Esto se tradujo en una desventaja en fecundidad y supervivencia con respecto a P. acuta, la cual presentó una constante de crecimiento menor pero maduró más tempranamente y sobrevivió más tiempo. Además, P. acuta no vio afectado su crecimiento por la reproducción y presentó un período reproductivo más prolongado, depositando así una mayor cantidad de huevos que S. marmorata.

Physa acuta Draparnaud, 1805 is an invasive gastropod that can affect local species. In Argentina, it is widespread and abundant, even in environments inhabited by the native species Stenophysa marmorata Guilding, 1828. Its predominance raises the question whether this could be explained by a more successful energy allocation in functional requirements (growth, reproduction and survival) compared to S. marmorata. This study was aimed at comparing growth rates, as well as survival and fecundity, between both species under laboratory conditions. Individuals born on the same day were grouped in four per aquaria and kept under controlled conditions of food, light, and temperature. Snails were weekly measured (maximum shell length), and growth rates were calculated using the Von Bertalanffy's equation. The number of eggs and survivors were grouped by week. Stenophysa marmorata was larger at birth than Physa acuta and invested more energy in growth, delaying sexual maturity. This resulted in a disadvantage in fecundity and survival compared to P. acuta, which had a lower growth rate but matured earlier and survived longer. Furthermore, the growth of P. acuta was not affected by reproduction, its reproductive period was longer, consequently with more eggs laid than S. marmorata.

Experimental infection of Physa cubensis Pfeiffer, 1839 and Lymnaea columella with Fasciola hepatica miracidiae Linnaeus, 1758 / Infecção experimental de Physa cubensis Pfeiffer 1839 e Lymnaea columella com miracídios de Fasciola hepatica Linnaeus, 1758

The experimental infection of Physa cubensis Pfeiffer, 1839 was realized with three Fasciola hepatica miracidiae. One hundred snails were infected. Some groups were maintained up to the 60º. day post infection for the observation of the larval forms emergency. The snails, in the remaining groups, were immerged in Raillet & Henry 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 24; 48; 72; 96; 120 and 144 hours post infection. The experiment was realized comparatively with Lymnaea columella. The results demonstrated, at first days infection, esporocysts presence in the cephalopodal mass and mantle, however, in the last days it didn"t get to identify any larval form, in P. cubensis.

Foi realizada a infecção experimental de Physa cubensis Pfeiffer, 1839, com miracídios de Fasciola hepatica. Para tanto, cada um dos cem moluscos, selecionados para o experimento, foram infectados com três miracídeos. Alguns exemplares, escolhidos ao acaso, foram mantidos até o 60º dia para observação da emergência de formas larvais. Os moluscos restantes foram fixados após 0,5; 1; 2; 3; 4; 5; 24; 48; 72; 96; 120 e 144 horas de infecção, utilizando Raillet & Henry. O trabalho foi realizado de forma comparativa com Lymnaea columella. Os resultados demonstraram o desenvolvimento das formas larvais do trematódeo em L. columella e a presença de esporocistos em vários estágios de degeneração na região cefalopodal e na região do manto nos primeiros dias de infecção em P. cubensis.