Gangrenous mastitis in sheep caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus / Mastite gangrenosa em ovinos causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente

Mastitis is a multifactorial disease and considered one of the most critical problems in the dairy industry worldwide. The condition is characterized by reduced milk and several abnormalities in the mammary gland. This study aimed to report an outbreak of gangrenous mastitis caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus in a Santa Inês sheep herd. Eighteen sheep were affected, and five of them with severe clinical pictures were examined. The clinical and pathological picture were variable and characterized by apathy, anorexia, emaciation, opaque and brittle hair, apparent and congested episcleral vessels, and hyperthermia. These ewes had enlarged, firm, and painful mammary glands. Macroscopically, these lesions consisted of severe gangrenous mastitis, and microscopically, the primary lesions consisted of necrosis, thrombosis, and fibrosis of the mammary parenchyma. Milk samples from one of the five severely affected ewes were collected and cultured under aerobic or microaerophilic incubation at 37°C for 24 hours on sheep blood agar. The obtained colonies were then submitted to MALDI-TOF for speciation. The colonies were also submitted to an antimicrobial susceptibility test, genotyping of virulence factors and resistance genes were also performed. The isolates showed antimicrobial multiresistance since they were resistant to seven out of 13 tested antibiotics. The isolates were also positive for two staphylococcal enterotoxigenic genes (sec and see) and fibronectin-binding protein B (fnbB).(AU)

A mastite é uma doença multifatorial e é considerada um dos problemas mais importantes na indústria de laticínios no mundo todo. A condição é caracterizada pela redução de leite e várias anormalidades na glândula mamária. O objetivo deste estudo foi relatar um surto de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em um rebanho ovino Santa Inês. Dezoito ovelhas foram afetadas e cinco delas com quadro clínico severo foram examinadas. O quadro clínico-patológico era variável quanto a severidade e consistia em apatia, anorexia, magreza, pelos opacos e quebradiços e vasos episclerais aparentes e ingurgitados. As ovelhas apresentavam glândulas aumentadas, firmes e dolorosas. Macroscopicamente, as principais lesões consistiam em mastite gangrenosa e microscopicamente havia necrose do parênquima glandular, trombose e fibrose. Amostras de leite de uma das cinco ovelhas severamente afetadas foram coletadas e cultivadas sob incubação aeróbica ou microaerofílica a 37°C por 24 horas em ágar sangue de ovelha. As colônias obtidas foram então submetidas ao MALDI-TOF para especiação. Além disso, as colônias foram submetidas a um teste de suscetibilidade antimicrobiana e foi realizada a genotipagem de fatores de virulência e genes de resistência. Os isolados apresentaram multirresistência antimicrobiana por serem resistentes a sete dos 13 antibióticos testados. Os isolados também foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos (sec e see) e proteína B de ligação à fibronectina (fnbB).(AU)

Gangrenous mastitis in sheep caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus / Mastite gangrenosa em ovinos causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente

Mastitis is a multifactorial disease and considered one of the most critical problems in the dairy industry worldwide. The condition is characterized by reduced milk and several abnormalities in the mammary gland. This study aimed to report an outbreak of gangrenous mastitis caused by multidrug-resistant Staphylococcus haemolyticus in a Santa Inês sheep herd. Eighteen sheep were affected, and five of them with severe clinical pictures were examined. The clinical and pathological picture were variable and characterized by apathy, anorexia, emaciation, opaque and brittle hair, apparent and congested episcleral vessels, and hyperthermia. These ewes had enlarged, firm, and painful mammary glands. Macroscopically, these lesions consisted of severe gangrenous mastitis, and microscopically, the primary lesions consisted of necrosis, thrombosis, and fibrosis of the mammary parenchyma. Milk samples from one of the five severely affected ewes were collected and cultured under aerobic or microaerophilic incubation at 37°C for 24 hours on sheep blood agar. The obtained colonies were then submitted to MALDI-TOF for speciation. The colonies were also submitted to an antimicrobial susceptibility test, genotyping of virulence factors and resistance genes were also performed. The isolates showed antimicrobial multiresistance since they were resistant to seven out of 13 tested antibiotics. The isolates were also positive for two staphylococcal enterotoxigenic genes (sec and see) and fibronectin-binding protein B (fnbB).(AU)

A mastite é uma doença multifatorial e é considerada um dos problemas mais importantes na indústria de laticínios no mundo todo. A condição é caracterizada pela redução de leite e várias anormalidades na glândula mamária. O objetivo deste estudo foi relatar um surto de mastite gangrenosa causada por Staphylococcus haemolyticus multirresistente em um rebanho ovino Santa Inês. Dezoito ovelhas foram afetadas e cinco delas com quadro clínico severo foram examinadas. O quadro clínico-patológico era variável quanto a severidade e consistia em apatia, anorexia, magreza, pelos opacos e quebradiços e vasos episclerais aparentes e ingurgitados. As ovelhas apresentavam glândulas aumentadas, firmes e dolorosas. Macroscopicamente, as principais lesões consistiam em mastite gangrenosa e microscopicamente havia necrose do parênquima glandular, trombose e fibrose. Amostras de leite de uma das cinco ovelhas severamente afetadas foram coletadas e cultivadas sob incubação aeróbica ou microaerofílica a 37°C por 24 horas em ágar sangue de ovelha. As colônias obtidas foram então submetidas ao MALDI-TOF para especiação. Além disso, as colônias foram submetidas a um teste de suscetibilidade antimicrobiana e foi realizada a genotipagem de fatores de virulência e genes de resistência. Os isolados apresentaram multirresistência antimicrobiana por serem resistentes a sete dos 13 antibióticos testados. Os isolados também foram positivos para dois genes enterotoxigênicos estafilocócicos (sec e see) e proteína B de ligação à fibronectina (fnbB).(AU)

Efeito de extratos de folhas de Mangifera indica L. em Staphylococcus spp.

A mastite bovina é responsável por impactos negativos na pecuária leiteira e o uso de antimicrobianos para a doença tem favorecido a resistência bacteriana, que representa um problema global. Extratos vegetais têm representado alternativa para o controle bacteriano. A Mangifera indica é comum em vários continentes, pertence à família Anacardiaceae que possui árvores com propriedades antimicrobianas. O objetivo nesta pesquisa foi avaliar a ação antimicrobiana de extratos da mangueira. As bactérias avaliadas neste estudo, foram provindas de vacas com mastite, sequenciadas e identificadas como Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus e comparadas com S. aureus (ATCC 25923). Os isolados ATCC 25923, SA178 e SA353C apresentaram resistência à penicilina, antibacteriano mais utilizado em rebanhos leiteiros. Foram utilizados extratos aquoso (EA) e etanólico (EE) de folhas da planta. Os perfis cromatográficos do EA foram obtidos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) indicando flavonoides e do EE por cromatógrafo a gás da Agilent Technologies (GC 7890A), revelando a presença de ácido gálico, carboidratos e compostos fenólicos. E os teores de taninos condensados foram quantificados. Foi inicialmente realizado o teste inibição em difusão em ágar e os halos de inibição foram comparados em delineamento inteiramente casualizado. Avaliou-se a concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM) dos extratos com e sem taninos para os cinco isolados mais resistentes e estirpe padrão. Posteriormente, avaliou-se a capacidade de formação de biofilmes pelos isolados mais resistentes e as eficácias do extrato mais eficiente nas etapas anteriores para reduzi-los. Os EE e EA de folhas da mangueira apresentaram halos de inibição entre 9,98-11,65 mm e 6,75-10,82 mm, respectivamente, sendo o EE mais eficiente (p<0,05). As CIMs do EE variaram entre 1,8-7,5 mg/ml com CBM de 15,1-45,3 mg/ml. Para o EA, as CIMs variaram entre 8,8-71 mg/ml, não obtendo-se CBM para as bactérias avaliadas. Após a remoção dos taninos, não foi verificado efeito inibitório satisfatório, indicando esse metabólito secundário como agente principal do efeito antibacteriano dos extratos avaliados. Todas as bactérias testadas formaram biofilmes em borrachas de teteiras e aço inoxidável. Em nosso conhecimento, esta foi a primeira pesquisa a avaliar borrachas de teteiras em testes de biofilmes bacterianos. O EE a 45,3 mg/ml, apresentou ação sanitizante após 5 minutos de contato contra o principal agente causador da mastite bovina, com remoção total de células de S. aureus. Conclui-se que os extratos de folhas de M. Indica, após estudos de toxicidade e testes in vivo, poderiam contribuir para controle alternativo dessas bactérias e o EE, atuar na redução eficiente de biofilmes.

Bovine mastitis is responsible for negative impacts on dairy cattle and use of antimicrobials for the disease has favored bacterial resistance, which represents a global problem. Plant extracts have represented an alternative for bacterial control. Mangifera indica is common in several continents, it belongs to the family Anacardiaceae that has trees with antimicrobial properties. The objective in this research was to evaluate the antimicrobial action of extracts from the hose. Bacteria evaluated in this study, they came from cows with mastitis, sequenced and identified as Staphylococcus aureus, Staphylococcus haemolyticus and compared to S. aureus (ATCC 25923). Isolates ATCC 25923, SA178 and SA353C showed resistance to penicillin, the most used antibacterial in dairy farms. Were used aqueous (EA) and ethanolic (EE) extracts of plant leaves. EA chromatography profiles were obtained by high performance liquid chromatography (HPLC) indicating flavonoids and EE by gas chromatograph from Agilent Technologies (GC 7890A), revealing a presence of gallic acid, carbohydrates and phenolic compounds. And contents of condensed tannins were quantified. Initially, it was performed in the agar diffusion inhibition test and the inhibition halos were compared in a completely randomized design. Was evaluated the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (CBM) of the extracts with and without tannins for the five most resistant isolates and standard strain. Subsequently, was evaluated the biofilm formation capacity by more resistant isolates and efficiencies of most efficient extract in the previous stages to reduce them. EE and EA of leaves mango had inhibition halos between 9.98-11.65 mm and 6.75-10.82 mm, respectively, being the EE more efficient (p <0.05). As EE CIMs ranged from 1.8-7.5 mg/ml with CBM of 15.1-45.3 mg/ml. For EA, as MICs ranged from 8.8-71 mg/ml, not obtaining CBM for the bacteria evaluated. After a removal of the tannins, no satisfactory inhibitory effect was observed, indicating this secondary metabolite as the main agent of the antibacterial effect of the extracts. All the bacteria tested formed biofilms in teat rubbers and stainless steel. To our knowledge, this was the first survey of teat rubbers in bacterial biofilm tests. EE at 45.3 mg/ml presented a sanitizing action after 5 minutes of contact against the main agent causing bovine mastitis, with total removal of S. aureus cells. It was concluded that extracts of M. Indica leaves, after toxic studies and in vivo tests, could contribute for alternative control of these bacteria and the EE, act in the efficient reduction of biofilms.

Extratos vegetais de plantas do Cerrado com eficácia antibacteriana in vitro para Staphylococcus spp. e Escherichia coli de bovinos

As diarreias em bezerros e as mastites em bovinos representam impacto negativo na pecuária. Nesta pesquisa promoveu-se a seleção de extrados de plantas do Cerrado em efeito inibitório para Escherichia coli e Staphylococcus spp. provenientes de bovinos. Foram selecionados os extratos etanólico de Annona crassiflora Mart e os extratos etanólicos e aquosos de Schinopsis brasiliensis Engl. e Caryocar brasiliense Cambess. Os perfils cromatográficos obtidos por HPLC e os teores de taninos condensados foram analizados para esses extrados. Após a remoção ou não de taninos e padronização a 84 mg/ml, foram avaliados em teste de difusão em Ágar para comparar o antagonismo para dois isolados de Eschechiria spp. provenientes de bezerros com diarreia e ATCC 25922 (Eschechiria coli) e três isolados de Staphylococcus spp. provenientes de vacas com mastite e ATCC 25923 (Staphylococcus aureus). Os halos de inibição foram comparados em delineamento inteiramente casualizado e determinou-se concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida mínima (CBM). Para Escherichia spp. todos os extratos selecionados foram eficientes e para Staphylococcus spp. os extratos etanólico de A. crassiflora e aquoso de S. brasiliensis foram mais efetivos. A CMI do extrato aquoso de S. brasiliensis foi apenas 37,5 g/mL para o isolado E2 de Escherichia e para os demais extratos foi 150 g/mL. A CBM do extrato etanólico de A. crassiflora foi 150 g/mL para todas as cepas. Após a remoção dos taninos não verificou-se efeito inibitório, o que indica esse metabólito seguncadário como agente do efeito antibacteriano dos extratos avalidados. Nesta pesquisa, os isolados S. aureus eram resistentes aos antibacterianos vancomicina, oxacilina, clindamicina e penicilina e E. coli eram resistentes à tetraciclina e os esses extratos selecionados, após estudos de toxicidade e testes in vivo, poderiam contribuir para o controle alternativo dessas bactérias.

Diarrhea in calves and mastitis in cattle represent negative impact on livestock. In this research promoted to check the Cerrado plant extrados in inhibitory effect on Escherichia coli and Staphylococcus spp. from cattle. The ethanol extracts of Annona crassiflora Mart and ethanol and aqueous extracts of Schinopsis brasiliensis Engl been selected. and Caryocar brasiliense Cambess. The chromatographic perfils obtained by HPLC and levels of condensed tannins were analyzed for these extrados. After removal of tannins or not the patterning and 84 mg/ml, were evaluated in agar diffusion test to compare the antagonism of two isolates Eschechiria spp. from calves with diarrhea and ATCC 25922 (Eschechiria coli) and three isolates of Staphylococcus spp. from cows with mastitis and ATCC 25923 (Staphylococcus aureus). The halos of inhibition were compared in a randomized design and was determined minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (CBM). Escherichia spp. all extracts were selected for efficient and Staphylococcus spp. the ethanol extracts of A. crassiflora and aqueous S. brasiliensis were more effective. The MIC aqueous extract of S. brasiliensis was only 37.5 µg/ml for the isolated Escherichia E2 and other extracts was 150 µg/ml. The CBM of the ethanol extract of A. crassiflora was 150 µg/ml for all strains. After removal of tannins is not verified inhibitory effect, indicating seguncadário this metabolite as an agent of the antibacterial effect avalidados extracts. In this research, the isolated S. aureus were resistant to antibacterial vancomycin, oxacillin, penicillin and clindamycin and E. coli were resistant to tetracycline and these selected extracts after toxicity studies and in vivo tests, could contribute to alternative control these bacteria .