Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil / Características de virulência, resistência e diversidade genética de estirpes de Salmonella Infantis isoladas de frangos de corte no Brasil

Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the β-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greatSalmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the ß-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greater than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers' production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.er than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers' production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.(AU)

Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos ß-lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters. O cluster B agrupou 33 estirpes, todas positivas para os genes lpfA e agfA, provenientes tanto do aviário quanto do matadouro frigorífico, persistentes durante todo o período do estudo. Este cluster ainda agrupou 18 estirpes clones com similaridade genética superior a 99%, todas isoladas no matadouro frigorífico. A presença dos genes de virulência, associada à persistência das estirpes clones durante um longo período do estudo, alertam para a possibilidade de S. Infantis em formar biofilme, devendo ser constantemente monitorada na cadeia de produção avícola, especialmente no ambiente de abate, de forma a conhecer o perfil das estirpes que podem contaminar o produto final e assim avaliar os perigos que representam para a saúde pública.(AU)

Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil / Características de virulência, resistência e diversidade genética de estirpes de Salmonella Infantis isoladas de frangos de corte no Brasil

Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broiler's production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the β-lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greatSalmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat...(AU)

Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos ß-lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters...(AU)

Characteristics of virulence, resistance and genetic diversity of strains of Salmonella Infantis isolated from broiler chicken in Brazil

ABSTRACT: Salmonella Infantis is frequently associated with human infections worldwide and is transmitted by consumption of contaminated foods, particularly those of animal origin, especially the chicken meat. We aimed to evaluate virulence characteristics, antimicrobial resistance and the genetic similarity of 51 strains of S. Infantis isolated from samples of poultry origin. The strains were isolated from 2009 to 2010 in a company with full cycle of broilers production in the state of São Paulo, Brazil. The antimicrobial susceptibility test was performed and, by PCR, we evaluated the presence of the genes lpfA (hem-adhesion), agfA (hem-biofilm) and sefA (hem-adhesion) and resistance genes to beta-lactams (blaTEM, blaSHV, bla CTX-M and blaAmpC ). The phylogenetic relationship was determined by RAPD-PCR method. Among the drugs tested, the highest percentages of resistance were to amoxicillin (35.3%) and to sulfonamide (15.7%). Eleven antimicrobial resistance patterns were identified (A1 to A11), none of them presented a multiresistance profile (> 3 antimicrobials classes). There was 100% of positivity for the agfA gene, 92.2% for the lpfA gene, and no strain presented the sefA gene. Most of the isolates showed similarities in virulence potential, since they were simultaneously positive for two studied genes, agfA and lpfA (92.2%, 47/51). Of the 18 (35.3%) strains resistant to antimicrobials of the -lactam class, 10 (55.5%) were positive to blaAmpC gene, five (27.8%) for blaCTX-M , two (11.1%) to blaSHV and no strain presented the blaTEM gene. The phylogenetic evaluation has shown the presence of five clusters (A, B, C, D and E) with similarity greater than 80%, and three distinct strains which were not grouped in any cluster. Cluster B grouped 33 strains, all positive for lpfA and agfA genes, from both, the broiler farming facility and the slaughterhouse, persistent throughout all the study period. This cluster also grouped 18 strains clones with genetic similarity greater than 99%, all isolated in the slaughterhouse. The presence of virulence genes associated with persistent strains clones for a long period, warns to the possibility of S. Infantis to form biofilm, and should be constantly monitored in broilers production chain, in order to know the profile of the strains that may contaminate the final product and evaluate the hazards that represents to public health.

RESUMO: Salmonella Infantis é frequentemente associada a infecções humanas no mundo todo sendo transmitida pelo consumo de alimentos contaminados, principalmente aqueles de origem animal, com destaque para a carne de frango. Objetivou-se avaliar características de virulência, resistência antimicrobiana e a similaridade genética de 51 estirpes de S. Infantis isoladas em amostras de origem avícola. As estirpes foram isoladas no período de 2009 a 2010 em uma empresa com ciclo completo de produção de frango de corte, localizada no estado de São Paulo, Brasil. Foi realizado o teste de susceptibilidade antimicrobiana e pela técnica de PCR, foi avaliada a presença dos genes lpfA (fímbria-adesão), agfA (fímbria-biofilme) e sefA (fímbria-adesão) e os genes de resistência aos beta-lactâmicos (bla TEM, blaSHV, blaCTX-M e blaAmpC ). A relação filogenética foi determinada pelo método de RAPD-PCR. Dentre as drogas testadas, os maiores percentuais de resistência foram para amoxacilina com 35,3% e sulfonamida com 15,7%. Onze perfis de resistência aos antimicrobianos foram identificados (A1 a A11), sendo que nenhum deles apresentou perfil de multirresistência (>3 classes de antimicrobianos). Houve 100% de positividade para o gene agfA, 92,2% para o gene lpfA e nenhuma estirpe apresentou o gene sefA. A maioria dos isolados apresentaram semelhanças no potencial de virulência, pois foram positivos simultaneamente para dois genes estudados, agfA e lpfA (92,2% - 47/51). Das 18 (35,3%) estirpes resistentes aos antimicrobianos da classe dos -lactâmicos, 10 (55,5%) foram positivas para o gene blaAmpC , cinco (27,8%) para blaCTX-M , duas (11,1%) para blaSHV e nenhuma estirpe apresentou o gene bla TEM . A avaliação filogenética demonstrou a presença de cinco clusters (A, B, C, D e E) com similaridade superior a 80%, e três estirpes distintas que não foram agrupadas em nenhum dos clusters. O cluster B agrupou 33 estirpes, todas positivas para os genes lpfA e agfA, provenientes tanto do aviário quanto do matadouro frigorífico, persistentes durante todo o período do estudo. Este cluster ainda agrupou 18 estirpes clones com similaridade genética superior a 99%, todas isoladas no matadouro frigorífico. A presença dos genes de virulência, associada à persistência das estirpes clones durante um longo período do estudo, alertam para a possibilidade de S. Infantis em formar biofilme, devendo ser constantemente monitorada na cadeia de produção avícola, especialmente no ambiente de abate, de forma a conhecer o perfil das estirpes que podem contaminar o produto final e assim avaliar os perigos que representam para a saúde pública.

Genes de virulência e diversidade genética em Salmonella spp. isoladas de amostras de origem suína / Virulence genes and genetic diversity in Salmonella spp. isolated from samples of swine origin

A diversificação da produção industrial de alimentos de origem suína e o intercâmbio comercial de animais e seus derivados destinados ao consumo humano podem ser importantes disseminadores de sorovares de Salmonella spp. na cadeia alimentar. Objetivou-se avaliar em 86 cepas de Salmonella spp., isoladas em granja de terminação e no abate de suínos, a ocorrência de três genes de virulência (invA, agfA e lpfA), bem como a similaridade genética entre elas. A ocorrência do gene invA foi verificada em 100% das amostras. O gene lpfA foi detectado em 80,23% (69/86) das cepas, não foi detectado em S. Panama e estava presente em todas as cepas de S. Infantis. O gene agfA foi detectado em 63,95% (55/86) das amostras. S. Agona apresentou positividade para todos os genes de virulência estudados. A análise de homologia entre as cepas agrupou os diferentes sorovares em clusters. A similaridade foi independente do local de isolamento, o que demonstra a presença de clones ao longo da cadeia de produção e a existência de multiplicidade de fontes para a infecção dos animais, como a ração, e a contaminação cruzada das carcaças. A pesquisa de genes de virulência e a avaliação da proximidade gênica permitem a caracterização e um maior entendimento sobre cepas de Salmonella circulantes na cadeia produtiva de suínos e, assim, podem subsidiar medidas de controle durante o processo produtivo com o objetivo de garantir a saúde do consumidor.(AU)

The diversification of industrial food production of swine origin and trade of animals and their derivatives for human consumption may be important disseminators of serovars of Salmonella spp. in the food chain. This study aimed to evaluate 86 strains of Salmonella spp. isolated form in the finishing and slaughter of pigs, the occurrence of three virulence genes (invA, agfa and lpfA), as well as the genetic similarity between them. The occurrence of gene invA was observed in 100% of the samples. The gene lpfA was detected in 80.23% (69/86) strains and is not detected in S. Panama, but present in all strains of S. Infantis. The gene agfA was detected in 63.95% (55/86). S. Agona was positive for all virulence genes studied. The analysis of homology between the different serovars grouped the isolates in clusters. The similarity was regardless of the location of isolation, demonstrating the presence of clones along the production chain and that there are multiple sources for the infection of animals, such as feed, and cross-contamination of carcasses. A survey of virulence genes and evaluation of gene proximity allow characterization and better understanding of Salmonella strains circulating in the pig production chain, thus being able to support control measures during the production process in order to ensure consumer health.(AU)

Caracterização molecular de estafilococos isolados de vacas com mastite subclínica e ordenhadores / Molecular characterization of staphylococci isolated from bovine mastitis and milking workers

Mastitis Test CMT e nove suabes de mão de ordenhadores, de nove propriedades rurais situadas no Município de Jataí, GO. Das amostras coletadas (163 de leite e 9 de suabes de mão), foram identificadas 83 linhagens do gênero Staphylococcus spp., sendo S. aureus (31), S. saprophyticus (29), S. xylosus (17), S. epidermidis (4) e S. intermedius (2). No presente estudo, 35 perfis foram gerados de 83 amostras de Staphylococcus e o perfil IA (64,5%) de S. aureus, IS (44,8%) de S. saprophyticus, VX (35,3%) de S. xylosus e IIE (50%) de S. epidermidis foram os mais prevalentes. Houve predominância de um tipo entre os isolados de S. aureus nos rebanhos. Cepas idênticas foram encontradas em diferentes animais de uma mesma propriedade, assim como houve identidade genética entre cepa oriunda da mão do ordenhador e do animal. Assim, nossos dados mostraram que há variabilidade entre os isolados, mas também similaridade genética de algumas cepas concentradas em determinados locais. A similaridade genética pode compreender um complexo de clones relacionados, sugerindo relação de contaminação e transferência cruzada entre as cepas de origem humana e animal.(AU)

MOLECULAR CHARACTERIZATION OF STAPHYLOCOCCI ISOLATED FROM BOVINE MASTITIS AND MILKING WORKERS. Bacteria isolated for this study were derived from 96 cows(163quarters positive for theCaliforniaMastitis Test(CMT) and 9 swabs taken from the hands of milking staff, on 9 farmsin the municipality ofJataí, state of Goiás, Brazil.Of the samplescollected(163 from milkand 9swabstaken from hands)83strainsof the genusStaphylococcus spp. were identified: S.aureus(31), S. saprophyticus(29), S. xylosus(17), S. epidermidis(4), S. intermedius(2).In this study, 35 profiles were generated from 83samples of Staphylococcus, and profile IA(64.5%) of S. aureus,IS(44.8%) of S. Saprophyticus,VX(35.3%) of S. xylosus and IIE (50%) of S. epidermidis were the most prevalent. There was a predominance of one type among isolates of S. aureusin herds.Identicalstrains were found in different animals of the same farm,as well as genetic identity between the strain isolated from the hand of the milker and the animal. Thus, our data showed thatthere is variability among isolates, but also genetic similarity of some strains concentrated in certain locations.Thegenetic similaritymay comprise acomplex ofrelatedclones, suggesting a relationship of cross-contamination and transfer among strains of human and animal origin.(AU)

Caracterização molecular de estafilococos isolados de vacas com mastite subclínica e ordenhadores / Molecular characterization of staphylococci isolated from bovine mastitis and milking workers

Mastitis Test – CMT e nove suabes de mão de ordenhadores, de nove propriedades rurais situadas no Município de Jataí, GO. Das amostras coletadas (163 de leite e 9 de suabes de mão), foram identificadas 83 linhagens do gênero Staphylococcus spp., sendo S. aureus (31), S. saprophyticus (29), S. xylosus (17), S. epidermidis (4) e S. intermedius (2). No presente estudo, 35 perfis foram gerados de 83 amostras de Staphylococcus e o perfil IA (64,5%) de S. aureus, IS (44,8%) de S. saprophyticus, VX (35,3%) de S. xylosus e IIE (50%) de S. epidermidis foram os mais prevalentes. Houve predominância de um tipo entre os isolados de S. aureus nos rebanhos. Cepas idênticas foram encontradas em diferentes animais de uma mesma propriedade, assim como houve identidade genética entre cepa oriunda da mão do ordenhador e do animal. Assim, nossos dados mostraram que há variabilidade entre os isolados, mas também similaridade genética de algumas cepas concentradas em determinados locais. A similaridade genética pode compreender um complexo de clones relacionados, sugerindo relação de contaminação e transferência cruzada entre as cepas de origem humana e animal.

MOLECULAR CHARACTERIZATION OF STAPHYLOCOCCI ISOLATED FROM BOVINE MASTITIS AND MILKING WORKERS. Bacteria isolated for this study were derived from 96 cows(163quarters positive for theCaliforniaMastitis Test(CMT) and 9 swabs taken from the hands of milking staff, on 9 farmsin the municipality ofJataí, state of Goiás, Brazil.Of the samplescollected(163 from milkand 9swabstaken from hands)83strainsof the genusStaphylococcus spp. were identified: S.aureus(31), S. saprophyticus(29), S. xylosus(17), S. epidermidis(4), S. intermedius(2).In this study, 35 profiles were generated from 83samples of Staphylococcus, and profile IA(64.5%) of S. aureus,IS(44.8%) of S. Saprophyticus,VX(35.3%) of S. xylosus and IIE (50%) of S. epidermidis were the most prevalent. There was a predominance of one type among isolates of S. aureusin herds.Identicalstrains were found in different animals of the same farm,as well as genetic identity between the strain isolated from the hand of the milker and the animal. Thus, our data showed thatthere is variability among isolates, but also genetic similarity of some strains concentrated in certain locations.Thegenetic similaritymay comprise acomplex ofrelatedclones, suggesting a relationship of cross-contamination and transfer among strains of human and animal origin.

Caracterização molecular de estafilococos isolados de vacas com mastite subclínica e ordenhadores

Bacteria isolated for this study were derived from 96c ows (163 quarters positive for the California Mastitis Test (CMT) and 9 swabs taken from the hands of milking staff, on 9 farms in the municipality of Jataí, state of Goiás, Brazil. Of the samples collected (163 from milk and 9 swabs taken from hands) 83 strains of the genus Staphylococcus spp. were identified: S. aureus (31), S. saprophyticus (29), S. xylosus (17), S. epidermidis (4), S. intermedius (2).In this study,35 profiles were generated from 83 samples of Staphylococcus, and profile IA (64.5%) of S. aureus, IS (44.8%) of S. Saprophyticus, VX (35.3%) of S. xylosus and IIE (50%) of S. epidermidis were the most prevalent. There was a predominance of one type among isolates of S. aureus in herds. Identical strains were found in different animals of the same farm, as well as genetic identity between the strain isolated from the hand of the milker and the animal. Thus, our data showed that there is variability among isolates, but also genetic similarity of some strains concentrated in certain locations. The genetic similarity may comprise a complex of related clones, suggesting a relationship of cross-contamination and transfer among strains of human and animal origin.

As bactérias isoladas para o estudo foram oriundas de 96 vacas (163 tetos positivos no California Mastitis Test - CMT e nove suabes de mão de ordenhadores, de nove propriedades rurais situadas no Município de Jataí, GO. Das amostras coletadas (163 de leite e 9 de suabes de mão), foram identificadas 83 linhagens do gênero Staphylococcus spp., sendo S. aureus (31), S. saprophyticus (29), S. xylosus (17), S. epidermidis (4) e S. intermedius (2). No presente estudo, 35 perfis foram gerados de 83 amostras de Staphylococcus e o perfil IA (64,5%) de S. aureus, IS (44,8%) de S. saprophyticus, VX (35,3%) de S. xylosus e IIE (50%) de S. epidermidis foram os mais prevalentes. Houve predominância de um tipo entre os isolados de S. aureus nos rebanhos. Cepas idênticas foram encontradas em diferentes animais de uma mesma propriedade, assim como houve identidade genética entre cepa oriunda da mão do ordenhador e do animal. Assim, nossos dados mostraram que há variabilidade entre os isolados, mas também similaridade genética de algumas cepas concentradas em determinados locais. A similaridade genética pode compreender um complexo de clones relacionados, sugerindo relação de contaminação e transferência cruzada entre as cepas de origem humana e animal.

Genetic similarity between staphylococcus sp isolated from human and hospital settings, and susceptibility to different antimicrobials

One hundred and forty-three samples from human hands and hospital beds were collected at a teaching hospital in the city of Ribeirão Preto/SP by swabs, and placed in BHI broth. Following a 24 h incubation period at 37ºC, they were seeded on Petri dishes containing Agar "Staphylococcus Medium 110". Colonies typical of the genus Staphylococcus were collected and stored at 4ºC until tested for catalase, mannitol, hemolysis, DNAse and coagulase. Strains were analyzed by RAPD-PCR to verify their similarity, and tested for sensitivity to ten different antibiotics. From the ninety-two isolated strains, 67 (72,8%) were coagulase- negative and 25 (27,2%) coagulase-positive. Similarity analysis showed a great heterogeneity among strains, but some presented 100% similarity. Resistance to oxacilin was encountered in 39 (42%) of the strains. Two coagulase- negative strains were resistant to vancomycin, and eleven (12%) were considered multiresistant. Measures such as hand disinfection of the staff and hospital beds and rationalization of antibiotic use could contribute to decrease pathogen transmission and selection pressure, diminishing the frequency and lethality of nosocomial infections.

Foram coletadas 143 amostras de mãos de humanos e camas hospitalares, através de "swabs" no caldo BHI, em um hospital escola da cidade de Ribeirão Preto/SP. As amostras coletadas foram incubadas a 37ºC por 24 horas e após este período as culturas foram semeadas em placas de Petri contendo agar "Staphylococcus Médium 110". As colônias típicas do gênero Staphylococcus foram colhidas e estocados a 4ºC até o momento de elaboração das provas de catalase, manitol, hemólise, DNAse e coagulase. As cepas isoladas foram analisadas através da técnica de RAPD-PCR para verificar o grau de similaridade. A sensibilidade das cepas isoladas foi testada frente a 10 diferentes antibióticos. Das 92 cepas de Staphylococcus sp isoladas, 67 (72,8%) foram identificados como Staphylococcus coagulase-negativas e 25 (27,2%) como Staphylococcus coagulase-positivas. A análise de similaridade mostrou uma grande heterogeneidade entre as cepas, entretanto foram isoladas algumas cepas com 100% de similaridade. Resistência a oxacilina foi encontrada em 39 (42%) cepas. Duas cepas de estafilococos coagulase-negativos mostraram-se resistentes a vancomicina. Onze cepas (12%) de estafilococos foram consideradas multirresistentes. Medidas de desinfecção das mãos de pessoal e dos leitos hospitalares e a racionalização do uso indiscriminado de antibióticos podem contribuir para a queda da transmissão de patógenos e diminuição da pressão de seleção, e conseqüentemente diminuindo a freqüência e letalidade das infecções nosocomiais.

Molecular genetic differentiation of avian Escherichia coli by RAPD-PCR

Escherichia coli is one of the most important bacterial avian pathogens and a common inhabitant of the gastrointestinal tract of animals. Most pathogenic E. coli can not be differentiated biochemically or by classic microbiologic methods. Molecular typing methods, particularly PCR, facilitated epidemiological and ecological studies of bacteria. Here we describe the application of a random amplified polymorphic DNA- polymerase chain reaction (RAPD-PCR) for molecular genetic differentiation of E. coli isolates in Iran. In this study 58 E. coli isolates including 4 standard strains, 3 food originated isolates, 33 avian isolates, 8 isolates form diarrheic calves and 10 isolates from unweaned diarrheic lambs were analyzed by RAPD-PCR using primer 1247(5/-AAG AGC CCG T-3/). The RAPD analysis showed that these isolates could be grouped into 33 RAPD types and avian isolates were discriminated into 29 genotypes. It was shown that the primer could not differentiate E. coli isolated from lambs. Discriminatory index for entire isolates was 0.912 and for avian isolates was 0.990. We concluded that RAPD-PCR can be used as a method for molecular differentiation of E. coli isolates.

Escherichia coli é um dos patógenos aviários mais importantes e um habitante comum do trato gastrointestinal de animais. A maioria das cepas patogênicas não pode ser diferenciada por métodos bioquímicos ou outros métodos microbiológicos clássicos. Métodos de tipagem molecular, particularmente PCR, têm facilitado os estudos epidemiológicos e ecológicos a respeito desse microrganismo. Nesse estudo, descrevemos a aplicação do RAPD-PCR para a diferenciação molecular de isolados de E.coli do Irã. No estudo, 58 isolados, incluindo 4 isolados padrão, 3 isolados de alimentos, 33 isolados de aves, 8 isolados de bezerros diarréicos e 10 isolados de carneiros diarréicos foram analisados por RAPD-PCR com o primer 1247 (5'-AAG AGC CCG T-3'). A análise mostrou que esses isolados podiam ser agrupados em 33 tipos RAPD, sendo os isolados de aves agrupados em 29 genótipos diferentes. Verificou-se que o primer utilizado não diferenciou os isolados de carneiros. O índice discriminatório para todos os isolados foi 0,912 e para os isolados de aves foi 0,990. Concluiu-se que o RAPD-PCR pode ser usado como método para diferenciação molecular de isolados de E. coli.

Analysis of the genetic diversity of vancomycin-resistant Staphylococcus aureus

Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and methicillin-resistant coagulase-negative staphylococci (MRCoNS) are among the most frequent causes of hospital infections worldwide, thus justifying the increasing use of vancomycin. In this study, we evaluated the presence of glycopeptide-resistant staphylococci, in 41 patients hospitalized in the Clinical Hospital of the Federal University of Uberlândia in Uberlândia, MG, who were being treated with vancomycin. All isolates were plated on Mueller-Hinton agar containing vancomycin. Vancomycin resistance was confirmed by surface growth after incubation for 24-48 h at 35ºC. Heteroresistance was evaluated by plating with a large inoculum (10(8) CFU/mL). One patient with nephritis who was on a hemodialysis program was diagnosed with the phenotype isolate of vancomycin-intermediate Staphylococcus aureus (VISA) (CIM = 8 mug/mL) and in eight patients, strains of heteroresistant Staphylococcus corresponding to the hVISA phenotype were isolated. In addition to the extended use of vancomycin, other risk factors associated with the presence of these microorganisms included the use of three or more antimicrobial agents, surgery, and three or more invasive procedures. Molecular analysis by randon amplified polymorphic DNA polymerase chain reaction (RAPD-PCR) showed two clusters involving two samples each one of them, in surgical patients, with temporal and spatial relationship and isolates similarity concerning the susceptibility range to antimicrobial agents.

Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA) e Staphylococcus coagulase negativo resistente à meticilina (MRCoNS) são os agentes mais freqüentes em infecções hospitalares mundialmente, justificando o incremento no uso de vancomicina. Neste estudo avaliamos a presença de Staphylococcus resistentes aos glicopeptideos em 41 pacientes, em uso de vancomicina, hospitalizados no Hospital de Clínicas da Universidade Federal de Uberlândia em Uberlândia-MG. Todos os isolados foram semeados em agar Mueller-Hinton acrescido do antimicrobiano. A resistência a vancomicina foi confirmada por crescimento após incubação por 24-48 horas a 35ºC. A heterorresistência foi avaliada por semeadura com inóculo mais denso (10(8) UFC/mL). Um paciente com nefrite, no programa de hemodiálise teve o fenótipo de Staphylococcus aureus com resistência intermediária à vancomicina (VISA) (CIM= 8 mig/mL) e em oito pacientes as amostras apresentaram heterorresistência (hVISA). Além do uso prévio de vancomicina outros fatores de risco incluindo três ou mais antimicrobianos, cirurgia e três ou mais procedimentos invasivos, foram observados. A análise molecular foi realizada por amplificação randômica de DNA polimórfico em reação em cadeia da polimerase (RAPD-PCR) mostrando dois clusters com duas amostras cada um, em pacientes cirúrgicos, com relação temporal espacial e com perfil de susceptibilidade semelhantes quando frente à vários outros antimicrobianos.

Chronic infection of cystic fibrosis patient airways by a single clone of Burkholderia cepacia: replacement of non-mucoid to mucoid morphotype

Mucoid Burkholderia cepacia morphotype emerged within a nine year follow-up of a cystic fibrosis patient. Clinical data suggested a linkage between the mucoid phenotype isolation and the deterioration of the patient's condition. Despite of the phenotypic variation, molecular typing showed that the patient was chronically infected with B. cepacia complex isolates belonging to a same genetic clone.

O presente trabalho descreve a emergência de cepas mucoides do complexo B. cepacia em um paciente com Fibrose Cística dentro de um acompanhamento bacteriológico prospectivo de nove anos. Os dados clínicos sugerem a associação entre o isolamento do morfotipo mucoide e a deterioração clínica do paciente. Apesar da variação fenotípica, os testes moleculares mostraram que o paciente manteve-se cronicamente infectado por cepas de mesma origem clonal.

Chronic infection of cystic fibrosis patient airways by a single clone of Burkholderia cepacia: replacement of non-mucoid to mucoid morphotype

Mucoid Burkholderia cepacia morphotype emerged within a nine year follow-up of a cystic fibrosis patient. Clinical data suggested a linkage between the mucoid phenotype isolation and the deterioration of the patient's condition. Despite of the phenotypic variation, molecular typing showed that the patient was chronically infected with B. cepacia complex isolates belonging to a same genetic clone.

O presente trabalho descreve a emergência de cepas mucoides do complexo B. cepacia em um paciente com Fibrose Cística dentro de um acompanhamento bacteriológico prospectivo de nove anos. Os dados clínicos sugerem a associação entre o isolamento do morfotipo mucoide e a deterioração clínica do paciente. Apesar da variação fenotípica, os testes moleculares mostraram que o paciente manteve-se cronicamente infectado por cepas de mesma origem clonal.

Chronic infection of cystic fibrosis patient airways by a single clone of Burkholderia cepacia: replacement of non-mucoid to mucoid morphotype

Mucoid Burkholderia cepacia morphotype emerged within a nine year follow-up of a cystic fibrosis patient. Clinical data suggested a linkage between the mucoid phenotype isolation and the deterioration of the patient's condition. Despite of the phenotypic variation, molecular typing showed that the patient was chronically infected with B. cepacia complex isolates belonging to a same genetic clone.

O presente trabalho descreve a emergência de cepas mucoides do complexo B. cepacia em um paciente com Fibrose Cística dentro de um acompanhamento bacteriológico prospectivo de nove anos. Os dados clínicos sugerem a associação entre o isolamento do morfotipo mucoide e a deterioração clínica do paciente. Apesar da variação fenotípica, os testes moleculares mostraram que o paciente manteve-se cronicamente infectado por cepas de mesma origem clonal.