Diversity and antimicrobial resistance of Salmonella isolated from swines feces and carcasses / Diversidade e resistência aos antimicrobianos de Salmonella isoladas de fezes e carcaças de suínos

The aim of this study was to determine the most frequent Salmonella serovars in swine feces in the farm, piggery’s waiting slaughterhouse and after in their carcasses during slaughter, as well as their antimicrobial resistance profiles. Eighty six strains of Salmonella spp. were used, they were previously isolated from three different lots in different collections. The identification of serovars was done by serotyping and the resistance to antimicrobial agents was determined by disc diffusion. A variety of serovars was observed, and the 86 strains were serologically identified as: 28 (32.55%) S. Typhimurium, 20 (23.26%) S. Agona, 17 (19.77%) S. Infantis, 6 (6.98%) S. Panama, and 15 (17.44%) S. Minnesota. The diversity of serovars indicated that different factors influence the infection of finishing pigs and the persistence of microorganisms in the carcass after slaughter of these animals. More than 50% of the isolates were resistant to nine of the 11 tested antibiotics. The drugs that microorganisms had the highest percentages of sensitivity were sulphazotrim and norfloxacin, 22.1% and 14%, respectively. S. Typhimurium serovar was the most isolated, including in the carcasses, and also showed the largest difference in antimicrobial resistance when compared to other serovars. The profile of multidrug resistance observed in this study highlights to the necessity of a judicious observation of antimicrobial resistance in zoonotic foodborne bacteria.

Objetivou-se determinar os sorovares de Salmonella mais freqüentes em fezes de suínos na granja de terminação, pocilga de espera do frigorífico e em suas carcaças durante o abate, assim como, seus perfis de resistência aos antimicrobianos. Utilizou-se 86 cepas de Salmonella spp previamente isoladas de três lotes diferentes em coletas distintas. A identificação dos sorovares foi realizada por meio de sorotipificação e a resistência aos antimicrobianos foi determinada pela técnica de difusão de discos. Foi observada uma multiplicidade de sorovares, sendo as 86 cepas identificadas sorologicamente como: 28 (32,55%) S. Typhimurium, 20 (23,26%), S. Agona, 17 (19,77%) S. Infantis, 6 (6,98%) S. Panama, e 15 (17,44%) S. Minnesota. A diversidade de sorovares indicou que diferentes fatores influenciam na infecção de suínos em terminação e na persistência do microrganismo na carcaça destes animais após o abate. Mais de 50% dos isolados apresentaram resistência a nove dos 11 antibióticos testados. As drogas as quais os microrganismos apresentaram os maiores percentuais de sensibilidade foram o sulfazotrim e a norfloxacina, 22,1% e 14%, respectivamente. S. Typhimurium foi o sorovar mais isolado, inclusive nas carcaças, e também o que demonstrou maior diferença quanto à resistência aos antimicrobianos, quando comparado aos outros sorovares. O perfil de multirresistência observado neste estudo alerta para a necessidade de vigilância e monitoramento sistemático da resistência aos antimicrobianos em bactérias zoonóticas transmitidas pelos alimentos.

Diversity and antimicrobial resistance of Salmonella isolated from swines feces and carcasses / Diversidade e resistência aos antimicrobianos de Salmonella isoladas de fezes e carcaças de suínos

The aim of this study was to determine the most frequent Salmonella serovars in swine feces in the farm, piggerys waiting slaughterhouse and after in their carcasses during slaughter, as well as their antimicrobial resistance profiles. Eighty six strains of Salmonella spp. were used, they were previously isolated from three different lots in different collections. The identification of serovars was done by serotyping and the resistance to antimicrobial agents was determined by disc diffusion. A variety of serovars was observed, and the 86 strains were serologically identified as: 28 (32.55%) S. Typhimurium, 20 (23.26%) S. Agona, 17 (19.77%) S. Infantis, 6 (6.98%) S. Panama, and 15 (17.44%) S. Minnesota. The diversity of serovars indicated that different factors influence the infection of finishing pigs and the persistence of microorganisms in the carcass after slaughter of these animals. More than 50% of the isolates were resistant to nine of the 11 tested antibiotics. The drugs that microorganisms had the highest percentages of sensitivity were sulphazotrim and norfloxacin, 22.1% and 14%, respectively. S. Typhimurium serovar was the most isolated, including in the carcasses, and also showed the largest difference in antimicrobial resistance when compared to other serovars. The profile of multidrug resistance observed in this study highlights to the necessity of a judicious observation of antimicrobial resistance in zoonotic foodborne bacteria.(AU)

Objetivou-se determinar os sorovares de Salmonella mais freqüentes em fezes de suínos na granja de terminação, pocilga de espera do frigorífico e em suas carcaças durante o abate, assim como, seus perfis de resistência aos antimicrobianos. Utilizou-se 86 cepas de Salmonella spp previamente isoladas de três lotes diferentes em coletas distintas. A identificação dos sorovares foi realizada por meio de sorotipificação e a resistência aos antimicrobianos foi determinada pela técnica de difusão de discos. Foi observada uma multiplicidade de sorovares, sendo as 86 cepas identificadas sorologicamente como: 28 (32,55%) S. Typhimurium, 20 (23,26%), S. Agona, 17 (19,77%) S. Infantis, 6 (6,98%) S. Panama, e 15 (17,44%) S. Minnesota. A diversidade de sorovares indicou que diferentes fatores influenciam na infecção de suínos em terminação e na persistência do microrganismo na carcaça destes animais após o abate. Mais de 50% dos isolados apresentaram resistência a nove dos 11 antibióticos testados. As drogas as quais os microrganismos apresentaram os maiores percentuais de sensibilidade foram o sulfazotrim e a norfloxacina, 22,1% e 14%, respectivamente. S. Typhimurium foi o sorovar mais isolado, inclusive nas carcaças, e também o que demonstrou maior diferença quanto à resistência aos antimicrobianos, quando comparado aos outros sorovares. O perfil de multirresistência observado neste estudo alerta para a necessidade de vigilância e monitoramento sistemático da resistência aos antimicrobianos em bactérias zoonóticas transmitidas pelos alimentos.(AU)

Endocarditis vegetativa en lechones causadas por Streptococcus suis serotipo 9 / Vegetative endocarditis in piglets caused by Streptococcus suis serotype 9 / Endocardite vegetativa em leitões causada por Streptococcus suis sorotipo 9

La endocarditis vegetativa es una importante alteración del endocardio del cerdo, siendo casi siempre asociada las infecciones sistémicas provocadas por bacterias. Fue identificado como un agente causante de endocarditis vegetativa por Streptococcus suisserotipo 9 en cerdos de edad de 7 a 10 y 30 días de edad. Ese caso resultó ser de interés debido a la edad de los animales y el serotipo identificado. Al ser una lesión de causa crónica, endocarditis vegetativa en los lechones jóvenes es considerada inusual, no siendo relatada previamente en la literatura. Por otra parte, no se encontró relato que relaciona el serotipo 9 como causador de endocarditis vegetativa causado en lechones jóvenes.(AU)

Vegetative endocarditis is an important endocardium alteration in swine, related with bacterial systemic infection. It was identified Streptococcus suis serotype 9 as the causative agent of the vegetative endocarditis in piglets with 7 to 10 and 30 days of age. This case arouses interest due the age of the affected animals and the identified serotype. Because it is a chronic injury, the vegetative endocarditis is considered unusual in piglets and it is not report previously in the literature. Furthermore, it was not found report that relates serotype 9 causing vegetative endocarditis in young piglets.(AU)

A endocardite vegetativa é uma importante alteração do endocárdio do suíno, quase sempre associada a infecções sistêmicas provocadas por bactérias. Foi identificado como agente causador de endocardite vegetativa Streptococcus suis sorotipo 9, em leitões de 7 a 10 e 30 dias de idade. Esse caso mostrou-se de interesse devido à idade dos animais acometidos e o sorotipo identificado. Por ser uma lesão de causa crônica, a endocardite vegetativa em leitões jovens é considerada incomum, não sendo relatada anteriormente na literatura. Além disso, não foi encontrado relato que relacione o sorotipo 9 como causador de endocardite vegetativa em leitões jovens.(AU)

Endocarditis vegetativa en lechones causadas por Streptococcus suis serotipo 9 / Vegetative endocarditis in piglets caused by Streptococcus suis serotype 9 / Endocardite vegetativa em leitões causada por Streptococcus suis sorotipo 9

La endocarditis vegetativa es una importante alteración del endocardio del cerdo, siendo casi siempre asociada las infecciones sistémicas provocadas por bacterias. Fue identificado como un agente causante de endocarditis vegetativa por Streptococcus suisserotipo 9 en cerdos de edad de 7 a 10 y 30 días de edad. Ese caso resultó ser de interés debido a la edad de los animales y el serotipo identificado. Al ser una lesión de causa crónica, endocarditis vegetativa en los lechones jóvenes es considerada inusual, no siendo relatada previamente en la literatura. Por otra parte, no se encontró relato que relaciona el serotipo 9 como causador de endocarditis vegetativa causado en lechones jóvenes.

Vegetative endocarditis is an important endocardium alteration in swine, related with bacterial systemic infection. It was identified Streptococcus suis serotype 9 as the causative agent of the vegetative endocarditis in piglets with 7 to 10 and 30 days of age. This case arouses interest due the age of the affected animals and the identified serotype. Because it is a chronic injury, the vegetative endocarditis is considered unusual in piglets and it is not report previously in the literature. Furthermore, it was not found report that relates serotype 9 causing vegetative endocarditis in young piglets.

A endocardite vegetativa é uma importante alteração do endocárdio do suíno, quase sempre associada a infecções sistêmicas provocadas por bactérias. Foi identificado como agente causador de endocardite vegetativa Streptococcus suis sorotipo 9, em leitões de 7 a 10 e 30 dias de idade. Esse caso mostrou-se de interesse devido à idade dos animais acometidos e o sorotipo identificado. Por ser uma lesão de causa crônica, a endocardite vegetativa em leitões jovens é considerada incomum, não sendo relatada anteriormente na literatura. Além disso, não foi encontrado relato que relacione o sorotipo 9 como causador de endocardite vegetativa em leitões jovens.

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.

RESUMO: Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil

ABSTRACT: Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.

RESUMO: Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.

Genotypic profile of Listeria monocytogenes isolated in refrigerated chickens in southern Rio Grande do Sul, Brazil / Perfil genotípico de Listeria monocytogenes isolada em frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil

Listeria monocytogenes is of notable concern to the food industry, due to its ubiquitous nature and ability to grow in adverse conditions. This study aimed to determine the genotypic profile of L. monocytogenes strains isolated from refrigerated chickens marketed in the southern part of Rio Grande do Sul, Brazil. The strains of L. monocytogenes isolated were characterized by serotyping and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE). Three different serotypes (1/2a, 1/2b and 4e) were evaluated by PFGE, and the macrorestriction patterns utilizing enzymes AscI and ApaI, revealed five different pulsotypes. The presence of such varied genotypic profiles demonstrates the prevalence of L. monocytogenes contamination of chicken processing environments, which combined with ineffective cleaning procedures, allowing the survival, adaptation and proliferation of these pathogens, not only in the processing environment, but also in local grocery stores.(AU)

Listeria monocytogenes é uma notável preocupação para a indústria de alimentos, devido à sua natureza ubíqua e a capacidade de se multiplicar em condições adversas. Este estudo objetivou determinar o perfil genotípico de L. monocytogenes isolada a partir de frangos refrigerados comercializados na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil. As cepas de L. monocytogenes foram selecionadas e caracterizadas por sorotipagem e Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE). Três sorotipos diferentes (1/2a, 1/2b e 4e) foram avaliados por PFGE, e a combinação dos padrões de macrorestrição utilizando as enzimas AscI e ApaI revelou cinco diferentes pulsotipos. A presença de diferentes perfis genotípicos demonstra a importância da contaminação no ambiente de processamento de frangos, o qual, juntamente com procedimentos de limpeza ineficazes, permitem a sobrevivência, adaptação e proliferação desses patógenos, não somente no ambiente de processamento, mas também no local de comercialização destes produtos.(AU)

Characterization of Streptococcus suis through serotyping, SE-AFLP and virulence profile / Caracterização de Streptococcus suis por sorotipagem, SE-AFLP e perfil de virulência

Streptococcus suis is one of most important pathogens in the swine industry worldwide. Despite its importance, studies of S. suis characterization in South America are still rare. This study evaluates S. suis isolates from distinct Brazilian states, from 1999 to 2004, and its molecular and serological characterization. A total of 174 isolates were studied. S. suis identification was confirmed by PCR and isolates were further serotyped and genotyped by SE-AFLP and amplification of virulence markers. Serotype 1, 2, 3, 4, 7, 18, 22 and 32 were identified among the studied isolates, and only 4% were characterized as non-typeable. The mrp+/epf+/sly+ genotype was the most frequent. The SE-AFLP analysis resulted in 29 patterns distributed in three main clusters with over 65% of genetic similarity. Isolates presented a slight tendency to cluster according to serotype and origin; however, no further correlation with virulence genotypes was observed.(AU)

Streptococcus suis é um dos patógenos de maior importância para indústria suinícola mundial. Apesar de sua importância, a caracterização de isolados de S. suis na América do Sul ainda é pouco descrita. O presente estudo descreve a avaliação de isolados de S. suis provenientes de diferentes Estados brasileiros, e sua caracterização sorológica e molecular. Foram avaliados 174 isolados de S. suis e os mesmos foram submetidos a SE-AFLP e pesquisa de marcadores de virulência. Os sorotipos 1, 2, 3, 4, 7, 18, 22 e 32 foram identificados dentre os isolados estudados e apenas 4% foram caracterizados como não tipáveis. O perfil de virulência mrp+/epf+/sly+ foi o mais frequente. A análise do SE-AFLP resultou em 29 perfis distribuídos em três grupos principais com mais de 65% de similaridade genética. Os isolados apresentaram tendência de se agrupar segundo origem e sorotipo; no entanto, não foi observada correlação entre os grupamentos e os perfis de virulência.(AU)

BIODIVERSIDADE FENOTÍPICA E GENOTÍPICA DE Salmonella spp. ISOLADAS DE ALIMENTOS ENVOLVIDOS EM SURTOS DE DOENÇAS TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS (DTA) EM MINAS GERAIS/BRASIL

Salmonella spp. é um dos principais patógenos causadores de Doenças Transmitidas por Alimentos (DTA) no mundo. Neste estudo, analisamos 70 amostras de Salmonella spp., isoladas de alimentos implicados em casos de salmonelose humana em Minas Gerais/Brasil, de 2003 a 2017, em relação à sorotipagem bacteriana, à susceptibilidade a 16 antimicrobianos (oito classes terapêuticas), à presença dos genes de virulência avrA, flgL, flgK, hilA, invA, iroB, lfpA, sefA, sipA, sipB, sipD, sivH, sopB, sopE, spvB e spvC e do gene PT4 e ao polimorfismo genético, por meio das sequências de elementos repetitivos REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromic). Treze sorotipos foram identificados neste estudo. As frequências de S. Enteritidis e S. Typhimurium foram estatisticamente maiores (p 0,05) que os demais sorotipos, ambas correspondendo a 74,2%. Produtos de origem animal ou com algum ingrediente de origem animal representaram 90% dos alimentos envolvidos nos surtos de salmonelose. S. Enteritidis apresentou maior associação (p 0,05) com os produtos de origem animal. Cerca de 94,3% das amostras de Salmonella spp. demonstraram ser resistentes a pelo menos um dos 16 antimicrobianos avaliados. Percentual estatisticamente significativo (p 0,05) de resistência antimicrobiana foi identificado para nitrofurantoína (71,4%), ácido nalidíxico (68,6%) e ciprofloxacina (40%), principalmente nas amostras de S. Enteritidis. O fenótipo de resistência a múltiplos antimicrobianos variou de 10 a 12,8%, com predominância no sorotipo S. Typhimuirum. A presença dos genes de virulência oscilou de 75,7 a 100% nas 70 amostras de Salmonella ssp.. Maior associação entre os genes de virulência e os sorotipos, após decomposição das variáveis pela Análise de Componentes Principais, foi observada em S. Enteritidis. O fagotipo PT4 foi observado em 90% das amostras de S. Enteritidis. Na análise de diversidade genética, S. Enteritidis (n = 40) subdividiu-se em três clusters que compartilharam mais de 80% de similaridade e 14 padrões eletroforéticos (ID = 0,80), um deles composto por 17 amostras (42,5%) indistinguíveis procedentes de diferentes surtos de salmonelose. O agrupamento formado por S. Typhimurium (n=12) apresentou dois clusters e seis perfis distintos (ID=0,74). O grupo Outros sorotipos, composto por vários sorotipos, caracterizou-se por três clusters e 11 perfis com impressão digital única (ID=0,89). Neste experimento, REP-PCR apresentou reprodutibilidade, tipabilidade e potencial discriminatório. Conclui-se que as amostras de Salmonella ssp., isoladas de alimentos envolvidos em surtos de DTA em Minas Gerais/Brasil, de 2003 a 2017, apresentam padrão sorológico similar àquele reportado 9 pelos principais centros de Saúde Pública mundial. Caracterizam-se por elevada prevalência de resistência às classes terapêuticas quinolona e nitrofurano, demonstram significativo potencial patogênico, em especial o sorotipo S. Enteritidis e, embora algumas amostras de Salmonella spp. possuam um genoma relativamente variável, é comum uma elevada similaridade genética entre as mesmas, em alguns casos, com impressões digitais idênticas. Por meio deste experimento foi possível também observar a circulação de perfis genéticos únicos, constantes e predominantes, em várias mesorregiões estaduais e em períodos distintos, corroborando, dessa forma, a hipótese de circulação clonal de alguns sorotipos no Estado de Minas Gerais/Brasil.

Salmonella spp. is one of the main pathogens that cause foodborne diseases (DTA) in the world. In this study, we analyzed 70 samples of Salmonella spp., isolated from foods implicated in cases of human salmonellosis in Minas Gerais State / Brazil, to 2003 from 2017, as for bacterial serotyping, antimicrobial susceptibility to 16 antimicrobials (eight therapeutic classes), presence of the virulence genes avrA, flgL, flgK, hilA, invA, iroB, lfpA, sefA, sipA, sipB, sipD, sivH, sopB, sopE, spvB e spvC and the PT4 gene and genetic polymorphism, using the sequences of repetitive elements REP-PCR (Repetitive Extragenic Palindromic). Thirteen serotypes were identified in this study. The frequencies of S. Enteritidis and S. Typhimurium were significantly higher (p 0.05) than the other serotypes, both corresponding to 74.2% of those. Products of animal origin or with any ingredient of animal origin accounted for 90% of those involved in salmonellosis outbreaks. S. Enteritidis showed a greater association (p 0.05) with products of animal origin. About 94.3% of the samples of Salmonella spp. demonstrated to be resistant to at least one of the 16 evaluated antimicrobials. Statistically significant percentage (p 0.05) of antimicrobial resistance was identified for nitrofurantoin (71.4%), nalidixic acid (68.6%) and ciprofloxacin (40%), mainly in the samples of S. Enteritidis. The phenotype of resistance to multiple antimicrobidans varied from 10 to 12.8%, with predominance in the S. Typhimuirum serotype. The presence of virulence genes ranged from 75.7% to 100% in the 70 samples of Salmonella ssp.. Greater association between virulence genes and serotypes, after decomposition of the variables by Principal Component Analysis, was observed in S. Enteritidis. The PT4 phagotype was observed in 90% of S. Enteritidis samples. In the analysis of genetic diversity, S. Enteritidis (n = 40) was subdivided into three clusters that shared more than 80% similarity and 14 electrophoretic patterns (ID = 0.80), the largest consisting of 17 samples (42.5%) indistinguishable originated from different outbreaks of salmonellosis. The cluster formed by S. Typhimurium (n = 12) had two clusters and six distinct profiles (ID = 0.74). The group Other serotypes, composed of several serotypes, was characterized by three clusters and 11 profiles with a unique fingerprint (ID = 0.89). In this experiment, REP-PCR showed reproducibility, typability and discriminatory potential. We concluded that the samples of Salmonella ssp., isolated from food in outbreaks of DTA in Minas Gerais/Brazil, from 2003 to 2017, feature a serological pattern similar to that reported by the main centers of Public Health worldwide, are characterized by a high prevalence of resistance to therapeutic classes 11 quinolone and nitrofuran, demonstrate significant pathogenic potential, especially the serotype S. Enteritidis and, although some samples of Samonella spp. have a relatively variable genome, a high genetic similarity between them is common, in some cases, with identical fingerprints. According to this experimente, was also possible to observe the circulation of unique, constant and predominant genetic profiles, in several State mesoregions and in different periods, thus corroborating the hypothesis of clonal circulation of some serotypes in the Minas Gerais/Brasil.

Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs / Isolamento, sorotipagem e padrões de resistência a antimicrobianos de Salmonella em fezes e linfonodos de suínos

Salmonellosis is a foodborne disease caused by bacteria of the genus Salmonella, being pigs and pork-products potentially important for its occurrence. In recent decades, some serovars of Salmonella have shown increase of resistance to conventional antimicrobials used in human and animal therapy, with serious risks for public health. The aim of this study was to evaluate feces (n=50), mediastinal (n=50), mesenteric (n=50) and mandibular (n=50) lymph nodes obtained from slaughter houses for Salmonella spp. Positive samples were serotyped and subjected to an in vitro antimicrobial susceptibility test, including the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Salmonella species were identified in 10% (20/200) of total samples. From these, 20% (10/50) were identified in the submandibular lymph nodes, 18% (9/50) in the mesenteric lymph nodes, 2% (1/50) in feces and 0% (0/50) in the mediastinal lymph nodes. The serotypes found were Salonella Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg and S. Derby with 5% (5% each). All strains showed resistance to at least one antimicrobial; 90% were resistant to four or more antimicrobials, and 15% were multidrug-resistant. Resistance to ciprofloxacin, tetracycline and nalidixic acid was particularly prevalent amongst the tested serovars. Here, we highlighted the impact of pigs in the epidemiological chain of salmonellosis in domestic animals and humans, as well as the high antimicrobial resistance rates of Salmonella strains, reinforcing the necessity for responsible use of antimicrobials for animals as an emergent One Health issue, and to keep these drugs for human therapy approaches.(AU)

Nas últimas décadas, o aumento de cepas circulante de Salmonella concomitantemente a resistência microbiana tem despertado a preocupação dos órgãos de Saúde Pública. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presença de Salmonella a partir de fezes (n=50), linfonodos mediastinos (n=50), mesentéricos (n=50) e submandibular (n=50) oriundos de um abatedouro suíno. As cepas isoladas foram sorotipadas e testadas quanto a resistência antimicrobiana. A presença de Salmonella isolada foram em 10% (20/200) do total de amostras, sendo 20% dos linfonodos submandibulares, 18% dos linfonodos mesentéricos e 2% das fezes. Os sorotipos encontrados foram S. Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg (5%) e S. Derby (5%). Todas a cepas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano testado, sendo 90% resistente pelo menos quatro antimicrobianos. Destes, 15% foram classificadas como multidrogas resistentes. Os antimicrobianos mais resistentes entre os sorovares isolados foram a ciprofloxacina, tetraciclina e o ácido nalidixico. A presença de cepas de Salmonella resistente a antimicrobianos na espécie suína tem gerado um grande impacto epidemiológico entre homem e animal, reforçando cada vez mais a necessidade do uso adequado de drogas principalmente relacionado com o tema "One Health".(AU)

Frequency, serotyping and antimicrobial resistance pattern of Salmonella from feces and lymph nodes of pigs / Isolamento, sorotipagem e padrões de resistência a antimicrobianos de Salmonella em fezes e linfonodos de suínos

Salmonellosis is a foodborne disease caused by bacteria of the genus Salmonella, being pigs and pork-products potentially important for its occurrence. In recent decades, some serovars of Salmonella have shown increase of resistance to conventional antimicrobials used in human and animal therapy, with serious risks for public health. The aim of this study was to evaluate feces (n=50), mediastinal (n=50), mesenteric (n=50) and mandibular (n=50) lymph nodes obtained from slaughter houses for Salmonella spp. Positive samples were serotyped and subjected to an in vitro antimicrobial susceptibility test, including the extended-spectrum beta-lactamase (ESBL) production. Salmonella species were identified in 10% (20/200) of total samples. From these, 20% (10/50) were identified in the submandibular lymph nodes, 18% (9/50) in the mesenteric lymph nodes, 2% (1/50) in feces and 0% (0/50) in the mediastinal lymph nodes. The serotypes found were Salmonella Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg and S. Derby with 5% (5% each). All strains showed resistance to at least one antimicrobial; 90% were resistant to four or more antimicrobials, and 15% were multidrug-resistant. Resistance to ciprofloxacin, tetracycline and nalidixic acid was particularly prevalent amongst the tested serovars. Here, we highlighted the impact of pigs in the epidemiological chain of salmonellosis in domestic animals and humans, as well as the high antimicrobial resistance rates of Salmonella strains, reinforcing the necessity for responsible use of antimicrobials for animals as an emergent One Health issue, and to keep these drugs for human therapy approaches.(AU)

Nas últimas décadas, o aumento de cepas circulante de Salmonella concomitantemente a resistência microbiana tem despertado a preocupação dos órgãos de Saúde Pública. Deste modo, o objetivo do presente trabalho foi pesquisar a presença de Salmonella a partir de fezes (n=50), linfonodos mediastinos (n=50), mesentéricos (n=50) e submandibular (n=50) oriundos de um abatedouro suíno. As cepas isoladas foram sorotipadas e testadas quanto a resistência antimicrobiana. A presença de Salmonella isolada foram em 10% (20/200) do total de amostras, sendo 20% dos linfonodos submandibulares, 18% dos linfonodos mesentéricos e 2% das fezes. Os sorotipos encontrados foram S. Typhimurium (55%), S. enterica subsp. enterica 4,5,12: i: - (35%), S. Brandenburg (5%) e S. Derby (5%). Todas a cepas apresentaram resistência a pelo menos um antimicrobiano testado, sendo 90% resistente pelo menos quatro antimicrobianos. Destes, 15% foram classificadas como multidrogas resistentes. Os antimicrobianos mais resistentes entre os sorovares isolados foram a ciprofloxacina, tetraciclina e o ácido nalidixico. A presença de cepas de Salmonella resistente a antimicrobianos na espécie suína tem gerado um grande impacto epidemiológico entre homem e animal, reforçando cada vez mais a necessidade do uso adequado de drogas principalmente relacionado com o tema One Health.(AU)

Análise comparativa de genomas de estirpes de Streptococcus suis isoladas de suínos no Brasil

Streptococcus suis é um patógeno de grande importância na indústria suína sendo capaz de provocar diferentes quadros clínicos em animais de várias idades e, além disso, também é considerado um agente zoonótico. Dessa forma, é de extrema importância a caracterização das estirpes que causam doença em suínos no Brasil. Os objetivos deste estudo foram a caracterização fenotípica e genotípica de 215 estirpes de S. suis isoladas entre os anos de 2001 e 2016, de suínos com sinais clínicos de infecção, provenientes de diferentes Estados do Brasil. Para tanto, as estirpes isoladas neste período e mantidas a 86C foram reativadas e submetidas à confirmação da identificação por PCR e espectrometria de massa MALDI TOF. Em seguida, foi realizada sorotipagem molecular e a identificação de genes de virulência pela PCR, e a foi realizada a genotipagem pelas técnicas de AFLP e PFGE. Para a identificação dos perfis de resistência aos antimicrobianos foi utilizada a técnica de microdiluição em caldo, obtendo os valores de concentração inibitória mínima (CIM). A partir dos resultados fenotípicos e genotípicos foram selecionadas 24 estirpes para o sequenciamento do genoma utilizando a plataforma Illumina® MiSeq. O sorotipo mais frequentemente identificado foi o 2 / ½ (82,8%); seguido em menor proporção pelos sorotipos 3, 4, 6, 7, 8, 9, 18, 27, 28, 1 / 14, sendo apenas seis estirpes não tipaveis (NT). Para caracterização do perfil de virulência foram avaliados quatro genes sly, arcA, epf e as variantes de mrp sendo identificados 11 perfis de virulência nas estirpes estudadas. A genotipagem por AFLP identificou 30 perfis genotípicos e a técnica de PFGE identificou 64 pulsotipos. Para ambas as técnicas não foi identificada uma correlação clara entre dados epidemiológicos e genotípicos, mas pode se observar uma tendência de agrupamento das estirpes por ano de isolamento. A partir dos resultados de CIM foram identificados nove perfis de susceptibilidade aos antimicrobianos com 72,1% das estirpes classificadas como multirresistentes. Foram detectadas altas taxas de resistência às tetraciclinas, macrolídeos, clindamicina e sulfadimetoxina, enquanto beta--lactâmicos e florfenicol foram os antimicrobianos mais eficazes. A partir da análise genômica não foram detectados marcadores de plasmídeos e apenas três genes de resistência foram identificados nos genomas brasileiros; destaca--se o gene ermB, que codifica resistência à macrolídeos e lincosamidas, que foi detectado em 79,2% das estirpes estudadas. Foram identificadas oito novas sequências de alelos na MLST e uma nova combinação alélica, de tal forma que foram identificadas seis novas sequências tipo (STs) dentre os 24 genomas analisados. A partir do mapeamento das nove estirpes do sorotipo 2 foi identificado um elemento genético móvel (CMGETZ080501), relacionado à resistência aos antimicrobianos, em sete destas; as duas estirpes Brasileiras do sorotipo 2 que se diferenciam das demais (45 e 47) foram as mais sensíveis. Em relação às cinco estirpes do sorotipo 3, foi observado no mapeamento que duas destas se distanciam das demais e apresentam maior similaridade ao genoma da referência do sorotipo 4. Este resultado também foi verificado tanto na wgSNP quanto na análise da MLST, confirmando que a caraterização capsular de S. suis não deve ser utilizada como um indicativo de similaridade genética. Tendo em vista a variabilidade genética e a alta frequência de multirresistência identificada nas estirpes de S. suis circulantes no país, é possível avaliar as razões para que o controle do agente continue sendo um grande desafio para a suinocultura intensiva nacional.

Streptococcus suis is a pathogen of great importance in the pig industry and can cause diverse clinical conditions in animals of different ages, in addition of this, is also considered a zoonotic agent. Thus, is essential the characterization of strains that causes disease in swine from Brazil. The current study aimed phenotypic and genotypic characterization of 215 S.suis strains isolated between 2001 and 2016 from diseased swine of different Brazilian states. Isolated strains were stored at 86 ° C and were posteriorly reactivated for confirmation through PCR and MALDI TOF mass spectrometry. Subsequently, molecular serotyping and virulence gene identification were performed by PCR, and genotyping was performed by AFLP and PFGE techniques. To identify the resistant profiles, the minimum inhibitory concentration (MIC) was determined using the broth microdilution technique. Based on the results obtained from the phenotypic and genotypic characterization, twenty four strains were selected for genome sequencing using the Illumina® MiSeq platform. The most frequently identified serotype was 2 / ½ (82.8%); followed to a lesser extent by serotypes 3, 4, 6, 7, 8, 9, 18, 27, 28, 1/14, with only six non typeable strains (NT). For virulence profile characterization, four genes sly, arcA, epf and mrp variants were screened, and were identified 11 virulence profiles in the studied strains. The genotyping by AFLP technique identified 30 genotypic profiles and the PFGE technique identified 64 pulsotypes. For both techniques, no clear correlation between epidemiological and genotypic data could be identified, but a tendency to group strains per year of isolation can be observed. The MIC results identified nine antimicrobial susceptibility profiles and 72.1% of the strains were classified as multidrug resistant. High rates of resistance to tetracyclines, macrolides, clindamycin and sulfadimethoxine were observed, while beta lactams and florfenicol were the most effective antimicrobials. In the genomic analysis, no plasmid markers were detected and only three resistance genes were identified in the S. suis Brazilian genomes; the ermB gene, which encodes resistance to macrolides and lincosamides, was detected in 79.2% of the 24 studied genomes. The MLST analysis identified eight new allele sequences and one new allelic combination, such that six new type sequences (STs) were identified among the 24 genomes analyzed. It was identified a mobile genetic element (CMGETZ080501) related to antimicrobial resistance in seven from nine strains of serotype 2; the two Brazilian serotype 2 strains that differ from the others (45 and 47) were the most susceptible strains to antimicrobials. Regarding genetic mapping of the strains from serotype 3, it was observed that two of them differ from the others and show greater similarity to the reference genotype of serotype 4 strains. This result was both verified in wgSNP and MLST analysis, confirming that the capsular characterization of S. suis should not be used as an indication of genetic similarity. Given the genetic variability and the high frequency of multidrug resistance identified in the S. suis strains circulating in the country, it is possible to evaluate the reasons for the control of the agent to remain a major challenge for the national intensive pig production systems.

Identification of new flagellin-encoding fliC genes in Escherichia coli isolated from domestic animals using RFLP-PCR and sequencing methods / Identificação de novas flagelinas codificadas por fliC em Escherichia coli isoladas de animais domésticos utilizando RFLP-PCR e sequenciamento

Identification of Escherichia coli requires knowledge regarding the prevalent serotypes and virulence factors profiles allows the classification in pathogenic/non-pathogenic. However, some of these bacteria do not express flagellar antigen invitro. In this case the PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) and sequencing of the fliC may be suitable for the identification of antigens by replacing the traditional serology. We studied 17 samples of E. coli isolated from animals and presenting antigen H nontypeable (HNT). The H antigens were characterized by PCR-RFLP and sequencing of fliC gene. Three new flagellin genes were identified, for which specific antisera were obtained. The PCR-RFLP was shown to be faster than the serotyping H antigen in E. coli, provided information on some characteristics of these antigens and indicated the presence of new genes fliC.(AU)

A identificação da Escherichia coli requer conhecimento sobre os sorotipos e fatores de virulência prevalentes permitindo a classificação em patogênico/não patogênico. No entanto, algumas destas bactérias não expressam o antígeno flagelar in vitro. Neste caso, o PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP-PCR) e o sequenciamento do gene fliC podem ser adequados para a identificação desses antígenos, substituindo a sorologia tradicional. Nesta pesquisa foram estudadas 17 amostras de E. coli isoladas de animais e que apresentavam antígeno H não tipável (HNT). Os antígenos H foram caracterizados por PCR-RFLP e sequenciamento do gene fliC. Três novos genes da flagelina foram identificados, para os quais anti-soros específicos foram obtidos. A técnica PCR-RFLP mostrou-se mais rápida que a sorotipagem do antígeno H em E. coli, fornecendo informações sobre algumas características desses antígenos e indicou a presença de novos genes fliC.(AU)

Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Actinobacillus pleuropneumoniae provenientes de diferentes estados brasileiros

A infecção por Actinobacillus pleuropneumoniae, doença conhecida como pleuropneumonia suína, assumiu grande importância na suinocultura moderna devido à alta ocorrência observada nos rebanhos. O impacto da doença está relacionado à capacidade do agente em causar pneumonia severa, levando os animais a óbito ou doença crônica, resultando em graves prejuízos zootécnicos. Diante desse cenário, o controle e monitoramento do agente se faz importante por meio da identificação dos diferentes sorotipos, da análise genética e da determinação dos perfis de resistência aos antimicrobianos. O objetivo do presente estudo foi caracterizar fenotípica e genotípicamente estirpes de Actinobacillus pleuropneumoniae isoladas a partir de quadros de pneumonia em suínos. Um total de 85 estipes de A. pleuropneumoniae foram submetidas a reação em cadeia pela polimerase (PCR) para identificação e sorotipagem, determinação da concentração inibitória mínima de antimicrobianos, polimorfismo do comprimento de fragmentos amplificados (AFLP) e eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE). Os sorotipos mais frequentes foram: 5 (38,8%), 10 (29,4%), 7 (5,9%), 8 (5,9%) e 6 (3,5%), sendo que 14 (16,5%) estirpes foram não tipáveis. Foi observada alta heterogeneidade de perfil genético entre as estirpes analisadas, tanto pelo AFLP quanto pelo PFGE, e o índice discriminatório para cada técnica foi 0,97 e 0,84, respectivamente. Todas as estirpes foram sensíveis ao ceftiofur, gentamicina, tulatromicina e tilmicosina, sendo que 98,8% das estirpes foram resistentes à tilosina e altas taxas de resistência foram observadas ainda para as tetraciclinas, clindamicina e sulfadimetoxina.

Infection by Actinobacillus pleuropneumoniae, a disease known as swine pleuropneumonia, has gained greater relevance to modern pig farming due to the high recurrence rate observed in herds. The impact of the disease relates to the capacity of the agent to cause severe pneumonia, leading to animal death or chronic conditions, thus resulting in severe zootechnical losses. In view thereof, the control and monitoring of the agent is key, being performed through the identification of different serotypes, genetic analysis and determination of antimicrobial resistance profiles. The objective of this study was to characterize phenotypically and genotypically Actinobacillus pleuropneumoniae strains isolated from swine with clinical presentation of pneumonia. A total of 85 strains of A. pleuropneumoniae were subject to polymerase chain reaction (PCR) for identification and serotyping, determination of the minimal inhibitory concentration, amplified fragment length polymorphism (AFLP) and pulsed field gel electrophoresis typing techniques (PFGE). Most recurring serotypes were: 5 (38.8%), 10 (29.4%), 7 (5.9%), 8 (5.9%) and 6 (3.5%), of which 14 (16.5%) strains were nontypeable. High genetic heterogeneity was observed for both AFLP and PFGE, and the discriminatory index for each technique was 0.97 and 0.84, respectively. All 85 strains were susceptible to ceftiofur, gentamicin, tulatromicin and tilmicosin, 84 of which were resistant to tylosin, and high resistance rates were also observed for clindamycin, tetracyclines and sulfadimethoxine.

Identificação sorológica e relação filogenética de Salmonella spp. de origem suína / Serological identification and phylogenetic relationship of Salmonella spp. pig origin

Salmonella spp. é um importante patógeno zoonótico que pode ser disseminado ao longo da cadeia produtiva de suínos. Objetivou-se avaliar a incidência de Salmonella spp. em fezes de suínos de terminação na granja, no pré-abate e amostras ambientais, identificar os sorovares e estabelecer a relação filogenética entre os isolados. Foram realizadas três coletas em lotes diferentes de suínos alojados na granja de terminação e nos mesmos animais após o transporte ao frigorífico totalizando 90 parcelas e 9 amostras ambientais. O transporte não influenciou na porcentagem de isolamento do microrganismo (p>0,05). Das 99 amostras, 50 (50,5 por cento) foram identificados como Salmonella spp., sendo identificado uma multiplicidade de sorovares: Agona (30 por cento), Typhimurium (26 por cento), Minnesota (24 por cento), Infantis (18 por cento) e Panama (2 por cento). Os dendrogramas demonstraram homologia entre isolados dos diferentes sorovares agrupados em clusters. A similaridade foi independente do local de isolamento indicando a presença de vários clones. As principais fontes de infecção determinadas foram a contaminação cruzada entre animais e ambiente e o consumo de ração contaminada. A diversidade de sorovares e a homologia entre eles indicam origem comum, demonstrando necessidade de monitoramento de bactérias zoonóticas e de implantação de medidas de controle mais eficazes para Salmonella spp. em suínos.(AU)

Salmonella spp. is an important zoonotic pathogen that can spread along the production chain of swines. The objective was to evaluate the incidence of Salmonella spp. in feces of swines in termination phase in the farm, in the pre-slaughter and environmental samples, identify the serotypes and establish a phylogenetic relationship among the isolates. Three collections were done in different batches of pigs housed in the termination pen and in the same animals after transport to the slaughterhouse totaling 90 plots and 9 environmental samples. The transport does not influenced the percentage of isolation of the microorganism (p>0.05). Of the total of 99 samples, 50 (50.5 percent) were identified as Salmonella spp., and was identified a variety of serovars: Agona (30 percent), Typhimurium (26 percent), Minnesota (24 percent), Infantis (18 percent) and Panama (2 percent). Dendrograms showed homology among isolates of different serovars grouped into clusters. The similarity was independent of the local of isolation, indicating the presence of several clones. The main sources of infection were cross-contamination between animals and environment and the consumption of contaminated feed. The diversity of strains and homology among the isolates indicates a common origin, demonstrating a need for monitoring of zoonotic bacterias and the deployment of more effective control measures for Salmonella spp. in swines.(AU)

Caracterização fenotípica e molecular de estirpes de Haemophilus parasuis isoladas de suínos da região Centro-sul do Brasil

Haemophilus parasuis é o agente etiológico da Doença de Glässer, que causa artrite, pneumonia, meningite e poliserosite em suínos e tem assumido grande importância na suinocultura moderna, uma vez que sua ocorrência tem aumentado significativamente nos últimos anos em rebanhos afetados pelo circovirus suíno tipo 2. No presente estudo foram avaliadas 117 amostras de H. parasuis isoladas dentre os anos de 2009 a 2014, isoladas de suínos de diferentes estados do da região Centro-Sul do Brasil. As estirpes foram submetidas à sorotipificação, confirmação do gênero/espécie pela PCR, o perfil de resistência a antimicrobianos foi avaliado através da determinação da concentração inibitória mínima (CIM), foi realizada a caracterização genotípica das amostras por eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e por sequenciamento de múltiplos sítios (multilocus sequence typing - MLST) e a presença de genes de virulência vtaA foi analisada. Os sorotipos mais frequentes foram: 4 (21,3%), seguido do 5 (12,9%), do 13 (9,4%), do 14 (7,7%) e do sorotipo 1 (1,7%), e em alguns casos mais de um sorotipo foi identificado na mesma granja e até no mesmo animal, resultado este parecido ao encontrado no restante do mundo. Em todas as amostras o gene vtaA estava presente, para alguns antibióticos os índices de resistência foram elevados, como para tilosina (98,29%), danofloxacina (95,72%), sulfadimetoxina (88,03%), penicilina (77,7%) e a multirrestencia atingiu o índice alarmente de 93,16% das estirpes. Foram identificados 67 perfis diferentes no PFGE e das 9 amostras analisadas pelo MLST foram identificados novos STs, até então, não descritos mundialmente. Quando os novos STs foram comparados com os previamente descritos, estas se dispersaram entre as descritas em diferentes países. Neste estudo foi possível observar que as estirpes de H. parasuis brasileiras possuem alta variabilidade, tanto nos sorotipos, perfis de resistência, análises genômicas de PFGE e MLST.

Haemophilus parasuis is the etiological agent of Glässer disease that causes arthritis, pneumonia, meningitis and polyserositis in pigs and has assumed great importance in modern swine production, since its occurrence has increased significantly in recent years in herds affected by porcine circovirus type 2. In the present study 117 strains of H. parasuis isolated between 2009 to 2014 were utilized, isolated from pigs of south center of Brazil. The strains were serotyping, confirmed genus/species by PCR, the antimicrobial resistance profile was evaluated determining the minimum inhibitory concentration (MIC) and strains were genotypically characterized by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE), multilocus sequence typing (MLST) and presence of vtA virulence gene. The major serotypes identified were 4 (21.3%), 5 (12.9%), 13 (9.4%), 14 (7.7%) and at last the 1 (1.7%), In some cases more than one serotype was identified in the same farm and in the same animal, this results were identified in others parts of the world. All samples had vtA gene. The resistance for some antibiotics was high for tylosin (98.29%), danofloxacin (95.72%) sulfadimetoxin (88.03%), and penicillin (77.7%). Multidrug resistance rates reached 93.16% of the samples. A total of 67 different profiles were identified in PFGE and nine samples were analyzed by MLST. All nine strains tested were identified as new STs. When these strains were compared with MLST database, they were dispersed among the strains from other countries. In this study, it was clear that the Brazilian H. parasuis strains are highly variable considering serotypes, resistance profiles, genomic analysis of PFGE and MLST.

Characterization of Listeria monocytogenes isolated from a fresh mixed sausage processing line in Pelotas-RS by PFGE

Listeria monocytogenes is a bacterium capable to adhere to the surfaces of equipment and utensils and subsequently form biofilms. It can to persist in the food processing environmental for extended periods of time being able to contaminate the final product. The aim of this study was to trace the contamination route of L. monocytogenes on a fresh mixed sausage processing line, from raw material to the final product. The isolates obtained were characterized by serotyping and molecular typing by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) using the restriction enzymes ApaI and AscI. L. monocytogenes was detected in 25% of the samples. The samples of raw material were not contaminated, however, the microorganism was detected in 21% of the environmental samples (food contact and non-food contact), 20.8% of the equipments, 20% of the food worker's hands, 40% of the mass ready to packaging and in all the final products samples, demonstrating that the contamination of final product occurred during the processing and the importance of cross contamination. PFGE yielded 22 pulsotypes wich formed 7 clusters, and serotyping yielded 3 serotypes and 1 serogroup, however, the presence of serotypes 4b and 1/2b in the final product is of great concern for public health. The tracing of contamination showed that some strains are adapted and persisted in the processing environment in this industry.

Listeria monocytogenes é uma bactéria com capacidade de formar biofilmes e de colonizar superfícies de equipamentos e utensílios. Esse microrganismo pode persistir por longos períodos em plantas de processamento de alimentos, sendo capaz de contaminar o produto final. O objetivo deste estudo foi traçar a rota de contaminação de L. monocytogenes em uma linha de processamento de lingüiça mista frescal, desde a matéria-prima até o produto final. Os isolados obtidos foram caracterizados por sorotipagem e por tipagem molecular, através de Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), usando as enzimas de restrição ApaI and AscI. L. monocytogenes foi detectada em 25% das amostras. Nenhuma amostra da matéria-prima apresentava o patógeno, entretanto, o microrganismo foi detectado em 21% das amostras ambientais (com e sem contato com o alimento), 20,8% dos equipamentos, 20% das amostras de mãos de manipuladores, 40% da massa pronta para o embutimento, e em todas as amostras do produto final. Isso demonstra que a contaminação do produto final ocorreu durante o processamento, e a importância da contaminação cruzada. PFGE produziu 22 pulsotipos e a sorotipagem produziu 3 sorotipos e 1 sorogrupo, entretanto, a presença dos sorotipos 4b e 1/2b no produto final é de grande importância para a saúde pública. Os perfis de macrorestrição mostraram que algumas cepas são adaptadas e persistiram no ambiente de processamento dessa indústria.

Pheno- and genotypic characterization of Listeria monocytogenes clinical isolates from the southwestern region of the State of São Paulo, Brazil

Considering the lack of information available in Brazil concerning listeriosis, the present study aimed to analyze phenotypic and genotypically Listeria monocytogenes clinical isolates from the Southwestern region of the State of São Paulo, Brazil. From January 1995 to May 2005, thirteen isolates of L. monocytogenes from twelve patients with listeriosis were sent to the Adolfo Lutz Institute (Campinas Regional Laboratory, São Paulo, Brazil). The antimicrobial susceptibility of the isolates was evaluated by the microdilution broth method for ampicillin, gentamicin, trimethoprim, sulfamethoxazole and vancomycin. They were also serotyped (Denka Seiken, Japan), and sub-typed by PFGE employing ApaI and AscI and the American CDC protocol. None of the isolates showed resistance to the antibiotics tested; however, seven of them presented increased values for sulfamethoxazole MICs. Ten isolates belonged to serotype 4b, two to serotype 1/2a and only one to serotype 1/2b. After digestion with ApaI and AscI, the strains were distributed in 3 different groups according to their profile. It was observed that the spatial or temporally unrelated strains exhibited similar PFGE profiles, indicating a possible clonal relationship among them.

No Brasil, dados sobre a ocorrência de surtos ou casos esporádicos de listeriose são raros, assim como estudos que tratem da caracterização de cepas de L. monocytogenes isoladas destes episódios. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avaliar feno e genotipicamente 13 cepas de Listeria monocytogenes isoladas de 12 casos clínicos de listeriose ocorridos em 6 municípios da região sudoeste do Estado de São Paulo, Brasil, no período de janeiro de 1995 a maio de 2005. As cepas foram submetidas ao teste de sensibilidade a cinco antimicrobianos (ampicilina, gentamicina, trimetoprim, sulfametoxazol e vancomicina) pelo método de microdiluição em caldo; à sorotipagem (Denka Seiken, Japão) e à determinação do perfil de macro-restrição por eletroforese em campo pulsado (PFGE, Pulsenet, CDC, USA, 2001). Nenhuma das cepas foi resistente aos antimicrobianos testados; entretanto, sete tiveram valores da CIM aumentados para o sulfametoxazol. Dez cepas pertenciam ao sorotipo 4b, duas ao sorotipo 1/2a e apenas uma ao sorotipo 1/2b. Com o emprego da técnica de PFGE e as enzimas Apa I e Asc I as cepas foram separadas em três grupos diferentes, de acordo com seus perfis moleculares. É interessante destacar que cepas não relacionadas (temporal ou espacialmente) apresentaram perfis moleculares semelhantes indicando uma possível relação clonal entre elas.

Comparison of two slide agglutination serotyping methods and PCR-based capsule typing for the characterization of Haemophilus influenzae serotypes

Ninety-three nasopharyngeal Haemophilus influenzae isolates were serotyped by two slide agglutination methods (SAST 1 and SAST 2) and the results compared with those obtained by capsule type-specific PCR. SAST 1 presented a low correlation with results obtained by PCR (75.2%) while SAST 2 showed a better agreement with the molecular technique results (93.5%). These findings suggest that SAST 2 could be an alternative method for adequate detection of H.influenzae type b.

Noventa e três isolados nasofaringeanos de H. influenzae foram sorotipados através de 2 métodos de aglutinação em lamina (SAST 1 e SAST 2) e os resultados foram comparados com a sorotipagem por PCR. SAST 1 apresentou uma baixa correlação com os resultados obtidos por PCR (75,2%) enquanto que SAST 2 mostrou uma melhor concordância com os resultados da técnica molecular (93,5%). Estes resultados indicam que SAST 2 pode ser um método alternativo para a correta detecção de H. influenzae tipo b.

Caracterização genotípica de cepas de Haemophilus parasuis / Genotype characterization of Haemophilus parasuis strains

Haemophilus parasuis é um dos agentes bacterianos que tem assumido grande importância na indústria suinícola nos últimos anos. Por muitos anos foi considerada uma doença esporádica de suínos jovens, no entanto, com o surgimento de doenças imunossupressoras ou com o aumento da criação de suínos com alto status sanitário, sua freqüência vem assumindo proporções cada vez maiores. A caracterização das cepas através de métodos fenotípicos como a sorotipagem não tem sido suficiente para os estudos epidemiológicos sobre esta bactéria, uma vez que muitos isolados não são sorotipificáveis. Os objetivos deste estudo foram caracterizar os isolados através da sorotipagem, do Polimorfismo do Comprimento de Fragmentos Amplificados (AFLP) e da Eletroforese em Gel de Campo Pulsado (PFGE), comparando os resultados obtidos. Dentre as 51 cepas de Haemophilus parasuis avaliadas uma foi classificada como sorotipo 2, doze como sorotipo 4, seis como sorotipo 5, quatro como 13 e sete como sorotipo 14, sendo que vinte e uma amostras não foram sorotipificáveis. Através do AFLP foi possível caracterizar todos os isolados, com um índice discriminatório de 0,98, porém esta técnica não demonstrou uma boa reprodutibilidade. Através da PFGE utilizando a enzima Sma I apenas 14 cepas foram genotipadas, porém com a enzima Not I, todas apresentaram padrões de bandas e o índice discriminatório obtido foi de 0,95. Os perfis obtidos através da PFGE com a enzima Not I apresentaram a melhor correlação com os dados de origem das cepas e seus sorotipos, indicando que a técnica possui um bom potencial para aplicação em estudos epidemiológicos

In recent years, Haemophilus parasuis has had a growing impact on the swine industry. In the past, Haemophilus parasuis infections were considered to be sporadic in young pigs. However, the incidence is increasing due to immunosuppressive diseases and the increase in the production of pigs with high sanitary status. Characterization of strains using methods based on phenotype identification is not enough to perform epidemiological studies on thebacterium, since a large percentage of isolates are nontypeable). The aim of this study was to characterize isolates according to serotyping, Amplified Fragment Length Polymorphism (AFLP), and Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE), and to compare characterization results. Out of the 51 strains of Haemophilus parasuis evaluated in this study: one was serotype 2; twelve serotype 4; six serotype 5; four serotype 13; and seven serotype 14. Serotyping could not be performed on the remaining 21 samples. All isolates were characterized using AFLP, with a discriminatory index of 0.98, but reproducibility of this technique is not good. Regarding PFGE, 14 strains were genotyped using enzyme Sma I; yet, with enzyme Not I, all strains presented band size and discriminatory index power of 0.95. The profiles obtained using PFGE with Not I presented better correlation with the origin and serotype of the strains, suggesting that this technique could be used in epidemiological studies with promising results