Early maturation of corpus luteum in rabbits - effect of sildenafil citrate on luteolytic capacity in the early luteal period

Background: Prostaglandin F2 alpha (PGF2 α) binds to the specific receptor (PTGFR) on the corpus luteum (CL) in mammals, inducing regression of the CL structure (luteolysis) and initiating a new cycle. While PGF2 α is effective only on mature CL, the immature CL structure (early luteal phase) resists PGF2 α. In this study, sildenafil citrate, which is used to increase blood flow in the genital organs for treating specific pregnancy issues in women, was administered during the early luteal phase in a rabbit model to test the hypothesis of enhancing blood flow to the CL, thereby promoting earlier maturation and enabling a response to PGF2 α. Materials, Methods & Results: The study was conducted in 2 sub-studies: clinical and molecular. A large number of rabbits were initially included in the sub-studies to ensure a sufficient number of pseudo-pregnant rabbits. Ovulation in rabbits was induced with buserelin acetate and was considered as day 0 of the study. The sub-studies were continued with rabbits whose pseudo-pregnancies were confirmed according to progesterone (P4 ) results. As a result, the studies were continued with a total of 41 pseudo-pregnant New Zealand female rabbits, 21 of which were included in the clinical sub-study and 20 in the molecular sub-study. In both sub-studies, on day 3 of the luteal period, rabbits in the treatment group received 5 mg/kg sildenafil citrate and all rabbits received a single dose of exogenous PGF2 α on day 4 to induce luteolysis. In the clinical sub-study, echotexture and intraovarian blood flow changes in the ovaries were determined by ultrasonography (USG) examination. In the molecular sub-study, the expression changes of Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha (HIF1A) and Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) related to angiogenesis, Steroidogenic Acute Regulatory Protein (StAR) related to P4 metabolism, Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2 (PTGS2) related to prostaglandin (PG) mechanism and 15-Hydroxyprostaglandin Dehydrogenase (HPGD) genes at mRNA level were determined using Real Time Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) in CL tissues obtained with ovariohysterectomy (OVH) at 1 and 12 h after PGF2 α injection. In addition, blood samples were collected for determine P4 levels from all rabbits. In the clinical sub-study; there was no difference between the groups in mean gray values (MGV), whereas there was a significant decrease in both pulsatile index (PI) and resistance index (RI) values at 40 min after PGF2 α injection (P < 0.05). In the molecular sub-study, it was determined that sildenafil citrate had no significant effect (P > 0.05) on the expression levels 1 and 12 h after PGF2 α injection. According to the results of the molecular sub-study, no significant effect of sildenafil citrate on the mRNA expression levels in the investigated genes was detected (P > 0.05). However, within each group, differences were found according to OVH time after PGF2 α injection. It was observed that PTGS2 and HPGD mRNA expressions decreased at the 12th h compared to the 1st h, while HIF1A expression increased (P < 0.05). Discussion: According to the results obtained from clinical and molecular sub-studies, it was determined that a single dose of sildenafil citrate (5 mg/kg) applied on the 3rd day of the luteal period did not contribute to the maturation process of the CL, did not increase blood flow, and was insufficient to break the resistance of the CL against PGF2 α applied on the 4th day of the luteal period. However, a significant decrease in the PI value at the 40th min after PGF2 α injection suggests that sildenafil citrate has a supportive effect, and that this decrease is also seen in the RI value, suggesting that its effect is insufficient against the vasoconstrictive effect of PGF2 α.

Preoperative subcutaneous sildenafil injection increases random flap survival in rats

Purpose: To investigate the effect of subcutaneous sildenafil on random flap survival. Methods: Fourteen Wistar rats, which were divided in to two groups, were used for this experimental study. Rats in the sildenafil group received subcutaneous sildenafil injections daily for seven days before flap elevation. At the end of the treatment period, 9x3 cm dorsal skin flaps were elevated and reinserted back into their place in all of the animals. Necrotic and whole flaps areas were recorded on graph papers. Seven days after the flap elevation samples for histological examination were taken and angiographies were performed to visualize the flap vascularization. Results: The calculated average percentage of necrotic flap areas were 18.29% and 42.26% in the sildenafil and control group respectively.(p=0.0233). In selected angiography images, vessels were found to be more prominent in the sildenafil group. The average number of capillary formations under light microscopy was higher in the sildenafil group (p= 0.0286). Conclusion: The subdermal high dose sildenafil has a positive effect on flap survival.(AU)

Evaluation of prophylactic and therapeutic effects of sildenafil on acute radiation proctitis in rats

Purpose: To investigate the prophylactic and therapeutical effects of sildenafil in a model of acute radiation proctitis (ARP). Methods: All experimental procedures of this study was examined by histopathological, immunohistochemical and transmission electron microscopic analysis. Results: Our histopathological evaluations indicated significant increases in lesion severity, cryptic apsis, cryptitis, cryptic distortion, reactive atypia and infiltration depth of the control (proctitis) group. While the prophylaxis group and the treatment group had significantly lower scores. High-dose group showed similar results as prophylaxis group. Histopathological findings of the prophylaxis group was more significant than the treatment group. Immunoreactivities of IL-1β, FGF-2, TNF-α and HIF-1α increased in the control group especially in the epithelial and cryptic regions. On the contrary, sildenafil application caused significant decreases of inflammatory markers in all treatment groups, specifically better results in the prophylaxis group. Conclusion: The sildenafil has anti-inflammatory effects on ARP, as well as protective effects against ARP and the protective effect of sildenafil surpasses its therapeutic effect histopathologically.(AU)

Electroretinography and immunohistochemistry of retina in rabbits treated with sildenafil citrate / Eletrorretinografia e imuno-histoquímica da retina de coelhos tratados com citrato de sildenafil

Sildenafil citrate is a type-5 phosphodiesterase inhibitor (PDE-5), able to inhibit type-6 phosphodiesterase (PDE-6) as well, providing clinical benefits and paraeffects, some of them potentially related to the retina. The effects of the sildenafil on the retrobulbar and retinal circulation were studied in 27 adult male rabbits of the White New Zealand breed. The electric activity of the retina was evaluated before and at the end of the treatments, and immunohistochemistry studies were conducted. An amplitude increase of the b wave was found in the mixed response of cones and rods after 7 days of treatment with sildenafil citrate. However, in the other evaluations and periods, the values did not differ from the basal ones. Through immunohistochemistry, no significant decrease of the expression of PDE-5 and PDE-6 proteins was observed. Based on the results obtained, it is possible to admit that the sildenafil citrate did not change the expression of PDE-5 and PDE-6, neither the electroretinographic activity of the retina of male rabbits of the White New Zealand breed(AU)

O citrato de sildenafil é um inibidor da fosfodiesterase do tipo 5 (PDE-5), capaz de inibir também a fosfodiesterase do tipo 6 (PDE-6), proporcionando benefícios clínicos e paraefeitos, alguns deles potencialmente relacionados à retina. Foram estudados efeitos do sildenafil sobre a circulação retrobulbar e a retiniana em 27 coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia Branco. Avaliou-se a atividade elétrica da retina antes e ao término dos tratamentos e realizaram-se estudos à imunoistoquímica. Encontrou-se aumento da amplitude da onda b na resposta mista de cones e de bastonetes, após 7 dias de tratamento com citrato de sildenafil. Entretanto, nas demais avaliações e períodos, os valores não divergiram dos basais. Pela imunoistoquímica, não se observou diminuição significativa da expressão das proteínas PDE-5 e PDE-6. Com base nos resultados obtidos, é possível admitir que o citrato de sildenafil não alterou a expressão de PDE-5 e PDE-6, tampouco, a atividade eletrorretinográfica da retina de coelhos machos da raça Nova Zelândia Branco(AU)

Sildenafil citrate on retrobulbar and retinal circulation of rabbits / Citrato de sildenafil sobre a circulação retrobulbar e retiniana de coelhos

The effects of sildenafil on retrobulbar and retinal circulation were studied in 18 adult male, albino, homozygous rabbits, of the New Zealand White breed, randomly divided into 3 groups of 6 animals, for drug treatment at a dose of 3.5mg kg-1 every 24 hours, for 7, 15 and 30 days. Nine animals used for control were treated with saline solution at 0.9%. It was evaluated intraocular pressure (IOP), mean arterial pressure (MAP), ocular perfusion pressure (PPO), B-mode ultrasonography and fluorescein angiography before and at the end of treatments. A slight decrease in results of IOP, MAP and PPO after treatment with sildenafil was evident, however, there was no statistical significance. It was observed significant increased diameter of the ophthalmic artery after 7 and 30 days of treatment and decreased mean arterial pressure after 7, 15 and 30 days of treatment, with no statistical difference. On fluorescein angiography, it was observed that the arterial, arteriovenous and venous stages initiated more rapidly in animals after treatment, with significant difference on the arteriovenous stage at the 7th and 15th days. It was possible to admit that the sildenafil citrate improves blood circulation in the retina of rabbits, by increasing the speed of blood flow and decreasing the perfusion pressure.(AU)

Os efeitos do sildenafil sobre a circulação retrobulbar e a retiniana foram estudados em 18 coelhos machos adultos, albinos, homozigotos, da raça Nova Zelândia Branco, distribuídos aleatoriamente em 3 grupos de 6 animais, para tratamento com o fármaco na dose de 3,5mg kg-1 a cada 24 horas, por 7, 15 e 30 dias. Nove animais foram utilizados para controle, tratados com solução fisiológica a 0.9%. Foram avaliadas a pressão intraocular (PIO), a pressão arterial média (PAM) e a pressão de perfusão ocular (PPO), ultrassonografia em modo-B e a angiografia fluoresceínica, antes e ao término dos tratamentos. Evidenciou-se discreta diminuição nos resultados da PIO, da PAM e da PPO após tratamento com sildenafil, entretanto não houve significância estatística. Observou-se aumento significativo do diâmetro da artéria oftálmica após 7 e 30 dias de tratamento e diminuição da pressão arterial média após 7, 15 e 30 dias de tratamento, sem diferença estatística. À angiografia fluoresceínica, observou-se que as fases arterial, artério-venosa e venosa iniciaram-se mais rapidamente nos animais após o tratamento, com diferença significativa na fase artério-venosa ao 7o e 15o dias. Foi possível admitir que o citrato de sildenafil melhora a circulação de sangue na retina de coelhos, através do aumento da velocidade do fluxo de sangue e diminuição da pressão de perfusão.(AU)

ANÁLISE HISTOLÓGICA, MORFOMÉTRICA, EXPRESSÃO DE GENES, PROTEÍNAS E WESTERN BLOT NA RETINA DE RATOS COM GLAUCOMA INDUZIDO E TRATADOS COM CITRATO DE SILDENAFIL

O glaucoma é a principal causa global de cegueira irreversível e o número de pessoas com glaucoma em todo o mundo aumentará para 111,8 milhões em 2040, mesmo com os tratamentos vigentes. Deste modo, enseja uma necessidade de desenvolver terapias neuroprotetoras que possam ser usadas para reduzir os efeitos perniciosos do glaucoma, como a morte de células ganglionares da retina (CGR). Avanços na compreensão da fisiopatologia do glaucoma é um fator chave na compreensão da patogênese da neuropatia glaucomatosa. Neste contexto a isquemia retiniana desempenha um papel central em várias doenças da retina. A patogênese da isquemia retiniana envolve alterações temporais da morfologia e morfometria da retina assim como mudanças na expressão gênica e protéica. O Citrato de Sildenafila (SC) mostrou efeito protetor nos modelos de isquemia/reperfusão (I/R) com efeitos neuroprotetores. Contudo, a administração oral de CS, em humanos, encontra inúmeros efeitos colaterais, tais como redução da pressão arterial, dores de cabeça, rubor e congestão nasal são concomitantes, assim como pacientes com moderada a grave doença cardiovascular ou aqueles submetidos a terapia a base de nitrato apresentam riscos secundários aumentados para efeitos cardiovasculares adversos. Deste modo, propomos que a administração tópica de CS pode ser uma alternativa à via oral e também ser igualmente neuroprotetor no glaucoma e podem minimizar os riscos indesejados no uso sistêmico desse fármaco, além de oferecer uma nova abordagem para a intervenção terapêutica na patogênese da neuropatia glaucomatosa. Caso nossos resultados sejam positivos, em um estudo tão abrangente, pode levar a um ensaio clínico deste fármaco seguro e promissor em pacientes com glaucoma.

Glaucoma is the leading global cause of irreversible blindness and the number of people with glaucoma worldwide will increase to 111.8 million by 2040, even with current treatments. Thus, there is a need to develop neuroprotective therapies that can be used to reduce the deleterious effects of glaucoma, such as retinal ganglion cell death (RBC). Advances in understanding the pathophysiology of glaucoma are a key factor in understanding the pathogenesis of glaucomatous neuropathy. In this context, retinal ischemia plays a central role in various diseases of the retina. The pathogenesis of retinal ischemia involves temporal changes in retinal morphology and morphometry as well as changes in gene and protein expression. Sildenafil Citrate (SC) showed protective effect in the ischemia / reperfusion (I / R) models with neuroprotective effects. However, oral administration of CS in humans finds numerous side effects such as reduced blood pressure, headaches, flushing and nasal congestion are concomitant, as well as patients with moderate to severe cardiovascular disease or those undergoing nitrate therapy have increased secondary risks for adverse cardiovascular effects. Thus, we propose that the eye drops administration of CS may be an alternative to the oral route and also be equally neuroprotective in glaucoma and may minimize the undesirable risks in the systemic use of this drug, as well as offer a new approach for the therapeutic intervention in the pathogenesis of neuropathy glaucomatous. If our results are positive, in such a comprehensive study, it may lead to a clinical trial of this safe and promising drug in patients with glaucoma.

Impacto do pneumoperitônio na função renal em ratos pré-tratados com sildenafil

A laparoscopia tem sido cada vez mais empregada na rotina médica e veterinária com o intuito de promover intervenções cirúrgicas e diagnósticas menos invasivas. Apesar de seus benefícios, há evidências de que a insuflação abdominal pode levar à isquemia dos órgãos, seguida pela injúria de reperfusão. Algumas medicações tem sido utilizadas na tentativa de prevenir ou minimizar os danos que podem ser causados pela injúria isquemia/reperfusão. O presente estudo teve por objetivo avaliar se o uso do sildenafil via oral, antes da realização do pneumoperitôneo, seria capaz de atenuar estes efeitos da isquemia/reperfusão. Foram utilizados 26 ratos Wistar machos, divididos em 3 grupos: controle (6), Sham (10) e S/P (10). O grupo S/P foi suplementado com 1mg/kg de citrato de sildenafil via oral. Os animais dos grupos Sham e S/P foram submetidos ao pneumoperitônio por 60 minutos, com pressão intra-abdominal de 12mmHg. A artéria carótida direita foi dissecada e canulada para que fossem colhidas amostras sanguíneas e avaliadas variáveis de oxigenação e ventilação (pressão parcial de oxigênio, pressão parcial de gás carbônico e saturação de oxigênio). Durante o procedimento também foram avaliadas variáveis hemodinâmicas (frequência cardíaca, frequência respiratória e pressão arterial média). Após 24 horas os animais foram submetidos à eutanásia e foram colhidos os rins para dosagem do estresse oxidativo, através da mensuração da atividade das enzimas antioxidantes superóxido dismutase, glutationaperoxidase e catalase, além do subproduto da peroxidação lipídica, o hidroperóxido. Os resultados observados em relação às variáveis hemodinâmicas e também de oxigenação e ventilação, não apresentaram diferença quando comparados os diferentes momentos dentro de um mesmo grupo, e na comparação entre os grupos. Nos valores encontrados para a atividade das enzimas antioxidantes foi similar no grupo S/P e controle. Foi observado que a atividade das enzimas glutationa peroxidase e catalase apresentaram considerável aumento, ao passo que a superóxido dismutase teve importante queda. O subproduto da peroxidação lipídica, hidroperóxido, também foi menor nos grupos controle e S/P, quando comparado ao grupo Sham. Tais resultados indicam que tanto o grupo controle, como o grupo S/P apresentam uma maior capacidade de proteção contra a agressão oxidativa. Sendo assim, pode-se concluir que o citrato de sildenafil, quando utilizado antes da realização do pneumoperitôneo foi capaz de diminuir o estresse oxidativo causado pela injúria de isquemia e reperfusão.

Laparoscopy has been increasingly used in medical and veterinary routine in order to promote less invasive surgical and diagnostic interventions. Despite its benefits, there is evidence that abdominal insufflation can lead to ischemia of the organs, followed by reperfusion injury. Some medications have been used in attempts to prevent or minimize the damage that can be caused by injury ischemia/reperfusion. This study aimed to assess whether the use of oral sildenafil, prior to the pneumoperitoneum, was able to mitigate these effects of ischemia/reperfusion. We used 26 male Wistar rats, divided in 3 groups: control (6) Sham (10) and S/P (10). The S/P group was supplemented with 1 mg/kg of oral sildenafil citrate. The animals of the sham group and S/P were subjected to pneumoperitoneum for 60 minutes with intra-abdominal pressure of 12mmHg. The right carotid artery was dissected and cannulated in order to collect blood samples and evaluated oxygenation and ventilation variables (partial pressure of oxygen, partial pressure of carbon dioxide and oxygen saturation). During the procedure, hemodynamic variables were also evaluated (heart rate, respiratory rate and mean arterial pressure). After 24 hours the animals were euthanized and their kidneys were collected for dosage of oxidative stress by measuring the activity of antioxidant enzymes superoxide dismutase, catalase and glutationaperoxidase, besides the by-product of lipid peroxidation, hydroperoxide. The results observed for the hemodynamic variables and also oxygenation and ventilation, showed no difference when comparing the diferente times whithin the same group, and compared between groups. The values found for the antioxidant enzyme activity were similar in the S/P and control group. It was observed that the activities of the enzymes glutathione peroxidase and catalase were markedly increased, while superoxide dismutase had a significant decrease. The by-product of lipid peroxidation, hydroperoxide, was also lower in the control groups and S/P when compared to the sham group. These results indicate that the control group, like the S/P group have a greater ability to protect against oxidative insult. Thus, it can be concluded that sildenafil citrate when used prior to the pneumoperitoneum was able to reduce the oxidative stress caused by ischemia and reperfusion injury.

EFEITO DE DIFERENTES FRAÇÕES INSPIRADAS DE OXIGÊNIO SOBRE A AÇÃO ANTI-HIPERTENSIVA PUMONAR DO SILDENAFIL

O sildenafil é um agente anti-hipertensivo, cuja ação pode ser modificada por diferentes frações inspiradas de oxigênio (FiO2). Comparam-se os efeitos do oxigênio puro (FiO2 > 90%) ou do ar ambiente (FiO2 = 21%) na ação cardiopulmonar do sildenafil em ovinos com embolia pulmonar aguda (EPA). Trinta e dois ovinos anestesiados sob ventilação mecânica (34.9 ± 5.4 kg) foram aleatoriamente distribuídos em quatro grupos (n = 8): FiO2 > 90% sem intervenção (Controle90); EPA induzida com microesferas com FiO2 > 90%, seguido 30 minutos após por placebo (Emb90); ou EPA seguida após 30 minutos por sildenafil (0.7 mg/kg, IV durante 30 minutos) com FiO2 > 90% (Emb+Sild90) ou FiO2 = 21% (Emb+Sild21). Os parâmetros foram coletados até 30 minutos após o final da administração dos tratamentos. A administração de microesferas aumentou significativamente (P < 0.05) a pressão média da artéria pulmonar (PMAP) em todos os grupos embolizados (valores médios 111-140% acima do basal). Comparativamente aos valores obtidos 30 minutos após a indução da EPA (E30), o sildenafil induziu maior diminuição na PMAP no grupo Emb+Sil90 que no grupo Emb+Sil21 (valores médios 23% e 14% menores que E30, respectivamente). A hipotensão (pressão arterial média < 60 mm Hg) foi desencadeada com a administração do sildenafil no grupo Emb+Sil21. A embolia diminuiu significativamente a relação PaO2/FiO2 e aumentou significativamente a mistura venosa; muito embora o prejuízo na oxigenação induzido pela EPA não tenha sido modificado pelo sildenafil. Conclui-se que, na EPA, o sildenafil administrado concomitante ao oxigênio puro induz efeito anti-hipertensivo pulmonar mais consistente e com menor interferência na circulação sistêmica comparativamente a administração do sildenafil com ambiente.

Sildenafil is a pulmonary anti-hypertensive agent whose action could be modified by different fractions of inspired oxygen (FiO2). The effects of pure oxygen (FiO2 > 90%) or room air (21% FiO2) on the cardiopulmonary actions of sildenafil were compared in sheep with acute pulmonary embolism (APE). Thirty two anesthetized, mechanically ventilated sheep (34.9 ± 5.4 kg), were randomly distributed into four groups (n = 8 per group): FiO2> 90% without intervention (Sham90); APE induced by microspheres with FiO2 > 90%, followed 30 min later by placebo (Emb90); or APE followed 30 min later by intravenous sildenafil (0.7 mg/kg over 30 minutes) with FiO2 > 90% (Emb+Sild90) or FiO2 = 21% (Emb+Sild21). Variables were recorded until 30 min after the end of treatment administration. Microsphere injection increased (P < 0.05) mean pulmonary artery pressure (MPAP) in all embolized groups (111-140% higher than baseline). Compared with values recorded 30 min after induction of APE (E30), sildenafil induced greater decreases in MPAP in the Emb+Sil90 group than in the Emb+Sil21 group (23% and 14% lower than E30, respectively). Hypotension (mean arterial pressure < 60 mm Hg) was precipitated by sildenafil due to systemic vasodilation in the Emb+Sil21 group. Embolization significantly lowered the PaO2/FiO2 ratio and significantly increased venous admixture. However, sildenafil did not alter the oxygenation impairment induced by APE. Sildenafil induces a more consistent pulmonary anti-hypertensive effect and causes less interference with the systemic circulation with the concomitant use of pure oxygen than with room air in the setting of APE.

Estudo da miostatina pela técnica de PCR, no modelo canino dedistrofia muscular (GRMD) em tratamento com multi-fármacos / Study of myostatin by PCR in a canine model of muscular dystrophy (GRMD) treated with multi-drug

A Distrofia Muscular de Duchenne é uma anomalia genética ligada ao cromossomo X, acomete meninos,caracterizada por uma deficiência na produção de distrofina. Esta deficiência leva há um desequilíbrio docomplexo protéico resultando em fibras musculares mais fracas que sofrem degeneração progressiva. ADistrofia Muscular dos cães Golden Retriever (GRMD) é geneticamente homóloga à distrofia de humanos,por isso estes cães são utilizados como modelo de estudos para esta doença que ainda não possui cura.A miostatina é um importante inibidor do crescimento muscular esquelético no desenvolvimento adultoe embrionário e foi utilizada como marcador para este estudo no qual foram testados sete fármacosconjuntamente. Foram eles: Sildenafil; ácido ursodesoxicólico; acetilcisteína; losartan; micofelato mofetil;talidomida e diltiazen, com o propósito de tratar os efeitos da distrofia muscular.Este trabalho estudou a eficiência destes multi-fármacos em cães do modelo GRMD pela presença da miostatinana musculatura esquelética distrófica, observada pela técnica de PCR, analisando esse tratamentofarmacológico em cães afetados pela distrofia muscular em comparação com cães afetados não tratados.Como resultado, foi observado que a quantidade de miostatina foi maior no momento T0 nas avaliações,diminuindo gradualmente sem aparente interferência do tratamento. Concluiu-se, portanto que sua expressãono músculo esquelético é maior em animais filhotes, visto que no momento T0 os animais apresentavam3 meses, e diminui com o passar do tempo. E para que haja inibição da miostatina é necessário umtratamento que atue no seu sítio de produção, o que não ocorreu com o coquetel medicamentoso utilizado.(AU)

The Duchenne muscular dystrophy is a genetic abnormality associated to chromosome X, caused by anabsence of dystrophin that affect humans. This absence results in an imbalance of the protein complex, resulting in weaker muscle fibers that suffer progressive degeneration. The Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) is genetically homologous tothe human dystrophy, therefore these dogs are used as a model for studies of this pathology, not yet cured.Myostatin is an important inhibitor of skeletal muscle growth in embryonic and adult development andwas used as a marker for this study, in which seven drugs will be tested together. Namely: Sildenafil whichincreases nitric oxide; ursodeoxycholic acid, as anti-inflammatory; acetylcysteine as an antioxidant,losartan, antifibrotic and cardioprotective; micofelato mofetil as immunosuppressive therapy, thalidomide, such as diltiazem and antiTNF as a calcium channel blocker, for the purpose of dealing with theeffects that cause muscular dystrophy.As a result, it was observed that the quantity of myostatin was higher at time T0, gradually decreasing treatment with no apparent interference. It is concluded, therefore, that its expression in skeletal muscle is higher in young animals, where as in the animals presented T0 in 3 months and decreases over time. And so there myostatin inhibition treatment is required to act in your production site, which did not occurwith the drug cocktail used.(AU)

Estudo da miostatina pela técnica de PCR, no modelo canino dedistrofia muscular (GRMD) em tratamento com multi-fármacos / Study of myostatin by PCR in a canine model of muscular dystrophy (GRMD) treated with multi-drug

A Distrofia Muscular de Duchenne é uma anomalia genética ligada ao cromossomo X, acomete meninos,caracterizada por uma deficiência na produção de distrofina. Esta deficiência leva há um desequilíbrio docomplexo protéico resultando em fibras musculares mais fracas que sofrem degeneração progressiva. ADistrofia Muscular dos cães Golden Retriever (GRMD) é geneticamente homóloga à distrofia de humanos,por isso estes cães são utilizados como modelo de estudos para esta doença que ainda não possui cura.A miostatina é um importante inibidor do crescimento muscular esquelético no desenvolvimento adultoe embrionário e foi utilizada como marcador para este estudo no qual foram testados sete fármacosconjuntamente. Foram eles: Sildenafil; ácido ursodesoxicólico; acetilcisteína; losartan; micofelato mofetil;talidomida e diltiazen, com o propósito de tratar os efeitos da distrofia muscular.Este trabalho estudou a eficiência destes multi-fármacos em cães do modelo GRMD pela presença da miostatinana musculatura esquelética distrófica, observada pela técnica de PCR, analisando esse tratamentofarmacológico em cães afetados pela distrofia muscular em comparação com cães afetados não tratados.Como resultado, foi observado que a quantidade de miostatina foi maior no momento T0 nas avaliações,diminuindo gradualmente sem aparente interferência do tratamento. Concluiu-se, portanto que sua expressãono músculo esquelético é maior em animais filhotes, visto que no momento T0 os animais apresentavam3 meses, e diminui com o passar do tempo. E para que haja inibição da miostatina é necessário umtratamento que atue no seu sítio de produção, o que não ocorreu com o coquetel medicamentoso utilizado.

The Duchenne muscular dystrophy is a genetic abnormality associated to chromosome X, caused by anabsence of dystrophin that affect humans. This absence results in an imbalance of the protein complex, resulting in weaker muscle fibers that suffer progressive degeneration. The Golden Retriever Muscular Dystrophy (GRMD) is genetically homologous tothe human dystrophy, therefore these dogs are used as a model for studies of this pathology, not yet cured.Myostatin is an important inhibitor of skeletal muscle growth in embryonic and adult development andwas used as a marker for this study, in which seven drugs will be tested together. Namely: Sildenafil whichincreases nitric oxide; ursodeoxycholic acid, as anti-inflammatory; acetylcysteine as an antioxidant,losartan, antifibrotic and cardioprotective; micofelato mofetil as immunosuppressive therapy, thalidomide, such as diltiazem and antiTNF as a calcium channel blocker, for the purpose of dealing with theeffects that cause muscular dystrophy.As a result, it was observed that the quantity of myostatin was higher at time T0, gradually decreasing treatment with no apparent interference. It is concluded, therefore, that its expression in skeletal muscle is higher in young animals, where as in the animals presented T0 in 3 months and decreases over time. And so there myostatin inhibition treatment is required to act in your production site, which did not occurwith the drug cocktail used.

Ação do citrato de sildenafil sobre a função uretral de ratas com desnervação vesical

BACKGROUND: Nitric oxide acts as a non-adrenergic and non-cholinergic neurotransmitter in the bladder and urethra. It activates the guanilatocyclase that transforms GMP in cGMP which promotes muscle relaxation. Sildenafil citrate increases the cGMP concentration by inhibiting the phosphodiesterase responsible for its hydrolysis. METHODS: 6 female rats weighing 200g were anesthetized with urethane at a dosage of 1.25mg/kg. All animals underwent cystostomy with a catheter P50 connected by a Y to an infusion pump and to a polygraph Narco-Biosystem. The cystometry was performed trice in each animal: right after the cystostomy, after surgical of bladder denervation and 1h after gastric infusion of 1mg/kg of sildenafil citrate. Maximum (MaP) and minimum (MiP) vesical pressure were compared in the following moments: I - before bladder denervation, II - after bladder denervation and III - after bladder denervation and sildenafil administration. Wilcoxon test was used for a level of significance of 5%. RESULTS: Mean values of MaP were: I - 86.6±10.1, II - 42.6±15.0 and III - 30.8±12.4. The corresponding values of MiP were: : I - 72.1±18.9, II - 31.1±9.8 and III - 14.5±9.5. The comparison between MaP and MiP in each moment showed difference only in moment III (p 0.01). For MaP p value was 0.002 in IxII and IxIII and >0.05 in IIxIII. For MiP the p values were 0.004 in IxII, 0.002 in IxIII and 0.01 in IIxIII. CONCLUSION: 1) Bladder denervation reduces maximum and minimum urethral pressure; 2) Sildenafil citrate reduces the minimum urethral pressure widening the interval between the peak and bottom pressures; and, 3) Sildenafil citrate does not interfere on the peak urethral pressure after bladder denervation.

O óxido nítrico atua como neurotransmissor não adrenérgico e não colinérgico na bexiga e na uretra. Sua forma de ação se faz pela ativação da guanilatociclase responsável pela transformação de GMP em GMPc que promove o relaxamento da fibra muscular lisa. O citrato de sildenafil causa aumento do GMPc, através da inibição de fosfodiesterases, que hidrolisam o GMPc. Assim, o objetivo do experimento foi verificar sua ação na uretra. MÉTODOS: Estudou-se 6 ratas com peso aproximado de 200g. A anestesia foi com uretana na dose de 1,25 mg/kg. As cistometrias, em número de 3, foram realizadas através de cistostomia com cateter P50. A primeira logo após a cistostomia; a segunda depois da desnervação cirúrgica da bexiga e a terceira uma hora após a infusão gástrica do citrato de sildenafil. O sistema de registro das pressões constou de uma bomba de infusão contínua regulada para 0,3ml/minuto conectada em Y com o cateter P50 e a um polígrafo Narco-Bioystem. Nas cistometrias avaliou-se as pressões vesicais máxima e mínima nos momentos: normais-(I); desnervadas (II) e desnervadas com citrato de sildenafil na dose de 1 mg/kg (III). A análise estatística foi feita pelo método de Wilcoxon. RESULTADOS: As médias das pressões máximas (pma) foram: momentos I (x=86,6 - SD=10,1) ; momentos II (x=42,6 - SD=15,0) e momentos III (x=30,8 - SD=12,4). As médias das pressões mínimas (pmi) foram: momentos I (x=72,1 - SD=18,9); momentos II (x=31,1 - SD=9,8); momentos III ( x=14,5 - SD=9,5). A análise estatística entre as pma e pmi no mesmo grupo mostrou p 0,01 para o grupo III, sendo maior que 0,05 para os demais. A comparação das pma revelou p 0,002 entre os momentos I-II e I-III, sendo maior que 0,05 entre os momentos II e III. A comparação das pmi mostrou p 0,004 entre os momentos I-II; p 0,002 entre os momentos I -III e p 0,01 entre os momentos II-III, havendo portanto nível de significância entre os 3 momentos. CONCLUSÕES: 1) A desnervação vesical promove queda nas pressões uretrais máxima e mínima; 2) O Citrato de sildenafil amplia a faixa pressórica de trabalho da uretra devido a diminuição da pressão mínima; 3) O citrato de sildenafil não altera a pressão uretral máxima depois da desnervação.

Ação do citrato de sildenafil sobre a função uretral de ratas com desnervação vesical

BACKGROUND: Nitric oxide acts as a non-adrenergic and non-cholinergic neurotransmitter in the bladder and urethra. It activates the guanilatocyclase that transforms GMP in cGMP which promotes muscle relaxation. Sildenafil citrate increases the cGMP concentration by inhibiting the phosphodiesterase responsible for its hydrolysis. METHODS: 6 female rats weighing 200g were anesthetized with urethane at a dosage of 1.25mg/kg. All animals underwent cystostomy with a catheter P50 connected by a Y to an infusion pump and to a polygraph Narco-Biosystem. The cystometry was performed trice in each animal: right after the cystostomy, after surgical of bladder denervation and 1h after gastric infusion of 1mg/kg of sildenafil citrate. Maximum (MaP) and minimum (MiP) vesical pressure were compared in the following moments: I - before bladder denervation, II - after bladder denervation and III - after bladder denervation and sildenafil administration. Wilcoxon test was used for a level of significance of 5%. RESULTS: Mean values of MaP were: I - 86.6±10.1, II - 42.6±15.0 and III - 30.8±12.4. The corresponding values of MiP were: : I - 72.1±18.9, II - 31.1±9.8 and III - 14.5±9.5. The comparison between MaP and MiP in each moment showed difference only in moment III (p 0.01). For MaP p value was 0.002 in IxII and IxIII and >0.05 in IIxIII. For MiP the p values were 0.004 in IxII, 0.002 in IxIII and 0.01 in IIxIII. CONCLUSION: 1) Bladder denervation reduces maximum and minimum urethral pressure; 2) Sildenafil citrate reduces the minimum urethral pressure widening the interval between the peak and bottom pressures; and, 3) Sildenafil citrate does not interfere on the peak urethral pressure after bladder denervation.

O óxido nítrico atua como neurotransmissor não adrenérgico e não colinérgico na bexiga e na uretra. Sua forma de ação se faz pela ativação da guanilatociclase responsável pela transformação de GMP em GMPc que promove o relaxamento da fibra muscular lisa. O citrato de sildenafil causa aumento do GMPc, através da inibição de fosfodiesterases, que hidrolisam o GMPc. Assim, o objetivo do experimento foi verificar sua ação na uretra. MÉTODOS: Estudou-se 6 ratas com peso aproximado de 200g. A anestesia foi com uretana na dose de 1,25 mg/kg. As cistometrias, em número de 3, foram realizadas através de cistostomia com cateter P50. A primeira logo após a cistostomia; a segunda depois da desnervação cirúrgica da bexiga e a terceira uma hora após a infusão gástrica do citrato de sildenafil. O sistema de registro das pressões constou de uma bomba de infusão contínua regulada para 0,3ml/minuto conectada em Y com o cateter P50 e a um polígrafo Narco-Bioystem. Nas cistometrias avaliou-se as pressões vesicais máxima e mínima nos momentos: normais-(I); desnervadas (II) e desnervadas com citrato de sildenafil na dose de 1 mg/kg (III). A análise estatística foi feita pelo método de Wilcoxon. RESULTADOS: As médias das pressões máximas (pma) foram: momentos I (x=86,6 - SD=10,1) ; momentos II (x=42,6 - SD=15,0) e momentos III (x=30,8 - SD=12,4). As médias das pressões mínimas (pmi) foram: momentos I (x=72,1 - SD=18,9); momentos II (x=31,1 - SD=9,8); momentos III ( x=14,5 - SD=9,5). A análise estatística entre as pma e pmi no mesmo grupo mostrou p 0,01 para o grupo III, sendo maior que 0,05 para os demais. A comparação das pma revelou p 0,002 entre os momentos I-II e I-III, sendo maior que 0,05 entre os momentos II e III. A comparação das pmi mostrou p 0,004 entre os momentos I-II; p 0,002 entre os momentos I -III e p 0,01 entre os momentos II-III, havendo portanto nível de significância entre os 3 momentos. CONCLUSÕES: 1) A desnervação vesical promove queda nas pressões uretrais máxima e mínima; 2) O Citrato de sildenafil amplia a faixa pressórica de trabalho da uretra devido a diminuição da pressão mínima; 3) O citrato de sildenafil não altera a pressão uretral máxima depois da desnervação.