Bioaccumulation of pyrethroid in parasite Wenyonia acuminata (Cestoda: Caryophyllaeidae) and host fish Synodontis clarias (Linnaeus, 1758) from Lekki Lagoon, Lagos Nigeria / Bioacumulação de piretroide no parasita Wenyonia acuminata (Cestoda: Caryophyllaeidae) e peixe hospedeiro Synodontis clarias (Linnaeus, 1758) da lagoa de Lekki, Lagos, Nigéria

This study was aimed at determining the concentration of pyrethroid in the surface water, sediment, Weyonia acuminata and Synodontis clarias fish in Lekki lagoon, Lagos, Nigeria. In-situ physicochemical analysis of the surface water was conducted using a calibrated handheld multi-parameter probe (Horiba Checker Model U-10). Intestinal samples from infected and uninfected fish were analyzed for pyrethroid concentrations, microbial colonization, proteins (PRO), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced glutathione (GSH), malonaldehyde (MDA) and glutathione peroxidase (GPx). The histopathology of infected and uninfected intestinal tissues were analyzed using Haematoxylin and Eosin (H&E) stains and examined under a binocular light microscope (Model 230485). A total of 39 out of 98 S. clarias fish were infected with cestode parasite, Wenyonia acuminate, amounting to 39% parasite prevalence. Among the tested pyrethroids, Cyfluthrin and Alpha cypermethrin had significant sorption of 1.62 and 3.27 respectively from the aqueous phase to the bottom sediment of the lagoon. Pyrethroid concentration was in the order of sediment > parasite> water > intestine> liver. The cholesterol, triglycerides, and LDL (low density lipids) in the parasite were higher than in the host fish (p 0.05). On the other hand, the fish hepatic protein, high density lipids (HDL) and glucose were higher than the levels in the parasites (p 0.05). There was a high prevalence of gut microbes (30 - 40%), which include Salmonella sp, Escherichia coli, Pseudomonas sp and Bacillus sp among individuals infected with gut Cestodes, Wenyonia sp compared with uninfected individual which had higher gut Staphylococcus sp., Klebsiella sp., and Proteus sp. (10- 40%). among the congeners of pyrethroids analyzed, Cyfluthrin > Alpha-Cyermethrin had significant sorption on the sediment, however unlike a benthopelagic fish, no pyrethroid was accumulated in the S. clarias from the sediment. The fish however accumulated Alpha-Cypermethrin from the aqueous phase. The parasite on the other hand accumulated Bathroid significantly from the surface water and bottom sediment which may be linked to the higher stress levels observed in the parasite than the host fish. The parasite in turn inflicted histological alterations on the host intestine, marked by moderate inflammation of mucosa, alteration of the villi microstructure, moderate stunting of the villous structure and moderate fibrosis of villous structure. The study demonstrated the efficiency of histopathological and microbial analysis in biomonitoring studies enteric parasites and early detection of pyrethroid toxicity respectively compared to bioaccumulation analysis.(AU)

Este estudo teve como objetivo determinar a concentração de piretroide nos peixes de águas superficiais, sedimentos, Wenyonia acuminata e Synodontis clarias na lagoa de Lekki, Lagos, Nigéria. A análise físico-química in situ da água de superfície foi realizada usando uma sonda multiparâmetro manual calibrada (Horiba Checker Modelo U-10). Amostras intestinais de peixes infectados e não infectados foram analisadas quanto a concentrações de piretroides, colonização microbiana, proteínas (PRO), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa reduzida (GSH), malonaldeído (MDA) e glutationa peroxidase (GPx). A histopatologia dos tecidos intestinais infectados e não infectados foi analisada usando manchas de Hematoxilina e Eosina (H&E) e examinada sob um microscópio de luz binocular (Modelo 230485). Um total de 39 dos 98 peixes de S. clarias foi infectado com o parasita cestoide Wenyonia acuminata, totalizando 39% de prevalência do parasita. Entre os piretroides testados, ciflutrina e alfa-cipermetrina tiveram sorção significativa de 1,62 e 3,27, respectivamente, da fase aquosa ao sedimento de fundo da lagoa. A concentração de piretroides estava na ordem de sedimentos > parasita > água > intestino > fígado. O colesterol, os triglicerídeos e o LDL (lipídios de baixa densidade) no parasita foram maiores que no peixe hospedeiro (p 0,05). Por outro lado, a proteína hepática dos peixes, os lipídios de alta densidade (HDL) e a glicose foram superiores aos níveis nos parasitas (p 0,05). Houve uma alta prevalência de micróbios intestinais (30-40%), incluindo Salmonella sp., Escherichia coli, Pseudomonas sp. e Bacillus sp. entre indivíduos infectados no intestino com o parasita cestoide Wenyonia sp. em comparação com indivíduos não infectados com Staphylococcus sp., Klebsiella intestinal sp. e Proteus sp. (10-40%). Entre os congêneres dos piretroides analisados, ciflutrina > alfa-cipermetrina teve sorção significativa no sedimento, porém, diferentemente de um peixe bentopelágico, nenhum piretroide foi acumulado no S. clarias do sedimento. No entanto, os peixes acumularam alfa-cipermetrina a partir da fase aquosa. O parasita, por outro lado, acumulou Bathroid significativamente da água superficial e do sedimento do fundo, o que pode estar relacionado aos níveis mais altos de estresse observados no parasita do que no peixe hospedeiro. O parasita, por sua vez, causou alterações histológicas no intestino hospedeiro, marcadas por inflamação moderada da mucosa, alteração da microestrutura das vilosidades, atrofia moderada da estrutura das vilosidades e fibrose moderada da estrutura das vilosidades. O estudo demonstrou a eficiência da análise histopatológica e microbiana nos estudos de biomonitoramento de parasitas entéricos e detecção precoce da toxicidade dos piretroides, respectivamente, em comparação à análise de bioacumulação.(AU)

Avaliação comparativa in vitro da sensibilidade de Rhipicephalus (boophilus) microplus a acaricidas comercializados no município de Rolim de Moura, Rondônia, Brasil / Comparative in vitro assessment of the sensitivity of Rhipicephalus (boophilus) microplus to acaricides commercialized in Rolim de Moura, Rondônia, Brazil

Objetivou-se avaliar in vitro a sensibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus aos acaricidas comercializados no município de Rolim de Moura, Rondônia, Brasil. Foram coletadas 400 partenóginas de R. (B.) microplus de bovinos naturalmente infestados, pertencentes a duas propriedades rurais. As partenóginas foram separadas em sete grupos homogêneos de 10 indivíduos cada, para análise dos perfis de sensibilidade ao diclorvós 45% + cipermetrina 5%, cipermetrina 15%, cipermetrina 20%, amitraz 12,5%, deltametrina 2,5% e fipronil 1% e o grupo controle. Foram adotados o Teste de Imersão de Adultos (TIA) e o Teste de Imersão de Larvas (TIL). Para cada grupo de 10 partenóginas foi determinado, o índice de produção de ovos, a eficiência reprodutiva e a eficiência do produto. Na propriedade 1 o produto com ação mais rápida sobre as partenóginas foi o fipronil 1%, que matou 70% (7/10) delas em menos de três dias, tendo também inibido a postura dos ovos nas sobreviventes. Enquanto na propriedade 2, a mortalidade das partenóginas só iniciaram a partir do terceiro dia com o uso do amitraz 12,5%, com 50% (5/10) de morte no vigésimo dia, porém nas partenóginas sobreviventes não houve inibição de postura. Na propriedade 1 a cipermetrina 20% e o amitraz 12,5%, inibiram 100% da eclosão dos ovos e a associação de diclorvós 45% + cipermetrina 5% obteve 98% de eficiência de produto. No entanto, na propriedade 2 não houve inibição de eclosão em nenhum grupo teste e a eficiência do produto, de 44,49% com amitraz 12,5% foi o maior, não se mostrando, mesmo assim, eficiente, dentro das normas vigentes. Quanto ao TIL, na propriedade 1, diclorvós 45% + cipermetrina 5% matou 100% das larvas e na propriedade 2 esse resultado foi observado com o fipronil 1%. Esses primeiros resultados reforçam a necessidade de controle estratégico do carrapato e o uso constante de bioensaios - testes laboratoriais de eficácia de acaricida, antes da prescrição, sobretudo no ambiente amazônico.

The objective of this study was to evaluate in vitro the sensitivity of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to acaricides sold in the municipality of Rolim de Moura, Rondônia, Brazil. The 400 R. (B.) microplus female ticks were collected from naturally infested cattle, belonging to two rural properties. The ticks were separated into seven homogeneous groups of 10 individuals each, to analyze the sensitivity profiles to dichlorvós 45% + cypermethrin 5%, cypermethrin 15%, cypermethrin 20%, amitraz 12.5%, deltamethrin 2.5% and fipronil 1 % and the control group. The Adult Immersion Test (AIT) and the Larvae Immersion Test (LIT) were adopted. For each group of 10 ticks, the egg production index, reproductive efficiency and product efficiency were determined. At property 1, the product with the fastest action on ticks was fipronil 1%, which killed 70% (7/10) of them in less than three days, and also inhibited the laying of eggs on survivors. While on property 2, the mortality of the ticks only started from the third day with the use of amitraz 12.5%, with 50% (5/10) of death on the twentieth day, however, in the surviving ticks, there was no posture inhibition. In property 1, cypermethrin 20% and amitraz 12.5% inhibited 100% of the eggs hatching and the association of dichlorvós 45% + cypermethrin 5% obtained 98% product efficiency. However, in property 2 there was no hatching inhibition in any test group and the product's efficiency, of 44.49% with amitraz 12.5%, was the highest, not even being efficient, within the current rules. As for LIT, in property 1, dichlorvós 45% + cypermethrin 5% killed 100% of the larvae and in property 2 this result was observed with fipronil 1%. These first results reinforce the need for strategic control of the tick and the constant use of bioassays - laboratory tests for the effectiveness of acaricide, before prescription, especially in the Amazonian environment.

Avaliação comparativa in vitro da sensibilidade de Rhipicephalus (boophilus) microplus a acaricidas comercializados no município de Rolim de Moura, Rondônia, Brasil / Comparative in vitro assessment of the sensitivity of Rhipicephalus (boophilus) microplus to acaricides commercialized in Rolim de Moura, Rondônia, Brazil

Objetivou-se avaliar in vitro a sensibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus aos acaricidas comercializados no município de Rolim de Moura, Rondônia, Brasil. Foram coletadas 400 partenóginas de R. (B.) microplus de bovinos naturalmente infestados, pertencentes a duas propriedades rurais. As partenóginas foram separadas em sete grupos homogêneos de 10 indivíduos cada, para análise dos perfis de sensibilidade ao diclorvós 45% + cipermetrina 5%, cipermetrina 15%, cipermetrina 20%, amitraz 12,5%, deltametrina 2,5% e fipronil 1% e o grupo controle. Foram adotados o Teste de Imersão de Adultos (TIA) e o Teste de Imersão de Larvas (TIL). Para cada grupo de 10 partenóginas foi determinado, o índice de produção de ovos, a eficiência reprodutiva e a eficiência do produto. Na propriedade 1 o produto com ação mais rápida sobre as partenóginas foi o fipronil 1%, que matou 70% (7/10) delas em menos de três dias, tendo também inibido a postura dos ovos nas sobreviventes. Enquanto na propriedade 2, a mortalidade das partenóginas só iniciaram a partir do terceiro dia com o uso do amitraz 12,5%, com 50% (5/10) de morte no vigésimo dia, porém nas partenóginas sobreviventes não houve inibição de postura. Na propriedade 1 a cipermetrina 20% e o amitraz 12,5%, inibiram 100% da eclosão dos ovos e a associação de diclorvós 45% + cipermetrina 5% obteve 98% de eficiência de produto. No entanto, na propriedade 2 não houve inibição de eclosão em nenhum grupo teste e a eficiência do produto, de 44,49% com amitraz 12,5% foi o maior, não se mostrando, mesmo assim, eficiente, dentro das normas vigentes. Quanto ao TIL, na propriedade 1, diclorvós 45% + cipermetrina 5% matou 100% das larvas e na propriedade 2 esse resultado foi observado com o fipronil 1%. Esses primeiros resultados reforçam a necessidade de controle estratégico do carrapato e o uso constante de bioensaios - testes laboratoriais de eficácia de acaricida, antes da prescrição, sobretudo no ambiente amazônico.(AU)

The objective of this study was to evaluate in vitro the sensitivity of Rhipicephalus (Boophilus) microplus to acaricides sold in the municipality of Rolim de Moura, Rondônia, Brazil. The 400 R. (B.) microplus female ticks were collected from naturally infested cattle, belonging to two rural properties. The ticks were separated into seven homogeneous groups of 10 individuals each, to analyze the sensitivity profiles to dichlorvós 45% + cypermethrin 5%, cypermethrin 15%, cypermethrin 20%, amitraz 12.5%, deltamethrin 2.5% and fipronil 1 % and the control group. The Adult Immersion Test (AIT) and the Larvae Immersion Test (LIT) were adopted. For each group of 10 ticks, the egg production index, reproductive efficiency and product efficiency were determined. At property 1, the product with the fastest action on ticks was fipronil 1%, which killed 70% (7/10) of them in less than three days, and also inhibited the laying of eggs on survivors. While on property 2, the mortality of the ticks only started from the third day with the use of amitraz 12.5%, with 50% (5/10) of death on the twentieth day, however, in the surviving ticks, there was no posture inhibition. In property 1, cypermethrin 20% and amitraz 12.5% inhibited 100% of the eggs hatching and the association of dichlorvós 45% + cypermethrin 5% obtained 98% product efficiency. However, in property 2 there was no hatching inhibition in any test group and the product's efficiency, of 44.49% with amitraz 12.5%, was the highest, not even being efficient, within the current rules. As for LIT, in property 1, dichlorvós 45% + cypermethrin 5% killed 100% of the larvae and in property 2 this result was observed with fipronil 1%. These first results reinforce the need for strategic control of the tick and the constant use of bioassays - laboratory tests for the effectiveness of acaricide, before prescription, especially in the Amazonian environment.(AU)

Bioaccumulation of Pyrethroid in Parasite Wenyonia acuminata (Cestoda: Caryophyllaeidae) and Host fish Synodontis clarias (Linnaeus, 1758) from Lekki Lagoon, Lagos Nigeria

Abstract This study was aimed at determining the concentration of pyrethroid in the surface water, sediment, Weyonia acuminata and Synodontis clarias fish in Lekki lagoon, Lagos, Nigeria. In-situ physicochemical analysis of the surface water was conducted using a calibrated handheld multi-parameter probe (Horiba Checker Model U-10). Intestinal samples from infected and uninfected fish were analyzed for pyrethroid concentrations, microbial colonization, proteins (PRO), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced glutathione (GSH), malonaldehyde (MDA) and glutathione peroxidase (GPx). The histopathology of infected and uninfected intestinal tissues were analyzed using Haematoxylin and Eosin (H&E) stains and examined under a binocular light microscope (Model 230485). A total of 39 out of 98 S. clarias fish were infected with cestode parasite, Wenyonia acuminate, amounting to 39% parasite prevalence. Among the tested pyrethroids, Cyfluthrin and Alpha cypermethrin had significant sorption of 1.62 and 3.27 respectively from the aqueous phase to the bottom sediment of the lagoon. Pyrethroid concentration was in the order of sediment > parasite> water > intestine> liver. The cholesterol, triglycerides, and LDL (low density lipids) in the parasite were higher than in the host fish (p 0.05). On the other hand, the fish hepatic protein, high density lipids (HDL) and glucose were higher than the levels in the parasites (p 0.05). There was a high prevalence of gut microbes (30 - 40%), which include Salmonella sp, Escherichia coli, Pseudomonas sp and Bacillus sp among individuals infected with gut Cestodes, Wenyonia sp compared with uninfected individual which had higher gut Staphylococcus sp., Klebsiella sp., and Proteus sp. (10- 40%). among the congeners of pyrethroids analyzed, Cyfluthrin > Alpha-Cyermethrin had significant sorption on the sediment, however unlike a benthopelagic fish, no pyrethroid was accumulated in the S. clarias from the sediment. The fish however accumulated Alpha-Cypermethrin from the aqueous phase. The parasite on the other hand accumulated Bathroid significantly from the surface water and bottom sediment which may be linked to the higher stress levels observed in the parasite than the host fish. The parasite in turn inflicted histological alterations on the host intestine, marked by moderate inflammation of mucosa, alteration of the villi microstructure, moderate stunting of the villous structure and moderate fibrosis of villous structure. The study demonstrated the efficiency of histopathological and microbial analysis in biomonitoring studies enteric parasites and early detection of pyrethroid toxicity respectively compared to bioaccumulation analysis.

Resumo Este estudo teve como objetivo determinar a concentração de piretroide nos peixes de águas superficiais, sedimentos, Wenyonia acuminata e Synodontis clarias na lagoa de Lekki, Lagos, Nigéria. A análise físico-química in situ da água de superfície foi realizada usando uma sonda multiparâmetro manual calibrada (Horiba Checker Modelo U-10). Amostras intestinais de peixes infectados e não infectados foram analisadas quanto a concentrações de piretroides, colonização microbiana, proteínas (PRO), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa reduzida (GSH), malonaldeído (MDA) e glutationa peroxidase (GPx). A histopatologia dos tecidos intestinais infectados e não infectados foi analisada usando manchas de Hematoxilina e Eosina (H&E) e examinada sob um microscópio de luz binocular (Modelo 230485). Um total de 39 dos 98 peixes de S. clarias foi infectado com o parasita cestoide Wenyonia acuminata, totalizando 39% de prevalência do parasita. Entre os piretroides testados, ciflutrina e alfa-cipermetrina tiveram sorção significativa de 1,62 e 3,27, respectivamente, da fase aquosa ao sedimento de fundo da lagoa. A concentração de piretroides estava na ordem de sedimentos > parasita > água > intestino > fígado. O colesterol, os triglicerídeos e o LDL (lipídios de baixa densidade) no parasita foram maiores que no peixe hospedeiro (p 0,05). Por outro lado, a proteína hepática dos peixes, os lipídios de alta densidade (HDL) e a glicose foram superiores aos níveis nos parasitas (p 0,05). Houve uma alta prevalência de micróbios intestinais (30-40%), incluindo Salmonella sp., Escherichia coli, Pseudomonas sp. e Bacillus sp. entre indivíduos infectados no intestino com o parasita cestoide Wenyonia sp. em comparação com indivíduos não infectados com Staphylococcus sp., Klebsiella intestinal sp. e Proteus sp. (10-40%). Entre os congêneres dos piretroides analisados, ciflutrina > alfa-cipermetrina teve sorção significativa no sedimento, porém, diferentemente de um peixe bentopelágico, nenhum piretroide foi acumulado no S. clarias do sedimento. No entanto, os peixes acumularam alfa-cipermetrina a partir da fase aquosa. O parasita, por outro lado, acumulou Bathroid significativamente da água superficial e do sedimento do fundo, o que pode estar relacionado aos níveis mais altos de estresse observados no parasita do que no peixe hospedeiro. O parasita, por sua vez, causou alterações histológicas no intestino hospedeiro, marcadas por inflamação moderada da mucosa, alteração da microestrutura das vilosidades, atrofia moderada da estrutura das vilosidades e fibrose moderada da estrutura das vilosidades. O estudo demonstrou a eficiência da análise histopatológica e microbiana nos estudos de biomonitoramento de parasitas entéricos e detecção precoce da toxicidade dos piretroides, respectivamente, em comparação à análise de bioacumulação.

Acute toxicity of a deltamethrin based pesticide (DBP) to the Neotropical electric fish Microsternarchus cf. bilineatus (Gymnotiformes) / Toxicidade aguda de um pesticida à base de deltametrina (PBD) no peixe elétrico neotropical Microsternarchus cf. bilineatus (Gymnotiformes)

Deltamethrin is a pyrethroid insecticide widely used in pest control in Brazilian agriculture. The intensive and disordered use of this pesticide in the Amazon region can drive it into aquatic ecosystems in several ways, but mainly by runoff and leaching. The present study was conceived to determine the acute toxicity (LC50) of a deltamethrin based pesticide (DBP) and to characterize its effects on two biochemical biomarkers, glutathione-S-transferase (GST) and acetylcholinesterase (AChE), in tissues of the electric fish Microsternarchus cf. bilineatus. Fishes were exposed to concentrations of 1, 2, 3, 4 and 5 g L-1 of DBP for up to 96 hours. For each treatment, the absolute activity of the enzymes GST (muscle and liver) and AChE (muscle and nervous tissue) were analyzed. The LC50-96 h for Microsternarchus cf. bilineatus was 2.15 g L-1, the lowest concentration registered for an Amazonian fish species so far. None of the concentrations tested of this insecticide affected AChE activity for the exposure period tested. A significant increase in muscle GST activity was detected only for concentrations of 2 and 3 g L-1.(AU)

A deltametrina é um inseticida piretróide amplamente utilizado no controle de pragas na agricultura brasileira. O uso intensivo e desordenado desse pesticida na Amazônia pode carreá-lo aos ecossistemas aquáticos de várias maneiras, mas principalmente por escoamento e lixiviação. O presente estudo foi concebido para determinar a toxicidade aguda (LC50) de um pesticida à base de deltametrina (PBD) e caracterizar seus efeitos sobre dois biomarcadores bioquímicos, a glutationa-S-transferase (GST) e a acetilcolinesterase (AChE), em tecidos do peixe elétrico Microsternarchus cf. bilineatus. Os peixes foram expostos a concentrações de 1, 2, 3, 4 e 5 g L-1 de PBD por até 96 horas. Para cada tratamento, foi analisada a atividade absoluta das enzimas GST (músculo e fígado) e AChE (músculo e tecido nervoso). A CL50-96 h para Microsternarchus cf. bilineatus foi de 2,15 g L-1, a menor concentração registrada para um peixe amazônico até o momento. Nenhuma das concentrações testadas deste inseticida afetou a atividade da AChE para o período de exposição testado. Um aumento significativo da atividade de GST no músculo foi detectado somente para as concentrações de 2 e 3 g L-1.(AU)

Antiparasitic efficacy of fipronil in Wistar rats naturally infested by Polyplax spinulosa (Burmeister, 1839) / Eficácia antiparasitária do fipronil em ratos Wistar naturamente infestados por Polyplax spinulosa (Burmeister, 1839)

Based on the importance of pediculosis by Polyplax spinulosa for rodents, this study evaluated two treatments against this louse in naturally infested Wistar rats. 21 adult male rats were randomly distributed into three groups (n = 7): T1 = treated with the association of cypermethrin (5%), dichlorvos (45%) and piperidine butoxide (25%) administered topically by spraying; T2 = treated with fipronil 1 mg. Kg-1 administered topically by spot on; T3 = untreated animals (control). In the initial phase, animals were housed in cages and wrapped in white cotton fabrics for evaluating 4, 12, 24 and 48 hours post-treatment (HPT) to count the number of lice present in the external environment. In the second phase, the groups were transferred to polypropylene boxes for antiparasitic evaluation 7, 14 and 21 days post-treatment (DPT) by direct inspection of eggs and lice presence in the animals. The results showed higher lice counts 4 HPT, representing 41% of the total, and these findings were strongly influenced by the control animals with 20.51%. However, rats treated with fipronil had the highest counts with 24 HPT, representing 14.36% of lice. No variation in lice counts was observed in T1 (pharmacological association). The efficacy study in the animals revealed absence of lice and presence of eggs in treated animals (T1 and T2) at 7 and 14 DPT. In the 21st day, rats treated with the pharmacological association presented lice whereas fipronil treated rats remained only with eggs not hatched. However, this study demonstrated that Fipronil at 1 mg.kg-1via spot on is an effective option for the control of P. spinulosa in Wistar rats, while treatment with the association of cypermethrin (5%), dichlorvos (45%) and piperidine butoxide (25%) was not effective against eggs viability and hatching, resulting in the return of parasitic infestation.

Baseado na importância da pediculose por Polyplax spinulosa em roedores, este estudo avaliou dois tratamentos para controle deste piolho em ratos Wistar naturalmente infestados. Para tal, 21 ratos adultos machos foram distribuídos em três grupos (n=7): T1= tratados com associação farmacológica cipermetrina (5%), diclorvos (45%) e butóxido de piperolina (25%), via tópica por pulverização; T2= tratados com fipronil 1 mg. Kg-1 via tópica por “Spot on”; T3= animais não tratados (controle). Na fase inicial do estudo, os animais foram acondicionados em gaiolas e envolvidos em tecidos de algodão branco para avaliação 4, 12, 24 e 48 horas pós-tratamento (HPT) do número de piolhos presentes no tecido (ambiente externo). Na segunda etapa, os grupos foram transferidos para caixas de polipropileno para avaliação antiparasitária 7, 14 e 21 dias pós-tratamento (DPT) por inspeção direta da presença de ovos e piolhos nos animais. Os resultados revelaram maiores contagens de piolho 4 HPT, representando 41% do total, sendo estes achados fortemente influenciados pelos animais controles com 20,51%. Entretanto, ratos tratados com fipronil apresentaram as maiores contagens com 24 HPT representando 14, 36% dos piolhos. Não se observou variações nas contagens de piolho em animais do grupo T1 (associação de fármacos). O estudo de eficácia nos animais revelou ausência de piolhos e presença de ovos nos animais tratados (T1 e T2) no 7 e 14° DPT. Na avaliação realizada 21° DPT, ratos tratados com a associação farmacológica apresentaram piolhos enquanto ratos tratados com fipronil permaneceram somente com ovos não eclodidos. Contudo, este estudo demonstrou que o fipronil via “Spot on” em dose única na concentração de 1mg.kg-1 é uma opção eficaz para o controle de P. spinulosa em ratos Wistar, enquanto o tratamento com a associação de cipermetrina (5 %), diclorvos (45%) e butóxido de piperolina (25%) não se mostrou eficaz contra a viabilidade e...

Antiparasitic efficacy of fipronil in Wistar rats naturally infested by Polyplax spinulosa (Burmeister, 1839) / Eficácia antiparasitária do fipronil em ratos Wistar naturamente infestados por Polyplax spinulosa (Burmeister, 1839)

Based on the importance of pediculosis by Polyplax spinulosa for rodents, this study evaluated two treatments against this louse in naturally infested Wistar rats. 21 adult male rats were randomly distributed into three groups (n = 7): T1 = treated with the association of cypermethrin (5%), dichlorvos (45%) and piperidine butoxide (25%) administered topically by spraying; T2 = treated with fipronil 1 mg. Kg-1 administered topically by spot on; T3 = untreated animals (control). In the initial phase, animals were housed in cages and wrapped in white cotton fabrics for evaluating 4, 12, 24 and 48 hours post-treatment (HPT) to count the number of lice present in the external environment. In the second phase, the groups were transferred to polypropylene boxes for antiparasitic evaluation 7, 14 and 21 days post-treatment (DPT) by direct inspection of eggs and lice presence in the animals. The results showed higher lice counts 4 HPT, representing 41% of the total, and these findings were strongly influenced by the control animals with 20.51%. However, rats treated with fipronil had the highest counts with 24 HPT, representing 14.36% of lice. No variation in lice counts was observed in T1 (pharmacological association). The efficacy study in the animals revealed absence of lice and presence of eggs in treated animals (T1 and T2) at 7 and 14 DPT. In the 21st day, rats treated with the pharmacological association presented lice whereas fipronil treated rats remained only with eggs not hatched. However, this study demonstrated that Fipronil at 1 mg.kg-1via spot on is an effective option for the control of P. spinulosa in Wistar rats, while treatment with the association of cypermethrin (5%), dichlorvos (45%) and piperidine butoxide (25%) was not effective against eggs viability and hatching, resulting in the return of parasitic infestation.(AU)

Baseado na importância da pediculose por Polyplax spinulosa em roedores, este estudo avaliou dois tratamentos para controle deste piolho em ratos Wistar naturalmente infestados. Para tal, 21 ratos adultos machos foram distribuídos em três grupos (n=7): T1= tratados com associação farmacológica cipermetrina (5%), diclorvos (45%) e butóxido de piperolina (25%), via tópica por pulverização; T2= tratados com fipronil 1 mg. Kg-1 via tópica por “Spot on”; T3= animais não tratados (controle). Na fase inicial do estudo, os animais foram acondicionados em gaiolas e envolvidos em tecidos de algodão branco para avaliação 4, 12, 24 e 48 horas pós-tratamento (HPT) do número de piolhos presentes no tecido (ambiente externo). Na segunda etapa, os grupos foram transferidos para caixas de polipropileno para avaliação antiparasitária 7, 14 e 21 dias pós-tratamento (DPT) por inspeção direta da presença de ovos e piolhos nos animais. Os resultados revelaram maiores contagens de piolho 4 HPT, representando 41% do total, sendo estes achados fortemente influenciados pelos animais controles com 20,51%. Entretanto, ratos tratados com fipronil apresentaram as maiores contagens com 24 HPT representando 14, 36% dos piolhos. Não se observou variações nas contagens de piolho em animais do grupo T1 (associação de fármacos). O estudo de eficácia nos animais revelou ausência de piolhos e presença de ovos nos animais tratados (T1 e T2) no 7 e 14° DPT. Na avaliação realizada 21° DPT, ratos tratados com a associação farmacológica apresentaram piolhos enquanto ratos tratados com fipronil permaneceram somente com ovos não eclodidos. Contudo, este estudo demonstrou que o fipronil via “Spot on” em dose única na concentração de 1mg.kg-1 é uma opção eficaz para o controle de P. spinulosa em ratos Wistar, enquanto o tratamento com a associação de cipermetrina (5 %), diclorvos (45%) e butóxido de piperolina (25%) não se mostrou eficaz contra a viabilidade e...(AU)

Diversity of insects under the effect of Bt maize and insecticides / Diversidade de insetos sob a influência do milho Bt e inseticidas

The genetically modified maize to control some caterpillars has been widely used in Brazil. The effect of Bt maize and insecticides was evaluated on the diversity of insects (species richness and abundance), based on the insect community, functional groups and species. This study was conducted in genetically modified maize MON810, which expresses the Cry1Ab protein from Bacillus thuringiensis Berliner, and conventional maize with and without insecticide sprays (lufenuron and lambda-cyhalothrin) under field conditions in Ponta Grossa (Paraná state, Brazil). Insect samplings were performed by using pitfall trap, water tray trap and yellow sticky card. A total of 253,454 insects were collected, distributed among nine orders, 82 families and 241 species. No differences were observed in the insect community based on the richness, diversity and evenness indices. Predators and pollinators were more abundant in genetically modified maize. Parasitoids, detritivores, sap-sucking herbivores and chewing herbivores were more abundant in conventional maize with insecticide sprays. Significant differences were found for the species Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) and Nusalala tessellata (Gerstaecker) which were most abundant in Bt maize, and Dalbulus maidis and Condylostylus sp.2 in conventional maize.

O milho geneticamente modificado visando ao controle de lagartas tem sido amplamente utilizado no Brasil. Em estudo de campo realizado em Ponta Grossa (Paraná, Brasil), compararam-se, com base na diversidade (riqueza de espécies e abundância), os efeitos do milho Bt e do controle químico sobre a comunidade de insetos, grupos funcionais e espécies. A comunidade de insetos foi amostrada no milho geneticamente modificado MON810, que expressa a proteína Cry1Ab de Bacillus thuringiensis Berliner, e no milho convencional com e sem a aplicação de inseticidas (lufenuron e lambda-cialotrina). As amostragens foram realizadas por meio da coleta de insetos utilizando-se armadilha de queda, bandeja-d’água e cartão adesivo. Foram coletados 253.454 insetos, distribuídos em nove ordens, 82 famílias e 241 espécies. Não foram observadas diferenças na comunidade de insetos para os índices de riqueza, diversidade e equitabilidade nos tratamentos avaliados. Predadores e polinizadores foram mais abundantes no milho geneticamente modificado, e parasitoides, decompositores, sugadores e mastigadores, no milho convencional com inseticida. Diferenças significativas foram detectadas para as espécies Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) e Nusalala tessellata (Gerstaecker), mais abundantes no milho Bt, e Dalbulus maidis e Condylostylus sp.2, mais abundantes no milho convencional.

Diversity of insects under the effect of Bt maize and insecticides / Diversidade de insetos sob a influência do milho Bt e inseticidas

The genetically modified maize to control some caterpillars has been widely used in Brazil. The effect of Bt maize and insecticides was evaluated on the diversity of insects (species richness and abundance), based on the insect community, functional groups and species. This study was conducted in genetically modified maize MON810, which expresses the Cry1Ab protein from Bacillus thuringiensis Berliner, and conventional maize with and without insecticide sprays (lufenuron and lambda-cyhalothrin) under field conditions in Ponta Grossa (Paraná state, Brazil). Insect samplings were performed by using pitfall trap, water tray trap and yellow sticky card. A total of 253,454 insects were collected, distributed among nine orders, 82 families and 241 species. No differences were observed in the insect community based on the richness, diversity and evenness indices. Predators and pollinators were more abundant in genetically modified maize. Parasitoids, detritivores, sap-sucking herbivores and chewing herbivores were more abundant in conventional maize with insecticide sprays. Significant differences were found for the species Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) and Nusalala tessellata (Gerstaecker) which were most abundant in Bt maize, and Dalbulus maidis and Condylostylus sp.2 in conventional maize.(AU)

O milho geneticamente modificado visando ao controle de lagartas tem sido amplamente utilizado no Brasil. Em estudo de campo realizado em Ponta Grossa (Paraná, Brasil), compararam-se, com base na diversidade (riqueza de espécies e abundância), os efeitos do milho Bt e do controle químico sobre a comunidade de insetos, grupos funcionais e espécies. A comunidade de insetos foi amostrada no milho geneticamente modificado MON810, que expressa a proteína Cry1Ab de Bacillus thuringiensis Berliner, e no milho convencional com e sem a aplicação de inseticidas (lufenuron e lambda-cialotrina). As amostragens foram realizadas por meio da coleta de insetos utilizando-se armadilha de queda, bandeja-d'água e cartão adesivo. Foram coletados 253.454 insetos, distribuídos em nove ordens, 82 famílias e 241 espécies. Não foram observadas diferenças na comunidade de insetos para os índices de riqueza, diversidade e equitabilidade nos tratamentos avaliados. Predadores e polinizadores foram mais abundantes no milho geneticamente modificado, e parasitoides, decompositores, sugadores e mastigadores, no milho convencional com inseticida. Diferenças significativas foram detectadas para as espécies Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) e Nusalala tessellata (Gerstaecker), mais abundantes no milho Bt, e Dalbulus maidis e Condylostylus sp.2, mais abundantes no milho convencional.(AU)

Diversity of insects under the effect of Bt maize and insecticides / Diversidade de insetos sob a influência do milho Bt e inseticidas

The genetically modified maize to control some caterpillars has been widely used in Brazil. The effect of Bt maize and insecticides was evaluated on the diversity of insects (species richness and abundance), based on the insect community, functional groups and species. This study was conducted in genetically modified maize MON810, which expresses the Cry1Ab protein from Bacillus thuringiensis Berliner, and conventional maize with and without insecticide sprays (lufenuron and lambda-cyhalothrin) under field conditions in Ponta Grossa (Paraná state, Brazil). Insect samplings were performed by using pitfall trap, water tray trap and yellow sticky card. A total of 253,454 insects were collected, distributed among nine orders, 82 families and 241 species. No differences were observed in the insect community based on the richness, diversity and evenness indices. Predators and pollinators were more abundant in genetically modified maize. Parasitoids, detritivores, sap-sucking herbivores and chewing herbivores were more abundant in conventional maize with insecticide sprays. Significant differences were found for the species Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) and Nusalala tessellata (Gerstaecker) which were most abundant in Bt maize, and Dalbulus maidis and Condylostylus sp.2 in conventional maize.(AU)

O milho geneticamente modificado visando ao controle de lagartas tem sido amplamente utilizado no Brasil. Em estudo de campo realizado em Ponta Grossa (Paraná, Brasil), compararam-se, com base na diversidade (riqueza de espécies e abundância), os efeitos do milho Bt e do controle químico sobre a comunidade de insetos, grupos funcionais e espécies. A comunidade de insetos foi amostrada no milho geneticamente modificado MON810, que expressa a proteína Cry1Ab de Bacillus thuringiensis Berliner, e no milho convencional com e sem a aplicação de inseticidas (lufenuron e lambda-cialotrina). As amostragens foram realizadas por meio da coleta de insetos utilizando-se armadilha de queda, bandeja-dágua e cartão adesivo. Foram coletados 253.454 insetos, distribuídos em nove ordens, 82 famílias e 241 espécies. Não foram observadas diferenças na comunidade de insetos para os índices de riqueza, diversidade e equitabilidade nos tratamentos avaliados. Predadores e polinizadores foram mais abundantes no milho geneticamente modificado, e parasitoides, decompositores, sugadores e mastigadores, no milho convencional com inseticida. Diferenças significativas foram detectadas para as espécies Colopterus sp., Colaspis occidentalis (L.) e Nusalala tessellata (Gerstaecker), mais abundantes no milho Bt, e Dalbulus maidis e Condylostylus sp.2, mais abundantes no milho convencional.(AU)

Bioaccumulation of Pyrethroid in Parasite Wenyonia acuminata (Cestoda: Caryophyllaeidae) and Host fish Synodontis clarias (Linnaeus, 1758) from Lekki Lagoon, Lagos Nigeria

Abstract This study was aimed at determining the concentration of pyrethroid in the surface water, sediment, Weyonia acuminata and Synodontis clarias fish in Lekki lagoon, Lagos, Nigeria. In-situ physicochemical analysis of the surface water was conducted using a calibrated handheld multi-parameter probe (Horiba Checker Model U-10). Intestinal samples from infected and uninfected fish were analyzed for pyrethroid concentrations, microbial colonization, proteins (PRO), superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), reduced glutathione (GSH), malonaldehyde (MDA) and glutathione peroxidase (GPx). The histopathology of infected and uninfected intestinal tissues were analyzed using Haematoxylin and Eosin (H&E) stains and examined under a binocular light microscope (Model 230485). A total of 39 out of 98 S. clarias fish were infected with cestode parasite, Wenyonia acuminate, amounting to 39% parasite prevalence. Among the tested pyrethroids, Cyfluthrin and Alpha cypermethrin had significant sorption of 1.62 and 3.27 respectively from the aqueous phase to the bottom sediment of the lagoon. Pyrethroid concentration was in the order of sediment > parasite> water > intestine> liver. The cholesterol, triglycerides, and LDL (low density lipids) in the parasite were higher than in the host fish (p 0.05). On the other hand, the fish hepatic protein, high density lipids (HDL) and glucose were higher than the levels in the parasites (p 0.05). There was a high prevalence of gut microbes (30 - 40%), which include Salmonella sp, Escherichia coli, Pseudomonas sp and Bacillus sp among individuals infected with gut Cestodes, Wenyonia sp compared with uninfected individual which had higher gut Staphylococcus sp., Klebsiella sp., and Proteus sp. (10- 40%). among the congeners of pyrethroids analyzed, Cyfluthrin > Alpha-Cyermethrin had significant sorption on the sediment, however unlike a benthopelagic fish, no pyrethroid was accumulated in the S. clarias from the sediment. The fish however accumulated Alpha-Cypermethrin from the aqueous phase. The parasite on the other hand accumulated Bathroid significantly from the surface water and bottom sediment which may be linked to the higher stress levels observed in the parasite than the host fish. The parasite in turn inflicted histological alterations on the host intestine, marked by moderate inflammation of mucosa, alteration of the villi microstructure, moderate stunting of the villous structure and moderate fibrosis of villous structure. The study demonstrated the efficiency of histopathological and microbial analysis in biomonitoring studies enteric parasites and early detection of pyrethroid toxicity respectively compared to bioaccumulation analysis.

Resumo Este estudo teve como objetivo determinar a concentração de piretroide nos peixes de águas superficiais, sedimentos, Wenyonia acuminata e Synodontis clarias na lagoa de Lekki, Lagos, Nigéria. A análise físico-química in situ da água de superfície foi realizada usando uma sonda multiparâmetro manual calibrada (Horiba Checker Modelo U-10). Amostras intestinais de peixes infectados e não infectados foram analisadas quanto a concentrações de piretroides, colonização microbiana, proteínas (PRO), superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT), glutationa reduzida (GSH), malonaldeído (MDA) e glutationa peroxidase (GPx). A histopatologia dos tecidos intestinais infectados e não infectados foi analisada usando manchas de Hematoxilina e Eosina (H&E) e examinada sob um microscópio de luz binocular (Modelo 230485). Um total de 39 dos 98 peixes de S. clarias foi infectado com o parasita cestoide Wenyonia acuminata, totalizando 39% de prevalência do parasita. Entre os piretroides testados, ciflutrina e alfa-cipermetrina tiveram sorção significativa de 1,62 e 3,27, respectivamente, da fase aquosa ao sedimento de fundo da lagoa. A concentração de piretroides estava na ordem de sedimentos > parasita > água > intestino > fígado. O colesterol, os triglicerídeos e o LDL (lipídios de baixa densidade) no parasita foram maiores que no peixe hospedeiro (p 0,05). Por outro lado, a proteína hepática dos peixes, os lipídios de alta densidade (HDL) e a glicose foram superiores aos níveis nos parasitas (p 0,05). Houve uma alta prevalência de micróbios intestinais (30-40%), incluindo Salmonella sp., Escherichia coli, Pseudomonas sp. e Bacillus sp. entre indivíduos infectados no intestino com o parasita cestoide Wenyonia sp. em comparação com indivíduos não infectados com Staphylococcus sp., Klebsiella intestinal sp. e Proteus sp. (10-40%). Entre os congêneres dos piretroides analisados, ciflutrina > alfa-cipermetrina teve sorção significativa no sedimento, porém, diferentemente de um peixe bentopelágico, nenhum piretroide foi acumulado no S. clarias do sedimento. No entanto, os peixes acumularam alfa-cipermetrina a partir da fase aquosa. O parasita, por outro lado, acumulou Bathroid significativamente da água superficial e do sedimento do fundo, o que pode estar relacionado aos níveis mais altos de estresse observados no parasita do que no peixe hospedeiro. O parasita, por sua vez, causou alterações histológicas no intestino hospedeiro, marcadas por inflamação moderada da mucosa, alteração da microestrutura das vilosidades, atrofia moderada da estrutura das vilosidades e fibrose moderada da estrutura das vilosidades. O estudo demonstrou a eficiência da análise histopatológica e microbiana nos estudos de biomonitoramento de parasitas entéricos e detecção precoce da toxicidade dos piretroides, respectivamente, em comparação à análise de bioacumulação.

Perfil histométrico hepático em lambaris (Astyanax lacustris) expostos ao inseticida Lambda-cialotrina

A lambda-cialotrina é um inseticida piretróide utilizado no controle de amplo espectro de artrópodes como uma alternativa ao uso de inseticidas persistentes no meio ambiente e apresentam baixa toxicidade para aves e mamíferos. Considerando que a contaminação de ambientes aquáticos pode ocorrer pelo uso doméstico, agrícola ou em pisciculturas, torna-se necessário o estudo deste composto quanto à sua toxicidade e efeitos sobre espécies aquáticas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil histológico assim como a histometria hepática em Astyanax lacustris expostos à lambda-cialotrina na concentração de 10,30 µg L -1 aos 1, 3, 6, 9 e 12 dias pósexposição (dpe). O fígado foi avaliado a partir do índice de alterações histológicas (IAH), seguido de técnicas estereológicas (densidade estrutural volumétrica, densidade de glicogênio e morfometria celular). Os dados foram analisados pela ANOVA, modelo linear misto generalizado. O IAH foi superior nos animais expostos em relação aos controles, não havendo diferenças entre os tempos. Infiltrado leucocitário, hiperemia e núcleos picnóticos em algumas amostras (P<0,05) foram os achados mais prevalentes. Os espécimes expostos aos 1 e 3 dpe tiveram maior densidade de glicogênio hepático em relação aos demais dpe (P<0,05). O volume nuclear dos hepatócitos, nos dias 1 e 6 foi superior ao dos expostos no dia 9. A densidade dos hepatócitos assim como o seu volume foi superior nos grupos controles em relação aos expostos em todos os períodos. Porém, a densidade sinusoidal foi superior nos expostos em comparação aos controles, sugerindo hiperemia vascular. Os resultados obtidos nos permitem concluir que a lambda-cialotrina em dose subletal é capaz de afetar o metabolismo e a estrutura hepática. A toxicidade nos espécimes expostos caracteriza-se pela redução no armazenamento do glicogênio, na densidade estrutural e no volume dos hepatócitos além de maior índice de alterações histológicas.

Lambda-cyhalothrin is a pyrethroid insecticide used to control a broad spectrum of arthropods as an alternative to the use of insecticides that are persistent in the environment and have low toxicity for birds and mammals. Whereas the contamination of aquatic environments can occur by household, agricultural, or fish farms, it is necessary to study this compound as to its toxicity and effects on aquatic species. This study aimed to evaluate the histological profile and liver histometry in Astyanax lacustris exposed to lambda-cyhalothrin at a concentration of 10.30 µg L-1 at 1, 3, 6, 9, and 12-days post-exposure (dpe). The liver was evaluated from histological changes index (HCI), followed by stereological techniques (structural volumetric density glycogen cell density and morphology). Data were analyzed by ANOVA, a general linear mixed model. The HCI was higher in specimens exposed compared to controls, with no difference between the times. Leukocyte infiltration, hyperemia, and pyknotic nuclei were the most prevalent findings, especially from 6 dpe. At 6, 9, and 12 dpe, there was a reduction in hepatic glycogen storage. The nuclear volume of hepatocytes on days 1 and 6 was higher than that exposed on day 9. The hepatocytes density and their volume were higher in the control groups than those exposed in all periods. However, sinusoidal density was higher in exposed individuals compared to controls, suggesting vascular hyperemia. The results allow us to conclude that the lambdacyhalothrin in sublethal dose can affect the liver metabolism and structure. Toxicity in exposed specimens is characterized by reduced glycogen storage, structural density, and volume of hepatocytes, in addition to a higher rate of histological changes.

Avaliação da suscetibilidade de populações de Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) ao inseticida Permetrina, no município de Castanhal, Pará, Brasil

Aedes aegypti é um mosquito amplamente distribuído no mundo que possui grande importância médica, apresentando competência vetorial para diversos vírus como da Febre Amarela (YFV), Dengue (DENV), Chikungunya (CHIKV) e Zika (ZIKV). Diversos métodos de controle foram desenvolvidos na tentativa de combater esses parasitos, no entanto, a utilização rotineira de inseticidas gerou a resistência múltipla à esses produtos. O presente estudo teve como objetivo verificar a susceptibilidade de Ae. aegypti provenientes de seis bairros do município de Castanhal-PA, a permetrina. Para isso, foram coletados exemplares de campo por meio de busca ativa por criadouros. As larvas e pupas foram transferidas para recipientes com água destilada e mantidas em laboratório com temperatura de 26 28ºC, e 12 horas de luminosidade para obtenção de F1. O bioensaio inseticida foi realizado com a geração F1 de Ae. aegypti, utilizando-se permetrina na concentração de 15µg/mL. Os mosquitos testados foram sensíveis ao efeito nocaute da permetrina. A mortalidade das populações de campo no tempo diagnóstico variou de 98,3% a 100%, tendo-se observado em apenas dois bairros a presença de mosquitos que morreram após o tempo diagnóstico. No entanto, a taxa de sobrevivência foi zero após 120 minutos de observação. Dessa forma, concluímos que todas as populações de Ae. aegypti testadas são sensíveis à permetrina.

Aedes aegypti is a mosquito widely distributed in the world that has great medical importance, presenting vectorial competence for various viruses such as Yellow Fever (YFV), Dengue (DENV), Chikungunya (CHIKV) and Zika (ZIKV). Several control methods have been developed in an attempt to combat these parasites, however, the routine use of insecticides has generated multiple insecticide resistance to these products. The present study aimed to verify the susceptibility of Ae. aegypti from six neighborhoods in the municipality of Castanhal-PA, permethrin. For this purpose, field specimens were collected through an active search for breeding sites. The larvae and pupae were transferred to containers with distilled water and kept in the laboratory with a temperature of 26 - 28ºC, and 12 hours of light to obtain F1. The insecticidal bioassay was carried out with the F1 generation of Ae. aegypti, using permethrin at a concentration of 15 µg / mL. The tested mosquitoes were sensitive to the knockout effect of permethrin. The mortality of field populations at the time of diagnosis varied from 98.3% to 100%, having been observed in only two neighborhoods the presence of mosquitoes that died after the time of diagnosis. However, the survival rate was zero after 120 minutes of observation. Thus, we conclude that all populations of Ae. aegypti tested, from the municipality of Castanhal, Pará, are sensitive to permethrin.

IDENTIFICAÇÃO DE DOMÍNIOS CONSERVADOS ASSOCIADOS A RESISTÊNCIA A ACARICIDAS EM Amblyomma sculptum (Acari: Ixodidae)

Este é o primeiro relato da identificação de domínios conservados associados a resistência a acaricidas em Amblyomma sculptum. Na criação de equinos, uma das principais dificuldades é o controle dos carrapatos do complexo Amblyomma cajennense. Vários fatores, como época de aplicação do produto, a base química e a frequência de aplicação, influenciam a eficiência do controle. Assim, considera-se um grande desafio lidar com o desenvolvimento da resistência parasitária. Pouco se sabe sobre resistência no gênero Amblyomma e há poucos estudos. O objetivo do trabalho foi identificar regiões gênicas relacionadas a resistência à acaricidas a base de piretróides e organofosforados em amostras biológicas de Amblyomma sculptum. O trabalho foi desenvolvido em duas etapas. A primeira compreendeu uma pesquisa observacional, com aplicação de um formulário semi-estruturado onde foram levantadas informações para caracterização das propriedades e criadores, assim como o manejo dos acaricidas. A segunda etapa envolveu a parte experimental onde foram realizadas técnicas de biologia molecular para identificação de possíveis regiões gênicas relacionadas a resistência química em A. sculptum. Os carrapatos foram coletados na região Sul de Minas Gerais/Brasil em cavalos naturalmente infestados. Os exemplares foram congelados em ultra freezer -80º C até o processamento. Um total de 24 carrapatos foram macerados com ajuda do Cryocooler® para extração do RNA total e posterior síntese de cDNA, seguida pela PCR. Foram desenhados quatro pares de primers para amplificar as regiões relacionadas com a resistência sendo dois pares de primers para cada base química. As sequências do A. sculptum foram selecionadas de acordo com a similaridade com sequências de outros artrópodes, que já foram relacionadas ao processo de resistência às bases químicas piretróide e organofosforado. Para cada primer foi realizada uma PCR, contabilizando 48 amostras para cada base química. Para o sequenciamento, foram enviadas 2 alíquotas de 20 produtos da PCR, selecionadas de acordo com a intensidade da banda apresentada na eletroforese, totalizando 40 alíquotas, e, após análise dos dados, foi feita uma busca pelo domínio conservado da superfamília de transportadores ABC, relacionada com resistência a múltiplas drogas, no banco de dados Conserved Domain Database do NCBI. Observou-se uma grande semelhança no perfil dos criadores, assim como na caracterização da propriedade, manejo e controle do A. sculptum. Todos os criadores realizam o controle com aplicação de algum produto carrapaticida, estando os piretróides como o grupo químico mais utilizado. A maioria dos entrevistados parece confundir o ciclo e controle do A. sculptum com o R. microplus, o que é um problema claro para o controle. Em relação as análises moleculares, o resultado obtido foi 29 amostras positivas para a região relacionada a resistência a organofosforados e 32 amostras positivas para piretróides. A presença da superfamília dos transportadores ABC sugere que A. sculptum possa apresentar regiões gênicas específicas relacionadas à resistência aos acaricidas a base de piretróides e organofosforados. Esta tese está organizada em duas partes sendo a primeira referente ao referencial teórico e a segunda parte contendo o artigo científico relatando a metodologia e os resultados encontrados.

This is the first study that identifies conserved domains related to the resistance to acaricides in Amblyomna sculptum. On the raising of equines, the control of A. sculptum is one of the biggest challenges to the living stock raisers. There is no study in the literature that tries to explain the molecular mechanisms and their components involved on the development of chemical resistance in A. sculptum. Therefore, the objective of this work was to identify conserved domains related to the resistance to the two most commonly used chemical bases in the control of A. sculptum, the pyrethroids and organophosphates. This work was developed in two stages. The first one comprehended an observational research, with the application of a semi-structured form for the characterization of properties and living stock raisers, and for the acaricides-handling as well. On the second stage, the experimental one, molecular biology techniques were done in order to identify the conserved domains related to the chemical resistance in A. sculptum. 24 specimens of A. sculptum were collected, from naturally infested living stock in properties of southern Minas Gerais. The form was applied on those properties. For the molecular analysis, the 24 A. sculptum specimens had their total RNA extracted, followed by the cDNA synthesis. For the PCR, four pairs of primers were synthesized. On the Primer Blast software it was obtained four pairs of primers; two pairs related to the resistance to organophosphate and two pairs related to the resistance to pyrethroids. The PCR, for each pair of primer, was done using the cDNA of the 24 specimens, totalizing 48 samples for each chemical base. The PCR results were subjected to electrophoresis. For the sequencing, it was sent 20 parts. It was noticed a great similarity on the profile of the living stock raisers, as well as for the characterization of property, A. sculptum handling and control. All rliving stock raisers did the control with the application of some anti-tick product, with the pyrethroids as the most used chemical group. Most of the interviewees seems to confound the cycle and control of A. sculptum with the Rhipicephalus microplus and with Dermacentor nitens, which is problematic. When it comes to the molecular analysis, the obtained result was 29 positive samples to the region associated to the resistance to organophosphate and 32 positive samples to pyrethroids. After data analysis, it was done a search for conserved domains in the Conserved Domain Database (CDD) at NCBI. Related to the sequences of A. sculptum, it was identified two domains, both members of the superfamily of ABC transporters. The presence of this superfamily suggests that the studied species might present specific genic regions related to the resistance to acaricides based on pyrethroids and organophosphates. This thesis is organized in two parts, with the first one concerning the theoretic referential and the second part contenting the scientific article reporting the methodology and the found results.

Behavioral and neurochemical evidence of deltamethrin anxiogenic-like effects in rats / Evidências neuroquímicas e comportamentais do efeito ansiogênico da deltametrina em ratos

Pyrethroid insecticides are extensively used for pest control around the house, flea prevention for pets, and plant sprays for the home and in agriculture. Deltamethrin (DTM) is a Type II pyrethroid insecticide used to control a variety of insects in agriculture and domestic environments. The present study investigated the possible anxiogenic effects of DTM (1, 3, and 10 mg/kg) in rats using behavioral and neurochemical methods. We assessed general locomotor activity and behavior in the elevated plus maze and open field test. Striatal and hippocampal neurotransmitter and metabolite levels were also measured. DTM (i) reduced locomotion and rearing frequency, (ii) slightly increased the duration of immobility, (iii) reduced the time engaged in social interaction, (iv) reduced the percentage of entries into and time spent on the open arms of the elevated plus maze, (v) reduced the number of center crossings in the elevated plus maze, (vi) Striatal and hippocampal neurotransmitter and metabolite levels were also measured. DTM (i) reduced locomotion and rearing frequency, (ii) slightly increased the duration of immobility, (iii) reduced the time engaged in social interaction, (iv) reduced the percentage of entries into and time spent on the open arms of the elevated plus maze, (v) reduced the number of center crossings in the elevated plus maze, (vi) increased striatal serotonin neurotransmitter and its metabolite, and (vii) did not alter motor coordination on the rotarod, grooming duration in the open field test, rectal temperature, or hippocampal neurotransmitter levels. These data suggest that DTM at the present doses and under these experimental conditions presented a similar profile to that of anxiogenic drugs, unrelated with the increased serotonin neurotransmission.(AU)

Inseticidas piretróides são amplamente utilizados para controle de pragas, como na prevenção de pulgas em animais de estimação e sprays de plantas para a casa e na agricultura. Deltametrina (DTM) é um inseticida piretróide tipo II usado para controlar uma variedade de insetos na agricultura e ambientes domésticos. O presente estudo investigou os possíveis efeitos ansiogênicos de DTM (1, 3 e 10 mg/kg) em ratos, utilizando métodos comportamentais e neuroquímicos. Foi avaliada a atividade locomotora geral e comportamento no labirinto em cruz elevado e teste de campo aberto. Os níveis de neurotransmissores e metabólitos no estriado e hipocampo também foram mensurados. DTM (i) reduziu a locomoção e a frequência de levantar, (ii) aumentou da duração da imobilidade, (iii) reduziu o tempo de interacção social, (iv) reduziu a percentagem de entradas e tempo gasto nos braços abertos do elevado labirinto em cruz, (v) reduziu o número de cruzamentos no centro do labirinto em cruz elevado, (vi) aumentou neurotransmissor serotonina e de seu metabólito estriatal, e (vii) não alterou a coordenação motora no rotarod, duração do grooming no teste de campo aberto, temperatura retal, ou níveis de neurotransmissores do hipocampo. Estes dados sugerem que DTM nas presentes doses e sob estas condições experimentais apresentaram um perfil semelhante ao de drogas ansiogénicas, não relacionados ao aumento da serotonina estriatal.(AU)

Efficacy of the d-phenothrin/pyriproxyfen association against mites in naturally co-infested rabbits / Eficácia da associação de d-fenotrina e piriproxifen no controle de ácaros em coelhos naturalmente co-infestados

The aim of the present study was to evaluate the efficacy of the d-phenothrin/pyriproxyfen association against Psoroptes ovis, Cheyletiella parasitivorax, and Leporacarus gibbus infestations in naturally co-infested rabbits. Twenty crossbreed (New Zealand White x California) rabbits concurrently infested by the three mite species were randomly divided in two groups. All rabbits presented with hyperemia, erythema and formation of crusts in the ear canals caused by P. ovis. Infestations by both C. parasitivorax and L. gibbus were considered asymptomatic in all animals.Ten animals were treated with a 4.4% d-phenothrin and 0.148% pyriproxyfen spray formulation until have their body surface uniformly sprayed, including external ear canals. The other ten rabbits remained untreated, serving as control group. Observations were done on days +7, +14, +21, +28, and +35 post-treatment. The d-phenothrin/pyriproxyfen association showed 100% efficacy against the three mite species and was responsible for the remission of psoroptic mange lesions on treated animals. No signs of intoxication were observed. The results indicate that d-phenothrin/pyriproxyfen spray formulation in a single application is an effective and clinically safe option for the control of different mite infestations in rabbits.(AU)

O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficácia da associação de d-fenotrina e piriproxifen no controle de infestações simultâneas por Psoroptes ovis, Cheyletiella parasitivorax e Leporacarus gibbus em coelhos naturalmente co-infestados. Vinte coelhos mestiços (Nova Zelândia Branco x Califórnia) infestados simultaneamente pelas três espécies de ácaros foram divididos aleatoriamente em dois grupos. Todos os coelhos infestados por apresentavam eritema, hiperemia e formação de crostas nas orelhas, causados por P. ovis. Infestações simultâneas por C. parasitivorax e L. gibbus foram considerados assintomáticas em todos os animais. Dez animais foram tratados com uma formulação spray contendo d-fenotrina a 4,4% e piriproxifen a 0,148%, pulverizando toda a superfície corporal de forma uniforme, incluindo a face interna das orelhas. Os outros 10 coelhos não foram t ratados, sendo mantidos como grupo controle. Os animais foram avaliados nos dias 7, 14, 21, 28 e 35 pós-tratamento. A associação de d-fenotrina e piriproxifen foi 100% eficaz no controle das três espécies de ácaros e foi responsável pela remissão das lesões de sarna psoróptica nos animais tratados. Não foram observados sinais de intoxicação. Os resultados indicam que a formulação spray de d-fenotrina e piriproxifen em uma única aplicação é uma opção clinicamente segura e eficaz no controle de infestações por ácaros em coelhos.(AU)

Susceptibility of the horn fly, Haematobia irritans irritans (Diptera: Muscidae), to insecticides in Brazil / Suscetibilidade da mosca-dos-chifres, Haematobia irritans irritans (Diptera: Muscidae), a inseticidas no Brasil

Since horn fly populations became established throughout Brazil, complaints regarding control failure have increased around the country. A broad survey to evaluate the susceptibility of horn flies to both organophosphate (OP) and pyrethroid insecticides was conducted from October 2000 to April 2003. Bioassays using filter papers impregnated with cypermethrin, permethrin or diazinon were conducted on 154 horn fly populations in 14 states and 78 municipalities. Resistance to cypermethrin, the active ingredient present in most insecticide products for horn fly control in Brazil, was detected in 98.46% of the populations, with resistance ratios (RR) ranging from 2.5 to 719.9. Resistance to permethrin (RRs < 6.3) was found in 96.67% of the populations, despite its lack of use. In general, pyrethroid resistance was detected in 97.18% of the horn fly populations, with frequencies greater than 87% in all regions of the country. The status of susceptibility of horn fly populations in Brazil to insecticides can be characterized by high susceptibility to OPs and widespread resistance to pyrethroids, potentially compromising the efficacy of pyrethroid products in most cases. Although some partial results have previously been presented, a general picture of horn fly susceptibility in Brazil is presented here for the first time.(AU)

Desde a dispersão da mosca-dos-chifres, no Brasil, queixas sobre seu controle aumentaram em todo o país. Um amplo levantamento objetivando avaliar a suscetibilidade da mosca a inseticidas organofosforados (OF) e piretróides foi realizado de outubro de 2000 a abril de 2003. Bioensaios com papéis de filtro impregnados com cipermetrina, permetrina ou diazinon foram conduzidos em 154 populações da mosca-dos-chifres de 14 Estados e 78 municípios. Resistência à cipermetrina, ingrediente ativo presente na maioria dos produtos para controle da mosca-dos-chifres no Brasil, foi detectada em 98,46% das populações, com fatores de resistência (FR) variando de 2,5 a 719,9. Resistência à permetrina (FR < 6,3) foi encontrada em 96,67% das populações testadas, apesar da falta de uso de produtos contendo este princípio ativo. Em geral, resistência a piretróides foi detectada em 97,18% das populações, com frequências acima de 87% em todas as regiões do país. A situação da suscetibilidade da mosca-dos-chifres a inseticidas, no Brasil, pode ser caracterizada por uma elevada suscetibilidade aos organofosforados e ocorrência generalizada de resistência aos piretróides, potencialmente comprometendo a eficácia desses produtos na maioria dos casos. Embora resultados parciais tenham sido apresentados anteriormente, um quadro geral da suscetibilidade da mosca-dos-chifres no Brasil é apresentado pela primeira vez.(AU)

Pyrethroid toxicity in silver catfish, Rhamdia quelen / Toxicidade dos piretróides sobre Jundiás, Rhamdia quelen

This study aimed to determine both the lethal and sublethal concentrations of Cypermethrin in young Silver Catfish (Brazilian "Jundiá", Rhamdia quelen) on aquatic environment during 96 hours, as well as to determine the Cypermethrin and Deltamethrin sublethal concentrations during the initial embryonic development period of Rhamdia quelen, and to verify their respective rates of fertilization, hatching and survival. Pyrethroid nowadays is a widely used insecticide, which presents a high toxicity to fish. In order to determine lethal and sublethal concentrations, 120 silver catfish were used; each one had an average weight of 59.58±4.50g and an average size of 20.33±2.34cm. Concentrations used were 0, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 5.0, 10.0, 15.0 and 20.0mg of Cypermethrin per liter of water (mg/L). Fish were exposed to the product in 30-liter fish tanks. In each fish tank there were four fishes and the product was applied three times, i.e., a total of twelve fish were exposed to the product at each application, and a total of 120 fish during the entire experiment (n=120). In order to determine the Cypermethrin and Deltamethrin sublethal concentrations during the initial embryonic development, ovulation induction was performed on female fishes using hormones, and then and egg collection was performed. The eggs were then hydrated and fertilized in Cypermethrin and Deltamethrin in different concentrations: 0.001, 0.01, 0.1, 1.0 and 10.0mg/L of Cypermethrin and 0.001, 0.01, 0.1, 0.5 and 1.0mg/L of Deltamethrin, in addition to the control group (0mg/L). After fertilization, the eggs were kept in containers with the respective pesticides of Cypermethrin and Deltamethrin until hatching, when hatching rate was verified. Then the alevins, from the hatching, were kept on their respective concentrations of Cypermethrin and Deltamethrin so that the survival rate could be analyzed regarding the tested insecticides, during both 12-hour and 24-hour periods. Concerning the... (AU)

O presente estudo teve o objetivo de determinar a concentração letal e subletal da cipermetrina por via hídrica em 96 horas em jundiás (Rhamdia quelen) jovens, determinar a concentração subletal da cipermetrina e da deltametrina durante o período inicial do desenvolvimento embrionário do Rhamdia quelen e verificar suas respectivas taxas de fertilização, eclosão e sobrevivência. Os piretróides são inseticidas amplamente utilizados atualmente e apresentam alta toxicidade para peixes. Para determinação da concentração letal e subletal foram utilizados 120 jundiás com peso médio de 59,58±4,50g e comprimento médio de 20,33±2,34cm. As concentrações utilizadas foram 0; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 5,0; 10,0; 15,0 e 20,0mg de cipermetrina por litro de água (mg/L). Os peixes foram expostos ao produto dentro de aquários com capacidade para 30 litros. Em cada aquário foram colocados quatro peixes e cada tratamento teve três repetições, totalizando doze peixes por tratamento. Para determinar a concentração subletal da cipermetrina e deltametrina na fase de desenvolvimento embrionário foi realizada a indução da ovulação em fêmeas de jundiá através de hormônios, com posterior coleta dos ovos. Os ovos foram hidratados e fertilizados em soluções de cipermetrina e deltametrina em diferentes concentrações, sendo estas: 0,001; 0,01; 0,1; 1,0 e 10,0mg/L para cipermetrina e 0,001; 0,01; 0,1; 0,5 e 1,0mg/L para deltametrina, além do grupo controle (0mg/L). Após a fertilização, os ovos permaneceram em recipientes com os respectivos pesticidas até o momento da eclosão onde foi analisada a taxa de eclosão. Em seguida as larvas, a partir da eclosão dos ovos, foram mantidas nas respectivas concentrações de cipermetrina e deltametrina para analisar a taxa de sobrevivência frente aos inseticidas testados, durante 12 e 24 horas. Em relação as concentrações letais e subletais de jundiás jovens, estes apresentaram-se sensíveis à cipermetrina nas concentrações testadas, ...(AU)

Suscetibilidade acaricida do carrapato do cão Rhipicephalus sanguineus s.l. na região metropolitana de Porto Alegre, Rio Grande do Sul, Brasil

Rhipicephalus sanguineus sensu lato é o carrapato mais comum encontrado em cães de áreas urbanas do sul do Brasil. Este parasita pode ser vetor de patógenos causadores de doenças severas, muitas delas com potencial zoonótico. Tratamentos químicos contra carrapatos podem levar à seleção de resistência e consequentes falhas em seu controle. Infelizmente, pouco se conhece sobre a resistência a acaricidas nesta espécie de carrapato de cães no Brasil. Esta informação é importante para a correta recomendação de controle na prática clínica de pequenos animais. O objetivo deste estudo é analisar a suscetibilidade a acaricidas em R. sanguineus s.l. da área metropolitana de Porto Alegre, sul do Brasil. Entre novembro de 2015 e janeiro de 2017, fêmeas ingurgitadas de R. sanguineus s.l. foram colhidas em dez locais diferentes de cães naturalmente infestados ou do ambiente em casas, abrigos e canis. Como população de referência, foi utilizado um isolado de R. sanguineus s. l. gentilmente cedida pelo laboratório de parasitologia da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Os isolados foram mantidos em incubadoras para permitir a postura de ovos e obter larvas de 14 a 21 dias que foram utilizadas nos bioensaios (teste de pacote larval), com deltametrina, amitraz, fipronil e (teste de imersão larval) com ivermectina. Os dados de mortalidade determinaram as concentrações letais médias (CL50). As CL50 calculadas (em ppm de ingrediente ativo) para a estirpe RJ foram: deltametrina 111,772 (100,824 123,602); amitraz 94,183 (81,912 105,563); fipronil 255,195 (243,885 266,238) e ivermectina 2,850 (2,494 3,190). As CL50s calculadas para deltametrina nos isolados de campo variaram de 30,562 a 173,338 e uma população foi considerada resistente. CL50s para ivermectina variou entre 8,706 e 25,846, e todos os isolados foram considerados resistentes. Todas as populações testadas para amitraz e fipronil foram consideradas susceptíveis. Os resultados revelaram uma notável variação de suscetibilidade à deltametrina, ivermectina, amitraz e fipronil nos isolados de R. sanguineus s.l. estudados. Este estudo documenta pela primeira vez a existência de populações de R. sanguineus s.l. resistentes aos acaricidas deltametrina e ivermectina na região metropolitana de Porto Alegre, Brasil.

Rhipicephalus sanguineus sensu lato (Brown Dog Tick) is the most common tick found in dogs from urban areas of Southern Brazil. This parasite can be vector of pathogens that causes severe diseases, many of them zoonotic. Chemical treatments against ticks can lead to the selection for resistance and consequential failures on their control. Unfortunately, little is known about acaricide resistance on this canine tick species in Brazil, been this information remarkably important to small animal clinical practice. The objective of this study was to analyse acaricide susceptibility of R. sanguineus s.l. from the metropolitan area of Porto Alegre, Southern Brazil. Between November 2015 and January 2017, engorged R. Sanguineus s.l. female were collected in ten different locations, from naturally infested dogs or the environment (homes, shelters and kennels). As reference strain, a R. Sanguineus s.l. from the Federal University of Rio de Janeiro (UFRRJ) was used. The isolates were reared in incubators to allow egg laying and obtain 14- 21 days-old larvae that were used in the bioassays (larval packet test), with deltamethrin, amitraz, fipronil and (larval immersion test) with ivermectin. Mortality data was determinate by the median lethal concentrations (LC50). The calculated LC50s (in ppm of active ingredient) for RJ strain were: deltamethrin 111.772 (100.824 123.602); amitraz 94.183 (81.912 - 105.563); fipronil 255.195 (243.885 266.238) e ivermectin 2.850 (2.494 3.190). Calculated LC50s for deltamethrin in the field isolates ranged from 30.562 to 173.338 and one population was considered resistant. LC50s for ivermectin ranged between 8.706 and 25.846, and all the isolates were considered resistant. All the isolates tested were susceptivel to amitraz and fipronil. The results reveal a notable variation of susceptibility to deltamethrin, ivermectin, amitraz and fipronil for R. sanguineus s.l. isolates studied. This study documents for the first time the existence of acaricide resistant deltamethrin and ivermectin in populations of R. sanguineus s.l. in the metropolitan area of Porto Alegre, Brazil.

Variabilidade genética do canal de sódio voltagem-dependente em populações naturais de Aedes aegypti e Aedes albopictus da Colômbia e do Brasil: importantes mosquitos vetores de arbovírus

O canal de sódio voltagem-dependente (NaV) é fundamental para a sinalização elétrica no sistema nervoso e é o sítio-alvo para Piretróides (PY) e DDT. A resistência knockdown (kdr), causada por alterações no NaV, é portanto, um dos mecanismos que confere resistência a estes inseticidas. Pelo menos 12 mutações não sinônimas foram relatadas em nove códons diferentes no gene do NaV em Aedes aegypti, a maioria delas nos segmentos IIS6 e IIIS6. A mutação kdr Phe1534Cys no segmento IIIS6 é a mais prevalente em todo o mundo, e também foi encontrada em populações asiáticas de Aedes albopictus resistente aos PY. Aqui foi investigada a ocorrência, frequência e distribuição de mutações kdr presentes nos segmentos IIS6 e IIIS6 do NaV em populações naturais de A. aegypti da Colômbia e Brasil e de A. albopictus do Brasil. O DNA de 13 populações de A. aegypti da Colômbia (quatro) e Brasil (nove) e nove de A. albopictus do Brasil foram individualmente extraídos e agrupados por Estado (A. aegypti) e localidade (A. albopictus), amplificados, clonados e sequenciados para os correspondentes segmentos IIS6 e IIIS6 do NaV. Adicionalmente, os indivíduos de cada espécie, para cada localidade foram individualmente genotipados via PCR alelo específica (AS-PCR) para se obter as frequências genotípicas e alélicas para os sítios kdr 1016 e 1534 para A. aegypti, e 1534 para A. albopictus. A área urbana de Foz do Iguaçu foi dividida por estratos, de forma que as frequências genotípicas e alélicas foram então analisadas separadamente e, em seguida, como uma unidade. Nas populações de A. aegypti de ambos os países foram detectados três polimorfismos não sinônimos no NaV (Ile1011Met, Val1016Ile no segmento IIS6 e Phe1534Cys no IIIS6). Já em A. albopictus apenas a mutação Phe1534Cys foi evidenciada em populações brasileiras dos Estados de Paraná (PR) e Rondônia (RO). Substituições restritas ao sítio 1534 (NaVR1) e substituições simultâneas em ambos os sítios 1016 e 1534 (NaVR2) foram observadas em todas as populações de A. aegypti da Colômbia e Brasil. O alelo kdr NaVR1 foi detectado em todas as localidades da Colômbia e Brasil. No Brasil, o alelo kdr NaVR2 foi mais frequente nas localidades da região Sul e Centro-Oeste. Em Foz do Iguaçu, o alelo kdr NaVR2 estava distribuido nos estratos em frequências 55%, com exceção do estrato 1. Por sua parte, em A. albopictus, o alelo 1534Cyskdr variou entre 3% (Marilena/PR e Porto Velho/RO) e 10% (Foz do Iguaçu/PR). Esta é a primeira evidencia de ocorrência e distribuição de uma mutação kdr em A. albopictus para América do Sul. Os resultados aqui apresentados sugerem a necessidade de um uso integrado apropriado de inseticidas na Colômbia e no Brasil, assim como a inclusão de A. albopictus no monitoramento da resistência aos inseticidas, a fim de manter os compostos químicos como uma ferramenta de controle de vetores quando necessário.

The voltage-gated sodium channel (NaV) is critical for electrical signaling in the nervous system and is the target site for Pyrethroids (PY) and DDT. The knockdown resistance (kdr) caused by changes in NaV, is one of the mechanisms that confers resistance to those insecticides. At least 12 non-synonymous mutations were reported at nine different codons in the NaV gene in Aedes aegypti, most of them in the segments IIS6 and IIIS6. The kdr mutation Phe1534Cys in IIIS6 NaV segment is the most prevalent throughout the world, and has also been found in Asian Aedes albopictus populations resistant to PY. Here, we studied the occurrence, frequency and distribution of kdr mutations present in the IIS6 and IIIS6 NaV segments in natural populations of A. aegypti from Colombia and Brazil and A. albopictus from Brazil. The DNA from 13 A. aegypti populations from Colombia (four) and Brazil (nine) and nine from A. albopictus from Brazil were individually extracted and grouped by State (A. aegypti) and location (A. albopictus), amplified, cloned and sequenced to the corresponding IIS6 and IIIS6 NaV segment. In addition, individuals from each location for each species were individually genotyped using PCR specific allele (AS-PCR) for obtaining the genotypic and allelic frequencies for the kdr sites 1016 and 1534 for A. aegypti and 1534 for A. albopictus. The urban area of Foz do Iguaçu was divided by strata, and genotypic and allelic frequencies were analyzed, first by strata and then as a single unit. In A. aegypti populations from both countries three non-synonymous polymorphisms (Ile1011Met, Val1016Ile in IIS6 and Phe1534Cys in IIIS6 NaV segment) in the NaV gene were detected. However, in A. albopictus, only the Phe1534Cys kdr mutation was evidenced in Brazilian populations from the states of Paraná (PR) and Rondônia (RO). Restricted substitutions to 1534 site (NaVR1) and simultaneous substitutions at both 1016 and 1534 sites in (NaVR2) were observed in all A. aegypti populations from Colombia and Brazil. The NaVR1 kdr allele was detected in all locations from Colombia and Brazil. In Brazil, the NaVR2 kdr allele was more frequent in the localities from the South and Central West. In Foz do Iguaçu, the NaVR2 kdr allele was spread in all strata in frequencies 55%, except for the stratum 1. On the other hand, in A. albopictus, the allele 1534Cyskdr ranged from 3% (Marilena/PR and Porto Velho/RO) 10% (Foz do Iguaçu/PR). This is the first evidence of occurrence and distribution of kdr mutation in A. albopictus from South America. The results presented here suggest the need for an appropriate integrated use of insecticides in Colombia and Brazil, as well as the inclusion of A. albopictus monitoring to insecticides resistance in order to maintain the chemical compounds as an efficient vector control tool when necessary.