Oogênese e Foliculogênese em Bovinos / Oogenesis and Folliculogenesis in Cattle

Os ovários desempenham papéis relevantes para o sistema reprodutivo, no qual a função exócrina (ou gametogênica) realiza a maturação e liberação do oócito para a fecundação e a função endócrina (ou esteroidogênica) afeta a síntese, secreção de hormônios e fatores de crescimento. Além disso, existe uma interação entre os fatores endócrinos, autócrinos e parácrinos, atuando em associação com o processo de desenvolvimento folicular e oocitário durante a vida reprodutiva da fêmea. O córtex, porção mais externa do ovário, representa a região funcional onde se localizam os folículos ovarianos e as estruturas lúteas, em diferentes estágios de desenvolvimento e/ou atresia. A região medular localiza-se mais internamente, na maioria das espécies, e sua principal função é nutrir e sustentar o ovário. Apesar da numerosa população folicular presente nos ovários, estabelecida durante a vida fetal, quase todos os folículos encontrados no pool de reserva ovariana, ou seja, 99,9%, não atingem a ovulação. Esses folículos passam por um processo de morte celular conhecido como atresia folicular, tornando o ovário um órgão de baixa produtividade. A elucidação dos mecanismos que regulam a foliculogênese, incluindo o processo de atresia, é importante para o melhor aproveitamento dos folículos na melhoria da eficiência reprodutiva de animais de produção.

The ovaries play roles relevant to the reproductive system, in which the exocrine (or gametogenic) function carries out the maturation and release of the oocyte for fertilization and the endocrine (or steroidogenic) function effects the synthesis and secretion of hormones and growth factors. In addition, there is an interaction between endocrine, autocrine and paracrine factors, acting in association with the follicular and oocyte development process during the female's reproductive life. The cortex, the outermost portion of the ovary, represents the functional region where the ovarian follicles and luteal structures are located, at different stages of development and/or atresia. The medullary region is located more internally, in most species, and its main function is to nourish and support the ovary. Despite the numerous follicular population present in the ovaries, established during fetal life, almost all follicles found in the ovarian reserve pool, i.e., 99.9%, do not reach ovulation. These follicles undergo a process of cell death known as follicular atresia, making the ovary a low-productivity organ. The elucidation of the mechanisms that regulate folliculogenesis, including the atresia process, is important for the better use of follicles in improving the reproductive efficiency of production animals.

Powdered coconut water (ACP 406®) as an alternative base culture medium for in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue

This study evaluated a powdered coconut water solution (ACP 406®) as a base culture medium on the in vitro survival and development of in situ goat preantral follicles. The ovarian fragments were either immediately fixed in Carnoy solution (non-cultured control) or individually cultured for 2 or 6 days. The following culture media (all containing 100 μg/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin) were evaluated: α-MEM (α-MEM alone, without additional supplementation); α-MEM+ (supplemented α-MEM); ACP (ACP®406 alone); or ACP+ (supplemented ACP®406). Additional supplementation includes: 1.25 mg/mL bovine serum albumin, 10 μg/mL insulin, 5.5 μg/mL transferrin, 5 ng/mL selenium, 2 mM glutamine, and 2 mM hypoxanthine. The endpoints (i) follicular morphology; (ii) development; (iii) estradiol production; and (iv) reactive oxygen species (ROS) were recorded. Data were analyzed using chi-square, Turkey, t-test or One-Way ANOVA. Differences were considered significant when P < 0.05. At day 2 of culture, a greater (P < 0.05) percentage of morphologically normal follicles was observed between ACP+ and ACP treatments. Moreover, at day 2 of culture, no hormonal difference (P < 0.05) was observed between ACP+ and both α-MEM treatments. At day 6 of culture when ACP and α-MEM treatments were compared the percentage of healthy follicles were similar (P > 0.05) among treatments. Overall, all treatments had lower primordial follicles (P < 0.05) accompany by greater developing follicles (P < 0.05) percentages than non-cultured control treatment, indicating primordial follicle activation. However, at day 6 of culture, the percentage of primordial follicle development were similar (P > 0.05) among the treatments. Likewise, no differences (P > 0.05) were observed for ROS production and follicular and oocyte diameters among treatments. Therefore, ACP+ has the equivalent efficiency to MEM+ in maintaining the survival and development of goat preantral follicles, representing an alternative plant-based low-cost culture medium for in vitro culture.(AU)

Powdered coconut water (ACP 406®) as an alternative base culture medium for in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue

This study evaluated a powdered coconut water solution (ACP 406®) as a base culture medium on the in vitro survival and development of in situ goat preantral follicles. The ovarian fragments were either immediately fixed in Carnoy solution (non-cultured control) or individually cultured for 2 or 6 days. The following culture media (all containing 100 μg/mL penicillin and 100 μg/mL streptomycin) were evaluated: α-MEM (α-MEM alone, without additional supplementation); α-MEM+ (supplemented α-MEM); ACP (ACP®406 alone); or ACP+ (supplemented ACP®406). Additional supplementation includes: 1.25 mg/mL bovine serum albumin, 10 μg/mL insulin, 5.5 μg/mL transferrin, 5 ng/mL selenium, 2 mM glutamine, and 2 mM hypoxanthine. The endpoints (i) follicular morphology; (ii) development; (iii) estradiol production; and (iv) reactive oxygen species (ROS) were recorded. Data were analyzed using chi-square, Turkey, t-test or One-Way ANOVA. Differences were considered significant when P 0.05) among treatments. Overall, all treatments had lower primordial follicles (P 0.05) among the treatments. Likewise, no differences (P > 0.05) were observed for ROS production and follicular and oocyte diameters among treatments. Therefore, ACP+ has the equivalent efficiency to MEM+ in maintaining the survival and development of goat preantral follicles, representing an alternative plant-based low-cost culture medium for in vitro culture.

Effect of somatotropin on survival and diameter of bovine preantral follicles / Efeito da somatotropina na sobrevivência e no diâmetro de folículos pré-antrais de bovinos

The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)

Effect of somatotropin on survival and diameter of bovine preantral follicles / Efeito da somatotropina na sobrevivência e no diâmetro de folículos pré-antrais de bovinos

The aim of this study was to evaluate the effect of Recombinant bovine somatotropin (rbST) on survival and diameter of bovine preantral ovarian follicles (PAOF) cultured in vitro. Ovaries were collected from adult cows and fragments of ovarian cortex were immediately fixed (non-cultured control) or cultured in vitro in α-MEM+ alone or containing 10, 50, 100 or 1,000ng/mL rbST. The fragments were processed for Classical Histology and Transmission Electron Microscopy. After one and seven days of culture, the percentage of normal follicles in the non-cultured control was superior (P< 0.05) to the follicles cultured in α-MEM+ alone or with different rbST concentrations. The oocyte and follicular mean diameter did not increase during the culture for one and seven days, both in media containing rbST and in the medium without this hormone. The only medium in which there was no reduction in follicular diameter with the time of culture was the medium without rbST. Ultrastructural damage in PAOF cultured in vitro was found. It is concluded that the use of rbST at different concentrations in in situ culture of bovine preantral follicles has no beneficial effects on survival and growth of bovine PAOF.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da somatotropina recombinante bovina (rbST) sobre a sobrevivência e o diâmetro de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) bovinos cultivados in vitro. Ovários foram coletados de vacas adultas e fragmentos do córtex ovariano foram imediatamente fixados (controle não cultivado) ou cultivados in vitro em α-MEM + sozinho ou contendo 10, 50, 100 ou 1.000ng/mL de rbST. Os fragmentos foram processados para histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Após um e sete dias de cultivo, o percentual de folículos normais no controle não cultivado foi superior (P<0,05) aos cultivados em α-MEM + sozinho ou acrescido de diferentes concentrações de rbST. Os diâmetros médios oocitário e folicular não aumentaram durante o cultivo por um e sete dias, tanto nos meios contendo rbST, como no meio sem esse hormônio (α-MEM + ). O único meio em que não houve redução no diâmetro folicular com o tempo de cultivo foi o sem rbST. Verificaram-se ainda danos ultraestruturais em FOPA cultivados in vitro. Conclui-se que o uso de rbST em diferentes concentrações no cultivo in situ de folículos pré-antrais bovinos não tem efeitos benéficos na sobrevivência e no crescimento de FOPA bovinos.(AU)

Adaptação da tecnologia do ovário artificial para os animais silvestres / Adaptation of the artificial ovary technology for wild animals

A biodiversidade mundial tem sido consideravelmente reduzida nos últimos anos, principalmente devido as modificações antrópicas nos habitats. Como consequência, tem-se observado um rápido e contínuo declínio das espécies mamíferas silvestres. Nesse contexto, a biotécnica “Ovário Artificial”, surge como uma ferramenta para a conservação da biodiversidade, pois tem como objetivo a manipulação in vitro de oócitos inclusos em folículos préantrais visando o seu crescimento e maturação, além da preservação de oócitos por meio do resfriamento e/ou criopreservação, permitindo o fornecimento de milhares de oócitos, que poderão ser utilizados posteriormente. Este artigo de revisão descreve os aspectos gerais, importância e avanços do ovário artificial em animais silvestres.(AU)

The world biodiversity has declined in recent years, mainly due to anthropogenic changes in habitats. As consequence, a rapid and steady decline in wild mammalian species is observed. In this context, the "Artificial Ovary" biotechnology emerges as a tool for the biodiversity conservation, since its objective is the in vitro manipulation of oocytes enclosed in preantral follicles, aiming their growth and maturation, as well as their preservation by cooling and / or cryopreservation, allowing the supply of thousands of oocytes, which can be further used. This review describes the general aspects, importance and advances of the artificial ovary in wild animals.(AU)

Adaptação da tecnologia do ovário artificial para os animais silvestres / Adaptation of the artificial ovary technology for wild animals

A biodiversidade mundial tem sido consideravelmente reduzida nos últimos anos, principalmente devido as modificações antrópicas nos habitats. Como consequência, tem-se observado um rápido e contínuo declínio das espécies mamíferas silvestres. Nesse contexto, a biotécnica “Ovário Artificial”, surge como uma ferramenta para a conservação da biodiversidade, pois tem como objetivo a manipulação in vitro de oócitos inclusos em folículos préantrais visando o seu crescimento e maturação, além da preservação de oócitos por meio do resfriamento e/ou criopreservação, permitindo o fornecimento de milhares de oócitos, que poderão ser utilizados posteriormente. Este artigo de revisão descreve os aspectos gerais, importância e avanços do ovário artificial em animais silvestres.

The world biodiversity has declined in recent years, mainly due to anthropogenic changes in habitats. As consequence, a rapid and steady decline in wild mammalian species is observed. In this context, the "Artificial Ovary" biotechnology emerges as a tool for the biodiversity conservation, since its objective is the in vitro manipulation of oocytes enclosed in preantral follicles, aiming their growth and maturation, as well as their preservation by cooling and / or cryopreservation, allowing the supply of thousands of oocytes, which can be further used. This review describes the general aspects, importance and advances of the artificial ovary in wild animals.

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina) / Morfometria, estimativa e ultraestrutura da população folicular ovariana preantral de cutia (Dasyprocta leporina)

The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40µm, 12.28±2.37µm and 6.10±0.93µm for primordial, 23.75±5.70µm, 14.22±3.00µm and 6.70±1.24µm for primary and 88.55±17.61µm, 52.85±17.56µm and 22.33±17.61µm for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40µm, 12,28±2.37µm e 6,10±0,93µm para primordial, 23,75±5,70µm, 14,22±3,00µm e 6,70±1,24µm para primário e 88,55±17,61µm, 52,85±17,56µm e 22,33±17,61µm de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.(AU)

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina) / Morfometria, estimativa e ultraestrutura da população folicular ovariana preantral de cutia (Dasyprocta leporina)

The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40µm, 12.28±2.37µm and 6.10±0.93µm for primordial, 23.75±5.70µm, 14.22±3.00µm and 6.70±1.24µm for primary and 88.55±17.61µm, 52.85±17.56µm and 22.33±17.61µm for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.(AU)

O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40µm, 12,28±2.37µm e 6,10±0,93µm para primordial, 23,75±5,70µm, 14,22±3,00µm e 6,70±1,24µm para primário e 88,55±17,61µm, 52,85±17,56µm e 22,33±17,61µm de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.(AU)

Estimation, morphometry and ultrastructure of ovarian preantral follicle population in agouti (Dasyprocta leporina)

ABSTRACT: The aim of this study was to characterize the preantral ovarian follicular population in agoutis (D. leporina) by estimating the number of follicles at each developmental category, and also describe the morphometry and the specific features of the follicle and the oocyte by using light and transmission electron microscopy. The length of each ovary was measured using a caliper rule, longitudinally sectioned into two halves and both were immediately fixed to perform the estimation of follicular population and ultrastructural analysis. The mean (±S.E.M.) population of follicular per pair of ovary was estimated at 4419.8±532.26 and 5397.52±574.91 for right and left ovaries, respectively, but no differences were observed between them. The diameters for follicles, oocyte and nuclei were: 18.62±3.40m, 12.28±2.37m and 6.10±0.93m for primordial, 23.75±5.70m, 14.22±3.00m and 6.70±1.24m for primary and 88.55±17.61m, 52.85±17.56m and 22.33±17.61m for secondary follicles, respectively. The most of the follicles found belonged to the primordial category (86.63%), followed by primary (13.01%) and secondary (0.35%) one. Additionally, polyovular follicles were observed in all the animals and they represented 7.51% of the total follicles counted. The ultrastructural analysis showed that the oocyte presented a central and regular nuclei, displaying a homogenous mass. Among the organelles, the mitochondria were the most abundant and the oocyte Golgi apparatus was rarely observed. In conclusion, this work shows for the first time the characterization of the population of preantral follicles in the ovary of Dasyprocta leporina. Those information will be useful for further development and adaptation of biotechniques such as germplasm cryopreservation and in vitro gametes manipulation.

RESUMO: O objetivo deste trabalho foi caracterizar a população folicular ovariana pré-antral em cutias (D. leporina) estimando o número de folículos em cada categoria de desenvolvimento, e também descrever a morfometria e as características específicas do folículo e oócito usando microscopia de luz e eletrônica de transmissão. O comprimento de cada ovário foi medido utilizando um paquímetro, seccionados longitudinalmente em duas metades e ambos foram imediatamente fixados para realizar a estimativa da população folicular e análise ultraestrutural. A média (±S.E.M.) da população folicular por par de ovário foi estimada em 4419,8±532,26 e 5397,52±574,91 nos ovários direito e esquerdo, respectivamente, mas não foram observadas diferenças entre eles. Os diâmetros dos folículos, oócito e núcleos, respectivamente, foram: 18,62±3,40m, 12,28±2.37m e 6,10±0,93m para primordial, 23,75±5,70m, 14,22±3,00m e 6,70±1,24m para primário e 88,55±17,61m, 52,85±17,56m e 22,33±17,61m de folículos secundários. A maioria dos folículos encontrados pertencia à categoria primordial (86,63%), seguido pelo primário (13,01%) e um secundário (0,35%). Adicionalmente, os folículos poliovulares foram observados em todos os animais e representavam 7,51% do total de folículos contados. A análise ultra-estrutural mostrou que o oócito apresentou núcleos centrais e regulares, exibindo uma massa homogênea. Dentre as organelas, as mitocôndrias foram as mais abundantes e o aparelho de Golgi do oócito foi raramente observado. Em conclusão, este trabalho mostra pela primeira vez a caracterização da população de folículos pré-antrais do ovário da Dasyprocta leporina. Essas informações serão úteis para o desenvolvimento e adaptação de biotécnicas, como a criopreservação de germoplasma e manipulação de gametas in vitro.

Interval in the replacement of in vitro culture medium affects the integrity and development of equine preantral follicles / Intervalo na substituição do meio de cultivo in vitro afeta a integridade e o desenvolvimento de folículos pré-antrais equinos

The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher's test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.(AU)

A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados ​​usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.(AU)

Interval in the replacement of in vitro culture medium affects the integrity and development of equine preantral follicles / Intervalo na substituição do meio de cultivo in vitro afeta a integridade e o desenvolvimento de folículos pré-antrais equinos

The efficiency of a culture system is related to the elaboration and replacement of a medium with conditions suitable for follicular development. Recent investigations suggested that in vitro culture medium should be replaced after specific time periods in various species. However, the suitable interval for the exchange of in vitro culture medium has not yet been established in equine species. The objective of this investigation was to evaluate the effect of medium exchange intervals of 24 hours (T24) or 48 hours (T48) for in vitro culture of preantral follicles at 2 or 6 days. At the end of the culture period, the fragments were processed using classical histology. Equine preantral follicles were classified according to morphological integrity and developmental stage. Data analysis was performed using Fisher's test with a significance level of p<0.05. Out of a total of 399 follicles evaluated, 174 (43.6%) were primordial follicles, 225 (56.4%) were in development, and 63.76% were morphologically intact. In the in vitro culture performed over two days, there was no significant difference in relation to follicular integrity after medium replacement (p>0.05). Compared to the medium replacement at six days of culture, there was a statistically significant difference for T24 (68.9%, p<0.05). Therefore, we suggest changing the medium for equine species at 48 hours after the start of culture followed by subsequent daily replacements.(AU)

A eficiência de um sistema de cultivo está relacionada à elaboração e substituição do meio de cultivo com condições adequadas ao desenvolvimento folicular. Pesquisas recentes sugerem que o meio de cultivo in vitro deve ser substituído após períodos de tempo específicos para várias espécies. No entanto, o intervalo adequado para a troca de meio de cultivo in vitro ainda não foi estabelecido na espécie equina. O objetivo desta investigação foi avaliar o efeito de intervalos de troca média de 24 horas (T24) ou 48 horas (T48) para cultivo de folículos pré-antrais aos 2 ou 6 dias. No final do período de cultivo, os fragmentos foram processados ​​usando histologia clássica. Os folículos pré-antrais equinos foram classificados de acordo com a integridade morfológica e o estágio de desenvolvimento. A análise dos dados foi realizada utilizando o teste de Fisher com um nível de significância de p<0,05. De um total de 399 folículos avaliados, 174 (43,6%) foram folículos primordiais, 225 (56,4%) estavam em desenvolvimento e 63,76% estavam morfologicamente intactos. No cultivo in vitro realizado ao longo de dois dias, não houve diferença significativa em relação à integridade folicular após a substituição do meio (p>0,05). Comparado com a substituição média aos seis dias de cultivo, houve diferença estatisticamente significativa para T24 (68,9%, p<0,05). Portanto, sugerimos alterar o meio para as espécies equinas às 48 horas após o início da cultura, seguindo as subsequentes substituições diárias.(AU)

Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) improves follicular survival, oocyte and follicular diameters, in a dose-dependent manner, after the in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue fragments

The aims of this study were to investigate the effects of different concentrations of Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) on the survival, activation, levels of ROS, and growth of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in Alpha Minimum Essential Medium (α-MEM+ ) with or without PDGF-BB (0, 25, 50 and 100 ng/ml). The results showed that both the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments maintained the percentage of morphologically normal follicles from day 1 to day 7. In addition, the 25 ng/ml PDGF treatment showed a significantly higher percentage of morphologically normal follicles when compared to the other treatments. At day 7, greater (P < 0.05) follicular and oocyte diameters were observed in the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments when compared to the cultured control treatment. On day 7 of culture, all the treatments tested had a significant increase in the percentage of developing follicles when compared to the non-cultured control. However, the percentage of follicle activation, as well as ROS production, were similar (P < 0.05) among the treatments, irrespective of culture time. In conclusion, PDGF-BB improved, in a concentration-dependent manner, follicular survival as well as oocyte and follicular diameter after in vitro culture of goat preantral follicle-enclosed in ovarian tissue fragments.

Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) improves follicular survival, oocyte and follicular diameters, in a dose-dependent manner, after the in vitro culture of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue fragments

The aims of this study were to investigate the effects of different concentrations of Platelet-derived growth factor-BB (PDGF-BB) on the survival, activation, levels of ROS, and growth of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue. For this, ovarian fragments were cultured for 7 days in Alpha Minimum Essential Medium (α-MEM+ ) with or without PDGF-BB (0, 25, 50 and 100 ng/ml). The results showed that both the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments maintained the percentage of morphologically normal follicles from day 1 to day 7. In addition, the 25 ng/ml PDGF treatment showed a significantly higher percentage of morphologically normal follicles when compared to the other treatments. At day 7, greater (P < 0.05) follicular and oocyte diameters were observed in the 25 ng/ml PDGF and the 50 ng/ml PDGF treatments when compared to the cultured control treatment. On day 7 of culture, all the treatments tested had a significant increase in the percentage of developing follicles when compared to the non-cultured control. However, the percentage of follicle activation, as well as ROS production, were similar (P < 0.05) among the treatments, irrespective of culture time. In conclusion, PDGF-BB improved, in a concentration-dependent manner, follicular survival as well as oocyte and follicular diameter after in vitro culture of goat preantral follicle-enclosed in ovarian tissue fragments.(AU)

Tecnologia do ovário artificial: aplicações, estado da arte, limitações e perspectivas / Artificial ovary technology: applications, state of art, limitations and prospects

O ovário dos mamíferos contem de milhares a milhões de oócitos imaturos, sendo a maioria (cerca de90%) inclusa nos folículos pré-antrais. Entretanto, in vivo a quase totalidade destes folículos será eliminada porum processo fisiológico denominado de atresia. Portanto, os principais objetivos da tecnologia do ovárioartificial são: 1- Resgatar os folículos pré-antrais dos ovários antes que eles se tornem atrésicos e 2- cultivar invitro estes folículos até a maturação, com o propósito de produzir oócitos aptos a serem utilizados para aprodução in vitro de embriões. Este artigo de revisão descreve as aplicações e estado da arte da tecnologia doovário artificial, bem como discute os principais resultados, limitações e perspectivas do cultivo in vitro defolículos pré-antrais, com ênfase nos pequenos ruminantes.(AU)

The mammalian ovary contains from thousands to millions of immature oocytes being most of them(approximately 90%) enclosed in preantral follicles. However, in vivo the vast majority of follicles will beeliminated by a physiological process named atresia. Therefore, the main goals of the artificial ovary technologyare: 1- to recover preantral follicles from the ovary before they become atretic and 2- in vitro culture thosefollicles up to maturation stages for the purpose of producing oocytes to be used for further in vitro embryoproduction. This review article describes the applications and state of art of the artificial ovary technology aswell as discusses the main results, limitations and prospects of in vitro follicle culture focus on small ruminants.(AU)

Tecnologia do ovário artificial: aplicações, estado da arte, limitações e perspectivas / Artificial ovary technology: applications, state of art, limitations and prospects

O ovário dos mamíferos contem de milhares a milhões de oócitos imaturos, sendo a maioria (cerca de90%) inclusa nos folículos pré-antrais. Entretanto, in vivo a quase totalidade destes folículos será eliminada porum processo fisiológico denominado de atresia. Portanto, os principais objetivos da tecnologia do ovárioartificial são: 1- Resgatar os folículos pré-antrais dos ovários antes que eles se tornem atrésicos e 2- cultivar invitro estes folículos até a maturação, com o propósito de produzir oócitos aptos a serem utilizados para aprodução in vitro de embriões. Este artigo de revisão descreve as aplicações e estado da arte da tecnologia doovário artificial, bem como discute os principais resultados, limitações e perspectivas do cultivo in vitro defolículos pré-antrais, com ênfase nos pequenos ruminantes.

The mammalian ovary contains from thousands to millions of immature oocytes being most of them(approximately 90%) enclosed in preantral follicles. However, in vivo the vast majority of follicles will beeliminated by a physiological process named atresia. Therefore, the main goals of the artificial ovary technologyare: 1- to recover preantral follicles from the ovary before they become atretic and 2- in vitro culture thosefollicles up to maturation stages for the purpose of producing oocytes to be used for further in vitro embryoproduction. This review article describes the applications and state of art of the artificial ovary technology aswell as discusses the main results, limitations and prospects of in vitro follicle culture focus on small ruminants.

VITRIFICAÇÃO E CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS SECUNDÁRIOS DE OVELHAS: ESTUDO TRANSLACIONAL E UMA ALTERNATIVA PARA A PRESERVAÇÃO DA FUNÇÃO REPRODUTIVA

A vitrificação de folículos secundários isolados pode ser uma opção eficiente para a preservação da fertilidade de mulheres tratadas e curadas de certos tipos de câncer que oferecem o risco de reintrodução de células malignas após o transplante de tecido ovariano. O objetivo dessa dissertação foi avaliar a morfologia, viabilidade e desenvolvimento folicular (crescimento e formação de antro), bem como investigar as proteínas relacionadas com a função esteroidogênica (aromatase) e com o remodelamento da membrana basal [metaloproteinases 2 (MMP-2) e 9 (MMP-9)] em folículos secundários após vitrificação e cultivo in vitro (CIV). Para isso, o córtex ovariano foi fragmentado e folículos secundários foram mecanicamente isolados. Imediatamente após o isolamento, parte dos folículos frescos foram fixados em paraformaldeído a 4% e destinados à imunomarcação para a aromatase e às MMPs-2 e 9. Os demais folículos foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos: folículos secundários frescos (FSF) e folículos secundários vitrificados (VSF), ambos seguido do CIV por 6 ou 12 dias. Ao final do D6 e D12 de cultivo os FSF e VSF foram submetidos às análises de morfologia, viabilidade (azul de trypan), formação de antro, diâmetro folicular e oocitário. Além disso, a aromatase e as metaloproteinases também foram investigadas nos dois grupos de folículos (FSF e VSF). Nossos resultados mostraram que a vitrificação reduziu significativamente o percentual de folículos intactos após CIV, comparado aos FSF. O diâmetro folicular e oocitário dos VSF foi inferior (P < 0,05) ao dos FSF em ambos os dias de CIV. Os VSF apresentaram redução da viabilidade entre os dias 6 e 12 de cultivo, no entanto não foram observadas diferenças significativas em comparação aos FSF em ambos os dias. A formação de antro nos VSF foi inferior (P < 0,05) à dos FSF, no entanto, foi observado um aumento desse percentual de 6 para 12 dias em ambos os grupos de folículos. Além disso, os resultados mostraram que nos dias 6 e 12 a imunomarcação para a aromatase nas células da granulosa (GC) dos FSF foi forte e moderada, respectivamente, enquanto que nos VSF foi, respectivamente, moderada e forte. Quanto às MMPs, foi observada marcação moderada para as MMP-2 e MMP-9 nas GC dos FSF e VSF em ambos os dias de cultivo, exceto nos FSF no D6, que apresentaram marcação forte para MMP-9. Em conclusão, folículos secundários vitrificados são capazes de crescer e se desenvolver durante 12 dias de cultivo in vitro. Os folículos também mostraram evidências da sua capacidade esteroidogênica e de remodelamento da membrana basal, as quais são importantes para o desenvolvimento folicular.

The vitrification of secondary follicles can be an efficient option for preserving the fertility of women treated and cured of certain types of cancer that offer the risk of reintroduction of malignant cells after the transplantation of ovarian tissue. The objective of this dissertation was to evaluate the morphology, viability, and follicular development (growth and formation of antrum), as well as to investigate how proteins related to the steroidogenic function (aromatase) and the remodeling of the basement membrane [metalloproteinases 2 (MMP-2) and 9 (MMP-9)] in secondary follicles after vitrification and in vitro culture (IVC). For this, the ovarian cortex was fragmented and secondary follicles were mechanically isolated. Immediately after isolation, part of the fresh follicles were fixed in 4% paraformaldehyde and destined for immunostaining for aromatase and MMPs-2 and 9. The other follicles were randomly distributed in two groups: fresh secondary follicles (FSF) and vitrified secondary follicles (VSF), both followed by IVC for 6 or 12 days. At the end of D6 and D12 of culture, the FSF and VSF were submitted to morphology, viability (trypan blue), antrum formation, follicular, and oocyte diameter. In addition, aromatase and metalloproteinases were also investigated in the two groups of follicles (FSF and VSF). Our results showed that vitrification significantly reduced the percentage of intact follicles after IVC, compared to FSF. The follicular and oocyte diameter of the VSF was lower (P <0.05) than that of the FSF on both days of VSD. VSF showed a reduction in viability between days 6 and 12 of culture, however, no significant differences were observed in comparison to FSF on both days. Antrum formation in the VSF was lower (P <0.05) than in the FSF, however, an increase of this percentage was observed from 6 to 12 days in both groups of follicles. Furthermore, the results showed that on days 6 and 12 the immunostaining for aromatase in granulosa (GC) cells of the FSF was strong and moderate, respectively, whereas in the VSF it was, respectively, moderate and strong. As for MMPs, moderate marking was observed for MMP-2 and MMP-9 in the FSF and VSF GCs on both days of cultivation, except for the FSF in D6, which showed strong marking for MMP-9. In conclusion, vitrified secondary follicles can grow and develop during 12 days of in vitro culture. The follicles also showed evidence of their steroidogenic capacity and remodeling of the basement membrane, which is important for follicular development.

Effect of fixative type and fixation time on the morphology of equine preantral ovarian follicles / Efeito do tipo de fixador e tempo de fixação na morfologia de folículos pré-antrais equinos

The aim of this study was to investigate the efficacy of the tissue fixatives Bouin, Carnoy and 10% Formaldehyde in equine ovarian fragments. Ovaries (n=4) from mares of mixed breeds were obtained at a local slaughterhouse and transported at 20 ºC in a thermo container. Immediately after collection, the ovaries were washed with a modified PBS solution (Cultilab®, Campinas-SP, Brazil) and divided into nine fragments with approximately 5x5x1 mm, removed from the parenchyma of each ovary. The ovarian fragments were then immersed in three different fixatives, Bouin (B) Carnoy (C) or 10% Formaldehyde (F) for 6, 12 or 24 hours. Each fragment was individually immersed in a 20 mL tube containing 20 times the volume of fixative solution. After this period, the fragments were held in 70% ethanol for 24 hours. Each procedure was performed in four replicates. For histological analysis, the specimens were dehydrated in increasing concentrations of alcohol, submitted to diaphanization in xylol and embedded in paraffin. Serial sections of 5 μm were made with the use of a rotating microtome (Leica® type, Wetzlar, Germany), followed by slide mounting and staining with periodic acid-Schiff (PAS) and hematoxylin. A total of 540 slides with 1,620 sections were evaluated, which contained 465 preantral follicles that were classified as normal or degenerated. Follicles were considered as degenerated when presented at least one of the following aspects: cytoplasm retraction, pyknotic nucleus, cytoplasmic vacuoles,displacement of granulosa cells and/or disruption of the basal membrane. A logistic regression test was used for statistical analysis, and differences were considered significant when P<0.05. The Carnoy fixative, when used for 24 hours, provided the best conditions of morphological integrity (53.3%; 32/60)compared to all others, and the use of Boiun for 24 hours was considered the worst treatment (19.1%; 9/47)[...](AU)

O objetivo deste estudo foi investigar a eficácia dos fixadores teciduais Bouin, Carnoy ou Formol 10% em fragmentos ovarianos equinos. Ovários (n=4) de éguas, sem raça definida, foram obtidos de abatedouro local e transportados em recipiente térmico a 20 ºC. Imediatamente após a coleta, os ovários foram lavados com solução de PBS modificado (Cultilab®, Campinas-SP, Brasil), e divididos em nove fragmentos com aproximadamente 5x5x1 mm, retirados do parênquima de cada ovário. Em seguida, os fragmentos ovarianos foram imersos em um dos três diferentes fixadores, Bouin (B), Carnoy (C) ou Formol 10% (F), por 6, 12 ou 24 horas. Cada fragmento foi acondicionado individualmente em um frasco contendo aproximadamente 20 vezes o volume da solução fixadora. Após este período, foram mantidos em álcool 70% por 24 horas. Para cada fixador e tempo foram realizadas quatro réplicas. No processamento histológico, os fragmentos foram desidratados em concentrações crescentes de álcool, diafanizados em xilol e incluídos em parafina. Em seguida, foram feitos cortes seriados de 5 ?m em micrótomo rotativo (Leica®, Wetzlar-Alemanha), seguidos da montagem de lâminas e coloração com ácido periódico de Schiff (PAS) e hematoxilina. Foram avaliadas 540 lâminas com 1.620 cortes histológicos, contendo 465 folículos pré-antrais que foram classificados como íntegros ou degenerados. A degeneração foi detectada pela presença de pelo menos um dos seguintes aspectos: retração docitoplasma, núcleo picnótico, vacúolos citoplasmáticos, deslocamento das células da granulosa e/ou rompimento da membrana basal. Um teste de regressão logística foi utilizado para a análise estatística, e as diferenças foram consideradas significativas quando P<0,05. O fixador Carnoy utilizado por 24 horas proporcionou as melhores condições de integridade morfológica (53,3%; 32/60) em relação aos demais,sendo Boiun por 24 h o tratamento menos eficaz (19,1%; 9/47).[...](AU)

XENOTRANSPLANTE DE FRAGMENTOS DE CÓRTEX OVARIANO BOVINO TRATADOS COM RESVERATROL

O processo de restabelecimento da circulação sanguínea após o transplante, tem influência na sobrevivência do tecido e no desenvolvimento folicular. O resveratrol tem sido utilizado em inúmeros estudos, por apresentar efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios. No entanto, não existe informação sobre possíveis ações benéficas do resveratrol nos tecidos ovarianos que serão destinados ao transplante. Objetivou-se, no primeiro experimento, realizar a vitrificação de tecido ovariano com e sem resveratrol, e após o cultivo in vitro e xenotransplante de tecido ovariano de fêmeas bovinas, avaliar a morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos pré- antrais, e ainda, o estresse oxidativo, os níveis de degeneração celular e a apoptose no tecido, e no segundo experimento, realizar a incubação do tecido ovariano por 24 horas em meio de cultivo acrescido ou não com resveratrol, seguido do cultivo in vivo (xenotransplante) e avaliar a morfologia e a capacidade de desenvolvimento dos folículos préantrais. Observou-se que no primeiro experimento, os tecidos que foram vitrificados com resveratrol, apresentaram menores taxas de degeneração celular (p<0,05) quando comparado aos tecidos vitrificados sem resveratrol. O xenotransplante fresco por 7 dias, apresentou viabilidade folicular semelhante ao controle cultivado in vitro por 7 dias. A vitrificação com resveratrol seguida do xenotransplante apresentou maior taxa de degeneração celular e apoptose, do que os tecidos vitrificados sem resveratrol e xenotransplantados. No segundo experimento, o grupo de tecidos ovarianos incubados com resveratrol e xenotransplantados por 14 e 28 dias apresentou menor (P < 0,05) viabilidade e ativação folicular que os tecidos incubados sem adição do antioxidante resveratrol. O grupo xenotransplante fresco e o grupo xenotransplantes incubado sem resveratrol por 14 e 28 dias, apresentaram viabilidade folicular semelhante (P > 0,05) ao grupo controle fresco. Frente aos resultados obtidos, podemos concluir que o uso de resveratrol em soluções de vitrificação reduz a viabilidade folicular de tecidos ovarianos de fêmeas bovinas após xenotransplante por 7 dias. A utilização do cultivo in vivo (xenotransplante) sem resveratrol, demonstrou bons resultados na manutenção da viabilidade de folículos pré-antrais inclusos em tecido ovariano bovino, levando a manutenção folicular pelo período de 28 dias de transplante.

The process of reestablishing blood circulation after transplantation has an influence on tissue survival and follicular development. Resveratrol has been used in numerous studies, presenting antioxidant and anti-inflammatory effects. However, the possible beneficial actions of resveratrol in the ovarian tissues that will be aimed for transplantation is still not established. The aim of the first study was to vitrify ovarian tissue with resveratrol, and to evaluate the morphology and the developmental capacity of the preantral follicles after in vitro and in vivo cultivation (xenotransplantation) of ovarian tissue of bovine females. We also evaluate oxidative stress, levels of cell degeneration, and apoptosis in the tissue. In the second study we evaluate the morphology and the developmental capacity of the preantral follicles in the ovarian tissue that was incubate for 24 hours in cultivation medium with addition of resveratrol and after in vivo cultivation (xenotransplantation). The tissues that were vitrified with resveratrol, presented lower rates of cell degeneration (p <0.05) when compared to the vitrified tissues without resveratrol. Fresh xenotransplantation for 7 days presented follicular viability similar to the cultured control in vitro for 7 days. Resveratrol vitrification followed by xenotransplantation presented a higher rate of cell degeneration and apoptosis than vitrified tissues without resveratrol and xenotransplantation. The group of ovarian tissues incubated with resveratrol and xenotransplantation for 14 and 28 days presented less viability (P <0.05) and follicular activation than the tissues incubated without the addition of the antioxidant resveratrol. The fresh xenotransplantation and xenotransplantation groups incubated without resveratrol for 14 and 28 days presented similar follicular viability (P> 0.05) to the fresh control group. The use of resveratrol in vitrification solutions reduces the follicular viability of ovarian tissues of bovine females after xenotransplantation for 7 days. The use of in vivo cultivation (xenotransplantation) without resveratrol, demonstrated good results in maintaining the viability of pre-antral follicles included in bovine ovarian tissue, leading to follicular maintenance for the period of 28 days of transplantation.

The human follicle stimulating hormone (hFSH) keeps the normal ultrastructure of caprine preantral follicles cultured in vitro / O hormônio folículo estimulante humano (hFSH) mantém a ultraestrutura normal de folículos pré-antrais caprinos cultivados in vitro

The aim of this study was to investigate the effects of human follicle stimulating hormone (hFSH) on the in vitro culture of caprine preantral follicles. Fragments of goat ovarian cortex were cultured in ?-MEM+ supplemented with 0, 10, or 50 ng/mL hFSH for one or seven days. Small fragments of non-cultured and cultured ovarian tissue were processed for classic histology and transmission electron microscopy. The statistical tests used in this study were Lilliefors, Cochran, and Tukeys (when significance was detected, PROC ANOVA, SAS was used). The results revealed a reduction in the percentage of normal follicles after one or seven days of culture under all treatment conditions. The rates of follicular survival were similar to each other, within each day of culture. The medium containing 10 ng/mL hFSH reduced the percentage of primordial follicles following culture for one and seven days and did not increase the percentage of developing follicles. The follicular diameter of ovarian tissue cultured in ?-MEM+ medium and medium supplemented with 10 ng/mL of hFSH did not change when compared with the control (non-cultured). The ultrastructural analysis confirmed the integrity of follicles cultured for seven days in medium containing 10 ng/mL hFSH. In conclusion, hFSH (10 ng/mL) is capable of promoting the activation of primordial follicles and maintaining the ultrastructural integrity of caprine preantral follicles cultured in vitro for seven days.(AU)

O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos do FSH humano (hFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais caprinos. Fragmentos do córtex ovariano de caprinos foram cultivados em ?-MEM+ suplementado com 0, 10, ou 50 ng/mL de hFSH por um ou sete dias. Pequenos fragmentos de tecido ovariano cultivado e não cultivados, foram processados por histologia clássica e microscopia eletrônica de transmissão. Os testes estatísticos utilizados na pesquisa foram Lilliefors, Cochran, e Tukeys (caso significância - PROC ANOVA; SAS). Os resultados mostraram uma redução no percentual de folículos normais, após um ou sete dias de cultivo em todas as condições de tratamento. As taxas de sobrevivência folicular foram semelhantes entre si, dentro de cada dia de cultivo. O meio contendo 10 ng/mL de hFSH reduziu a percentagem de folículos primordiais no dia um e sete de cultivo, e não aumentou a percentagem dos folículos em desenvolvimento. O diâmetro folicular de tecido ovariano cultivado em meio ?-MEM+ e meio suplementado com 10 ng/mL de hFSH não alterou, quando comparado com o controle (não cultivado). As análises ultraestruturais confirmaram a integridade de folículos cultivados por sete dias em meio contendo 10 ng/mL de hFSH. Em conclusão, o hFSH (10 ng/mL) é capaz de promover a ativação de folículos primordiais e manter a integridade ultraestrutural de folículos préantrais caprinos cultivados in vitro por até sete dias.(AU)