INFLUÊNCIA DO TEMPO NA FERTILIDADE DO SÊMEN DESCONGELADO DE GARANHÕES DA RAÇA QUARTO DE MILHA

Quando se trata de biotecnologias da reprodução, é conhecido que o índice de fertilidade do sêmen congelado equino ainda é reduzido, uma vez que, os processos de congelação e descongelação levam a efeitos deletérios sobre o espermatozoide, diminuindo sua taxa de motilidade e vigor, modificando sua morfologia e, consequentemente, reduzindo o potencial fértil dos reprodutores. Por isso a necessidade de testes in vitro que avaliem a qualidade do sêmen equino descongelado, assim como sua viabilidade in vivo, levandose em consideração a possível influência da individualidade do animal sobre a forma de se comportar das células espermáticas frente aos processos de congelação e descongelação. Logo, o objetivo do presente estudo foi avaliar parâmetros de qualidade seminal in vitro de diferentes garanhões durante o teste de termorresistência, com o propósito de se obter uma técnica com maior repetibilidade, e que auxilie no incremento dos resultados no uso de sêmen congelado equino. Para isso, foram utilizadas amostras de sêmen de 4 garanhões da raça Quarto de Milha, em 5 repetições, submetidos a TTR nos tempos 0, 30, 60 e 90 minutos. A cinética espermática foi avaliada através do CASA. A integridade de membrana, foi avaliada pela coloração dupla (Diacetato de Carboxifluoresceína e Iodeto de Propídio), e a integridade do acrossoma, o Isotiocianeto de Fluoresceína conjugado a Peanut agglutin. A morfologia espermática foi analisada através de microscopia em câmara úmida com microscópio de contraste de fase. A viabilidade in vivo, foi testada pela inseminação de 10 éguas para gestação ou coleta de embriões distribuídos entre os reprodutores. Os dados foram analisados pelo Statistical Analysis System (SAS), com linearidade mista e parcelas repetidas no tempo, adotando covariância autorregressiva; e as médias comparadas pelo teste de Tukey Kramer. As correlações entre as variáveis foram avaliadas pelo coeficiente de correlação de Spearman. Foi observada uma interação significativa nos parâmetros Reprodutor, Tempo e interação reprodutor x tempo (p < 0,001) na cinética espermática, indicando individualidade entre garanhões em termos de longevidade espermática. Essa individualidade se repetiu na integridade de membrana, onde apenas um dos garanhões manteve membrana íntegra sem diferença significativa até os 90 minutos pós-TTR, enquanto que os demais reprodutores obtiveram diferença na integridade de membrana aos 30 e aos 60 minutos, respectivamente. Não houve diferença na patologia espermática ou na integridade de acrossoma entre tempos ou reprodutores. 50% das éguas inseminadas apresentaram embrião ou prenhez e todos as amostras seminais apresentaram pelo menos 1 égua prenhe ou embriões. Demonstrando nitidamente a individualidade dos reprodutores e a necessidade de mais conhecimento das características seminais de longevidade espermática dos mesmos, a fim de se padronizar protocolos de IA para poder determinar o momento mais adequado para a inseminação de acordo com o tempo da ovulação, mantendo-se índices de fertilidade melhores.

The aim of this study was to evaluate parameters of seminal quality in vitro of different stallions correlating with time, in order to obtain a technique with greater repeatability, and which helps to increase results in the use of frozen equine semen. Cryopreserved semen samples from 4 Quarter Horses stallions were used, in 5 repetitions, submitted to TTR at times 0, 30, 60 and 90 minutes. Sperm kinetics, membrane and acrosome integrity, sperm morphology were evaluated, and in vivo viability was demonstrated. Data analysis was performed by the Statistical Analysis System (SAS), in mixed linear models with plots repeated over time, adopting autoregressive covariance structure. And the means compared by the Tukey Kramer test. The correlations between the variables under study were assessed using Spearman's correlation coefficient. A significant interaction was observed in the parameters Breeder, Time and Breeder x time interaction (p <0.001) in sperm kinetics, indicating individuality between stallions in terms of sperm longevity. This individuality was repeated in the membrane integrity, where only one of the stallions maintained an intact membrane without significant difference until 90 minutes after TTR, while the other breeders obtained a difference in membrane integrity at 30 and 60 minutes, respectively. There was no difference in sperm pathology or acrosome integrity between times or reproducers. Of the inseminated mares 50% (5/10) presented embryo or pregnancy and all seminal samples presented at least 1 pregnant mare or produced embryos. The study clearly demonstrated the individuality of the breeders and the need for more knowledge of the semen characteristics of sperm longevity in order to standardize AI protocols taking into account the individuality of the stallion to determine the most appropriate time for insemination according to the time of ovulation, maintaining favorable fertility rates

Effect of split ejaculation and seminal extenders on longevity of donkey semen preserved at 5° C

The aim of this study was to evaluate the longevity of donkey sperm comparing the rich seminal fraction and the whole semen in two extenders, Kenney and modified Baken extenders. Semen of five donkeys were collected through an open-end artificial vagina once a week for five consecutive weeks. The two first jets (rich fraction) of semen were collected separately from the rest of the ejaculate. Whole semen samples were obtained mixing proportionally part of the rich with part of the poor seminal fractions. Seminal samples were immediately diluted 1:1 in each extender and maintained at room temperature during sperm concentration analysis. Samples were further diluted to rich 50×10(6) sperm per ml, cooled in a refrigerator at the initial rate of -0.6° C/min and preserved at 5° C. Total motility (TM), progressive motility (PM) and sperm vigor (V) were examined after final dilution and cooling, and every 24 hours up to the decrease of total motility under 10%. Sperm morphology was evaluated using a phase contrast microscope directly after dilution, on days 3, 6 and 9 post collection. It was used a 2×2 factorial design in a randomised bloc experiment, and means were compared by Students t test. Longevity did not vary between the rich seminal fraction and the whole semen for both extenders used. TM, PM, V and sperm morphology were better preserved in the extender with egg yolk (modified Baken extender) than in the one with skimmed milk (Kenney) in both seminal fractions.

O objetivo deste trabalho foi avaliar a longevidade dos espermatozóides provenientes da fração rica e da fração completa de ejaculados de jumentos, preservados em dois diluidores. As duas amostras seminais foram diluídas nos dois diluidores (Kenney e Baken modificado) e preservadas a 5° C. Sêmens de cinco jumentos foram coletados com auxílio de vagina artificial de fundo aberto, uma vez por semana e por cinco semanas consecutivas. Os dois primeiros jatos do ejaculado (fração rica) foram coletados separadamente do restante do ejaculado. Amostras de ejaculado completo foram obtidas misturando proporcionalmente parte da fração rica e parte do restante do ejaculado. Amostras de sêmen foram, em seguida, misturadas 1:1 com cada diluidor e mantidas em temperatura ambiente até a avaliação da concentração. A diluição final teve por objetivo a obtenção de 50×10(6) espermatozóides por ml. O sêmen diluído foi resfriado até 5° C numa taxa de -0.6° C/min. A motilidade total e progressiva e o vigor foram avaliados no final da diluição, após resfriamentos e a cada 24 horas até a queda da motilidade total abaixo de 10%. A morfologia espermática foi avaliada por microscopia de contraste de fase em amostras coletadas após a diluição, e nos dias 3, 6 e 9 pós-coleta. As médias foram comparadas pelo teste t de Student. Não houve diferença na longevidade dos espermatozóides entre a fração seminal rica e a fração completa com ambos os diluidores testados. Observou-se que os espermatozóides, tanto da fração rica como da completa, foram melhor preservados no meio Baken modificado (base de gema de ovo) do que no meio Kenney (base de leite desnatado).