Resumo
Leishmaniose visceral (LV) é uma doença causada pelo parasita intracelular do gênero Leishmania, que acomete o homem e várias espécies animais. O cão é um dos principais reservatórios urbanos do parasita, e desempenha um papel central no ciclo de transmissão aos seres humanos pelos flebotomíneos. Estudos sobre a resposta imune em cães com Leishmaniose Visceral têm demonstrado que a imunidade protetora está associada à resposta imune do tipo celular, enquanto que a progressão da doença está associada à resposta humoral e à produção de IL-10 e TGF-?. Essas citocinas induzem a desativação de macrófagos e têm potencial para incapacitar a defesa do hospedeiro contra Leishmania spp., levando à visceralização da infecção. O objetivo do estudo foi avaliar a produção de IL-10 e de TGF-? por células T regulatórias (Treg) em amostras de sangue e de baço de cães naturalmente infectados por Leishmania spp., e correlacionar à carga parasitária e aos achados histopatológicos. Cinco cães saudáveis e vinte e nove cães com manifestações clínicas de leishmaniose visceral e sorologia positiva para anticorpos anti-Leishmania foram incluídos no grupo de estudo. A PCR em tempo real foi utilizada para a quantificação da carga parasitária e para confirmação da infecção por Leishmania spp. Realizou-se, por citometria de fluxo, a quantificação das células T CD4 regulatórias produtoras de IL-10 e TGF-?. O teste t não pareado foi utilizado para comparar o percentual de células Treg produtoras de IL-10 e TGF-? entre os cães infectados e os saudáveis, e utilizou-se o teste de Mann-Whitney para comparar o percentual de IL-10 e TGF-? no sangue e no baço de cães com LV... )
Visceral leishmaniasis (VL) is a disease caused by the intracellular parasite of the Leishmania genus that affects humans and several animal species. The dog is one of the main urban reservoirs of the parasite once it plays a central role in the transmission cycle to humans by sandflies. Studies about the immune response in dogs with visceral leishmaniasis have demonstrated that protective immunity is associated with the immune response of the cellular type, while disease progression is associated with the humoral response and IL-10 and TGF-? production. These cytokines induce the macrophages deactivation and have the potential to disable the host defense against Leishmania spp. leading to infection visceralization. The aim of this study was to evaluate the regulatory T cells (Treg) producing IL-10 and TGF-? in blood and spleen samples from dogs naturally infected by Leishmania spp. and correlate to the parasite load and histopathology. Five healthy dogs and twenty-nine dogs with clinical visceral leishmaniasis manifestations, and seropositivity for anti-Leishmania antibodies were included in the study group. The real-time PCR was used to quantify the parasite load and infection confirmation with Leishmania spp. The regulatory CD4 T cells producing IL-10 and TGF-? quantification was performed by flow cytometry. The unpaired t test was used to compare the percentage of Treg cells producing...
Resumo
Endotoxemia é distúrbio sistêmico que se origina da resposta do hospedeiro a um componente da membrana celular das bactérias Gram- negativas. Esta resposta se dá através da exposição dos receptores celulares TLR-4 e TLR-2 ao LPS. Os objetivos deste estudo foram investigar as alterações na expressão gênica da exposição ao LPS em leucócitos de equinos utilizando a técnica de microarray, avaliar a eficiência do modelo ex vivo para os estudos envolvendo a endotoxemia pela mesma técnica, avaliar a expressão global de genes em vias envolvidas, identificar componentes da cascata metabólica com potenciais para novas terapias, e fornecer subsídio para futuros estudos. Amostras de sangue total (15mL) de cavalos saudáveis (n=6) foram incubadas durante 4 horas a 37°C com 5% de CO2 na presença (1 ou 10 ng/mL) ou ausência de LPS (0 ng/mL). Alíquotas de 500µL de sangue foram coletadas nos momentos 0, 2 e 4 horas após o estímulo do LPS. O RNA, extraído das mostras, foi utilizado para a transcrição do cDNA. A hibridização do cDNA marcado com Cy-3 foi realizada em lâminas 4x44K v2 de humanos contendo sequências homólogas com a espécie equina para os genes de interesse. Após a leitura das lâminas, com filtro para genes 30x mais ou menos expressos, verificou-se um aumento da expressão do TLR-2 na concentração de 10 ng LPS/mL no momento 4 em relação ao momento 2. Este resultado sugere que, embora o receptor TLR-4 seja o principal receptor no reconhecimento do LPS, o receptor TLR-2 também tem um papel no reconhecimento destas moléculas
Endotoxemia is systemic disturbance that origins from the host response to a component of the cellular membrane of Gram-negative bacterias. This response occurs through exposure of cellular receptors TLR-4 and TLR-2 to LPS. The objectives of this study were to investigate changes in gene expression of exposure to LPS in horses leukocytes using the microarray technique, to evaluate the efficiency of the ex vivo model for studies of endotoxemia by the same technique, to evaluate the global expression of genes in the metabolic pathways involved, identify components of the metabolic cascade with potential for new therapies, and provide allowance for future studies. Whole blood samples (15mL) of healthy horses (n=6) were incubated for 4 hours at 37°C with 5% of CO2 in the presence (1 or 10 ng/ml) or absence of LPS (0 ng/ml). Aliquots of 500?L of blood were collected at 0,2 and 4 hours after LPS stimulation. The RNAs, extracted from the samples, were used for the transcription of the cDNAs. Hybridization of labeled cDNAs with Cy-3 were performed in 4x44K v2 slides containing human sequences homologous to the equine species for the genes of interest. After the reading of the slides with filter for genes 30x up regulation or down regulation expression, it was observed an increased expression of the TLR-2 concentration of 10 ng LPS/mL at time 4 compared to time 2. This result suggests that, although the TLR-4 receptor is the main LPS recognition receptor, the receptor TLR-2 also plays a role in recognition of these molecules
Resumo
Objetivo: Analizar las diferentes formas de tratamiento propuestas, para unión retardada y no-unión de fracturas en canes, considerando la clasificación del proceso, condiciones encontradas y la viabilidad de cada tratamiento. Fuentes Pesquisadas: Se investigó en las bases de datos LILACS, DEDALUS, PUBMED Y el acervo de la Biblioteca de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de São Paulo, Brasil, en el periodo de junio de 2003 a marzo de 2004. Síntesis de los Datos: Unión retardada y no-unión son eventos patológicos en el proceso de recuperación de fracturas, originarias de varios factores físicos o biológicos que resultan en una inadecuada reparación ósea. Entre sus causas, la más común es sin duda la elección inadecuada del tratamiento originando inestabilidad, pérdida dei aporte vascular y quiebra de la secuencia de los procesos biológicos de cicatrización. Conclusiones: Estudios experimentales y clínicos indican una variedad muy grande de tratamientos, con destaque entre ellos el uso de proteínas osteoinductoras.
Objective: To analyze different proposed treatments for delayed union and nonunion fractures in dogs, taking into consideration process classification, encountered conditions and feasibility of each treatment. Data Sources: LILACS, DEDALUS, PUBMED databases and the bibliographic collection of the Library of the "Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo" (College of Veterinary Medicine and Zootechny from the University of São Paulo), São Paulo, Sp, Brazil, were surveyed during the period comprised from June 2003 to March 2004. Data Synthesis: Retarded union and nonunion are pathological events in fractures repair process, arising out of several physical OI" biological factors that result in an inadequate bone repair. Amongst the causes, no question that the most common is the inadequate choice of treatment, generating instability, loss of vascular provision and breach of the sequence of the healing biological processes. Conclusions: Experimental and clinical studies indicate a large variety of treatments, standing out among them the use of osteoinducting proteins.
Objetivo: Analisar as diferentes formas de tratamento propostas para união retardada e não-união de fraturas em cães, levando em consideração a classificação do processo, condições encontradas e a viabilidade de cada tratamento. Fontes Pesquisadas: Foram pesquisadas as bases de dados LILACS, DEDALUS, PUBMED e o acervo da Biblioteca da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, no período de junho de 2003 a março de 2004. Síntese dos Dados: União retardada e não-união são eventos patológicos no processo de recuperação de fraturas, decorrentes de vários fatores físicos ou biológicos que resultam em uma inadequada reparação óssea. Dentre as causas, sem dúvida, a mais comum é a escolha inadequada do tratamento, gerando instabilidade, perda do aporte vascular e quebra da seqüência dos processos biológicos de cicatrização. Conclusões: Estudos experimentais e clínicos indicam uma variedade muito grande de tratamentos, destacando- se entre eles o uso de proteínas osteoindutoras.
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Objetivo: Analizar las diferentes formas de tratamiento propuestas, para unión retardada y no-unión de fracturas en canes, considerando la clasificación del proceso, condiciones encontradas y la viabilidad de cada tratamiento. Fuentes Pesquisadas: Se investigó en las bases de datos LILACS, DEDALUS, PUBMED Y el acervo de la Biblioteca de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad de São Paulo, Brasil, en el periodo de junio de 2003 a marzo de 2004. Síntesis de los Datos: Unión retardada y no-unión son eventos patológicos en el proceso de recuperación de fracturas, originarias de varios factores físicos o biológicos que resultan en una inadecuada reparación ósea. Entre sus causas, la más común es sin duda la elección inadecuada del tratamiento originando inestabilidad, pérdida dei aporte vascular y quiebra de la secuencia de los procesos biológicos de cicatrización. Conclusiones: Estudios experimentales y clínicos indican una variedad muy grande de tratamientos, con destaque entre ellos el uso de proteínas osteoinductoras.
Objective: To analyze different proposed treatments for delayed union and nonunion fractures in dogs, taking into consideration process classification, encountered conditions and feasibility of each treatment. Data Sources: LILACS, DEDALUS, PUBMED databases and the bibliographic collection of the Library of the "Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo" (College of Veterinary Medicine and Zootechny from the University of São Paulo), São Paulo, Sp, Brazil, were surveyed during the period comprised from June 2003 to March 2004. Data Synthesis: Retarded union and nonunion are pathological events in fractures repair process, arising out of several physical OI" biological factors that result in an inadequate bone repair. Amongst the causes, no question that the most common is the inadequate choice of treatment, generating instability, loss of vascular provision and breach of the sequence of the healing biological processes. Conclusions: Experimental and clinical studies indicate a large variety of treatments, standing out among them the use of osteoinducting proteins.
Objetivo: Analisar as diferentes formas de tratamento propostas para união retardada e não-união de fraturas em cães, levando em consideração a classificação do processo, condições encontradas e a viabilidade de cada tratamento. Fontes Pesquisadas: Foram pesquisadas as bases de dados LILACS, DEDALUS, PUBMED e o acervo da Biblioteca da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, no período de junho de 2003 a março de 2004. Síntese dos Dados: União retardada e não-união são eventos patológicos no processo de recuperação de fraturas, decorrentes de vários fatores físicos ou biológicos que resultam em uma inadequada reparação óssea. Dentre as causas, sem dúvida, a mais comum é a escolha inadequada do tratamento, gerando instabilidade, perda do aporte vascular e quebra da seqüência dos processos biológicos de cicatrização. Conclusões: Estudos experimentais e clínicos indicam uma variedade muito grande de tratamentos, destacando- se entre eles o uso de proteínas osteoindutoras.
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