In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use

ABSTRACT: Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF- (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.

RESUMO: O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF- antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.

In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use / Produção e validação de plasma rico em plaquetas canino liofilizado para fins de utilização terapêutica

Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-β, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF-β (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.(AU)

O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF-β antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- β (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.(AU)

In-vitro production and pre-validation of lyophilized canine platelet-rich plasma for therapeutic use / Produção e validação de plasma rico em plaquetas canino liofilizado para fins de utilização terapêutica

Platelet-rich plasma (PRP) has been considered a promising therapeutic alternative, since platelets are rich in growth factors that are used in the Regenerative Medicine field. However, fresh PRP cannot be stored for long periods. This study aimed to develop a protocol for obtaining lyophilized canine PRP capable of maintaining viability after its reconstitution. For that purpose, canine PRP extraction and lyophilization protocols were initially tested. Subsequently, assays were carried out to quantify the growth factors VEGF and TGF-β, before and after the lyophilization process, gelation test and the three-dimensional gel structure analysis of the reconstituted lyophilized PRP by electron microscopy, as well as in vitro cell proliferation test in lyophilized PRP gel. Additionally, the immunogenicity test was performed, using allogeneic samples of lyophilized PRP. The results showed that the lyophilized PRP had adequate therapeutic concentrations of growth factors VEGF and TGF-β (9.1pg/mL and 6161.6pg/mL, respectively). The reconstituted PRP gel after lyophilization showed an in vitro durability of 10 days. Its electron microscopy structure was similar to that of fresh PRP. In the cell proliferation test, an intense division process was verified in mesenchymal stem cells (MSCs) through the three-dimensional mesh structure of the lyophilized PRP gel. The immunogenicity test showed no evidence of an immune reaction. The findings were promising, suggesting the possibility of having a lyophilized canine PRP that can be marketed. New in vivo and in vitro studies must be carried out for therapeutic confirmation.(AU)

O plasma rico em plaquetas (PRP) é uma alternativa terapêutica promissora, pois as plaquetas são ricas em fatores de crescimento com ação na regeneração de tecidos. No entanto, o PRP fresco não pode ser armazenado por longos períodos. Esse trabalho teve como objetivo desenvolver um protocolo de obtenção de PRP liofilizado canino capaz de manter a viabilidade pós reconstituição. Portanto, foram testados diversos protocolos de extração e liofilização. Para validação do PRP canino liofilizado foi analisada a concentração dos fatores de crescimento VEGF e TGF-β antes e após o processo de liofilização, a estrutura tridimensional do PRP liofilizado reconstituído em forma de gel por microscopia eletrônica e seu efeito in vitro na proliferação de células-tronco mesenquimais. Os resultados demonstraram que o PRP liofilizado apresentou concentrações terapêuticas adequadas dos fatores de crescimento VEGF e TGF- β (9,1pg/ml e 6161,6pg/ml, respectivamente). O gel de PRP reconstituído após liofilização apresentou uma durabilidade in vitro de 10 dias, sua estrutura tridimensional mostrou-se semelhante ao PRP fresco e proporcionou intensa proliferação de células-tronco mesenquimais durante o cultivo. O teste de imunogenicidade não demonstrou evidências de reação imune. Os achados foram promissores, sugerindo a possibilidade de uso de PRP canino liofilizado para o mercado. Novos estudos in vivo e in vitro deverão ser conduzidos para comprovação terapêutica.(AU)

Allogenic platelet-rich plasma in induced ulcers in rat's cornea / [Plasma rico em plaquetas alogênico em úlceras de córnea induzidas em ratos]

The objective in this study was to evaluate the clinic effect of applying allogenic platelet-rich plasma (PRP) heated or not, for treating cornea ulcers, including the dosage of PDGF-BB in the cornea. The ulcers were induced, standardizing the left eye from 81 rats (Ratus norvegicus, albinus variety), assigned randomly into three groups (N=27): control group (CG) which did not receive any topic treatment; heated PRP group (GA) and PRP group (GP), which received topical treatment every eight hours for five days. Each group underwent evaluation at 24 hours (M1), three days (M3) and five days (M5). The clinical exam evaluated the opacity, vascularization and corneal repair. The corneal PDGF-BB was dosed through the ELISA method. The corneal opacity was decreased in PRP-treated animals (GA and GP) and corneal repair time reduced when compared to CG at M1 and M5. Furthermore, GP showed greater vascularization at M3 compared to M1. Applied allogenic PRP eye drops, heated or not, speed up corneal healing, and reduce corneal repair time. However, the corneal PDGF concentration was not altered in any of the treatments.(AU)

Objetivou-se avaliar o efeito clínico da aplicação de plasma rico em plaquetas alogênico (PRP) aquecido ou não, no tratamento de úlceras de córnea, como a dosagem de PDGF-BB na córnea. As úlceras foram induzidas, padronizando-se o olho esquerdo de 81 ratos (Rattus norvegicus, variedade albinus), aleatoriamente, nos três grupos (N = 27): grupo controle (CG), que não recebeu nenhum tratamento tópico; grupo PRP aquecido (GA) e grupo PRP (GP), que receberam tratamento tópico a cada oito horas, durante cinco dias. Cada grupo foi subdividido em 24 horas (M1), três dias (M3) e cinco dias (M5). O exame clínico avaliou a opacidade, a vascularização e o reparo corneano. O PDGF-BB corneano foi dosado pelo método Elisa. Houve diminuição da opacidade da córnea nos animais tratados com PRP (GA e GP) e diminuição do tempo de reparo da córnea em comparação com CG, M1 e M5. Além disso, foi observada maior vascularização no GP no momento M3 em relação ao M1. A aplicação de colírios de PRP alogênico, aquecidos ou não, acelera a cicatrização da córnea, além de reduzir o tempo de reparo da córnea. No entanto, a concentração de PDGF na córnea não se alterou em nenhum dos tratamentos.(AU)

Uso do plasma rico em plaquetas associado a colírios no tratamento de ceratite ulcerativa em equino / Use of rich plasma on platters associated with collieries in the treatment of ulcerative caeratitis in equine

A córnea é a primeira estrutura do olho a receber luz, sendo localizada na parte mais externado bulbo ocular. Devido a sua localização está sujeita, com maior frequência, a processos lesivos, como a úlcera de córnea, também chamada de ceratite ulcerativa. É a patologia com maior ocorrência dentre as afecções oftalmológicas em equinos, e caso não tenha o tratamento adequado, pode levar a perda da visão do animal. Diante desse contexto, objetivo do estudo foi relatar um caso clínico de ceratite ulcerativa em equino tratado com plasma rico em plaquetas (PRP) associado a colírios. Um equino, macho, de 3 anos de idade, raça Quarto de Milha, pelagem alazã foi encaminhado para atendimento veterinário por ter sofrido uma pancada em um caibro. Durante o exame clínico foi constatado que o cavalo apresentava quemose, epífora, blefaroespasmo e perda temporária da capacidade visual. Baseado nos sinais clínicos e histórico a suspeita clínica foi de ceratite ulcerativa. O tratamento indicado foi instilação de Ocucan® colírio, Ciprovet® e PRP, duas gotas de cada, duas vezes ao dia, além de lavagem com solução fisiológica. O animal apresentou evolução significativa ao tratamento e com 30 dias foi liberado para retornar a propriedade e as atividades físicas gradativamente. Dessa forma, podemos concluir que o uso de plasma rico em plaquetas constitui uma ferramenta importante e acessível no tratamento de ceratite ulcerativa em equinos, inclusive demonstrando bons resultados na caraterística da cicatrização e no tempo da mesma.

The cornea is the first structure of the eye receiving light, being located at the outermost part of the ocular bulb. Due to its location is subject, more often, the harmful processes such as corneal ulcer, also called keratitis Ulcerative. It is the disease with higher incidence among ophthalmologic diseases in horses, and if no proper treatment, can lead to the animal vision loss. In this context, objective of the study was to report a case of keratitis Ulcerative equinus treated with platelet-rich plasma (PRP) associated with eye drops. A horse, male, 3 years old, Quarter Horses, sorrel coat was referred to veterinary care after suffering a stroke on a rafter. During the clinical examination revealed that the horse had chemosis, epiphora blepharospasm and temporary loss of vision. Based on clinical signs and history clinical suspicion was keratitis Ulcerative. The treatment was Ocucan® instillation of eye drops, Ciprovet® PRP and two drops each, twice a day, and washing with saline solution. The animal showed evolution significant treatment and was released 30 days to return the property and physical activity gradually. Thus, we conclude that the use of platelet rich plasma is an important tool and accessible in the treatment of ulcerative keratitis in horses, including demonstrating good results in healing characteristic and time thereof.

Uso do plasma rico em plaquetas como adjuvante no tratamento de lesão meniscal e tendinose de calcâneo em um cão / Use of platelet-rich plasma as an adjuvant on treatment of meniscal lesion and tendinosis of calcaneus in a dog

O objetivo deste trabalho é relatar o caso de um cão com lesão meniscal associado à tendinose de calcâneo tratado com aplicação única de plasma rico em plaquetas (PRP) intraarticular e intratendínea. Foi atendido um cão da raça Boxer com dificuldade de deambulação há três meses. Observou-se claudicação grau II/IV em ambos os membros pélvicos, atrofia muscular bilateral, dor e leve crepitação em joelho esquerdo, discreta instabilidade aos testes de gaveta e tibial cranial, com intensa fibrose medial à articulação e espessamento/rigidez do tendão calcâneo direito. O estudo radiográfico demonstrou artrose moderada no joelho esquerdo e, ao exame ultrassonográfico, constatou-se áreas de hipoecogenicidade em menisco medial esquerdo e ruptura de fibras musculares do tendão calcâneo direito. Sendo assim, o paciente foi diagnosticado com insuficiência do ligamento cruzado cranial crônica, com estabilidade fibrótica periarticular, e lesão meniscal em joelho esquerdo e tendinose de calcâneo direito. Foram prescritos condroprotetores, diacereína, fisioterapia e uma aplicação de PRP intra-articular e intratendínea. Para a concentração do PRP, foram coletados 50mL de sangue autólogo, os quais foram depositados em frascos contendo citrato de sódio. Foi realizada dupla centrifugação, sendo a primeira com força de120g e a segunda 240g, ambas por dez minutos. Ao final, obteve-se 2mL de PRP com246.000 plaquetas/µL (antes da concentração o sangue tinha 141.000 plaquetas/µL). A aplicação ocorreu de forma asséptica, sob anestesia geral e guiada por ultrassom. Foram injetados 1ml intra-articular em joelho esquerdo, 0,25mL em região perilesional e 0,75mLintralesional em tendão calcâneo direito. Após 14 dias, notou-se grau de claudicação I/IV e discreto fortalecimento muscular. Foi mantido o tratamento clínico com fisioterapia e condroprotetores com retornos periódicos para acompanhamento da evolução. Conclui-se que o uso do PRP foi importante adjuvante na terapia clínica empregada.

The aim of this paper is to report the case of a dog with meniscal lesion associated with calcaneal tendinosis treated with single application of intra-articular and intratendinous platelet rich plasma (PRP). A dog of the Boxer racer with difficulty walking was treated three months ago. Grade II/IV lameness was observed in both pelvic limbs, bilateral muscle atrophy, pain and slight crepitation in the left knee, slight instability to the drawer and cranial tibial tests, with intense medial fibrosis to the joint and right calcaneal tendon thickening/stiffness. The radiographic study showed moderate arthrosis in the left knee, and ultrasound examination revealed areas of hypoechogenicity in the left medial meniscus and rupture of the right calcaneal tendon muscle fibers. Thus, the patient was diagnosed with chronic cranial cruciate ligament insufficiency, periarticular fibrotic stability, and left meniscal injury and right calcaneal tendinosis. Chondroprotectors, diacerein, physiotherapyand an application of intra-articular and intratendinous PRP were prescribed. For the PRP concentration, 50mL of autologous blood were collected and deposited in vials containing sodium citrate. A double centrifugation was performed, the first strength of 120g and the second 240g, both for ten minutes. At the end, 2mL of PRP was obtained with 246.000platelets/µL (before concentration the blood had 141.000 platelets/µL). The application occurred aseptically, under general anesthesia and guided by ultrasound. We injected 1mlintra-articular in the left knee, 0.25mL in the perilesional region and 0.75mL intralesional in the right calcaneal tendon. After 14 days, I/IV lameness and slight muscle strengthening were noted. Clinical treatment with physiotherapy and chondroprotectors was maintained, with periodic returns to follow the evolution. It was concluded that the use of PRP was an important adjuvant in the clinical therapy employed.

Associação de plasma rico em plaquetas de equino e pomada comercial no tratamento de feridas em pele de coelho / Rich plasma association in equine platform and commercial oil in writing of rabbit skin

Autologous platelet-rich plasma (PRP) is beneficial in the healing process of reconstructive surgeries, contributing to the stimulation of angiogenesis; however, heterologous plasma has been shown to be more effective. The objective of this study was to verify, by macro- and microscopic evaluation, whether PRP accelerates the healing process as compared to a commercial ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A (study ointment). This study used 24 white New Zealand rabbits, aged 12 months, and each weighing approximately 3 kg. The animals were separated into 4 equal groups and underwent wound induction through skin removal in the thoracic (study wound) and lumbar (control wound) dorsal midline. Study wounds were co-treated with equine PRP and the study ointment. Control wounds were treated with only the study ointment. Group I underwent histological evaluation 3 days after the skin removal procedure, group II after 7 days, group III after 14 days, and group IV after 21 days. A skin fragment was collected from each animal for histological evaluation. The co-treatment with heterologous equine PRP and the study ointment accelerated the healing process in the surgically induced skin wounds, confirming the acceleratory effect of PRP on wound healing.

O plasma rico em plaquetas autólogo é importante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando na estimulação da angiogênese; no entanto, o plasma heterólogo mostrou-se mais eficaz. Utilizou-se 24 coelhos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses, com peso corporal cerca de 3,0 kg. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos a remoção de pele na linha média dorsal torácica (ferida tratada) e lombar (ferida controle). Nas tratadas, foi aplicado plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A e, nas do grupo controle, somente a pomada. Nos do grupo I, foi coletado tecido cutâneo para a avaliação histológica com três dias de pós-operatório, nos do grupo II com sete dias, nos do grupo III com 14 dias e, nos do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação histológica. O uso associado do plasma rico em plaquetas heterólogo de equino com a pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, em feridas de pele induzidas cirurgicamente acelera o processo cicatricial.

Uso do plasma rico em plaquetas associado a colírios no tratamento de ceratite ulcerativa em equino / Use of rich plasma on platters associated with collieries in the treatment of ulcerative caeratitis in equine

A córnea é a primeira estrutura do olho a receber luz, sendo localizada na parte mais externado bulbo ocular. Devido a sua localização está sujeita, com maior frequência, a processos lesivos, como a úlcera de córnea, também chamada de ceratite ulcerativa. É a patologia com maior ocorrência dentre as afecções oftalmológicas em equinos, e caso não tenha o tratamento adequado, pode levar a perda da visão do animal. Diante desse contexto, objetivo do estudo foi relatar um caso clínico de ceratite ulcerativa em equino tratado com plasma rico em plaquetas (PRP) associado a colírios. Um equino, macho, de 3 anos de idade, raça Quarto de Milha, pelagem alazã foi encaminhado para atendimento veterinário por ter sofrido uma pancada em um caibro. Durante o exame clínico foi constatado que o cavalo apresentava quemose, epífora, blefaroespasmo e perda temporária da capacidade visual. Baseado nos sinais clínicos e histórico a suspeita clínica foi de ceratite ulcerativa. O tratamento indicado foi instilação de Ocucan® colírio, Ciprovet® e PRP, duas gotas de cada, duas vezes ao dia, além de lavagem com solução fisiológica. O animal apresentou evolução significativa ao tratamento e com 30 dias foi liberado para retornar a propriedade e as atividades físicas gradativamente. Dessa forma, podemos concluir que o uso de plasma rico em plaquetas constitui uma ferramenta importante e acessível no tratamento de ceratite ulcerativa em equinos, inclusive demonstrando bons resultados na caraterística da cicatrização e no tempo da mesma.(AU)

The cornea is the first structure of the eye receiving light, being located at the outermost part of the ocular bulb. Due to its location is subject, more often, the harmful processes such as corneal ulcer, also called keratitis Ulcerative. It is the disease with higher incidence among ophthalmologic diseases in horses, and if no proper treatment, can lead to the animal vision loss. In this context, objective of the study was to report a case of keratitis Ulcerative equinus treated with platelet-rich plasma (PRP) associated with eye drops. A horse, male, 3 years old, Quarter Horses, sorrel coat was referred to veterinary care after suffering a stroke on a rafter. During the clinical examination revealed that the horse had chemosis, epiphora blepharospasm and temporary loss of vision. Based on clinical signs and history clinical suspicion was keratitis Ulcerative. The treatment was Ocucan® instillation of eye drops, Ciprovet® PRP and two drops each, twice a day, and washing with saline solution. The animal showed evolution significant treatment and was released 30 days to return the property and physical activity gradually. Thus, we conclude that the use of platelet rich plasma is an important tool and accessible in the treatment of ulcerative keratitis in horses, including demonstrating good results in healing characteristic and time thereof.(AU)

Uso do plasma rico em plaquetas como adjuvante no tratamento de lesão meniscal e tendinose de calcâneo em um cão / Use of platelet-rich plasma as an adjuvant on treatment of meniscal lesion and tendinosis of calcaneus in a dog

O objetivo deste trabalho é relatar o caso de um cão com lesão meniscal associado à tendinose de calcâneo tratado com aplicação única de plasma rico em plaquetas (PRP) intraarticular e intratendínea. Foi atendido um cão da raça Boxer com dificuldade de deambulação há três meses. Observou-se claudicação grau II/IV em ambos os membros pélvicos, atrofia muscular bilateral, dor e leve crepitação em joelho esquerdo, discreta instabilidade aos testes de gaveta e tibial cranial, com intensa fibrose medial à articulação e espessamento/rigidez do tendão calcâneo direito. O estudo radiográfico demonstrou artrose moderada no joelho esquerdo e, ao exame ultrassonográfico, constatou-se áreas de hipoecogenicidade em menisco medial esquerdo e ruptura de fibras musculares do tendão calcâneo direito. Sendo assim, o paciente foi diagnosticado com insuficiência do ligamento cruzado cranial crônica, com estabilidade fibrótica periarticular, e lesão meniscal em joelho esquerdo e tendinose de calcâneo direito. Foram prescritos condroprotetores, diacereína, fisioterapia e uma aplicação de PRP intra-articular e intratendínea. Para a concentração do PRP, foram coletados 50mL de sangue autólogo, os quais foram depositados em frascos contendo citrato de sódio. Foi realizada dupla centrifugação, sendo a primeira com força de120g e a segunda 240g, ambas por dez minutos. Ao final, obteve-se 2mL de PRP com246.000 plaquetas/µL (antes da concentração o sangue tinha 141.000 plaquetas/µL). A aplicação ocorreu de forma asséptica, sob anestesia geral e guiada por ultrassom. Foram injetados 1ml intra-articular em joelho esquerdo, 0,25mL em região perilesional e 0,75mLintralesional em tendão calcâneo direito. Após 14 dias, notou-se grau de claudicação I/IV e discreto fortalecimento muscular. Foi mantido o tratamento clínico com fisioterapia e condroprotetores com retornos periódicos para acompanhamento da evolução. Conclui-se que o uso do PRP foi importante adjuvante na terapia clínica empregada.(AU)

The aim of this paper is to report the case of a dog with meniscal lesion associated with calcaneal tendinosis treated with single application of intra-articular and intratendinous platelet rich plasma (PRP). A dog of the Boxer racer with difficulty walking was treated three months ago. Grade II/IV lameness was observed in both pelvic limbs, bilateral muscle atrophy, pain and slight crepitation in the left knee, slight instability to the drawer and cranial tibial tests, with intense medial fibrosis to the joint and right calcaneal tendon thickening/stiffness. The radiographic study showed moderate arthrosis in the left knee, and ultrasound examination revealed areas of hypoechogenicity in the left medial meniscus and rupture of the right calcaneal tendon muscle fibers. Thus, the patient was diagnosed with chronic cranial cruciate ligament insufficiency, periarticular fibrotic stability, and left meniscal injury and right calcaneal tendinosis. Chondroprotectors, diacerein, physiotherapyand an application of intra-articular and intratendinous PRP were prescribed. For the PRP concentration, 50mL of autologous blood were collected and deposited in vials containing sodium citrate. A double centrifugation was performed, the first strength of 120g and the second 240g, both for ten minutes. At the end, 2mL of PRP was obtained with 246.000platelets/µL (before concentration the blood had 141.000 platelets/µL). The application occurred aseptically, under general anesthesia and guided by ultrasound. We injected 1mlintra-articular in the left knee, 0.25mL in the perilesional region and 0.75mL intralesional in the right calcaneal tendon. After 14 days, I/IV lameness and slight muscle strengthening were noted. Clinical treatment with physiotherapy and chondroprotectors was maintained, with periodic returns to follow the evolution. It was concluded that the use of PRP was an important adjuvant in the clinical therapy employed.(AU)

Associação de plasma rico em plaquetas de equino e pomada comercial no tratamento de feridas em pele de coelho / Rich plasma association in equine platform and commercial oil in writing of rabbit skin

Autologous platelet-rich plasma (PRP) is beneficial in the healing process of reconstructive surgeries, contributing to the stimulation of angiogenesis; however, heterologous plasma has been shown to be more effective. The objective of this study was to verify, by macro- and microscopic evaluation, whether PRP accelerates the healing process as compared to a commercial ointment containing gentamicin, sulfanilamide, sulfadiazine, urea, and vitamin A (study ointment). This study used 24 white New Zealand rabbits, aged 12 months, and each weighing approximately 3 kg. The animals were separated into 4 equal groups and underwent wound induction through skin removal in the thoracic (study wound) and lumbar (control wound) dorsal midline. Study wounds were co-treated with equine PRP and the study ointment. Control wounds were treated with only the study ointment. Group I underwent histological evaluation 3 days after the skin removal procedure, group II after 7 days, group III after 14 days, and group IV after 21 days. A skin fragment was collected from each animal for histological evaluation. The co-treatment with heterologous equine PRP and the study ointment accelerated the healing process in the surgically induced skin wounds, confirming the acceleratory effect of PRP on wound healing.(AU)

O plasma rico em plaquetas autólogo é importante no processo cicatricial de cirurgias reconstrutivas, auxiliando na estimulação da angiogênese; no entanto, o plasma heterólogo mostrou-se mais eficaz. Utilizou-se 24 coelhos da raça Nova Zelândia, com idade de 12 meses, com peso corporal cerca de 3,0 kg. Os animais foram separados em quatro grupos de igual número e submetidos a remoção de pele na linha média dorsal torácica (ferida tratada) e lombar (ferida controle). Nas tratadas, foi aplicado plasma rico em plaqueta de equino e pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A e, nas do grupo controle, somente a pomada. Nos do grupo I, foi coletado tecido cutâneo para a avaliação histológica com três dias de pós-operatório, nos do grupo II com sete dias, nos do grupo III com 14 dias e, nos do grupo IV, com 21 dias. Decorrido o período de avaliação de cada grupo, foi coletado fragmento de pele para avaliação histológica. O uso associado do plasma rico em plaquetas heterólogo de equino com a pomada contendo gentamicina, sulfanilamida, sulfadiazina, ureia e vitamina A, em feridas de pele induzidas cirurgicamente acelera o processo cicatricial.(AU)

Comparison of the protocols for obtaining platelet-rich plasma in dogs: a cellular study / Comparação entre protocolos para obtenção de plasma rico em plaquetas em cães: estudo celular

This study aimed to evaluate two protocols (PA and PB) that are used to obtain canine platelet-rich plasma (PRP) for cellularity. Twenty healthy dogs were used. Blood samples were collected and placed in two tubes of 3.2% sodium citrate. PA used double centrifugation at 210 x g, and 370 x g and PB used double centrifugation with 140 x g and 330 x g. The PRP samples from the protocols were examined in terms of their platelet, erythrocyte, and leukocyte count in the Neubauer chamber, differential leukocyte count and platelet morphological observation in blood smears. Data (mean and standard deviation) were analyzed with the 95% probability t-test (P <0.05) using Pearsons correlation to test the relationship between platelets and erythrocytes, platelets, and leukocytes, and the leukocyte count versus the erythrocytes. Very weak negative correlation between platelets and leukocytes (p= -0.03), weak negative correlation between platelets and erythrocytes (p= -0.3) and a strong positive correlation between leukocytes and erythrocytes (ρ = 0.75) were noted. Although, BP did not reach the desired mean of one million platelets (979300 ± 79631 cells / μL), both protocols, A and B (4.42 ± 1.61 and 3.85 ± 1.55 times more platelets than total blood, respectively) (p <0.05) were efficient in concentrating platelets. Platelet activation was present in 26.55 ± 6.72% of the PA platelets and 26.25 ± 7.03% in PB (p> 0.05). PA and PB presented low erythrocyte concentration (p> 0.05), and PA had more leukocytes (p <0.05) than PB, with higher concentrations of basophils that were segmented, and lymphocytes.(AU)

Foi proposto avaliar dois protocolos (PA e PB) para obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) canino quanto a celularidade. Foram utilizados 20 cães sadios e coletadas amostras sanguíneas, sendo acondicionados em dois tubos de citrato de sódio a 3,2%. O PA utilizando centrifugação dupla com 210 xG e 370 xG e PB utilizando centrifugação dupla com 140 xG e 330 xG. Amostras de PRP dos protocolos foram destinadas a contagem plaquetária, eritrocitária e leucocitária em câmara de Neubauer, contagem diferencial leucocitária e observação morfológica plaquetária em esfregaços sanguíneos. Analisou-se os dados (médias e desvios padrão) pelo Teste t com 95% de probabilidade (p<0,05) utilizando-se correlação de Pearson para testar a relação entre a contagem de plaquetas e eritrócitos, plaquetas e leucócitos e leucócitos em relação aos eritrócitos. Houve correlação negativa muito fraca entre plaquetas e leucócitos (ρ= -0,03), negativa fraca entre plaquetas e eritrócitos (ρ= -0,3) e correlação positiva forte entre leucócitos e eritrócitos (ρ=0,75). Embora o PB não tenha alcançando a média de um milhão de plaquetas desejado (979300 ± 79631 células/µL), ambos os protocolos, A e B (4,42 ± 1,61 e 3,85 ± 1,55 vezes mais plaquetas que o sangue total, respectivamente) (p<0,05), foram eficientes em concentrar plaquetas. A ativação plaquetária esteve presente em 26,55 ± 6,72 % das plaquetas do PA e 26,25 ± 7,03 % nas do PB (p>0,05). PA e PB apresentaram baixa concentração eritrocitária (p>0,05) e PA apresentou mais leucócitos (p<0,05) que PB, com maiores concentrações de basófilos, segmentados e linfócitos.(AU)

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Utilização de plasma rico em plaquetas no tratamento de ferida cutânea em cão: relato de caso / Use of platelet-rich plasma in the treatment of cutaneous wound in dogs: a case report / Utilización de plasma rico en plaquetas en el tratamiento de herida cutánea en perro: relato de caso

O plasma rico em plaquetas (PRP) consiste em um concentrado suprafisiológico de plaquetas extraído a partir do sangue autógeno do paciente e centrifugado adequadamente. O presente relato descreve a utilização do PRP no tratamento de ferida cutânea, após exérese de massa com evolução de 4 meses em um cão fêmea, da raça Beagle, de 7 anos de idade. Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF) foi realizada na massa e diagnóstico sugestivo de neoplasia de anexo cutâneo de baixo grau foi identificado. O tratamento instituído consistiu na excisão da massa e aplicações tópicas e intradérmicas do produto obtido nos bordos da ferida. A lesão apresentou diminuição da resposta inflamatória, cicatrização limpa, bordos uniformes, e ausência de exsudato purulento, tecido de granulação exagerado e complicações sob o caráter neoplásico da etiologia da ferida, cicatrizando completamente após 17 dias.(AU)

Platelet-rich plasma (PRP) consists of a supra-physiologic platelet concentrate extracted from the patient's autogenous blood, after being properly centrifuged. This report describes the use of PRP in the treatment of cutaneous wound, after excision of mass with 4-month evolution in a 7-year-old beagle bitch. Fine needle aspiration cytology (FNAC) was performed in the mass and suggestive diagnosis of cutaneous adnexal neoplasm was identified. The treatment consisted of mass excision, added by topical and intradermal applications of the studied product in the wound edges. The wound presented decreased inflammatory response, clean healing, uniform edges, and absence of purulent exudate, exaggerated granulation tissue or complications under the neoplastic character of the wound, healing completely after 17 days.(AU)

El plasma rico en plaquetas (PRP) consiste en un concentrado supra fisiológico de plaquetas extraído a partir de la sangre autógena del paciente y centrifugado adecuadamente. El presente relato describe la utilización del PRP en el tratamiento de herida cutánea, tras exéresis de masa con evolución de 4 meses en una perra, de la raza Beagle, de 7 años de edad. Citología aspirativa por aguja fina (CAAF), se realizó en la masa y el diagnóstico sugestivo de neoplasia de anexo cutáneo de bajo grado fue identificado. El tratamiento instituido consistió en la escisión de la masa y aplicaciones tópicas e intradérmicas en los bordes de la herida con el producto obtenido. La lesión presentó reducción de la respuesta inflamatoria, cicatrización limpia, bordes uniformes, ausencia de exudado purulento, tejido de granulación exagerado y complicaciones bajo el carácter neoplásico de la etiología de la herida, cicatrizando completamente después de 17 días.(AU)

Utilização de plasma rico em plaquetas no tratamento de ferida cutânea em cão: relato de caso / Use of platelet-rich plasma in the treatment of cutaneous wound in dogs: a case report / Utilización de plasma rico en plaquetas en el tratamiento de herida cutánea en perro: relato de caso

O plasma rico em plaquetas (PRP) consiste em um concentrado suprafisiológico de plaquetas extraído a partir do sangue autógeno do paciente e centrifugado adequadamente. O presente relato descreve a utilização do PRP no tratamento de ferida cutânea, após exérese de massa com evolução de 4 meses em um cão fêmea, da raça Beagle, de 7 anos de idade. Citologia aspirativa por agulha fina (CAAF) foi realizada na massa e diagnóstico sugestivo de neoplasia de anexo cutâneo de baixo grau foi identificado. O tratamento instituído consistiu na excisão da massa e aplicações tópicas e intradérmicas do produto obtido nos bordos da ferida. A lesão apresentou diminuição da resposta inflamatória, cicatrização limpa, bordos uniformes, e ausência de exsudato purulento, tecido de granulação exagerado e complicações sob o caráter neoplásico da etiologia da ferida, cicatrizando completamente após 17 dias.(AU)

Platelet-rich plasma (PRP) consists of a supra-physiologic platelet concentrate extracted from the patient's autogenous blood, after being properly centrifuged. This report describes the use of PRP in the treatment of cutaneous wound, after excision of mass with 4-month evolution in a 7-year-old beagle bitch. Fine needle aspiration cytology (FNAC) was performed in the mass and suggestive diagnosis of cutaneous adnexal neoplasm was identified. The treatment consisted of mass excision, added by topical and intradermal applications of the studied product in the wound edges. The wound presented decreased inflammatory response, clean healing, uniform edges, and absence of purulent exudate, exaggerated granulation tissue or complications under the neoplastic character of the wound, healing completely after 17 days.(AU)

El plasma rico en plaquetas (PRP) consiste en un concentrado supra fisiológico de plaquetas extraído a partir de la sangre autógena del paciente y centrifugado adecuadamente. El presente relato describe la utilización del PRP en el tratamiento de herida cutánea, tras exéresis de masa con evolución de 4 meses en una perra, de la raza Beagle, de 7 años de edad. Citología aspirativa por aguja fina (CAAF), se realizó en la masa y el diagnóstico sugestivo de neoplasia de anexo cutáneo de bajo grado fue identificado. El tratamiento instituido consistió en la escisión de la masa y aplicaciones tópicas e intradérmicas en los bordes de la herida con el producto obtenido. La lesión presentó reducción de la respuesta inflamatoria, cicatrización limpia, bordes uniformes, ausencia de exudado purulento, tejido de granulación exagerado y complicaciones bajo el carácter neoplásico de la etiología de la herida, cicatrizando completamente después de 17 días.(AU)

Protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) in Quarter Horses / Protocolos para o preparo de plasma rico em plaquetas (PRP) em cavalos Quarto de Milha

This study compared two protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) and evaluated the association between manual and automated methods for platelet count using a prospective study design. Eight clinically healthy Quarter Horses had venous blood samples collected at rest. After collection, blood samples were centrifuged twice, using two different protocols including a period of sample resting, either at the start or at the end of the protocol. Platelet counting at the start of the protocol, during, and after obtaining PRP was conducted manually or with an automated counter, followed by comparison of the two methods. In order to investigate platelet degranulation during the protocol, vascular endothelial growth factor (VEGF) was measured at each preparation stage. The protocol with sample resting before centrifugation yielded a more concentrated PRP, and the study verified that both manual and automated methods are comparable and can be used interchangeably for platelet counting. VEGF concentration did not differ significantly between protocols, or among protocol stages. The results indicate that choice of protocol for PRP preparation will affect the quantity of platelets in the final product, although platelet degranulation was not observed as evidenced by the stable VEGF concentrations measured. A larger yield of non-degranulated platelets in PRP is desirable since more α-granules will be present, therefore Protocol II is recommended. Both manual and automated counts reliably allow clinicians to obtain platelet counts and the choice of utilizing a manual or automated method is unlikely to interfere with evaluation of the final PRP product.(AU)

Este estudo comparou dois protocolos de preparo de plasma rico em plaquetas (PRP) e avaliou a associação entre dois métodos de contagem plaquetária - um manual e o outro automático através de um estudo prospectivo. Sangue venoso de oito equinos da raça Quarto de Milha foi coletado e em seguida foi centrifugado duas vezes utilizando-se dois protocolos distintos: um com descanso antes da primeira centrifugação e outro após a segunda centrifugação. A contagem plaquetária ao início, no meio e ao final dos protocolos foi realizada manualmente e pelo método automatizado, seguida de comparação entre os dois métodos. Para investigar a degranulação plaquetária ocorrida durante o preparo do PRP, o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) foi mensurado em cada estágio dos protocolos. O método utilizando o descanso da amostra antes da primeira centrifugação proporcionou a obtenção de um PRP mais concentrado, além de o estudo verificar que ambos os métodos de contagem plaquetária (manual e automatizado) são comparáveis e podem ser usados indiferentemente. A concentração de VEGF não foi significativamente diferente entre os estágios de preparo do PRP. Os resultados indicam que o método de preparo afeta a quantidade de plaquetas obtidas no PRP, apesar da degranulação plaquetária não ter sido observada, como evidenciado pela concentração estável de VEGF. Uma maior concentração de plaquetas no PRP é desejável, pois indica que um maior número de α-grânulos estará presente na amostra, portanto, conclui-se que o Protocolo II é mais recomendável. Tanto o método manual, quanto o automatizado, pode ser usado de maneira confiável para a contagem plaquetária, não interferindo com a avaliação do produto final (PRP).(AU)

Protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) in Quarter Horses / Protocolos para o preparo de plasma rico em plaquetas (PRP) em cavalos Quarto de Milha

This study compared two protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) and evaluated the association between manual and automated methods for platelet count using a prospective study design. Eight clinically healthy Quarter Horses had venous blood samples collected at rest. After collection, blood samples were centrifuged twice, using two different protocols including a period of sample resting, either at the start or at the end of the protocol. Platelet counting at the start of the protocol, during, and after obtaining PRP was conducted manually or with an automated counter, followed by comparison of the two methods. In order to investigate platelet degranulation during the protocol, vascular endothelial growth factor (VEGF) was measured at each preparation stage. The protocol with sample resting before centrifugation yielded a more concentrated PRP, and the study verified that both manual and automated methods are comparable and can be used interchangeably for platelet counting. VEGF concentration did not differ significantly between protocols, or among protocol stages. The results indicate that choice of protocol for PRP preparation will affect the quantity of platelets in the final product, although platelet degranulation was not observed as evidenced by the stable VEGF concentrations measured. A larger yield of non-degranulated platelets in PRP is desirable since more α-granules will be present, therefore Protocol II is recommended. Both manual and automated counts reliably allow clinicians to obtain platelet counts and the choice of utilizing a manual or automated method is unlikely to interfere with evaluation of the final PRP product.(AU)

Este estudo comparou dois protocolos de preparo de plasma rico em plaquetas (PRP) e avaliou a associação entre dois métodos de contagem plaquetária - um manual e o outro automático através de um estudo prospectivo. Sangue venoso de oito equinos da raça Quarto de Milha foi coletado e em seguida foi centrifugado duas vezes utilizando-se dois protocolos distintos: um com descanso antes da primeira centrifugação e outro após a segunda centrifugação. A contagem plaquetária ao início, no meio e ao final dos protocolos foi realizada manualmente e pelo método automatizado, seguida de comparação entre os dois métodos. Para investigar a degranulação plaquetária ocorrida durante o preparo do PRP, o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) foi mensurado em cada estágio dos protocolos. O método utilizando o descanso da amostra antes da primeira centrifugação proporcionou a obtenção de um PRP mais concentrado, além de o estudo verificar que ambos os métodos de contagem plaquetária (manual e automatizado) são comparáveis e podem ser usados indiferentemente. A concentração de VEGF não foi significativamente diferente entre os estágios de preparo do PRP. Os resultados indicam que o método de preparo afeta a quantidade de plaquetas obtidas no PRP, apesar da degranulação plaquetária não ter sido observada, como evidenciado pela concentração estável de VEGF. Uma maior concentração de plaquetas no PRP é desejável, pois indica que um maior número de α-grânulos estará presente na amostra, portanto, conclui-se que o Protocolo II é mais recomendável. Tanto o método manual, quanto o automatizado, pode ser usado de maneira confiável para a contagem plaquetária, não interferindo com a avaliação do produto final (PRP).(AU)

Protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) in Quarter Horses

ABSTRACT: This study compared two protocols for preparation of platelet rich plasma (PRP) and evaluated the association between manual and automated methods for platelet count using a prospective study design. Eight clinically healthy Quarter Horses had venous blood samples collected at rest. After collection, blood samples were centrifuged twice, using two different protocols including a period of sample resting, either at the start or at the end of the protocol. Platelet counting at the start of the protocol, during, and after obtaining PRP was conducted manually or with an automated counter, followed by comparison of the two methods. In order to investigate platelet degranulation during the protocol, vascular endothelial growth factor (VEGF) was measured at each preparation stage. The protocol with sample resting before centrifugation yielded a more concentrated PRP, and the study verified that both manual and automated methods are comparable and can be used interchangeably for platelet counting. VEGF concentration did not differ significantly between protocols, or among protocol stages. The results indicate that choice of protocol for PRP preparation will affect the quantity of platelets in the final product, although platelet degranulation was not observed as evidenced by the stable VEGF concentrations measured. A larger yield of non-degranulated platelets in PRP is desirable since more -granules will be present, therefore Protocol II is recommended. Both manual and automated counts reliably allow clinicians to obtain platelet counts and the choice of utilizing a manual or automated method is unlikely to interfere with evaluation of the final PRP product.

RESUMO: Este estudo comparou dois protocolos de preparo de plasma rico em plaquetas (PRP) e avaliou a associação entre dois métodos de contagem plaquetária - um manual e o outro automático através de um estudo prospectivo. Sangue venoso de oito equinos da raça Quarto de Milha foi coletado e em seguida foi centrifugado duas vezes utilizando-se dois protocolos distintos: um com descanso antes da primeira centrifugação e outro após a segunda centrifugação. A contagem plaquetária ao início, no meio e ao final dos protocolos foi realizada manualmente e pelo método automatizado, seguida de comparação entre os dois métodos. Para investigar a degranulação plaquetária ocorrida durante o preparo do PRP, o fator de crescimento vascular endotelial (VEGF) foi mensurado em cada estágio dos protocolos. O método utilizando o descanso da amostra antes da primeira centrifugação proporcionou a obtenção de um PRP mais concentrado, além de o estudo verificar que ambos os métodos de contagem plaquetária (manual e automatizado) são comparáveis e podem ser usados indiferentemente. A concentração de VEGF não foi significativamente diferente entre os estágios de preparo do PRP. Os resultados indicam que o método de preparo afeta a quantidade de plaquetas obtidas no PRP, apesar da degranulação plaquetária não ter sido observada, como evidenciado pela concentração estável de VEGF. Uma maior concentração de plaquetas no PRP é desejável, pois indica que um maior número de -grânulos estará presente na amostra, portanto, conclui-se que o Protocolo II é mais recomendável. Tanto o método manual, quanto o automatizado, pode ser usado de maneira confiável para a contagem plaquetária, não interferindo com a avaliação do produto final (PRP).

Avaliação das fibras colágenas de feridas dérmicas de coelhos tratadas com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas / Evaluation of collagen in dermal wounds of rabbits treated with different sources of platelet-rich plasma

Para comparar a regeneração tecidual de feridas dérmicas em coelhos tratados e não tratados, de forma seriada, com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas (PRP) gel, biópsias dérmicas foram feitas na região dorsal, com auxílio de um punch de 8mm, em que o lado direito foi tratado com NaCl 0,9%® e o lado esquerdo recebeu aplicação de diferentes fontes de PRPs (autóloga, heteróloga e homóloga), nos dias zero, três, sete, 10, 14, tendo sido acompanhadas durante 17 dias. Ao final do 17º dia, foi realizada avaliação histopatológica das feridas. Do total de 24 animais, seis coelhos (três machos e três fêmeas) foram utilizados somente como doadores para obtenção do PRP homólogo gel. Um cão adulto, saudável, foi utilizado como doador durante o experimento para o preparo do PRP gel do grupo heterólogo. As médias das fibras dos grupos autólogo e homólogo foram muito semelhantes (75,0±13,7 e 73,1±10,2, respectivamente), quando comparadas às médias obtidas no grupo controle (71,5±10,8). Já as fibras colágenas do grupo heterólogo foram inferiores (P<0,05) às dos demais grupos (59,4±11,3). Conclui-se que a fonte heteróloga produz fibras colágenas menos organizadas e menos homogêneas, sendo o último recurso a ser utilizado para promover uma cicatrização de boa qualidade.(AU)

In order to compare the tissue regeneration of dermal wounds in treated and untreated rabbits serially with different sources of platelet rich plasma (PRP) gel, dermal biopsies were made in the dorsal region with the aid of an 8mm punch. The right side was treated with 0.9% NaCl and, on the left side, the different sources of PRPs (autologous, heterologous and homologous) on days 0, 3, 7, 10, 14 were applied and monitored for 17 days. At the end of the 17th day, histopathological evaluation of the wounds was performed. From the total of 24 animals, six rabbits (3 males and 3 females) were used only as donors to obtain the homologous PRP gel. A healthy, adult dog was used as a donor during the experiment to prepare the PRP gel from the heterologous group. The mean values of the fibers of the autologous and homologous groups were very similar (75.0±13.7 and 73.1±10.2, respectively), when compared to the means obtained in the control group (71.5±10.8). The collagen fibers of the heterologous group were inferior (P<0.05) to the other groups (59.4±11.3). It is concluded that the heterologous source produces less organized and homogeneous collagen fibers and should be the last resource to be used in order to promote good quality healing.(AU)

Avaliação das fibras colágenas de feridas dérmicas de coelhos tratadas com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas / Evaluation of collagen in dermal wounds of rabbits treated with different sources of platelet-rich plasma

Para comparar a regeneração tecidual de feridas dérmicas em coelhos tratados e não tratados, de forma seriada, com diferentes fontes de plasma rico em plaquetas (PRP) gel, biópsias dérmicas foram feitas na região dorsal, com auxílio de um punch de 8mm, em que o lado direito foi tratado com NaCl 0,9%® e o lado esquerdo recebeu aplicação de diferentes fontes de PRPs (autóloga, heteróloga e homóloga), nos dias zero, três, sete, 10, 14, tendo sido acompanhadas durante 17 dias. Ao final do 17º dia, foi realizada avaliação histopatológica das feridas. Do total de 24 animais, seis coelhos (três machos e três fêmeas) foram utilizados somente como doadores para obtenção do PRP homólogo gel. Um cão adulto, saudável, foi utilizado como doador durante o experimento para o preparo do PRP gel do grupo heterólogo. As médias das fibras dos grupos autólogo e homólogo foram muito semelhantes (75,0±13,7 e 73,1±10,2, respectivamente), quando comparadas às médias obtidas no grupo controle (71,5±10,8). Já as fibras colágenas do grupo heterólogo foram inferiores (P<0,05) às dos demais grupos (59,4±11,3). Conclui-se que a fonte heteróloga produz fibras colágenas menos organizadas e menos homogêneas, sendo o último recurso a ser utilizado para promover uma cicatrização de boa qualidade.(AU)

In order to compare the tissue regeneration of dermal wounds in treated and untreated rabbits serially with different sources of platelet rich plasma (PRP) gel, dermal biopsies were made in the dorsal region with the aid of an 8mm punch. The right side was treated with 0.9% NaCl and, on the left side, the different sources of PRPs (autologous, heterologous and homologous) on days 0, 3, 7, 10, 14 were applied and monitored for 17 days. At the end of the 17th day, histopathological evaluation of the wounds was performed. From the total of 24 animals, six rabbits (3 males and 3 females) were used only as donors to obtain the homologous PRP gel. A healthy, adult dog was used as a donor during the experiment to prepare the PRP gel from the heterologous group. The mean values of the fibers of the autologous and homologous groups were very similar (75.0±13.7 and 73.1±10.2, respectively), when compared to the means obtained in the control group (71.5±10.8). The collagen fibers of the heterologous group were inferior (P<0.05) to the other groups (59.4±11.3). It is concluded that the heterologous source produces less organized and homogeneous collagen fibers and should be the last resource to be used in order to promote good quality healing.(AU)