Occurrence of ticks in dogs in a hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil / Ocorrência de carrapatos em cães de população hospitalar no Espírito Santo

Ticks, along with fleas, are considered the main ectoparasites affecting dogs in Brazil. The literature is rich in reports on the occurrence of ticks, which are vectors of diseases in both dogs and humans. The study of the epidemiology of these arthropods provides important data that can help control the infestation in residential areas where dogs are present. Thus, the study of their occurrence in urban areas and veterinary services is very important. The aim of the present study was to determine the occurrence of ticks in dogs in a veterinary hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil. Over a one-year period (July 2012 to July 2013), 1483 dogs brought to veterinary services in south-eastern Brazil were examined. Among the dogs examined, 8.97% presented tick infestation, of which 100% were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Given that this species of tick acts as a vector for diseases, it is important that the official health services monitor the occurrence of infestation in dogs and humans, in order to identify diseases transmitted by these ticks in this region.(AU)

Os carrapatos, juntamente com as pulgas, são considerados, no Brasil, como os principais ectoparasitas do cão. A literatura é rica em relatos considerando a ocorrência de carrapatos, que são vetores de doenças para cães e humanos. O estudo da epidemiologia de artrópodes é um dado importante que pode ajudar a controlar a infestação em áreas domiciliadas com a presença de cães. Nesse sentido, o estudo de sua ocorrência em áreas urbanas e ou mesmo em serviços médicos veterinários é importante. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência de carrapatos em cães em uma população hospitalar do estado de Espírito Santo, Brasil. Durante um ano (julho de 2012 a julho de 2013), foram examinados 1483 cães atendidos em serviços hospitalares no sudeste do Brasil. Entre os cães examinados, 8,97% apresentaram infestação de carrapatos, sendo 100% deles identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Uma vez que se trata de uma espécie de carrapato que atua como vetor de doenças, é importante que os serviços oficiais de saúde mantenham um monitoramento da ocorrência de infestação tanto em cães como em humanos, a fim de identificar doenças transmitidas por esses carrapatos nesta região.(AU)

Occurrence of ticks in dogs in a hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil / Ocorrência de carrapatos em cães de população hospitalar no Espírito Santo

Ticks, along with fleas, are considered the main ectoparasites affecting dogs in Brazil. The literature is rich in reports on the occurrence of ticks, which are vectors of diseases in both dogs and humans. The study of the epidemiology of these arthropods provides important data that can help control the infestation in residential areas where dogs are present. Thus, the study of their occurrence in urban areas and veterinary services is very important. The aim of the present study was to determine the occurrence of ticks in dogs in a veterinary hospital population in the state of Espírito Santo, Brazil. Over a one-year period (July 2012 to July 2013), 1483 dogs brought to veterinary services in south-eastern Brazil were examined. Among the dogs examined, 8.97% presented tick infestation, of which 100% were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Given that this species of tick acts as a vector for diseases, it is important that the official health services monitor the occurrence of infestation in dogs and humans, in order to identify diseases transmitted by these ticks in this region.(AU)

Os carrapatos, juntamente com as pulgas, são considerados, no Brasil, como os principais ectoparasitas do cão. A literatura é rica em relatos considerando a ocorrência de carrapatos, que são vetores de doenças para cães e humanos. O estudo da epidemiologia de artrópodes é um dado importante que pode ajudar a controlar a infestação em áreas domiciliadas com a presença de cães. Nesse sentido, o estudo de sua ocorrência em áreas urbanas e ou mesmo em serviços médicos veterinários é importante. O objetivo do presente estudo foi verificar a ocorrência de carrapatos em cães em uma população hospitalar do estado de Espírito Santo, Brasil. Durante um ano (julho de 2012 a julho de 2013), foram examinados 1483 cães atendidos em serviços hospitalares no sudeste do Brasil. Entre os cães examinados, 8,97% apresentaram infestação de carrapatos, sendo 100% deles identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato. Uma vez que se trata de uma espécie de carrapato que atua como vetor de doenças, é importante que os serviços oficiais de saúde mantenham um monitoramento da ocorrência de infestação tanto em cães como em humanos, a fim de identificar doenças transmitidas por esses carrapatos nesta região.(AU)

Ocorrência de carrapatos em Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) na Caatinga, Nordeste do Brasil / Occurrence of ticks in Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) in Caatinga biome, northeastern Brazil

A Caatinga é um bioma exclusivamente brasileiro e um dos mais diversificados do mundo, abrigando grande variedade faunística. Este estudo objetivou relatar a presença de carrapatos em tamanduás Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) atendidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga, Petrolina-PE, Brasil. De fevereiro de 2010 a fevereiro de 2016, 23 T. tetradactyla foram recebidos e inspecionados para avaliação da presença de carrapatos. A identificação foi realizada pela observação das características morfológicas e pela utilização de chaves taxonômicas. Aproximadamente 8,69% (2/23) dos animais apresentavam parasitismo por carrapatos. Os ixodídeos foram encontrados fixados nas regiões ventral e cervical, e identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato (cinco fêmeas), Amblyomma auricularium (uma larva, 18 ninfas e uma fêmea) e Amblyomma sp. (seis larvas). Este estudo relata o parasitismo inédito de larva de A. auricularium em T. tetradactyla no semiárido pernambucano, bem como reafirma a maior afinidade por membros da superordem Xenarthra. O parasitismo de R. sanguineus s.l. em tamanduá-mirim pode estar relacionado ao compartilhamento do mesmo habitat com cães domésticos infestados. O parasitismo sobre animais silvestres em novas localidades onde não foi registrado previamente deve ser estudado para ampliação do conhecimento sobre a distribuição geográfica dos ixodídeos no Brasil.(AU)

The Caatinga is an exclusively Brazilian biome and one of the most diverse in the world, housing a great variety faunal. Southern Tamandua (Linnaeus, 1758), known as collared anteater, can be found throughout the country. The present study aimed to report the presence of ticks on anteaters treated at the Conservation Center and Wildlife Management of Caatinga, Petrolina, Pernambuco, Brazil. From February 2010 to February 2016, 23 T. tetradactyla from the municipalities of Juazeiro (BA) Casa Nova (BA), Sento Sé (BA), Nonato (PI), Petrolina (PE), Great Pond (PE ) and Willow (PE), have been received and inspected to evaluate the presence of ticks, which were later collected with the help of anatomical tweezer and stored in tubes containing 70% alcohol. The identification was carried out by observation of morphological characteristics in stereomicroscope and use of taxonomic keys. Approximately 8.69% (2/23) of the animals had parasitism by ticks. The Ixodids were found fixed on ventral and cervical regions and were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato (five female), parasitizing the anteater 1 coming from Petrolina-PE; Amblyomma auricularium (one larva, 18 nymphs and a female) and Amblyomma sp. parasitizing the anteater 2 coming from Salgueiro-PE. This study reports the novel parasitism by larva of A. auricularium in T. tetradactyla in semiarid of Pernambuco ; and reaffirms the higher affinity of this ixodid by members of the superorder Xenarthra. It was possible to determine the parasitism of R. sanguineus s.l. in collared anteater, the which may be related to the sharing of the same habitat with domestic dogs infested. The parasitism of wild animals in new locations where they were not previously registered must be stimulated to expand the knowledge of the geographical distribution of ixodids in Brazil.(AU)

Ocorrência de carrapatos em Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) na Caatinga, Nordeste do Brasil / Occurrence of ticks in Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) in Caatinga biome, northeastern Brazil

A Caatinga é um bioma exclusivamente brasileiro e um dos mais diversificados do mundo, abrigando grande variedade faunística. Este estudo objetivou relatar a presença de carrapatos em tamanduás Tamandua tetradactyla (Linnaeus, 1758) atendidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga, Petrolina-PE, Brasil. De fevereiro de 2010 a fevereiro de 2016, 23 T. tetradactyla foram recebidos e inspecionados para avaliação da presença de carrapatos. A identificação foi realizada pela observação das características morfológicas e pela utilização de chaves taxonômicas. Aproximadamente 8,69% (2/23) dos animais apresentavam parasitismo por carrapatos. Os ixodídeos foram encontrados fixados nas regiões ventral e cervical, e identificados como Rhipicephalus sanguineus sensu lato (cinco fêmeas), Amblyomma auricularium (uma larva, 18 ninfas e uma fêmea) e Amblyomma sp. (seis larvas). Este estudo relata o parasitismo inédito de larva de A. auricularium em T. tetradactyla no semiárido pernambucano, bem como reafirma a maior afinidade por membros da superordem Xenarthra. O parasitismo de R. sanguineus s.l. em tamanduá-mirim pode estar relacionado ao compartilhamento do mesmo habitat com cães domésticos infestados. O parasitismo sobre animais silvestres em novas localidades onde não foi registrado previamente deve ser estudado para ampliação do conhecimento sobre a distribuição geográfica dos ixodídeos no Brasil.(AU)

The Caatinga is an exclusively Brazilian biome and one of the most diverse in the world, housing a great variety faunal. Southern Tamandua (Linnaeus, 1758), known as collared anteater, can be found throughout the country. The present study aimed to report the presence of ticks on anteaters treated at the Conservation Center and Wildlife Management of Caatinga, Petrolina, Pernambuco, Brazil. From February 2010 to February 2016, 23 T. tetradactyla from the municipalities of Juazeiro (BA) Casa Nova (BA), Sento Sé (BA), Nonato (PI), Petrolina (PE), Great Pond (PE ) and Willow (PE), have been received and inspected to evaluate the presence of ticks, which were later collected with the help of anatomical tweezer and stored in tubes containing 70% alcohol. The identification was carried out by observation of morphological characteristics in stereomicroscope and use of taxonomic keys. Approximately 8.69% (2/23) of the animals had parasitism by ticks. The Ixodids were found fixed on ventral and cervical regions and were identified as Rhipicephalus sanguineus sensu lato (five female), parasitizing the anteater 1 coming from Petrolina-PE; Amblyomma auricularium (one larva, 18 nymphs and a female) and Amblyomma sp. parasitizing the anteater 2 coming from Salgueiro-PE. This study reports the novel parasitism by larva of A. auricularium in T. tetradactyla in semiarid of Pernambuco ; and reaffirms the higher affinity of this ixodid by members of the superorder Xenarthra. It was possible to determine the parasitism of R. sanguineus s.l. in collared anteater, the which may be related to the sharing of the same habitat with domestic dogs infested. The parasitism of wild animals in new locations where they were not previously registered must be stimulated to expand the knowledge of the geographical distribution of ixodids in Brazil.(AU)

Ixodidae fauna of domestic dogs in Parana, southern Brazil / Fauna ixodídica em cães domésticos no Paraná, Sul do Brasil

The present study aimed to contribute towards identification and registration of tick species that parasitize dogs in rural and urban areas of three mesoregions of Paraná, southern Brazil, and to estimate the rate of occurrence of each species. Fifty-six dogs with ticks living in three mesoregions: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) and Centro Sul Paranaense (CSP), were used in the study. From these 56 dogs, 253 ticks were collected and were identified and morphologically characterized according to the species. Among all the ticks, 69.6% were identified as belonging to the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.); 28.1% as Amblyomma aureolatum and 2.4% as Amblyomma ovale. Among the dogs in MC that were evaluated, 57.7% were parasitized by R. sanguineus s. l., 38.5% by A. aureolatum and 3.8% by A. ovale; while in COP, 72.4% of the dogs were parasitized by A. aureolatum and 27.6% by R. sanguineus s. l.. In CSP, one tick was obtained, which was identified as A. aureolatum.(AU)

O presente estudo objetivou contribuir com a identificação e o registro das espécies de carrapatos que parasitam cães de áreas rurais e urbanas de três mesorregiões do Paraná, Sul do Brasil, e estimar a taxa de ocorrência de cada espécie. Cinquenta e seis cães com carrapatos, provenientes das mesorregiões: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) e Centro Sul Paranaense (CSP) foram utilizados no estudo. Dos 56 cães, foram coletados 253 carrapatos que foram identificados e caracterizados morfologicamente de acordo com a espécie. Do total de carrapatos, 69,6% foram identificadas como pertencentes à espécie Rhipicephalus sanguineus s. l.; 28,1% como Amblyomma aureolatum e 2,4% como Amblyomma ovale. Dentre os animais avaliados, provenientes da MC, 57,7% estavam parasitados por R. sanguineus s. l., 38,5% por A. aureolatum e 3,8% por A. ovale; enquanto na COP 72,4% dos cães foram parasitados por A. aureolatum e 27,6% por R. sanguineus s. l.. Na CSP foi obtido um carrapato, identificado como A. aureolatum.(AU)

Avaliação molecular de patógenos transmitidos por carrapatos em cães

Os carrapatos são importantes vetores para a difusão de diversas doenças tanto para animais quanto para humanos e o avanço das técnicas moleculares para a detecção de patógenos responsáveis por causar morbidade e mortalidade em cães tem sido de grande relevância na Medicina Veterinária. O objetivo do presente estudo foi detectar, por ferramentas de diagnóstico molecular, a presença de patógenos transmitidos por carrapatos em cães, assim como nos ixodídeos vetores, de áreas no entorno de uma Unidade de Conservação do Estado do Rio de Janeiro. No estudo foi dada ênfase à identificação de organismos da ordem Piroplasmida e de espécies do complexo Borrelia burgdorferi sensu lato e às possíveis coinfecções. Visando alcançar os objetivos propostos, foram coletadas amostras de sangue de 130 cães, machos e fêmeas, e um total de 303 carrapatos que os parasitavam, na região de Vargens (Vargem Grande e Vargem Pequena) e Guaratiba, próximo ao Parque Estadual da Pedra Branca. Foi extraído DNA genômico do sangue e dos carrapatos, sendo eles da espécie Rhipicephalus sanguineus sensu lato e Amblyomma sculptum, e submetido a amplificações específicas. Os resultados da PCR e sequenciamento genético foram utilizados para verificar as espécies de patógenos que ocorrem na região, acometendo os cães e circulando no local. Foi identificada a presença de 2,3% de amostras de sangue de cães positivas para a espécie Babesia vogeli, além de 13,1% para Borrelia burgdorferi sensu lato. Em ixodídeos foram detectados 14,9% deste último agente. A coinfecção foi encontrada em um animal (0,77%). É possível concluir que os cães residentes próximos ao Parque Estadual da Pedra Branca, que é uma unidade de conservação (e ecoturismo), possuem contato com microorganismos da espécie Babesia vogeli e Borrelia burgdorferi sensu lato. E que ixodídeos podem estar infectados com a mesma bactéria. Podendo assim, haver a transmissão desses agentes para outras espécies de carrapato, animais silvestres que vivem no local, e assumindo extrema relevância por ser uma doença com potencial zoonótico e ser uma zona onde o homem tem acesso.

Ticks are important vectors for the spread of several diseases, both animals and humans and the advancement of molecular techniques for the detection of pathogens responsible for causing morbidity and mortality in dogs has been of great relevance in Veterinary Medicine. The purpose of present study was to detect, by molecular diagnostic tools, a presence of tick-borne pathogens in dogs, as well as in vectors ixodids, from áreas surrounding a Conservation Unit of the Rio de Janeiro state. The study emphasized the identification of organisms of the order Piroplasmida and species of the Borrelia burgdorferi sensu lato complex and also to possible co-infections. Aiming to reach the proposed objectives, blood samples were collected from 130 male dogs and females, and a total of 303 ticks that parasitized them, in the region of Vargens (Vargem Grande and Vargem Pequena) and Guaratiba, close to Pedra Branca State Park. Genomic DNA was extracted from blood and ticks, being the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato and Amblyomma sculptum, and subjected to specific amplifications. The results of PCR and genectic sequencing were used to verify the species of pathogens that occur in the region, affecting dogs and circulating in the área. The presence of 2.3% of blood samples from positive dogs was identified as Babesia vogeli, plus 13,1% for Borrelia burgdorferi sensu lato. In ixodids, 14,9% of the latter agent was detected. Coinfection was found in one animal (0.77%). It is possible to conclude that dogs residing close to Pedra Branca State Park, which is a conservation unit (and ecotourism), have contact with microorganisms of the Babesia vogeli Borrelia burgdorferi sensu lato species. And that ixodids may be infected with the same bacteria. So, transmission of these agents to other tick species, animals wild animals that live in the place, and assuming extreme relevance for being a desease with zoonoctic potential and be na área where men have access.

AGENTES TRANSMITIDOS POR CARRAPATOS E FAUNA IXODÍDICA EM CÃES DO PARANÁ

Os carrapatos são ectoparasitas que podem transmitir diversos agentes patogênicos aos animais e seres humanos. A distribuição desses vetores varia de acordo com as características ambientais e a disponibilidade de hospedeiros de cada região. No Brasil, existem várias espécies parasitando cães. Dessa forma, o conhecimento das espécies de carrapatos que ocorrem em uma região é importante para determinar e precaver as possíveis doenças transmitidas por esses vetores e o risco de suas ocorrências. Nos cães com hemoparasitoses transmitidas por carrapatos, os sinais clínicos são semelhantes e inespecíficos. O diagnóstico baseado na identificação dos agentes infecto-parasitários é importante para avaliar o potencial zoonótico e o melhor tratamento. No Paraná existem poucos estudos que identificaram os carrapatos em cães e os agentes transmitidos por esses vetores. O presente trabalho foi dividido em dois capítulos. O primeiro capítulo objetivou identificar as espécies de carrapatos que parasitam os cães nas mesorregiões geográficas: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) e Centro Sul Paranaense (CSP), e determinar a ocorrência de cada espécie por mesorregião. Foram coletadas amostras de carrapatos de 26 cães provenientes da mesorregião MC, 29 da COP e um da CSP. Os carrapatos foram retirados da pele dos cães com a utilização de pinça e acondicionados em tubos com álcool isopropílico. Dos 56 cães foram coletados 253 carrapatos que foram caracterizados morfologicamente de acordo com a espécie. Do total de carrapatos, 69,6% foram identificados como pertencentes à espécie Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), 28,1% como Amblyomma aureolatum e 2,4% como A. ovale. Dos 26 cães da mesorregião MC, 57,7% estavam parasitados por R. sanguineus s. l., 38,5% por A. aureolatum e 3,8% por A. ovale. Na mesorregião COP dos 29 cães parasitados, 72,4% eram por A. aureolatum e 27,6% por R. sanguineus s. l.. Na CSP foi obtida uma amostra, identificada como A. aureolatum. O segundo capítulo objetivou descrever as alterações clínicas e hematológicas observadas nos cães com carrapato; determinar a soroocorrência para piroplasmas nos cães das mesorregiões estudadas; investigar a presença de Babesia sp., Ehrlichia sp. e outros agentes da família Anaplasmataceae nos cães; e descrever os resultados hematológicos e bioquímicos dos cães infectados com Rangelia vitalii, E. canis e agentes da família Anaplasmataceae. Cinquenta e seis cães com carrapato foram avaliados por meio da história clínica, exames físicos e hematológicos, ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e reação em cadeia da polimerase (PCR). Foi realizado o sequenciamento genético das amostras positivas na PCR para Ehrlichia sp. e Babesia sp. Amostras de sangue dos 56 cães foram obtidas por punção da veia cefálica ou jugular, acondicionadas em tubos estéreis: com anticoagulante ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) para realização do hemograma, exame de camada leucocitária e PCR; e em tubos sem anticoagulante para a obtenção do soro para a sorologia. Os principais sinais clínicos observados nos cães com carrapato foram: depressão, anorexia, desidratação e febre. As principais alterações hematológicas nos cães com carrapato foram: anemia, leucocitose, neutrofilia e eosinofilia. A taxa de soropositividade no ELISA para piroplasmas foi de 76% na MC e 64,3% na COP. O cão da CSP foi soronegativo. Um cão procedente da mesorregião MC foi positivo na PCR para Babesia sp., contudo, o produto da PCR foi sequenciado e gerou sequências de DNA que foram 100% idênticas às amostras de R. vitalii; um cão da COP foi positivo na PCR para Ehrlichia sp., e no sequenciamento genético a amostra revelou 100% de identidade com E. canis; e um cão da MC foi positivo para a família Anaplasmataceae. As principais alterações nos exames do cão infectado por R. vitalii foram anemia, leucocitose, neutrofilia e trombocitopenia; hipoalbuminemia e aumento nos valores de uréia, AST, GGT, bilirrubina direta e total. No cão infectado por E. canis verificou-se anemia, leucocitose, neutrofilia e linfocitose; hipoalbuminemia e aumento da proteína total, bilirrubina direta, globulinas e ALT. No cão positivo para a família Anaplasmataceae verificou-se eosinofilia e hipoalbuminemia. Os resultados desse estudo indicam um risco potencial para a exposição dos cães para carrapatos das espécies R. sanguineus s. l., A. aureolatum e A. ovale, assim como para agentes transmitidos por eles, como a R. vitalii, E. canis, B. canis e agentes a família Anaplasmataceae, nas mesorregiões estudadas; possibilitaram a obtenção de dados de soroocorrência para piroplasmas, ainda não descrita no estado, consiste na detecção molecular e sequenciamento genético de R. vitalii e o primeiro sequenciamento genético de E. canis do Paraná.

Ticks are ectoparasites that can transmit various pathogenic agents to animals and humans. The distribution of these vectors varies according to the environmental characteristics and host availability of each region. In Brazil there are several species parasitizing dogs. Thus, knowledge of the tick species that occur in a region is important to determine and preclude the possible diseases transmitted by these vectors and the risk of occurrence. Dogs with tick-borne hemoparasitosis show non-specific and similar clinical signs. The diagnosis based on the identification of the infectious-parasitic agents is important to evaluate the zoonotic potential and the best treatment. In Paraná there are few studies that identified the ticks in dogs and the agents transmitted by these vectors. The present work was divided in two chapters. The first chapter aimed to identify the species of ticks that parasitize dogs in the geographic midland regions: Metropolitana de Curitiba (MC), Centro Oriental (COP) e Centro Sul Paranaense (CSP), and determine the occurrence of each species by midland region. Samples of ticks were collected from 26 dogs from the MC midland region, 29 from the COP and one from the CSP. The ticks were removed from the dogs skin using tweezers and packed in tubes with isopropyl alcohol. Of the 56 dogs were collected 253 ticks that were characterized morphologically according to the species. Of the total number of ticks, 69.6% were identified as belonging to the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato (s. l.), 28.1% as Amblyomma aureolatum and 2.4% as A. ovale. Of the 26 dogs of the MC midland region, 57.7% were parasitized by R. sanguineus s. l., 38.5% by A. aureolatum and 3.8% by A. ovale. In the COP midland region of the 29 parasitized dogs, 72.4% were by A. aureolatum and 27.6% by R. sanguineus s. l.. In CSP, a sample, identified as A. aureolatum, was obtained. The second chapter aimed to describe the clinical and hematological changes observed in dogs with ticks; to determine the serooccurrence for piroplasms in dogs of the midland regions studied; to investigate the presence of Babesia sp., Ehrlichia sp. and other agents of the Anaplasmataceae family in dogs; and to describe the hematological and biochemical results of dogs infected with Rangelia vitalii, E. canis and agents of the Anaplasmataceae family. Fifty-six dogs with ticks were evaluated through clinical history, physical and hematological exams, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and polymerase chain reaction (PCR). Was performed the gene sequencing of PCR positive samples for Ehrlichia sp. and Babesia sp. Blood samples from the 56 dogs were obtained by puncture of the cephalic or jugular vein, placed in sterile tubes: with anticoagulant ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) to perform the blood count, buffy coat and PCR; and in tubes without anticoagulant to obtain serum for serology. The main clinical signs observed in dogs with ticks were: depression, anorexia, dehydration and fever. The main hematological changes in dogs with ticks were: anemia, leukocytosis, neutrophilia and eosinophilia. The seropositivity rate in ELISA for piroplasms was 76% in MC and 64.3% in COP. The CSP dog was seronegative. A dog from the MC mesoregion was positive in the PCR for Babesia sp., nevertheless the PCR product was sequenced and generated DNA sequences that were 100% identical to the R. vitalii samples; one COP dog was positive in PCR for Ehrlichia sp., and in the gene sequencing of 100% identity sample with E. canis; and one MC dog was positive for the Anaplasmataceae family. The main alterations in the examinations of the dog infected by R. vitalii were anemia, leukocytosis, neutrophilia and thrombocytopenia; hypoalbuminemia and increased urea, AST, GGT, and total bilirubin levels. In the dog infected with E. canis the anemia, leukocytosis, neutrophilia, lymphocytosis, hypoalbuminemia and total protein increase, direct bilirubin, globulins and ALT, were observed. In the dog positive for the Anaplasmataceae family, eosinophilia and hypoalbuminemia were observed. The results of this study indicate a potential risk for the exposure of dogs to ticks of the species R. sanguineus s. l., A. aureolatum and A. ovale, as well as to agents transmitted by them, such as R. vitalii, E. canis, B. canis and agents of the Anaplasmatacea family, in the midland regions studied; made it possible to obtain serooccurrence data for piroplasms, not yet described in the state, consists of the molecular detection and gene sequencing of R. vitalii and the first gene sequencing of E. canis from Paraná.

Detecção de Anaplasma platys em cães e em carrapatos: padronização de qPCR e análise epidemiológica no estado do Rio de Janeiro, Brasil e na região ocidental de Cuba

Este trabalho objetivou padronizar um novo método de diagnóstico da infecção por Anaplasma platys, e investigar a circulação deste agente em cães na microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro, Brasil, e cães e carrapatos em duas províncias da ilha de Cuba, analisando aspectos epidemiológicos associados à infecção causada por esta bactéria em cães. Um novo método de reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) foi padronizado com alvo no gene citrato sintase (gltA) para a identificação de A. platys em cães naturalmente infectados. Os oligoiniciadores e a sonda foram desenhados para amplificar um fragmento de 84 pares de base baseado em sequências do gene gltA de A. platys disponíveis no GenBank. 186 amostras de sangue de cães da microrregião de Itaguaí, Rio de Janeiro, Brasil, foram testados pela qPCR. As mesmas amostras foram testadas pela citologia e reação em cadeia da polimerase nested (nPCR, 16S rDNA) para determinar o desempenho da qPCR frente à essas técnicas. 17,20% das amostras testadas pela qPCR foram positivas, significativamente mais do que detectado pela nPCR (13,98%). A técnica de qPCR foi mais específica que a citologia, em virtude dos resultados falsopositivos obtidos pela microscopia óptica. A prevalência de A. platys em cães da microrregião de Itaguaí foi de 14,4%. Cães com menos de seis meses, infestados por carrapatos, que possam maior tempo restrito ao ambiente doméstico e sem abrigo são fatores associados a infecção por este hemoparasito em cães na região do estudo. Durante investigação de A. platys realizada em Cuba, 100 amostras de sangue foram coletadas de cães residentes em quatro cidades localizadas nas províncias de Habana e Mayabeque. Ao inspecionar os animais, carrapatos encontrados foram coletados, identificados e criteriosamente agrupados, formando um total de 49 pools. Amostras de DNA extraídas do sangue dos cães e de carrapatos foram submetidas a nPCR (16S rDNA). Amostras positivas na nPCR foram também submetidas a PCR convencional (gene gltA), e os produtos foram sequenciados. Somente a espécie Rhipicephalus sanguineus sensu lato foi encontrada em cães cubanos, e 10,2% (n=5/49) desses carrapatos somado aos 16,0% (n=16/100) de cães foram considerados positivos para A. platys. Todas as sequências analisadas dos genes gltA e 16S rDNA, respectivamente, mostraram uma identidade de 99-100% com sequências de A. platys reportadas em outros países. A análise filogenética mostrou dois clusters definidos para o gene 16S rDNA e três clusters definidos para o gene gltA. Com base no gene gltA, a sequência de aminoácidos deduzidos demonstrou dois pontos de mutações não-sinônimas nas posições 88 e 168 comparados com sequência de referência DQ525687. Um estudo preliminar sobre os aspectos epidemiológicos associados com a infecção por A. platys demonstrou nenhuma associação estatística com as variáveis avaliadas (p > 0,05). O presente estudo além de relatar a primeira evidência de A. platys em ambos cães e carrapatos em Cuba, também apresenta pela primeira vez o desenvolvimento de um novo método de qPCR que contribui para o avanço da pesquisa envolvendo A. platys. O estudo epidemiológico realizado no Brasil permitiu identificar fatores importantes na ocorrência da anaplasmose canina, enquanto em Cuba, pode-se concluir que mais investigações são necessárias para avaliar quais os fatores decisivos na transmissão e dispersão de A. platys nesse país

This work aimed to standardize a new method of diagnosis of infection by Anaplasma platys, and investigate the circulation of this agent in dogs in the Itaguai microregion, Rio de Janeiro, Brazil, and dogs and ticks in two provinces of the island of Cuba, analyzing epidemiological aspects associated with infections caused by this bacterium in dogs. A new real-time polymerase chain reaction method (qPCR) was patterned to target the citrate synthase gene (gltA) for the identification of A. platys in naturally infected dogs. The primers and probe were designed to amplify a fragment of 84 base pairs based on gltA gene sequences of A. platys available in GenBank. 186 blood samples of dogs from Itaguai microregion, Rio de Janeiro, Brazil, were tested by qPCR. The same samples were tested by cytology and nested polymerase chain reaction (nPCR, 16S rDNA) to determine the performance of qPCR front of these techniques. 17.20% of the samples tested positive by qPCR were significantly more than that detected by nPCR (13.98%). The qPCR technique was more specific than cytology, due to false-positive results obtained by optical microscopy. The prevalence of A. platys in dogs from Itaguai microregion was 14.4%. Dogs less than six months, infested by ticks, that spend the most of the time restrict to domestic environment and without shelter are factors associated with infection by this hemoparasite in dogs in the study area. During research, A. platys held in Cuba, 100 blood samples were collected from residents dogs in four cities located in the provinces of Havana and Mayabeque. When inspecting the animals, found ticks were collected, identified and carefully grouped, forming a total of 49 pools. DNA extracted from blood samples from dogs and ticks were subjected nPCR (16S rDNA). Positive samples in nPCR were also subjected to conventional PCR (gltA gene), and the products were sequenced. Only the species Rhipicephalus sanguineus sensu lato was found in Cuban dogs and 10.2% (n=5/49) of these ticks added to 16.0% (n=16/100) dogs were considered positive for A. platys. All sequences analyzed of the gltA and 16S rDNA genes, respectively, showed a 99-100% identity with sequences from A. platys reported in other countries. Phylogenetic analysis showed two clusters defined for the 16S rDNA gene and three clusters defined for the gltA gene. Based on the gltA gene, the deduced amino acid sequence showed two points of non-synonymous mutations at positions 88 and 168 compared to the reference sequence DQ525687. A preliminary study on the epidemiological aspects associated with infection with A. platys showed no statistical association with the variables studied (p> 0.05). This study also to report the first evidence of A. platys in both dogs and ticks in Cuba also presents for the first time the development of a new qPCR method that contributes to the advancement of research involving A. platys. The epidemiological study in Brazil allowed us to identify significant factors in the occurrence of canine anaplasmosis, while in Cuba, it can be concluded that more research is needed to assess what the deciding factors in the transmission and spread of A. platys in that country.